楮树叶总黄酮提取工艺优化

C N V m 式中，C 为测定样品溶液总黄酮浓度（ mg/mL） ；N 为稀释倍数；V 为最初样品定容体积（mL） ；m 为样品质量（g） 。
总黄酮提取率（mg/g）

1.2.4 楮树叶中总黄酮提取工艺单因素试验及正交试验 参考文献[15,16]，选择提取时间、乙醇体积分数、料液比、提取温度、提取次数进行单因素试验。在单因素试验基础上， 选择 4 个影响较显著的因素：提取时间、乙醇体积分数、料液比、提取温度，按照 L9（34）正交试验表进行试验确定楮树叶 中总黄酮提取最佳工艺。 表一 水平 1 2 3 1.2.5 最佳提取工艺验证 L9（34）因素水平表: 因素 A 提取时间/h 1.5 2 2.5 B 乙醇体积分数/% 60 70 80 C 料液比/g/mL 1:15 1:20 1:25 D 提取温度/℃ 60 70 80
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器： 楮树叶，2011 年 10 月采自湖南科技学院校园，经鉴定为桑科植物楮树(Broussonetia papyrifera)的叶子；芦丁标准品， 中国药品生物制品检定所生产；石油醚、95％乙醇、甲醇等均为分析纯试剂。 T6 可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；RE-52B 旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；SHB-Ⅲ循环水式 多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；TE124S 电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；集热式磁力搅拌器，郑州长 城科工贸有限公司。 1.2 实验方法 1.2. 1 对照溶液的制备 精密称取在 120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品 25 mg 至 50 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成浓度为 0.5 mg/mL 溶液，精密量取 10 mL 置 50 mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得对照溶液（含芦丁 0.1 mg/mL） 。
楮树(Broussonetia papyrifera)，在我国绝大多数地方都有分布，资源非常充足，同时也具有多种利用价值[1]。其纤维是 高档新闻纸纸浆材和纤维板原料[2]。成熟果实既可提取天然食用橙红色素，适用于软饮料、调制酒、果汁果酱和冰淇淋等食 品的着色[3]；又可入药称为楮实子，是常见的中药，中华人民共和国历版药典均有收载，始载《名医别录》列为中药上品， 具有补肾清肝，明目利尿的功效，用于腰膝酸软，虚劳骨蒸，头晕目昏，目生翳膜，水肿胀满[4,5]。楮树叶是很好的饲料， 楮树叶提取物还可以制备保健食品[6,7]。楮树叶也可入药，具有清热、解毒、益肝肾、强壮筋骨和消炎之功能[8]，还可以治 疗顽癣、神经性皮炎、湿疹等皮肤病，如：楮叶软膏[9]。楮树叶中含有大量的黄酮类化合物，不但黄酮类化合物数量较多， 达到几十种，而且总黄酮含量也非常高[10-12]。目前对楮树叶中黄酮类成分定量及定性分析虽已有文献报道[9-14]，但对楮树叶 的研究开发利用严重滞后，楮树叶的精加工产品较少，尤其适用于工业化大生产的提取工艺的研究还未报道。本研究为了提 高楮树叶中总黄酮的提取率， 同时选择有利于工业化提取生产的乙醇提取方法提取楮树叶黄酮， 采用分光光度法测定楮树叶 提取液中总黄酮的含量，计算出提取率，对其最佳提取工艺进行了研究，为楮树药用价值、经济价值的进一步研究和生产实 践开发提供依据。
收稿日期：2012－04－22 基金项目：湖南科技学院大学生研究性学习与创新性实验计划项目 作者简介：黄瓒（1989－） ，男，湖南长沙人，湖南科技学院制药工程 2010 级学生。通讯作者：王宗成（1983－） ，湖 南长沙人，助教，硕士，主要从事药物合成及天然产物开发。 30
1.2. 2 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 与 5.0 mL，分别置于 10 mL 容量瓶中，分别加入 5% NaNO2 溶液 0.3 mL，摇匀，放置 6 分钟后各加入 10% Al(NO3)3 溶液 0.3 mL，摇匀，放置 6 分钟，再分别加入 4% NaOH 溶液 4.0 mL， 再加水至刻度，摇匀，放置 10 min，在 510 nm 波长处测定吸光度，绘制出总黄酮质量浓度与吸光度的标准曲线。 1.2.3 样品总黄酮含量的测定 准确称取 10 g 干燥粉碎的楮树叶，加人石油醚（60～90℃）500 mL 回流脱脂 6 h。脱脂后粉末按一定条件提取，将 提取液抽滤，滤渣在相同条件下提取一定次数，合并滤液浓缩至约 25 mL，转移至 50 ml 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇 匀。取该溶液 1.0 mL，转移至 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容至刻度，摇匀。再取该溶液 1.0 mL，置于 10 mL 容量瓶中， 按照标准曲线绘制方法操作，测定吸光度，根据标准曲线计算出测定样品溶液总黄酮浓度 C。然后计算样品中总黄酮的提取 率。
第 33 卷 第 8 期 2012 年 8 月
湖南科技学院学报 Journal of Hunan University of Science and Engineering
Vol.33 No.8 Aug.2012
楮树叶总黄酮提取工艺优化
黄
摘
瓒
Hale Waihona Puke 李振申王宗成*（湖南科技学院 生命科学与化学工程系，湖南 永州 425100） 要：采用乙醇提取楮树叶中的总黄酮，并采用分光光度法，以芦丁为标准品测定楮树叶中总黄酮的提取率。通过单 因素实验分析了乙醇体积分数、料液比、提取温度、提取时间四个主要因素对黄酮提取的影响，在单因素试验的基础上通过 正交实验设计优化了楮树叶中总黄酮提取的条件。结果表明：楮树叶中总黄酮乙醇提取最佳条件为乙醇体积分数 70%，料 液比 1:20，温度 70℃，时间 2 h/次，提取 2 次，该条件下楮树叶总黄酮提取率为 58.0 mg/g。本工艺简单可行，可能为楮树 药用价值、经济价值的进一步研究和工业化生产实践开发提供依据。 关键词：楮树；总黄酮；提取工艺；正交试验 中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-2219（2012）08-0030-05