关于厌氧菌培养方法的探讨
厌氧培养方法
厌氧性细菌的分离培养法厌氧菌需有较低的氧化—还原势能才能生长 (例如破伤风梭状芽孢杆菌需氧化—还原电势降低至 0.11V 时才开始生长 )，在有氧的环境下，培养基的氧化—还原电势较高，不适于厌氧菌的生长。
为使培养基降低势，降低培养环境的氧压是十分必要的。
现有的厌氧培养法甚多，主要有生物学，化学和物理学 3 种方法，可根据各实验室的具体情况而选用。
1．生物学方法培养基中含有植物组织 (如马铃薯、燕麦、发芽谷物等 )或动物组织 (新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、心、脑等 ) ，由于组织的呼吸作用或组织中的可氧化物质氧化而消耗氧气(如肌肉或脑组织中不饱和脂肪酸的氧化能消耗氧气，碎肉培养基的应用，就是根据这个原理 )，组织中所含的还原性化合物如谷胱甘肽也可以使氧化—还原电势下降。
另外，将厌氧菌与需氧菌共同培养在一个平皿内，利用需氧菌的生长将氧消耗后，使厌氧菌能生长。
其方法是将培养皿的一半接种吸收氧气能力强的需氧菌(如枯草杆菌 )，另一半接种厌氧菌，接种后将平皿倒扣在一块玻璃板上，并用石蜡密封，置37恒温箱中培养2~3d 后，即可观察到需氧菌和厌氧菌均先后生长。
2．化学方法利用还原作用强的化学物质，将环境或培养基内的氧气吸收，或用还原氧化型物质，降低氧化—还原电势。
此法系用连二亚硫酸纳 (Sodium hydrosulphite) 和碳酸钠以吸收空气中的氧气，其反应式如下：Na2S204 十Na2C03十O2 一→ Na2SO4十Na2SO3 十C02取一有盖的玻璃罐，罐底垫一薄层棉花，将接种好的平皿重叠正放于罐内 (如系液体培养基，则直立于罐内 )，最上端保留可容纳 1~2 个平皿的空间 (视玻罐的体积而定 )，按玻罐的体积每1000cm3 空间用连二亚硫酸纳及碳酸钠各 30g，在纸上混匀后，盛于上面的空平皿中，加水少许使混合物潮湿，但不可过湿，以免罐内水分过多。
若用无盖玻罐，则可将平皿重叠正放在浅底容器上，以无盖玻罐罩于皿上，罐口周围用胶泥或水银封闭 (如图１－５ )。
厌氧菌的分离和培养
实验十厌氧菌的分离和培养1 目的1.1 了解厌氧微生物的生长特性1.2 观察厌氧微生物（双歧杆菌）的形态特征1.3 掌握厌氧微生物的滚管分离、培养与计数技术2 原理目前培养厌氧微生物的简便而又有效的技术包括有：厌氧箱培养技术；厌氧罐培养技术；厌氧袋培养技术；亨盖特厌氧滚管技术。
这里介绍的是亨盖特厌氧滚管技术。
亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特（Hungate）于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。
以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趣完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一整套完整技术。
而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。
亨盖特厌样滚管培养技术不仅可用于有益厌氧菌如双歧杆菌等的分离、与活菌培养计数，还可以用于有害腐败菌（如酪酸菌）或病原菌（如肉毒梭状芽孢杆菌）的分离与鉴定。
3 材料3.1 样品双歧酸奶（液体）、双歧杆菌制剂（固体）。
3.2 培养基改良MRS培养基，PTYG培养基。
3.3 仪器和器具亨盖特厌氧滚管装置一套，厌氧管，厌氧瓶，滚管机，定量加样器。
4 流程铜柱除氧→预还原培养基→稀释用液制备→稀释样品→滚管→培养→计数5 方法5.1铜柱系统除氧铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。
此管的大小为40—400mm，两段被加工成漏斗装，外壁绕有加热带，并与变压器相连来控制电压和稳定铜柱的温度。
铜柱两端连接胶管，一端连接气钢瓶，一端连接出气管口。
由于从气钢瓶出来的气体如N2、CO2和H2等通常都含有O2，故当这些气体通过温度约360℃的铜柱时，铜和气体中的微量O2化合生成CuO，铜柱则由明亮的黄色变为黑色。
当向氧化状的铜柱通入H2时，H2与CuO中的氧就结合形成H2O，而CuO又被还原成了铜，铜柱则又呈现明亮的黄色。
此铜柱可以反复使用，并不断起到除氧的目的。
当然H2源也可以由氢气发生器产生。
5.2 预还原培养基及稀释液的制备制作预还原培养基及稀释液时，先将配制好的培养基和稀释液煮沸驱氧，而后用半定量加样器趁热分装到螺口厌氧试管中，一般琼脂培养基装4.5-5ml，稀释液装9ml，并插入通N2气的长针头以排除O2。
厌氧菌的培养方法
1 液体培养基的厌氧培养法
培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却 添加还原剂：
0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸 0.01～0.02％硫乙醇钠 0.5～1％葡萄糖 0.1％抗坏血酸 其它还原剂 添加琼脂
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2 固体培养基的厌氧培养法
厌氧罐法 简易厌氧罐和厌氧袋法 钢丝绒法 焦性没食子酸法 抽气换气厌氧培养法 生物好氧厌氧培养法 转管技术和气体喷射培养法 厌氧手套箱法 （又称厌氧室法）
2.6 生物好氧厌氧培养法
疱肉培养基:
牛肉渣
0.5g
牛肉浸液 7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧培养方法
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2.7 转管技术和气体喷射培养法
钢瓶进气 除氧气体
微量O2 H2源
铜柱
360℃ （亮黄色）
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CuO （黑色）
2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
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干燥器容内径（厘米） 容器3
容积（毫升）
容器1
0.2克
柠檬酸0.6克
15cm（约2150毫升）
和
1.5克
碳酸氢钠0.7克
容器2
硼氢钠
氯化钴
或
0.6克
钯粒
18cm（约3500毫升） 1克
硼氢钠
氯化钴0.33克
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柠檬酸
2.2.2 厌氧袋法
聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋 产气袋 厌氧指示剂 触媒
融化的白蜡封边
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2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
三通阀 触媒:钯粒 / 浸泡钢丝绒 / 氯化钴 厌氧指示剂
厌氧菌的采集送检培养分离鉴定及注意事项
厌氧菌的采集送检培养分离鉴定及注意事项厌氧菌是一类在缺氧或无氧条件下生长的微生物。
由于其独特的代谢方式和生长环境的要求，厌氧菌的采集、送检、培养分离和鉴定需要特殊的注意事项。
下面将详细介绍厌氧菌的采集、送检、培养分离和鉴定的方法及注意事项。
一、厌氧菌的采集方法：1.采集样品时应尽量避免与空气接触，以防止厌氧菌暴露于氧气中而失活。
2.采集厌氧菌的样品应尽快送检，以确保其最佳生长环境。
常见的厌氧菌采集样品包括：创伤分泌物、组织切片、血液、体液、粪便等。
二、厌氧菌的送检和保存：1.送检时应明确注明样品为厌氧菌的检测，以便实验室作出相应的处理。
2.采样后，尽量将样品封存，避免与氧气接触，以确保厌氧菌生长环境的完整性。
3.若无法封存样品，应尽快送检至实验室。
三、厌氧菌的培养方法：1. 使用厌氧培养基来提供适宜的生长环境，如：血寒胁素琼脂培养基、Schaedler琼脂培养基等。
2.培养瓶或培养皿密封完好，以维持厌氧条件。
3.培养培养基时，应将其加热至48-50℃，以刺激厌氧菌的孢子萌发。
4.培养温度通常为35-37℃。
四、厌氧菌的分离方法：1.采用分离培养基，在含有抗生素的培养基上分离厌氧菌。
2.厌氧菌通常会在培养基上产生特殊的形态特征，如：斑点、颜色变化等。
3.通过剖析菌落形态特征，并进行细胞的染色观察来鉴定培养物中的厌氧菌。
五、厌氧菌的鉴定方法：1.根据厌氧菌的生物学特征进行初步鉴定，如：形态特征、生理特性等。
2.利用生化试验对厌氧菌进行进一步的鉴定，如：糖、氨基酸、营养盐的利用能力等。
3.利用分子生物学方法，如PCR、16SrRNA测序等进行鉴定。
六、厌氧菌的注意事项：1.在操作过程中应严格遵守无菌操作的要求，以避免外源性菌的污染。
2.在培养过程中要注意保持相应的厌氧环境，如密封培养瓶或培养皿，避免与氧气接触。
3.在采集和送检过程中要注意样品的完整性和新鲜度，以提高厌氧菌的培养成功率。
4.在菌落鉴定过程中要仔细观察形态特征和生物学特性，以确保鉴定结果的准确性。
厌氧菌的培养方法
厌氧菌的培养方法厌氧菌是一类不能在氧气存在下生长和繁殖的微生物。
这些微生物在许多领域都具有重要的应用价值，包括环境保护、生物能源生产等。
因此，为了研究和应用这些厌氧菌，科学家们发展了多种厌氧菌的培养方法。
本文将详细介绍常用的三种厌氧菌的培养方法。
一、利用情境气氛培养厌氧菌情境气氛培养是培养厌氧菌的一种常用方法，其原理是通过调节培养基的气氛来控制氧气浓度。
在培养厌氧菌时，一般会采用以下方法之一来制备情境气氛。
1.预氧化法：将培养容器密封，置于28-37°C的恒温灭菌箱中。
然后通过注入一定比例的高纯度二氧化碳-氧气混合气体，使容器内的气氛变为厌氧情境。
这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较低的情况。
2.双液低压法：将培养基分成两个相隔的容器，分别加入不同的培养液。
然后将两个容器封口并贴膜，用胶带封好。
经过一段时间后，在密封的容器内会形成低压情境。
这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较高的情况。
通过以上两种情境气氛培养方法，可以模拟出适合厌氧菌生长的条件。
二、利用厌氧培养器培养厌氧菌厌氧培养器是一种专门用于培养厌氧菌的装置，其原理是通过封闭式容器和气氛控制系统，实现在厌氧情境下的培养。
常用的厌氧培养器有以下两种类型：1.商用厌氧培养器：通常有专门的培养室和压力控制系统，可以产生适合厌氧菌生长的气氛。
在这种培养器中，可以根据菌株的特性进行相应的操作和调节。
2.自制厌氧培养器：由于商用的厌氧培养器设备较为昂贵，对于一些实验室来说并不实际。
因此，一些实验室会开发自己的厌氧培养器。
自制培养器的原理和商用培养器类似，只是在设计和制作上有所差异。
利用厌氧培养器进行培养时，需要注意以下几点：1.气氛控制：厌氧培养器应能够调节培养基的气氛，包括氮气、二氧化碳等气体的供应和排除。
2.温度调节：厌氧培养器应能够保持恒定的培养温度，一般为28-37°C。
3.培养基搅拌：适当的培养基搅拌可以增加氧气的溶解度，并促进菌体的生长和分散。
厌氧菌
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。
通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
厌氧菌的培养方法
2.2.1 简易厌氧罐
干燥器容内径（厘米） 容器1 容积（毫升） 硼氢钠
15cm（约2150毫升） 0.6克
容器2
容器3
氯化钴 0.2克 柠檬酸0.6克
或
和
钯粒1.5克 碳酸氢钠0.7克
18cm（约3500毫升） 硼氢钠 1克
氯化钴0.33克 柠檬酸1克
或
和
钯粒2克 碳酸氢钠1.15克
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厌氧菌的培养方法
祁红兵
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物理方法包括遮断空气法、煮沸法、真空法、空 气置换法、气体喷射法或转管法等
化学方法包括焦性没食子酸法、铁丝绒法、保险 粉法等
生物学方法包括与需氧菌共生好氧法、燕麦发芽 法等
混合法包括厌氧罐（袋）法、厌氧手套箱法或厌 氧室法、空气置换铁丝绒法、空气置换钯粒法等。
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2.1 Gas-pak法
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原理
气体发生袋：
柠檬酸和碳酸氢钠 ＋H2O
CO2
硼氢化钠 111＋11H2O
H2
触媒 ：
钯粒
H2O
厌氧罐中的O2
厌氧指示剂
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厌氧指示剂
亚甲基兰 指示剂 卢卡斯固体厌氧指示剂 布鲁氏指示剂
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亚甲基兰 指示剂
6％葡萄糖水溶液
2
0.1N氢氧化钠水溶液
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2.4 焦性没食子酸法
焦性末食子酸粉末， NaHCO3 或NaOH溶液
无菌玻片
已接种细菌的平板倒扣在上面
融化的白蜡封边
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2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
厌氧菌的采集、送检、培养、分离鉴定及注意事项
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
厌氧培养箱之厌氧菌的培养操作
厌氧培养箱之厌氧菌的培养操作厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。
通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1．厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管（有硼Q化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3．厌氧手套箱（Anaerobie glove box）即厌氧培养箱。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气（H2，CO2，N2）达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物（多是植物），消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
厌氧细菌培养技术
厌氧细菌培养技术一、厌氧菌的培养方式厌氧菌的培养过程中，最重要的就是为其提供厌氧生长环境，厌氧环境的提供可以从以下两方面着手。
一方面可以提供厌氧装置如厌氧手套箱，厌氧产气罐或者厌氧产气袋。
另一方面可以提供含有还原剂的特殊培养基，如含少量琼脂，L-半胱氨酸，硫乙醇酸钠，巯基乙醇等的液体培养基。
要注意的是，如果没有厌氧手套箱，我们在对厌氧菌活化或者是转接操作的时候，动作要快，防止厌氧菌在空气中暴露的时间过长。
二、我们正常的大气环境中是有氧环境，这类厌氧菌通常生活在哪里呢我们研究这类菌有什么意义呢我们的大气环境确实是一个有氧环境。
但是，地球上还存在很多厌氧环境比如深海和淤泥中，厌氧菌在我们人体中也普遍存在。
我们研究厌氧菌，一方面是因为厌氧菌是临床上一类重要的病原菌；另一方面，哺乳动物肠道菌群中99%是厌氧菌，其中许多是促进消化吸收的有益菌，不管是从致病机理，还是开展疾病治疗来说对厌氧菌的研究意义都很重大。
三、为什么好氧菌在生长繁殖过程中必须有氧气存在，而厌氧菌在生长过程中氧气却对对其产生毒害作用呢微生物虽然可以利用氧，通过有氧呼吸来产生更多的能量，满足机体的需要，但是氧对一切生物都会产生有毒害的代谢产物，比如会产生超氧阴离子，过氧化氢和羟自由基。
超氧阴离子和羟自由基是强氧化剂，能氧化细胞内的大分子物质和有机化合物，对细胞造成损伤，过氧化氢也会损害一些细胞组分。
但是，微生物细胞可以通过产生过氧化氢酶，超氧化物歧化酶和超氧化物还原酶等等这些酶类来清除细胞内的毒性氧。
对于好氧菌来说，细胞内往往会产生超氧化物歧化酶和过氧化氢酶，所以氧气对这类微生物不会产生毒害。
那么对于厌氧菌来说，细胞内无法合成超氧化物歧化酶〔SOD〕和细胞色素氧化酶，大多数还缺乏过氧化氢酶。
所以，这类微生物无法消除氧气对它的毒害作用。
只能在无氧的环境中通过发酵或无氧呼吸产能。
厌氧培养方法范文
厌氧培养方法范文厌氧培养是一种在缺氧条件下进行的微生物培养方法，对于一些需氧菌或者厌氧菌的研究非常重要。
本文将详细介绍厌氧培养的方法和步骤，并探讨其应用和优缺点。
厌氧培养的方法主要有以下几种：摇瓶培养、拊盘培养、封口瓶培养和深层培养。
摇瓶培养是最常用的厌氧培养方法之一、首先，选择适当的培养基，如液态或半固态培养基，并添加适宜的培养物。
然后，将培养基倒入摇瓶中，尽量避免气泡的产生。
接下来，用柱塞或酸奶盖密封摇瓶，并利用橡皮筋将塞子固定在摇床上。
最后，调节摇床的转速和温度，进行培养。
拊盘培养是一种用于培养需氧菌和厌氧菌的简单而有效的方法。
首先，将适当的培养基倒入培养皿中，然后用柱塞或酸奶盖密封。
接下来，用一个4角钝的扁担将培养皿颠倒置放入密闭的培养箱中。
最后，将培养箱密封并将其置于恒温培养箱中。
封口瓶培养是一种用于培养厌氧菌的方法。
首先，选择适当的培养基并添加适宜的培养物。
然后，将培养基倒入平底培养瓶中，并用瓶塞或金属夹密封瓶口。
接下来，将密封的培养瓶置于温度适宜的培养箱中进行培养。
深层培养是一种用于培养厌氧菌的方法，允许微生物在无氧条件下生长，并通过其代谢产物显示菌落的出现。
首先，准备含有培养物的试管。
然后，结合震荡和倾倒的方法，将培养液均匀地倒入试管中，使空气尽可能少地进入。
最后，使用胶体溶液或者石蜡密封试管，以便在无氧条件下进行培养。
厌氧培养方法的应用非常广泛，可以用于分离和鉴定厌氧菌，研究厌氧代谢等。
在医学领域，厌氧培养可以用于检测和诊断各种厌氧菌感染，如产气荚膜梭菌感染和肠道厌氧菌感染等。
在环境领域，厌氧培养可以用于研究厌氧微生物的多样性和功能。
厌氧培养方法也有一些局限性和不足之处。
首先，厌氧培养需要特殊设备和技术，对实验环境的要求比较高。
其次，厌氧条件往往会导致培养时间延长，且很多厌氧菌并不容易培养。
此外，厌氧培养也容易受到外界条件的干扰，如温度和氧气浓度等。
总的来说，厌氧培养是一种重要的微生物培养方法，在微生物学研究和应用中起着重要的作用。
水族箱厌氧菌的培养方法
水族箱厌氧菌的培养方法
水晶虾
厌氧菌生存在低氧的环境下，水晶虾、硝化菌都需大量的氧气，水中有充分的氧气，造成培育厌氧菌极为困难，就是有的话也不足需求，所以一般的缸子到硝酸盐氮循环就止，传统下来培养厌氧菌的概念就是铺厚厚的底床，但虾缸用的是土，土不像石或砂，厚土会败坏，不适用来培养厌氧菌。
最佳培养厌氧菌的地方还是在筒子里。
1、Eheim2215串三个（一个马达+二个前置）：用多量的菌类去“消耗”氧气，才能让最后一个筒子有厌氧菌生存的环境。
2、用品质好的滤材：硝化菌越多，最后筒内的氧气会越少。
3、设缸时用品牌好和多量的菌类并维持硝酸盐在最低（太高就换水）
4、处理缸内的有机物质，有机物质的累积会导致硝酸盐过高而无法降低。
厌氧微生物培养技术的目的和原理
厌氧微生物培养技术的目的和原理厌氧微生物培养技术是一种特殊的微生物培养技术，用于培养需要在无氧（或低氧）条件下生长的微生物。
传统的培养技术通常在常氧（或高氧）条件下进行，但很多微生物对氧气敏感，只有在无氧或低氧条件下才能生长和繁殖。
因此，厌氧微生物培养技术通过提供适宜的无氧（或低氧）环境，使得这些微生物能够在实验室中进行培养和研究。
下面将对厌氧微生物培养技术的目的和原理进行详细的阐述。
1.研究厌氧微生物的生长特性：通过培养厌氧微生物，可以研究其生长速度、代谢途径、产生的代谢产物等生物学特性。
这有助于了解厌氧微生物的生态功能和对环境的影响。
2.分离和纯化厌氧微生物：通过厌氧培养技术，可以将混合微生物群体中的厌氧微生物单独分离出来。
这有助于研究单个厌氧微生物的特性，并为进一步的研究提供纯化的微生物株。
3.研究厌氧微生物的代谢途径和产物：许多厌氧微生物具有特殊的代谢途径，如厌氧呼吸、厌氧发酵等。
通过培养这些厌氧微生物，可以研究其代谢途径和产物，有助于理解它们在生物地球化学循环中的角色。
1.提供无氧（或低氧）环境：为了使厌氧微生物能够生长和繁殖，必须在培养过程中提供无氧（或低氧）的条件。
通常采用的方法是使用密封的容器或瓶子，将培养物与外界的氧气隔离开来。
为了进一步确保无氧环境，可以添加还原剂如硫化钠或葡萄糖，以降低培养液中的氧气含量。
2.确定厌氧微生物的生长需求：不同的厌氧微生物对培养条件有不同的要求，如温度、pH值、营养物质等。
在培养之前需要进行调查和研究，以确定最适合其生长和繁殖的条件。
3.选择适当的培养基：为了培养厌氧微生物，需要选择适合其生长的培养基。
一般来讲，培养基中需要添加适量的有机物、无机盐和维生素等营养物质。
此外，还可以添加一些特殊的成分，如胶体杰尔线、酶还原剂等，以促进厌氧微生物的生长。
4.控制培养条件：在培养过程中，需要注意控制培养条件，如温度、pH值等。
这可以通过使用恒温箱、恒温培养箱和PH计等仪器设备来实现。
厌氧培养方法
厌氧培养方法
厌氧培养方法啊，这可真是个有趣又重要的领域呢！大家都知道，有些微生物啊，它们就喜欢在没有氧气的环境里生活，那怎么才能给它们创造一个舒适的家呢？
先来说说厌氧罐吧，这就像是一个专门为厌氧菌打造的小城堡。
把样本放进去，然后通过一些特殊的手段，比如加入一些能吸收氧气的物质，让里面的氧气变得极少极少，几乎可以忽略不计。
这样，厌氧菌们不就可以欢快地生长繁殖啦！这就好像给它们准备了一场专属的派对，它们肯定开心得不得了！
还有厌氧手套箱，这简直就是个神奇的存在呀！它就像是一个密封的大盒子，人可以把手伸进去操作，而里面一直保持着无氧的状态。
想象一下，在这个小空间里，厌氧菌们自由自在地活动着，不用担心氧气这个“大坏蛋”来捣乱，多棒啊！
再讲讲培养基的选择，那可真是有讲究的呢！得选择适合厌氧菌生长的培养基，就像给它们准备了最爱的美食一样。
要是选错了，它们可能就不乐意生长啦。
厌氧培养可不像在公园里散步那么简单哦！需要我们细心、耐心，还要有一些小技巧。
就好像照顾一个特别挑剔的小朋友，得时刻关注它的需求。
但当你看到厌氧菌们茁壮成长，那种成就感啊，简直无法用言语来形容！
厌氧培养方法对于很多领域都有着至关重要的作用。
在医学上，它可以帮助我们研究一些特殊的病菌；在科研中，更是能让我们深入了解厌氧菌的世界。
它就像是一把钥匙，能打开一个充满神秘和惊喜的大门。
所以啊，我们一定要好好掌握厌氧培养方法，让它为我们的生活和科学研究带来更多的惊喜和发现呀！。
厌氧菌的培养方法
厌氧菌的培养方法厌氧菌是一类不能在氧气环境下生长的微生物，其培养方法与其他菌种有所不同。
为了成功培养厌氧菌，我们需要采取特殊的培养条件和方法。
下面我将详细介绍厌氧菌的培养方法。
一、厌氧培养条件的建立1. 气氛控制：培养厌氧菌的关键是防止氧气的进入。
常用的气氛控制方法包括密封法、气体置换法和用稀有气体混合气体置换法。
其中，密封法是最常用的方法。
我们可以将培养基置于密封的容器中，并注入一定量的气体，如氮气、氩气或二氧化碳等，从而构建无氧环境。
2. pH控制：厌氧菌对pH值较为敏感，一般要求pH值在6.8至7.4之间。
所以，在培养厌氧菌时，我们需要对培养基的pH进行调节。
3. 温度控制：不同的厌氧菌对温度的要求各有不同，一般在25至37之间。
在培养过程中，应根据具体菌株的要求进行控制。
4. 无氧条件维持：在培养过程中，需要保持无氧条件，避免氧气的进入。
一般可以选择在无氧罐中进行培养，该罐内有还原剂（如碘化钠、甲酚等）与氧气发生反应，将氧气消耗掉。
二、厌氧菌的预培养方法在真正进行厌氧培养之前，我们需要进行预培养，以提高成功培养的几率。
1. 培养基制备：根据具体菌株的不同要求配制培养基。
2. 保护性缓冲层：在培养基上覆盖一层液体密度较高的液体，如厌氧缓冲液、灌封液等。
这层液体可以形成一个保护层，避免氧气的进入。
3. 器具处理：将要使用的器具（如培养瓶、移液管等）经过高温高压灭菌或用灭菌包装。
4. 预培养条件：在厌氧罐或无氧条件下，将培养基接种菌种。
一般预培养时间较短，一般为12至24小时。
5. 初代接种：将预培养的菌种移植到新的含有适宜的培养基的无氧培养容器中。
三、厌氧菌的分离和纯化为了获得纯种的厌氧菌，我们需要对菌落进行分离和纯化。
常用的方法包括传代分离法和稀释分离法。
1. 传代分离法：将初代接种中的菌落进行分离。
一般使用无菌的毛细管或环陆法将菌落划入含有适宜培养基的无氧培养容器中。
2. 稀释分离法：将菌落分散在适宜培养基中，再将分散液进行稀释，以期获得稀释液中只有一个菌落的稀释液。
厌氧细菌培养方法的步骤
1. 准备培养基：选择适合厌氧细菌生长的培养基，如缺氧琼脂或者含有还原剂的液体培养基。
在实验室通气橱中进行操作，确保培养基不会受到氧气污染。
2. 设置好培养条件：调整好培养基的pH值和温度，使其适合目标细菌的生长。
另外，根据需要添加适量的营养物质和生长因子。
3. 处理样品：将待培养的厌氧细菌样品接种到培养基上。
在通气橱中用无菌技术操作，避免细菌受到氧气污染。
4. 封闭容器：将接种好的培养皿或者管子密封好，以防止氧气进入。
可以使用气密性较好的培养皿或者密封膜进行覆盖，确保细菌在无氧环境中生长。
5. 培养：将密封好的培养皿或者管子放入恒温培养箱或者恒温振荡培养箱中，以固定温度和适当的湿度进行培养。
根据目标厌氧细菌种类的需求，培养的时间可能会有所不同。
6. 观察和收获：在培养结束后，可以打开培养皿或者管子，观察厌氧细菌的生长情况。
根据需要，可以进行进一步的分离和纯化，或者收集细菌进行后续的实验操作。
厌氧菌的培养方法
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2.1 Gas-pak法
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5
原理
气体发生袋：
柠檬酸和碳酸氢钠 ＋H2O
CO2
硼氢化钠 111＋11H2O
H2
触媒 ：
钯粒
H2O
厌氧罐中的O2
厌氧指示剂
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厌氧指示剂
亚甲基兰 指示剂 卢卡斯固体厌氧指示剂 布鲁氏指示剂
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亚甲基兰 指示剂
6％葡萄糖水溶液
2
0.1N氢氧化钠水溶液
0.1
1
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
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Gas-Pak罐的使用操作程序
平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅
速紧闭罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。
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2.2.1 简易厌氧罐
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4.2 冷冻保存：
20％脱脂牛奶0.5ml分注在带螺旋塞的玻 璃瓶中，经110℃、15分钟高压灭菌，冷却后， 先用毛细吸管取半固体高层培养基24～48h生 长茂盛部位的厌氧菌液0.5ml，加入玻璃瓶中， 直接置于－80℃冰库中保存。
厌氧菌较理想的保存方法是液氮保存法。 将108以上浓菌液置脱纤维羊血、脱纤维兔血 或羊血牛奶各半的分散剂中，先在干冰中预 冻，然后连容器一起放入液氮罐中。
厌氧菌的培养方法
祁红兵
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物理方法包括遮断空气法、煮沸法、真空法、空 气置换法、气体喷射法或转管法等
化学方法包括焦性没食子酸法、铁丝绒法、保险 粉法等
生物学方法包括与需氧菌共生好氧法、燕麦发芽 法等
关于厌氧菌培养方法的探讨
关于厌氧菌培养方法的探讨啤酒有害菌是纯生啤酒生产中微生物检验最重要的一项指标，如何对啤酒进行有效的厌氧菌(即有害菌)检测意义重大。
影响厌氧菌检验的因素很多，其中最重要的是能否达到厌氧菌培养所需的厌氧环境。
本文结合作者多年的工作经验，对厌氧培养箱法培养厌氧菌进行初步探讨1 常见的厌氧菌培养方法1．1 最古老的方法：蜡烛耗氧法此法利用蜡烛燃烧消耗封闭容器里的氧气，产生二氧化碳，在封闭容器内形成厌氧环境。
此法产生的厌氧环境很难得到保证，培养过程不方便操作。
1．2 置换法通过真空泵使二氧化碳气体从厌氧罐底部进入，二氧化碳比重比氧气大，迫使氧气上浮，随着二氧化碳气体的逐渐充满氧气从顶部排出，在厌氧罐里形成厌氧环境。
使用此方法，成本较低+佩操作繁琐，厌氧程度不能得到有效保证。
1．3 厌氧盒，罐法厌氧盒，罐法是利用吸氧剂把厌氧盒，罐中的氧气吸收，使其达到无氧状态。
由于厌氧盒容量一般较小，此法厌氧环境能够保证，但不能满足大生产需要；另吸氧剂成本较高。
1．4 厌氧培养箱法通过真空泵先将箱内氧气抽出，充人氮气和混合气，使箱内形成厌氧环境。
此厌氧环境在正静隋况下可一直保持。
每次使用时只需置换过渡间的空气，实现与培养箱内的互通，进行样品的放置或取出等操作。
2 厌氧培养箱法简单介绍2．1 初始厌氧环境的形成为了严格保证厌氧环境，一般采取20次抽真空和充N2过程进行初始化。
2．2 样品放置的步骤在样品放置过程中．可以采用三次抽真空，两次N2清洗交替进行，使厌氧培养箱内的氧气含量低于l％。
在厌氧菌培养过程中，适当保持培养箱内的厌氧气体压力，使形成轻微正压，以保证厌氧环境。
2．3 使用要点由于厌氧培养所需的时间比较长，一个厌氧培养箱内又不可能只培养一个时期的样品，这就牵涉到不同时期样品的进出。
在放、取样品进厌氧培养箱时，都要先通过过渡间，只有过渡问的外门开启接触到外界空气，在样品进入过渡间后．经过平衡清洗程序使厌氧环境得到控制，而培养箱中存有的少量氧气可通过催化剂吸收。
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关于厌氧菌培养方法的探讨
啤酒有害菌是纯生啤酒生产中微生物检验最重要的一项指标，如何对啤酒进行有效的厌氧菌(即有害菌)检测意义重大。
影响厌氧菌检验的因素很多，其中最重要的是能否达到厌氧菌培养所需的厌氧环境。
本文结合作者多年的工作经验，对厌氧培养箱法培养厌氧菌进行初步探讨
1 常见的厌氧菌培养方法
1．1 最古老的方法：蜡烛耗氧法此法利用蜡烛燃烧消耗封闭容器里的氧气，产生二氧化碳，在封闭容器内形成厌氧环境。
此法产生的厌氧环境很难得到保证，培养过程不方便操作。
1．2 置换法
通过真空泵使二氧化碳气体从厌氧罐底部进入，二氧化碳比重比氧气大，迫使氧气上浮，随着二氧化碳气体的逐渐充满氧气从顶部排出，在厌氧罐里形成厌氧环境。
使用此方法，成本较低+佩操作繁琐，厌氧程度不能得到有效保证。
1．3 厌氧盒，罐法
厌氧盒，罐法是利用吸氧剂把厌氧盒，罐中的氧气吸收，使其达到无氧状态。
由于厌氧盒容量一般较小，此法厌氧环境能够保证，但不能满足大生产需要；另吸氧剂成本较高。
1．4 厌氧培养箱法
通过真空泵先将箱内氧气抽出，充人氮气和混合气，使箱内形成厌氧环境。
此厌氧环境在正静隋况下可一直保持。
每次使用时只需置换过渡间的空气，实现与培养箱内的互通，进行样品的放置或取出等操作。
2 厌氧培养箱法简单介绍
2．1 初始厌氧环境的形成
为了严格保证厌氧环境，一般采取20次抽真空和充N2过程进行初始化。
2．2 样品放置的步骤
在样品放置过程中．可以采用三次抽真空，两次N2清洗交替进行，使厌氧培养箱内的氧气含量低于l％。
在厌氧菌培养过程中，适当保持培养箱内的厌氧气体压力，使形成轻微正压，以保证厌氧环境。
2．3 使用要点
由于厌氧培养所需的时间比较长，一个厌氧培养箱内又不可能只培养一个时期的样品，这就牵涉到不同时期样品的进出。
在放、取样品进厌氧培养箱时，都要先通过过渡间，只有过渡问的外门开启接触到外界空气，在样品进入过渡间后．经过平衡清洗程序使厌氧环境得到控制，而培养箱中存有的少量氧气可通过催化剂吸收。
通过厌氧指示剂来检查厌氧培养箱内是否达到厌氧程度如果指示剂呈白色则表明达到厌氧程度，厌氧程度不足时，指示剂呈红色。
当出现指示剂呈红色状态时，可按照以下步骤对厌氧培养箱进行检查：氮气和混合气的瓶内压力或输出压力是否符合要求，如果不符合，要及时调整气罐上的气阔，把进气阀调到正常的进气状态；同时，要检查连接气瓶的管道与厌氧培养箱的接口密封是否完好，以上两项都符合要求时，就要检查厌氧培养箱内两道封闭门是否关好，压力释放瓶中石蜡液位和石蜡油的颜色是否正常，当石蜡油的颜色由无色透明变成黄色时，就要更换石蜡油。
另外，在日常维护时，还要注意培养箱能否进行自动补气程序，视窗、套筒、套筒口和护套是否完好无裂缝。
同时还要经常检查箱内的温度是否达到要求。
培养箱内的催化剂和干燥剂要按频率进行再生，以保持箱内环境的干燥和厌氧环境等。
3 结论
厌氧培养箱法虽然初始操作较繁琐，但每次操作时简便，可随时进行样品的放置、取出、观察；箱体容量大，能制造较大的厌氧空间，满足大生产需要；厌氧程度较高，样品能立即进入厌氧环境，使结果更准确可靠。
此设备体积较大，占地多，一次性投资大，但消耗费用较低。
目前这种厌氧培养箱只有一小部分能进行自动温度控制，其余存放样品的空间温控要靠室温调节，这是有待改进的地方。
经过多年的实践，我们发现厌养培养箱法技术成熟可靠，是大企业啤酒有害菌检测比较理想的方法。