关于厌氧菌培养方法的探讨
污水处理培养菌种方法
污水处理培养菌种方法
一、引言
污水处理是保护环境和人类健康的重要任务之一。菌种的选择和培养是有效处理污水的关键步骤。本文将详细介绍污水处理中常用的菌种培养方法。
二、菌种选择
1. 好氧菌：好氧菌需要氧气进行生长，常用的好氧菌有硝化菌和硫化菌。硝化菌能将氨氮转化为硝酸盐，硫化菌能将硫化物转化为硫酸盐。
2. 厌氧菌：厌氧菌在无氧环境下生长，常用的厌氧菌有产甲烷菌和硝化菌。产甲烷菌能将有机物转化为甲烷气体，硝化菌能将亚硝酸盐转化为氮气。
三、菌种培养方法
1. 好氧菌培养方法：
a. 准备培养基：将适量的无机盐溶解在蒸馏水中，加入有机物质作为碳源，如葡萄糖或者乳糖。
b. 菌种接种：将菌种接种到培养基中，培养基需预先灭菌。
c. 培养条件：在适宜的温度和pH下培养，通入适量的氧气。
d. 培养时间：根据菌种的生长速度，培养时间普通为24-48小时。
e. 菌种保存：将培养好的菌种保存在冷冻液氮中或者制备菌种冻干粉。
2. 厌氧菌培养方法：
a. 准备培养基：将适量的无机盐溶解在蒸馏水中，加入有机物质作为碳源，如乙酸或者丙酸。
b. 菌种接种：将菌种接种到培养基中，培养基需去除氧气，可以通过加入还原剂或者用氮气气氛替换氧气。
c. 培养条件：在适宜的温度和pH下培养，保持无氧环境。
d. 培养时间：根据菌种的生长速度，培养时间普通为24-72小时。
e. 菌种保存：将培养好的菌种保存在无氧条件下，可以用液氮冷冻或者制备菌种冻干粉。
四、菌种培养监测
1. 菌落计数：将培养好的菌种接种到琼脂平板上，经过一段时间后，用菌落计数器统计菌落数量，以评估菌种培养的效果。
厌氧微生物的分离及培养
整理ppt
一、目的要求
1、掌握碱性焦性没食子酸法的原理； 2、掌握斜面接种法和大试管套小试管法进行厌氧微生物培
养的方法。
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二、基本原理
厌氧微生物在自然界分布广泛，种类繁多，作用也日益引起重视。培养 厌氧微生物的技术关键是要使该类微生物处于除去了氧或氧化还原势低 的环境中。
用于严格厌氧菌的分离和培养 ①Ｈungate技术；②厌氧手套箱； 一般厌氧菌的培养
①碱性焦性没食子酸法 ②厌氧罐培养法 ③疱肉培养基法
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碱性焦性没食子酸法
焦性没食子酸与碱溶液（NaOH、Na2CO3和NaHCO3）作用后形成易被氧 化的碱性没食子酸盐，能通过氧化作用而形成黑、褐色的焦性没食子 橙从而除掉密封容器中的氧。
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厌氧罐培养法
利用一定方法在密闭的厌氧罐中生成一定量的氢气，而经过处理的钯或铂可作 为催化剂催化氢与氧化合成水，从而除掉罐中的氧而造成厌氧环境。
例如：利用镁与氯化锌遇水后发生反应生成氢气，及碳酸氢钠加柠檬酸水后产 生CO2，而厌氧罐中使用的厌氧度指示剂一般都是根据美蓝在氧化态时呈蓝色，而 在还原态时呈无色的原理设计的。
这种方法的优点是无需特殊及昂贵的设备，操作简单，适于任何可密 封的容器，可迅速建立厌氧环境。而其缺点是在氧化过程中会产生少 量的一氧化碳，对某些厌氧菌的生长有抑制作用。同时，NaOH的存在 会吸收掉密封容器中的二氧化碳，对某些厌氧菌的生长不利。用 NaHCO3代替NaOH，可部分克服二氧化碳的被吸收问题，但却又会导致 吸氧速率的减慢。
实用血培养厌氧菌分离鉴定及药敏试验方
实用厌氧菌分离鉴定及药敏试验方法
临床重要的厌氧菌(主要是内源性)主要是拟杆菌科（G-b）和厌氧球菌。血培养阳性厌氧菌主要有拟杆菌属、梭杆菌属、、普雷沃菌属、卟啉单胞菌属、消化链球菌属及其他厌氧菌。
一、必需的设备
•厌氧罐、厌氧盒、厌氧袋（标本少）
•厌氧发生气袋
•厌氧指示剂
二、培养基的准备
•非选择厌氧血平板
布氏血平板
脑心浸液琼脂
CDC厌氧血琼脂
哥伦比亚血琼脂
新鲜配制或经24h预还原（厌氧环境放置）！！！
特殊成份（降低氧还电势）: L-半胱氨酸、氯化血红素(Hemin)、VitK1
·选择性厌氧血平板：自制、商商品化
三、厌氧血培养瓶报警后
步骤二：耐氧试验确认厌氧菌
情况一和二：耐氧试验24-48h再观察结果，有确认厌氧菌的菌落按下边鉴定步骤。
耐氧试验方法：选择每种形态的单菌落，转种一个厌氧血平皿和巧克力平皿，分别培养。情况三：相当于耐氧试验，再结合菌落菌体形态，可以确认厌氧菌，用以下方法鉴定。
四、厌氧菌鉴定方法
（一）快速商品鉴定系统（4h报告结果）
1 无须厌氧培养，4h培养后人工输入结果，电脑软件辅助报告结果：
VITEK ANI卡
Rap ID 32A
MicroScan Anareobe Panel
Rap ID ANA II等
2厌氧环境培养24-48h观察结果
API 20A
特点是快速，可鉴定到种水平，但有时不一定获得满意结果，可同时进行以下操作提供临床初步报告。
（二）初步鉴定方法
1 临床重要的厌氧菌特殊菌落形态和菌体形态及特征（图示）
·G-cb有色素——普雷沃菌、卟啉单胞菌
·细G-b，两端变尖——具核梭菌
厌氧培养的规范化操作
厌氧菌鉴定流程 转种需氧培养 ↓ 35℃18-24h
转种厌氧培养 ↓ 35℃48~72h
↓ ↓ ↓ 阳性 阴性 阳性 ↓ ↓ ↓ 做需氧菌鉴定 考 虑 厌 氧 菌 ↓ 菌落革兰色染色、触酶试验、API20A鉴定 报告 报告菌种名或厌氧菌未生长
2.具体采样要求
1）从正常无菌部位或通过严格无菌操作采取，如血 液、胸腔液、腹腔液、心包积液、CSF、关节液以及 通过外科无菌手术或穿刺抽得脓液，或通过特殊技 术如纤维支气管镜取得下呼吸道标本及由阴道后窟 窿穿刺抽得盆腔脓液等。采集和运输过程中应避免 接触空气，及时送检。 2）经口吐出的痰不能避免咽喉部正常菌群感染，不 适宜做厌氧菌培养。可用纤维支气管镜采集。人工 气道如气管切开或气管插管患者，可用吸痰管理经 人工气道口插至叶支气管水平吸引痰液。
2接种厌氧平板置厌氧箱80n观察平板上的菌落挑选可疑菌落涂片革兰色染色4耐氧试验和生化反应5鉴定流程厌氧菌鉴定流程转种需氧培养转种厌氧培养351824h354872h阳性阴性阳性菌落革兰色染色触酶试验api20a鉴定报告报告菌种名或厌氧菌未生长
厌氧培养的规范化操作
泰兴市人民医院检验科微生物室 刘鸿丽
厌氧菌在适当的培养基上，经35℃、厌氧环境 （80%N2、10%H2、10%CO2）下孵育48~72小时,经涂 片染色、菌落特征、耐氧试验、生化反应等作出 鉴定。
检验流程
厌氧菌培养驯化
厌氧反应池B-107在正式投用前要进行厌氧菌的培养和驯化,
具体方法步骤如下：
1、将中活性污泥打入厌氧池中作为接种污泥;打入的污泥量以达到厌氧池正常操作水位的10%为宜;
2、启动气浮水提升泵P-101向厌氧池注入污水,注入量以达到正常操作水位的40%左右,即污水量加活性污泥量达到厌氧池正常操作水位的50%;
3、启动潜水搅拌器流以保持池内污水处于搅拌状态,不致使污泥沉在池底;
然后即使池内厌氧菌自行生长繁殖;每2天启动一次气浮水提升泵P-101向厌氧池内注污水,每次注入5%液位10天后即达到正常操作液位;
4、在厌氧菌培养阶段每天分析一次池内污水中的CODcr、氨氮和总磷;保持CODcr在300 mg/L 以上,氨氮在 mg/L以上,总磷在 mg/L以上;
如果CODcr低于300 mg/L则立即启动气浮水提升泵P-101向池内注污水,如果氨氮低于 mg/L 则向池内投加尿素以补充氮源,如果总磷低于 mg/L则向池内投加磷酸三钠;投加的数量以达到上述指标为准;
5、10天后如分析结果显示池中的CODcr和氨氮比进水降低20%以上,说明厌氧菌已经生成,则进入污泥培养驯化阶段;
6、进入污泥驯化阶段时,启动气浮水提升泵P-101向池内连续进水,同时也连续出水;进水量控制在正常进水量的10%左右;每天提高一次进水量,每次提高正常进水量的10%;10天后即达到正常进水量;
7、在污泥培养驯化阶段每天分析一次CODcr,和氨氮;如果出水中的CODcr和氨氮比进水中的CODcr和氨氮降低30%以上,说明厌氧菌已形成,可以转入正常操作状态,投入正常运行;
厌氧菌的分离、培养及鉴定
厌氧菌的分离、培养及鉴定
1.1实验内容:
厌氧菌的分离、培养及鉴定;
1.2目的:
1掌握厌氧菌的分离、培养及活菌计数的一般方法。
了解厌氧菌菌鉴定的一般方法。
2复习并巩固平时所学的微生物知识与技能。
3培养独立思考、设计和动手实验的能力。
二介绍:
厌氧微生物在自然界分布广泛，种类繁多，其生理作用日益受到人们的重视。
专性厌氧菌，对氧气非常敏感，因此，他们的分离、培养及活菌计数的关键是提供无氧和低氧化还原电势的培养环境。
厌氧菌的培养:
在培养厌氧菌时，最需要控制的是厌氧条件，在pH=7.0,O2的浓度与1atm 的氧平衡时，O2--O2-反应的电位是0.81V，因此，在-0.33V时，O2浓度是大气压中O2浓度的10-75。每升饱和了空气的水中含有1.48×10-55个O2。所以说，要保证厌氧菌培养时的低电位是很重要的。
厌氧菌的培养方法很多，如厌氧箱法、厌氧袋法、厌氧罐法。这些方法都需要特定的除氧措施，操作步骤多，较繁琐。本实验介绍的是一种简便的试管培养法--亨盖特厌氧滚管技术，亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特
于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术因此他是世界上第一个分离纯化厌氧菌的人。
以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趋完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一套完整技术，而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。该技术的优点是:预还原培养基制好后，可随时取用进行试验;任何时间观察或检查试管内的菌种都不会干扰厌氧条件。
厌氧菌的培养方法
厌氧菌的培养方法
厌氧菌是一类不能在氧气存在下生长和繁殖的微生物。这些微生物在
许多领域都具有重要的应用价值，包括环境保护、生物能源生产等。因此，为了研究和应用这些厌氧菌，科学家们发展了多种厌氧菌的培养方法。本
文将详细介绍常用的三种厌氧菌的培养方法。
一、利用情境气氛培养厌氧菌
情境气氛培养是培养厌氧菌的一种常用方法，其原理是通过调节培养
基的气氛来控制氧气浓度。在培养厌氧菌时，一般会采用以下方法之一来
制备情境气氛。
1.预氧化法：将培养容器密封，置于28-37°C的恒温灭菌箱中。然
后通过注入一定比例的高纯度二氧化碳-氧气混合气体，使容器内的气氛
变为厌氧情境。这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较低的情况。
2.双液低压法：将培养基分成两个相隔的容器，分别加入不同的培养液。然后将两个容器封口并贴膜，用胶带封好。经过一段时间后，在密封
的容器内会形成低压情境。这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较高
的情况。
通过以上两种情境气氛培养方法，可以模拟出适合厌氧菌生长的条件。
二、利用厌氧培养器培养厌氧菌
厌氧培养器是一种专门用于培养厌氧菌的装置，其原理是通过封闭式
容器和气氛控制系统，实现在厌氧情境下的培养。常用的厌氧培养器有以
下两种类型：
1.商用厌氧培养器：通常有专门的培养室和压力控制系统，可以产生适合厌氧菌生长的气氛。在这种培养器中，可以根据菌株的特性进行相应的操作和调节。
2.自制厌氧培养器：由于商用的厌氧培养器设备较为昂贵，对于一些实验室来说并不实际。因此，一些实验室会开发自己的厌氧培养器。自制培养器的原理和商用培养器类似，只是在设计和制作上有所差异。
厌氧菌
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
厌氧微生物培养技术的目的和原理
厌氧微生物培养技术的目的和原理
厌氧微生物培养技术是一种特殊的微生物培养技术，用于培养需要在
无氧（或低氧）条件下生长的微生物。传统的培养技术通常在常氧（或高氧）条件下进行，但很多微生物对氧气敏感，只有在无氧或低氧条件下才
能生长和繁殖。因此，厌氧微生物培养技术通过提供适宜的无氧（或低氧）环境，使得这些微生物能够在实验室中进行培养和研究。下面将对厌氧微
生物培养技术的目的和原理进行详细的阐述。
1.研究厌氧微生物的生长特性：通过培养厌氧微生物，可以研究其生
长速度、代谢途径、产生的代谢产物等生物学特性。这有助于了解厌氧微
生物的生态功能和对环境的影响。
2.分离和纯化厌氧微生物：通过厌氧培养技术，可以将混合微生物群
体中的厌氧微生物单独分离出来。这有助于研究单个厌氧微生物的特性，
并为进一步的研究提供纯化的微生物株。
3.研究厌氧微生物的代谢途径和产物：许多厌氧微生物具有特殊的代
谢途径，如厌氧呼吸、厌氧发酵等。通过培养这些厌氧微生物，可以研究
其代谢途径和产物，有助于理解它们在生物地球化学循环中的角色。
1.提供无氧（或低氧）环境：为了使厌氧微生物能够生长和繁殖，必
须在培养过程中提供无氧（或低氧）的条件。通常采用的方法是使用密封
的容器或瓶子，将培养物与外界的氧气隔离开来。为了进一步确保无氧环境，可以添加还原剂如硫化钠或葡萄糖，以降低培养液中的氧气含量。
2.确定厌氧微生物的生长需求：不同的厌氧微生物对培养条件有不同
的要求，如温度、pH值、营养物质等。在培养之前需要进行调查和研究，以确定最适合其生长和繁殖的条件。
实验十二 厌氧性细菌(1稿)
实验十二厌氧性细菌（厌氧培养方法）
厌氧性细菌（Anaerobicbacteria）是一大群必须在无氧或低氧环境中才能生长繁殖的细菌；一般情况下，这类细菌在无氧条件下比在有氧环境中生长好，不能在空气（氧气浓度大于18%）和（或）二氧化碳浓度小于10%以下的固体培养基表面生长。这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢多以无氧发酵的方式进行。它能引起人体不同部位的感染，包括阑尾炎、胆囊炎、中耳炎、口腔感染、心内膜炎、子宫内膜炎、脑脓肿、心肌坏死、骨髓炎、腹膜炎、脓胸、输卵管炎、脓毒性关节炎、肝脓肿、鼻窦炎、肠道手术或创伤后伤口感染、盆腔炎以及菌血症等。（一）无芽胞厌氧菌主要种类及生物学性状
无芽胞厌氧菌共有23个属，与人类疾病相关的主要有10个属。
1.革兰阴性厌氧杆菌有8个属，类杆菌属中的脆弱类杆菌最为重要。形态呈多形性，有荚膜。除类杆菌在培养基上生长迅速外，其余均生长缓慢。
2.革兰阴性厌氧菌有3个属，其中以韦荣菌属最重要。为咽喉部主要厌氧菌，但在临床厌氧菌分离标本中，分离率小于1%，且为混合感染菌之一。其他革兰阴性球菌极少分离到。
3.革兰阳性厌氧菌有5个属，其中有临床意义的是消化链球菌属，主要寄居在阴道。本菌属细菌生长缓慢，培养需5～7天。
4.革兰阳性厌氧杆菌有7个属，其中以下列3个属为主：
（1）丙酸杆菌属：小杆菌，无鞭毛，能在普通培养基上生长，需要2～5天，与人类有关的有3个种，以痤疮丙酸杆菌最为常见。
（2）双歧杆菌：呈多形性，有分枝，无动力，严格厌氧，耐酸。29个种中有10个种与人类有关，其中只有齿双歧杆菌与龋齿和牙周炎有关。其他种极少从临床标本中分离到。
厌氧菌的培养方法
厌氧菌的培养方法
厌氧菌是一类不能在氧气环境下生长的微生物，其培养方法与其他菌种有所不同。为了成功培养厌氧菌，我们需要采取特殊的培养条件和方法。下面我将详细介绍厌氧菌的培养方法。
一、厌氧培养条件的建立
1. 气氛控制：培养厌氧菌的关键是防止氧气的进入。常用的气氛控制方法包括密封法、气体置换法和用稀有气体混合气体置换法。其中，密封法是最常用的方法。我们可以将培养基置于密封的容器中，并注入一定量的气体，如氮气、氩气或二氧化碳等，从而构建无氧环境。
2. pH控制：厌氧菌对pH值较为敏感，一般要求pH值在6.8至7.4之间。所以，在培养厌氧菌时，我们需要对培养基的pH进行调节。
3. 温度控制：不同的厌氧菌对温度的要求各有不同，一般在25至37之间。在培养过程中，应根据具体菌株的要求进行控制。
4. 无氧条件维持：在培养过程中，需要保持无氧条件，避免氧气的进入。一般可以选择在无氧罐中进行培养，该罐内有还原剂（如碘化钠、甲酚等）与氧气发生反应，将氧气消耗掉。
二、厌氧菌的预培养方法
在真正进行厌氧培养之前，我们需要进行预培养，以提高成功培养的几率。
1. 培养基制备：根据具体菌株的不同要求配制培养基。
2. 保护性缓冲层：在培养基上覆盖一层液体密度较高的液体，如厌氧缓冲液、灌封液等。这层液体可以形成一个保护层，避免氧气的进入。
3. 器具处理：将要使用的器具（如培养瓶、移液管等）经过高温高压灭菌或用灭菌包装。
4. 预培养条件：在厌氧罐或无氧条件下，将培养基接种菌种。一般预培养时间较短，一般为12至24小时。
5. 初代接种：将预培养的菌种移植到新的含有适宜的培养基的无氧培养容器中。
厌氧细菌培养方法的步骤
1. 准备培养基：选择适合厌氧细菌生长的培养基，如缺氧琼脂或者含有还原剂的液体培养基。在实验室通气橱中进行操作，确保培养基不会受到氧气污染。
2. 设置好培养条件：调整好培养基的pH值和温度，使其适合目标细菌的生长。另外，根据需要添加适量的营养物质和生长因子。
3. 处理样品：将待培养的厌氧细菌样品接种到培养基上。在通气橱中用无菌技术操作，避免细菌受到氧气污染。
4. 封闭容器：将接种好的培养皿或者管子密封好，以防止氧气进入。可以使用气密性较好的培养皿或者密封膜进行覆盖，确保细菌在无氧环境中生长。
5. 培养：将密封好的培养皿或者管子放入恒温培养箱或者恒温振荡培养箱中，以固定温度和适当的湿度进行培养。根据目标厌氧细菌种类的需求，培养的时间可能会有所不同。
6. 观察和收获：在培养结束后，可以打开培养皿或者管子，观察厌氧细菌的生长情况。根据需要，可以进行进一步的分离和纯化，或者收集细菌进行后续的实验操作。
培养相应的厌氧菌
（3）亨盖特滚筒技术 (Hungate roll-tube technique)
是利用除氧筒来制备高纯度氮，用纯氮驱除小环境中的空气， 使培养基的配制，分装、灭菌和贮存，以及菌种的接种、培养、 观察、分离、移种和保藏等过程始终处于高度无氧条件下。
（4）厌氧罐 （anaerobic jar)
（5）厌氧手套箱 （anaerobic glove box)
（二）液体培养法
1.好氧菌的培养 通过增加液体与氧的接触面积或提高氧分压 来提高溶氧速率，主要措施是： （1）浅层液体培养； （2）利用摇床对三角瓶培养物作振荡培养； （3）在深层液体培养瓶的底部通入加压空气， 用空气分布器使以小泡形式均匀喷出； （4）对培养液进行机械搅拌，并在培养器的 壁上设置挡板装置。
多功能产酯大曲：
2.厌氧的堆积培养法
如白酒生产中的深层地窖发酵法
（二）液体培养
1.好氧菌的培养
（1）浅盘培养（shallow pan cultivation)
(2)利用发酵罐作深层液体发酵 发酵罐的主要作用是要为微生物提供丰富而均匀的 养料，良好的通气和搅拌，适宜的温度和酸碱度， 并能确保防止杂菌污染。
⑦从单纯微生物细胞——高等动、植物细胞；
⑧从单菌发酵发展——混菌发酵；
பைடு நூலகம்
⑨从利用野生菌种——利用变异株以及“工程菌”
一 、实验室培养法
污水处理培养菌种方法
污水处理培养菌种方法
一、引言
污水处理是保护环境和人类健康的重要环节，其中污水处理中的微生物处理过
程起着至关重要的作用。菌种的选择和培养方法对于污水处理的效果起着决定性的影响。本文将介绍污水处理中常用的菌种培养方法，以及相应的标准格式文本。二、菌种的选择
在污水处理过程中，常用的菌种有好氧菌、厌氧菌、硝化菌和反硝化菌等。根
据不同的处理要求，可以选择适合的菌种进行培养。
三、菌种培养方法
1. 好氧菌培养方法
好氧菌是在氧气存在下生长的菌种，对于氧化有机物质具有较高的能力。其培
养方法如下：
（1）准备好氧气充足的培养基，如LB培养基。
（2）将菌种接种于培养基上，通常采用无菌的接种环进行接种。
（3）将接种好的培养基放入恒温摇床中，以适当的温度和摇动速度进行培养。
（4）培养一定时间后，可观察到菌落的生长情况。
2. 厌氧菌培养方法
厌氧菌是在无氧或微氧环境下生长的菌种，对于降解有机物质具有较高的能力。其培养方法如下：
（1）准备好无氧或微氧条件下的培养基，如厌氧培养基。
（2）将菌种接种于培养基上，通常采用无菌的接种环进行接种。
（3）将接种好的培养基放入无氧或微氧条件下的培养箱中，控制好温度和湿度。
（4）培养一定时间后，可观察到菌落的生长情况。
3. 硝化菌培养方法
硝化菌是在氧气存在下将氨氮氧化为亚硝酸盐和硝酸盐的菌种，对于去除污水中的氨氮具有重要作用。其培养方法如下：
（1）准备好含有氨氮的培养基，如氨氮含量为50mg/L的硝化培养基。
（2）将菌种接种于培养基上，通常采用无菌的接种环进行接种。
（3）将接种好的培养基放入恒温摇床中，在适当的温度和摇动速度下进行培养。
厌氧菌的培养特性
2 菌落性状 1）色素 产黑色素类杆菌2~10天可产生 黑色素；溶齿放线菌培养3~4天产生粉红 色色素 2）溶血 产气夹膜梭菌在新鲜的血琼脂 平板上可产生双溶血环 3）荧光
Байду номын сангаас
3 抗生素敏感实验 4一些特殊的敏感实验—— 聚茴香脑磺酸 钠敏感实验 5生化特性 6气液相色扑 7 PCR等等
0 + + +
+ ++ ++ ++
++ ++ ++ +
0 + ± ±
± + ++ +
致病的原因
1 组织缺氧或氧化还原电势降低 穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿 瘤压迫等等 2 机体免疫力低下
临床的症状
1 感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏 死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感 染的特征 2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂 片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴 性的 3 其它等等
2 ）标本的接种 每份标本应接种3个培养平板，分别 放置于有氧，无氧和含5%~10%的CO2的 容器中，有时需要专用的培养基
3） 厌氧培养法 a 厌氧罐培养法 b 气袋法 c 气体喷射法 d 厌氧手套箱法 e 其它等等
污水处理培养菌种方法
污水处理培养菌种方法
1. 引言
污水处理是保护环境和人类健康的重要环节。菌种的选择和培养对于有效处理
污水至关重要。本文将介绍一种常用的污水处理培养菌种方法，包括菌种选择、培养条件、培养方法和菌种应用等方面。
2. 菌种选择
在污水处理中，常用的菌种主要包括厌氧菌、好氧菌和厌氧-好氧菌。厌氧菌
主要用于有机物分解和沉淀，好氧菌主要用于氨氮和硝酸盐的氧化，而厌氧-好氧
菌则能同时适应厌氧和好氧环境。
3. 培养条件
菌种的培养需要适宜的环境条件。一般来说，温度、pH值、氧气和营养物质
是影响菌种生长的主要因素。对于厌氧菌，通常在35-40摄氏度下培养，pH值在6.5-7.5之间；好氧菌则适宜在25-30摄氏度下培养，pH值在7-8之间。而厌氧-好
氧菌则需要提供适宜的厌氧和好氧条件。
4. 培养方法
菌种的培养方法主要包括液体培养和固体培养两种。
4.1 液体培养
液体培养是最常用的菌种培养方法之一。首先，准备好适宜的培养基，包括碳源、氮源、矿物盐和其他必需的营养物质。然后，将培养基倒入适宜的培养容器中，如培养瓶或培养皿。接下来，将菌种接种到培养基中，并在适宜的条件下进行培养，如温度、pH值和氧气浓度等。培养一段时间后，可以通过观察培养物的生长情况
和菌落形态来判断菌种的生长情况。
4.2 固体培养
固体培养是一种将菌种培养在固体培养基上的方法。首先，准备好适宜的固体培养基，如琼脂或琼脂糖。然后，将固体培养基倒入培养皿中，并在适宜的条件下进行固化。接下来，将菌种接种到固体培养基上，并在适宜的条件下进行培养。培养一段时间后，可以通过观察培养皿上的菌落形态和颜色来判断菌种的生长情况。
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关于厌氧菌培养方法的探讨
啤酒有害菌是纯生啤酒生产中微生物检验最重要的一项指标，如何对啤酒进行有效的厌氧菌(即有害菌)检测意义重大。影响厌氧菌检验的因素很多，其中最重要的是能否达到厌氧菌培养所需的厌氧环境。本文结合作者多年的工作经验，对厌氧培养箱法培养厌氧菌进行初步探讨
1 常见的厌氧菌培养方法
1．1 最古老的方法：蜡烛耗氧法此法利用蜡烛燃烧消耗封闭容器里的氧气，产生二氧化碳，在封闭容器内形成厌氧环境。此法产生的厌氧环境很难得到保证，培养过程不方便操作。1．2 置换法
通过真空泵使二氧化碳气体从厌氧罐底部进入，二氧化碳比重比氧气大，迫使氧气上浮，随着二氧化碳气体的逐渐充满氧气从顶部排出，在厌氧罐里形成厌氧环境。使用此方法，成本较低+佩操作繁琐，厌氧程度不能得到有效保证。
1．3 厌氧盒，罐法
厌氧盒，罐法是利用吸氧剂把厌氧盒，罐中的氧气吸收，使其达到无氧状态。由于厌氧盒容量一般较小，此法厌氧环境能够保证，但不能满足大生产需要；另吸氧剂成本较高。
1．4 厌氧培养箱法
通过真空泵先将箱内氧气抽出，充人氮气和混合气，使箱内形成厌氧环境。此厌氧环境在正静隋况下可一直保持。每次使用时只需置换过渡间的空气，实现与培养箱内的互通，进行样品的放置或取出等操作。
2 厌氧培养箱法简单介绍
2．1 初始厌氧环境的形成
为了严格保证厌氧环境，一般采取20次抽真空和充N2过程进行初始化。
2．2 样品放置的步骤
在样品放置过程中．可以采用三次抽真空，两次N2清洗交替进行，使厌氧培养箱内的氧气含量低于l％。在厌氧菌培养过程中，适当保持培养箱内的厌氧气体压力，使形成轻微正压，以保证厌氧环境。
2．3 使用要点
由于厌氧培养所需的时间比较长，一个厌氧培养箱内又不可能只培养一个时期的样品，这就牵涉到不同时期样品的进出。在放、取样品进厌氧培养箱时，都要先通过过渡间，只有过渡问的外门开启接触到外界空气，在样品进入过渡间后．经过平衡清洗程序使厌氧环境得到控制，而培养箱中存有的少量氧气可通过催化剂吸收。通过厌氧指示剂来检查厌氧培养箱内是否达到厌氧程度如果指示剂呈白色则表明达到厌氧程度，厌氧程度不足时，指示剂呈红色。当出现指示剂呈红色状态时，可按照以下步骤对厌氧培养箱进行检查：氮气和混合气的瓶内压力或输出压力是否符合要求，如果不符合，要及时调整气罐上的气阔，把进气阀调到正常的进气状态；同时，要检查连接气瓶的管道与厌氧培养箱的接口密封是否完好，以上两项都符合要求时，就要检查厌氧培养箱内两道封闭门是否关好，压力释放瓶中石蜡液位和石蜡油的颜色是否正常，当石蜡油的颜色由无色透明变成黄色时，就要更换石蜡油。
另外，在日常维护时，还要注意培养箱能否进行自动补气程序，视窗、套筒、套筒口和护套是否完好无裂缝。同时还要经常检查箱内的温度是否达到要求。培养箱内的催化剂和干燥剂要按频率进行再生，以保持箱内环境的干燥和厌氧环境等。
3 结论
厌氧培养箱法虽然初始操作较繁琐，但每次操作时简便，可随时进行样品的放置、取出、观察；箱体容量大，能制造较大的厌氧空间，满足大生产需要；厌氧程度较高，样品能立即进入厌氧环境，使结果更准确可靠。此设备体积较大，占地多，一次性投资大，但消耗费用较低。目前这种厌氧培养箱只有一小部分能进行自动温度控制，其余存放样品的空间温控要靠室温调节，这是有待改进的地方。经过多年的实践，我们发现厌养培养箱法技术成熟可靠，是大企业啤酒有害菌检测比较理想的方法。