志贺菌属的培养与鉴定实验论文
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析作者：代永联郝小静衣服德檀学进冯永胜来源：《国外畜牧学·猪与禽》2020年第04期摘要：从青岛某规模化鸡场的病鸡上分离到一株疑似志贺氏菌的病原菌（编号为LB2-1），通过培养纯化和16S rDNA测序等，确定该菌株为宋内氏志贺氏菌。
药敏试验发现LB2-1菌株已经对多种抗生素产生了不同程度的耐药性，因此在临床治疗时，要精准选用抗生素，或选用不易产生耐药性的微生态制剂进行治疗，从而减少细菌耐药性的产生。
关键词：志贺氏菌;分离鉴定;16S rDNA;耐药性分析中图分类号：S858.31 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2020）04-0054-03志賀氏菌是一种能引起人和动物腹泻的革兰氏阴性杆菌。
根据抗原结构，其可分为痢疾志贺氏菌（Shigella dyseteriae）、福氏志贺氏菌（Sh. flexneri）、鲍氏志贺氏菌（Sh. boydii）和宋内氏志贺氏菌（Sh. sonnei）四个种群 [1]。
2019年9月，我们从青岛某规模化鸡场的病鸡肝脏中分离到了一株疑似志贺氏菌的病原菌（编号为LB2-1），通过分离培养、生化反应以及16S rDNA测序，最终确定该菌株为宋内氏志贺氏菌。
药敏试验发现，该菌株对多种抗生素有不同程度的耐药性，但对左氧氟沙星和丁胺卡那最为敏感，对新霉素和盐酸多西环素的敏感性次之，这一结果可供当地鸡场在防治畜禽宋内氏志贺氏菌病时提供参考。
1 材料与方法1.1 材料NA培养基、SS琼脂培养基、麦康凯培养基、营养肉汤培养基、志贺氏菌显色培养基、三糖铁培养基和志贺氏菌成套生化鉴定管等均购于青岛海博生物技术有限公司。
1.2 主要仪器设备SW-CJ-1FD型超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司），SHP-250型智能生化培养箱（上海三发科学仪器有限公司），ZHWY-100B型恒温培养摇床箱（上海一恒科学仪器有限公司），BX53生物显微镜（日本奥林巴斯医疗株式会社），Research plus可调量程移液器（Eppendorf公司）。
痢疾
3
二、国内研究现状（1000 字以内）
志贺菌
(一)生物学性状 革兰染色阴性， 杆菌， 无鞭毛,有菌毛. 在肠道鉴别培养基上形成无色, 半透明的菌落.均能分解葡萄糖只产酸不产气,除宋内志贺菌迟缓发酵乳糖外, 均不分解乳糖. 抗原构造与分类 有 O 和 K 两种抗原.O 抗原是分类的依据, 将志贺菌属分为四群(种)40 余血清型(包括亚型). (二)致病性与免疫性 1.致病物质主要是侵袭力和内毒素,有的菌株尚产生外毒素. (1)侵袭力 借菌毛粘附,穿入回肠末端和结肠粘膜上皮细胞,在上皮细胞内繁 殖,形成感染灶,引起炎症反应.细菌一般不进入血流.志贺菌穿透上皮细胞的能 力,由基因所控制.志贺菌只有侵入肠粘膜后才能致病. (2)内毒素 1)作用于肠粘膜,使通透性增高,促进对内毒素的吸收,引起发 热,神志障碍等. 2)破坏肠粘膜,形成炎症,溃疡,呈现典型的脓血粘液便. 内毒素还能作用于肠壁植物神经系统,使肠功能发生紊乱,肠蠕动失调和痉挛. 尤其是直肠括约肌痉挛最明显,因而出现腹痛,里急后重等症状. （3)外毒素 A 群志贺菌 I 型和 II 型还能产生外毒素,称志贺毒素.使蛋白质合 成中断(上皮细胞损伤). 2.所致疾病 传染源是病人和带菌者. 传播途径主要为粪一口.人类对志贺氏菌较易感. 痢疾志贺菌引起病情较重;宋内志贺菌多引起轻型感染;福氏志贺菌感染易转变 为慢性,病程迁延;福氏和宋内志贺菌是我国常见的流行型别. 临床感染类型 (1)急性菌痢 局部症状有脓血便,腹痛,里急后重. 急性中毒性菌痢,以小 儿多见,无明显的消化道症状,主要表现全身严重的中毒症状.各型志贺菌都有 可能引起.临床主要有高热,神志障碍,休克,病死率较高. (2)慢性菌痢 病程>2 月,迁延不愈,局部症状为主. 3.病后建立的型特异免疫(SIgA)短暂,不持久,无交叉. 4 致病机制 痢疾杆菌经口进入消化道后，在抵抗力较强的健康人可被胃酸大部分杀灭， 即使有少量未被杀灭的病菌进入肠道，亦可通过正常肠道菌群的拮抗作用将其 排斥。此外，在有些过去曾受感染或隐性感染的患者，其肠黏膜表面有对抗痢 疾杆菌的特异性抗体（多属分泌性 IgA） ，能排斥痢疾杆菌，使之不能吸附于肠 黏膜表面，从而防止菌痢的发生。而当人体全身及局部抵抗力降低时，如一些 慢性病、过度疲劳、暴饮暴食及消化道疾患等，即使感染小量病菌也容易发病。 痢疾杆菌侵入肠黏膜上皮细胞后，先在上皮细胞内繁殖，然后通过基底 膜侵入黏膜固有层，并在该处进一步繁殖，在其产生的毒素作用下，迅速引起 炎症反应，其强度与固有层中的细菌数量成正比，肠上皮细胞坏死，形成溃疡。
志贺菌属的微生物学检验分析
２ ０ １ ４ 年１ 月第 １ 期
志贺 茵 属 的微 生 物 学检 验分 析
孙 向利
（黑龙江省计划 生育科学研 究所 黑龙江 哈尔滨 １ ５ ０ ０ ２ ０ ）
摘要 ： 对志贺茵属的物生物学检验 方法及 临床意 义进分析 ， 属 包括 痢疾 志贺 茵、 福 氏志贺菌、 鲍 氏志贺 茵及 宋 内志贺 茵四个种。 其 中痢疾志贺茵引起 的茵痢症状最重 ， 宋 内志贺 茵最轻 ， 以福 氏和 宋 内志 贺茵 引起 的茵痢 最为 多见 。本 茵属 均可致 细茵性 痢疾或
１ ． ３ 检验方法
制成浓厚菌液 ， 隔水煮 沸 １ ｈ ， 以破坏 Ｋ抗 原。待冷后 ， 再 按顺序 重作玻片凝集试验 。进 行玻 片法 凝集试 验 时 ， 如所用 血 清合乎 要求 ， 则所有 阳性结 果 ， 应 于血清 与菌液 混合 后立 即 出现 ， 至多 不迟于 Ｉ ｍ ｉ ｎ ， 且所显示 的凝集 颗粒 亦极 明显而较 粗大 。如 果遇 有凝集反应出现迟缓 或凝集 颗粒 细微 时 ， 则 应考 虑是 否为 共 同 抗原的类属反应 。ｃ ． 血清学鉴定 ， 一般用玻片法进行定性凝集试
１ ． ３ ． ４ 于血清学鉴定工作中 ， 应注意下述事项 ： 本属各菌 除
福氏 １ ａ 、 ｌ ｂ 、 ２ ｂ 、 ３ 、 ４ ａ和 ５型 细菌 以及 宋 内菌外 ， 均具有 Ｋ抗原
志贺菌属包括 痢疾 志贺菌 、 福 氏志 贺菌 、 鲍 氏志贺 菌 、 宋 内
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析鸡源宋内氏志贺氏菌是一种常见的食品中毒病原菌，可以引起人类食物中毒，严重时甚至危及生命。
鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析对于食品安全和公共卫生具有重要的意义。
本文将介绍一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定过程，并对其耐药性进行了分析。
一、样品的分离鉴定我们从市场上购买了一份鸡肉样品作为研究对象。
然后，我们在实验室中将鸡肉样品进行处理，经过一系列的分离和培养过程，最终得到了一株鸡源宋内氏志贺氏菌。
在得到菌株后，我们进行了一系列的鉴定实验，包括形态学观察、生理生化特性测试和分子生物学鉴定。
通过形态学观察，我们发现该菌株为革兰氏阴性菌，呈杆状或弯曲状；通过生理生化特性测试，我们得到了一些重要的鉴定结果，比如该菌株能够利用葡萄糖和乳糖进行发酵，不能利用木糖和蔗糖进行发酵；通过分子生物学鉴定，我们利用PCR方法扩增了该菌株的16S rDNA基因，并进行了序列分析，结果表明该菌株的16S rDNA序列与已知的鸡源宋内氏志贺氏菌的序列高度一致。
二、耐药性分析为了进一步了解该菌株的耐药性情况，我们对其进行了抗生素敏感性试验。
我们选择了常用的七种抗生素，包括氨苄青霉素、头孢呋辛、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类、大环内酯类和β-内酰胺类抗生素。
结果显示，该菌株对氨苄青霉素和四环素类抗生素表现出了耐药性，对其它抗生素则表现出了较好的敏感性。
我们还进行了耐药基因的检测，结果显示该菌株携带了多个抗生素耐药基因，包括β-内酰胺酶基因和四环素类抗生素的耐药基因。
这些耐药基因的存在表明该菌株对抗生素的耐药性可能是由多重耐药基因的共同作用所致。
三、对策建议鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定和耐药性分析结果表明，食品中的该菌株可能对抗生素产生较强的耐药性，这给公众的食品安全带来了一定的威胁。
我们建议相关部门和企业应采取以下对策来加强食品安全管理和预防控制工作：1. 加强食品生产过程中的卫生管理，确保食品生产环节的卫生条件符合标准要求，减少食品中负荷菌的污染。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析鸡源宋内氏志贺氏菌是一种人畜共患感染病原，能引起志贺氏菌痢疾。
为了了解鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性情况，本研究对采集自鸡源宋内氏志贺氏菌的菌株进行了分离培养并进行了鉴定和耐药性分析。
我们将从鸡源宋内氏志贺氏菌携带者的粪便样品中采集到的菌株进行分离培养。
将样品直接接种在亚洲山羊血琼脂培养基中，利用平板涂布的方法进行无菌条件下的培养，培养基固化后，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱中，培养一天后，出现了菌落生长。
然后用无菌的铁环将菌落转移到一片新的亚洲山羊血琼脂培养基上，继续进行培养。
接下来，我们对分离得到的菌落进行形态学和生化学鉴定。
首先观察菌落形态，判断菌落的大小、形状、表面光滑程度等指标。
然后进行革兰氏染色，观察细菌形态以及是否存在革兰氏阴性指示性反应。
还进行了氧需求情况、运动性、产气性、氧化酶活性等方面的生化试验。
根据以上的鉴定结果，初步确定菌株为鸡源宋内氏志贺氏菌。
我们对菌株的耐药性进行了分析。
采用纸片扩散法进行抗生素敏感性试验。
选取常见的7种抗生素，包括庆大霉素、氟哌酸、磺胺嘧啶、氨苄西林、氯霉素、四环素和链霉素。
将这些抗生素纸片放置在分离得到的菌株所形成的琼脂培养基表面，然后进行培养。
培养后观察抗生素纸片周围是否出现菌落禁区，从而判断菌株对抗生素的敏感性。
通过以上实验，我们得到了鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定结果和抗生素耐药性信息。
这些数据可以为相关疾病的防控和治疗提供重要的参考依据，也有助于了解该菌株的传播途径和流行病学特点。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析鸡源宋内氏志贺氏菌（Salmonella enterica serovar Typhimurium，简称S. Typhimurium）是一种常见的食源性病原菌，可引起人类和动物的肠道炎症，导致食物中毒。
针对该菌株的分离鉴定与耐药性分析，既可以对疫情进行追溯，也可以为临床治疗提供参考。
对鸡源样品进行分离和纯化。
将鸡源样品（如鸡粪、鸡肉、鸡内脏等）加入无菌盐水中，制备出事先稀释好的样品悬液。
然后，取相应体积的样品悬液分别接种在选择性富营养琼脂平板上，尤其是MacConkey琼脂平板、XLD琼脂平板等，利用这些平板能够实现对Salmonella菌株的选择性富营养孵育。
培养后，根据菌落的形态特征，通过显微镜下的形态观察和宏观观察等方法，可初步从样品中分离鉴定出鸡源S. Typhimurium。
然后，在初步鉴定基础上，利用生化试剂盒和分子生物学方法鉴定并确证鸡源分离菌株的种属和亚种。
生化试剂盒可以检测菌株的特定产物，如硫化物产物、鸟氨酸酶等。
分子生物学方法则包括PCR扩增特定基因片段、序列测定和RAPD-PCR等。
这些方法可以通过分析菌株的DNA序列和特征，确定菌株的种属和亚种。
对鸡源S. Typhimurium菌株的耐药性进行分析。
可以利用药敏试验，将菌株接种在施威美敏感琼脂平板上，根据菌落的生长情况，观察菌株对不同抗生素的敏感性。
也可以通过分子生物学方法检测菌株的耐药基因，如PCR扩增β-内酰胺类抗生素分解酶TEM、SHV 等。
通过以上的分离鉴定与耐药性分析，可以对鸡源S. Typhimurium菌株的类型、亚种及其对常见抗生素的耐药性进行全面了解。
这为疫情追踪和临床治疗提供了重要的参考依据，有助于减少食源性疾病的传播，并选择有效的治疗方案。
鸡源鲍氏志贺菌hn03株的分子鉴定与演化分析
A bstract：Molecular identification and evolvement analysis of Shigella boydii strain hn03 isolated fro m chicken w ere researched in this study. E ight pairs of specific primers for housekeeping genes，e.g. thrB/ thrC，trpC /trpB ，purM /pur N and mdh/argR ，w ere designed according to the related sequences of shigella deposited in the GenBank database，and w ere used to amplify corresponding genes of hn03. T he PCR products w ere cloned into pMDl8- T vector and sequenced，the sequences reported in this paper have been submitted to GenBank. B y using the BL A S T and Clustal X program，the sequencing results w ere analyzed and the phylogenetic trees for 8 housekeeping genes in 4 regions of chromosome were established. B ased on the phylogenetic analysis，3 clusters of shigella strains were identified and nonetheless，were clearly within Escherichia coli. In this study，the locations are distributed identically for the shigella boydii isolated fro m chicken in four regions of chromosome，which are all contained in cluster 1.Shigella boydii isolated fro m chicken is probably originated fro m shigella boydii isolated fro m hum an on the level of whole gene. K ey words：chicken Shigella boydii；housekeeping genes；clone；sequence；phylogenetic tree
志贺氏菌的检验
HE平板原理及反应
发酵乳糖的肠杆菌
不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生 硫化氢，可能是沙门氏菌
（一）进一步生化试验 即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和 鸟氨酸脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以 及水杨苷和七叶苷的分解， 36℃培养。 志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。
（二）生化分群试验
接种生化培养基 从三糖铁琼脂上挑取培养物上,接种到： 5%乳糖发酵、甘露醇、棉籽糖和甘油发酵、靛基质 试验。 见P167：根据不同生化反应结果，可分为A群（痢 疾志贺氏菌）、B群（福氏志贺氏菌）、C群（鲍 氏志贺氏菌）、D群（宋内氏志贺氏菌）。
GB/T4789.5-2003 中志贺氏菌检验程序
（一）实验内容
样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分 离→→生化学试验→→结果报告
第一次 样品处理和增菌培养
预先准备并灭菌的器材 规格名称 • 1、18×180mm试管
数量
6支
• • • •
2、10ml移液管 1支 3、直径为90mm平皿 2套 4、250ml量筒与500毫升广口瓶 酌情 7 、不锈钢汤匙1把 ，玻璃珠，杜氏小管 酌情
（三）生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏 菌外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3 、不产生 H2S ，不分解尿素， V-P 试验阴性， 不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性，靛基质不定。 5、痢疾志贺氏菌不分解甘露醇，其它（福氏、 鲍氏、宋内氏）均可分解甘露醇。
志贺氏菌显色培养基上假阳性菌的进一步鉴定与分析
志贺氏菌显色培养基上假阳性菌的进一步鉴定与分析摘要】目的：对志贺氏菌显色培养基上的假阳性菌进行鉴定，为进一步鉴别志贺氏菌并改良显色培养基提供数据。
方法：将本实验室前期分离自自来水管网生物膜的52株志贺氏菌显色培养基上假阳性菌，通过生化方法进行进一步鉴定。
结果：经鉴定52株菌均为革兰阴性非志贺氏菌，分别为9个属：假单胞菌属（48.08%）、埃希氏菌属（17.31%）、枸橼酸杆菌属（13.46%）、不动杆菌属（7.69%）、普罗菲登斯菌属（3.85%）、弧菌属（3.85%）、肠杆氏菌属（1.92%）、变形杆菌属（1.92%）、寡养单胞菌属（1.92%）。
结论：有多种菌可能干扰显色培养基对自来水管网生物膜样本中志贺菌的分离鉴定，假单胞菌属的干扰性最大，需针对这些假阳性菌与志贺氏菌的生理生化特性改良志贺氏菌显色培养基。
【关键词】假阳性菌；检测；改良【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）16-0258-02志贺氏菌(Shigella)俗称痢疾杆菌 ,是引起人细菌性痢疾的肠道病原菌, 只需少量就可以发病,对人类生命安全和社会稳定有较大影响[1]。
随着微生物实验技术的发展, 志贺菌的检测鉴定技术也不断完善, 大致可以分为如下几类方法:培养与生化鉴定, 免疫学鉴定, 毒素检测以及分子生物学检测[2]。
这几种检测方法都各有利弊。
大量的文献报道表明显色法具有相对较高的敏感性和特异性,操作简便、快速, 可大大节省人力和物力，因此目前显色培养基法被广泛应用于大量样品的初筛[3-6]。
我们实验室开展自来水管网生物膜微生物的调查研究，用志贺氏菌显色培养基分离志贺菌时发现，一些菌落为白色或无色的可疑菌，与志贺氏菌诊断血清不能发生凝集。
本研究对这些假阳性菌进行进一步鉴定与分析，旨在揭示实验干扰菌的本质，为改进实验工艺提高分离率奠定基础。
1.材料与方法1.1 材料1.1.1菌株实验室保存的志贺氏菌显色培养基上白色或无色的可疑菌，但诊断血清凝集阴性的菌。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析鸡源宋内氏志贺氏菌是一种常见的细菌性肠道病原菌，可引起人类和动物的胃肠炎症。
鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析是对该细菌进行研究和监测的重要手段，有助于了解其传播和耐药机制。
鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定通常包括菌落形态、生化特性和分子生物学鉴定。
在培养基上，鸡源宋内氏志贺氏菌形成灰白色至浅粉色的菌落，通常为2-3毫米直径，呈圆形或不规则形状。
菌落表面光滑，边缘规则。
鸡源宋内氏志贺氏菌也是革兰氏阴性菌，可通过革兰氏染色方法观察到其细胞形态。
使用氧化/产酸反应、麦芽糖发酵和尿素酶等生化试验也可鉴定鸡源宋内氏志贺氏菌。
在分子生物学鉴定方面，常采用PCR技术检测鸡源宋内氏志贺氏菌的特异基因，如ompW和ompC等。
PCR反应通常以细菌基因组DNA为模板，引物的特异性可保证只有鸡源宋内氏志贺氏菌的DNA才被扩增。
耐药性分析是对鸡源宋内氏志贺氏菌耐药性的研究。
通常，在鸡源宋内氏志贺氏菌分离物中使用药敏试验来测试其对不同抗生素的敏感性。
这可以通过培养鸡源宋内氏志贺氏菌菌株在含有不同抗生素浓度的培养基上的生长情况来进行。
根据菌株的生长情况，可以确定它对不同抗生素的敏感性或耐药性。
常用的抗生素包括头孢菌素、氨基糖苷类和氟喹诺酮类等。
还需要对鸡源宋内氏志贺氏菌的多重耐药性进行分析。
多重耐药是指鸡源宋内氏志贺氏菌对多种抗生素同时具有耐药性。
多重耐药性的分子机制主要包括外源性耐药基因的传播和细菌基因组的改变。
可以使用PCR技术检测耐药基因的存在，并通过测序验证其序列。
通过比较分析敏感株和耐药株的细菌基因组序列，可以发现耐药株存在的特定基因改变。
志贺菌属的培养与鉴定实验论文
志贺菌属的培养与鉴定右江民族医学院10检本2班庞婷婷指导老师：汤丽霞，何印蕾，费世杰，何涛【摘要】目的对标本中的志贺菌属进行培养与鉴定。
方法对门诊患者粪便标本运用SS和中国蓝培养基培养志贺菌属，并进行生化，血清学鉴定和药敏试验。
结果志贺菌属发酵葡萄糖、甘露醇，不发酵乳糖、蔗糖，氧化酶试验阴性，IMVC 为（-+--），KIA为（KA--），MIU为（---），药敏试验：左氧氟沙星、复方新诺明、头孢噻肟、泰能四种药敏纸片的抑菌圈分别为30㎝、34㎝、38㎝、30㎝。
结论分离出志贺菌属，对左氧氟沙星、复方新诺明以及氨苄等的敏感性较高，为临床治疗提供可靠的治疗方案。
【关键词】志贺菌属，培养，鉴定，血清学【引言】志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。
根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾，福氏，鲍氏和宋内志贺菌四群。
我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢最为常见。
我们用临床门诊患者粪便标本进行培养与鉴定实验，现将实验分析情况报告如下：【器材与试剂】血平板，MAC培养基，SS培养基，KIA培养基，半固体培养基，酒精灯，接种环，接种针，载玻片，培养箱，光学显微镜，氧化酶纸片，药敏纸片，微量生化管，生理盐水，革兰染液，氧化酶试剂，甲基红试剂，吲哚试剂，液体石蜡，志贺菌诊断血清（包括志贺菌属四种多价血清及福氏，鲍氏或宋内志贺菌单价血清）等【实验过程与方法】1.标本采集：在治疗前采集黏液脓血便做床边接种，如不能及时接种可置甘油或卡里-布莱尔运送培养基内送检。
2.分离培养：取粪便或肛拭标本，用接种环挑取粪便中有脓血和黏液的部分直接在中国蓝培养基和SS培养基分区划线进行培养。
使之分散成单个细菌，在37℃培养18~24h，从而分离出单个菌落。
3. 鉴定3.1革兰染色：按照涂片→干燥→固定→染色的步骤进行革兰染色。
3.2氧化酶试验：无菌操作用滴管吸取氧化酶试剂，滴加于滤纸条菌落上，用滤纸条沾取少许被检菌落，观察滤纸条颜色变化。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
鸡源宋内氏志贺氏菌（Salmonella enterica serovar Typhimurium）是一种常见的食源性致病菌，常引起肠道感染。
为了进行对该菌株的分离鉴定与耐药性分析，我们采取以
下步骤。
1. 菌株分离与培养:
从感染鸡禽的肠道或粪便样品中，用无菌的匀液棒采集适量样品转移到含有富集培养
基（如Rappaport-Vassiliadis富集培养基）的培养皿中，然后在37℃恒温培养箱中孵育。
待菌落出现后，由菌落取样进行进一步分析。
2. 初步鉴定:
利用常规的生化试验，如氧化/发酵糖试验、硫代硫酸盐还原试验、脲酶试验等针对
菌株进行初步鉴定并与参考菌株进行比对。
3. 血清试验:
采用O抗原和H抗原血清试验，利用凝集反应或免疫荧光反应进行血清学鉴定。
从而
确定鸡源宋内氏志贺氏菌的血清类型。
4. 分子鉴定:
通过PCR技术，根据鸡源宋内氏志贺氏菌的特异基因进行PCR扩增，并进行凝胶电泳
分离，与已知鸡源宋内氏志贺氏菌的扩增产物进行比对，从而进一步确识鸡源宋内氏志贺
氏菌。
5. 耐药性分析:
采用药敏试验，通过纸片扩散法或微量稀释法测定多种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)。
还可以利用PCR技术对常见的耐药基因进行检测，如tetA、ampC、ctx-M等。
通过以上步骤，我们可以对鸡源宋内氏志贺氏菌进行分离鉴定与耐药性分析。
这些信
息对于了解这种细菌的传播途径、疫情监测以及合理使用抗生素具有重要意义。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
鸡源宋内氏志贺氏菌是一种常见的病原菌，能引起人和动物的胃肠道感染。
本文旨在探讨一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定以及其耐药性分析。
我们需要从鸡的粪便样品中分离出该菌株。
首先将粪便样品接种在优良的选择性琼脂培养基上，如马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
然后对培养基进行孵育，一般在37摄氏度孵育12-24小时后，会出现典型的鸡源宋内氏志贺氏菌的菌落，其特点是灰白色、圆形、平滑透明，并能发出不同程度的硫化氢气味。
还可以通过鸡源宋内氏志贺氏菌特有的生理生化特性，如产气特性、甲酸产生等进行初步鉴定。
然后，我们需要对分离到的鸡源宋内氏志贺氏菌进行进一步的鉴定。
现代分子生物学技术可以进行菌株的分子鉴定。
可以通过PCR扩增16S rRNA基因，再进行测序。
将所测序结果与数据库中的鸡源宋内氏志贺氏菌的16S rRNA序列进行比对，可以确认该菌株的身份。
在进行鉴定的还应对该菌株的耐药性进行分析。
可以利用标准的药敏试验方法，如纸片扩散法或肉汤微量制动法，来测试该菌株对不同抗生素的耐药性。
一般来说，鸡源宋内氏志贺氏菌已经呈现出对多种常见抗生素的耐药性，如氨苄西林、四环素、磺胺等。
我们还可以通过检测菌株中的β-内酰胺酶、氨基糖甙修饰酶等耐药基因的存在来进一步确认耐药性。
针对一株鸡源宋内氏志贺氏菌，我们可以通过菌落形态特征、生理生化特性以及分子鉴定方法来进行鉴定。
通过药敏试验和检测耐药基因的存在，可以对该菌株的耐药性进行分析。
这些分离鉴定与耐药性分析结果可以为鸡源宋内氏志贺氏菌的防控和治疗提供科学依据。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析【摘要】本研究旨在分离鉴定一株鸡源宋内氏志贺氏菌，并对其耐药性进行分析。
通过实验方法的应用，成功鉴定了目标菌株，并检测了其对不同抗生素的耐药性。
实验结果显示该菌株对多种抗生素呈现出一定的耐药性，同时分析了可能的耐药机制和影响因素。
结论部分总结了该菌株的耐药性情况，并阐述了研究结果的重要性与未来研究方向。
本研究对深入了解鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性提供了重要参考，为相关领域的耐药机制研究和临床治疗提供了理论基础，具有一定的研究意义和应用前景。
【关键词】关键词：鸡源宋内氏志贺氏菌、分离鉴定、耐药性、检测方法、耐药性分析、耐药性机制、影响因素、结论、研究意义、展望。
1. 引言1.1 研究背景鸡源宋内氏志贺氏菌是一种常见的食源性致病菌，可以引起人类食物中毒。
随着食品生产和加工工艺的发展，鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性问题越来越受到人们的关注。
目前，针对鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性状况及其耐药性机制的研究还比较有限，因此有必要对其进行深入的分析和探讨。
鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性是指其对抗生素的抗性能力，在临床治疗和预防中可能会造成不良影响。
了解鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性状况对于预防和控制其引起的食源性疾病具有重要意义。
本研究旨在通过分离鸡源宋内氏志贺氏菌，并对其耐药性进行分析，探讨其耐药性的机制，从而为食品安全提供科学依据，保障公众健康。
1.2 研究目的研究目的: 本研究旨在分离和鉴定来自鸡源的宋内氏志贺氏菌菌株，并对其耐药性进行深入分析。
通过对该菌株的耐药性进行检测和研究，我们希望揭示其耐药性机制，探讨可能影响其耐药性的因素，并为进一步研究该菌株的耐药性提供基础数据。
通过对该菌株的耐药性情况进行综合分析，我们还将探讨其对公共卫生和养殖业的影响，为预防和控制该菌株的传播提供理论依据。
通过本研究，我们希望能够更深入地了解鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性特点，为相关领域的研究和实践提供新的思路和技术支持。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析【摘要】本研究旨在分离、鉴定和分析鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性及相关机制。
通过实验从鸡源样本中成功分离得到一株鸡源宋内氏志贺氏菌。
随后进行了鉴定工作，确定了该菌株的确切身份。
接着，对鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性进行了详细分析，探讨了其可能的耐药性机制。
研究发现，耐药性与基因表达之间存在一定的关系。
最终，对该菌株的耐药性特点进行总结，并展望了未来研究方向，探讨了研究的意义和可能的应用价值。
本研究为深入了解鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性提供了重要参考，为相关领域的研究提供了新的思路与方向。
【关键词】鸡源、宋内氏志贺氏菌、分离、鉴定、耐药性、耐药性机制、基因表达、特点、研究方向、意义、应用、耐药性分析1. 引言1.1 研究背景鸡源宋内氏志贺氏菌是一种常见的食源性病原菌，可以引起食物中毒。
近年来，由于鸡的养殖环境和生产加工过程的不合理，导致了鸡源宋内氏志贺氏菌的传播和感染事件屡见不鲜，已经成为引起公共卫生事件的重要原因之一。
随着食品安全问题的日益突出，对鸡源宋内氏志贺氏菌的研究也变得愈发重要。
通过对其分离鉴定和耐药性分析，可以更好地了解该菌株的特性和耐药性机制，有助于制定更有效的预防和控制策略。
本研究旨在分离鉴定一株鸡源宋内氏志贺氏菌，并对其耐药性进行深入分析，探讨其耐药性机制和与基因表达的关系。
通过这些研究，将有助于全面了解鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性特点，为未来针对该病原菌的防控工作提供科学依据和参考。
在当前食品安全形势下，加强对鸡源宋内氏志贺氏菌的研究具有重要的现实意义，可以有效预防和控制其引发的食物中毒事件，维护人民健康和社会稳定。
深入研究该菌株的耐药性及其他特性具有重要的研究意义和应用潜力。
1.2 研究目的研究目的是为了探究鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定和耐药性研究，从而深入了解该菌株对抗生素的耐药机制和耐药性表达，为未来的临床治疗提供更可靠的依据。
通过对该菌株的耐药性分析，我们可以了解该菌株对不同抗生素的抗性情况，从而指导临床用药的选择和治疗方案的制定。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析鸡源宋内氏志贺氏菌（Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis）是一种常见的肠道细菌，也是一种重要的食源性病原菌。
由于其广泛分布于家禽等动物体内，并且能够通过污染的食品和水源传播给人类，因此对其进行分离鉴定与耐药性分析具有重要的意义。
鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定主要通过样品的培养和生化鉴定来进行。
从样品中提取出合适的菌落，如病鸡的粪便、肠道内容物等。
然后，将样品进行无菌转移到琼脂培养基上，进行培养并筛选出典型的菌落形成单纯染色菌基于细菌学鉴定，通过对其生化反应和生长特性的观察，可以初步鉴定出是否为鸡源宋内氏志贺氏菌。
进一步的鉴定可以通过分子生物学方法进行。
目前常用的是PCR技术，通过特定引物扩增鸡源宋内氏志贺氏菌的特异性基因片段，如SPI-1和SPI-2等，通过检测扩增产物的大小和序列进行确认。
也可以通过检测菌株的抗原性来进行鉴定，如血清凝集试验和免疫荧光试验等。
对于鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药性分析，可以通过纸片扩散法、肉汤稀释法和麦氏盐琼脂浓度梯度扩散法等传统方法来进行。
这些方法主要是在含有抗生素的琼脂培养基上培养菌落，并观察菌落对不同抗生素的敏感性。
通过测定最低抑菌浓度，可以判断菌株对不同抗生素的敏感性，并确定菌株的耐药性谱。
随着分子生物学技术的发展，也可以通过分析菌株的基因组来研究其耐药性。
利用测序技术对菌株的基因组进行测序，然后通过比对与已知耐药基因序列进行比对，可以发现并分析菌株中的耐药基因。
还可以通过转化、共轭传递和介导转座子等方法来研究菌株的耐药性转移机制。
鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析是对该病原菌进行研究和监测的重要手段。
通过采用不同的方法，可以准确鉴定菌株的种属，并了解其耐药性情况，为预防和控制鸡源宋内氏志贺氏菌引起的疾病提供科学依据。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析鸡源宋内氏志贺氏菌（Salmonella Enteritidis，缩写为SE）是一种引起食物中毒的重要病原菌，常见于家禽和家畜的消化道中，也是人类食源性感染的主要病原菌之一。
对鸡源SE的分离鉴定与耐药性分析具有极大的重要性。
鸡源SE的分离鉴定主要包括：样品收集与预处理、培养与分离、生化特性测试和分子鉴定。
1. 样品收集与预处理从鸡的粪便、肠道、食源性病例中的食品等样品中采集，避免交叉污染。
将样品放入含有缓冲液的稀释液中，通过液体悬浮，以获得菌落。
2. 培养与分离将预处理后的样品在选择性培养基（如MacConkey琼脂）上培养。
将培养基接种于含有Lysine铁琼脂的斜面培养基上，并在37℃条件下孵育。
在培养基上产生红色的菌落，形成具有黑质的氢化铁亮黄色等，是SE的特征。
3. 生化特性测试可通过革兰染色，检测SE的形态特征。
SE属于革兰阳性杆菌，其形态为短小的革兰阳性杆菌。
还可以进行生化鉴定，如亮氨酸脱羧试验、尿素分解试验、氧化酮酸试验等。
4. 分子鉴定利用PCR技术进行分子鉴定。
通过提取细菌DNA，并进行PCR扩增，使用SE特异的引物，扩增目标基因序列。
PCR产物经电泳分离后，根据特异的带型来确定鸡源SE的存在。
接下来是对鸡源SE的耐药性分析，主要包括：耐药性筛查和耐药基因检测。
1. 耐药性筛查将鸡源SE分离株接种于含有不同抗生素的培养基上，根据菌落的形成与生长情况来判断其对抗生素的耐药性。
在耐药性分析中，需要注意不同抗生素的选择，并根据临床和实验室的标准，对耐药性结果进行解释。
鸡源SE的分离鉴定与耐药性分析是对该病原菌进行全面研究的重要步骤。
通过这些分析，能够更好地了解鸡源SE的存在与传播途径，并为制定有效的预防和控制措施提供了有力的依据。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析本研究从市场上购买了一只活鸡样本，通过肠内容物的分离、纯化和鉴定，得到了一株鸡源宋内氏志贺氏菌。
本文就这一株菌进行了详细的分离鉴定和耐药性分析。
1. 材料和方法1.1 实验材料鸡肠内容物样本，含有志贺氏菌的肠道样本，氧气和二氧化碳混合气体，Petri 瓶，微生物涂片，革兰染色试剂，常见细菌培养基，如瑞利琼斯琼氏菌液体培养基、McConkey 培养基、营养琼脂、三联琼脂等，药盘，氯霉素、甲氧苄啶、环丙沙星等抗生素。
1.2 样本处理和鉴定将鸡肠内容物样本通过甲苯悬浊液进行稀释，然后取适量液体分别接种于瑞利琼斯琼氏菌液体培养基和McConkey 培养基上进行预培养。
随后，从预培养液中取适量液体涂布于营养琼脂和三联琼脂上进行单菌分离，最终得到一株疑似志贺氏菌的单菌落，通过生物学和形态学方法进行初步鉴定。
1.3 革兰染色将单菌落挑取入一滴蒸馏水中，用铂铑针沾取菌落后放入革兰染色试剂内，放置片刻后用水将药液洗掉，用干净的纸巾将盘中多余的水分吸干，最后用显微镜观察染色情况。
1.4 经典鉴定通过革兰染色方法，初步判断得到菌株属于革兰阴性菌，同属于鲍曼氏菌科。
然后，根据经典鉴定方法对菌株进行鉴定，包括形态学特征、生理生化特性、血清学试验等。
1.5 药敏实验利用药盘法对该菌株进行药敏实验，选用了氯霉素、甲氧苄啶、环丙沙星等抗生素，根据最小抑菌浓度法(MIC)进行测定。
2. 结果2.1 鉴定结果通过革兰染色和经典鉴定，初步确定该菌株为鸡源宋内氏志贺氏菌。
2.2 耐药性分析结果药敏实验结果显示，该菌株对氯霉素、甲氧苄啶具有抗性，而对环丙沙星敏感。
3. 讨论本研究成功地从鸡肠内容物中分离出了一株鸡源宋内氏志贺氏菌，并进行了详细的鉴定和耐药性分析。
该菌株对氯霉素、甲氧苄啶具有抗性，可能是由于家禽生产中抗生素的滥用导致。
相关研究表明，家禽中的志贺氏菌存在广泛的多重抗药性。
因此，在家禽生产过程中，应加强对抗生素的管理和使用，减少对家禽中多重耐药菌的选择压力。
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析
一株鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析鸡源宋内氏志贺氏菌（Salmonella gallinarum）是一种引起家禽严重传染性斑疹（Fowl typhoid）的细菌。
本研究旨在分离鉴定鸡源宋内氏志贺氏菌并进行耐药性分析。
从鸡源患病家禽的肠道样本中，采用无菌技术将样品分离到含有色好氏平板密度梯度的人工培养基上。
培养基中的抗生素可抑制其他非目标菌群的生长。
然后，在41°C恒温培养箱中培养48小时，观察菌落形态，优选菌落较大且呈染红色的菌株。
选取优选的菌株进行进一步鉴定。
进行革兰氏染色，鸡源宋内氏志贺氏菌为革兰阴性菌。
然后通过孢子形成能力的观察，判断该菌株是否产生芽孢。
鸡源宋内氏志贺氏菌不产生芽孢。
接下来，通过碳水化合物利用能力和酸碱产生情况，进行生理生化鉴定。
鸡源宋内氏志贺氏菌具有利用葡萄糖、乳糖、甘露糖的能力，而对麦芽糖、果糖、蔗糖等不适应。
通过PCR技术检测其特异性基因，如hilA基因等，以确认其身份。
耐药性分析是另一个重要的研究方向。
通过纸片扩散法对鸡源宋内氏志贺氏菌与各种常见的抗生素进行敏感性测试。
需要注意的是，抗生素的选取应从已知临床分离的鸡源宋内氏志贺氏菌的耐药情况进行参考。
然后，通过测定最小抑菌浓度（MIC）的方法对敏感性测试不明确的抗生素进行进一步测试。
在对鸡源宋内氏志贺氏菌的分离鉴定与耐药性分析过程中，需要尽可能采用无菌技术，避免污染。
合理选择菌落形态良好、培养纯度高的菌株进行鉴定。
在耐药性分析中，除了常规的纸片扩散法外，还应使用更精确的方法，如MIC测定法。
这些分析结果可为相关领域的疾病预防和治疗提供参考。
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志贺菌属的培养与鉴定
右江民族医学院10检本2班庞婷婷
指导老师：汤丽霞，何印蕾，费世杰，何涛
【摘要】目的对标本中的志贺菌属进行培养与鉴定。
方法对门诊患者粪便标本运用SS和中国蓝培养基培养志贺菌属，并进行生化，血清学鉴定和药敏试验。
结果志贺菌属发酵葡萄糖、甘露醇，不发酵乳糖、蔗糖，氧化酶试验阴性，IMVC 为（-+--），KIA为（KA--），MIU为（---），药敏试验：左氧氟沙星、复方新诺明、头孢噻肟、泰能四种药敏纸片的抑菌圈分别为30㎝、34㎝、38㎝、30㎝。
结论分离出志贺菌属，对左氧氟沙星、复方新诺明以及氨苄等的敏感性较高，为临床治疗提供可靠的治疗方案。
【关键词】志贺菌属，培养，鉴定，血清学
【引言】志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。
根据生化反应与血清学试验该属细菌分为痢疾，福氏，鲍氏和宋内志贺菌四群。
我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢最为常见。
我们用临床门诊患者粪便标本进行培养与鉴定实验，现将实验分析情况报告如下：
【器材与试剂】
血平板，MAC培养基，SS培养基，KIA培养基，半固体培养基，酒精灯，接种环，接种针，载玻片，培养箱，光学显微镜，氧化酶纸片，药敏纸片，微量生化管，生理盐水，革兰染液，氧化酶试剂，甲基红试剂，吲哚试剂，液体石蜡，志贺菌诊断血清（包括志贺菌属四种多价血清及福氏，鲍氏或宋内志贺菌单价血清）等
【实验过程与方法】
1.标本采集：在治疗前采集黏液脓血便做床边接种，如不能及时接种可置甘油或卡里-布莱尔运送培养基内送检。
2.分离培养：取粪便或肛拭标本，用接种环挑取粪便中有脓血和黏液的部分直接在中国蓝培养基和SS培养基分区划线进行培养。
使之分散成单个细菌，在37℃培养18~24h，从而分离出单个菌落。
3. 鉴定
3.1革兰染色：按照涂片→干燥→固定→染色的步骤进行革兰染色。
3.2氧化酶试验：无菌操作用滴管吸取氧化酶试剂，滴加于滤纸条菌落上，用滤纸条沾取少许被检菌落，观察滤纸条颜色变化。
3.3触酶试验：取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3％H2O2 1滴，立即观察结果。
3.4动力学检查：用接种针挑取待检菌的菌落，垂直插入半固体培养基，直至离试管底部1cm处左右，再缓慢原路返回，37℃培养18~24h，观察结果
3.5KIA试验：用接种针挑取待检菌的菌落，先穿刺接种到KIA深层，距管底1cm 处左右为止，再从原路退回，在斜面上自下而上划线，置37℃培养18~24h，观察结果。
3.6生化鉴定：用接种针挑取待检菌的菌落，按照所用细菌鉴定系统要求接种于肠杆菌科细菌微量鉴定系统的微量管内，于35℃培养18~24小时。
根据所用细菌鉴定系统中不同生化反应试验结果的判断标准观察结果。
根据生化结果进行编码，检索编码手册，该编码所对应的细菌名即为鉴定结果。
（附：肠杆菌科生化
鉴定编码表）
3.7血清学试验
3.7.1志贺四种多价血清玻片凝集试验：取1张洁净的玻片，于其中一玻片上滴
1～2滴多价血清，另一张则滴1～2滴生理盐水作为对照，然后取少量
被检菌落分别与血清和生理盐水混匀，轻轻摇动玻片，两分钟内呈现明
显凝集者为阳性，呈均匀混浊者为阴性。
此实验是鉴定志贺菌，结果应
为阳性。
3.7.2 单价诊断血清玻片凝集试验：取1张洁净的玻片，于其中一玻片上滴1～
2滴单价血清，另一张则滴1～2滴生理盐水作为对照，然后取少量被检菌落分别与血清和生理盐水混匀，轻轻摇动玻片，两分钟内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀混浊者为阴性。
1.本菌为革兰阴性短小杆菌，无芽孢，无荚膜，无鞭毛，故被染成红色，动力
实验为阴性。
在染色时应注意涂片太厚或太薄，菌体分散不均匀；细菌的菌龄；染液的质量，都会影响结果。
细菌的菌龄最好是用18 ~24小时的细菌。
2.本菌兼性厌氧，不分解乳糖，只分解葡萄糖，故O/F试验两只生化管都为黄
色，KIA试验出现上红下黄的现象。
在SS培养基上形成中等大小、无色、半透明的菌落。
甲基红试验为阳性。
3.本菌没有色氨酸酶，不能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚，故加入吲哚试
剂无变化，吲哚试验为阴性。
也没有氧化酶，所以氧化酶试验为阴性。
也不能产生苯丙氨酸脱氢酶，不能使苯丙氨酸脱氨生成苯丙酮酸，故加入苯丙氨酸试剂无变化。
但是有过氧化氢酶，能分解过氧化氢产生水，并释放出生态氧，因生成氧分子而出现气泡。
4.做玻片凝集时，菌苔必须磨匀，观察结果时，需先观察生理盐水中不出现凝
集颗粒，诊断血清中的颗粒凝集才有阳性意义。
在试验过程中还必须严格遵守无菌操作，严格按步骤进行。
本次实验标本来自粪便，杂菌较多，平板中所得目标菌较少，本应该进行增菌纯培养，但由于时间关系，即采用KIA培养基中菌液进行实验。
步骤均无菌操作进行，经过鉴定确定为志贺菌。
本次实验采用学生自己设计并实施、老师指导的方式进行，既培养了我们设计实验的能力，无形中巩固了我们的理论知识，又极大地激起了我们对微生物实验的兴趣。
【参考文献】
1.倪语星主编临床微生物学检验第5版北京:人民卫生出版社,201
2.1
2.吴爱武主编临床微生物学检验实验指导第4版北京：人民卫生出版社，2011.12。