利用高速逆流色谱分离大黄活性成分

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高速逆流色谱技术在植物活性成分分离与纯化中的应用

（）：１～２３５２２１．
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学杂志，９６１（）３８１９，６６：６．

回流提取大黄实验报告

一、实验目的1. 掌握回流提取法的基本原理和操作步骤。

2. 提取大黄中的有效成分，即蒽醌类化合物。

3. 了解大黄中蒽醌类化合物的提取效率和纯度。

二、实验原理大黄（Rheum palmatum L.）是一种传统中药材，其主要有效成分是蒽醌类化合物，包括大黄素、大黄酚等。

这些成分具有泻下、抗菌、抗炎等药理作用。

回流提取法是一种常用的提取方法，通过加热使溶剂沸腾，使得药材中的有效成分溶解于溶剂中，然后冷却后分离溶剂和药材。

三、实验材料与仪器材料：- 大黄药材：20g- 乙醇：500ml- 水浴锅- 烧瓶：500ml- 冷凝管- 滤纸- 玻璃棒- 烧杯- 分液漏斗- 蒸馏水仪器：- 电子天平- 粉碎机- 薄层层析仪- 紫外可见分光光度计四、实验步骤1. 药材预处理：- 将大黄药材剪碎，用粉碎机粉碎成粗粉。

- 粗粉过80目筛，得到大黄粉末。

2. 回流提取：- 称取大黄粉末20g，置于500ml烧瓶中。

- 加入500ml乙醇，装上冷凝管。

- 将烧瓶置于水浴锅中，加热回流提取2小时。

- 提取过程中，每隔30分钟搅拌一次。

3. 过滤与浓缩：- 提取结束后，关闭水浴锅，待烧瓶冷却。

- 用滤纸过滤提取液，收集滤液。

- 将滤液置于蒸发皿中，在水浴锅中浓缩至约50ml。

4. 纯化：- 将浓缩后的溶液转移至分液漏斗中，加入适量蒸馏水。

- 静置分层，将有机层（乙醇层）分离出来。

- 将有机层置于蒸发皿中，在水浴锅中蒸干，得到大黄蒽醌粗品。

5. 鉴定：- 取适量大黄蒽醌粗品，用薄层层析法进行鉴定。

- 在薄层层析板上点样，用适当的溶剂进行展开。

- 通过比较大黄蒽醌粗品的Rf值与标准品的Rf值，鉴定大黄蒽醌的存在。

五、实验结果与分析1. 通过回流提取法，成功提取了大黄中的蒽醌类化合物。

2. 提取率约为80%，表明回流提取法是一种有效的提取方法。

3. 通过薄层层析法鉴定，大黄蒽醌粗品中主要含有大黄素和大黄酚。

六、实验讨论1. 回流提取法是一种常用的提取方法，具有操作简便、提取效率高等优点。

大黄的提取分离

大黄的提取分离实验报告一．背景和目的大黄，又名黄良、火参、将军等，为我国传统常用中药材。

大黄(Radixe RhiZomaRhei)为寥科植物掌叶大黄 (RheumPalmatumL)，唐古特大黄(Rheum tangutieumMaxim.exBal勺或药用大黄 (RheumoffieinaleBaill)的干燥根和根茎。

掌叶大黄和唐古特大黄药材称北大黄，主产于青海、甘肃等地。

药用大黄药材称南大黄，主产于四川。

于秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖。

除去须根，刮去外皮切块干燥，生用，或酒炒，酒蒸，炒炭用。

味苦、性寒。

归脾、胃、大肠、肝、心包经。

1.1天然产物提取、分离和纯化技术概述植物的化学成分比较复杂，种类很多，因此在着手研究一个植物的有效成分时，首先要大致知道有哪些类型的化学成分，这就需要对各类化学成分的进行简单的定性预试验。

通常先用几种不同极性的溶剂分别进行提取，进行生物活性筛选，确定哪一个溶剂提取部位有效后，再对该部位进行各类化学成分的预实验。

另外在植物资源化学研究工作中，常常根据工作需要，定向的寻求某类化学成分，这就要进行某类化学成分的单项预实验。

根据预实验的结果，判断可能含有哪些类型的化学成分，然后按照所含化学成分的性质，设计有效成分分离的具体方法。

通常将植物分别用石油醚、95%乙醇和水提取。

这样便可以把绝大部分植物成分提取出来，假使我们不着重研究挥发油，一般经过酒精和水两种溶剂的提取就可以进行预实验。

预实验往往只能提供初步的线索。

1.1.1.水提液取植物粉末5g，加50mL蒸馏水，在50-60℃的水浴上加热约1小时后过滤，此滤液即可在试管及滤纸上作糖、多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、鞣质、氨基酸、生物碱等项的预试验。

1.1.2.酒精提取液取植物粉末5g，加50mL95%的酒精，在水浴上加热回流约1小时后过滤，滤液即可进行酚类、鞣质、有机酸等项的预实验。

其后将滤液浓缩至浆状，置于研钵中，用少量5%盐酸溶解，取盐酸水溶液进行生物碱的预实验。

高效液相色谱法同时测定大黄中14种成分的含量

高效液相色谱法同时测定大黄中14种成分的含量建立高效液相色谱法同时测定大黄中大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、番泻苷A、番泻苷B、没食子酸、儿茶素、（-）-表儿茶素-3-没食子酸酯、异莲花掌苷、4-4′-羟基苯基-2-丁酮、莲花掌苷、4′-羟基苯基-2-丁酮-4′-O-β-D-（2″-O-桂皮酰基-6″-O-没食子酰基）-葡萄糖苷14个成分含量的方法。

采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm × 150 mm，5 μm），采用0.05%的磷酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，柱温40 ℃，检测波长268 nm。

结果表明在线性范围内14个成分线性良好（r>0.999 9）；日内精密度和日间精密度均小于3.1%；平均回收率在91.80%～104.1%。

同时，对收集到的10个掌叶大黄和10个唐古特大黄合格样品进行定量测定，发现掌叶大黄中含量比较高的成分是芦荟大黄素，唐古特大黄中含量比较高的是4-4′-羟基苯基-2-丁酮，各样品中所有化合物的含量差异都比较大。

所建立的含量测定方法能同时测定大黄中14个成分的含量，为大黄药材多成分含量测定和质量控制提供一种简便的方法。

标签：大黄；高效液相色谱法；蒽醌类；苯丁酮苷类；鞣质类；含量测定[Abstract] To establish an HPLC （high performance liquid chromatography）method for the simultaneous content determination of gallic acid，（+）-catechin，（-）-epicatechin-3-O-gallate，isolindleyin，4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone，emodin，chrysophanol，physcion，aloe-emodin，rhein，lindleyin，4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone-4′-O-β-D-（2″-O-galloyl-6″-O-cinnamoyl）-glucopyranoside，sennoside A and sennoside B in Rhei Radix et Rhizoma. The analysis was performed on Agilent Zorbax SB-C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm）with 0.05% phosphoric acid solution （A）- acetonitrile （B）as mobile phase for gradient elution. The flow rate was 1 mL·min-1，with column temperature of 40 ℃and the wavelength was set at 268 nm. All calibration curves showed good linearity （r > 0.999 9）within the concentration range. Both the intra- and inter-day precision for 14 analytes was less than 3.1%，with the mean recovery at the range of 91.80%-104.1%. Meanwhile，quantitative determination was carried out for 10 qualified samples from Rheum palmatum and 10 qualified samples from R. tanguticum. respectively. It was found that the content of 4-（4′-hydroxyphenyl）-2-butanone and aloe-emodin were higher in the R. tanguticum and R. palmatum，respectively，and the content of all the compounds was different in each sample. The established HPLC method for simultaneous content determination of 14 compounds from Rhei Radix et Rhizoma could be used for quantitative assessment and quality control of Rhei Radix et Rhizoma.[Key words] Rhei Radix et Rhizoma；HPLC；anthraquinones；butanone glycosides；tannins；content determination大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄R. tanguticum Maxim. ex Balf. 或药用大黄R. officinale Baill.的干燥根和根茎[1]。

利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分

利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分1. 引言1.1 研究背景中药大黄是一种常用的中药材，具有泻下通便、清热泄火等药性。

其中的游离蒽醌组分是其主要活性成分之一，具有抗炎、抗氧化等生物活性。

游离蒽醌组分在大黄中存在量较少，提取难度较大。

为了更有效地提取大黄中的游离蒽醌组分，研究者们开始尝试利用pH梯度萃取法。

pH梯度萃取法是一种利用酸碱性差异来实现物质分离提取的方法。

通过调节溶剂的酸碱度，可以使目标物质在不同的pH环境下具有不同的溶解度，从而达到有效提取的目的。

对于大黄中的游离蒽醌组分，其在不同pH条件下的溶解度也会有所不同，因此pH梯度萃取法可以帮助提高提取效率。

通过利用pH梯度萃取法提取大黄中的游离蒽醌组分，可以有效提高提取效率，减少提取时间，降低成本。

这对于进一步研究大黄药材的活性成分、提高其药效具有重要意义。

本研究旨在探究pH梯度萃取法在大黄中游离蒽醌组分提取中的应用价值，为中药材的提取工艺优化提供参考和借鉴。

1.2 研究目的研究目的：本研究旨在探讨利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分的可行性及方法优化，为提高药材中游离蒽醌的提取效率和纯度提供有效的技术支持。

通过深入研究游离蒽醌在大黄中的存在形式和提取条件下的转移规律，探索最佳的pH梯度条件和提取方法，从而实现对中药大黄中游离蒽醌组分的高效提取和纯化。

将通过实验结果的分析和对提取效果影响因素的探讨，进一步阐明pH梯度萃取法在中药提取领域中的应用前景和潜力，为药用价值的开发和利用提供科学依据和技术支持。

通过本研究，旨在为中药大黄中游离蒽醌组分的提取工作提供一种可行的方法和技术路线，推动中药资源的综合利用和开发，促进中药现代化科研的进一步发展。

1.3 研究意义中药大黄是一种常用的中药材，含有丰富的游离蒽醌组分，具有明显的药效活性。

游离蒽醌是大黄的主要活性成分之一，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种药理作用。

研究利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分的方法和效果具有重要的理论和实际意义。

高速逆流色谱的原理及活性成份提取的进展

雷公藤春碱
．
陈皮］
石油醚一乙酸乙酯一甲醇一（体积比为２４：：：水：３３）
正已烷一乙酸乙酯一甲醇一（体积比３５３５水：：：）石油醚一乙酸乙酯一甲醇一（水体积比２：５２：７２２：３１）
陈皮苷、桔皮素
⑤ 抗生素的分离纯化；
图１多级萃取技术
⑥ 天然产物未知有效成分的分离纯化（新化合物开发）；
⑦ 海洋生物活性成分的分离纯化；
⑧ 放射性同位素分离；
⑨ 多肽和蛋白质等生物大分子分离以及手性分离等。我国是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家，
３（－ｙｒｘ－ｎｙ）５７ｄｈｄｏｙ６ｍｅｈ－４ｈｄｏｙｅｚ１－，－ｉｙｒｘ－一ｔ —
叶黄素异戊烯基黄酮
黄酮茄尼醇１羟基一一一２甲基一蓖蒽二苯乙烯苷菊苣酸
大麻］乌药叶］
关键词：高速逆流色谱；应用；研究进展
ｄｉ１．９９Ｊｉｎ０４４３．０１０．３ｏ：０３６／．ｓ．１０－３７２１．６０２ｓ
逆流色谱（ｏｎｅｃｒｅｔｈｏｔｇａｈ，Ｃ）合了ＣｕｔｒｕｒｎｒｍａｏｒｐｙＣＣ结Ｃ
赵芳
（石河子大学化学化工学院
新疆石河子８２０）３００
要：综述ＨＣＣ的原理及从天然产物中提取活性成份的应用及进展：ＳＣ高速逆流色谱（ｉ－ｐｅｏｎｅｕｒｔｈｏａｈｈｓｅｃｕｔｃｒｎｒｍ — ｇｄｒｅｃ

高速逆流色谱对大黄有效成分的制备性分离研究

维普资讯
第４期
化
学
世
界
高速逆流色谱对大黄有效成分的制备性分离研究
袁黎明，夏滔吴，平刘，平谌学先，
（．１云南师范大学化学化工学院，明６０９；２云南师范大学科研扯，明６０９昆５０２昆５０２
（ｐｒｍｅｔｆＣｈｍａｙｕｎｎＮｏｍａｉｅｓｙｕｎｎＫｕｍｉｇ６０９．ｉａＩＤｅａｔｎ￣ｉｒ．ＹｎａｒｌｏｔＵｎｖｒｉｔｎａｎｎ５０２ＣｈｎｔｔＹ未ＤｅａｔｎｆＳｉｃ・ｎａｐｒｍｅｔｏｃｎｅＹｕｎｎⅣ一ｅ口Ｕｍｖｒｌ．ｙ＃￣ｙ … Ｋｕｍｔｇ６０９ｔ（ｎｎ５０２）
其与一般色谱的分离方式不同，其特别适用于制使
备性分离。近的研究结果表明：台普通的高速逆最一
流色谱仪一次进样可达数十毫升，次可分离十余一
克的样品。此，２因在Ｏ世纪８０年代后期其被广泛地
由于高速逆流色谱具有两大突出优点：、四ｌ聚氟乙烯管中的固定相不需要载体，因而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象，别适用特于分离极性物质和具有生物活性的物庸；、２由于
１实验部分１１仪器与试剂．
Ａｂｔａｔｉｈｓｅｄｃｕｔｒｕｒｎｈｏｔｇａｈｓｓｃｅｓｕｌｐｌｄｔｈｒｐｒｔｅｓｐｒｓｒｃ：Ｈｇｐｅｏｎｅｃｒｅｌｒｍａｏｒｐｙｗａｕｃｓｆｌａｐｉｏｔｅｐｅａａｉｅａａｃｙｅｖ

高速逆流色谱法及其在中药分离中的应用

天津药学ＴａｊＰａｃ２０ｉｎｎｈｒｙ０８年２月ｉｍａ
第２０卷第１期
高速逆流色谱法及其在中药分离中的应用
陈苏伟，勇琴，纪青潘蔡
（浙江省丽水市中医院，丽水摘要３３０）２００
药分离方面的应用做一综述。１高速逆流色谱法简述
化碳部分代替氯仿，乙酸代替甲醇使分配系数接近用
１。如果采用该系统得不到满意的结果，以考虑采用可正己烷一乙酸乙酯一正丁醇一甲醇一水体系，系统该
ＨＣＣ是应用特殊的流体动力学原理，用螺旋能够较均匀地覆盖更宽的极性范围，通过调节该系ＳＣ利并
综述高速逆流色谱（ＳＣ）ＨＣＣ的原理、溶剂体系的选择、特点及其在中药有效成分分离中的应用进展。
文献标识码：Ａ文章编号：０６５８（０８０－０４０１０ —６７２０）１７－３０
关键词高速逆流色谱，中药分离
０将）．ＹｏｈｒＩ博士发明了不同于传统液相色谱法的新总体积的５％以上，分配系数（调整在０５～２ｉｉｔｃｏｏＫ＝Ｃ／ＣＣ，为上相中溶质浓度，，ｃ为下相中溶质的型液一液色谱分离方法——高速逆流色谱法（ｉ（ｈｈｇ
颜继忠等综述了文献中所使用的溶剂体系，从
以往文献相反的角度概括出一些规律。将高速逆流色

高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量

高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量【关键词】高效摘要：采纳高效液相色谱法中的梯度洗脱测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量。

结果显示，所测得的二组分的含量和相对标准偏不同离为%、%；、% ，提示该法操作简单，结果靠得住，与药典法没有显著性不同。

关键词：高效液相色谱法；梯度洗脱；大黄素；大黄酚大黄是我国临床经常使用的中药之一，素有“将军”之称，在中药复方中应用相当普遍，有“泻热通畅、凉血解毒、逐瘀通经、攻积导滞、利胆退黄”之功效，《神农本草经》称大黄“主下瘀血、血闭、寒热、破症瘕积聚、留饮、宿食、荡涤肠胃、通利水谷、调中化食、安和五藏”。

人们对大黄的研究日趋加深，接踵发觉了新的活性成份。

大黄中的有效成份有蒽醌类、芪类、苯丁酮类、鞣质类、色原酮类、萘类、有机酸、糖、蛋白质、甾醇等150多种成份。

大量的研究说明，大黄的诸多制剂均以保留总蒽醌为目的。

本研究采纳高效液相色谱法中的梯度洗脱直接测定经甲醇简单提取后的样品中的大黄酚和大黄素的含量，结果靠得住。

1 仪器与试剂11 仪器HP1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，包括四元泵、真空脱气机、柱温箱、紫外检测器。

色谱柱: Hypersil ODS ×μm；预柱:C18×50mm)5μm)（大连依利特公司）。

12 试剂大黄素、大黄酚对照品购自中国药品生物制品检定所；大黄生药材为市售（产地为甘肃、四川）；乙腈为色谱纯，其余为分析纯。

2 方式与结果21 色谱条件NH4OAC水溶液（PH=）：乙腈=A:B；梯度洗脱：0分钟A:B=71:29，12分钟A:B=21:79，14分钟A:B=21:79，15分钟A:B=71:29。

检测器：紫外检测器；波长：436nm；流速：min；进样体积：10μl；柱温箱温度：25℃。

22 标准曲线的绘制周密称取大黄素、大黄酚对照品各别离置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即为大黄酚和大黄素的标准贮备液，浓度为2mg/ml。

高速逆流色谱技术综述

高速逆流色谱技术1.概述高速逆流色谱（high-speed counter current chromatography，简称 HSCCC），是20世纪70年代由美国国立卫生院（National Institute of Health，简称NIH）Ito博士首创，并且在最近10年之内发展迅速，是一种可在短时间内实现高效分离和制备的新型液-液分配色谱技术，这项技术可以达到几千个理论塔板数的。

它具有操作简单易行、应用范围很广、无需固体载体、产品纯度高、适用于制备型分离等特点。

自1982年第一台仪器问世，就开始了HSCCC的现代化进程。

HSCCC用于天然药物化学成分的分离始于1985年，到1989年达到一个高潮。

自2000年9月起国际逆流研究领域每隔2年举行一次世界逆流色谱学术会议。

近几年, 人们对健康的认识越来越深刻, 更多的人追求天然绿色的健康理念, 故HSCCC 作为一种对提取物污染小的制备技术, 它的应用越来越受到了人们的关注。

鉴于HSCCC的显著特点, 此项技术已被应用于生化、生物工程、医药、天然产物化学、有机合成、环境分析、食品、地质、材料等领域。

目前,HSCCC已从制备型发展到了分析型, 甚至是微量分析型, 应用范围也十分广泛[ 2]。

高速逆流色谱技术在我国的应用较早, 技术水平在国际领域也处于领先地位。

目前, 我国是世界上为数不多的高速逆流色谱仪生产国之一。

我国的深圳同田生化技术有限公司是全球第一家多分离柱高速逆流色谱仪专业生产企业。

公司拥有自主知识产权的高速逆流色谱专利技术, 现已研制并生产出TBE 系列分析型, 半制备型TBE 300，300A, 制备型TBE1000高速逆流色谱仪设备。

2.基本原理高速逆流色谱技术(HSCCC)是一种不用任何同态载体的液-液色谱技术，其分离原理是进行分离纯化时，首先选择预先平衡好的两相溶剂中的一相为固定相, 并将其充满螺旋管柱, 然后使螺旋管柱在一定的转速下高速旋转, 同时以一定的流速将流动相泵入柱内。

高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物的研究进展

高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物的研究进展陈丛瑾;杨国恩【摘要】Objective To review research progress on the high-speed countercurrent chromatography separation and puritication of flavonoid compounds. Method Papers, monographs, etc. published in recent years, on the high-speed countercurrent chromatography separation and purification of flavonoids were reviewed and analyzed. Result and Conclusion High-speed countercurrent chromatography is a very effective separation and purification method of flavonoids.%目的综述高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物的研究进展.方法查阅近年来公开发表的论文、专著等资料,对高速逆流色谱法分离纯化黄酮类化合物进行概述.结果与结论高速逆流色谱法是一种非常有效的分离纯化黄酮类化合物的方法.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2011(026)004【总页数】4页(P306-309)【关键词】黄酮;高速逆流色谱;分离纯化;进展【作者】陈丛瑾;杨国恩【作者单位】广西大学化学化工学院,广西,南宁,530004;中南林业科技大学材料科学与工程学院,湖南,长沙,410004【正文语种】中文【中图分类】R284黄酮类化合物(flavonoids)是植物中广泛存在的一类天然产物，在植物体内大部分与糖结合成苷类，有一部分是以游离态(苷元)形式存在的，其对植物的生长、发育、开花、结果及抗菌防病等起着重要的作用。

高速逆流色谱技术分离纯化天然产物中黄酮类化合物的研究进展

江南卷柏 Selaginella
dorffii
moellen-
穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮、竹柏双黄酮 A、银杏黄酮 Amentoflavone， hinokiflavone， podo-
carpusflavone A，ginkgetin
正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水 n-hexane-ethyl acetate-methanol-
1． 5
（ 1∶ 1∶ 2）
草珊瑚 Sarcandra glabra
异秦皮定 Isofraxidin
正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水
n-Hexane-ethyl acetate-Methanol-
2． 0
water （ 1∶ 2∶ 1∶ 2）
800
［12］
800
［13］
800［14］ຫໍສະໝຸດ 苹果树皮 Apple tree bark
木蝴蝶 Oroxylum indicum
黄芩素、白杨黄素 Fbaicalein，chrysin
石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水
Petroleum ether-ethyl acetate-
2． 0
Methanol-water （ 5∶ 5∶ 5∶ 5）
陈皮 Pericarpium Citri
Reticulatae
苷 Quercitrin，quercetin，hyperoside，iso-
quercitrin， miquelianin， epigallocate-
乙酸乙酯-甲醇-水 Ethyl acetate-methanol-water
（ 10∶ 1∶ 10）
chin，avicularin
2． 0
800
［7］
MTBE-n-butanol-MeCN-water

高速逆流与制备色谱技术在射干有效成分分离中的应用的开题报告

高速逆流与制备色谱技术在射干有效成分分离中的应用的开题报告一、研究背景射干作为一种常见的中草药，广泛应用于临床中，具有清热解毒、活血化瘀等功效。

然而，射干中含有多种活性成分，如黄酮类化合物、多糖等，这些成分具有不同的结构和性质，因此需要采用有效的分离提取技术进行分离纯化。

高速逆流色谱（HSCCC）作为一种新兴的分离技术，具有无需固定填料、高分离效率、不破坏样品等优点，已经被广泛应用于中草药有效成分的分离纯化中。

另外，制备色谱也是常用的中草药有效成分分离技术之一，可以通过优化条件获得高纯度的有效成分。

二、研究内容和意义本次研究的内容为采用HSCCC技术和制备色谱技术对射干中的有效成分进行分离纯化，并对所得到的纯化产物进行结构分析和生物活性研究，旨在探讨这两种技术在中草药有效成分分离中的应用，并为射干的深入研究提供基础数据。

三、研究方法和步骤1、样品制备：选取干燥的射干样品，粉碎并筛选过滤得到粉末状样品。

2、HSCCC分离：采用对流式高速逆流色谱对射干样品进行分离纯化，考察流速、回转速度和两相体积比等条件对分离效果的影响。

3、制备色谱分离：采用制备色谱对HSCCC所得产物进行进一步纯化，考察柱填料种类、洗脱剂种类及浓度对分离效果的影响。

4、结构分析和生物活性研究：通过质谱和核磁共振进行纯化产物的结构鉴定，通过抑菌试验等进行生物活性评价。

四、预期结果通过采用HSCCC和制备色谱技术对射干中的有效成分进行分离纯化，预期可以得到高纯度、高产率的有效成分，并对其结构和生物活性进行分析研究，为射干的深入开发利用提供基础数据，同时探讨并发展中草药有效成分分离纯化的技术和方法。

一种高纯度大黄素甲醚和大黄酚的制备方法[发明专利]

专利名称：一种高纯度大黄素甲醚和大黄酚的制备方法专利类型：发明专利
发明人：周剑宁,邓秋云
申请号：CN200410025334.0
申请日：20040622
公开号：CN1594261A
公开日：
20050316
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种用高速逆流色谱法(HSCCC)从中药大黄中分离高纯度大黄素甲醚和大黄酚的制备方法。

它包括制备上相固体相，下相流动相的溶剂体系：可选自石油醚，正庚烷、正己烷、正戊烷，；甲醇、乙醇、丙酮；水，体积比依次为：7－13∶5－9∶0.5－2。

条件温度15－30℃，用固定相存满柱子，主机转速600－1200rpm，以0.5－4mL/min的流速将流动相泵入柱内；待体系动态平衡后，进样阀进样；根据监测器紫外图谱接收目标成分。

馏分蒸干后乙醇结晶，得到大黄素甲醚的橙色针状结晶和大黄酚的橙色片状结晶。

本方法适用各种型号高速逆流色谱仪和各种含量大黄游离蒽醌制备，具有分离量大，回收率高，操作简便的特点。

申请人：上海同田生化技术有限公司
地址：200122 上海市浦东新区浦东南路1279号华融大厦1311室
国籍：CN
代理机构：上海开祺专利代理有限公司
代理人：黄志达
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天然药物化学各章习题及参考答案

天然药物化学各章习题及参考答案天然药物化学各章习题及答案(答案见最后) （第⼗、⼗⼀不是重点，没有）第⼀章（⼀）⼀、名词解释1、⾼速逆流⾊谱技术2、超临界流体萃取技术3、超声波提取技术4、⼆次代谢过程⼆、以下每⼀道考题下⾯有A、B、C、D、四个备选答案。

请从中选择⼀个最佳答案。

1、纸层析属于分配层析, 固定相为：（）A. 纤维素B. 展开剂中极性较⼩的溶液C. 展开剂中极性较⼤的溶液D. ⽔2、硅胶⾊谱⼀般不适合于分离（）Ａ、⾹⾖素类化合物Ｂ、⽣物碱类化合物Ｃ、酸性化合物Ｄ、酯类化合物3、⽐⽔重的亲脂性有机溶剂有：A. CHCl3B. 苯C. Et2 OD. ⽯油醚4、利⽤溶剂较少提取有效成分较完全的⽅法是：Ａ、连续回流法Ｂ、加热回流法Ｃ、渗漉法Ｄ、浸渍法5、由甲戊⼆羟酸演变⽽成的化合物类型是A. 糖类B. 萜类C. 黄酮类D. ⽊脂素类6、调节溶液的pH改变分⼦的存在状态影响溶解度⽽实现分离的⽅法有A．醇提⽔沉法B．铅盐沉淀法C．碱提酸沉法D．醇提丙酮沉法7、与⽔不分层的有机溶剂有：A. CHCl3B. 丙酮C. Et2 OD. 正丁醇8、聚酰胺层析原理是A物理吸附B氢键吸附C分⼦筛效应D、化学吸附9、葡聚糖凝胶层析法属于排阻层析，在化合物分离过程中，先被洗脱下来的为：A. 杂质B. ⼩分⼦化合物C. ⼤分⼦化合物D. 两者同时下来三、判断对错1、某结晶物质经硅胶薄层层析，⽤⼀种展开剂展开，呈单⼀斑点，所以该晶体为⼀单体。

( )2、糖、蛋⽩质、脂质、核酸等为植物机体⽣命活动不可缺少的物质，因此称之为⼀次代谢产物。

（）3、⼆氧化碳超临界流体萃取⽅法提取挥发油，具有防⽌氧化、热解及提⾼品质的突出优点。

（）4、⾊谱法是分离中药成分单体最有效的⽅法（）5、铅盐沉淀法常⽤于中药⽣产中除去杂质。

（）6、植物成分的⽣物转化，可为⼀些化合物的结构修饰提供思路，提供新颖的先导化合物。

（）7、在活性筛选⽅法的指导下进⾏化合物的分离提取要求分离⼯作者与活性测试⼈员两个⽅⾯的配合。

高效液相色谱法测定大黄中番泻苷A含量

一
大黄是多种蓼科大黄属的多年生植物的合称，为蓼科植物掌叶制成每毫升含１Ｏ、２０、３０、４０、５０、６Ｏ、７０、８０、９０、１００微克的溶液。分大黄、唐古特大黄或药用大黄的根茎。中国用大黄于医药有悠久历别精密上述溶液吸取１０Ｌ，注人液相色谱仪，依照２．１项下的色谱史，具有泻热通肠、凉血解毒，逐瘀通经的功效。大黄常用于实热便条件测定，记录色谱峰。以峰面积ｍ为纵坐标，对照品进样量（）（）为秘、泻痢不爽、湿热黄疸、目赤、咽肿、痈肿疔疮、瘀血经闭、跌扑损伤横坐标，绘制标准曲线。结果表明，番泻苷Ａ在１０～１００ｇ・ｍＬ－范等。《日华子本草》记载： “ 通宣一切气，调血脉，利关节，泄塑滞、水围内呈良好的线性关系。．２．６重现性试验气，四肢冷热不调，温瘴热痰，利大小便，并敷一切疮疖痈毒。” 大黄中含有大黄酚一１一葡萄糖甙、大黄素一６一葡萄糖甙（Ｅｍｏｄｉｎ一称取同一批的番泻苷Ａ样品６份，按测定方法项下的方法制备６－ｍｏｎｏｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）、大黄酚（Ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏ１）、大黄素（Ｅｍｏｄｉｎ）、大黄酸供试品溶液，测定含量，并计算样品的ＲＳＤ值，结果ＲＳＤ为０．６２％，８一葡萄糖甙（Ｒｈｅｉｎ一８一ｍｏｎｏｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）、大黄素甲醚（Ｐｈｙｓｃｉｏｎ）、芦结果表明此方法的重现性良好。２．７准确度试验荟大黄素（Ａｌｏｅ — ｅｍｏｄｉｎ）、大黄酸（Ｒｈｅｉｎ）、芦荟大黄素一８一葡萄糖甙（Ａｌｏｅ — ｅｍｏｄｉｎ一８一ｍｏｎｏｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）、儿茶精（Ｃａｔｅ —ｃｈｉｎ）、大黄四聚素取对照品适量，精密称取已知含量的样品９份，置量瓶中，分别（Ｔｅｔｒａｒｉｎ）等成份。大黄具有泻下、抗胃及十二指肠溃疡、止血、降低精密加入番泻苷Ａ对照品，按项下方法制备成８０％１００％、１２０％。９．５％，总胆固醇、降低甘油三酯、降低低密度脂蛋白、抗感染、利胆、保肝、取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为９促进胰液分泌、抑制胰酶活性、抗病原微生物、抗炎、解热、免疫调ＲＳＤ为０．６６％。２．８样品含量测定节、抗衰老抗氧化等作用。本文采用高效液相法对大黄中的番泻苷依照上述含量测定方法，测定掌叶大黄、唐古特大黄、药用大黄Ａ的进行了含量测定。１仪器与试药３种大黄三批样品。１．１仪器：ＨＸ一０６超声波清洗器斌汉恒信世纪科技有限公司）；样品名称第一次测定含量第二次测定含量第三次测定含量平￣＃ｊｔｔ赛多利斯ＰＭ２．５分析天平ＭＳＡ２．７Ｓ一０ＣＥ — ＤＭ（广州市深华生物技术有限公司）；ＲＵ超纯水机（上海同田生物技术有限公司）；ＵＶ一８０００双光束大屏幕扫描型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）；ＰＣ２００一Ｇ５０恒温水浴（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）；３讨论分别考察甲醇一水一冰醋酸（２０：８０：０．５），乙腈（Ａ）一水（Ｂ）为流ＬＣ３１００高效液相色谱仪（安徽皖仪科技股份有限公司）；天星进样动相，梯度洗脱［Ｏｍｉｎ（１８％Ａ）一２４ｍｉｎ（２２％Ａ）一２６ｍｉｎｆ２６％Ａ）一３０ｍｉｎ瓶清洗机ＴＸ一５００型（北京天星科仪科技有限公司）。１．２色谱柱：奥泰公司Ｃ１８色谱柱（２２０ｍｍ× ４．６ｍｍ，５ｍ）。（３２％Ａ）－－－￣５０ｍｉｎ（３３．５％Ａ）－－＋５５ｍｉｎ（３８％Ａ）］，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，甲醇一１．３对照品：番泻苷Ａ水一磷酸（５ｏ：５０：０．１），甲醇一水一冰醋酸（４０：６０：０．５），甲醇一水８０：２０，含０．１％三乙胺），四氢呋喃一水一醋酸（１５：８５：１＿５）不同比例１．４试剂：醋酸钠（山东浩中化工科技有限公司）、四氢呋喃（山（东丰仓化工集团有限公司）、甲醇（武汉市伟琪博星生物科技有限公的流动相，结果以四氢呋喃一水一醋酸（１５：８５：１．５）为流动相为流司）、磷酸二氢铵（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、冰醋酸（山动相，供试品各峰分离效果最好，故选用四氢呋喃一水一醋酸（１５：５：１．５）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简东浩中化工科技有限公司）、三乙胺（武汉市伟琪博星生物科技有限８公司）、乙腈（山东浩中化工科技有限公司）。便、快捷、准确、专属性好，可用于大黄中番泻苷Ａ的含量测定。参考文献１．５试药：大黄ｆ１１张村辛丽，肖永庆，林娜，刘春芳，田国芳，陈东东．ＨＰＬＣ法同时测定２测定方法确定大黄不同来源药材中２个蒽醌苷类成分的含量［Ｊ】．药物分析杂志，２．１色谱条件依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：四氢呋２０１０（０１）．喃一水一醋酸（１５：８５：１．５）为流动相，检测波长：３６５ｎｍ，流速：１．０ｍ・［２】李建生，刘敬霞，王冬，刘轲，梁生旺，孙捷，苏静，李宁，郭晓燕．大黄苷ｍｉｎ一１。柱温：３０ ℃。理论板数按番泻苷Ａ峰计算应不得低于２５００。元联合溶栓对血栓栓塞性脑缺血大鼠微血管基底膜损伤的保护作５・

高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用研究

高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用研究高速逆流色谱是近几年发展起来的新型色谱技术，由于其独特之处已被广泛应用于各个领域，本文就人们关心的热点中药有效成分的分离，采用新的色谱技术高速逆流色谱技术分离取得的成就进行总结，并展望未来的前景。

标签：高速逆流色谱法；中药有效成分；分离；应用近年来，随着中国经济的高速发展，中草药已经越来越受到人们的关注。

而中药的有效成分复杂，如何获得高效的有效成分，分离效果成为研究的热点。

高速逆流色谱法（high-speed countercurrent chromatography，HSCCC）具有分析能量大、分离效率高、结果重现性好等其他色谱无法替代的优点。

现高速逆流色谱技术这种新型的液-液分配色谱已广泛应用于医药、农林、化工等各领域[1]。

应用新型的高速逆流色谱分离成分复杂的中药有效成分可取得良好的效果，具体总结如下。

1工作原理高速逆流色谱HSCCC是应用不同物质在固液两相中的分配系数不同进行分离。

一台高速逆流色谱仪是由输液泵、分离柱、检测器、工作站、数据采集系统及馏分收集器等组成。

首先选择固定相，是将两相预先平衡好的溶剂中的一相填充满螺旋管柱，将流动相以一定的流速泵入高速旋转的螺旋管柱内。

在有液体流动相流出时，说明体系达到平衡，此时将样品注入高速逆流色谱体系中，螺旋管分离柱将依据不同成分在固液两相中的分配系数不同达到分离，依据工作站和数据采集系统将分离后的结果进行记录并积分处理。

在仪器运行的时候，可调节溶剂、固定相、流动相、样品浓度、柱温、洗脱方式、进样方式、流动相的流速及转速等使分离效果达到最好。

还需要根据所检测样品的特点，选择不同的检测器，UV-VIS（紫外-可见光检测器）、ELSD（蒸发光散射检测器）或者质谱检测器等[2]。

2中药的有效成分各种植物中所含的有效成分分类为生物碱、黄酮、苷、萜、蒽醌、木脂素、香豆素、有机酸等。

3高速逆流色谱分离各类中药有效成分3.1生物碱类中药的有效成分中生物碱是重要的一类化学成分，其中的天然含氮化合物是重要的疾病治疗和药物发展的物质。

高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的_含量毕业论文

论文标题高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量班级药学30801专业名称药学系部名称制药工程系河北化工医药职业技术学院毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重承诺：所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。

尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。

对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。

作者签名：日期：指导教师签名：日期：使用授权说明本人完全了解大学关于收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定，即：按照学校要求提交毕业设计（论文）的印刷本和电子版本；学校有权保存毕业设计（论文）的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。

作者签名：日期：学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。

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作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。

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涉密论文按学校规定处理。

作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日目录摘要 (3)第一章：大黄的概述 (3)§1-1基本信息 (3)§1-2化学成分 (4)§1-3药效作用 (4)1-3-1消化系统的影响 (4)1-3-2对血液系统的影响 (4)1-3-3抗感染作用 (5)§1-4不良反应 (5)§1-5现代研究 (5)第二章：高效液相色谱法测大黄中大黄素和大黄酚的含量 (6)§1-1仪器与试剂 (6)1-1-1仪器 (6)1-1-1试剂 (6)§2-2方法与结果............................................................. (7)2-2-1色谱条件 (7)2-2-2对照品的制备 (7)2-2-3供试品的制备 (7)2-2-4阴性对照溶液的制备 (7)2-2-5干扰试验 (7)2-2-6标准曲线的绘制 (7)2-2-7精密度试验 (7)2-2-8重复性试验 (7)2-2-9稳定性试验 (7)2-2-10加样回收率试验 (8)2-2-11样品的测定 (8)第三章：讨论 (8)§3-1药材含量测定中提取剂的确定 (8)§3-2HPLC法中检测波长的确定 (8)§3-3HPLC法中线形范围的确定 (9)参考文献 (9)第一章：摘要论文题目：高效液相色谱法测定大黄中的大黄素、大黄酚的含量摘要摘要内容：大黄是我国临床常用的中药之一，有“泻热通畅、凉血解毒、逐瘀通经、攻积导滞、利胆退黄”之功效，大黄中的有效成分有蒽醌类、芪类、苯丁酮类、鞣质类、色原酮类、萘类、有机酸、糖、蛋白质、甾醇等150多种成分。

高效液相色谱法测定烧伤液中大黄素-大黄素甲醚-槲皮素的含量

高效液相色谱法测定烧伤液中大黄素\大黄素甲醚\槲皮素的含量【摘要】目的建立高效液相色谱法测定烧伤液中大黄素、大黄素甲醚、槲皮素的含量。

方法采用Hypersil ODS C18(4.0 mm×250 mm,5 μm),以甲醇一磷酸盐缓冲液(pH=4)(65:35),流速1.0 ml/ml,检测波长254 nm。

结果大黄素线性范围0.7~7.0 μg/ml,平均回收率98.65%,RSD为1.24%;大黄素甲醚线性范围0.504~5.04 μg/ml,平均回收率为98.70%,RSD为1.08%,槲皮素线性范围0.384~3.84 μg/ml,平均回收率为99.36%,RSD为1.54%。

结论该方法简便、准确,可用于烧伤液的质控。

【Abstract】Objective To establish the HPLC metnod for determination of Emodin, Rheochrysidin and Quercetin in Burn tincture. Methods The Hypersil ODS C18was used as the stationary phase. The mobile phase consisted of methanol-phosphate buffer(pH=4)(65:35).The Detecting wavelength was 254nm and flow rate was 1.0 ml/min.Results The linear range of emodin, rheochrysidin and quertetin were 0.7~7.0 μg/ml, 0.504~5.04 μl/ml, 0.384-3.84 μl/ml respectively. The recovery rates of emodin, rheochrysidin and quercetin were 98.65%(RSD=1.24%),98.70%(RSD=1.08%),99.36%(RSD=1.54%) respectively. Conclusion This method is realiable and accurate, the method can be applied to determination of emodin, rheochrysidin and quercetin in Burn tincture.【Key words】Burn tincture;Emodin; Rheochrysidin;Quercetin; HPLC湖南师范大学化学化工学院(钟世华范芳伟)烧伤液由虎杖、檵木叶等中药材提取有效成分而制成,具有清热解毒之功效,用于烧伤患者的创面用药。

反相高效液相色谱法测定大黄便秘散中大黄素、大黄酚的含量

反相高效液相色谱法测定大黄便秘散中大黄素、大黄酚的含量孙红岩;李爱霞
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2005(14)7
【摘要】目的:建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)同时测定大黄便秘散中大黄素、大黄酚的含量.方法:采用shim-Pack vp 0DS 柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以
甲醇-0.1%磷酸溶液(90:10)为流动相,检测波长为254 nm,流速为0.75 mL/min.结果:大黄素和大黄酚分别在7.76×10-2～3.38×10-1μg(r=0.999 8),9.24×10-2～4.62×10-1μg(r=0.999 6)浓度范围内与峰面积呈线性关系,平均回收率分别为100.2%和99.5%,RSD分别为0.8%和1.5%.结论:RP-HPLC法快速、灵敏、准确、操作简便.
【总页数】1页(P46-46)
【作者】孙红岩;李爱霞
【作者单位】山东省淄博市中心医院,山东,淄博,255036;山东省淄博市中医医院,山东,淄博,255300
【正文语种】中文
【中图分类】R286.0;R282.71
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3.反相高效液相色谱法测定延肾胶囊中大黄素和大黄酚的含量 [J], 曹健;王芳;雷健;张卿;张恩娟
4.反相高效液相色谱法测定清解合剂中大黄素、大黄酚含量 [J], 焦志海
5.反相高效液相色谱法测定复方大黄颗粒中大黄素和大黄酚的含量 [J], 梁恒兴;岳玲;蔡徐骄
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