钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(SNAT2)多克隆抗体的制备
多克隆抗体制备的基本过程
多克隆抗体制备的基本过程
多克隆抗体制备的基本过程包括以下步骤：
1. 免疫原的选择：选择合适的免疫原，可以是蛋白质、多肽、细胞表面抗原等。
2. 免疫动物的选择：选择适合的免疫动物，常见的包括小鼠、兔子等。
3. 免疫动物的免疫：将免疫原注射到免疫动物体内，刺激其免疫系统产生特异性抗体。
4. 收集免疫动物的血清：在免疫动物免疫一段时间后，收集其血清，其中含有特异性抗体。
5. 分离特异性抗体：通过多种方法如沉淀、层析等技术，将特异性抗体从血清中分离出来。
6. 筛选特异性抗体：对分离出的抗体进行筛选，通常采用ELISA、免疫组化等方法，筛选出特异性较好的抗体。
7. 克隆特异性抗体：将特异性较好的抗体细胞与骨髓瘤细胞（如SP2/0）融合，形成杂交瘤细胞。
8. 杂交瘤细胞的筛选：通过培养基中添加抗代谢毒物质如氨甲酰青霉素（HAT），筛选出只含杂交瘤细胞的细胞。
9. 单克隆抗体的扩增：将筛选出的单克隆细胞进行培养和扩增，得到大量的单克隆抗体。
10. 纯化和鉴定：对单克隆抗体进行纯化和鉴定，确保其纯度和特异性。
11. 应用：获得的多克隆抗体可以应用于免疫组化、免疫沉淀、免疫印迹、免疫荧光等实验和应用中。
需要注意的是，多克隆抗体制备的过程可能因具体实验目的、免疫动物的选择等因素而有所差异。
以上是一般的基本步骤，具体实验过程中还需根据实际情况进行调整和优化。
多克隆抗体单克隆抗体的制备流程
多克隆抗体单克隆抗体的制备流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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多克隆抗体的原理及制作方法
多克隆抗体的原理及制作方法一、原理多克隆抗体是由针对多种不同抗原表位的抗体组成的混合物。
外源性抗原初次进入动物体内后，可引发机体初次免疫应答，即在抗原呈递细胞（antigenpresenting cell，APC）和T细胞的作用下，未成熟B细胞被激活分化为产生抗体的浆细胞，对于大多数可溶性蛋白抗原而言，动物注射后5～7天，血清中开始出现抗体，并在12天左右达到顶峰，然后逐渐下降。
初次免疫应答产生的抗体持续时间较短，亲和力也较低。
但是受抗原刺激的B细胞除了分化为抗体产生细胞外，还增殖形成大量记忆性B细胞，它们在实施加强免疫时被快速激活，加强免疫后抗体滴度迅速上升，并持续更长时间，抗体合成率也比初次反应增加几倍到几十倍，加强免疫后7～14天出现抗体的峰值。
由于记忆B细胞的存在，需要更少的抗原刺激即可引起再次免疫应答。
记忆B细胞是长寿细胞，因此，特异性抗体应答在最后一次加强免疫之后6个月到一年都会存在。
本节介绍用佐剂乳化的抗原免疫动物获得多克隆抗血清的方法。
该法可用于免疫家兔，小鼠、大鼠或地鼠，也可用于更大的动物如绵羊、山羊或马。
二、材料（一）动物选择根据需要可选择适当品系的家兔，小鼠，大鼠或地鼠等动物进行免疫获得抗体。
动物的选择取决于所需的抗血清量以及特异性抗原的物种来源和免疫动物物种之间进化上的差异。
家兔常被选作免疫动物，因为兔与人、兔与小鼠之间的遗传学差异大，而人和小鼠来源的蛋白是最经常被研究的对象。
每次获取25ml血清的采血量，对兔本身没有明显的损伤。
（二）抗原制备优质抗血清很大程度上取决于抗原的质量、纯度和数量。
常用纯化的抗原或部分纯化的抗原免疫动物，所用抗原往往是蛋白质或肽。
一般而言，细菌或病毒蛋白如血凝素或细菌包膜蛋白有很强的免疫原性，而哺乳动物蛋白如多肽类激素或细胞膜受体则免疫原性较弱。
有时也会用到与适当的蛋白质载体、细胞或细胞与组织提取物相交联的半抗原（多糖、核酸、脂类和小分子化学物质等）以增强半抗原的免疫原性，通过化学方法将半抗原连接到已知的免疫原性强的载体蛋白上，常用的载体蛋白有匙孔戚血蓝素（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）等。
氨基酸转运体在肿瘤代谢中的研究进展
生物技术进展2022年第12卷第1期50~56Current BiotechnologyISSN 2095‑2341进展评述Reviews氨基酸转运体在肿瘤代谢中的研究进展王林琳1，孙振亮2*1.上海理工大学健康科学与工程学院，上海200093；2.上海健康医学院附属第六人民医院南院中心实验室，上海201499摘要：代谢重编程是肿瘤的重要特征，是指肿瘤细胞为满足其快速增殖的生物合成与能量需求，对其糖代谢、脂代谢以及氨基酸代谢等代谢路径进行的重编程，以维持增长速度以及补偿能量代谢所造成的氧化还原压力。
虽然不同的癌症代谢变化不同，但有些特征是所有癌症共有的，氨基酸代谢重编程是其中一个重要的特征。
氨基酸进出细胞需要氨基酸转运体的协助，因而在肿瘤细胞中多种特定的氨基酸转运体均过表达。
靶向氨基酸转运体通过影响肿瘤细胞的氨基酸代谢从而达到抗肿瘤的目的，是目前抗肿瘤药物的研究热点之一。
主要介绍了几种在肿瘤代谢中发挥重要作用的氨基酸转运体以及靶向氨基酸转运体抗肿瘤治疗的研究进展及相关作用机制，旨在了解氨基酸转运体在抗肿瘤研究中的作用，以期促进靶向氨基酸转运体抗肿瘤药物的发展。
关键词：氨基酸代谢；氨基酸转运体；肿瘤；靶向治疗DOI ：10.19586/j.2095‑2341.2021.0016中图分类号：R730文献标志码：AResearch Progress of Amino Acid Transporters in Tumor MetabolismWANG Linlin 1，SUN Zhenliang 2*1.School of Health Science and Engineering ，University of Shanghai for Science and Technology ，Shanghai 200093，China ；2.Central Laboratory ，the South Campus of Shanghai No.6People ，Hospital Affiliated to Shanghai University of Medicine &Health Sciences ，Shanghai 201499，ChinaAbstract ：Metabolic reprogramming is an important feature of tumors.It refers to the reprogramming of metabolic pathways suchas carbohydrate metabolism ，lipid metabolism and amino acid metabolism by tumor cells to meet their rapid proliferation biosynthesis and energy requirements to maintain their growth rate and compensate for the redox stress caused by its energy metabolism.Although different cancers have different metabolic changes ，some features are common to all cancers ，and amino acid metabolism reprogramming is one of the important features.The transfer of amino acids into and out of cells require the assistance of amino acid transporters ，so many specific amino acid transporters are overexpressed in tumor cells.Targeted amino acid transporter achieves the purpose of antitumor by affecting the amino acid metabolism of tumor cells ，which is also one of the current research hotspots of antitumor drugs.This paper mainly introduced several amino acid transporter that play important roles in tumor metabolism and the research progress of antitumor therapy and related mechanism ，so as to understand the function ofamino acid transporters in antitumor research ，and promote the development of targeted amino acid transporter antitumor drugs.Key words ：amino acid metabolism ；amino acid transporter ；tumor ；target therapy大量的研究表明，与正常细胞相比，肿瘤细胞的代谢发生了明显的变化[1-3]，并称为肿瘤细胞的代谢重编程，产生原因主要有以下两个方面：一是为了满足肿瘤细胞自身的增殖需要；二是为了补偿肿瘤细胞能量需求增加造成的氧化还原压力以避免氧化应激反应的发生[1]。
钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂对伴有严重肾功能不全的2型糖尿病患者心血管保护作用的Meta分析
㊃循证研究㊃通信作者:许藏丹,E m a i l :x u c a n gd a n @163.c o m 钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂对伴有严重肾功能不全的2型糖尿病患者心血管保护作用的M e t a 分析许藏丹,赵 新,顾文元(天津中医药大学第二附属医院内分泌科,天津300150) 摘 要:目的 评价钠-葡萄糖共转运蛋白2(s o d i u m -g l u c o s e c o t r a n s p o r t e r 2,S G L T 2)抑制剂对伴严重肾功能不全的2型糖尿病患者(d i a b e t e s m e l l i t u st y p e2,T 2D M )心血管保护作用及其不良反应㊂方法 检索M e d l i n e ㊁E m b a s e 和C o c h r a n eL i b r a r y 数据库,收集关于S G L T 2抑制剂在糖尿病肾病患者中的随机对照研究,检索时限为建库以来至2021年8月㊂结果 共纳入6项R C T 研究,包括3679例伴有严重肾功能异常的糖尿病患者㊂M e t a 分析结果显示:与安慰剂组相比,S G L T 2抑制剂明显降低了因心力衰竭住院(H R =0.74,95%C I =0.55~0.99,P =0.04)和中风风险(H R =0.75,95%C I =0.60~0.93,P =0.008)㊂S G L T 2抑制剂组心血管死亡(H R =0.89,95%C I =0.60~1.30,P =0.54)及全因死亡发生率(H R =0.84,95%C I =0.56~1.28,P =0.43)与安慰剂相似㊂至于不良反应方面,包括总不良事件(R R =1.00,95%C I =0.94~1.07,P =0.96)㊁骨折(R R =2.34,95%C I =0.52~10.51,P=0.27)㊁泌尿道感染(R R =1.22,95%C I =0.64~2.35,P =0.54)㊁低血压(R R =1.32,95%C I =0.59~2.95,P =0.49)㊁生殖道感染(R R =0.67,95%C I =0.15~2.93,P =0.6)及急性肾损伤(R R =0.96,95%C I =0.41~2.26,P =0.93),两组差异均无统计学意义㊂结论 在伴有严重肾功能不全的T 2D M 患者中应用S G L T 2抑制剂后,患者因心力衰竭住院和中风风险降低,且没有增加不良事件的发生风险㊂S G L T 2抑制剂可能对伴有严重肾功能不全的T 2D M 患者的心血管结局事件具有保护作用且相对安全㊂未来需要更多的临床试验来支持S G L T 2抑制剂对严重肾功能不全的T 2D M 患者心血管结局的影响㊂关键词:糖尿病,2型;钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂;肾功能不全;心血管保护中图分类号:R 587.1 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2022)01-0014-06d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2022.01.002C a r d i o v a s c u l a r p r o t e c t i v e e f f e c t s o f s o d i u m -g l u c o s e c o t r a n s po r t e r 2i n h i b i t o r s i n t y p e 2d i a b e t e sm e l l i t u s p a t i e n t sw i t h s e v e r e r e n a l i n s u f f i c i e n c y :A m e t a -a n a l ys i s X uC a n g d a n ,Z h a oX i n ,G u W e n yu a n D e p a r t m e n t o f E n d o c r i n o l o g y ,S e c o n dT e a c h i n g H o s p i t a l o f T i a n j i nU n i v e r s i t y o fT r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e ,T i a n ji n 300150,C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :X uC a n g d a n ,E m a i l :x u c a n gd a n @163.c o m A B S T R A C T :O b je c t i v e T oe v a l u a t e t h ec a r d i o v a s c u l a r p r o t e c t i v eef f e c t sa n da d v e r s er e a c t i o no f s o d i u m -g l u c o s e c o t r a n s p o r t e r 2(S G L T 2)i nhi b i t o r si nt y p e2d i a b e t e s m e l l i t u s (T 2D M )p a t i e n t s w i t hs e v e r er e n a l i n s u f f i c i e n c y.M e t h o d s W e s e a r c h e d t h r e e p u b l i c d a t a b a s e s ,i n c l u d i n g M e d l i n e ,E m b a s e a n d C o c h r a n e L i b r a r y,t o c o l l e c t r a n d o m i z e d c o n t r o l l e d t r i a l s o nS G L T 2i n h i b i t o r s i n p a t i e n t sw i t hd i a b e t i cn e p h r o p a t h y f r o mt h e i n c e p t i o nt oA u gu s t 2021.R e s u l t s At o t a l o f s i xR C T sw e r e i n c l u d e d ,i n c l u d i n g 3679d i a b e t i c p a t i e n t sw i t h s e v e r e r e n a l i n s u f f i c i e n c y .T h e m e t a -a n a l y s i s s h o w e d t h a t S G L T 2i n h i b i t o rh a ds i g n i f i c a n t l y r e d u c e dt h e r i s ko fh o s p i t a l i z a t i o n (H R =0.74,95%C I =0.55-0.99,P =0.04)a n ds t r o k e (H R =0.75,95%C I =0.60-0.93,P =0.008)d u e t oh e a r t f a i l u r e i nc o m p a r i s o n w i t h p l a c e b o g r o u p .T h e i n c i d e n c eo f c a r d i o v a s c u l a rd e a t h (H R =0.89,95%C I =0.60-1.30,P =0.54)a n da l l -c a u s e d e a t h (H R =0.84,95%C I =0.56-1.28,P =0.43)i nt h eS G L T 2i n h i b i t o r g r o u p wa ss i m i l a r t ot h a t i n p l a c eb o g r o u p .A s f o r s i d e e f f ec t s ,t h e r ew a sn os i gn i f i c a n td i f f e r e n c e i nt o t a l a d v e r s ee v e n t s (R R =1.00,95%C I =0.94-1.07,P =0.96),f r a c t u r e (R R =2.34,95%C I =0.52-10.51,P =0.27),u r i n a r yt r a c t i n f e c t i o n (R R =1.22,95%C I =0.64-2.35,P =0.54),h y p o t e n s i o n (R R =1.32,95%C I =0.59-2.95,P =0.49),r e pr o d u c t i v e t r a c t i n f e c t i o n (R R =0.67,95%C I =0.15-2.93,P =0.6)a n da c u t ek i d n e y i n j u r y (R R =0.96,95%C I =0.41-2.26,P =0.93)b e t w e e n g r o u p s .C o n c l u s i o n F o r T 2D M p a t i e n t s w i t h s e v e r er e n a li n s u f f i c i e n c y,t h ea d m i n i s t r a t i o n o fS G L T 2i n h i b i t o r s i s c a p a b l e o f r e d u c i n g t h e r i s k s o f h o s p i t a l i z a t i o na n d s t r o k e d u e t oh e a r t f a i l u r e ,w i t h o u t i n c r e a s i n g th e r i s k o f a d v e r s e e v e n t s .S G L T 2i n h i b i t o r sm a y h a v e a p r o t e c t i v e a n d r e l a t i v e l y sa f e e f f e c t o n t h e i r c a r d i o v a s c u l a r o u t c o m e s .㊃41㊃‘临床荟萃“ 2022年1月20日第37卷第1期 C l i n i c a l F o c u s ,J a n u a r y 20,2022,V o l 37,N o .1Copyright ©博看网. All Rights Reserved.F u t u r e c l i n i c a l t r i a l s a r e n e e d e d t o s u p p o r t t h e i m p a c t o f SG L T2i n h i b i t o r s o n c a r d i o v a s c u l a r b e n e f i t s i nT2D M p a t i e n t s. K E Y W O R D S:d i a b e t e s m e l l i t u s,t y p e2;s o d i u m g l u c o s e c o t r a n s p o r t e r2i n h i b i t o r s;r e n a li n s u f f i c i e n c y;c a rd i o v a s c u l a r be n ef i t s心血管疾病是2型糖尿病(t y p e2d i a b e t e s m e l l i t u s,T2D M)患者的常见并发症,也是其首要的死亡原因[1-2]㊂糖尿病患者发生心力衰竭的风险较非糖尿病患者高出2~5倍[3]㊂钠-葡萄糖共转运蛋白2(s o d i u m-g l u c o s e c o t r a n s p o r t e r2,S G L T2)是一个新的糖尿病治疗靶点,S G L T2抑制剂通过阻断近端肾小管中葡萄糖和钠的再摄取,达到降糖作用,甚至也可能有益于降低血压和体重[4]㊂目前S G L T2抑制剂已被批准用于T2D M患者,尤其是估算的肾小球滤过率(e s t i m a t e d g l o m e r u l a rf i l t r a t i o nr a t e, e G F R)ȡ45m l/(m i n㊃1.73m2)的患者[5]㊂大量随机对照研究(R C T)显示,S G L T2抑制剂能对T2D M 患者以及伴有轻度肾功能受损的患者提供心血管保护作用[6-8]㊂S G L T2抑制剂的药效作用主要依赖于良好的肾功能,随着肾功能的下降其保护作用逐渐减弱[9-10]㊂目前对于已进展至严重肾功能不全[e G F R15~45m l/(m i n㊃1.73m2)]的糖尿病患者传统降糖药治疗效果欠佳㊂S G L T2抑制剂是否尚能对伴有严重肾功能不全的T2D M患者带来心血管结局的获益尚不清楚㊂因此,本研究通过搜集国内外有关S G L T2抑制剂治疗伴有严重肾功能不全的T2D M 患者的R C T并进行M e t a分析,探讨此治疗对于改善心血管事件的有效性及安全性,以期为临床用药提供科学依据㊂1资料与方法1.1文献检索策略在M e d l i n e㊁E m b a s e和C o c h r a n eL i b r a r y数据库搜索了S G L T2抑制剂治疗的T2D M和严重肾功能不全患者的R C T,检索时限为建库以来至2021年8月㊂使用主题词结合自由词的检索策略,中英文主题词:S G L T2抑制剂(s o d i u m g l u c o s ec o t r a n s p o r t e r2i n h i b i t o r s)㊁2型糖尿病(t y p e2d i a b e t e s m e l l i t u s)㊁肾功能异常(r e n a li n s u f f i c i e n c y)㊂检索限于中㊁英文㊂1.2纳入标准及排除标准纳入标准:①R C T;②研究对象为e G F R15~45m l/(m i n㊃1.73m2)的T2D M患者或者文献纳入自行定义的严重肾功能不全者;③文献提供了有效的终点事件及不良反应事件数据㊂排除标准:①评论㊁荟萃分析㊁病例对照研究㊁病例报告和动物实验;②对于来自同一研究的多份报告,排除质量较差者或无有效数据者;③试验组或对照组样本量<30例㊂1.3文献筛选两名研究人员根据检索词独立检索文献,按照事先制定好的纳入与排除标准提取相关数据㊂筛选及提取数据的过程中如两名研究者意见不一致,则通过协商或与第3名研究者共同讨论解决㊂纳入的信息主要包括:年龄㊁体重㊁e G F R㊁糖化血红蛋白(H b A1c)㊁T2D M确诊时间㊁研究持续时间㊁干预措施㊁样本量㊁心血管结局㊁全因死亡和不良反应事件㊂主要心血管结局是因心力衰竭导致住院㊁中风和心血管死亡㊂不良反应主要包括:骨折㊁泌尿道感染㊁低血压㊁生殖道感染及急性肾损伤㊂1.4文献质量评价对每项研究的偏倚风险采用J a d a d量表进行评价[11],随机化(0~2分)㊁双盲(0~ 2分),撤退(0~1分),得分ȡ3分的研究被认为是 高质量 研究㊂1.5统计学方法采用C o c h r a n e协作网提供的R e v M a n5.3软件进行数据分析㊂计量资料采用均数差(M D)及95%可信区间(C I)为效应分析统计量,计数资料采用风险比(R R)及其95%C I为效应分析统计量㊂研究结果的异质性用I2统计量评估, I2为0%㊁25%㊁50%和75%分别代表无异质性㊁低异质性㊁中等异质性或高异质性㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1文献检索结果检索共获得1020篇文章,经过筛选排除后,最终纳入6篇文献[7,12-16],包括3679例伴有严重肾功能异常的T2D M患者㊂其中3项研究纳入e G F R值为30~45m l/(m i n㊃1.73m2)的患者,1项研究纳入的e G F R值为15~45m l/(m i n㊃1.73m2)的患者,1项研究纳入e G F R值为15~30 m l/(m i n㊃1.73m2)的患者,1项研究纳入e G F R值为15~50m l/(m i n㊃1.73m2)的患者㊂文献检索流程图见图1㊂纳入文献的基本信息及质量评分情况见表1㊂2.2 M e t a分析结果2.2.1因心力衰竭导致住院共4项研究(2052例)报道了因心力衰竭导致住院的事件数㊂异质性检验结果示各试验间无异质性(χ2=0.94,P= 0.63,I2=0%),故采用固定效应模型㊂M e t a分析结果显示,S G L T2抑制剂治疗可降低因心力衰竭导致住院的风险(H R=0.74,95%C I=0.55~0.99,P= 0.04),提示S G L T2抑制剂治疗与较低的因心力衰㊃51㊃‘临床荟萃“2022年1月20日第37卷第1期 C l i n i c a l F o c u s,J a n u a r y20,2022,V o l37,N o.1Copyright©博看网. All Rights Reserved.竭导致住院率相关,见图2㊂图1 文献检索流程2.2.2 中风 3项研究(1592例)报道了中风的事件数㊂异质性检验结果示各试验间无异质性(χ2=0.46,P =0.80,I 2=0%),故采用固定效应模型㊂M e t a 分析结果显示,S G L T 2抑制剂治疗可明显降低中风的风险(H R =0.75,95%C I =0.60~0.93,P =0.008),提示S G L T 2抑制剂与较低的中风事件相关,见图3㊂2.2.3 心血管死亡 3项研究(1592例)报道了心血管死亡发生的比值㊂异质性检验结果示各试验间无异质性(χ2=0.90,P =0.64,I 2=0%),故采用固定效应模型㊂M e t a 分析结果显示,相较于安慰剂治疗,S G L T 2抑制剂治疗并没有减少心血管死亡的发生率(H R =0.89,95%C I =0.60~1.30,P =0.54),见图4㊂2.2.4 全因死亡 3项研究(1025例)报道了全因死亡发生的事件数㊂异质性检验结果示各试验间无异质性(χ2=0.90,P =0.63,I 2=0%),故采用固定效应模型㊂M e t a 分析结果显示,全因死亡发生率在S G L T 2抑制剂组和安慰剂组差异无统计学意义(H R =0.84,95%C I =0.56~1.28,P =0.43),见图5㊂表1 纳入研究基本特征及质量评价纳入研究治疗时间(周)药物干预组对照组平均年龄(岁)干预组对照组T 2DM 确诊时间干预组对照组B a r n e t t 201452恩格列净(25m g )安慰剂65.4(10.2)62.9(11.9) 1~5年:10.8%;5~10年:16.2%;>10年:73.0%1~5年:16.2%5~10年:21.6%>10年:62.2%C R E D E N C E2019136卡格列净(100m g)安慰剂62.9(9.2)63.2(9.2)15.5年16.0年N e u e n2018188.2卡格列净(100m g ,300m g )安慰剂68.7(8.0)--W a n n e r 2018 52恩格列净(10m g ,25m g )安慰剂66.2(8.0)66.0(8.5) <1年:2.1%;1~5年:10.1%5~10年:21.9%;>10年:66.0%<1年:1.2%;1~5年:9.9%;5~10年:19.8%;>10年:68.9%Y a l e 201452卡格列净(100m g ,300m g ) 安慰剂 卡格列净100m g :69.5(8.2)卡格列净300m g :67.9(8.2)68.2(8.4) 卡格列净100m g :15.6年卡格列净300m g :17.0年16.4年 Z a n n a d202116恩格列净(10m g)安慰剂70.4(9.5)70.1(9.8)//纳入研究体重(k g )干预组对照组e G F R[m l /(m i n ㊃1.73m2)]干预组对照组H b A 1c (%)干预组对照组样本量(例)干预组对照组J a d a d评分B a r n e t t 201477.9ʃ16.484.1ʃ21.115~3015~307.968.0837374C R E D E N C E2019//30~4530~458.38.36576564N e u e n2018--30~4530~45--5544W a n n e r 201886.84ʃ11.0185.49ʃ11.4330~4530~458.078.08381189Y a l e 2014卡格列净100m g :90.5ʃ18.4卡格列净300m g :90.2ʃ18.192.8ʃ17.4 30~50 30~50 卡格列净100m g :7.9卡格列净300m g :88卡格列净100m g :90卡格列净300m g :8990 4 Z a n n a d2021--15~4515~45//4604394图2 S G L T 2治疗组和安慰剂治疗组因心力衰竭住院事件的M e t a 分析森林图㊃61㊃‘临床荟萃“ 2022年1月20日第37卷第1期 C l i n i c a l F o c u s ,J a n u a r y 20,2022,V o l 37,N o .1Copyright ©博看网. All Rights Reserved.图3 S G L T 2治疗组和安慰剂治疗组中风事件的M e t a分析森林图图4 S G L T 2治疗组和安慰剂治疗组心血管死亡事件的M e t a分析森林图图5 S G L T 2治疗组和安慰剂治疗组全因死亡率的M e t a 分析森林图2.2.5 不良事件 总的不良事件的发生率在S G L T 2抑制剂组和安慰剂组之间差异均无统计学(R R =1.00,95%C I =0.94~1.07,P =0.96)㊂其他一些不良反应,包括:骨折(R R =2.34,95%C I =0.52~10.51,P =0.27)㊁泌尿道感染(R R =1.22,95%C I =0.64~2.35,P =0.54)㊁低血压(R R =1.32,95%C I =0.59~2.95,P =0.49)㊁生殖道感染(R R =0.67,95%C I =0.15~2.93,P =0.6)及急性肾损伤(R R =0.96,95%C I =0.41~2.26,P =0.93)的风险两组差异均无统计学意义,见表2㊂以上结果提示相较于安慰剂,S G L T 2抑制剂治疗并不带来额外的不良反应㊂表2 不良事件分析表不良反应报道研究数S G L T 2抑制剂例数总例数安慰剂例数总例数异质性检验P 值I 2(%)统计学方法R R 值P 值95%C I下限上限总不良事件32603001902170.40M -H ,F i x e d10.960.941.07骨折210274 21280.540M -H ,F i x e d 2.340.270.5210.51泌尿道感染225216121270.480M -H ,F i x e d 1.220.540.642.35低血压218216 81270.60M -H ,F i x e d 1.320.490.592.95生殖道感染1 4179 390--M -H ,F i x e d 0.670.60.152.93急性肾损伤19841090--M -H ,F i x e d0.960.930.412.26注:R R :相对风险;C I :可信区间;M -H :M a n t e -lH a e n s z e l 法;F i x e d :固定效应模型3 讨 论T 2D M 目前已成为严重影响人们生活质量的公共卫生问题,大部分糖尿病患者在病程进展过程中会出现肾功能改变㊂与肾功能正常或轻度受损的糖尿病患者相比,伴有严重肾功能受损的糖尿病患者的心血管事件及病死率大大升高㊂肾功能的严重减退使T 2D M 患者的治疗面临严峻挑战,目前传统降糖药物在此期应用受限,仅有瑞格列奈㊁利格列汀不受肾功能限制,但提供心血管获益证据有限[17]㊂S G L T 2抑制剂是一种新型降糖药,现已上市的有达格列净㊁卡格列净㊁恩格列净㊁索格列净㊂S G L T 2抑制剂通过抑制肾近曲小管S G L T 2重吸收葡萄糖,增㊃71㊃‘临床荟萃“ 2022年1月20日第37卷第1期 C l i n i c a l F o c u s ,J a n u a r y 20,2022,V o l 37,N o .1Copyright ©博看网. All Rights Reserved.加尿糖排泄,产生渗透性利尿,促进钠离子向远曲小管的转运,从而增加尿钠排泄,减少体内水钠潴留,减轻全身糖钠毒性㊂本研究应用M e t a分析系统评价了接受S G L T2抑制剂治疗的伴有严重肾功能不全的T2D M患者的心血管结局㊂研究结果显示,与安慰剂组相比, S G L T2抑制剂组明显降低了因心力衰竭住院及中风的风险㊂两组心血管死亡和全因死亡的发生率比较,差异无统计学意义㊂但值得注意的,S G L T2抑制剂用于伴有严重肾功能不全的T2D M患者时,无额外不良反应的发生㊂以上结果表明S G L T2抑制剂可能对伴有严重肾功能不全的T2D M患者的心血管结局事件具有保护作用且相对安全㊂既往大量研究显示,S G L T2抑制剂能够降低T2D M患者心力衰竭[18-19]㊁中风[20-21]及死亡[22-23]的风险,为T2D M患者带来明显的心血管获益㊂S G L T2抑制剂提供心血管保护的潜在机制尚不清楚,但可能涉及多种机制㊂这些机制包括:①通过改善血糖水平逆转促炎表型和糖毒性刺激,发挥抗炎抗氧化作用[24];②利尿㊁降低血压,通过减少心脏前后负荷来改善心肌耗氧量[25];③改善动脉血管僵硬度和内皮功能[26];④降低核苷酸寡聚化结构域(N O D)样受体家族3炎性小体活性,下调肾组织儿茶酚胺活性,发挥心脏保护作用[27];⑤降低血脂,增加酮体生成,为心肌细胞的能量代谢提供燃料[28]㊂本研究结果显示,S G L T2抑制剂可明显降低因心力衰竭住院及中风的风险,这与之前的报道一致㊂提示在对伴有严重肾功能不全的T2D M患者,S G L T2抑制剂仍然能够提供心血管获益㊂然而,S G L T2抑制剂组和安慰剂组心血管病死率及全因死亡率相似,由于纳入的研究较少,因此需要更多的数据验证此结果㊂对于伴有严重肾功能不全的患者应用S G L T2抑制剂需密切监测不良事件的发生[29]㊂本研究结果中,对于总不良事件及其他报道的不良事件,如骨折㊁泌尿道感染㊁低血压㊁生殖道感染及急性肾损伤,两组差异无统计学意义㊂既往有研究报道对于e G F R<60m l/(m i n㊃1.73m2)的T2D M患者的荟萃分析发现,S G L T2抑制剂治疗可能会增加生殖器感染风险[30]㊂而本研究中,对于生殖器感染的发生,两组间差异无统计学意义㊂为当前严重肾功能损伤患者治疗提供了一种新的选择,在临床上具有良好应用前景㊂本研究存在一些局限性:①纳入的研究不够10个,不适合进行漏斗图不对称检验,这可能导致在评估S G L T2抑制剂心脏获益作用时产生偏倚;②不同试验的持续时间可能会在一定程度上影响主要终点事件数;③纳入的部分研究信息不足,不同研究间纳入的心血管事件不同,亦存在一定偏倚㊂本研究因纳入的文献数量及有效信息有限,需要进一步不断挖掘相关数据予以证实㊂综上所述,本研究严格遵循R C T系统评价的原则,共纳入6篇高质量的R C T,得出可靠性结果和结论㊂未来需要进行更多大样本的临床试验去克服目前存在的局限性,证实即使T2D M患者肾功能进展至严重不全阶段,应用S G L T2抑制剂治疗仍能带来心血管获益㊂参考文献:[1] G a l b e t e A,C a m b r a K,F o r g a L,e t a l.A c h i e v e m e n t o fc a rd i o v a s c u l a r r i s k f a c t o r t a r ge t s a c c o r d i n g t o s e x a n d p r e v i o u sh i s t o r y o f c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e i n t y p e2d i a b e t e s:Ap o p u l a t i o n-b a s e d s t u d y[J].JD i a b e t e s C o m p l i c a t i o n s,2019,33(12):107445.[2] A m e r i c a nD i a b e t e s A s s o c i a t i o n.S t a n d a r d so f m e d i c a lc a r ei nd i a be t e s-2020a b r i d g e df o r p r i m a r y c a r e p r o v i d e r s[J].C l i nD i a b e t e s,2020,38(1):10-38.[3] W r i g h tA K,S u a r e z-O r t e g o nM F,R e a dS H,e t a l.R i s k f a c t o rc o n t r o l a n dc a rd i o v a s c u l a re v e n tr i s ki n p e o p l e w i t ht y p e2d i a be t e s i n p r i m a r y a n d s e c o n d a r y p r e v e n t i o n s e t t i n g s[J].C i r c u l a t i o n,2020,142(20):1925-1936.[4]S a i s h oY.S G L T2I n h i b i t o r s:t h e s t a r i n t h e t r e a t m e n t o f t y p e2d i a b e t e s[J].D i s e a s e s,2020,8(2).[5] F a l a L.J a r d i a n c e(E m p a g l i f l o z i n),a n S G L T2i n h i b i t o r,r e c e i v e sF D Aa p p r o v a l f o r t h e t r e a t m e n t o f p a t i e n t sw i t h t y p e 2d i a b e t e s[J].A m H e a l t h D r u g B e n e f i t s,2015,8(S p e cF e a t u r e):92-95.[6] L o p a s c h u k G D,V e r m a S.M e c h a n i s m s o f c a r d i o v a s c u l a rb e n e f i t s o f s o d i u m g l uc o s e c o-t r a n s p o r t e r2(S G L T2)i n h i b i t o r s:A s t a t e-o f-t h e-a r tr e v i e w[J].J A C C B a s i cT r a n s lS c i,2020,5(6):632-644.[7] Z a n n a dF,F e r r e i r a J P,P o c o c kS J,e t a l.S G L T2i n h i b i t o r s i np a t i e n t sw i t hh e a r tf a i l u r e w i t hr e d u c e de j e c t i o nf r a c t i o n:Am e t a-a n a l y s i s o f t h eE M P E R O R-R e d u c e d a n dD A P A-H F t r i a l s[J].L a n c e t,2020,396(10254):819-829.[8] C o w i e M R,F i s h e r M.S G L T2i n h i b i t o r s:M e c h a n i s m s o fc a rd i o v a s c u l a r be n ef i tb e y o n dg l y c a e m i cc o n t r o l[J].N a tR e vC a r d i o l,2020,17(12):761-772.[9] N e s p o u xJ,V a l l o nV.R e n a l e f f e c t so fS G L T2i n h i b i t o r s:A nu p d a t e[J].C u r rO p i nN e p h r o lH y p e r t e n s,2020,29(2):190-198.[10] T s i m i h o d i m o s V,F i l i p p a t o s T D,E l i s a f M S.S G L T2i n h i b i t o r sa n d t h e k i d n e y:E f f e c t s a n d m e c h a n i s m s[J].D i a b e t e sM e t a bS y n d r,2018,12(6):1117-1123.[11] C l a r kH D,W e l l sG A,H u e t C,e t a l.A s s e s s i n g t h e q u a l i t y o fr a n d o m i z e d t r i a l s:R e l i a b i l i t y o f t h eJ a d a ds c a l e[J].C o n t r o lC l i nT r i a l s,1999,20(5):448-452.㊃81㊃‘临床荟萃“2022年1月20日第37卷第1期 C l i n i c a l F o c u s,J a n u a r y20,2022,V o l37,N o.1Copyright©博看网. 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SNAT2介导蛋氨酸对牛乳腺上皮细胞增殖与自噬的调节作用
SNAT2介导蛋氨酸对牛乳腺上皮细胞增殖与自噬的调节作用祁昊; 孟春雨; 高学军; 甄贞【期刊名称】《《中国畜牧兽医》》【年(卷),期】2019(046)009【总页数】10页(P2516-2525)【关键词】钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(SNAT2); 牛乳腺上皮细胞(BMECs); mTOR; 增曾殖; 自噬【作者】祁昊; 孟春雨; 高学军; 甄贞【作者单位】东北农业大学黑龙江省高校农业生物功能基因重点实验室哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】Q291钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(sodium-dependent neutral amino acids transporter 2，SNAT2)属于SLC38基因家族System A亚型，由504个氨基酸组成，分子质量约56 ku。
SNAT2在转运中性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸(Met)等)的同时会同向转运一个Na+，运转过程受Na+浓度及pH影响[1]。
泌乳是由各种激素作用于已发育的乳腺而引起的，乳腺分泌乳汁的过程称为泌乳。
奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells，BMECs)在生理条件下分泌乳的同时会进行细胞增殖。
已有研究报道，在哺乳期间，0.3% BMECs会在24h内增殖[2]。
这种增殖作用主要是为了实现哺乳期细胞的自我更新。
细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)是细胞周期调控的关键蛋白，可促进细胞增殖。
研究发现，Gankyrin可通过PI3K/HIF-1α/Cyclin D1途径促进卵巢癌细胞增殖[3]。
自噬(autophagy)是一种由溶酶体介导的细胞内蛋白程序化降解过程[4]。
在奶牛乳腺中，自噬在泌乳周期的各个阶段都能观察到，其中干奶期最盛，此时自噬体和自噬溶酶体数量最多。
氨基酸不仅作为蛋白质合成的底物，也是调节细胞新陈代谢的重要信号分子。
在缺乏氨基酸等营养物质的条件下，细胞会发生自噬，且不同的氨基酸效应不同。
多克隆抗体技术及其制备技术
多克隆抗体技术及其制备技术1.多克隆抗体的概念抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B 淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Monclone antibody）。
由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD 等五类抗体。
2.免疫动物供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。
动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与抗原的性质有关。
如要获得大量的抗体，多采用大动物；如要是获得直接标记诊断的抗体，则直接采用本动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体；如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备；一般实验室采用的抗体，多用兔和羊制备。
免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。
由于对免疫应答的个别差异，免疫时应同时选用数只动物进行免疫。
抗原是多种多样的，而且千差万别。
就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗原、多糖类抗原和核酸抗原等。
就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。
为了获得较好的抗血清，最好是选用蛋白质抗原，如要制备用于筛选细菌表达的cDNA文库或免疫印迹的抗血清，最好选用可降解的蛋白质抗原。
不同的抗原，其免疫原性的强弱均不相同，这种免疫原性的强弱取决于抗原的分子量、化学活性基团、立体结构、物理形状和弥散速度等。
抗原的免疫剂量是依照给予动物的种类、免疫周期以及所要求的抗体特性等不同而不同。
2020年度肉鸡氨基酸营养研究进展
2020年度肉鸡氨基酸营养研究进展王一冰，张赛，蒋守群*（广东省农业科学院动物科学研究所，畜禽育种国家重点实验室，农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室，广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广东广州510640）摘要：肉鸡是我国的重要产业，2020年全球肉鸡产业转型升级进一步加快，加之严峻的非洲猪瘟疫情给肉鸡产业的发展提供重要机遇，肉鸡产业持续增长。
本文针对2020年度国内外对肉鸡氨基酸营养的研究进行综述，主要涉及肉鸡蛋氨酸、胱氨酸、赖氨酸、苏氨酸、精氨酸等氨基酸的营养及功能研究，以及氨基酸营养在肉鸡低蛋白质饲粮技术中的作用。
该综述旨在更深入、全面地介绍肉鸡饲料营养的研究进展，为其安全、高效、优质的生产提供技术指导。
关键词：肉鸡；氨基酸；营养；研究进展中图分类号：S816文献标识码：B文章编码：1005⁃8567（2021）02⁃0010⁃06肉鸡是我国的重要产业。
近几十年，肉鸡产业的发展格局不断演变，发展模式不断完善，实现了产业迅速发展、稳步增长。
2020年全球肉鸡产业转型升级进一步加快，加之非洲猪瘟疫情对肉鸡产业的推动，肉鸡产业仍然保持迅速发展的态势，产能持续增长。
氨基酸作为构成蛋白质的基本物质，参与机体多种功能调控，氨基酸营养在肉鸡的高效健康养殖中发挥重要作用，对其的相关研究也越来越深入。
本文针对2020年度国内外相关研究报道，对肉鸡氨基酸营养的研究进展进行综述，主要涉及肉鸡蛋氨酸、胱氨酸、赖氨酸等氨基酸的营养及功能研究，以及氨基酸营养在肉鸡低蛋白质饲粮技术中的作用。
该综述旨在更深入、全面地了解肉鸡饲料营养的研究进展，为其安全、高效、优质的生产提供技术指导。
1氨基酸营养与需要量1.1蛋氨酸蛋氨酸是玉米⁃豆粕型饲粮中的第一限制性氨基酸，对肉鸡营养具有重要的作用。
蛋氨酸是蛋白质合成所必需的氨基酸，参与多种代谢途径，其缺乏会影响营养物质的消化和吸收。
Fagundes 等发现，与对照组相比（蛋氨酸0.49%），饲喂缺乏蛋氨酸饲料（0.28%），可造成1~22日龄Cobb 肉仔公鸡生长性能降低、饲料效率降低，回肠和肾脏中b0+氨基酸转运蛋白（b0+AT ）和L⁃氨基酸转运蛋白（LAT4）的mRNA 表达上调，肌肉中钠偶联中性氨基酸转运蛋白（SNAT1、SNAT2）和阳离子氨基酸转运蛋白（CAT1）相对表达量上调。
多克隆抗体的制备ppt课件
多克隆抗体的制备
动物免疫
免疫动物的选择：
抗原来源与动物种属的关系：抗原的来源与免疫动物种 属差异越远，其免疫源性越强，免疫效果越好，而同种系 或亲缘关系越近，免疫效果越差。
人工合成佐剂：如双链多聚肌苷酸：胞苷酸（poly I：C）、 双链多聚腺苷酸：尿苷酸（poly A：U）；油剂：如弗氏完全 佐剂、花生油乳剂等；
纳米佐剂
多克隆抗体的制备
弗氏佐剂（Freund’s adjuvant）
分为弗氏不完全佐剂和完全佐剂两种： 前者是由油剂（矿物油或花生油）和乳化剂（羊 毛脂或吐温-80）按1：1～1：5比例混合而成；
选择性沉淀：
选择某抗原理化特性，采用相应沉淀剂或溶液环境， 如：
核酸去除 盐析沉淀法 有机溶剂沉淀法 高分子聚合物沉淀法
多克隆抗体的制备 50%饱和硫酸铵盐溶液可沉淀析出血清球蛋白；
超滤法： 利用孔径大小不同的特制薄膜对不同分子大小
的抗原物质进行滤筛。 电泳
多克隆抗体的制备
精分离
层析法： 凝胶过滤层析 离子交换层析 亲和层析 疏水层析 反相层析
多克隆抗体的制备及 抗体活性测定
张江中试平台
多克隆抗体的制备
主要内容
• 多克隆抗体制备的基本原理 • 多克隆抗体制备的操作步骤 • 抗体活性的实验原理、操作流程和结果判断
多克隆抗体的制备
原理
1、克隆(clone)： 是指无性繁殖细胞系，由单一个祖先细胞 分裂繁殖而形成的一簇细胞系。在这个家族的所有成员中， 如无发生突变其基因是完全相同的。
多克隆抗体的制备
N—糖酰胺酶F(PNGase F)在大肠杆菌中的表达纯化及其脱糖基化作用鉴定
N—糖酰胺酶F（PNGase F）在大肠杆菌中的表达纯化及其脱糖基化作用鉴定作者：闵伟勇刘丽张舟来源：《上海师范大学学报·自然科学版》2013年第04期摘要：N-糖酰胺酶F（PNGase F）是由革兰氏阴性菌——脑膜炎脓杆菌分泌的一种分子量为34.8 kDa的去糖基化酶.本研究通过PCR技术扩增出945 bp的N-糖酰胺酶F基因，经酶切、连接，构建了大肠杆菌表达载体pET28a-PNGase F.将 pET28a-PNGase F 转入大肠杆菌BL21中，16 ℃诱导表达及Ni柱纯化后，SDS-PAGE鉴定，获得超过95%纯度的可溶性表达的N-糖酰胺酶F.对Na+依赖的中性氨基酸转运蛋白1（SNAT1）和2（SNAT2）进行脱糖基化作用检测，结果证明：纯化的N-糖酰胺酶F对SNAT1和SNAT2具有高效的脱糖基化作用.关键词：N-糖酰胺酶 F；可溶性表达与纯化；中性氨基酸转运蛋白SNAT；脱糖基化中图分类号：Q 513+.2文献标识码：A文章编号：10005137（2013）040372060引言N-糖酰胺酶F（PNGase F）主要是由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌的一种酰胺水解酶，分子量为34.8 kDa，也存在于一些真核生物细胞内[1-2].N-糖酰胺酶F能从糖蛋白完整切下N-寡糖链，并将蛋白质的天冬酰胺残基转化为天冬氨酸[2-4].由于N-糖酰胺酶F切断的是天冬酰胺残基的Cγ与Nδ的结合，因此又被称为N-乙酰-β-D-天冬酰胺酶[5].N-糖酰胺酶F具有广泛的底物专一性，对所有类型的N-连接的糖蛋白都有作用[6-7].但是天冬酰胺残基的氨基和羧基必须形成肽键的形式，并且糖链至少包含一个N，N′-二乙酰壳二塘核心（GlcNAcb1→4GlcNAc）[8-9].实际上，它广泛的底物特异性是由于缺少了各种天冬酰胺多糖的外围碳水化合物部分.N-糖酰胺酶F在糖蛋白的研究和分析中作为一种生物化学工具被广泛应用，包括寡糖类的研究以及糖蛋白的脱糖基化研究等[9].脑膜炎脓杆菌的N-糖酰胺酶F基因的阅读框中含有1 062个碱基，前120个碱基编码的氨基酸为信号肽，因此表达的蛋白质为314个氨基酸，分子量为34.8 kDa[9].从脑膜炎脓杆菌中提取N-糖酰胺酶F十分耗资和耗时，步骤繁琐多级化，并且产率低，每升发酵液只能获得0.1～0.5 mg N-糖酰胺酶F[10]，而且脑膜炎脓杆菌为病源菌，不适合大规模发酵.这些因素极大的限制了N-糖酰胺酶F的制备和应用.本研究中，将PNGase F基因连接到pET28a载体上，构建了一个含有His-tag的重组表达载体.在大肠杆菌中经过低温诱导表达获得大量高纯度可溶性表达的N-糖酰胺酶F.钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白（Sodiumcoupled Neutral Amino Acid Transporter，SNAT）属于SLC38基因家族.根据各成员对转运底物的特异性，SLC38 家族又分为System A 和System N 两个亚族，其中SNAT1和SNAT2属于System A，具有重要的生理功能，其功能紊乱可引起神经退行性疾病[11-18].SNAT1和SNAT2被预测具有11个跨膜区域，其N端在细胞内，C端在细胞外，在第六和第七个跨膜区域之间的细胞膜外侧的loop上含有两个N-糖基化位点[13，19].通过Westernblot检测SNAT1或SNAT2的表达和定位时，糖基化位点的存在使蛋白条带模糊，并影响蛋白分子的迁移，这对SNAT1或SNAT2的结构与功能的研究带来了不便.。
氨基酸代谢调控与肿瘤免疫研究进展
综㊀㊀述㊀作者简介:陈星伊ꎬ女ꎬ研究方向:肿瘤药理学ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｃｈｘｙ０７＠１６３.ｃｏｍ㊀通信作者:杨勇ꎬ男ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ研究方向:肿瘤药理学ꎬTel:139****3047ꎬE －ｍａｉｌ:ｖａｌｉａｎｔｙ＠ｈｏｔｍａｉｌ.ｃｏｍ氨基酸代谢调控与肿瘤免疫研究进展陈星伊ꎬ王旭ꎬ周陶ꎬ杨勇(中国药科大学药物科学研究院ꎬ江苏南京２１１１９８)摘要:Ｗａｒｂｕｒｇ在有氧糖酵解方面的重大发现确立了代谢重编程是癌症的首要特征ꎮ在肿瘤发生发展过程中ꎬ常伴随糖类㊁脂类以及氨基酸的异常代谢ꎮ许多肿瘤利用新陈代谢的灵活性重新分配营养物质以发挥自身优势ꎬ从而摆脱免疫监视ꎮ以往肿瘤代谢研究主要集中在糖代谢方面ꎬ近年来ꎬ氨基酸代谢对肿瘤发展的贡献也逐渐被重视ꎮ氨基酸作为机体所有细胞生存所必需的营养物质ꎬ其代谢过程与肿瘤发展也有着密不可分的联系ꎮ本文综述了几类氨基酸在肿瘤发生发展和肿瘤免疫中的作用ꎮ关键词:氨基酸ꎻ肿瘤代谢ꎻ肿瘤免疫中图分类号:Ｒ７３０㊁２３１㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２１)０１－００３５－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２１.０１.００７ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎａｍｉｎｏａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｒｅｇｕｌａｔｉｏｎａｎｄｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｉｔｙＣＨＥＮＸｉｎｇｙｉꎬＷＡＮＧＸｕꎬＺＨＯＵＴａｏꎬＹＡＮＧＹｏｎｇ(ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅꎬＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＮａｎｊｉｎｇ２１１１９８ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｗａｒｂｕｒｇᶄｓｍａｊｏｒｄｉｓｃｏｖｅｒｙｉｎａｅｒｏｂｉｃｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｈａｔｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇｉｓｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｆｅａ￣ｔｕｒｅｏｆｃａｎｃｅｒ.Ｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｔｕｍｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬｉｔｉｓｏｆｔｅｎａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄｂｙａｂｎｏｒｍａｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｓｕｇａｒｓꎬｌｉｐｉｄｓａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓ.Ｍａｎｙｔｕｍｏｒｓｕｓｅｔｈｅｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｉｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｔｏｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｎｕｔｒｉｅｎｔｓｔｏｔｈｅｉｒａｄｖａｎｔａｇｅａｎｄｔｈｕｓｇｅｔａｗａｙｆｒｏｍｉｍｍｕｎｅｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ.Ｐｒｅｖｉｏｕｓｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｕｍｏｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｍａｉｎｌｙｆｏｃｕｓｅｄｏｎｇｌｕｃｏｓｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ.Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓꎬｔｈｅｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｔｏｔｕｍｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｈａｓｇｒａｄｕａｌｌｙｂｅｅｎｐａｉｄｍｏｒｅａｔｔｅｎｔｉｏｎ.Ａｍｉｎｏａｃｉｄｓꎬａｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｎｕｔｒｉｅｎｔｓｆｏｒｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆａｌｌｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｂｏｄｙꎬｔｈｅｉｒｍｅｔａｂｏｌｉｃｐｒｏｃｅｓｓｅｓａｒｅａｌｓｏｉｎｅｘｔｒｉｃａｂｌｙｌｉｎｋｅｄｔｏｔｕｍｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ.Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｒｏｌｅｏｆｓｅｖｅｒａｌｔｙｐｅｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｉｔｙ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＡｍｉｎｏａｃｉｄꎻＭｅｔａｂｏｌｉｓｍꎻＴｕｍｏｒ㊀㊀自 Ｗａｒｂｕｒｇ效应 被提出后[１]ꎬ肿瘤代谢研究的加速持续改变着研究者对肿瘤学的理解和认知ꎬ多个最新的研究揭示了氨基酸在肿瘤代谢中的重要作用ꎮ氨基酸具有氧化还原平衡㊁能量调节㊁生物合成支持和维持内稳态的基本功能ꎬ其广泛的功能使得氨基酸代谢在肿瘤研究中倍受欢迎ꎮ在肿瘤发展过程中ꎬ由于其异常增殖ꎬ肿瘤细胞需要大量营养物质来维持生长所需ꎬ同时还需要逃避来自宿主免疫系统的监视和攻击ꎬ这些过程肿瘤细胞都是以独特的代谢方式实现的ꎮＴ细胞与肿瘤细胞经历相似的代谢重编程ꎬ激活的Ｔ细胞同样依赖于持续的营养供应ꎬ以确保其正确分化和正常功能维持[２]ꎮ本综述主要讨论了氨基酸代谢在肿瘤微环境中的重要性及对肿瘤免疫的影响ꎬ并论述其未来成为肿瘤免疫治疗方向的潜力ꎮ１㊀肿瘤微环境中的精氨酸代谢和色氨酸代谢１.１㊀精氨酸代谢与抗肿瘤免疫㊀精氨酸(ａｒｇｉｎｉｎｅꎬＡｒｇ)具有重要的营养和生理意义ꎬ是蛋白质/尿素/肌酸/谷氨酸/一氧化氮和胍丁胺等信号分子的重要前体物质ꎮ精氨琥珀酸合成酶１(ａｒｇｉｎｉｎｏｓｕｃｃｉｎａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅꎬＡＳＳ１)和精氨琥珀酸裂解酶(ａｒｇｉｎｉｎｏｓｕｃｃｉｎａｔｅｌｙａｓｅꎬＡＳＬ)将瓜氨酸催化合成精氨酸ꎬ精氨酸由精氨酸酶１(ａｒｇｉｎａｓｅꎬＡＲＧ１)分解为鸟氨酸和尿素ꎬ鸟氨酸通过精氨酸酶(ａｒｇｉｎａｓｅꎬＡＲＧ)和鸟氨酸转氨甲酰酶(ｏｒｎｉｔｈｉｎｅｔｒａｎｓｃａｒｂａｍｙｌａｓｅꎬＯＴＣ)转化为瓜氨酸ꎬ并使其能在线粒体中再循环ꎮ精氨酸虽然是一种非必需氨基酸ꎬ但在特定生理条件或疾病状态下非常重要[３]ꎮ精氨酸缺乏导致Ｔ细胞的蛋白质生物合成介导的细胞耗尽ꎬ从而导致Ｔ细胞失去其抗肿瘤活性[４]ꎮ精氨酸激活基因表达程序ꎬ增强Ｔ细胞的生物能量ꎬ导致像Ｔ细胞状态的中央记忆和提高抗肿瘤活性[５]ꎮ许多肿瘤生长依赖外源性精氨酸ꎬ因为它们缺乏ＡＳＳ１表达[６]ꎮＫｏｂａｙａｓｈｉ等[７]发现骨肉瘤患者ＡＳＳ１缺乏会导致肿瘤肺转移ꎬ通常与侵袭性表型有关ꎬ患者预后较差ꎮ这种ＡＳＳ１缺乏导致肿瘤侵袭性变强的现象ꎬ可以通过肿瘤需要更有效地利用肿瘤微环境中的外源性精氨酸来解释ꎮ哺乳动物中ＡＲＧ包括ＡＲＧ１和ＡＲＧ２两种ꎬ在许多肿瘤中ꎬ例如乳腺癌ꎬ胃癌ꎬ前列腺癌ꎬ神经母细胞瘤ꎬ肿瘤微环境中的整体ＡＲＧ活性增强[８]ꎮＡＲＧ１活性增强会导致肿瘤相关髓细胞(ｔｕｍｏｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｙｅｌｏｉｄｃｅｌｌｓꎬＴＡＭＣｓ)的扩增ꎬＴＡＭＣｓ因响应肿瘤衍生物因子和代谢物ꎬ包括白介素４(ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎꎬＩＬ－４)㊁ＩＬ－１３㊁ＩＬ－６㊁巨噬细胞集落刺激因子(ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒꎬＭ－ＣＳＦ)㊁粒细胞巨噬细胞刺激因子(ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏ￣ｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒꎬＧＭ－ＣＳＦ)㊁转化生长因子β(ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａꎬＴＧＦ－β)㊁乳酸和环状单磷酸腺苷等ꎬ以及低氧诱导因子１α(ＨＩＦ－１α)相关的分子通路ꎬ从而反馈性上调ＡＲＧ１[９]ꎮＡＲＧ１水解精氨酸得到的产物为肿瘤细胞提供了多胺合成前体ꎬ促进肿瘤生长并降低了免疫细胞对精氨酸的利用率[１０]ꎮＴＡＭＣｓ还会触发一氧化氮合酶(ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅꎬＮＯＳ)将精氨酸氧化生成ＮＯꎬＮＯ可以抑制主要组织相容性复合体－Ⅱ(ｍａｊｏｒｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｏｍｐｌｅｘⅡꎬＭＨＣ－Ⅱ)表达ꎬ从而抑制Ｔ细胞的增殖ꎬ并促进Ｔ细胞凋亡ꎬ抑制Ｔ细胞功能[１１]ꎮ因肿瘤微环境中高水平的ＡＲＧ１导致的低浓度精氨酸还会促进ＮＯＳ解偶联并产生超氧阴离子(Ｏ２－)ꎬＮＯ与Ｏ２－在病理条件下会结合并产生各种活性氮(ｒｅ￣ａｃｔｉｖｅｎｉｔｒｏｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓꎬＲＮＳ)ꎬ它会破坏微环境中Ｔ细胞活性[１２]ꎮ综上所述ꎬＴＡＭＣｓ在肿瘤微环境中能够靶向精氨酸代谢ꎬ帮助肿瘤逃避免疫攻击ꎬ从而抑制抗肿瘤免疫反应ꎮ虽然针对精氨酸代谢的免疫治疗在仍处于起步阶段ꎬ体外和体内的精氨酸代谢研究使得精氨酸剥夺疗法发展迅速ꎮ目前靶向精氨酸代谢的药物有ＡＤＩ－ＰＥＧ２０[１３]ꎬ和人精氨酸酶(ｒｈＡｒｇ１－ＰＥＧ)ꎬ前者已在肿瘤治疗中展现出了治疗潜力[１４]ꎮ１.２㊀肿瘤微环境中的色氨酸㊀色氨酸(ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎꎬＴｒｐ)是另一种与免疫耐受调节和抗肿瘤免疫反应有关的氨基酸ꎮ它的分解代谢包括两步ꎮ吲哚胺２ꎬ３－双加氧酶－１(ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ２ꎬ３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ－１ꎬＩＤＯ１)和色氨酸２ꎬ３－双加氧酶(ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ２ꎬ３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅꎬＴＤＯ)催化Ｌ－色氨酸分解代谢的第一步ꎬ沿着犬尿氨酸途径ꎬ产生一系列分子ꎬ统称为犬尿氨酸(ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅꎬＫｙｎｓ)ꎮ已有研究表明ꎬＩＤＯ在多种肿瘤中过表达[１５－１６]ꎮＩＤＯ包括ＩＤＯ１和ＩＤＯ２两种亚型ꎬＩＤＯ２近年才被克隆出来[１７]ꎮ所以一直以来针对ＩＤＯ１的研究更为广泛ꎮＩＤＯ由免疫细胞和肿瘤细胞共同表达ꎮ正常情况下ꎬ由于色氨酸易穿过质膜ꎬ表达ＩＤＯ的树突细胞(ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌꎬＤＣ)会消耗胞外色氨酸ꎬ限制色氨酸对周边Ｔ细胞的供应ꎬ从而阻碍Ｔ细胞的活化及增殖[１０]ꎬ这在自身免疫和抗炎反应中发挥重要作用ꎻ有研究报道ＩＤＯ＋的ＤＣｓ可以抑制同种异体抑制排斥反应ꎬ延长小肠移植小鼠的存活时间[１８]ꎮＩＤＯ抑制剂处理的ＡｐｏＥ－/－小鼠血管炎症增强[１９]ꎮ而在肿瘤微环境中ꎬＩＤＯ限制了Ｔ细胞对肿瘤细胞的响应ꎬＵｙｔｔｅｎｈｏｖｅ等[２０]通过小鼠肥大瘤细胞Ｐ８１５模型证明ꎬ注射ＩＤＯ阴性Ｐ８１５细胞的小鼠多数不会发生肿瘤ꎬＩＤＯ阳性Ｐ８１５组的小鼠则发展出肿瘤并最终死亡ꎮ子宫内膜癌组织免疫组织化学染色结果也表明ꎬ高ＩＤＯ水平与低水平ＣＤ３＋㊁ＣＤ８＋和ＣＤ５７＋免疫细胞存在显著相关性ꎮ这些都表明ꎬ肿瘤微环境中的效应Ｔ细胞比肿瘤细胞更易受到ＩＤＯ的影响[１０]ꎮ在肿瘤微环境中ꎬ由ＩＤＯ导致的低浓度色氨酸具有抑制ｍＴＯＲ(ｍａｍｍａｌｉａｎｔａｒｇｅｔｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎ)激酶途径和激活ＧＣＮ２(ｇｅｎｅｒａｌｃｏｎｔｒｏｌｎｏｎｄｅｒｅｐｒｅｓｓｉｂｌｅ２)激酶途径的双重作用[２１]ꎮＧＣＮ２会影响ＩＤＯ＋细胞和其邻近Ｔ细胞的基因表达[２２－２３]ꎮ色氨酸剥夺还会下调Ｔ细胞受体复合物ζ链和ｃ－Ｍｙｃ的表达水平ꎬ从而抑制Ｔ细胞的增殖[２４]ꎮ除了这种直接的Ｔ细胞抑制方式ꎬＩＤＯ还可以通过激活调节性Ｔ细胞(ＴｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｃｅｌｌꎬＴｒｅｇ)产生有效的间接免疫抑制ꎮ暴露于ＩＤＯ的幼稚型ＣＤ４＋Ｔ细胞倾向于成为Ｆｏｘｐ３＋诱导的Ｔｒｅｇｓ[２５]ꎮＩＤＯ还可以直接激活成熟的㊁预先存在的Ｔｒｅｇｓꎬ显著增强抑制功能[２６]ꎮＩＤＯ和ＴＤＯ产生的Ｋｙｎｓ是芳烃受体(ａｒｙｌｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｒｅｃｅｐ￣ｔｏｒꎬＡｈＲ)的内源性激动剂ꎬＡｈＲ是Ｔ细胞和ＤＣｓ中一种配体激活的转录因子ꎮＫｙｎｓ诱导的ＡｈＲ激活促进效应Ｔ淋巴细胞转化为Ｔｒｅｇｓꎬ并上调ＤＣｓ中ＩＤＯ１的表达ꎬ从而进一步增强免疫调节作用并阻断抗肿瘤免疫[２７]ꎮ目前ꎬＩＤＯ抑制剂已广泛应用于临床前和临床试验ꎮ目前靶向色氨酸的药物包括:ＩＤＯ抑制剂Ｄ１－甲基－色氨酸(Ｄ－１－ｍｅｔｈｙｌ－ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎꎬＤ－１ＭＴ)和ＴＤＯ抑制剂(Ｅ)－６－氟－３[２－(１Ｈ－四唑－５－基)乙烯基]－１Ｈ－吲哚(ＬＭ１０)ꎮ此外还有联合用药靶向ＩＤＯ的治疗方法[２８]ꎮ１.３㊀ＴＧＦ－β㊁精氨酸与色氨酸 免疫抑制三联体㊀如前所述ꎬＩＤＯ由ＤＣｓ和肿瘤细胞共表达ꎮ在人体中ꎬＡＲＧ１主要表达于肝脏㊁红细胞和中性粒细胞三级颗粒中ꎬ其在细胞外释放后具有酶活性[２９]ꎮ在小鼠中ꎬＡＲＧ１也存在于其他免疫细胞中ꎬ如小鼠巨噬细胞和ＤＣｓ[３０]ꎮ尽管ＡＲＧ１和ＩＤＯ１在髓细胞中的主要诱导物不同ꎬ分别是ＩＬ－４和ＩＦＮ－γꎬ此外ＴＧＦ－β也可以影响二者的活性ꎮＴＧＦ－β在ＤＣｓ中同时诱导ＡＲＧ１和ＩＤＯ１ꎬ而ＡＲＧ１上调速度比ＩＤＯ１快ꎮＡＲＧ１的代谢产物Ｌ－鸟氨酸是鸟氨酸脱羧酶(ｏｒｎｉｔｈｉｎｅｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅꎬＯＤＣ)产生多胺的底物ꎬ多胺在肿瘤中可通过激活ＭＡＰＫ和Ｓｒｃ激酶促进酶的磷酸化和下游信号转导来促进肿瘤细胞增殖ꎮ故ＡＲＧ１升高导致的Ｌ－鸟氨酸水平升高有利于ＩＤＯ磷酸化及长期的免疫调节信号的激活[８]ꎮ由此可见ＴＧＦ－β与ＡＲＧ１和ＩＤＯ１建立的免疫抑制网络在肿瘤免疫方面非常重要ꎬ同时抑制ＡＲＧ１和ＩＤＯ１活性或ＴＧＦ－β信号传导可能是肿瘤免疫治疗的潜在靶点ꎮ２ 谷氨酰胺代谢与肿瘤的免疫逃逸谷氨酰胺(ｇｌｕｔａｍｉｎｅꎬＧｌｎ)是肿瘤细胞消耗最多的氨基酸[３１]ꎮ谷氨酰胺是一种非必需氨基酸ꎬ但增殖细胞对谷氨酰胺具有成瘾性ꎬ这表明谷氨酰胺是增殖细胞的条件必需氨基酸ꎮ谷氨酰胺可以用于核苷酸和脂质生物合成ꎬ也可以用于合成谷氨酸ꎬ谷氨酸可以转化为α－酮戊二酸的中间代谢物ꎬ将谷胱甘肽还原为还原形式ꎬ抑制氧化应激ꎬ并维持线粒体膜完整性ꎬ从而有助于增殖细胞的存活ꎮ有研究表明谷氨酰胺分解代谢在肿瘤细胞中是增加的[３２]ꎮＦｕ等[３３]评估了细胞外谷氨酰胺耗竭对免疫微环境的影响ꎮ高谷氨酰胺水平肿瘤的ＣＤ８＋Ｔ细胞中的干扰素γ(ｉｎｔｅｒ￣ｆｅｒｏｎ－γꎬＩＦＮγ)㊁人颗粒酶Ｂ(ｈｕｍａｎｇｒａｎｚｙｍｅＢꎬＧＺＭＢ)㊁穿孔蛋白(ｐｅｒｆｏｒｉｎꎬＰＲＦ１)表达较低ꎮ使用敲低膜定位的谷氨酰胺转运蛋白溶质载体家族１成员５(ｓｏｌｕｔｅｃａｒｒｉｅｒｆａｍｉｌｙ１ｍｅｍｂｅｒ５ꎬＳＬＣ１Ａ５)或者谷氨酰胺转化为谷氨酰胺的限速酶谷氨酰胺酶(ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅꎬＧＬＳ)的肾癌细胞建立小鼠肾癌模型ꎬ发现肿瘤细胞内谷氨酰胺ꎬ谷氨酸和α－酮戊二酸的浓度降低ꎬ表明肿瘤细胞中的谷氨酰胺分解减少ꎮ同时ꎬＳＬＣ１Ａ５和ＧＬＳ的敲低都增强了肿瘤浸润性ＣＤ８＋Ｔ细胞的增殖能力和细胞毒性ꎻ这些结果证实肿瘤细胞固有的谷氨酰胺代谢抑制了肿瘤微环境中的细胞毒性Ｔ细胞反应ꎮ而产生这种细胞毒性抑制的机制是高谷氨酰胺代谢的肿瘤细胞具有更高水平的ＴｒｅｇꎬＧＬＳ和ＳＬＣ１Ａ５的下调使谷氨酰胺减少ꎬ导致Ｔｒｅｇ增殖减少及活性下降ꎮＴ淋巴细胞需要中性氨基酸转运蛋白２(ｓｏｄｉｕｍ－ｃｏｕｐｌｅｄｎｅｕｔｒａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ２ꎬＳＮＡＴ２)摄取谷氨酰胺ꎬＳＮＡＴ２缺乏则Ｔ淋巴细胞无法分化为辅助性Ｔ淋巴细胞１(Ｔｈｅｌｐｅｒ１ꎬＴｈ１)和辅助性Ｔ淋巴细胞１７(Ｔｈｅｌｐｅｒ１７ꎬＴｈ１７)[３４]ꎮ当缺乏谷氨酰胺时ꎬ有利于Ｔ淋巴细胞向Ｔｈ１细胞分化的微环境不能使ＣＤ４＋Ｔ分化为Ｔｈ１细胞ꎬ而是分化为Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ细胞ꎮ加入α－酮戊二酸或使用特异性转录因子Ｔ－ｂｅｔ进行诱导ꎬ则可逆转这一现象[３５]ꎮ６－重氮５－氧代－１－正亮氨酸(６－ｄｉａｚｏ－５－ｏｘｏ－ｌ－ｎｏｒ￣ｌｅｕｃｉｎｅꎬＤＯＮ)是一种谷氨酰胺拮抗剂ꎬ能够全面抑制谷氨酰胺代谢ꎬ之前已在多种肿瘤类型中开展临床试验评估其有效性ꎬ但由于其严重的药物毒性而被放弃[３６]ꎮＲｏｂｅｒｔ等[３７]设计了一系列包括ＪＨＵ０８３在内ＤＯＮ的前药小分子来探究肿瘤中谷氨酰胺代谢是否可以成为免疫检查点ꎮ通过１３Ｃ－葡萄糖示踪技术ꎬ他们发现阻断谷氨酰胺代谢后葡萄糖代谢受到抑制ꎬ同时可以改善肿瘤微环境缺氧的状况ꎮ这表明阻断谷氨酰胺代谢可以严重破坏肿瘤细胞的整体代谢ꎬ并对肿瘤微环境内的营养环境产生显著影响ꎮ在采用过继性Ｔ细胞疗法(ａｄｏｐｔｉｖｅＴ－ｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙꎬＡＣＴ)之前使用ＪＨＵ０８３对Ｂ１６黑色素瘤(Ｂ１６ＯＶＡ)小鼠进行代谢治疗ꎬ处理过的小鼠显示出肿瘤控制和存活率的改善ꎬ这表明谷氨酰胺阻断可以调节肿瘤微环境以增强Ｔ细胞疗法的疗效ꎮ对小鼠肿瘤浸润淋巴细胞(ｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓꎬＴＩＬｓ)进行检测后发现ꎬ在ＪＨＵ０８３处理的小鼠中ＣＤ８＋ＴＩＬｓ对肿瘤内细胞死亡的敏感性较低ꎬ之前有研究猜想ꎬＣＤ８＋Ｔ细胞功能障碍和肿瘤免疫逃逸的机制是肿瘤微环境中肿瘤特异性Ｔ细胞的凋亡[３８]ꎬ上述结果与此猜想一致ꎮ以上研究结果表明阻断谷氨酰胺可以诱导不同的代谢程序从而改善肿瘤的免疫逃逸ꎬ谷氨酰胺代谢是肿瘤免疫治疗的一个潜在靶点ꎮ３ 新兴氨基酸代谢与肿瘤免疫的研究３.１㊀半胱氨酸 Ｔ细胞增殖的必需氨基酸㊀哺乳动物细胞可以合成蛋白质需要半胱氨酸(ｃｙｓｔｅｉｎｅꎬＣｙｓ)ꎬ大多数细胞可通过半胱氨酸酶将胞内蛋氨酸转化为半胱氨酸ꎬ或者通过半胱氨酸转运体Ｘｃ－将胞外的胱氨酸运输进细胞ꎬ再将胱氨酸还原为半胱氨酸ꎮ由于Ｔ细胞缺乏半胱氨酸酶ꎬ其Ｘｃ－转运体缺乏ＸＣＴ链ꎬＴ细胞只能依赖于其他细胞产生的半胱氨酸ꎮ半胱氨酸由巨噬细胞和ＤＣｓ等抗原递呈细胞(ａｎｔｉｇｅｎ－ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓꎬＡＰＣｓ)ＡＰＣｓ提供ꎬ由Ｔ细胞的质膜ＡＳＣ中性氨基酸转运体运输至胞内ꎬ并参与Ｔ细胞完成抗原递呈和活化的过程ꎮ有研究表明ꎬ由于ＭＤＳＣｓ表达Ｘｃ－转运体ꎬ但不表达ＡＳＣ中性氨基酸转运体ꎬ因此它们能够从环境中获得胱氨酸ꎬ但不能输出半胱氨酸ꎬ通过限制细胞外半胱氨酸ꎬ肿瘤特异性Ｔ细胞不被激活ꎬ因此抗肿瘤免疫被抑制[３９－４０]ꎮ然而仍需更多研究进一步阐明胱氨酸缺乏在免疫抑制中的作用ꎮ３.２㊀苯丙氨酸代谢引起的免疫抑制㊀苯丙氨酸(ｐｈｅｎｙｌａｌａ￣ｎｉｎｅꎬＰｈｅ)代谢也可参与免疫应答ꎮ白细胞介素４诱导基因１(ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｆｏｕｒｉｎｄｕｃｅｄｇｅｎｅ１ꎬＩＬ－４Ｉ１)最早是在小鼠中发现的ꎬ后期在人类Ｂ细胞中也被鉴定出来ꎮ它是一种分泌型ｌ－苯丙氨酸氧化酶ꎬ通过苯丙氨酸的氧化脱氨作用产生过氧化氢(Ｈ２Ｏ２)和苯丙酮酸ꎮ目前ꎬＢ细胞中唯一已知可诱导ＩＬ－４Ｉ１的细胞因子是ＩＬ－４ꎻＩＬ－４通过刺激ＩＬ－４/ＩＬ－１３受体进而使转录因子ＳＴＡＴ６磷酸化而发挥作用[４１]ꎮ人㊁小鼠ＩＬ－４Ｉ１可通过ＡＰＣｓ和小鼠ＭＤＳＣｓ表达ꎬＩＬ－４Ｉ１在各种类型肿瘤中的巨噬细胞中都能被检测到[４２]ꎮ有研究表明ꎬＩＬ－４Ｉ１在肿瘤诱导的小鼠ＭＤＳＣｓ中的ｍＲＮＡ表达增加ꎬ表明ＩＬ－４Ｉ１可能参与选择性激活异源髓细胞对Ｔ细胞活化的负反馈调节过程[４１]ꎮＢｏｕｌｌａｎｄ等[４３]还提出ＩＬ－４Ｉ１可通过Ｈ２Ｏ２的产生ꎬ抑制ＣＤ３ζ链的表达和Ｔ细胞的增殖ꎬ从而作为免疫调节因子ꎮ这些研究表明ꎬＩＬ－４Ｉ１和苯丙氨酸代谢可能是ＭＤＳＣｓ的重要抑制机制ꎮ３.３㊀亮氨酸通过ｍＴＯＲ通路对肿瘤免疫的影响㊀支链氨基酸(ｂｒａｎｃｈｅｄｃｈａｉｎａｍｉｎｏａｃｉｄꎬＢＣＡＡ)包括亮氨酸(ｌｅｕｃｉｎｅꎬＬｅｕ)ꎬ异亮氨酸和缬氨酸ꎬ约占健康个体必需氨基酸的４０％ꎮ其中ꎬ亮氨酸不仅是生物合成必需的组分之一ꎬ还是调节ｍＴＯＲ途径的信号[４４]ꎬ是公认的ｍＴＯＲ信号激活剂[４５]ꎮｍＴＯＲ通路在许多类型的肿瘤中均被上调ꎬ并且以ｍＴＯＲ为靶点的肿瘤治疗已成为临床研究的一部分[４６]ꎮ免疫细胞对ｍＴＯＲ的调节特别敏感ꎬ因为ｍＴＯＲ途径会影响免疫细胞的分化和功能ꎬ在没有ｍＴＯＲ信号的情况下ꎬＣＤ４＋Ｔ细胞则无法分化为效应细胞ꎮ抑制Ｔ细胞中的ｍＴＯＲ通路会促进Ｔ细胞耐受ꎬ而维持耐受的机制之一是当亮氨酸抑制剂存在ꎬＴ细胞无法上调ｍＴＯＲ活性[４７]ꎮ由此可见ꎬ亮氨酸作为一种重要的调节信号ꎬ通过ｍＴＯＲ通路对免疫细胞的增殖和活化都产生着一定的影响ꎬ但ｍＴＯＲ信号通路与肿瘤微环境中亮氨酸代谢的直接联系仍需进一步探索ꎮ４ 结语近年来的研究已经证明了氨基酸在肿瘤代谢中的重要作用ꎬ氨基酸为肿瘤细胞提供营养并参与肿瘤免疫调控ꎬ但靶向氨基酸的抗肿瘤药物研发仍面临诸多挑战ꎮ首先由于氨基酸代谢的灵活性㊁复杂性以及肿瘤研究模型的局限性ꎬ离体和在体模型之间转换时ꎬ代谢表型会发生改变ꎮ其次ꎬ肿瘤细胞和免疫细胞对氨基酸及氨基酸代谢酶有着相似需求ꎬ并经常在微环境中竞争相同的氨基酸ꎬ所以需要明确肿瘤细胞特有的代谢通路而尽可能减少对机体的毒性反应ꎮ另外ꎬ氨基酸代谢表型会因为肿瘤类型的不同而存在差异ꎮ目前ꎬ体外针对氨基酸代谢的靶向小分子抑制剂研究已经取得了很大的进展[１０]ꎬ但在体内实现肿瘤干预仍面临诸多问题ꎬ因此ꎬ必须谨慎地探索肿瘤微环境中的治疗性干预措施ꎬ以消除对抗肿瘤免疫力的潜在负面影响ꎮ由于大多数代谢抑制剂无法作为单一有效的治疗药物ꎬ因此联合治疗可能是较为合理的策略ꎬ如ＰＤ－１免疫检查点抑制剂派姆单抗(ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ)与ＩＤＯ１抑制剂联用[４８]ꎮ相信对氨基酸代谢与肿瘤免疫机制了解的深入ꎬ可以为调节肿瘤微环境ꎬ增强抗肿瘤免疫反应提供新的思路ꎮ参考文献:[１]㊀ＷＡＲＢＵＲＧＯꎬＷＩＮＤＦꎬＮＥＧＥＬＥＩＮＥ.Ｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｔｕｍｏｒｓｉｎｔｈｅｂｏｄｙ[Ｊ].ＪＧｅｎＰｈｙｓｉｏｌꎬ１９２７ꎬ８(６):５１９－５３０.[２]ＦＯＸＣＪꎬＨＡＭＭＥＲＭＡＮＰＳꎬＴＨＯＭＰＳＯＮＣＢ.Ｆｕｅｌｆｅｅｄｓｆｕｎｃ￣ｔｉｏｎ:ｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｔｈｅＴ－ｃｅｌｌｒｅｓｐｏｎｓｅ[Ｊ].ＮａｔＲｅｖＩｍ￣ｍｕｎｏｌꎬ２００５ꎬ５(１１):８４４－８５２.[３]ＧＲＯＨＭＡＮＮＵꎬＢＲＯＮＴＥＶ.Ｃｏｎｔｒｏｌｏｆｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｂｙａｍｉｎｏａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ[Ｊ].ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｖꎬ２０１０ꎬ２３６(１):２４３－２６４. [４]ＦＬＥＴＣＨＥＲＭꎬＲＡＭＩＲＥＺＭＥꎬＳＩＥＲＲＡＲＡꎬｅｔａｌ.ｌ－ＡｒｇｉｎｉｎｅＤｅｐｌｅ￣ｔｉｏｎＢｌｕｎｔｓＡｎｔｉｔｕｍｏｒＴ－ｃｅｌｌＲｅｓｐｏｎｓｅｓｂｙＩｎｄｕｃｉｎｇＭｙｅｌｏｉｄ－ＤｅｒｉｖｅｄＳｕｐｐｒｅｓｓｏｒＣｅｌｌｓ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０１５ꎬ７５(２):２７５－２８３. [５]ＧＥＩＧＥＲＲꎬＲＩＥＣＫＭＡＮＮＪＣꎬＷＯＬＦＴꎬｅｔａｌ.Ｌ－ＡｒｇｉｎｉｎｅＭｏｄｕ￣ｌａｔｅｓＴＣｅｌｌＭｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄＥｎｈａｎｃｅｓＳｕｒｖｉｖａｌａｎｄＡｎｔｉ－ｔｕｍｏｒＡｃ￣ｔｉｖｉｔｙ[Ｊ].Ｃｅｌｌꎬ２０１６ꎬ１６７(３):８２９－８４２.[６]ＧＡＲＣＩＡ－ＢＥＲＭＵＤＥＺＪꎬＷＩＬＬＩＡＭＳＲＴꎬＧＵＡＲＥＣＵＣＯＲꎬｅｔａｌ.Ｔａｒｇｅｔｉｎｇｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｎｕｔｒｉｅｎｔｄｅｐｅｎｄｅｎｃｉｅｓｏｆｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＭｏｌＭｅｔａｂꎬ２０２０(３３):６７－８２.[７]ＫＯＢＡＹＡＳＨＩＥꎬＭＡＳＵＤＡＭꎬＮＡＫＡＹＡＭＡＲꎬｅｔａｌ.ＲｅｄｕｃｅｄＡｒｇｉｎｉｎｏｓｕｃｃｉｎａｔｅＳｙｎｔｈｅｔａｓｅＩｓａＰｒｅｄｉｃｔｉｖｅＢｉｏｍａｒｋｅｒｆｏｒｔｈｅＤｅ￣ｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＰｕｌｍｏｎａｒｙＭｅｔａｓｔａｓｉｓｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＯｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ[Ｊ].ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒꎬ２０１０ꎬ９(３):５３５－５４４.[８]ＭＯＮＤＡＮＥＬＬＩＧꎬＵＧＥＬＳꎬＧＲＯＨＭＡＮＮＵꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｉｍｍｕｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｉｎｃａｎｃｅｒｂｙｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｚｉｎｇｅｎｚｙｍｅｓＡＲＧａｎｄＩＤＯ[Ｊ].ＣｕｒｒＯｐｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１７(３５):３０－３９.[９]ＵＧＥＬＳꎬＳＡＮＣＴＩＳＦＤꎬＭＡＮＤＲＵＺＺＡＴＯＳꎬｅｔａｌ.Ｔｕｍｏｒ－ｉｎｄｕｃｅｄｍｙｅｌｏｉｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ:Ｗｈｅｎｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｃｅｌｌｓｍｅｅｔｔｕｍｏｒ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ[Ｊ].ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔꎬ２０１５ꎬ１２５(９):３３６５－３３７６.[１０]ＡＮＡＮＩＥＶＡＥ.Ｔａｒｇｅｔｉｎｇａｍｉｎｏａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｃａｎｃｅｒｇｒｏｗｔｈａｎｄａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅ[Ｊ].ＷｏｒｌｄＪＢｉｏｌＣｈｅｍꎬ２０１５ꎬ６(４):１８－２６.[１１]ＢＯＧＤＡＮＣ.ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｂｙＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅ[Ｊ].ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌꎬ２０１１(６７７):３７５－３９３.[１２]ＤＥＳＡＮＣＴＩＳＦꎬＳＡＮＤＲＩＳꎬＦＥＲＲＡＲＩＮＩＧꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＥｍｅｒｇｉｎｇＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＲｏｌｅｏｆＰｏｓｔ－ＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｂｙＲｅａｃｔｉｖｅＮｉｔｒｏｇｅｎＳｐｅｃｉｅｓｉｎＣａｎｃｅｒＭｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１４(５):６９.[１３]ＳＩＮＧＨＰＫꎬＤＥＯＲＵＫＨＫＡＲＡＡꎬＶＥＮＫＡＴＥＳＵＬＵＢＰꎬｅｔａｌ.Ｅｘｐｌｏｉ￣ｔｉｎｇＡｒｇｉｎｉｎｅＡｕｘｏｔｒｏｐｈｙｗｉｔｈＰｅｇｙｌａｔｅｄＡｒｇｉｎｉｎｅＤｅｉｍｉｎａｓｅ(ＡＤＩ－ＰＥＧ２０)ｔｏＳｅｎｓｉｔｉｚｅＰａｎｃｒｅａｔｉｃＣａｎｃｅｒｔｏＲａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙｖｉａＭｅｔａｂｏｌｉｃＤｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ[Ｊ].ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒꎬ２０１９ꎬ１８(１２):２３８１－２３９３.[１４]ＴＯＭＬＩＮＳＯＮＢＫꎬＴＨＯＭＳＯＮＪＡꎬＢＯＭＡＬＡＳＫＩＪＳꎬｅｔａｌ.ＰｈａｓｅＩＴｒｉａｌｏｆＡｒｇｉｎｉｎｅＤｅｐｒｉｖａｔｉｏｎＴｈｅｒａｐｙｗｉｔｈＡＤＩ－ＰＥＧ２０ＰｌｕｓＤｏ￣ｃｅｔａｘｅｌｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＡｄｖａｎｃｅｄＭａｌｉｇｎａｎｔＳｏｌｉｄＴｕｍｏｒｓ[Ｊ].ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０１５ꎬ２１(１１):２４８０－２４８６.[１５]ＷＡＮＧＸꎬＳＵＮＳꎬＤＯＮＧＱꎬｅｔａｌ.ＲｅｃｅｎｔＡｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＩｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ２ꎬ３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ１(ＩＤＯ１)Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ[Ｊ].Ｍｅｄｃｈｅｍｃｏｍｍꎬ２０１９ꎬ１０(１０):１７４０－１７５４.[１６]ＰＡＮＤＡＳꎬＰＲＡＤＨＡＮＮꎬＣＨＡＴＴＥＲＪＥＥＳꎬｅｔａｌ.４ꎬ５－Ｄｉｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ１ꎬ２ꎬ３－ｔｒｉａｚｏｌｅｓ:ＥｆｆｅｃｔｉｖｅＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＩｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ２ꎬ３－Ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ１ＥｎｚｙｍｅＲｅｇｕｌａｔｅｓＴｃｅｌｌＡｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＭｉｔｉｇａｔｅｓＴｕｍｏｒＧｒｏｗｔｈ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１９ꎬ９(１):１８４５５.[１７]ＹＥＺꎬＹＵＥＬꎬＳＨＩＪꎬｅｔａｌ.ＲｏｌｅｏｆＩＤＯａｎｄＴＤＯｉｎＣａｎｃｅｒｓａｎｄＲｅｌａｔｅｄＤｉｓｅａｓｅｓａｎｄｔｈｅＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＩｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＪＣａｎｃｅｒꎬ２０１９ꎬ１０(１２):２７７１－２７８２.[１８]ＸＩＥＦＴꎬＣＡＯＪＳꎬＺＨＡＯＪꎬｅｔａｌ.ＩＤＯｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｌｏｇｒａｆｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌｂｏｗｅｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅｂｙｅｘｐａｎｓｉｏｎｏｆＦｏｘｐ３＋ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＴｒａｎｓｐｌＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１５ꎬ３３(２):６９－７７.[１９]ＰＯＬＹＺＯＳＫＡꎬＯＬＧＡＯꎬＭＡＲＴＩＮＢꎬｅｔａｌ.Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｉｎｄｏｌｅａｍ￣ｉｎｅ２ꎬ３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅｐｒｏｍｏｔｅｓｖａｓｃｕｌａｒｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｓａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓｉｎＡｐｏｅ－/－ｍｉｃｅ[Ｊ].ＣａｒｄｉｏｖａｓｃＲｅｓꎬ２０１５ꎬ１０６(２):２９５－３０２.[２０]ＵＹＴＴＥＮＨＯＶＥＣꎬＰＩＬＯＴＴＥＬꎬＴＨÉＡＴＥＩꎬｅｔａｌ.Ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａｔｕ￣ｍｏｒａｌｉｍｍｕｎｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｂａｓｅｄｏｎｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｂｙｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ２ꎬ３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬ２００３ꎬ９(１０):１２６９－１２７４.[２１]ＳＯＲＧＤＲＡＧＥＲＦꎬＮＡＵＤＥＰꎬＫＥＭＡＩＰꎬｅｔａｌ.ＴｒｙｐｔｏｐｈａｎＭｅｔａｂ￣ｏｌｉｓｍｉｎＩｎｆｌａｍｍａｇｉｎｇ:ＦｒｏｍＢｉｏｍａｒｋｅｒｔｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＴａｒｇｅｔ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１９(１０):２５６５.[２２]ＲＡＳＨＩＤＩＡꎬＭＩＳＫＡＪꎬＬＥＥ－ＣＨＡＮＧＣꎬｅｔａｌ.ＧＣＮ２ｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒＣＤ８＋Ｔｃｅｌｌｓｕｒｖｉｖａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｍｕｒｉｎｅｍｏｄｅｌｓｏｆｍａｌｉｇｎａｎｔｇｌｉｏｍａ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒꎬ２０２０ꎬ６９(１):８１－９４. [２３]ＨＡＬＡＢＹＭＪꎬＨＥＺＡＶＥＨＫꎬＬＡＭＯＲＴＥＳꎬｅｔａｌ.ＧＣＮ２ｄｒｉｖｅｓｍａｃｒｏｐｈａｇｅａｎｄＭＤＳＣｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｔｕｍｏｒｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ[Ｊ].ＳｃｉＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１９ꎬ４(４２):ｘ８１８９. [２４]ＥＬＥＦＴＨＥＲＩＡＤＩＳＴꎬＰＩＳＳＡＳＧꎬＡＮＴＯＮＩＡＤＩＧꎬｅｔａｌ.Ｉｎｄｏｌｅａｍｉｎｅ２ꎬ３－ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓＴ－ｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｃｏｍｐｌｅｘζ－ｃｈａｉｎａｎｄｃ－ＭｙｃꎬａｎｄｒｅｄｕｃｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｌｅｖｅｌｓａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅｉｎｈｕｍａｎＴ－ｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＭｏｌＭｅｄＲｅｐꎬ２０１６ꎬ１３(１):９２５－９３２.[２５]ＭＵＮＮＤＨ.ＢｌｏｃｋｉｎｇＩＤＯａｃｔｉｖｉｔｙｔｏｅｎｈａｎｃｅａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｉｔｙ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＢｉｏｓｃｉꎬ２０１２ꎬＥ４(２):７３４－７４５.[２６]ＭＵＮＮＤＨꎬＳＨＡＲＭＡＭＤꎬＪＯＨＮＳＯＮＴＳ.ＴｒｅｇＤｅｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄＲｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ:ＩｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０１８ꎬ７８(１８):５１９１－５１９９.[２７]ＧＲＯＨＭＡＮＮＵꎬＰＵＣＣＥＴＴＩＰ.ＴｈｅＣｏｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆＩＤＯ１ａｎｄＡｈＲｉｎｔｈｅＥｍｅｒｇｅｎｃｅｏｆＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＴＣｅｌｌｓｉｎＭａｍｍａｌｓ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＩｍ￣ｍｕｎｏｌꎬ２０１５(６):５８.[２８]ＡＮＡＮＩＥＶＡＥ.Ｔａｒｇｅｔｉｎｇａｍｉｎｏａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｃａｎｃｅｒｇｒｏｗｔｈａｎｄａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅ[Ｊ].ＷｏｒｌｄＪＢｉｏｌＣｈｅｍꎬ２０１５ꎬ６(４):２８１－２８９.[２９]ＩＮＧＥＲＳＯＬＬＳＡꎬＬＡＶＡＬＪꎬＦＯＲＲＥＳＴＯＡꎬｅｔａｌ.ＭａｔｕｒｅＣｙｓｔｉｃＦｉｂｒｏｓｉｓＡｉｒｗａｙＮｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓＳｕｐｐｒｅｓｓＴＣｅｌｌＦｕｎｃｔｉｏｎ:ＥｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａＲｏｌｅｏｆＡｒｇｉｎａｓｅ１ｂｕｔＮｏｔＰｒｏｇｒａｍｍｅｄＤｅａｔｈ－Ｌｉｇａｎｄ１[Ｊ].ＪＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１５ꎬ１９４(１１):５５２０－５５２８.[３０]ＤＺＩＫＪＭ.ＥｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙＲｏｏｔｓｏｆＡｒｇｉｎａｓｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１４(５):５４４.[３１]ＪＡＩＮＭꎬＮＩＬＳＳＯＮＲꎬＳＨＡＲＭＡＳꎬｅｔａｌ.ＭｅｔａｂｏｌｉｔｅＰｒｏｆｉｌｉｎｇＩｄｅｎ￣ｔｉｆｉｅｓａＫｅｙＲｏｌｅｆｏｒＧｌｙｃｉｎｅｉｎＲａｐｉｄＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０１２ꎬ３３６(６０８４):１０４０－１０４４.[３２]ＣＨＯＩＹꎬＰＡＲＫＫ.ＴａｒｇｅｔｉｎｇＧｌｕｔａｍｉｎｅＭｅｔａｂｏｌｉｓｍｆｏｒＣａｎｃｅｒＴｒｅａｔｍｅｎｔ[Ｊ].ＢｉｏｍｏｌＴｈｅｒꎬ２０１８ꎬ２６(１):１９－２８.[３３]ＦＵＱꎬＸＵＬꎬＷＡＮＧＹꎬｅｔａｌ.Ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＭａｃｒｏｐｈａｇｅ－ｄｅｒｉｖｅｄＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２３ＩｎｔｅｒｌｉｎｋｓＫｉｄｎｅｙＣａｎｃｅｒＧｌｕｔａｍｉｎｅＡｄｄｉｃ￣ｔｉｏｎｗｉｔｈＩｍｍｕｎｅＥｖａｓｉｏｎ[Ｊ].ＥｕｒＵｒｏｌꎬ２０１８ꎬ７５(５):７５２－７６３. [３４]ＮＡＫＡＹＡＭꎬＸＩＡＯＹꎬＺＨＯＵＸꎬｅｔａｌ.ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＴＣｅｌｌＲｅｓｐｏｎ￣ｓｅｓＲｅｌｙｏｎＡｍｉｎｏＡｃｉｄＴｒａｎｓｐｏｒｔｅｒＡＳＣＴ２ＦａｃｉｌｉｔａｔｉｏｎｏｆＧｌｕｔａ￣ｍｉｎｅＵｐｔａｋｅａｎｄｍＴＯＲＣ１ＫｉｎａｓｅＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｉｍｍｕｎｉｔｙꎬ２０１４ꎬ４０(５):６９２－７０５.[３５]ＫＬＹＳＺＤꎬＴＡＩＸꎬＲＯＢＥＲＴＰＡꎬｅｔａｌ.Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔα－ｋｅｔｏ￣ｇｌｕｔａｒａｔｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｂａｌａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎＴｈｅｌｐｅｒ１ｃｅｌｌａｎｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｙＴｃｅｌｌｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ[Ｊ].ＳｃｉＳｉｇｎａｌꎬ２０１５ꎬ８(３９６):ａ９７.[３６]ＬＥＭＢＥＲＧＫＭꎬＶＯＲＮＯＶＪＪꎬＲＡＩＳＲꎬｅｔａｌ.ＷｅᶄｒｅＮｏｔ"ＤＯＮ"Ｙｅｔ:ＯｐｔｉｍａｌＤｏｓｉｎｇａｎｄＰｒｏｄｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙｏｆ６－Ｄｉａｚｏ－５－ｏｘｏ－Ｌ－ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ.[Ｊ].ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒꎬ２０１８ꎬ１７(９):１８２４－１８３２. [３７]ＬＥＯＮＥＲＤꎬＺＨＡＯＬꎬＥＮＧＬＥＲＴＪＭꎬｅｔａｌ.Ｇｌｕｔａｍｉｎｅｂｌｏｃｋａｄｅｉｎｄｕｃｅｓｄｉｖｅｒｇｅｎｔｍｅｔａｂｏｌｉｃｐｒｏｇｒａｍｓｔｏｏｖｅｒｃｏｍｅｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｅｅ￣ｖａｓｉｏｎ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０１９ꎬ３６６(６４６８):１０１３－１０２１.[３８]ＨＯＲＴＯＮＢＬꎬＷＩＬＬＩＡＭＳＪＢꎬＣＡＢＡＮＯＶＡꎬｅｔａｌ.ＩｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌＣＤ８＋Ｔ－ＣｅｌｌＡｐｏｐｔｏｓｉｓｉｓａＭａｊｏｒＣｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆＴＣｅｌｌＤｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｐｅｄｅｓＡｎｔｉ－ＴｕｍｏｒＩｍｍｕｎｉｔｙ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＲｅｓꎬ２０１７ꎬ６(１):１４－２４.[３９]ＧＲＯＴＨＣꎬＨＵＸꎬＷＥＢＥＲＲꎬｅｔａｌ.Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｃｅｌｌｓ(ＭＤＳＣｓ)ｄｕｒｉｎｇｔｕｍｏｕｒｐｒｏ￣ｇｒｅｓｓｉｏｎ[Ｊ].ＢｒＪＣａｎｃｅｒꎬ２０１９ꎬ１２０(１):１６－２５.[４０]ＭＡＧＡＬＨＡＥＳＩꎬＹＯＧＥＶＯꎬＭＡＴＴＳＳＯＮＪꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＭｅｔａｂｏｌｉｃＰｒｏｆｉｌｅｏｆＴｕｍｏｒａｎｄＶｉｒａｌｌｙＩｎｆｅｃｔｅｄＣｅｌｌｓＳｈａｐｅｓＴｈｅｉｒＭｉｃｒｏｅｎｖｉ￣ｒｏｎｍｅｎｔＣｏｕｎｔｅｒａｃｔｉｎｇＴＣｅｌｌＩｍｍｕｎｉｔｙ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１９(１０):２３０９.[４１]ＹＡＮＧＢꎬＷＡＮＧＸꎬＲＥＮＸ.ＡｍｉｎｏＡｃｉｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍＲｅｌａｔｅｄｔｏＩｍｍｕｎｅＴｏｌｅｒａｎｃｅｂｙＭＤＳＣｓ[Ｊ].ＩｎｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌꎬ２０１２ꎬ３１(３):１７７－１８３.[４２]ＭＯＬＩＮＩＥＲ－ＦＲＥＮＫＥＬＶꎬＰＲÉＶＯＳＴ－ＢＬＯＮＤＥＬＡꎬＣＡＳＴＥＬＬＡＮＯＦ.ＴｈｅＩＬ４Ｉ１Ｅｎｚｙｍｅ:ＡＮｅｗＰｌａｙｅｒｉｎｔｈｅＩｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅＴｕｍｏｒＭｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ[Ｊ].Ｃｅｌｌｓꎬ２０１９ꎬ８(７):７５７.[４３]ＢＯＵＬＬＡＮＤＭＬꎬＭＡＲＱＵＥＴＪꎬＭＯＬＩＮＩＥＲ－ＦＲＥＮＫＥＬＶꎬｅｔａｌ.ＨｕｍａｎＩＬ４Ｉ１ｉｓａｓｅｃｒｅｔｅｄＬ－ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｂｙｍａｔｕｒｅｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓｔｈａｔｉｎｈｉｂｉｔｓＴ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｂｌｏｏｄꎬ２００７ꎬ１１０(１):２２０－２２７.[４４]ＬＩＥＵＥＬꎬＮＧＵＹＥＮＴꎬＲＨＹＮＥＳꎬｅｔａｌ.Ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｃａｎｃｅｒ[Ｊ].ＥｘｐＭｏｌＭｅｄꎬ２０２０ꎬ５２(１):１５－３０.[４５]ＪＥＷＥＬＬＪＬꎬＫＩＭＹＣꎬＲＵＳＳＥＬＬＲＣꎬｅｔａｌ.ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍＴＯＲＣ１ｂｙｌｅｕｃｉｎｅａｎｄｇｌｕｔａｍｉｎｅ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０１５ꎬ３４７(６２１８):１９４－１９８.[４６]ＭＡＧＡＷＡＹＣꎬＫＩＭＥꎬＪＡＣＩＮＴＯＥ.ＴａｒｇｅｔｉｎｇｍＴＯＲａｎｄＭｅｔａｂｏ￣ｌｉｓｍｉｎＣａｎｃｅｒ:ＬｅｓｓｏｎｓａｎｄＩｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ[Ｊ].Ｃｅｌｌｓꎬ２０１９ꎬ８(１２):６０９５－６１０１.[４７]ＺＨＥＮＧＹꎬＤＥＬＧＯＦＦＥＧＭꎬＭＥＹＥＲＣＦꎬｅｔａｌ.ＡｎｅｒｇｉｃＴＣｅｌｌｓＡｒｅＭｅｔａｂｏｌｉｃａｌｌｙＡｎｅｒｇｉｃ[Ｊ].ＪＩｍｍｕｎｏｌꎬ２００９ꎬ１８３(１０):６０９５－６１０１. [４８]ＬＡＢＡＤＩＥＢＷꎬＢＡＯＲꎬＬＵＫＥＪＪ.ＲｅｉｍａｇｉｎｉｎｇＩＤＯＰａｔｈｗａｙＩｎｈｉ￣ｂｉｔｉｏｎｉｎＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｖｉａＤｏｗｎｓｔｒｅａｍＦｏｃｕｓｏｎｔｈｅＴｒｙｐｔｏｐｈａｎ－Ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ－ＡｒｙｌＨｙｄｒｏｃａｒｂｏｎＡｘｉｓ[Ｊ].ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓꎬ２０１９ꎬ２５(５):１４６２－１４７１.«药学研究»关于抵制学术不端行为的声明捏造与篡改数据㊁抄袭剽窃㊁重复发表㊁虚假署名㊁一稿多投等学术不端行为不仅违反学术规范和道德ꎬ同时也有悖于国家相关法律法规ꎬ在学术界乃至社会造成恶劣影响ꎮ为加强科技道德规范ꎬ促进科研诚信ꎬ本刊编辑部严格遵守«中华人民共和国著作权法»等相关法律法规ꎬ坚决反对学术不端行为ꎮ编辑部将对所有来稿采用中国知网 科技期刊学术不端文献检测系统 进行检测来稿是否存在抄袭㊁一稿多投㊁伪造等学术不端行为ꎬ如来稿与已经刊发的文章雷同率在３０％以上ꎬ本刊即退稿ꎮ对最终认定为属于学术不端的论文ꎬ本刊会及时通知作者ꎬ在做出最终处理决定前ꎬ允许作者就此问题做出解释和申辩ꎻ如果该论文是已经正式刊出的ꎬ则以书面的形式通知论文作者ꎬ取消论文的录用资格ꎮ重复发表者ꎬ向相关期刊发通告函ꎬ责成撤稿ꎻ如给本刊造成声誉或是其他损失的ꎬ本刊将保留继续追索赔偿的权利ꎮ对情节严重的作者ꎬ就此事件向作者所在单位和该领域内的其他科技期刊进行通报ꎻ对严重抄袭剽窃㊁一稿多投的论文作者作为第一作者所撰写的论文ꎬ３年内本刊将一概不予录用ꎮ。
多克隆抗体的制备技术
多克隆抗体的制备技术
多克隆抗体的制备技术是一种利用多个B细胞克隆的方法，用于生产特定抗原的抗体。
具体步骤如下：
1. 抗原制备：首先，需要制备抗原。
抗原可以是蛋白质、病原体、多肽或其他分子，可以通过基因工程技术在大肠杆菌等表达系统中表达、纯化或合成。
2. 免疫小动物：将制备好的抗原注射到小动物体内（如小鼠、兔子或大鼠）作为免疫原。
这样做可以激发动物的免疫系统产生抗原特异性的抗体。
3. 收集抗体：收集免疫小动物产生的抗原特异性抗体。
一般情况下，可以通过静脉采血或收集腹水来获得抗体。
4. 抗体纯化：对采集到的抗体进行纯化，可以使用亲和层析或离子交换层析等技术进行精确的纯化。
5. 克隆：将纯化的抗体进行多次稀释，然后分别稀释至单个细胞级别。
接下来，将单个细胞分别种植在含有培养液的孔中，使其形成克隆。
6. 验证：对每个克隆进行酶联免疫吸附测定（ELISA）或其他检测方法验证抗体的特异性和亲和力。
7. 扩大培养：对验证合格的克隆进行扩大培养，使其产生大量的抗体。
通过以上步骤，可以制备出多个来自不同克隆的抗体，这些抗体可以与同一抗原结合，用于生物学研究、诊断和治疗等领域。
钠离子依赖性中性氨基酸转运载体2特性、表达调控及功能
钠离子依赖性中性氨基酸转运载体2特性、表达调控及功能李光燃;谭碧娥;管桂萍;印遇龙【摘要】Sodium-dependent neutral amino acid transporter 2 ( SNAT2 ) , which belongs to transport system A,is the main transporter of nitrogen in vivo. SNAT2 is well known as typical amino acid transceptor founded in recent years, which plays a dual role of amino acid transporter and receptor through regulating the concentra-tion of intracellular amino acids, thereby regulating the downstream signal of intracellular amino acid receptors. Because of its unique features, SNAT2 has become an attractive topic in nutritional induction of amino acids in recent years. In the present review, the new research progresses on the molecular characteristics, biological properties, expression regulation and amino acids sensing signaling of SNAT2 were summarized.%转运系统A载体——钠离子依赖性的中性氨基酸转运载体2 ( SNAT2 )是近年发现的氨基酸转运感受体的典型代表,是体内主要的氮转运载体. SNAT2通过转运过程调节细胞内氨基酸浓度,进而调控细胞内氨基酸感受体的下游信号,发挥氨基酸转运载体和信号受体的双重功能,而成为近年氨基酸营养感应的研究热点. 本文围绕SNAT2的分子特性、生物学特性、表达调控及其介导的氨基酸感应信号的研究进展进行综述.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2015(027)011【总页数】7页(P3338-3344)【关键词】钠离子依赖性中性氨基酸转运载体;分子特性;生物学特性;表达调控;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路【作者】李光燃;谭碧娥;管桂萍;印遇龙【作者单位】中国科学院亚热带农业生态研究所,中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室,湖南省畜禽健康养殖工程技术中心,农业部中南动物营养与饲料科学观测实验站,长沙 410125;中国科学院大学,北京 100049;中国科学院亚热带农业生态研究所,中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室,湖南省畜禽健康养殖工程技术中心,农业部中南动物营养与饲料科学观测实验站,长沙 410125;中国科学院亚热带农业生态研究所,中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室,湖南省畜禽健康养殖工程技术中心,农业部中南动物营养与饲料科学观测实验站,长沙 410125;湖南农业大学生物科学技术学院,长沙 410128;中国科学院亚热带农业生态研究所,中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室,湖南省畜禽健康养殖工程技术中心,农业部中南动物营养与饲料科学观测实验站,长沙 410125【正文语种】中文【中图分类】S852.2氨基酸是机体重要功能物质合成的必需前体物，在维持机体正常的生长、发育和繁殖方面发挥重要作用。
牛乳腺上皮细胞SNAT2对氨基酸调节乳合成的影响
牛乳腺上皮细胞SNAT2对氨基酸调节乳合成的影响孟春雨;黄鑫;刘丽杰;陈东莹;高学军【摘要】试验旨在研究氨基酸转运体钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白(the sodium-dependent neutral amino acid transporter 2,SNAT2)在牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)中对氨基酸调节乳合成的影响.利用组织块法成功培养原代BMEC,添加不同氨基酸(蛋氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)和亮氨酸(Leu)刺激BMEC后,通过实时荧光定量PCR、Western blotting技术和甘油三酯试剂盒检测SNA T2、酪蛋白(β-casein)基因的表达量和BMEC培养液上清甘油三酯的分泌量;将N-flag-SNAT2真核表达载体及SNAT2 siRNA分别转入细胞中进行SNA T2基因的过表达和敲低试验;通过Western blotting和甘油三酯试剂盒分别检测SNAT2、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(the mammalian target of rapamycin,mTOR)、β-casein蛋白表达量和BMEC培养液上清的甘油三酯含量.结果显示,3种氨基酸(Met、Lys、Leu)均能显著促进BMEC分泌乳蛋白和乳脂,并激活mTOR信号途径,其中Met、Lys还能够显著上调SNA T2基因表达;SNAT2能够正向调节BMEC乳蛋白和乳脂肪的合成,并激活mTOR信号通路,说明氨基酸激活mTOR信号通路是通过SNA T2基因介导完成的,进而调节了BMEC乳蛋白和乳脂肪合成.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2018(045)008【总页数】9页(P2119-2127)【关键词】氨基酸;SNAT2基因;mTOR;乳蛋白;乳脂肪【作者】孟春雨;黄鑫;刘丽杰;陈东莹;高学军【作者单位】东北农业大学乳品科学教育部重点实验室 ,哈尔滨150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室 ,哈尔滨150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室 ,哈尔滨150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室 ,哈尔滨150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室 ,哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】S823氨基酸是机体重要功能物质合成的必需前体物，在维持机体正常的生长、发育和繁殖方面发挥着重要作用[1]。
钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2的研究进展
钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白ＳＮＡＴ２的研究进展杜春秀 张晓燕△ 管又飞（大连医科大学医学科学研究院，辽宁省核受体与重大代谢疾病预防治疗技术工程中心，大连１１６０４４）摘要 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白２（ｓｏｄｉｕｍ ｃｏｕｐｌｅｄｎｅｕｔｒａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ２，ＳＮＡＴ２）是ＳＬＣ３８基因编码家族中转运系统Ａ（ＳｙｓｔｅｍＡ）的重要成员。
ＳＮＡＴ２广泛表达于哺乳动物各组织中。
其表达受高渗、ｐＨ值、激素、炎症因子等因素的影响。
ＳＮＡＴ２可以通过改变细胞内氨基酸的水平来调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物１（ｍａｍｍａｌｉａｎｔａｒｇｅｔｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎｃｏｍｐｌｅｘ１，ｍＴＯＲＣ１）的下游通路，从而影响细胞蛋白质合成。
ＳＮＡＴ２在肥胖、糖尿病、关节炎、癌症等多种病理生理过程中发挥着重要的作用。
本文对ＳＮＡＴ２的研究进展进行综述。
关键词 ＳＬＣｓ；ＳＮＡＴ２；中性氨基酸；ｍＴＯＲＣ１中图分类号 Ｒ３３５ 氨基酸作为三大营养物质之一，在维持机体生长、发育及繁殖等方面发挥着重要作用，某些氨基酸还可以作为神经递质发挥信使作用。
溶质转运体（ｓｏｌｕｔｅｃａｒｒｉｅｒｓ，ＳＬＣｓ）负责氨基酸、核苷酸、糖、无机离子及药物的吸收和运输。
根据氨基酸序列的同源性，ＳＬＣｓ分为５０多种亚家族（ＳＬＣ１ ５０等），其中超过２５％的转运体主要转运氨基酸，称为氨基酸转运体。
根据转运底物即氨基酸的酸碱性，氨基酸转运体可分为酸性氨基酸转运体、碱性氨基酸转运体及中性氨基酸转运体。
每类转运体根据是否依赖钠离子可进一步分为钠离子依赖型与钠离子非依赖型的氨基酸转运体。
ＳＬＣ３８基因编码的蛋白为钠离子依赖的中性氨基酸转运体，包括１１个成员即ＳＮＡＴ１ １１。
根据转运体的转运特点，ＳＬＣ３８家族中的转运体可以分为两类转运系统即转运系统Ａ（ＳｙｓｔｅｍＡ）与转运系统Ｎ（ＳｙｓｔｅｍＮ）。
ＳｙｓｔｅｍＡ倾向转运丙氨酸等小分子的中性氨基酸，其转运活动可以被丙氨酸的结构类似物α氨基异丁酸（α ｍｅｔｈｙｌ ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃａｃｉｄ，ＭｅＡＩＢ）竞争性抑制，ＳｙｓｔｅｍＡ对ＭｅＡＩＢ的转运可以用来判断其转运活性的高低。
中性氨基酸转运蛋白SNAT2拓扑结构初探的开题报告
中性氨基酸转运蛋白SNAT2拓扑结构初探的开题报告一、题目：中性氨基酸转运蛋白SNAT2拓扑结构初探二、研究背景：中性氨基酸转运蛋白（SLC38）是一类跨过细胞膜的蛋白质，负责将中性氨基酸通过细胞膜向细胞内外方向进行转运，维持细胞的生命活性和代谢平衡。
SLC38家族包括11种成员，它们的功能差异较大，其中SNAT2是一种广泛存在于多种细胞和组织中的重要中性氨基酸转运蛋白。
SNAT2主要存在于肝脏、肾、小肠、胰腺等组织/器官中，是调节肝糖原合成、肾功能和胰岛素分泌的重要蛋白质，其活性和表达水平与许多疾病如肥胖症、2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病等密切相关。
目前，SNAT2的拓扑结构仍未被完全揭示，制约了对其调节机制的深入理解和应用。
三、研究目的：本研究旨在通过蛋白质结晶、X射线晶体衍射、分子替代、电子显微镜等生物物理化学手段，探究SNAT2的拓扑结构及其通道活性和调节机制，为其进一步功能研究和药物靶点开发提供理论和实验依据。
四、研究方法：1. SNAT2的表达、纯化和结晶2. X射线晶体衍射和结构分析3. 分子替代和单片电子显微镜分析4. 基于SNAT2的底物结构和模型构建通道结构5. 生物物理化学分析，如荧光共振能量转移法、表面等离子体共振法等，探究SNAT2的结构和功能特征五、研究意义：1. 揭示SNAT2的拓扑结构和调节机制，有助于深入理解该蛋白的结构与功能和调节机制，为未来针对该蛋白的药物研发提供依据；2. 通过研究SNAT2底物结构和通道结构，探索其与底物结合和运输规律，对于进一步研究底物结合和转运具有重要意义；3. 通过本研究，可以建立SNAT2的分子模型，为快速评估SNAT2底物和潜在药物的作用提供可靠方法。
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Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２在 哺乳 动物组 织 中分 布非 常 广 泛． 运用 Ｒ Ｎ Ａ杂 交 的 方 法在 每 个 组 织 中均检 测 到 了 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２ ｍＲ Ｎ Ａ 的存 在 ， 但体 内试 验没 有 检测 出 哺乳动 物 的脑组 织 中含有 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２蛋 白． 然而 ， 用 原位 杂 交 的方 法
钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2snat2多克隆抗体的制备中性氨基酸极性中性氨基酸单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备原理抗体的制备单克隆抗体制备单克隆抗体的制备抗体制备多克隆抗体制备半抗原抗体制备
第４ ２卷 第 ５期
２０１ ３年 １ ０月
上海师范大学学报 （ 自然科学版）
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｎ ｏ ｒ ｍａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ （ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ）
通信作者
上海师范大学学报（ 自然 科 学 版 ）
在脑 组织 中检测 到 了 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的存 在 ， 且 在 神经 胶质 细 胞及 血 脑 屏 障 中也检 测 到 了 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２ ｍ Ｒ —
ＮＡ ［
．
Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２蛋 白被推 测是含 有 １ １次跨膜 结构 的膜 蛋 白＿ １ ， 存 在着 表达 量低 、 分 离 纯化难 度大 及膜 蛋 白 晶体难结 晶等 困难 ， 至今 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２的晶体结 构还 没有被 解析 ¨ ， 阻碍 了人们 对 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２及其 家族蛋 白的结 构 与功能 的 了解 ． 目前 ， 对于 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２的研究 只能在 酶 学 和细 胞 生物 学 的水 平 上进 行 ． 基 于此 原 因 ， 高 效 的Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２专一 性抗 体便 成为不 可缺 少 的工 具 ． 本 研究 针对 制备 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２的抗体 进 行探 索 ， 并 获 得特 异 性 较高的 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２多 克隆抗 体 ， 为促 进 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２蛋 白的结构 和功能 方面 的研究 提供 有效 的材料 ．
摘 要： 钠 离子依赖的中性氨基酸转运蛋 白２ （ Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２ ） 属于Ｓ Ｌ Ｃ ３ ８家族， 参与小的 中性氨基酸 跨 膜 转运 ， 在 哺乳 动物 组 织 中广泛表 达 ． Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２的功 能紊 乱 可 以导致 许 多神 经性 疾 病 ， 如 阿尔 茨海默症 、 帕金 森 症等 ． 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法扩 增得 到 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２氨 基 端 ７ ５个氨 基 酸 的编 码序 列 ， 构 建
Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２— ７ ５ ａ ａ ， 将 其作 为免 疫原 免 疫新 西 兰大 白兔 ， 从 而获得 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２多克 隆抗 体 ． 采 用 巯 丙基
琼脂糖 凝 胶 ６ Ｂ（ Ｔ ｈ ｉ ｏ ｐ ｒ ｏ ｐ ｙ ｌ ｓ ｅ ｐ ｈ ａ ｒ ｏ ｓ ｅ） 固定抗 原 亲和 纯化 法进 一 步 对该 抗体 进 行 纯化 ， 纯化
０ 引 言
Ｓ Ｌ Ｃ ３ ８基 因家 族 的钠 离 子依 赖 的中性 氨基 酸转 运蛋 白 （ Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ） 现有 １ １ 个 家 族 成 员 Ｊ ， 根 据他 们 的 功能 特点及 调 控类 型不 同可 分 为系统 Ａ和 系 统 Ｎ＿ ｌ － ２ ］ ． 系 统 Ａ转 运 体 系包 含 ３个 亚型 ： Ｓ Ｎ Ａ Ｔ １ 、 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２ 和Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ４ ２ － ３ ］ ， 它们 均转 运小 的脂 肪 族氨 基酸 ， 包 括谷 氨酰胺 、 丙 氨酸 、 天冬 酰胺 、 半胱 氨 酸等 Ｊ ． 其 中 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２在 哺乳 动物组 织 中分 布最 为广 泛 Ｊ ． Ｓ Ｎ Ａ Ｔ １ 、 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２和 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ４介 导 的氨基 酸 跨膜 转 运 均对 酸 敏 感 ， ， 能被 氨基 酸类 似 物 ２一甲氨 基 异丁 酸 （ Ｍ ｅ Ａ Ｉ Ｂ） 所抑 制 ’ ５ Ｉ ８ 且 在氨 基酸 饥饿刺 激 和激 素刺激 的 情 况下 上调 基 因表达 Ｊ ． 系统 Ａ转运 体 系在 １ ９ ６ ５年 就 已被发 现 ， 但 这一 转 运 系统 的蛋 白直到 ２ ０ ０ ０年 才 被鉴 定 出来 ¨ ． 首先 被鉴 定 出来 的转 运蛋 白是 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ １ ， 接着 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２转 运 蛋 白的基 因被 ３个 独 立 的科 研 团队分别 克 隆 了出来 ， ９ — １ ０ ］ ． Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ４是 目前 系 统 Ａ中最 晚 被 鉴定 出来 的转 运 蛋 白． 相 比较 系 统 Ａ， 系
重组 质 粒 ｐ Ｅ Ｔ ２ ８ ａ— Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２— ７ ５ ａ ａ ， 并 将其 转入 大肠 杆 菌 Ｂ Ｌ ２ １ （ Ｄ Ｅ ３ ） 中， 通过 Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ诱 导表 达 重
组蛋 白． 利 用组氨 酸标 签蛋 白经镍 柱 亲 和纯化 后得 到 了纯度 在 ９ ５ ％ 以上 的 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２氨 基端蛋 白
Ｖｏ １ ． ４２． Ｎｏ ． ５
０ｃ ｔ． ．２ ０ １ ３
钠 离 子 依 赖 的 中性 氨 基 酸 转 运 蛋 白 ２ （ Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２ ） 多克 隆抗 体 的 制备
刘 丽 ，闵伟勇 ， 张 舟２
（ Ｉ ． 上海 师范大 学 生命 与环境 科学学院 ， 上海 ２ ０ ０ ２ ３ ４ ； ２ ． 沈阳药科大学 生命科 学与生物制 药学院， 沈阳 １ １ ０ ０ １ ６ ）
后 的抗体效价至少提高 ｌ ０倍． 蛋 白免疫印迹确定该抗 体对 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２具有 高度 的特异性 ， 表明
Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２多克 隆抗体 制备 的成 功 ， 为进 一 步研 究 Ｓ Ｎ Ａ Ｔ ２蛋 白的 结构和 功 能奠定 了生化基础 ． 关键 词 ： 转运蛋 白 ；中性氨 基 酸 ；抗体 ；蛋 白纯化 中 图分类 号 ： Ｑ ５ １ ３ ． ２ 文 献标 识码 ： Ａ 文 章编 号 ： １ ０ ０ ０ － ５ １ ３ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ － ０ ４ ８ １ － ０ ６
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ３ ０９ － ０２ －
基 金项 目： 国家 自然科学 基金项 目（ ３ １ ２ ７ ０ ８ ８ ３ ） ； 上海市教委科研创新项 目（ １ ３ Ｚ Ｚ １ ０ ３ ）
作者简介 ： 张
教授．
舟（ １ ９ ７ １一） ， 女， 沈阳药科大 学生命 科学与 生物制 药学 院教授 ， 上海师 范大学生 命与环 境科学 学 院