MicroRNA在六种不同器官肿瘤细胞系中的差异表达
MicroRNA及其研究现状
的作 用 。相反 ， 果 敲 除 Ｂ ｎ ａ Ｈｉ 如 ａ ｔｍ， ｄ的表 达 水 平 将 上调 ， 导 凋亡 的发生 ， 诱 从而 抑制 细胞 增殖 ［ 。 ８ ］
动 物 中 的 ｍｉ ＲＮＡ 还 参 与 细 胞 分 化 。ｍｉ 一３ Ｒ ２ 与 Ｈｅ一 ｓ１基 因能够较 好地 互 补 （ 补 性 约 为 ７ ） 互 ７ 。 Ｈｅ一 ｓ１以一 种基 本 的螺 旋一 螺旋 结构 存在 ， 只在 环一 它 未分化 细 胞 中表 达 。研究 者 将 人 工 合 成 的 ｍｉ 一３ Ｒ ２ 加入 到 未 分 化 的 ＮＴ ２神 经 细 胞 中 ， 现 细 胞 内 发
度变 化 幅度较 大 ， 般 从几 十 到几 百 ｎ ＿ 。除 此 之 一 ｔ］ ４
外， 多数 ｍｉ ＮＡ 还具 有高 度保 守 性 、 Ｒ 组织 特 异 性 和
时 序性 。
２ 中 国农 业科 学 院上 海 兽 医 研 究所 农 业 部 动 物 寄 生 虫 学 ． 重 点开 放 实验 室 中 国农 业 科 学 院 动 物 源 性食 品安 全 研
ｍｉ ＲＮＡ， ｐ ｅｍｉ ｒ— ＲＮＡ ） 。 ｐ ｅｍｉ Ｌ ｒ— ＲＮＡ 在 Ｒａ — ｎ
片段 搜 索 ｍｉ ＮＡ 数据 库 ， 得 已知 ｍｉ ＮＡ 信 息 ； Ｒ 获 Ｒ
未获 得 比对结果 的片段可 作为 ｍｉ ＲＮＡ候 选 片段 。
６ ｍＩＮ 的 生 理 功 能 Ｒ Ａ
ＧＴ Ｐ依 赖 的核质 ／ 细胞 质转 运蛋 白 Ｅ ｐ ｒｉ ｘ ｏｔ ５的作 ｎ 用下 ， 从核 内运 输 到 胞 质 中 。在 双 链 ＲＮＡ 专 一 性
对 ｍｉ ＮＡ 的发 现 、 构 特 征 、 成 与 作 用 机 制 、 Ｒ 结 合 分
科研英文文献汇报英文--MicroRNA.
miRNA and 3′-UTRs靶点的特异性.
过表达 miR-224
在H1299, H1573, 和 H460细胞系中， mRNA and 蛋白质的TNFAIP1 and SMAD4 表达 减少
Western blot and quantitative RT-PCR 检测转 染了表达 miR-224前体的及 对照载体的肺癌胞中， TNFAIP1 及 SMAD4 蛋白及 mRNA 水平
在有转移的肺癌中，miR-224表达更强 miR-224可能在有转移的肺癌中起到重要作用
642例 NSCLC
TCGA
Kaplan–Meier 生存分析
miR-224表达与生存之间并无 明显联系
59例 ADC
Kaplan–Meier 生存分析
miR-224与有(kras)/p53 突变肺 腺癌患者的不良预后明显相关
在非小细胞肺癌组织中，我们证实了microRNA224 (miR-224) 显著上调，尤其发生转移的组织中。增 加miR-224 表达水平，其通过以抑癌物质TNFαinduced protein 1 (TNFAIP1) （肿瘤坏死因子介导蛋 白1）及SMAD4为靶点，从而促进了细胞的迁移，侵袭 及增殖。与体外实验一致，裸鼠异体移植实验也证实了 miR-224 在体内非小细胞肺癌中作为强力致癌的 miRNA。同时，我们还发现了在非小细胞肺癌中，启动 子甲基化及ERK信号参与调节miR-224的表达。上调的 miR-224通过拮抗SMAD4及SMAD4 的抑制作用，从而 增强非小细胞肺癌的形成及肿瘤侵袭性。
下调miR-224
在 A549 细胞中，TNFAIP1 及 SMAD4 mRNA蛋 白质水平表达增加
Western blot and quantitative RT-PCR 检测转染了表达 下调miR-224的及对照载体的肺癌胞中， TNFAIP1 及 SMAD4 蛋白及 mRNA 水平
MicroRNA基因上下游分析报告
结直肠癌相关的miR-10000的上游和下游调控关系分析样例背景基因的上下游分析是做生物医学研究必要的分析之一，但需要整合各种调控数据库以及多样本基因表达数据，某些研究人员可能无从下手。
只需要提供感兴趣的基因（或者miRNA，TF）名称，云生信整合全世界公共数据库所有样本数据，从众多基因上下游的分析结果中，挑选出与疾病最相关的结果。
结果作为实验的理论支持，大大降低实验的假阳性。
基因的上下游分析分析内容：转录因子调控靶基因分析（TF-target）；microRNA调控靶基因分析（miRNA-Target）；蛋白质与蛋白质相互作用分析（PPI）；其他如TF-miRNA、TF-lncRNA、lncRNA-mRNA、miRNA-lncRNA等。
整合的全球公共数据库所有样本数据：各个物种的转录调控数据库（TRANSFAC、JASPAR、TRED、PAZAR、AGRIS、RegulateDB、CHIPBASE等）；各种miRNA调控靶基因的算法工具（miRBase、miRWalk、TargetScan、miRanda、PicTar、PITA等）；蛋白互作数据库（如HPRD、STRING、DIP、BioGRID、MINT等）；TCGA数据库的RNA-seq、small-RNA-seq等；GEO数据库的基因芯片、miRNAx芯片等。
分析目的：通过对结直肠癌公共芯片数据的分析，获得与结直肠癌相关的mir-10000(此处数字为代指，下同)调控的上游、下游基因。
分析过程：1、公共芯片数据的选择下载。
本分析使用的数据下载自GEO（GSE410000）[1]，样本来自1992年至2004年期间在MSK肿瘤中心接受诊治的结直肠癌患者，包括10000例结直肠癌样本，与510000例正常结直肠组织对照。
芯片平台使用的是Affymetrix HG-U133A ，能够检测超过10000个人基因的转录表达水平。
2、差异表达基因分析我们使用R软件包Limma[2]中的经验贝叶斯模型识别110000例结直肠癌与50000例正常结直肠组织之间的差异表达基因，以logFC绝对值大于或者等于0.585（相当于1.5倍的平均表达水平改变）和adj.P.Val 小于0.05为基因显著差异表达的阈值。
小rna表达
小rna表达小RNA（小分子RNA）是一类非编码RNA分子，其长度通常在20-30个核苷酸左右。
小RNA在细胞内起着重要的调控作用，参与多种生物学过程，如基因表达调控、蛋白质合成、细胞分化和发育等。
本文将从不同角度介绍小RNA的功能和应用。
一、小RNA在基因表达调控中的作用小RNA通过与靶基因的mRNA序列特异性碱基互补配对，介导靶基因的转录后调控。
其中，miRNA（microRNA）是一类重要的小RNA分子，通过与mRNA的3'非翻译区（3' UTR）结合，可以促进mRNA的降解或抑制翻译。
miRNA的调控网络广泛参与细胞的生长、分化、凋亡等重要生理过程。
二、小RNA在疾病诊断和治疗中的应用由于小RNA在疾病发生发展过程中的重要调控作用，其异常表达常与多种疾病的发生发展相关。
例如，miRNA的异常表达与多种肿瘤的发生发展密切相关。
通过检测体液中的小RNA水平，可以实现一些疾病的早期诊断和预后评估。
此外，针对小RNA的干扰技术（如miRNA的mimic和抑制剂）也被广泛应用于疾病治疗研究中。
三、小RNA在植物生长发育中的调控作用在植物中，小RNA也发挥着重要的调控作用。
其中，siRNA（small interfering RNA）是一类重要的小RNA分子，通过与靶基因的mRNA序列碱基互补配对，介导靶基因的降解。
siRNA在植物的基因沉默调控中起着重要作用，调控植物的生长发育、抵抗病原体和逆境胁迫等。
四、小RNA在神经系统发育和功能调控中的作用小RNA在神经系统中也发挥着重要的作用。
研究发现，miRNA参与了神经细胞的分化和轴突的生长导向。
此外，miRNA还参与了神经系统的突触可塑性和学习记忆等功能的调控。
五、小RNA在药物研发中的应用小RNA作为一种具有调控功能的分子，已经成为药物研发的重要靶点。
针对小RNA的药物研发主要包括两个方面：一是针对小RNA 的干扰技术，如miRNA的mimic和抑制剂；二是针对小RNA的靶向药物，通过设计合成靶向小RNA的化合物来实现对小RNA的调控。
miRNA简介
miRNA简介Micro RNA简介1.关于microRNAmicroRNAs （简称miRNA）是⼀类进化上⾼度守的⼩分⼦⾮编码RNA，长度⼤约22nt左右，具有转录后调控基因表达的功能。
第⼀个microRNA 于1993 年被发现。
2000年之后，关于miRNA 的研究取得了很⼤进展，⽬前已经有1000多个⼈类被发现，这些miRNA调控⾄少 30% 以上的基因表达，参与多种⽣理病理过程。
编码miRNA的基因可能位于功能基因编码区、⾮编码区，可能成簇表达或独⽴表达。
在细胞核内，基因组DNA 转录⽣成较长的pri-pre-microRNA，之后被Drosha酶切割pri-pre-miRNA 成形成长度⼤约70-100 碱基的、具发夹结构的pre- microRNA。
这些发夹结构的RNA 被核输出蛋⽩exportin5转运到细胞质，在呗胞浆中的Dicer 酶切割形成19-23nt ⼤⼩的成熟的miRNAs 产物。
成熟的单链miRNAs 与⼀系列蛋⽩形成miRNA诱导的沉默复合物(miRISC)，结合于靶mRNA的3ˊ-UTR区，阻⽌所结合的mRNA 的翻译或直接降解靶miRNA。
每个miRNA可以调控多个（甚⾄上百个）靶基因，⽽特定靶miRNA也可以同时被多个miRNAs调节。
成熟的miRNA具有如下特点：（1）通常的长度为20～24 nt , 但在3′端可以有1～2 个碱基的长度变化;（2）5′端有⼀磷酸基团, 3′端为羟基, 这⼀特点使它与⼤多数寡核苷酸和功能RNA 的降解⽚段区别开来；（3）具有⾼度保守性、时序性和组织特异性。
序列（特别是种⼦序列）⾼度同源的miRNA被归为⼀个miRNA家族，但这些miRNA并不⼀定是成簇表达的。
例如miR-34 家族3个成员miR-34a、b、c，其中，miR-34a位于1号染⾊体1p36基因座位，单独表达；⽽miR-34b和-34c位于11号染⾊体11q23基因座位，成簇表达（图1），但它们都具有相同的种⼦序列（图1），并且都受到转录因⼦TP53的调控。
甲状腺乳头状癌microRNA差异表达谱分析
部 分 ｍｉＮＡｓ Ｐ Ｃ 肿 瘤 和 临 近 肿 瘤 未 受侵 袭 组 织 中 存 在 差 异 表 达 ， 能 参 与 了 Ｒ 在 Ｔ 可
关键词 ： Ｒ ｍｉＮＡ； 甲状 腺 乳 头 状 癌 ； 异 表 达 差
中图 分 类 号 ： ７ ６ １ Ｒ ３ ． ３ Ｒ ３． ；７０２１ 文 献 标识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ６ １ ８ ４ （ ０ ０ １ — １ ８Ｏ １ ７—３ ８ ２ １ ）０１８ 一２
生机 制 的 作 用提 供 依 据 。方 法
正常 对 照 ， 半 用 于 芯 片检 测 ， 一 半 用 于 荧光 定 量 Ｐ Ｒ检 测 。用 Ｔ ｉ ｌ 抽 提 组 织 标 本 总 Ｒ 一 另 Ｃ ｒｏ 法 ｚ ＮＡ， ＹＭ－Ｏ Ｉ０微 离心 滤 器 富 集 小
Ｒ ＮＡ， ８ ５个探 针 的 ｍｉ 含 ７ ＲＨｕ ｎ １ ～ 一 ９ ２ ０ ｍｉ ＮＡ 芯 片检 测 Ｐ Ｃ肿 瘤 组 织 标 本 和 临近 肿 瘤 未 受 侵 袭 组 织标 本 ｍｉ ＮＡ 的 ｍａ ３ ０ １ ５ Ｒ Ｔ Ｒ 差异 表 达 谱 。 利 用 Ｔ ｑ ｎ ｍｉ Ｎ ｓ ｙ ａ Ｍａ Ｒ Ａ Ａｓａ ｓ定量 Ｐ Ｒ试 剂盒 ， Ｕ６ｓ Ｒ Ｃ 以 ｎ ＮＡ作 为 内标 ， 对部 分 差 异 表 达 的 ｍｉ ＮＡ 进 行 实 时定 Ｒ ｓ
ｍｉ ＲＮＡ ｆｅ ｅ ｉｌｅ ｐｒ ｓｉ ｎ ｏ ｐｉｌｒ ｈ ｒ ｉ ａ ｃｎｏ ａ ｄｉｆｒ ｎｔａ ｘ ｅ ｓｏ ｆｐａ ｌａ ｙ ｔ ｙ ｏｄ ｃ ｒ ｉ ｍ ＣＨ ＥＮ ｉ ， Ｕ Ｘ ｎ Ｗ Ｃｈｅ ｎｇ— ， ｙｉ ＺＨ Ａ Ｎ Ｇ Ｚｈｅ ｎｇ
（ ． ｐ ｒｍｅ ｔ ｆ Ｇｅ ｅａ ｒ ｅｙ， ｒｔ ｆｉｉｔｄ Ｈｏ ｐ ｔｌ ２ Ｄｅ ａ ｔ ｎ ｆ Ｂｉｌｇ １ Ｄｅ ａ ｔ ｎ ｎ ｒ ｌＳｕ ｇ ｒ Ｆｉｓ ｏ Ａｆ ｌ ｅ ｓ ｉａ ； ． ｐ ｒｍｅ ｔ ｏｏ ｙ， ａ ｏ
miRNA与肿瘤
miRNA与肿瘤miRNA是一族非编码小RNA，具有极为重要的基因调控作用。
miRNA 在肿瘤的发生、发展中具有癌基因和抑癌基因的功能，并且在不同的肿瘤当中具有特异性的表达谱。
下面就miRNA 的形成、与肿瘤的关系等作一综述。
标签：miRNA；肿瘤miRNA（microRNA）是存在于真核细胞当中具有进化保守性的一族非编码小片段RNA，为18～24 bp 大小，通过与靶基因mRNA 的碱基互补配对来影响mRNA 的稳定性或抑制其翻译，实现对蛋白表达的调控。
mi RNA 是极为重要的一种基因调控物质，调控大约30%的人类基因的转录，控制着细胞的分化、增殖和程序性细胞死亡等多种重要生理过程。
与多种疾病，特别是肿瘤的发生发展有密切关系[1]。
1 miRNA 的概述当前研究表明，miRNA基因由RNA聚合酶Ⅱ或聚合酶Ⅲ，在细胞核内转录成初级转录物（pri-miRNA），后经Drosha酶剪切形成约70nt的miRNA前体（pre-miRNA），在核输出蛋白-5（exprotin-5）的作用下转移至细胞质中，最后在切酶（dicer）作用下产生成熟的miRNA。
成熟的miRNA与RNA诱导沉默复合物（RNA induced silencing complex，RISC）结合，通过与靶mRNA的特定序列互补或不完全互补结合，诱导靶mRNA剪切或者阻止其翻译。
miRNA基因具有前体折叠形成茎环或类似茎环的二级结构的特点，以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因组中，而且绝大部分定位于基因间隔区，其转录独立于其他基因，并不翻译成蛋白质，且在相近或多物种中具有保守性[2]。
2 微小RNA 与肿瘤的关系2.1与肿瘤相关的miRNAmiRNA的表达失调与多种肿瘤有关，目前认为miRNA既可充当肿瘤抑制基因又可作为致癌基因。
近来一项研究显示约有50%以上已阐明的人类miRNA位于肿瘤相关的染色体区域，包括染色体组脆性位点、染色体扩增区、缺失区等，这表明miRNA可能参与了肿瘤的发生发展。
MicroRNA在肿瘤分子诊断中的应用
MicroRNA在肿瘤分⼦诊断中的应⽤MicroRNA 在肿瘤分⼦诊断中的应⽤欧志英 夏慧敏[摘 要] MicroRNA （miRNA ）在⼤多真核⽣物中表达，通过抑制翻译或诱导靶mRNA 降解。
miRNA 是⼀种新的转录后基因表达调控模式，在复杂疾病形成过程中发挥着重要作⽤，调节了多种⽣物学过程，包括⽣长发育、信号转导、免疫调节、细胞凋亡、增殖及肿瘤发⽣等。
越来越多的证据表明异常表达的miRNA 是⼈类疾病的标志，包括肿瘤。
差异表达的miRNA 可能作为疾病早期诊断、分⼦分型及预后判断的指标，同时也可能成为多种肿瘤耐药新的治疗靶标。
因此，miRNA 在肿瘤中可能作为诊断、预测和治疗的⽣物标志。
[关键词] 肿瘤；MicroRNA （miRNA ）；分⼦诊断；治疗；预测；⽣物标志物Application of microRNA in cancer molecular diagnosisOU Zhiying ，XIA Huimin(Molecular Biology Lab, Guangzhou Women and Children's Medical Center, Guangdong, Guangzhou 510623, China) [ABSTRACT] MicroRNA (miRNA) is a new mode of post-transcriptional regulation of gene expression. It is expressed in most of the eukaryotes, which can inhibit translation or induce target mRNA degradation. miRNA plays an important role in the formation of complex diseases and regulates a variety of biological processes, including growth and development, signal transduction, immune regulation, apoptosis, proliferation and tumor genesis and so on. More and more evidences show that the abnormal expression of miRNA is a sign of human diseases, including cancer. Differentially expressed miRNA may be used as the indicators of early diagnosis, molecular typing and prognosis. It may also be a variety of tumor-resistant new therapeutic targets. Therefore, miRNA may be used as cancer biomarkers for diagnosis, prediction and treatment.[KEY WORDS] Tumor ；MicroRNA(miRNA)；Molecular diagnosis ；Therapy ；Prediction ；Biomarker基⾦项⽬：⼴东省⾃然科学基⾦(20121054)；⼴州市重⼤民⽣科技专项(2010U1-E00741)作者单位：⼴州市妇⼥⼉童医疗中⼼分⼦⽣物学实验室，⼴东，⼴州 510623通讯作者：欧志英，E-mail: ouzhiying@/doc/5e6817334.htmlmiRNA 作为⼀类重要的参与基因表达调控的分⼦，代表了⼀种新的基因表达调控模式，它在细胞中调节约30%的蛋⽩编码基因，在致病过程中起着重要作⽤。
MicroRNA及其在肾肿瘤中的研究现状及前景
MicroRNA及其在肾肿瘤中的研究现状及前景何昊玮;董杰;葛京平【摘要】MicroRNA(miRNA)是大小为19 ～25个核苷酸的单链非编码小分子RNA,在基因的转录和翻译水平进行调控.近期的研究发现,miRNA在细胞分化、增殖、凋亡等生物进程中均起到重要的作用.在多种人类肿瘤中均发现miRNA的表达异常,特定miRNA的异常表达与缺氧、上皮间质变等肾肿瘤关键发病机制密切相关.miRNA将会是肾肿瘤可能的重要标志物,对肾肿瘤的治疗具有重要意义.%MicroRNAs( miRNA )are non-protein-coding short single stranded RNAs with the size range of 19-25 nucleotides associated with gene regulation at the transcriptional and translational level. Kecent studies have proved that miRNAs play important roles in a large number of biological processes, including cellular differentiation,proliferation , apoptosis, etc. . Changes in their expression were found in a variety of human cancers. Specific miRNAs alterations were associated with key pathogenetic mechanisms of renal cell carcinoma like hypoxia or epithelial-mesenchymal transition. miRNAs potential to serve as a powerful biomarker of renal cell carcinoma,is of great significance for the treatment.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2013(019)004【总页数】4页(P640-643)【关键词】MicroRNA;肾肿瘤;癌基因;调控;基因表达谱【作者】何昊玮;董杰;葛京平【作者单位】第二军医大学南京临床医学院,南京军区南京总医院泌尿外科,南京,210002;第二军医大学南京临床医学院,南京军区南京总医院泌尿外科,南京,210002;第二军医大学南京临床医学院,南京军区南京总医院泌尿外科,南京,210002【正文语种】中文【中图分类】R737.11MicroRNA(miRNA)是长度为19～22个核苷酸的非编码RNA，最初于1993年由Lee等［1］在研究秀丽隐杆线虫时所发现。
mirna的表达
mirna的表达mirna的表达及其在生物学研究中的重要性概述：mirna（microRNA）是一类非编码RNA，其长度约为20-24个核苷酸。
它们在细胞内通过与mRNA结合，调控基因表达。
mirna的表达具有时空特异性，参与调控细胞生长、分化和凋亡等生物学过程。
本文将介绍mirna的表达、调控机制以及在生物学研究中的重要性。
一、mirna的表达mirna的表达受多种因素调控，包括转录因子、甲基化修饰以及mirna本身的调控因子等。
在转录因子的调控下，mirna基因会被转录成pri-mirna，随后经过一系列酶的剪切和修饰，最终形成成熟的mirna。
值得注意的是，mirna的表达具有组织特异性和发育阶段特异性，即不同组织和发育阶段的细胞会表达不同的mirna。
二、mirna的调控机制mirna通过与mRNA结合，调控基因的表达。
具体而言，mirna会与mRNA的3'非翻译区（3'UTR）结合，导致mRNA的降解或翻译抑制。
这种调控机制被称为“完全互补”机制。
此外，mirna还可以通过与mRNA的编码区或5'UTR结合，调控基因的表达。
这种调控机制被称为“不完全互补”机制。
通过这些调控机制，mirna能够精确地调控大量基因的表达，从而影响细胞的功能和特性。
三、mirna在生物学研究中的重要性mirna在生物学研究中具有重要的作用。
首先，mirna在细胞生长和分化过程中起着关键的调控作用。
通过调控特定基因的表达，mirna能够促进或抑制细胞的增殖和分化，从而影响组织发育和器官形成。
其次，mirna在细胞凋亡过程中发挥重要作用。
研究发现，某些mirna能够调控凋亡相关基因的表达，从而影响细胞的生存和死亡。
此外，mirna还参与调控肿瘤的发生和发展。
许多研究表明，某些mirna在肿瘤中表达异常，与肿瘤的增殖和转移相关。
因此，研究mirna不仅有助于深入理解细胞生物学过程，还有助于揭示疾病的发生机制。
宫颈鳞癌MicroRNA差异表达的研究
作者单位 ： ５ ３ ０ ０ ２ １ 南宁市 ，广西 医科 大学第一附属 医院妇科
（ 陈军莹 ） ： ５ ３ ０ ０ ２ １ 南宁市 ， 广西 医科大学 附属 肿瘤医 院妇瘤 科（ 姚
德生 ， 贺婵娟 。 卢艳 ， 欧婷瑜 ）
通信作 者 ： 姚德生 Ｅ — ｍａ ｉ ｌ ： ｙ ａ ｏ ｄ ｅ ｓ ｏ ｎ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｉ ｎ
基金项 目： 广 西 自然 科 学 基 金 项 目（ 编号 ： ２ ０ １ １ Ｇ Ｘ Ｎ Ｓ Ｆ Ａ ０ １ ８ １ ８ ４ ，
２ ０ １ ３ ＧＸ Ｎ Ｓ Ｆ Ｂ Ａ０ １ ９ １ ３ ０ ．２ ０ １ ３ Ｇ Ｘ Ｎ Ｓ Ｆ Ｂ Ａ ０ １ ９ １ ３ ２ ） ： 广西卫 生厅 自筹 课 题（ 编号 ： Ｚ ２ ０ １ ２ ０ ７ １ ）
选择 ２ ０ １ １ 年 １ ０月在广 西 医科 大学附属肿 瘤 医院妇瘤科接 受检 查、 治疗的 ９例 患者为研 究对 象， 其中， 晚期 宫颈浸 润癌 （ Ａ组 ） ３例 ， 中早期 浸润癌 （ Ｂ组 ） ３例 ， 正 常对 照（ ｃ组） ３例 。 留取 治疗前宫颈组 织 ， 分组 用杂 交 芯 片检 查 １ ４ ５ ０种 ｍｉ Ｒ Ｎ Ａ， 分析组 间差异表达 的 ｍｉ Ｒ Ｎ Ａ 采用 实时荧光 定量 Ｐ Ｃ Ｒ测定 ｍ ｉ Ｒ 一 １ ６ 、 ｍ ｉ Ｒ 一 ２ １ 、 ｍｉ Ｒ一 ３ ４ ａ水平 ， 对芯片结果进行初 步验证 。 结果 ： （ １ ） 在表达水平较 高的 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ中， 共有 ９ ０种 ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ在三组 间存
参ｍ ｉ Ｒ 一 １ ６ ） ， 结果与 杂交芯片一致 ， 两种检 测方 法无统计 学差别。结论 ： ｍ ｉ Ｒ Ｎ Ａ在 宫颈鳞 癌组 织与正常 宫颈
miRNA与肿瘤
持续性 的启动 子的活 性
miRNA 加工效 率的增 高
miRNA 稳定性 提高
miRNA表 达增加
18
什么是miRNA 肿瘤中miRNA的表达 miRNA的应用 -- 诊断和治疗
19
miRNA的基本问题
miRNA什么时候 且在哪里表达 miRNA的表达特 征
什么样的miRNA将会被表达出来 分离,克隆,测序
预后良好病例 13q14.3缺失
miR-16-1和miR-15a表达低
预后差的病例 miR-29家族表达低
TCL1（是miR－29家族的靶基因） 蛋白表达量高型
22
最新研究证明：
在外周血中也存在miRNA
健康人外周血的miRNA主要来自血细胞,异常的miRNA则 来自肿瘤.目前对于肿瘤相关性miRNA的来源问题尚无 定论,但可以肯定的是,其与血细胞无关.有关其来源的 猜测主要包括: (1)来源于外周血中的肿瘤细胞; (2)来源于肿瘤相关小体(exos ome).
miRNA 与靶 mRNA完全互补
miRNA 与靶 mRNA不完全互补
对靶mRNA的剪切 靶mRNA降解
对靶mRNA翻译的阻遏
若miRNA 表达异常
呢
11
子宫颈 膀胱 乳房 肺癌 白血病 甲状腺 前列腺 胰腺 结肠
miRNA 的异常表达
上调，则其为致癌基因
下调，则其为抑癌基因
抑制了抑癌基因的活性
原癌基因的活性增加
MicroRNA与肿瘤的关系
1
1
2006年的诺贝尔奖桂冠由Andrew Z.Firer和Craig C.Mello 共同摘得，以表彰他们发现了RNAi（1998）
microRNA,红到发紫的研究热潮加快了 Fire和Mello摘得桂冠的速度。
MicroRNA的基础与临床研究进展
MicroRNA的基础与临床研究进展【摘要】MicroRNA 是新近发现的一类调控性小分子RNA，通过降解靶基因mRNA或转录后抑制靶基因表达而发挥作用。
近期的研究发现人血清中稳定存在一定水平的miRNA，并且血清miRNA 表达谱的变化与多种肿瘤的发生、发展具有明确的相关性, 说明血清miRNA 可以作为肿瘤临床诊断和预后评估的分子标志物。
【Abstract】MicroRNAs are small noncoding RNAs that function to regulate gene expression by post-transcription regulation or degradation mRNA of target gene. Recently，it has been shown that serum contains large amounts of stable miRNAs and that the serum miRNA expression profile can be used as a novel serum-based biomarker potentially offering more sensitive and specific tests than those currently available for early diagnosis of cancer and other diseases.【Key words】MicroRNA; Gene expression regulation；Disease; Biomarker2002年, MicroRNAs(miRNAs)的发现被《Science》杂志评为十大科技突破第一名, 近年来, 已然成为生命科学研究的重要热点之一。
在动、植物及病毒等生物中发现了一系列小分子非编码RNA(small noncoding RNA), 包括miRNA, siRNA, piRNA，esiRNA等, 它们组成了RNA 调控网络, 调控包括细胞增殖、分化和凋亡等一系列生理进程,并与多种人类疾病密切相关［1］。
MicroRNA与肿瘤
综 述
M icroRNA
(
与 肿瘤
徐 锋 综述, 高建平, 程 文 审校
南京大学医学院临床学院 泌尿外科, 江苏南京 210002) 南京军区南京 总医院
[ 关键词 ] M ic roRNA ; 肿瘤发生; 诊断; 基因治疗
[ 1 5] D icer 蛋白而不是D ro sh a 蛋白的水平下调 。
由 RNA 聚合 酶� 转录 的 。 其最 初产 物是 被称为 pr i2 m iRNA
(p r i 。 P r i2 m a ry m iRNA ) 的 前体分 子 m iRNA 在一 种D rosha RN a se 的作用下, 剪切为具有茎环结构约 70 个核苷酸长度的 m iRNA 前体 (P re 2 m iRNA ) 。 p 调控胚胎后期发育的基因 lin24, 随后在多种 生物物种中鉴别出上千种m iRNA s [2 23]。 许 多m iRNA 的表达水 平具有较强的保守性、 基因簇集 现象、 时空特 异性及组织 特异性: ①保守 性 。 在已克 隆到的
m iRNA 中, 几乎所有的m iRNA s 的基因存在于相近动物中,
m RNA 之间的 错配程 度决定 的, 匹 配程度 高的 目的 mRNA
列进展。 本文从m iRNA 的概念与特征、 作用 m iRNA 的产生、 机制及与肿瘤的关系等方面作一阐述。
1 m iRNA 的发现及其生物学特性 1993 年, L ee 等
[1 ]
在 秀 丽新小 杆 线虫 (C. elegans ) 中 发
中图分类号: R 730 143 文献标识码: A 文章编号: 1672 2 271X (2008) 06 2 0436203 M icroRNA 简称为 m iRNA , 通常长度为 19～ 25 个 核苷 酸, 是 一类 重要 高度 保守 的非 编码 的小 分子 单链 RNA 。最新 有 关 研 究 表 明: m iRNA 与 肿 瘤 存 在 着 紧 密 关 联, 已 在
MicroRNA在6种肿瘤细胞中的表达差异
Expression of m icroRNA in 6 types of human cancer cell lines
MA Zhuo2ya, TANG Hua3 , L I Xin, L IU M in, WU Hai2dong, WANG J ing ( Tianjin L ife Science Center, Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China)
[ Abstract] O bjective: To determ ine the difference of m iRNA exp ression p rofiles in 6 types of human cancer cells by m icroarray technique. M ethods: The m icroarray was p repared, with contained 210 oligonucleotides, including 206 p robes comp lementary with human and mouse m iRNA sequences and 4 positive control oligos. M iRNA s were extracted from HeLa ( human cervical cancer ep ithelial cells) , MCF27 ( human breast cancer cells) , A549 ( human lung adenocarcinoma cells) , HT229 ( human colonic cancer cells) , ES22 ( ovarian carcinoma cells) , and K562 ( chronic myelogenous leukem ia cells) cells and were labeled with Cy3 for hybridization to the m iRNA m icroarray. The slides were scanned by ScanA rrayTM Exp ress1. 0 and images were analyzed by ScanA rray3. 0 and Cluster3. 0; the results were confirmed by Northern blotting and RT2PCR. Results: Totally 115 m iRNA s were found to be differentially exp ressed in the 6 cancer cell lines, with m iR 2 21 exp ression up 2regulated and m iR 2125b, let27 exp ression down2regulated. The exp ression of m iR 21725p and m iR 220a was in cluster and was more higher in ES22 cells than in other cells. HeLa and MCF27 cells were located on a single branch of the dendrogram in cluster analysis. Northern blotting showed that both pre2 and m iR 21725p exp ressed in K562, pre2m iR 21725p was weakly exp ressed in A549 and ES22 cells, and obvious p re2m iRNA exp ression and weak m iRNA ex2 p ression were noticed in MCF27, HeLa, and HT229 cells. RT2PCR showed that exp ression of pre2m iR 21725p in K562 cells was higher than those in other cells. Exp ression of m iR 221was high in all 6 cell lines and the highest exp ression was seen in A549 cells. Conclusion: M icroarray can be used to detect m iRNA exp ression files in cancer cells, which contributes to the study of the relation between m iRNA and tumor.
果蝇miRNA的结构与作用机制及生物功能-医学遗传学论文-基础医学论文-医学论文
果蝇miRNA的结构与作用机制及生物功能-医学遗传学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——miRNA( microRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为21 个核苷酸( nucleotide，nt) 的非编码单链RNA 分子，由具有发夹结构的70 ～90 个碱基大小的单链RNA 前体经过核酸酶加工生成，其本身不具有开放阅读框架( ORF) 。
越来越多的研究表明非编码RNA 对真核生物基因的表达起重要的调控作用。
miRNA 通过与靶标基因的mRNA 的特定结合位点结合，导该mRNA 的降解或者抑制该基因编码蛋白的合成，从而参与靶基因的表达调控( Kim et al.，2009) 。
miRNA 在不同的模式生物中的研究都取得了一定进展，而果蝇Dro-sophila 作为经典的模式生物，对其miRNA 的研究近几年取得了相当成就。
本文总结了miRNA 的发现、果蝇miRNA 作用机制，并对miRNA 调控果蝇生长发育等各个阶段的分子机制研究进行综述。
1 miRNA 的发现miRNA 最早于1993 年在秀丽隐杆线虫Caenorhabditis el-egans 中发现并确定其结构，研究发现一种22 nt 的RNA 分子lin-4 在翻译水平上通过抑制一种核蛋白lin-14 的表达来调控线虫的幼虫发育进程( Lee et al.，1993) 。
此结果在当时被认为是偶然情况。
直到发现第二个miRNA let-7，存在于线虫幼虫时期的L3 期、L4 期以及成虫期，与蜕皮激素相关( Rein-hart et al.，2000) 。
此后，2001 年《Science》分别报道了三个实验室从线虫、果蝇和小鼠中克隆得到的几十个与C. elegan的miRNA lin-4 相类似的miRNA( Lagos-Quintana et al.，2001;Lau et al.，2001; Lee Ambros，2001) 。
MicroRNA生物学功能及其在肿瘤中的作用机制
MicroRNA生物学功能及其在肿瘤中的作用机制陈国庆;赵志伟;曹霞;羊惠君【摘要】MicroRNA是新近发现的一类调控性小分子RNA,通过降解靶基因mRNA或者转录后抑制靶基因表达而发挥作用.目前的研究已经发现microRNA参与调控发育、细胞分化、细胞凋亡、细胞能量代谢等多种生理过程以及心血管疾病、神经系统疾病、糖尿病、肿瘤等多种病理过程.本文就microRNA的生物学功能及其在肿瘤发生、发展中的作用机制做一综述.【期刊名称】《四川解剖学杂志》【年(卷),期】2010(018)002【总页数】4页(P34-37)【关键词】MicroRNA;基因调控;肿瘤治疗【作者】陈国庆;赵志伟;曹霞;羊惠君【作者单位】武汉体育学院健康科学学院,武汉,430079;四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室,成都,610041;四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室,成都,610041;四川大学华西基础医学与法医学院人体解剖学教研室,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】R730.2MicroRNA是一类长度约为21至23个核苷酸的调控性小分子RNA,至1993年Anbros等人在线虫中发现第一个microRNA分子lin-4以来,microRNA的功能及其作用机制引起人们极大的重视,是当前生物医学领域研究的热点。
绝大多数microRNA来源于基因组中的非编码序列,microRNA的发现也使得人们得以重新认识基因组结构和功能,早先被认为是垃圾DNA的内含子、间隔序列、重复序列等也开始引起研究人员的注意。
迄今为止,人们在拟南芥、线虫、果蝇、小鼠、人类等多种生物中发现数千个microRNA分子,这些microRNA分子参与了包括发育、细胞分化、细胞凋亡、细胞能量代谢等多种生理过程以及心血管疾病、神经系统疾病、糖尿病、肿瘤等多种病理过程[1]。
microRNA的发现为基因表达调控的机制提供了一个全新的模式和更为复杂的调控网络。
胃癌相关差异表达microRNA的研究
胃癌相关差异表达microRNA的研究摘要目的：MicroRNA（miRNA）是一类非编码RNA，有研究表明其具有类似于原癌或抑癌基因的作用，参与了肿瘤的发生、发展、迁移、凋亡等生物事件中。
本文将对胃癌组织中差异表达的miRNA做初步的研究，探讨其在胃癌发生、发展过程当中起到的作用。
材料及方法：1、收集3例南华大学第二附属医院胃肠外科2018年4月至2018年11月间行胃癌根治术患者的肿瘤组织，并留取对应的癌旁组织（距肿瘤边缘5cm以上）作对照。
运用基因芯片技术对所收集的胃癌组织及对应癌旁组织中miRNA的表达情况进行检测。
2、收集2018年南华大学第二附属医院胃肠外科经病理确诊的7例胃癌根治手术后切除的新鲜胃癌组织及其对应的7例癌旁组织（距肿瘤边缘5cm以上），通过即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）技术验证基因芯片准确性，并筛查在胃癌中差异表达的microRNA，对其进行靶基因预测分析及GO、Pathway富集分析。
为之后的研究提供理论依据。
结果：1、基因芯片结果显示，共有1500余个miRNA检测到表达，其中有17个出现明显上调，19个出现明显下调。
2、通过qRT-PCR 对miRNA芯片验证，证实miR-31-3p、miR-147b、miR-6736-3p表达上调（p＜0.05），miR-3065-5p、miR-3921表达下调（p＜0.05），与芯片检测结果一致。
3、miR-31-3p、miR-6736-3p、miR-3065-5p、miR-3921在TargetScan、miRDB数据库中均有靶基因交集，并且这些差异表达ImiRNA参到了对异源物质代谢及化学致癌等病理生理过程当中。
结论：1、通过基因芯片技术获得了胃癌中差异表达miRNA表达谱，其中miR-3921、miR-147b、miR-3065-5p、miR-31-3p、miR-6736-3p 存在明显差异表达，可能在胃癌的发生发展中起着重要作用。
miRNA在蛋白质表达控制中的应用
miRNA在蛋白质表达控制中的应用蛋白质是细胞内的重要功能分子，其表达水平的调控对于维持正常的生物学过程至关重要。
过去，科学家主要通过调控转录过程来控制蛋白质表达。
然而，随着科技的发展，研究人员逐渐认识到microRNA （miRNA）在蛋白质表达调控中的重要作用。
miRNA是一类由RNA分子组成的非编码小分子，可以通过与靶基因mRNA结合来抑制其翻译或降解，从而影响蛋白质的表达水平。
本文将详细讨论miRNA在蛋白质表达控制中的应用。
1. miRNA的发现和作用机制miRNA最早于1993年被发现，进一步的研究表明它们在调控基因表达方面起着关键作用。
miRNA通常由RNA聚合酶Ⅱ合成，形成一个短链RNA前体分子。
通过Dicer酶的作用，这个前体分子进一步裁剪成约20-22个核苷酸的成熟miRNA。
成熟的miRNA通过与靶基因的3'非翻译区（3'UTR）结合，可以抑制靶基因的翻译或促进其降解。
2. miRNA在正常细胞中的调控作用miRNA在正常细胞中扮演着重要的调控角色。
研究发现，miRNA参与调节细胞的增殖、分化和凋亡等生命过程。
例如，在胚胎发育中，miRNA可以促进胚胎干细胞的定向分化，使其形成不同的器官和组织。
此外，miRNA还可以参与调控细胞周期和细胞凋亡，从而维持正常的细胞功能。
3. miRNA在疾病中的功能和应用miRNA的异常表达与多种疾病的发生和发展密切相关。
研究人员发现，在多种肿瘤类型中，miRNA的表达模式明显异常。
有些miRNA 被称为“肿瘤抑制miRNA”，其低表达与肿瘤的恶性程度相关。
另一些miRNA则被称为“肿瘤促进miRNA”，其高表达与肿瘤的发生和转移有关。
通过调节肿瘤相关miRNA的表达水平，研究人员可以干预肿瘤的发展。
此外，miRNA还被发现与心脏病、肝病、神经系统疾病等多种疾病的发生发展密切相关。
4. miRNA作为治疗靶点的前景miRNA调控蛋白质表达的特点使其成为治疗疾病的潜在靶点。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
特 异 性 逆 转 录 引 物 为 ： ｍｉＲ－１７－５ｐ： ５′－ ＣＣＡＴＡＡＴＧＣＴＡＣＡＡＧＴＧＣＣ－３′； ｍｉＲ－２１： ５′－ＣＡＧＣＣ－ ＣＡＴＣＧＡＣＴＧＧＴＧ－３′； Ｕ６： ５′－ＡＡＣＧＣＴＴＣＡＣＧＡＡＴＴ－ ＴＧＣＧＴ－３′。
采 用 ＳｃａｎＡｒｒａｙＴＭＥｘｐｒｅｓｓ１．０ （ ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ） 扫 描 仪进行扫描， 扫描强度为 １００％， 光电倍增管（ ＰＭＴ） 增益为 ８０％， 扫描精度为 １０μｍ。扫描所得图像经 ＳｃａｎＡｒｒａｙ３．０（ ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ） 软件进行处理分析。数据 经 总 体 归 一 化 和 对 数 转 化 后 用 Ｃｌｕｓｔｅｒ３．０ （ Ｓｔａｎｆｏｒｄ
中国肿瘤 ２００７ 年第 １６ 卷第 ９ 期
能会对人类基因组中近 ３０％的基因发挥调控作用［５］。 但关于 ｍｉＲＮＡ 的表达模式、生物学功能、作用机制 等目前认识还不是十分清楚。因此， 了解肿瘤中 ｍｉＲＮＡ 的表达水平可以帮助我们认识 ｍｉＲＮＡ 的调 节机制、ｍｉＲＮＡ 在细胞中的生物学行为以及 ｍｉＲＮＡ 与肿瘤或其它疾病间的关系。本实验中我们设计并 制备了 ｍｉＲＮＡ 表达谱的寡核苷酸芯片， 利用其快 速、平行、高通量的检测特点， 分析了六种不同器官 肿瘤细胞系中 ２０６ 个 ｍｉＲＮＡ 的表达水平特点， 为进 一步研究 ｍｉＲＮＡ 的生理功能以及 ｍｉＲＮＡ 与肿瘤的 关系奠定了基础。
１ 材料与方法
１．１ 细胞系 本实验中所用六种人类肿瘤细胞系， 均为本实
验室保存， 分别为 ＨｅＬａ（ 人宫颈癌上皮细胞） ， Ｋ５６２ （ 人慢性髓细胞性白血病细胞） ， ＥＳ－２（ 人卵巢透明细 胞癌） ， ＭＣＦ－７（ 人乳腺癌 细 胞 ） ， ＨＴ－２９（ 人 结 肠 腺 癌 细胞） ， Ａ５４９（ 人肺腺癌细胞） 。所有细胞系均在 ５％ ＣＯ２ 条件下， 用含有 １０％胎牛血清的适合培养基培养。 １．２ ｍｉＲＮＡ 芯片的制备
最 近 新 发 现 一 类 长 度 为 １８￣２６ 个 核 苷 酸 （ ｎｕ－ ｃｌｅｏｔｉｄｅ， ｎｔ） 的 小 非 编 码 ＲＮＡ， 被 称 为 ｍｉｃｒｏＲＮＡ （ ｍｉＲＮＡ） ， 它们在生物个体发育和细胞动态平衡中
收稿日期： ２００６－ １１－ １３； 修回日期： ２００７－ ０３－ ０９ 通讯作者： 汤 华
所用的 ２１０ 个寡核苷酸探针为 ｍｉｒＶａｎａＴＭ ｍｉＲ－ ＮＡ Ｐｒｏｂｅ Ｓｅｔ 试剂盒（Ａｍｂｉｏｎ）， 其中 ２０６ 个与已知的 人类和小鼠 ｍｉＲＮＡ 序列互补， ４ 个为阳性对照。３× ＳＳＣ 点样缓冲液溶解探针至 ５０μＭ， 用 ＳｐｏｔＡｒｒａｙＴＭ２４ 基 因 芯 片 点 样 仪 （ ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ） 印 制 于 ＳｕｐｅｒＣｈｉｐＴＭ Ⅰ（ ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ） 玻片表面， 制成 ｍｉＲＮＡ 寡核苷酸芯 片。每次杂交前进行水合、干燥等点样后处理。 １．３ ｍｉＲＮＡ 的准备、标记与杂交
ＰＣＲ 引 物 分 别 为 ： ｍｉＲ－１７－５ｐ： ５′－ＴＧＴＣＡＡＡＧＴ－ ＧＣＴＴＡＣＡＧＴＧ－３′， ５′－ＣＣＡＴＡＡＴＧＣＴＡＣＡＡＧＴＧＣＣ－ ３′； ｍｉＲ－２１： ５′－ＧＣＴＴＡＴＣＡＧＡＣＴＧＡＴＧＴＴＧＡＣＴＧ－３′， ５′－ＣＡＧＣＣＣＡＴＣＧＡＣＴＧＧＴＧ－３′； Ｕ６： ５′－ＣＴＣＧＣＴＴＣＧ－ ＧＣＡＧＣＡＣＡ－３′， ５′－ＡＡＣＧＣＴＴＣＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣＧＴ－３′。
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： ［ Ｐｕｒｐｏｓｅ］ Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ） ｉｎ ６ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｈｕ－ ｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｒｏｍ ｖａｒｉｏｕｓ ｏｒｇａｎｓ． ［ Ｍｅｔｈｏｄｓ］ Ｔｈｅ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｓｐｏｔｔｉｎｇ ２１０ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｗｈｉｃｈ ｃｏｎｔａｉｎｓ ２０６ ｐｒｏｂｅｓ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｏｕｓｅ ｍｉＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ４ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｌｉｇｏｓ． ＭｉＲＮＡｓ ｆｒｏｍ ＨｅＬａ，ＭＣＦ－７，Ａ５４９，ＨＴ－２９，ＥＳ－２，Ｋ５６２ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｎｄ ｌａｂｅｌｅｄ ｗｉｔｈ Ｃｙ３ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｍｉＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ． Ｔｈｅｎ， ｓｌｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｓｃａｎｎｅｄ ｂｙ Ｓｃａ－ ｎＡｒｒａｙＴＭＥｘｐｒｅｓｓ１．０ ａｎｄ ｉｍａｇｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＳｃａｎＡｒｒａｙ３．０ ａｎｄ Ｃｌｕｓｔｅｒ３．０． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎ－ ｆｉｒｍｅｄ ｂｙ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ． ［ Ｒｅｓｕｌｔｓ］ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ６ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ａｎｄ １１５ ｍｉＲＮＡｓ ｗｅｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ， ａｎｄ ９１ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｍｉＲＮＡｓ ｈａｄ ｎｏ ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ， ａｍｏｎｇ ｗｈｉｃｈ ｍｉＲ－２１ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ， ｗｈｉｌｅ ｍｉＲ－１２５ｂ， ｌｅｔ－７ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓｅｄ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｌｅｖｅｌ． Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ－１７－５ｐ ａｎｄ ｍｉＲ－２０ａ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｃｌｕｓｔｅｒ， ａｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ＥＳ－２ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｃｅｌｌｓ． ＨｅＬａ ａｎｄ ＭＣＦ－７ ｗｅｒｅ ｌｏｃａｔｅｄ ｏｎ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｂｒａｎｃｈ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｉｎｉｓ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓ． ［ Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］ Ｉｔ ｉｓ ｆｅａｓｉｂｌｅ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｍｉＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｗｉｔｈ ｍｉ－ ｃｒｏａｒｒａｙｓ， ｍｉＲＮＡ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｒｒａｙ； ｍｉｃｒｏＲＮＡ； ｎｅｏｐｌａｓｍｓ； ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅ
７１４
发挥重要作用。而在人类肿瘤中某些 ｍｉＲＮＡ 发生突 变或表达水平异常［１］， 提示这类小的核酸分子可能发 挥类似癌基因或抑癌基因的作用， 参与人类肿瘤的 发 生 、发 展［２］。 人 类 基 因 组 中 已 发 现 ３００ 多 种 ｍｉＲ－ ＮＡ， 而 且 预 测 在 人 体 中 实 际 数 目 会 更 多［３， ４］， 它 们 可
ＭｉｃｒｏＲＮＡ在六种不同器官肿瘤细胞系中
的差异表达
马卓娅， 汤 华， 李 欣， 刘 民， 吴海东， 王 晶
（ 天津市生命科学中心实验室， 天津医科大学， 天津 ３０００７０）
摘 要： ［ 目的］ 利用生物芯片技术分析 ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ ｍｉＲＮＡ） 在六种不同器官肿瘤细胞系中 ｍｉ－ ｃｒｏＲＮＡ（ ｍｉＲＮＡ） 的表达差异。［ 方法］ 将 ２１０ 个（ ２０６ 个 ｍｉＲＮＡ， ４ 个阳性对照） 与已知人类和小 鼠 ｍｉＲＮＡ 互补的序列作为探针， 点于玻片上制备寡核苷酸芯片。提取肿瘤细胞（ ＨｅＬａ、ＭＣＦ－７、 Ａ５４９、ＨＴ－２９、ＥＳ－２、Ｋ５６２） 的 ｍｉＲＮＡ， 用 荧 光 染 料 Ｃｙ３ 标 记 ， 并 与 制 备 好 的 芯 片 杂 交 。 用 Ｓｃａ－ ｎＡｒｒａｙＴＭＥｘｐｒｅｓｓ１．０ 扫描仪扫描荧光信号， 采用 ＳｃａｎＡｒｒａｙ３．０ 和 Ｃｌｕｓｔｅｒ３．０ 软件分析处理扫描结 果。并用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 和 ＲＴ－ＰＣＲ方法对芯片检测结果进行验证。 ［ 结果］ 芯片检测到在六种不 同器官肿瘤细胞系中， 发现 １１５ 种 ｍｉＲＮＡ 存在差异， ９１ 种 ｍｉＲＮＡ 没有明显差异。其中， ｍｉＲ－２１ 在六种肿瘤细胞表达水平均较高， ｍｉＲ－１２５ｂ 表 达 水 平 均 较 低 ， ｌｅｔ－７在 六 种 细 胞 系 中 表 达 水 平 较 低。ｍｉＲ－１７－５ｐ 和 ｍｉＲ－２０ａ 呈集簇表达， 在卵巢肿瘤 ＥＳ－２细胞系中的表达水平高于其它细胞， 乳 腺肿瘤细胞系 ＭＣＦ－７和宫颈癌细胞系 ＨｅＬａ 的 ｍｉＲＮＡ 的表达谱聚为一类。［ 结论］ 应用生物芯 片技术检测细胞中 ｍｉＲＮＡ 的表达差异谱是可行的， ｍｉＲＮＡ 可能参与肿瘤的发生发展。 关键词： 寡核苷酸芯片； ｍｉｃｒｏＲＮＡ； 肿瘤； 表达谱 中图分类号： Ｒ７３－３５＋４ 文献标识码： Ａ 文章编号： １００４－ ０２４２（ ２００７） ０９－ ０７１４－ ０４
１５％非 变 性 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 验 证 扩 增 产 物 大 小， ＬａｂＷｏｒｋｓ４．０ Ｉｍａｇｅ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｏｆｔ－ ｗａｒｅ 软件进行定量及数据处理。
２结果
２．１ ｍｉＲＮＡ 抽提和纯化 六 种 肿 瘤 细 胞 系 富 集 ｍｉＲＮＡ 的 Ａ２６０／Ａ２８０ 的 值
Ｄｉｆｆｅｒ ｅｎｔｉａｌ Ｅｘｐｒ ｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒ ｏＲＮＡ ｉｎ ６ Ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｌｉｎｅｓ ｆｒ ｏｍ Ｖａｒ ｉｏｕｓ Ｏｒ ｇａｎｓ
ＭＡ Ｚｈｕｏ－ｙａ， ＴＡＮＧ Ｈｕａ， ＬＩ Ｘｉｎ， ｅｔ ａｌ．
（Ｔｉａｎｊｉｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００７０， Ｃｈｉｎａ）