实验7植物细胞骨架观察
实验 细胞骨架的显示及观察
实验4 细胞骨架的显示及观察姓名：李思露学号：131140040一、实验目的1.掌握用考马斯亮蓝R250染色观察动物和植物细胞骨架的原理和方法。
2.了解免疫荧光法检测细胞成分的原理和方法。
二、实验原理1.细胞骨架：指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微管（microtubule，MT）、微丝（microfilament，MF）、中间纤维（intermediatedfilament，IF）。
2.微管微管是细胞内由微管蛋白形成的直径约呈放射状向胞质四周扩散，主要确定膜性细胞器的位置和作为膜泡运输的导管。
微管蛋白有α和β两种。
αβ异二聚体沿纵向聚合成丝，原丝成环状排列形成微管的壁。
微管不稳定，对低温（冷冻）、高压等物理因素及秋水仙素（微管断裂剂）等化学因素敏感。
紫杉醇可以和微管蛋白多聚体结合，抑制微管解聚。
3.微丝：真核细胞内是主要由肌动蛋白（actin）组成的直径为5～7nm的骨架纤丝。
主要分布在细胞质膜的内侧，作用是确定细胞表面特征、并与细胞运动、收缩、内吞等功能有关。
脊椎动物肌动蛋白分为α、β和γ三种类型，不同种类细胞中肌动蛋白组成不同。
肌动蛋白单体为球形，依次连接成链，两串肌动蛋白链互相缠绕扭曲成一股微丝。
细胞松弛素B为微丝断裂剂。
4.中间纤维：直径介于微丝和微管之间（7~11nm）、由多种不同蛋白组成的细胞骨架（1）了解细胞骨架与细胞各种功能行使之间的关系。
（2）了解理化因素是否通过影响细胞骨架对细胞功能产生影响，以便趋利避害。
（3）鉴定发育中的细胞及肿瘤的来源。
6. 显示细胞骨架的常用方法：考马氏亮蓝染色法、免疫荧光染色法、鬼笔环肽标记法。
（1）考马斯亮蓝染色法原理及特点原理：用去垢剂Triton X-100处理细胞适宜时间，可以溶解膜脂，并与大部分非骨架蛋白疏水区结合而将其溶解，剩下的纤维状细胞骨架蛋白比较稳定而不被溶解，然后用蛋白染料考马斯亮蓝染色即可显示其结构。
植物细胞骨架的光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察
首先，我们需要准备植物细胞标本。
可以选择一片老化或短时处理的叶片或根尖作为实验材料。
将其取下并迅速固定在伊红溶液中，避免细胞变形。
接下来，需要进行细胞固定和染色。
将固定好的细胞标本移至PBS （磷酸缓冲盐溶液）中进行洗涤，以去除残余的伊红溶液。
然后，在细胞中加入透明质酸，将其中和离子对骨架的结合，使骨架暴露出来。
接着，利用荧光染色剂如荧光素-鲍曼氏染液或Phalloidin染液来染色微丝以及微管。
准备好细胞标本后，我们可以将其放置在显微镜下进行观察。
在显微镜镜头下，可以看到细胞内微丝和微管形成的骨架结构。
微丝主要分布在细胞质内，形成一种网状结构，其中包括原生质流动的微丝束。
而微管主要分布在细胞中心，形成一个网络，并且辐放到细胞外围。
进一步观察时，可以调节显微镜的焦距和光源强度，以获得更清晰的图像。
可以使用高倍目镜观察细胞骨架的细节，并使用显微镜移动台来调整视野。
此外，还可以利用荧光显微镜技术，通过筛选不同波长的荧光滤光片，进一步突出特定荧光标记的细胞结构。
通过光学显微镜观察植物细胞骨架，可以更深入地了解细胞结构和功能。
通过观察微丝和微管的分布和连通性，可以了解细胞形态的维持和改变，细胞分裂以及细胞运动等生理过程。
此外，还可以观察植物细胞骨架在应对外界环境刺激，如生物逆境和激素信号的响应中的作用。
这些研究可以为揭示细胞生物学的本质和发展新的疾病治疗方法提供重要的参考。
8.细胞骨架和胞间连丝
植物细胞骨架和胞间连 丝的观察
一、植物细胞骨架的光学显微镜观察 （一）实验目的 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光 学显微镜下细胞骨架的网状结构。 （二）实验原理 细胞骨架定义： 狭义的细胞骨架（cytoskeleton）概念是指真核细胞中的蛋 白纤维网络结构。它所组成的结构体系称为 “细胞骨架系 统”，与细胞内的遗传系统、生物膜系统、并称 “细胞内的 三大系统”。包含三类蛋白纤丝？？
植物细胞用适当浓度的 TritonX—100 处理 后， 可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白 质却保存完好。 考马斯亮蓝 R250 (Coomassie brilliant blue R250) 是一种蛋白质染料，处理后的材料用考 马斯亮蓝 R250 染色后，用光学显微镜观察， 可以见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。
（二）实验材料、用品 1、材料：新鲜的红辣椒果实
2、仪器：显微镜，载玻片，镊子，玻璃吸 管，刀片，碘液，红墨水等。
（三）实验步骤
剪取一小块红辣椒，用刀片小心刮去果肉，留下一 层极薄露白的表皮，分别进行以下操作： 1. 放在载玻片上，滴一滴水，盖上盖玻片后即可观察。 镜检时光线不要太亮。 2. 加碘液染色制片观察。在高倍镜下，可以看见其表 皮是由不太规则的细胞群构成的，细胞中有着淡黄色 的细胞质。细胞壁很厚，着深黄色，壁上有小孔（纹 孔），孔里有细胞质丝穿过。 3. 用红墨水染色30 min，然后吸去多余的染料，加水封 片镜检，可见其细胞质被染成粉红色。也可观察到纹 孔和胞间连丝。
（四）实验结果
Байду номын сангаас
胞间连丝 连丝微管
胞间连丝
（五）实验报告
1 描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。 2 描绘所观察到的红辣椒细胞胞间连丝图。
植物细胞骨架的显示及光镜观察实验原理及步骤
实验五植物细胞骨架的显示及光镜观察
一、原理：
细胞内由微丝、微管、中间纤维等交织形成一个十分复杂的立体网络
结构。
它们对于细胞形状的保持、细胞内物质运输、细胞运动、细胞内各结构相
对位置的固定都有重要作用，故而称为细胞骨架。
细胞骨架在通常固定条件下不稳定，如低温、高压、酸处理等。
当采
用适当的手段，如M-缓冲液洗涤细胞，可以提高细胞骨架的稳定性，戊二醛在
室温下固定能较好的保存细胞骨架的成分，另外，Triton X-100处理能抽取掉
一部分杂蛋白，可使骨架成分显现的更加清晰。
微丝、微管、中间纤维等都是直径很小的结构。
最大的单根微管才
25nm左右，只能在电镜下才能看见，目前研究细胞骨架的主要方法是应用高压
电镜或免疫荧光显微技术，本实验用普通光镜观察到细胞骨架，是因为骨架纤维
成束分布，结构经染色以后，有夸大作用。
由于细胞经Triton X-100提取剩下
的主要成分是细胞骨架成分，使得显现等价清晰。
二、药品及器材：
材料：洋葱鳞茎
器材：显微镜、烧杯、吸管、镊子、载片、盖片
试剂： M-缓冲液（配制方法如下）：
咪唑 2.90g
KCl 3.70g MgCl2
0.012g
EGTA 0.38g EDTA
0.042g
巯基乙醇 0.086ml 加水到 1000 ml 6mM磷酸缓冲液
KH2PO4 0.74g。
实验七细胞骨架的观察考马斯亮兰R染植物细胞的微丝
考马斯亮兰R250染植物细胞的微丝
Triton X-100 (聚乙二醇辛基苯基醚)作用： 非离子去垢剂
适当浓度的Triton X-100，破坏膜结构、可使细胞膜溶解，而细 胞质中的细胞骨架系统可被保存； M－缓冲液 和磷酸缓冲液作用:
清洗组织细胞、稳定骨架蛋白，维持细胞的渗透压； EDTA（乙二胺四乙酸）和EGTA（乙二醇双醚四乙酸）作用：
洋葱内表皮细胞骨架的考马斯亮兰染色结果 洋葱鳞茎外层与内层的内表皮细胞比较（放大倍数10×20）
左：鳞茎外层（对照）；右鳞茎内层
前者可螯合大部分金属离子；后者专一性螯合Ca2＋，主要是 高浓度的Ca2＋可是微管解聚，因此加入EGTA来降低Ca2＋的浓度； 戊二醛作用：
良好的固定剂，使细胞结构保持它原有状态； 考马斯亮兰作用：
非专一性结合蛋白质，使蛋白着色（蓝色）。
实验的关键：
Triton X-100 抽提处理的时间很关键，如 果处理时间太短，没有抽提掉细胞器膜上的蛋白， 会造成很深的背景颜色，干扰细胞骨架的观察； 如果处理时间太长，会破坏骨架蛋白使骨架纤维 断裂。
一、实验目的
掌握观察植物细胞内微丝的方法。 了解观察动物细胞内微丝的方法。
二、实验原理
细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网格结构， 安组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和 中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、 运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。
光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1％ Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细 胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮兰 R250染色，使得细胞质中细胞骨架得以清晰可见。
盐溶液（PBS，pH6.8），
0.2％考马斯
植物细胞骨架的显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察一、【实验目的】1、掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
2、对洋葱鳞茎内表皮细胞进行染色，观察其细胞骨架。
二、【实验原理】用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、【实验试剂】1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；四、【实验步骤】（Ⅰ）1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中，使其下沉(约1-2min)；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗3次，每次3-5min；4、3%戊二醛固定30min5、pH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次3-5min；6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
注意事项：1、用去垢剂 TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应控制在30min 左右；2、每一次加液或染色后，应用 PBS 洗2 次，并用滤纸吸干。
3、加 3%戊二醛溶液对细胞骨架和细胞形态的维持十分重要，固定时间应不低于20min。
4、在用考马斯亮蓝染色的时候应该注意把洋葱鳞茎表皮摊开,使其染色均匀.利于以后观察.5、在染色之前用滤纸吸去缓冲液再进行染色或许观察到的效果更好.6、在观察时,很清楚的看到细胞核的分布,但细胞骨架有点模糊,不过也可以观察到它的基本轮廓及其分布的网状结构.四、【实验步骤】（II）1、取洋葱内皮1cm 左右2、置于含PBS 液的载玻片上3、湿润后，吸去PBS4、加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min5、吸去缓冲液，加3%戊二醛-PBS溶液，固定30min6、加PBS 洗2 次，共3min7、加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min8、用PBS 洗2 次，共2min，吸干，加盖玻片，于显微镜下观察四、【实验步骤】（III）1、取内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。
细胞骨架观察实验报告
细胞骨架观察实验报告实验目的：通过显微镜观察细胞骨架的结构和功能，深入了解生命科学中的重要概念。
实验材料和方法：植物细胞片、动物细胞片、荧光显微镜、细胞稀释液、甲醛、异丙醇、甲基绿、甲醛溶液、异丙醇溶液、PBS缓冲液、枪形笔、离心机、显微镜、涂片机、湿度调节器。
将前一天收集好的细胞培养物放入50mL离心管中。
将细胞培养物进行离心，速度为3000转/分钟，时间为5分钟。
将上清液弃去，留取细胞沉淀。
添加1mL PBS缓冲液并混匀。
在取出的细胞沉淀中加入3mL甲醛异丙醇溶液进行固定，固定时间为15-30分钟。
取出后在涂片机上进行铺片。
在铺好的玻璃片上滴加甲基绿溶液，静置15分钟，然后漂洗去荧光剂。
用PBS缓冲液洗涤3次，每次洗涤1分钟以上。
将玻璃片覆盖在玻璃载玻片上，放在调节好的荧光显微镜上进行观察。
实验结果：观察到了细胞骨架的结构。
细胞骨架是细胞内的一组基质蛋白，由微丝、中间纤维和微管三个部分组成。
在荧光显微镜下，我们可以看到其中的微丝会在不同时期产生不同的表现。
当细胞钙离子的浓度较高时，会细胞骨架的所有部分都产生显著的变形。
微管是细胞内比较长的蛋白纤维，是细胞分裂过程中必不可少的分子机制之一。
中间纤维是一种静止的形态，主要作用是连接细胞内的各个细胞结构，是维持细胞形态和结构的重要因素之一。
结论：通过本次实验，我们可以清楚地了解到细胞骨架作为生命科学领域内的重要概念，在细胞分裂和细胞形态维持方面起到了非常重要的作用。
通过深入观察细胞骨架的结构和功能，我们可以更好地了解生命科学的基本理念，同时也可以推动生命科学的进一步研究和发展。
大学课程《细胞生物学》实验教案--植物细胞骨架的光学显微镜观察
大学课程《细胞生物学》实验教案植物细胞骨架的光学显微镜观察一、实验目的掌握细胞染色的基本过程及非切片法制片技术，了解细胞骨架的结构，学会制作永久封片。
二、实验原理当用适当浓度的TritonX—100处理细胞时，因其非离子型表面活性剂的特性，可以除去可溶性蛋白质和脂类，而微丝束属不可溶性蛋白，就不会被TritonX—100破坏而保留在细胞中。
当用考马斯亮蓝R250染色时，在光学显微镜下通常能观察到以核为中心的纤维状骨架，在质膜下还能见到丝状骨架，骨架上常附着一些与膜运动、整合有关的蛋白质。
考马斯亮蓝R250并不是特异地显示微丝，但由于有些细胞骨架纤维如微管等在该实验条件下不够稳定，又因有些类型的纤维太细而在光学显微镜下无法分辨，因此看到的是由微丝组成的纤维束，直径约在40nm左右。
三、实验材料新鲜洋葱鳞状叶。
四、实验器材普通光学显微镜，50ml烧杯，滴管，试剂瓶，载玻片，盖玻片，镊子，染色板，吸水纸，擦镜纸。
五、实验药品1．M—缓冲液：所含各成分终浓度为50mmol／L眯唑，50mmol／LKCL，0.5mmol／LMgCl2，lmmol／LEGTA(乙二醇双(α—氨基乙基》醚四乙酸)，0.1mmol／L EDTA，lmmol／L巯基乙醇或二硫苏糖醇<DTT)。
lmol／L HCl调pH到6.82 0.01mol/L磷酸缓冲液(pH 6.8)用0.2mol/L磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲液稀释配制其中磷酸盐缓冲液配法：0.2mol/LNa2HPO449ml0.2mol/LNaH2PO45lml3. 1％TrltonX—100，用M—缓冲液配制。
4．0.2％考马斯亮蓝R250。
配制用的溶剂为：甲醇：冰醋酸:水(46.5：7：46.5)。
·5. 3％戊二醛溶液，用9.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)配制6. 50％，70％，95％乙醇。
7. 叔丁醇8. 正丁醇9. 二甲苯。
10.中性树胶。
植物细胞骨架的光学显微镜观察实验报告
植物细胞骨架的光学显微镜观察实验报告
1.了解植物细胞的组成和结构；
2.学习利用光学显微镜观察植物细胞；
3.观察和了解植物细胞骨架的结构和作用。
实验仪器：
光学显微镜、载玻片、镊子、荧光染料。
实验步骤：
1.将新鲜的姜或洋葱切成小片，用镊子将其轻轻夹在载玻片上；
2.将荧光染料滴在载玻片上，让荧光染料渗透进入细胞内；
3.用眼镜观察载玻片下的姜或洋葱片，找到一块合适的细胞及其骨架，调节显微镜的倍镜和焦距进行观察；
4.观察并记录该细胞骨架的形态、结构和分布情况，并拍摄照片。
实验结果：
经过观察和研究，我们发现植物细胞内部有一种关键的结构——细胞骨架。
植物细胞骨架主要由三个部分组成，分别是微丝、微管和中间纤维。
其中微丝是最细的部分，通过它们细胞可以保持形状和变形。
微管是较大的结构，可以支持细胞的分裂和胞吐作用。
中间纤维为肌动蛋白纤维和中间丝细胞内质网细胞丝组成的混合物，主要起到支撑和维持细胞结构稳定的作用。
实验结论：
通过本次实验，我们深入了解了植物细胞的组成和结构，并学会了如何用光学显微镜观察和研究植物细胞骨架。
植物细胞骨架的形态、结构和分布情况，对深入研究细胞生命活动的各个方面都有较大的帮助和意义。
植物细胞骨架的光学显微观察
10×40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构 确实由线性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。 细胞边缘骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向 的纤维形成的细胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤 维通过纵向的纤维相连。相邻细胞有纤维穿过胞 间的细胞壁。调节显微镜焦距可观察到细胞不同 横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维 立体结构的形式分布在整个细胞内。
三、实验用品 (一)器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻 片、盖玻片、镊子。 (二)试剂： 1．M一缓冲液：50mmol／L咪唑，50mmol／L KCl， 0.5 mmol／L MgCl2，lmmol／L EGTA(乙二醇双(a-氨 基乙酸)醚四乙酸)，0.1mmol／L EDTA，lmmol／L巯 基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)。 2．6mmol／L PH6．8磷酸缓冲液。 3．1％Triton X-100，用M-缓冲液配。 4．0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂是甲醇46.5ml， 冰乙酸7ml，蒸馏水46.5ml。 5．3％戊二醛，用6mmol／L磷酸缓冲液(PH6．8)配 制。 6．5％、7％、95％乙醇。 7．叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 (三)材料：洋葱鳞茎。
实验原理实验原理植物细胞骨架的观察植物细胞骨架的观察细胞骨架微观中间纤维实验原理实验原理植物细胞骨架的观察植物细胞骨架的观察显示细胞骨架的非特异性方法coomassiebluetritonx100可溶解抽提细胞中的蛋白质和脂质但不破坏细胞骨架系统
五、植物细胞骨架的光学显微观 察
一、实验目的 通过光学显微镜观察细胞骨架的结构， 并掌握显示植物细胞骨架的方法及原理。 二、实验原理 细胞骨架是指真核细胞中与保持细胞形 态结构和细胞运动有关的纤维网络。包括微 管、微丝和中间丝。
四、实验方法 (一)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片温于装 有PH6．8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。 (二)吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X-100处理20-30分钟。 (三)吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，，每次10分 钟。 (四)3％戊二醛固定0.5-1小时(对照组开始处理)。 (五)PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。 (六)用0.2％考马斯亮蓝R250染色20-30分钟。 (七)用蒸馏水洗1-2次，材料置于载玻片上，加盖玻片， 即可镜检。 (八)如作永久制片，可使样品顺序通过如下试剂：50％ 乙醇，70％乙醇，95％乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液 (1：1)，每次5-10分钟，或正丁醇→正丁醇→二甲苯→二 甲苯，每次5-10分钟。然后捞取样品，平展于载玻片上， 中性树胶封固。
植物细胞骨架的显示与观察
植物细胞骨架的显示与观察
１．洋葱鳞茎内表皮要选取新鲜的。 ２．材料在载玻片上要确保展平，并且
是单层细胞。 ３．要保证材料充分和药品接触。
植物细胞骨架的显示与观察
作业：实验报告，观察到的图像要画图。
Hale Waihona Puke 植物细胞骨架的显示与观察观察时，先用低倍镜观察，可以看见细胞的核 区及细胞质中的细胞骨架成份被染成兰色，成束 的细胞骨架成份从核周围呈现放射状地向细胞质 中延伸，找到典型的图像后，转用油镜细心观察 ，注意调节显微镜的工作状态，尽可能达到最佳 分辨效果和清晰度，并仔细地调节细调旋钮，在 立体细胞的不同水平面进行观察。这时候，可以 看到细胞骨架结构的立体情况，并在细胞膜下见 到由很细的纤维构成的网格结构，此外，还可以 明显观察到横穿细胞壁的胞间连丝存在的部位。
植物细胞骨架的显示与观察
根据细胞骨架成份的蛋白质性质及其抗去垢 剂抽提的特点，用戊二醛在室温下固定细胞后， 经非离子型去垢剂TritonX-100处理除去膜结构 和可溶性蛋白质，留下抗抽提的细胞骨架成份， 用考马斯亮兰R250染色显示。
植物细胞骨架的显示与观察
实验目的 １．加深了解细胞骨架成份的化学性质、形态
分布与功能。 ２．掌握用考马斯亮兰显示细胞骨架系统的原
理与方法。
植物细胞骨架的显示与观察
１．仪器、用具 显微镜、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子
２．材料 新鲜的洋葱鳞茎内表皮
３．试剂 （１）3%戊二醛固定液 （２）1%TritonX-100抽提剂 （３）0.2%考马斯亮兰R250染色液
植物细胞骨架的显示与观察
细胞骨架(cytoskeleton）是真核细胞中由蛋白质聚合而成
的三维的纤维状网架体系。不仅维持细胞形态，在细胞分裂、 细胞生长、细胞物质运输、细胞壁合成等许多生命活动中都 具有非常重要的作用。发现较晚，主要是因为一般电镜制样 采用低温固定，而细胞骨架会在低温下常解聚。直到20世纪 60年代后，采用戊二醛常温固定，才逐渐认识到细胞骨架的 客观存在。细胞骨架一般包括微丝、微管和中间纤维，广义 的细胞骨架还包括核骨架、核纤层和细胞外基质，形成贯穿 于细胞核、细胞质、细胞外的网络结构。
细胞骨架的观察实验指导
细胞骨架的观察实验指导实验材料：1.细胞培养物2.细胞培养培养基3.PBS（磷酸盐缓冲盐溶液）4.4%多聚甲醛5. 0.1% Triton X-100 溶液6.1%BSA溶液7.细胞骨架特异抗体（如抗微管抗体和抗中间丝抗体）8.辅助抗体（如荧光标记的二抗）9.荧光染料（如荧光素-鳦绿或苏木精红）10.封片用溶剂（如磁性切片载玻片和硝酸盐封片剂）实验步骤：1.倒置细胞培养物：a.制备细胞培养物并放置在合适的培养箱中。
b.取出培养箱中的细胞培养物，小心地倒置在培养皿或玻璃片上。
确保培养物均匀地覆盖在底部。
2.固定细胞：a.慢慢地向细胞培养物中加入4%多聚甲醛，使浓度达到最终浓度。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
3.渗透化细胞膜：a. 用0.1% Triton X-100 溶液渗透化细胞膜，在室温下孵育5分钟。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
4.阻止非特异结合：a.使用1%BSA溶液阻止非特异结合，将其加入细胞上，孵育30分钟。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
5.免疫反应：a.加入特异性抗体（如抗微管抗体或抗中间丝抗体），孵育1小时。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
6.加入荧光标记的二抗：a.添加荧光标记的二抗，与特异抗体结合，孵育1小时。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
7.染色：a.使用适当的荧光染料（如荧光素-鳦绿或苏木精红）进行细胞染色。
按需求用荧光染料染色。
b.使用PBS洗涤细胞3次，每次洗涤5分钟。
8.封片：a.倒置细胞培养物到切片载玻璃片上。
b.轻轻地用硝酸盐封片剂将细胞培养物封盖，并放置在室温下干燥。
9.观察并记录：a.将封片放置在显微镜台上。
b.使用荧光显微镜观察细胞骨架。
c.使用相机或图像捕获软件记录观察到的细胞骨架结构。
实验注意事项：1.细胞处理和操作过程中要保持洁净，避免细菌和污染物的干扰。
2.细胞固定和渗透化过程中要严格控制时间和温度，使得细胞组织得到最佳的处理效果。
观察细胞骨架实验报告
观察细胞骨架实验报告观察细胞骨架实验报告篇一：洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告吴若自然科学大类单周四 119 XX/11/17一、实验目的:1. 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法。
2. 认识细胞骨架的形态，联系细胞骨架的功能。
二、实验原理：细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中间纤维。
细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。
本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。
三、操作步骤：1. 取洋葱内皮表层膜1cm2(可多取两片)左右置于含2mlPBS液的小皿中湿润5min后，吸去PBS2. 向小皿中加入1.5mlTritonX-100(1%)，浸没20min后，吸走TritonX-1003. 向小皿中加入2mlMbuffer浸没置于摇床上5min，重复两次后，吸走Mbuffer4. 向小皿中加入105ml戊二醛（3%），浸没30min后，吸走戊二醛5. 向小皿中加入2mlPBS，浸没置于摇床上5min，重复两次6. 取出表皮平铺于载玻片上，滴加100微升，静置100min后吸取染料7. 向表面滴加蒸馏水洗涤后用纸巾洗去液体，重复两次8. 盖上盖玻片，擦去残余液体，用光学显微镜观察并拍照记录四、实验结果：如图所示，洋葱内表皮细胞轮廓清晰可见，细胞壁及其分界明显可见。
可观察到线性纤维交织而成的网状结构，同一细胞内各处骨架密集度不均匀，细胞核区域纤维较密集，蓝色较重。
调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
细胞生物计划实验报告
实验名称：细胞骨架观察与细胞融合实验一、实验目的1. 掌握制作植物细胞骨架装片的方法。
2. 在显微镜下观察植物细胞的骨架结构，对微管、微丝、中间丝进行识别和区分。
3. 了解细胞融合的原理和过程，初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。
二、实验原理1. 细胞骨架是细胞内的一种网状结构，由微管、微丝和中间丝组成，对维持细胞形态、细胞运动、细胞分裂等生命活动具有重要意义。
2. 细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。
化学融合方法一般使用聚乙二醇（PEG）诱导细胞在体外进行融合。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物细胞（如洋葱表皮细胞）- 动物细胞（如小鼠成纤维细胞）- 聚乙二醇（PEG）- PBS缓冲液- 联苯胺- 碘液- 显微镜- 载玻片、盖玻片、镊子、滴管、吸水纸等2. 实验仪器：- 显微镜- 超净工作台- 离心机- 恒温培养箱四、实验步骤1. 制作植物细胞骨架装片：a. 将洋葱表皮细胞制成悬液，滴加于载玻片上。
b. 将盖玻片轻轻覆盖在细胞悬液上，用吸水纸吸取多余液体。
c. 滴加稀碘液，用吸水纸从盖玻片另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。
d. 将载玻片放入显微镜下观察。
2. 细胞融合实验：a. 将小鼠成纤维细胞制成悬液，滴加于载玻片上。
b. 将盖玻片轻轻覆盖在细胞悬液上，用吸水纸吸取多余液体。
c. 将PEG溶液滴加于盖玻片上，静置5分钟。
d. 将载玻片放入显微镜下观察。
3. 细胞中过氧化物酶的显示：a. 将骨髓细胞制成悬液，滴加于载玻片上。
b. 将盖玻片轻轻覆盖在细胞悬液上，用吸水纸吸取多余液体。
c. 滴加联苯胺处理标本，观察细胞内过氧化物酶的反应。
4. 细胞凋亡的形态学检测与观察：a. 将细胞悬液制成涂片，滴加碘液染色。
b. 将涂片放入显微镜下观察细胞凋亡的形态学特征。
五、实验结果与分析1. 植物细胞骨架观察：a. 显微镜下观察到洋葱表皮细胞的细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、液泡、叶绿体等结构。
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实验7 植物细胞骨架观察
〔目的要求〕
了解动植物的细胞骨架的基本形态
〔实验原理〕
1%Triton X-100处理细胞，使95%以上的可溶性蛋白及全部脂质被抽提，而细胞骨架中的蛋白质却不被破坏，经固定和考马斯亮兰（非特异性蛋白质染料）染色后，胞质背景着色弱，有利微丝的显示，可在光镜下观察到由微丝组成的纤维束。
〔仪器材料〕
1、器材：恒温水浴锅、光学显微镜、小培养皿、小镊子、载玻片、盖玻片、吸管、50ml
烧杯、小烧杯、吸水纸、擦镜纸
2、材料：洋葱鳞茎
3、试剂：6mmol/L磷酸缓冲液（PBS）、1% Triton X-100，3%戊二醛、M缓冲液、0.2%
考马斯亮蓝R250染液
4、试剂配制：
（1）PBS（pH=6.5）
A液：NaH2PO4.2H2O 936mg/1000ml
B液：Na2HPO4.12H2O 2148mg/1000ml
工作液：A液68.5ml+B液31.5ml，NaHCO3调pH=6.5
（2）M缓冲液（pH=7.2）咪唑3.4克、KCl 3.71g、MgCl2.6H2O 101.65mg、EGTA(乙二醇双醚四乙酸)380.35mg、EDTA（乙二胺四乙酸）29.22mg、巯基乙醇0.07ml、甘油292ml，加蒸馏水至1000l。
HCl调pH为7.2。
（3）1% Triton X-100：Triton X-100 1ml、M缓冲液99ml。
（4）3%戊二醛：25%戊二醛12ml、6mmol/LPBS 88ml
（5）0.2%考马斯亮蓝R250染液：考马斯亮蓝R250 0.2g、甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml
〔内容方法〕
1、取材：洋葱内表皮，浸入装有PBS缓冲液的烧杯中，使其下沉处理3分钟
2、抽提：吸去PBS，加2ml 1% Triton X-100入烧杯中，置37℃恒温处理20分钟
3、冲洗：吸去Triton X-100，用M缓冲液轻轻洗2次，每次5分钟。
4、固定：加3%戊二醛固定20分钟。
5、冲洗：去固定液，PBS洗2次，每次5分钟
6、染色：考马斯亮蓝R250染液染色
7、制片：去染液，用蒸馏水洗2-3次，将标本放在载玻片上，盖盖玻片
8、观察：低倍镜下可见细胞内存在被染成蓝色、粗细不等的纤维网络状结构，便是
构成细胞骨架的微丝束。
高倍镜下转动微调可见细胞骨架的立体结构。
〔实验作业〕
绘制植物细胞骨架微丝结构图。