实验一 DNA提取教学文案
DNA的粗提取与鉴定(教案)
【教学目标】(一)知识目标知识与技能: 1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取,了解DNA的物理化学性质。
2、理解DNA粗提取与鉴定的原理过程与方法:掌握DNA如提取计数,能利用DNA的性质进行实验设计和操作情感态度与价值观:通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作,锻炼科学的思维方法,培养实事求是的科学态度。
(二)重点和难点:重点: DNA的粗提取和鉴定方法难点: DNA的粗提取和鉴定方法【课前预习】(一)实验原理:1.提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是。
对于DNA的粗提取而言,就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。
1)DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。
2)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解,但是对没有影响。
大多数蛋白质不能忍受60—80o C的高温,而DNA在以上才会变性。
洗涤剂能够瓦解,但对DNA没有影响。
3)DNA不溶于,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
2.DNA的鉴定:DNA遇(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
(二)实验设计1、实验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑,但是使用的生物组织,成功的可能性更大。
2、破碎细胞,获取含DNA的滤液1)制备和提取细胞核物质:动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例。
在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用搅拌,得到鸡血细胞液。
过滤后收集研磨液;如果实验材料是植物细胞,需要先用溶解细胞膜。
例如,提取洋葱的DNA时,在切碎的洋葱中加入一定的和食盐,进行充分的搅拌和研磨。
过滤后收集研磨液。
思考:①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?③如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响?④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分?2)溶解细胞核的DNA:向收集的滤液中加入的溶液,搅拌使DNA呈溶解状态。
高中生物选修一DNA的粗提取与鉴定教案
教学反思
过滤
可以用滤纸过滤吗?
不可以,孔径太小。需要用到3-4层纱布,除去一些颗粒较大的杂质,获得含有DNA的滤液。
这时DNA在哪里?
滤液里。
板书:破碎细胞,释放DNA
对于动物细胞我们可以利用细胞的渗透压来破碎细胞,但是很多情况下,人们不得不面对植物材料,那么我们是不是还可以通过加入一定量的蒸馏水来涨破细胞呢?
方案三:将滤液放在60-75℃的恒温水浴箱中保温10-15min。
利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与DNA分离。
过滤:用3~4层纱布对DNA稀释液进行过滤,滤过蛋白质,收集DNA的粘稠物。
思考、分析、回答
思考、分析、回答
使学生掌握盐析法的原理与方法
通过对,其他两种方案的分析,使学生深入理解纯化DNA的方法和原理
因此,我们可以设计实验,通过破碎细胞,释放DNA→溶解细胞核内的DNA→DNA的析出→DNA的初步纯化→DNA的鉴定
完成DNA的粗提取与鉴定
视频:DNA的粗提取与鉴定
小结
小结
板书设计
DNA的粗提取与鉴定
1.破碎细胞,释放DNA
2.去除滤液中的杂质
(1)溶解细胞核内的DNA
(2)DNA的析出
3.DNA的初步纯化
板书:(2)DNA的析出
在刚才实验中我们利用DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同的特性,去除杂质。
那么课本中还给出了其他两种方案,请你阅读教材P56,思考这两个方案的原理。
方案二:直接在滤液中加入嫩肉粉,反应10-15min
嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶,利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的DNA与蛋白质分开
背景介绍;DNA的溶解性
DNA的粗提取与鉴定教案
DNA的粗提取与鉴定教案第一章:DNA的简介1.1 课程目标:了解DNA的定义和结构理解DNA在生物体内的功能和重要性1.2 教学内容:DNA的定义和组成DNA的双螺旋结构DNA的复制和遗传信息的传递1.3 教学活动:引入话题:通过播放一个关于DNA的科普视频或进行一个简短的讨论来引起学生对DNA的兴趣。
讲解DNA的定义和组成:使用PPT或板书来展示DNA的基本结构和组成单位。
讲解DNA的双螺旋结构:使用模型或动画来展示DNA的双螺旋结构。
讲解DNA的复制和遗传信息的传递:使用示例或图解来说明DNA的复制过程和遗传信息的传递方式。
1.4 作业与评估:给学生发放相关的阅读材料或布置相关的阅读作业,以加深对DNA的理解。
进行小组讨论或小测验,以评估学生对DNA的掌握程度。
第二章:DNA的粗提取2.1 课程目标:学习DNA的粗提取方法理解DNA在不同溶液中的溶解度特性2.2 教学内容:DNA的溶解度特性:介绍DNA在不同溶液中的溶解度变化。
DNA的粗提取方法:介绍使用不同的溶液和离心方法来粗提取DNA。
2.3 教学活动:讲解DNA的溶解度特性:使用PPT或板书来展示DNA在不同溶液中的溶解度变化。
讲解DNA的粗提取方法:使用PPT或板书来展示使用不同的溶液和离心方法来粗提取DNA的步骤。
进行实验演示:演示如何使用不同的溶液和离心方法来粗提取DNA。
2.4 作业与评估:给学生发放实验指导书或布置相关的实验作业,以指导学生进行DNA的粗提取实验。
进行小组讨论或小测验,以评估学生对DNA的粗提取方法的掌握程度。
第三章:DNA的鉴定3.1 课程目标:学习DNA的鉴定方法理解DNA的电泳迁移和光谱特性3.2 教学内容:DNA的电泳迁移:介绍使用琼脂糖凝胶电泳来鉴定DNA的迁移速度。
DNA的光谱特性:介绍使用紫外光谱仪来鉴定DNA的吸收光谱。
3.3 教学活动:讲解DNA的电泳迁移:使用PPT或板书来展示琼脂糖凝胶电泳的原理和步骤。
植物DNA提取实验方案
植物DNA提取实验方案一、实验目的本实验旨在通过提取植物组织中的DNA,了解DNA的结构和功能,学习DNA提取技术。
二、实验原理DNA提取实验基于DNA的特性进行,主要包括以下几个步骤:1.组织破碎:通过物理或化学方法将植物组织破碎,使DNA暴露出来。
2.细胞溶解:使用细胞溶解液使细胞膜破裂,释放DNA。
3.蛋白质消化:加入蛋白酶等物质,将DNA周围的蛋白质降解。
4.DNA沉淀:通过加入乙醇等溶剂,使DNA沉淀。
5.洗涤和纯化:通过洗涤和纯化步骤去除杂质。
6.分析和测定:利用凝胶电泳等技术对提取得到的DNA进行分析和测定。
三、实验材料1.植物材料(如香蕉、草莓等)2.液氮或冰块3.细胞溶解液(如PBS缓冲液、CTAB溶液等)4.蛋白酶K溶液5.乙醇6.盐溶液7. DNase-free水8.1.5mL离心管9.离心机10.电磁振荡器11.热水浴12.紫外分光光度计四、实验步骤1.将所需植物材料切碎,放入离心管中。
2.将离心管放入液氮或冰块中,立即研磨材料,直至完全破碎。
3.加入适量的细胞溶解液,如PBS缓冲液,将混合物混合均匀。
4.将混合物置于电磁振荡器中,振荡5分钟。
5.加入适量的蛋白酶K溶液,混合均匀。
6.将离心管置于热水浴中,温度为55℃,孵育1小时。
7.加入相同体积的酒精,轻轻摇匀离心管,将DNA沉淀。
9.倒出上清液,加入适量的盐溶液,轻轻摇匀离心管,使DNA残留在离心管底部。
10.使用离心机将离心管离心,离心条件同上,离心10分钟。
11.倒出上清液,加入适量的乙醇,轻轻摇匀离心管,使DNA沉淀。
12.使用离心机将离心管离心,离心条件同上,离心10分钟。
13.倒出上清液,加入适量的盐溶液,轻轻摇匀离心管,使DNA残留在离心管底部。
14.使用离心机将离心管离心,离心条件同上,离心10分钟。
15. 倒出上清液,用DNase-free水洗涤DNA三次,每次离心5分钟。
16. 将离心管中的DNA溶解于适量的DNase-free水中。
尝试DNA的提取与鉴定教案
富县高级中学集体备课教案年级:高二科目:生物授课人:课题尝试DNA的提取与鉴定第1课时三维目标1、知识与能力:学会DNA的粗提取与鉴定2、过程与方法:尝试运用基因工程原理,提出一解决实际问题的方案。
3、情感态度、价值观:关注基因工程的发展。
重点DNA的粗提取与鉴定中心发言人谢文娟难点DNA的鉴定教具多媒体课型新授课课时安排 1 课时教法问题,引导,点拨学法合作交流个人主页教学过程执勤学生复习上节课的内容,教师点评继续进行新课DNA的粗提取与鉴定实验原理DNA在氯化钠溶液中的溶解度,是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。
当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L时,DNA的溶解度最大,浓度为 0.14 mol /L时,DNA的溶解度最低。
利用这一原理,可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
DNA不溶于95%的酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
DNA中含有脱氧核糖,能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA 的试剂。
方法步骤1.提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 mL~10mL,注入到50 mL烧杯中。
向烧杯中加入蒸馏水20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌5 min,使血细胞加速破裂。
然后,用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。
取其滤液。
2.溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40mL 加入到滤液中,并摇动烧杯,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态。
3.析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色。
继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多。
当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14mol/L)。
4.滤取含DNA的粘稠物用放有多层纱布的漏斗,过滤步骤3中的溶液至500mL的烧杯中,含 DNA的粘稠物被留在纱布上。
新人教版生物选修1课题1DNA的粗提取与鉴定word教案
DNA的粗提取和鉴定教学目标:一、知识与能力目标明白得DNA的理化特性及依照其理化特性而提取和鉴定的原理,初步把握DNA的粗提取和鉴定方式,明白得相关溶液的作用机理,培育学生的分析能力,通过实验使学生能够简述科学探讨的大体进程。
二、情感态度与价值目标通过探讨培育科学的怀疑精神和创新精神;通过实验结果,学生树立生命物质性的观点。
教学重点:提取DNA的相关原理和步骤教学难点:提取DNA的相关原理和步骤教学进程:开门见山讲解本实验的目的是提取DNA和DNA的鉴定,其中提取DNA是本实验的重点和难点。
提出问题:“DNA要紧存在于什么结构上?”“如何提取DNA?”“选什么材料好?”达到共识:一、造适宜材料:选动物细胞,易打破细胞结构二、破坏细胞膜、核膜结构,得核物质。
3、将DNA与蛋白质等物质分开,得DNA4、去掉DNA中杂质,提纯DNA。
探讨实验原理:NaCl2mo1/L L LDNA蛋白质表格2DNA 蛋白质杂质95%酒精不同浓度的NaC1溶液可溶解或析出DNA。
95%酒精可提取DNA。
填表1:NaCl2mo1/L L LDNA 最大最小变大蛋白质解聚最大变小填表2:DNA 蛋白质杂质95%酒精不溶可溶可溶通过对实验原理的预习,表格的比较,使学生明确了各溶液的用途,保证明白得实验。
请学生代表简述DNA提取实验步骤[实验设计一]投影展现实验设计思路:鸡血细胞液①aDNA 释放②bDNA与蛋白质的分离③cDNA析出④dDNA浓缩(提纯)取得鸡血细胞核物质:提核物质→溶解→析出→溶解→析出实验步骤:引导学生讨论、回忆并回答目的①~⑨。
①避免血凝。
②加速血细胞破裂。
③溶解DNA。
④使2 mol/L的NaCl溶液稀释至mol/L,促DNA最大限度地析出。
⑤使含DNA的粘稠物被留在纱布上。
⑥使含DNA的粘稠物尽可能多地溶于溶液中⑦除去含DNA的滤液中的杂质。
⑧提取DNA。
⑨A:显现蓝色。
B:无转变讨论与结论:投影给出如下讨论提纲,供学生讨论。
DNA的粗提取和鉴定 学案.doc
DNA的粗提取和鉴定教学目标:i>知识与能力目标理解DNA的理化特性及根据其理化特性而提取和鉴泄的原理,初步掌握DNA的粗提取和鉴定方法,理解相关溶液的作用机理,培养学生的分析能力,通过实验使学生能够简述科学探究的基本过稈。
2、情感态度与价值目标通过探索培养科学的怀疑精神和创新精神;通过实验结果,学生树立生命物质性的观点。
教学重点:提取DNA的相关原理和步骤教学难点;提取DNA的相关原理和步骤三、知识归纳1.提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是_________________________________________ 、对于DNA的粗提取而言, 就是要利用 ___________ 、_____________ 等在物理和化学性质方面的若异,提取DNA,去除其他成分。
1)_________________________________________________________________________________ DNA的溶解性DNA和蛋白质等英他成分在不同浓度的________________________________________________ 中溶解度不同,利用这一特点, 选择适当的盐浓度就能使_________ 充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离日的。
此外,DNA不溶于________ 溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步的分离。
2)____________________________________________________________________________ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解 ___________________________________________________ ,但是对 _______ 没有影响。
大多数蛋白质不能忍受60—80°C的高温,而DNA在________ 以上才会变性。
DNA的提取与鉴定实验说课稿
≪DNA的提取与鉴定》说课稿各位评委、老师下午好!我的说课题目是“DNA的粗提取与鉴定”。
下面我将从教材分析、实验教学目标、实验教学改进、实验教学过程、实验反思与评价五个方面进行今天的说课。
一、教材分析课程标准:通过尝试对植物或动物中的DNA进行粗提取,了解DNA的物理化学性质;理解DNA粗提取及DNA鉴定的原理。
高考导航:DNA的粗提取与鉴定的原理、材料的选取及注意事项等方面,是高考考查的重点,意在考查学生的实验设计和探究能力。
二、实验教学目标(一)学情分析学生已有基础:细胞分子的组成、细胞的基本机构、DNA是主要的遗传物质、DNA的结构学生可能存在的问题:学生理论学习丰富而实际操作少,同时对分子生物学理解困难。
(二)教学重难点重点:DNA的粗提取和鉴定的原理和方法;难点:用不同处理材料进行DNA粗提取和鉴定的实验操作。
(三)实验教学目标1.学生通过进行DNA提取和鉴定的模拟实验,初步学会DNA的粗提取与鉴定的方法,领悟实验原理。
2.学生通过结合课本,给定的材料用具,自主选择、设计并实施探究实验,体现了自主合作的科学探究素养。
3.学生选择同种实验材料采用不同处理,进行DNA提取,发展了创造性思维的科学思维素养。
三、实验教学改进(一)利用国家虚拟仿真实验平台,体验大学实验室中的DNA提取与鉴定实验。
(二)通过对这个实验的模拟操作,比较教材所给的实验方案和学校实验室的条件,改进实验方案,以此来实操DNA的粗提取实验。
(三)结合实际条件,采用视频展示鉴定DNA的不同方法,链接高考进行DNA电泳图谱分析四、实验教学过程(-)虚拟仿真实验利用国家虚拟仿真实验平台上人类DNA的提取与鉴定虚拟实验,让学生切身体验,学习DNA的粗提取与鉴定的方法,领悟实验原理。
通过对这个实验的模拟操作,比较教材所给的实验方案和学校实验室的条件,改进实验方案,以此来实操DNA的粗提取实验。
(二)开展DNA粗提取实验——探究同种材料不同处理对DNA提取结果的影响1.实验原理2.实验材料与试剂3.实验过程•称取20g材料,剪碎置于塑料杯中;•加入IOm1温水,2g食盐,5滴洗洁精,充分研磨;•用双层纱布过滤研磨液,收集滤液;•向滤液中加入2M1菠萝汁,混合均匀;•将滤液置于55-60°C的水浴中加热5-IOmin;•冷却,加入等体积、冷处理的体积分数为95%的乙醇;•静置2-3I nin,用玻璃棒(或筷子)挑取白色絮状析出物。
DNA粗提取及鉴定教案
DNA粗提取及鉴定教案第一篇:DNA粗提取及鉴定教案《DNA粗提取及鉴定》一、学习目标:学生通过对本节内容的探究学习:能⑴了解DNA的物理化学性质。
⑵理解DNA粗提取与鉴定的原理。
⑶掌握DNA粗提取及鉴定方法,⑷利用DNA的性质进行实验分析和实验设计。
二、本节内容学习的重点:DNA的粗提取和鉴定原理、方法。
难点:DNA的粗提取和鉴定原理、方法。
三、自主探究(一)(阅读教材、学案;探究下列问题)1、提取生物大分子的基本思路?2、提取DNA的基本思路?3、用文字和坐标曲线描述DNA的溶解性;并思考该问题在DNA 粗提取中将有何应用?4、DNA在酒精溶液中的溶解性5、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性6、如何来进行DNA鉴定自主探究(二)(阅读教材、学案;探究下列问题)1、进行DNA粗提取应选择什么样的材料;你的选择的理由?2、为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?3、如何破碎植物细胞,并获取含DNA的滤液;请举例说明,并告诉自己应注意什么?自主探究(三)(阅读教材、学案;探究下列问题)去除滤液中的杂质1、此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分?2、方案一中为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?3、方案二与方案三的原理有什么不同?自主探究(四)(阅读教材、学案;探究下列问题)1、DNA析出的原理,DNA析出物是什么颜色?2、DNA鉴定需要设置对照吗?要注意什么问题?四:讨论(一)你帮助、我改正;我质疑,共提升小组内讨论自主探究内容并自行改正讨论(二)你我同思考,细总结,共同突破难点小组内讨论:总结1、本实验的实验原理2、DNA粗提取与鉴定过程3、此实验过程中有几次使用蒸馏水?几次过滤,几次析出?分别在哪一步?五:小组间质疑,完善六:课堂小结七:达标检测;当堂掌握知识拓展:课下思考总结:1、在我们的高中生物学习中有颜色反应的实验有那些?2、DNA在不同浓度氯化钠溶液中溶解度的变化曲线还能表示那些量的关系?3、还有那些实验中用到了酒精,他们的作用是?第二篇:dna粗提取和鉴定dna粗提取和鉴定实验用具洋葱或其他植物、洗洁精、食盐、搅拌机或研钵(我们采用的是家用豆浆机)、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、试管(20mL两支)、天平,dna粗提取和鉴定。
人教版选修1 DNA的粗提取与鉴定 第1课时 教案4
DNA的粗提取与鉴定一、教学目标知识目标1)了解DNA理化性质。
2)掌握DNA粗提取与鉴定的原理,初步学会DNA的粗提取与鉴定的方法。
能力目标1)通过自主阅读培养学生的自主学习能力。
2)在尝试利用不同的实验试剂、材料、方法对动植物组织中的DNA进行粗提取的过程中培养学生的探究能力、创新能力和动手操作能力。
情感、态度与价值观通过实验活动体验分工协作的愉悦情感,积极参与讨论交流,善于倾听不同的意见,认同科学的思维方法对实验的价值,养成严谨的科学实验作风和实事求是的科学态度。
二、学情分析通过必修和选修相关章节的学习,学生已经了解了DNA的空间结构,掌握了DNA的部分理化性质,具有一定的实验操作能力和实验设计能力。
教师在学生已经具备上述能力的基础上,充分激发学生的求知欲,带领学生整理实验思路,设计实验过程,延伸课题探究,共同完成实验课题。
三、重点难点教学重点:根据不同的材料试剂设计DNA的粗提取与鉴定实验。
教学难点:DNA的粗提取与鉴定的实验操作。
实验现象的汇总比较。
四、教学过程活动1【导入】导入新课教师表述:我们平时常说“眼见为实”,可是生物学中常提到的DNA你见过吗?其实当你制作DNA双螺旋结构模型,模拟DNA的复制,绘制DNA指导蛋白质合成过程图的时候,你都没有亲眼见过真正的DNA。
今天我们就来打破这种“雾里看花,水中望月”的感觉,一起来完成一个DNA的提取鉴定实验,让大家见识一下真正的DNA。
设计意图:简单导入,正切主题,激发学生求知欲。
活动2【讲授】新课学习1.根据实验目的整理实验思路在明确实验目的的前提下,教师通过问题串理清实验思路。
1)从什么材料里提取DNA?2)如何提取DNA?3)按照这样的方法得到的DNA有杂质吗?4)如何鉴定提取的物质是不是DNA?学生活动:根据已有知识简单思考回答问题:教师表述:根据学生的回答归纳实验思路,材料选择→释放DNA→粗提取DNA→纯化DNA→鉴定DNA。
《课题1 DNA的粗提取与鉴定》教学设计(福建省市级优课)
《DNA的粗提取与鉴定》教学设计一、教学内容分析《DNA的粗提取与鉴定》是人教版高中生物选修1《生物技术实践》专题5《DNA和蛋白质技术》第1节,介绍了大分子提取的的基本思路、DNA粗提取与鉴定的原理以及实验方法。
本节虽然属于选修1的内容,但在选修3的《考试大纲》中也有一定要求。
福建省目前的现状是大部分学校选择选修3,却往往忽略了对本节内容的教学。
实际上本节内容对于学生理解生物大分子分离原理、锻炼实验设计能力和动手操作能力都具有重要的作用,可帮助学生形成对DNA的感性认识,有利于学生更好理解必修2中有关DNA的内容。
二、学情分析通过必修2《遗传与进化》的学习,学生已经了解了DNA是主要的遗传物质,掌握了DNA分子的双螺旋结构以及DNA的复制、指导蛋白质的合成等功能。
通过本课题的学习,可增加学生对DNA的感性认识。
三、教学目标1.知识与技能:(1)通过资料分析,比较DNA与蛋白质的理化性质。
(2)理解并说出DNA的粗提取与鉴定的原理和方法。
2.过程与方法:(1)初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。
(2)在对实验原理、方法的分析和理解过程中体会大分子物质分离的方法。
3.情感态度与价值观:(1)在观看实验教学视频过程中认同严谨细致、实事求是的科学态度。
(2)养成自主学习,合作学习的习惯。
四、教学重点和难点1.教学重点:DNA的粗提取与鉴定的原理和方法2..教学难点:DNA的粗提取与鉴定的原理和方法五、教学策略分析用学生熟悉的DNA结构与功能导入课题,激发学生想要接触真实DNA的强烈欲望。
教学中以学生为主体,教师为主导,对于实验材料的选取、细胞的破碎方法等内容,教师通过预先设计的问题串,基于学生已有的学情,引导学生一步步分析问题、解决问题。
对于DNA粗提取的方案,教师提供三则背景资料让学生在预习的基础上再小组讨论,设计方案解决问题,从而提升分析资料、解决问题的能力。
通过带着问题观看实验教学视频,进一步让学生理解DNA 粗提取和鉴定的方法和原理,为下一节课学生亲自动手实验,掌握规范的实验操作奠定基础。
基因组dna提取教案
9. 12,000 rpm离心2 min,弃废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
10.将吸附柱CB3转入1.5 ml离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TB,室温放置2-5 min,12,000 rpm离心2 min,将溶液收集到离心管中。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min,12,000 rpm离心2 min
【实验材料】:
血液基因组DNA提取试剂盒:细胞裂解液CL、缓冲液GS、缓冲液GB、缓冲液GD、漂洗液PW、洗脱缓冲液TB、Proteinase K、吸附柱CB3、收集管(2 ml)、1.5 ml离心管
【实验内容】:
1采用血液基因组DNA提取试剂盒利用酚抽提法提取人外周血细胞基因组DNA
【实验原理】:
教具与课件:
板书
课外作业:
1.复习人外周血细胞DNA分离与纯化酚抽提法的原理。
2.完成实验报告并对结果进行分析。
课后回忆(经验教训、效果估计或反应,存在问题……):
系(教研室)主任
年月日
教学内容与组织安排:
人体外周血细胞基因组DNA的分离与纯化
【目的要求】:
1掌握人血白细胞DNA分离与纯化的原理和法。
12,000 rpm离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
6.向吸附柱CB3中加入500μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
7.向吸附柱CB3中加入600μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心30 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
(完整版)《DNA的粗提取与鉴定》实验教学设计
鉴定DNA的原理:
DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
2、实验过程:师生共同学习
以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取
鸡血细胞做实验材料的原因
①鸡血细胞核的DNA含量丰富,材料易得
【点拨拓展:】
(1)此实验过程中有几次使用蒸馏水?几次过滤,几次析出,几次搅拌?分别在哪一步?
答:整个实验共“两次蒸馏水,三次过滤,两次析出,六次搅拌”
①两次蒸馏水
第一次:细胞吸水胀破第一步
第二次:使DNA黏稠物析出第三步
②三次过滤
第一次:DNA存在于滤液里第一步
第二次:DNA被留在纱布上第四步
第三次:DNA存在于滤液里第六步
通过实验的学习,让学生了解到生物世界的奥秘
教学
重点
提取和鉴定DNA的原理与实验操作
教学
难点
提取和鉴定DNA的实验原理与实验操作
教学
方法
讲授法、小组合作法、边讲边练
教学程序设计
教
学
过
程
及
方
法
环节一 明标自学
过程设计
二次备课
【学习目标】
1、能够说出DNA的提取、纯化与鉴定的实验原理
2、通过实验培养学生的动手能力与分析问题的能力
讨论:提取鸡血中的DNA时,为什么除去血液中的上清液?
答:血液分为两部分,一部分是血浆,一部分是血细胞,离心后除去的上清液是血浆
3、过程(结合导学案边做边学)
①提取鸡血细胞的细胞核物质
②溶解细胞核内的DNA
【合作释疑一】
细菌基因组DNA的提取
四、注意事项——核酸分离、纯化
四、注意事项——核酸沉淀、溶解
当沉淀时间有限时,用预冷的乙醇或异丙醇沉淀,沉淀会更充分 沉淀时加入1/10体积的NaAc(pH5.2,3M),有利于充分沉淀 沉淀后应用70%的乙醇洗涤,以除去盐离子等 晾干DNA,让乙醇充分挥发(不要过分干燥) 若长期储存建议使用TE缓冲液溶解 TE中的EDTA能螯和Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase pH值为8.0,可防止DNA发生酸解
原因
02
材料不新鲜或反复冻融 未很好抑制内源核酸酶的活性 提取过程操作过于剧烈,DNA被机械打断 外源核酸酶污染 反复冻融
尽量取新鲜材料,低温保存材料避免反复冻融 液氮研磨或匀浆组织后,应在解冻前加入裂解缓冲液 在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时,可增加裂解液中螯合剂的含量 细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔 所有试剂用无菌水配制,耗材经高温灭菌 将DNA分装保存于缓冲液中,避免反复冻融
01
小心吸出上清液转入新的eppendorf管,用预冷的两倍体积的无水乙醇沉淀,放置-20℃冰箱30min,然后13000rpm离心15min,可见白色丝状沉淀物。
02
小心吸出液体,弃上清液,用预冷的400µl 70%乙醇洗涤2次,室温干燥后,用50µlTE (含20µg/ml的Rnase)溶解DNA,-20℃冰箱放置备用。
核酸制备的步骤: 破碎细胞
01
一、实验原理
核酸酶的抑制和抑制剂 降低温度,改变pH及盐的浓度,都利于对核酸酶活性的抑制,但均不如利用核酸酶抑制剂更有利,当然,几个条件并用更好。 对于DNA,抑制DNase活力很容易,但防止机械张力拉断则更重要。 对于RNA,因分子较小,不易被机械张力拉断,但抑制RNase活力较难,故在RNA提取中设法抑制RNase更重要。
DNA的粗提取与鉴定教(学)案
当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L时,DNA的溶解度最大,浓度为 0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使DNA在盐溶液中溶解或析出
为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?
用高浓度的盐溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。
背景介绍;DNA的溶解性
图片:DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线
问题:
在什么浓度下,DNA的溶解度最小?DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的?
在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低;在0.14 mol/L时,DNA溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大。
板书:DNA的鉴定
思考、分析、回答
使学生知道DNA鉴定的原理和方法
小结
我们根据所需分离物质与其他物质物理或者化学性质的不同,来提取生物大分子物质。而通过今天的学习,我们知道DNA有以下物理或者化学的特性是与其他生物大分子物质不同的:
在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低;在0.14 mol/L时,DNA溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大。
植物细胞有细胞壁的支持和保护,因此吸水不会涨破。
我们通常通过研磨来破碎植物细胞的细胞壁。在研磨的过程中,一般还会加入洗涤剂和食盐。
洗涤剂的作用:
洗涤剂也分为亲水基团和亲脂基团,可以与细胞膜中的蛋白质结合,使之溶解,进而瓦解细胞膜。
食盐的作用:
食盐中主要含有NaCl,有利于DNA的溶解。
《DNA 的粗提取与鉴定》 说课稿
《DNA 的粗提取与鉴定》说课稿尊敬的各位评委老师:大家好!今天我说课的题目是《DNA 的粗提取与鉴定》。
下面我将从教材分析、学情分析、教学目标、教学重难点、教学方法、教学过程以及教学反思这几个方面来展开我的说课。
一、教材分析《DNA 的粗提取与鉴定》是高中生物学中的一个重要实验。
本实验通过一系列的操作步骤,让学生亲身体验从细胞中提取 DNA 并进行鉴定的过程,有助于学生深入理解 DNA 的结构和性质,培养学生的实验操作能力和科学思维。
在教材的编排上,本实验位于必修 2《遗传与进化》的相关章节之后,是对前面所学遗传学知识的实践应用和拓展延伸。
通过本实验,学生能够将抽象的遗传学概念与具体的实验操作相结合,进一步巩固和深化对 DNA 相关知识的理解。
二、学情分析授课对象为高二年级的学生,他们已经具备了一定的生物学基础知识和实验操作技能。
在之前的学习中,学生已经了解了 DNA 的分子结构、功能以及遗传规律等理论知识,但对于如何从细胞中提取和鉴定DNA 还缺乏实际的操作经验。
高二学生具有较强的好奇心和求知欲,对实验操作充满兴趣。
然而,他们在实验设计、数据处理和结果分析等方面的能力还有待提高。
因此,在教学过程中,需要教师给予适当的引导和指导,帮助学生顺利完成实验。
三、教学目标1、知识目标(1)理解 DNA 粗提取与鉴定的原理。
(2)说出 DNA 粗提取与鉴定的实验材料和试剂的作用。
2、能力目标(1)通过实验操作,掌握 DNA 粗提取与鉴定的基本方法和技能。
(2)培养学生的观察能力、分析问题和解决问题的能力。
3、情感态度与价值观目标(1)体验科学探究的过程,培养学生严谨的科学态度和团队合作精神。
(2)激发学生对生物学的兴趣,培养学生的创新意识和探索精神。
四、教学重难点1、教学重点(1)DNA 粗提取的原理和方法。
(2)DNA 鉴定的方法和原理。
2、教学难点(1)去除杂质,提取较纯净的 DNA。
(2)实验操作中的注意事项和误差分析。
人教版教学教案课题1DNA的粗提取与鉴定预习学案
人教版教学教案课题1DNA的粗提取与鉴定预习学案第一篇:人教版教学教案课题1 DNA的粗提取与鉴定预习学案DNA的粗提取与鉴定学习目标1.尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取2.了解DNA的物理化学性质3.理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理学习重点与难点DNA的粗提取和鉴定方法自主学习一基础知识1.提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是。
对于DNA的粗提取而言,就是要利用DNA与、和等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。
1)DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。
课本图5—1是DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线,请根据曲线图,【思考】①在什么浓度下,DNA的溶解度最小?DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的?②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出?此外,DNA不溶于溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步的分离。
2)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解,但是对没有影响。
大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温,而DNA在以上才会变性。
洗涤剂能够瓦解,但对DNA没有影响。
3)DNA的鉴定在条件下,DNA遇会被染成色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
2.实验设计1)实验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑,但是选用的生物组织,成功的可能性更大。
在下面的生物材料中选取适合的实验材料:鱼卵、猪肝、菜花(花椰菜)、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌【思考】哺乳动物的红细胞的特点?2)破碎细胞,获取含DNA的滤液动物细胞的破碎比较容易,以鸡血细胞为例,在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用搅拌,过滤后收集滤液即可。
如果实验材料是植物细胞,需要先用溶解细胞膜。
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实验一D N A提取实验一 DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA(CTAB法)1 实验目的:随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用,人们经常需要提取高分子量的植物DNA,用于构建基因文库、基因组 southern 分析、酶切及克隆等,这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法,进一步了解DNA 的性质。
2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物(DNP)的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时,一般先破碎细胞释放出DNP,再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质,最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP 与核糖核蛋白(RNP)在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大,利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例:RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大,而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1%。
当NaCl 浓度逐渐增大时,RNP的溶解度变化不大,而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时,DNP的溶解度最大,为纯水中溶解度的2 倍,因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品,可用适量的RNase 处理提取液,以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法:1. CTAB 法:CTAB(十六烷基三甲基溴化铵,hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB):是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中(0.7mol/LNaCl)是可溶的,当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开,然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中,再加入乙醇使核酸沉淀,CTAB 能溶解于乙醇中。
2. SDS 法:利用高浓度的阴离子去垢剂SDS(十二烷基磺酸钠,Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS)使DNA 与蛋白质分离,在高温(55~65℃)条件下裂解细胞,使染色体离析,蛋白变性,释放出核酸,然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀,离心后除去沉淀,上清液中的DNA用酚/氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
一般生物体的基因组DNA 为107~109bp,在基因克隆工作中,通常要求制备的大分子DNA 的分子量为克隆片段长度的4 倍以上,否则会由于制备过程中随机断裂的末端多为平末端,导致酶切后有效末端太少,可用于克隆的比例太低,严重影响克隆工作。
因此有效制备大分子DNA 的方法必须考虑两个原则:(1)尽量去除蛋白质、RNA、次生代谢物质(如多酚、类黄酮等)、多糖等杂质,并防止和抑制内源DNase 对DNA 的降解。
(2)尽量减少对溶液中DNA 的机械剪切破坏。
几乎所有的DNase 都需要Mg2+或Mn2+为辅因子,故实现(1)尽量去除蛋白质的要求,需加入一定浓度的螯合剂,如EDTA、柠檬酸,而且整个提取过程应在较低温度下进行(一般利用液氮或冰浴)。
为实现(2)需要在DNA 处于溶解状态时,尽量减弱溶液的涡旋,而且动作要轻柔,在进行DNA 溶液转移时用大口(或剪口)吸管。
提取的DNA 是否为纯净、双链、高分子的化合物,一般要通过紫外吸收、化学测定、“熔点”(melting temperature, Tm)测定、电镜观察及电泳分离等方法鉴定。
本实验采用CTAB 法提取DNA 并通过紫外吸收法鉴定。
3材料和试剂:3.1长春花叶片3.2 试剂(1)CTAB 提取缓冲液:100 mmol/L Tris-HCl (pH8.0),20 mmol/L EDTA-Na2,1.4mol/LNaCl(如表1),2% CTAB,使用前加入0.1%(V/V)的β-巯基乙醇。
表1 CTAB提取缓冲液配制用HCl 调pH 值。
(2)TE 缓冲液:10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA( pH8.0)。
(3)氯仿/异戊醇:将氯仿和异戊醇按体积24:1的比例混匀,置棕色瓶中,4℃保存。
4 仪器设备离心机、3离心管、紫外分光光度计、微量移液器、吸头、吸水纸、水浴锅、冰箱、电子天平、高压灭菌锅、一次性手套、电泳仪等。
5 方法与步骤:5.1 在提取过程中用到的吸头,提取缓冲液等先高压灭菌(121℃,20min),取出后待用;5.2 取大约指甲盖大小的植物叶片,放入1.5ml的EP管中, 加入液氮,用钢珠研磨成粉末状,再加入600μL的 CTAB提取缓冲液,;5.3 65℃水浴锅中水浴40min,加入等体积的氯仿:异戊醇(24:1),轻轻混匀,颠倒几次,乳化1min。
4℃,11,000rpm离心10min;5.4 吸上清到新离心管中(约400μl),加入等体积预冷异丙醇,混匀,-20℃放置20min沉淀DNA;5.5 5000 rpm常温离心15min,倒掉上清液;5.6 用75%乙醇(900μl)洗沉淀,11,000rpm离心2min,倒掉乙醇,再用乙醇同样处理一次;5.7 置于干燥仪干燥10min,将水分蒸干;5.8 加入50μL去离子水,融解 DNA,同时加入RNA酶(按每50μL DNA加入1μL RNase),37℃30min;5.9 利用分光光度计检测OD260,同时进行1%凝胶电泳检测;5.10 琼脂糖电泳检测DNA:制作1%的琼脂糖凝胶,吸取提取的DNA溶液5μL 电泳检测;5.11 -20℃保存DNA备用;5.12 提取的DNA的浓度检测:取少量待测DNA样品,用蒸馏水稀释1,000倍;用蒸馏水做空白,分别在260nm、280nm测DNA样品的吸光值。
【注意事项】1. 叶片磨得越细越好。
2. 注意移液器的正确使用。
3. 由于植物细胞中含有大量的DNA酶,因此,除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外,第一步的操作应迅速,以免组织解冻,导致细胞裂解,释放出DNA酶,使DNA降解。
6. 思考题1.制备的DNA 在什么溶液中较稳定?2.为了保证植物DNA 的完整性,在吸取样品、抽提过程中应注意什么?7 实验结果:结果计算式中OD260nm 为260nm 处的光密度;L 为比色杯光径(cm);0.020 为1μg/mL DNA 钠盐的光密度。
DNA 的紫外吸收高峰为260nm,吸收低峰为230nm,而蛋白质的紫外吸收高峰为280nm。
上述DNA 溶液适当稀释后,在751 分光光度计上测定其OD260nm、OD230nm 和OD280nm。
如OD260nm/ OD230nm≥2OD260nm/ OD280nm≥1.8,表示RNA 已经除净,蛋白含量不超过0.3%。
8 实验分析:传统DNA提取方法CTAB 法、SDS 法是在裂解细胞的基础上,多次苯酚氯仿等有机溶剂抽提使蛋白质变性沉淀于有机相,而核酸保留在水相,达到分离核酸的目的;加入RNA 酶除去核酸中的RNA; 然后加入异丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70 %乙醇漂洗沉淀,除去分离过程中残留的有机溶剂和盐离子,以免影响核酸溶解和抑制后续步骤的酶促反应,最后用TE 溶解DNA 备用。
CTAB 是一种阳离子去污剂,能与核酸形成复合物,此复合物在高盐( > 0. 7 mol/ L) 浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0. 1~0. 5 mol/ L NaCl) 下CTAB - 核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。
通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
经离心弃上清后,CTAB - 核酸复合物再用70 %酒精浸泡可洗脱掉CTAB 。
SDS 是一种阴离子去垢剂,在高温(55~65 ℃) 条件下能裂解细胞,使染色体离析、蛋白变性,同时SDS 与蛋白质和多糖结合成复合物,释放出核酸;提高盐(KAc 或NH4Ac) 浓度并降低温度(冰浴) ,使 SDS - 蛋白质复合物转变为溶解度更小的钾盐形式,使蛋白质及多糖杂质沉淀更加完全,离心后除去沉淀;上清液中的 DNA 用酚/ 氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
SDS 法操作简单,温和,也可提取到高分子量的DNA ,但所得到的产物含糖类杂质较多。
基因组DNA 经典的提取方法由于无需昂贵仪器和药品,提取的DNA 纯度能够满足一般分子生物学的需要,一直作为DNA 提取的常规方法。
但这种方法操作步骤复杂,耗时长,易交叉污染,残留在DNA 溶液中有机物质对DNA 聚合酶有抑制作用。
另外,酚、氯仿等有机溶剂易造成环境污染,有损操作者健康。
DNA提取新方法近年来出现了以螯合树脂、特异性 DNA 吸附膜、离子交换纯化柱及磁珠或玻璃粉吸附等基础 DNA 提取新方法。
这些方法主要应用于提取病毒、微生物、人和动物细胞、包埋组织样品、古生物标本及土壤环境样品 DNA 。
已有多篇利用纯化柱和玻璃粉纯化植物基因组 DNA 的报道。
马小军等将CTAB 液提取和氯仿抽提两步的上清液直接通过Wizard 纯化系统纯化得到的DNA ,RAPD 扩增效果良好,产率达2 250μg/ g 。
张博等用硅珠(SiO2) 颗粒吸附DNA 纯化方法,从不同树木叶片中均得到了高质量的 DNA 样品。
黄椰林等对常规CTAB 法提取的DNA 用玻璃粉悬浮液纯化,所获DN 的APCR 产物能直接测序,比较适用于富含黏多糖、单宁、多酚和萜类化合物等次生代谢物的植物样品和长期保存的标本材料。
袁长春等也用玻璃粉吸附法从富含酚类的茶类植物中提取纯净的总DNA。
目前国内外开发了多种商品化的DNA 提取纯化试剂盒,其分离原理有的利用核酸的分子量差异,有的利用特异性膜与DNA 结合达到分离、回收的目的,如离子交换柱、磁珠等。
这些试剂盒针对不同的材料来源设计了不同的提取方法,操作简单、高效, DNA 质量较高,但价格昂贵,提取量少。
著名的国外的试剂盒生产厂家有Sigma2Aldrich、Promega、Invitrogen、 TaKaRa 、Whatman 等,它们针对不同来源的材料如微生物、动物体液、血液和组织、植物、加工产品、转基因产品等开发出一系列的试剂盒。
国内的生物公司发展迅速,如上海生工、北京天为、北京博奥等也开发了系列试剂盒,质量与国外厂家相当,价格较低。
除此之外,由于核酸提取纯化试剂盒制作门槛低,还有大量的生物公司提供试剂盒产品,使用者一定要慎重选择。
DNA 试剂盒经过了几十年的发展,已经不再局限于单纯的提取纯化,有些厂家推出了DNA 提取—扩增 PCR 试剂盒,将DNA 提取和PCR 扩增结合起来,极大的提高了工作效率,如Sigma2Aldrich 公司的Sigma’s Extract2N2Amp Plant PCR kit 等。