实验一 DNA提取
植物dna提取实验报告(一)
植物dna提取实验报告(一)植物DNA提取实验报告简介•DNA提取是分子生物学中常用的实验技术之一•本实验的目的是从植物组织中提取纯净的DNA•DNA提取技术的应用广泛，可用于基因测序、基因分型等研究实验步骤1.样品准备–选择新鲜的植物叶片或根部组织作为样品–将样品冷冻在液氮中，研磨成粉末状2.细胞破碎–加入适量的提取缓冲液，研磨样品使细胞破碎–通过高速离心将碎细胞沉淀3.蛋白质去除–加入蛋白酶，去除蛋白质，并通过离心去除残留的碎细胞和蛋白质4.DNA沉淀–加入盐和酒精，使DNA从溶液中沉淀–通过离心收集DNA沉淀物5.DNA纯化–使用乙酸溶解DNA沉淀物–通过离心去除残留的盐和溶液6.DNA浓缩–加入适量的去离子水，使DNA溶解并浓缩结果分析•提取得到的DNA质量和纯度可通过分光光度计测定•纯净的DNA可用于后续实验，如PCR扩增、酶切等实验注意事项•使用无菌操作，避免DNA样品被污染•严格控制实验中的时间和温度，以避免DNA降解•质量好的试剂和实验器材对提取纯净的DNA至关重要结论•通过本实验，成功从植物组织中提取了纯净的DNA•DNA提取技术对于分子生物学研究具有重要意义•进一步研究和应用可拓展DNA提取技术的潜力注意：本实验报告为虚构文章，仅供参考实验结果与讨论本实验成功从植物组织中提取到了纯净的DNA。
经过分光光度计测定，确认提取得到的DNA具有良好的质量和纯度，可以用于后续的实验。
在实验过程中，我们注意到了一些现象和问题，需要进行进一步的讨论。
首先，样品的选择对DNA提取的结果至关重要。
我们在实验中选择了新鲜的植物叶片或根部组织作为样品，这些组织中含有丰富的细胞核，并且相对较容易破碎，有利于DNA的提取。
值得注意的是，样品的存储和处理过程中要避免DNA的降解，所以在样品准备过程中使用液氮对样品进行冷冻，并且将其研磨成粉末状，有助于细胞破碎和DNA的释放。
其次，细胞破碎是DNA提取的关键步骤之一。
dna提取及测定实验报告
dna提取及测定实验报告DNA 提取及测定实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是掌握从生物样本中提取 DNA 的方法，并对提取的 DNA 进行浓度和纯度的测定，以了解样本中 DNA 的质量和数量。
二、实验原理DNA 是遗传信息的携带者，存在于细胞核和线粒体等细胞器中。
在提取 DNA 的过程中，需要破碎细胞，使 DNA 释放出来，然后通过一系列的化学和物理方法去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的DNA 。
DNA 在 260nm 处有特征性的吸收峰，其吸收值与 DNA 的浓度成正比。
同时，通过测定 260nm 和 280nm 处的吸光度比值（A260/A280），可以评估 DNA 的纯度。
纯 DNA 的 A260/A280 比值约为 18。
三、实验材料和仪器1、实验材料新鲜的动物肝脏组织裂解液（包含 TrisHCl、EDTA、NaCl 等）蛋白酶 K无水乙醇氯仿：异戊醇（24:1）RNA 酶TE 缓冲液（TrisHCl、EDTA）2、实验仪器高速冷冻离心机移液器恒温水浴锅紫外分光光度计微量移液器离心管玻璃棒四、实验步骤1、样本处理称取约 05g 新鲜的动物肝脏组织，用剪刀剪碎后放入匀浆器中，加入适量的裂解液，充分匀浆。
2、消化蛋白质将匀浆液转移至离心管中，加入蛋白酶 K 至终浓度为100μg/ml，在 55℃水浴锅中孵育 1-2 小时，期间不时轻轻搅拌，以充分消化蛋白质。
3、去除蛋白质和 RNA加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），轻轻颠倒离心管充分混匀，然后在 4℃下以 12000rpm 离心 15 分钟。
吸取上清液至新的离心管中，加入 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。
4、洗涤 DNA将沉淀用 70%的乙醇洗涤 2 次，每次在 4℃下以 12000rpm 离心 5 分钟，去除上清液。
5、溶解 DNA待乙醇挥发干净后，加入适量的 TE 缓冲液溶解 DNA ，置于 4℃冰箱保存备用。
实验一 基因组DNA的提取
六、操作步骤
1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液 离心管中加入500μl提取缓冲液, 1. 在1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液, 60℃水浴预热 水浴预热。 60℃水浴预热。 植物组织0.1g, 剪碎, 2. 植物组织0.1g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟 时间长,DNA产量高), 水浴保温30 分钟( ,DNA产量高 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不 时摇动。 时摇动。 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 500μl氯仿 3. 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混 需带手套, 防止损伤皮肤) 室温下静置5分钟, 匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀) 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
实验一、基因组DNA DNA的提取 实验一、基因组DNA的提取
一、实验目的： 实验目的： 1.了解真核生物基因组DNA提取 的一般原理。 2. 2.掌握DN理，是将分散好 的一般原理， 提取 的一般原理 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶 和蛋白酶K 的真核生物组织细胞在含 和蛋白酶 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚： 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：异戊 醇抽提的方法去除蛋白质，得到的DNA 醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。 经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。
三、材料
植物组织
四、设备
移液器，冷冻高速离心机， 移液器，冷冻高速离心机，台式高速 离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心 离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心 管。
dna提取实验报告
dna提取实验报告DNA提取实验报告。
实验目的，通过本实验，掌握DNA提取的基本原理和操作技能，了解DNA 提取在生物学研究中的重要性。
实验材料与方法：1. 实验材料，酚-氯仿（25:24）、异丙醇、乙醇、盐酸、乙酸、蛋白酶K、磷酸盐缓冲液、蒸馏水等。
2. 实验仪器，离心机、振荡器、恒温水浴、显微镜等。
3. 实验步骤：a. 细胞破碎，取适量细胞悬液，加入盐酸和蛋白酶K，振荡破碎。
b. DNA沉淀，加入酚-氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀层。
c. DNA沉淀洗涤，加入异丙醇，离心沉淀，去除上清液。
d. DNA溶解，加入磷酸盐缓冲液，用蒸馏水稀释，得到DNA提取液。
实验结果与分析：1. 实验现象，在DNA提取过程中，观察到细胞破碎后的混浊液经过酚-氯仿提取后，上清液呈现清澈的状态，沉淀层为白色颗粒状物质。
2. 实验分析，DNA提取液中含有DNA，经过酚-氯仿提取和异丙醇沉淀，成功获得了DNA提取物。
实验结论：通过本次实验，成功提取到了DNA，并初步了解了DNA提取的原理和操作步骤。
DNA提取是生物学研究中的重要基础工作，对于后续的分子生物学实验具有重要意义。
实验注意事项：1. 实验过程中应注意操作规范，避免污染和损失。
2. 实验中使用的试剂和仪器应符合实验要求，避免影响实验结果。
3. 实验后应及时清洗实验台和仪器，保持实验环境整洁。
总结：DNA提取实验是生物学实验中的基础操作，掌握好DNA提取的原理和技能对于后续实验具有重要意义。
通过本次实验，我对DNA提取有了更深入的了解，也提高了实验操作的技能。
希望通过不断实验和学习，能够更好地运用DNA提取技术，为生物学研究做出更大的贡献。
（以上内容为虚构内容，仅供参考）。
试验一植物基因组DNA提取
实验一植物基因组DNA提取目的：了解植物细胞的特点，掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。
原理：用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品，提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子，以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用，而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质，从而减少了蛋白质对DNA的污染。
然后用CTAB处理，在特定的盐浓度下，CTAB 使基因组DNA处于溶解状态，而蛋白质仍为沉淀。
经细胞破碎液获得的DNA 粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理，其中酚是高效的蛋白变性剂，可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉，然后用氯仿、异戊醇处理，一方面可达到去蛋白的目的，另一方面还可去除残留的酚。
一、材料植物的根、茎、叶。
二、设备移液管，高速冷冻离心机，台式离心机，水浴锅。
三、试剂1、CTAB或Nacl溶液：4.1克NaCl溶解于80ml水，缓慢加入10克CTAB，加水至100ml。
2、其它试剂：氯仿、异戊醇（24：1），酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），异丙醇，TE，10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml），5mol/LNaCl。
四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干，用蒸馏水洗两次，然后用超纯水洗一遍，吸干，剪碎称0.5-0.25克。
2、将所取材料放入预冷的研钵（研钵提前要灭菌），研成粉末后置于7ml离心管内（可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulＣＴＡＢ后用玻棒捣碎）。
3、加入2.4ml 65℃预热的CTAB，充分混合后65℃水浴90min以上，冷却到室温，加入等体积氯仿异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min，取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀，-20℃度放置20min，4℃离心5000g×5min，去上清。
4、再沉淀中加入0.6ml的65℃CTAB温育30min，待沉淀充分溶解，加入等体积氯仿异戊醇充分混匀，4℃离心6000g×5min，去上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇，轻轻混匀-20℃放置20min。
实验1植物基因组DNA的提取
实验1 转基因植物PCR 检测一、植物DNA 的提取技术(CTAB 法)一、实验目的1.掌握用CTAB 法提取植物总DNA 的方法和基本原理。
2.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA 抽提方法。
二、原理CTAB 法[十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide ，简称为CTAB)]是一种快速简便的提取植物总DNA 的方法。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，然后加入CTAB ，CTAB 是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使核酸(DNA 、RNA)得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA 、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入无水乙醇使DNA 沉淀，沉淀DNA 溶于TE 溶液中，即得植物总DNA 溶液。
三、实验材料大豆幼苗[材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响。
通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集过程中应尽可能保持组织材料所含的水分。
通常的做法是取样时立即用浸湿的纱布包裹采集到的组织材料，放置在带有冷藏功能的采集箱中，这样通常使组织材料在3-5d 内仍然保持新鲜。
野外远距离采集样本时，在可能的条件下应冷冻保存（如放置于液氮中）；当不具备冷冻条件时，最好用盛有无水CaSO4的瓶子分别保存，使其迅速干燥，这种方法可将材料保存数月，返回后应尽快进行DNA 的提取工作。
那些具有大量次生代谢产物（如单宁、酚类、醌类等）的植物材料，应尽可能采集幼嫩组织。
]四、试剂4.1 CTAB 提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na 2，1.4mol/L NaCl （如表1），2% CTAB ，使用前加入0.1%（V/V ）的β-巯基乙醇。
表1 CTAB 提取缓冲液配制4.2 TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA （ pH8.0）。
提取和分析DNA实验报告
提取和分析DNA实验报告DNA提取是生物学实验中的重要步骤，有助于从各种生物组织中分离出DNA并进行后续分析。
本实验旨在提取DNA样本，并通过凝胶电泳等方法对提取得到的DNA进行分析，以验证提取的DNA质量和纯度。
1. 实验材料与仪器实验所需材料包括DNA提取试剂盒、离心管、显微管、琼脂糖凝胶、电泳槽等。
实验仪器包括显微镜、电泳仪等。
2. 实验步骤（1）样本处理：将待检测样本加入DNA提取试剂盒中，根据试剂盒说明书进行细胞破碎、蛋白酶处理等步骤，将DNA溶解于缓冲液中。
（2）DNA沉淀与收集：通过离心加速DNA沉淀的过程，最终在离心管底部形成DNA沉淀。
（3）洗涤与溶解：分离DNA沉淀后，进行多次洗涤，并最终将DNA溶解于适量缓冲液中。
（4）凝胶电泳分析：在琼脂糖凝胶中进行凝胶电泳，通过电场作用使DNA在凝胶中移动，根据DNA条带特征分析样本DNA的大小和纯度。
3. 实验结果与分析通过凝胶电泳结果可以清晰地观察到不同大小的DNA条带，根据标准DNA分子量Marker的位置，可以估算待测DNA片段的大小。
如果实验操作正确，提取得到的DNA应具有良好的纯度和完整性，且无附加杂质。
若实验存在操作失误或污染等问题，则可能导致DNA提取不完整或DNA受损，影响到后续结果的准确性。
4. 实验总结与展望DNA提取与分析是生物学研究中不可或缺的重要环节，有效的DNA提取和分析技术能够为后续实验提供可靠的数据基础。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验操作技巧，提高DNA提取的效率和准确性，以应对更复杂的研究需求。
通过本次实验，我们成功实现DNA的提取与分析，验证了实验设计的有效性，并积累了丰富的操作经验，为今后的生物学研究工作奠定了基础。
DNA提取实验的重要性在于为科研和临床诊断提供了坚实的理论支持和实验数据，为生命科学领域的发展和进步发挥着重要作用。
DNA提取与分析实验的成功展示了科学实验的严谨性和方法的重要性，同时也提醒我们在实验操作中应保持谨慎与耐心，以获得准确可靠的实验结果。
实验一细菌基因组DNA的提取
细胞破碎 机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法； 化学试剂法：用SDS处理细胞； 酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。 DNA提取 SDS（十二烷基硫酸钠 ）法 ：SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中DNA与 蛋白质之间 常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏这种价键。 CTAB（十六烷基三甲基溴化铵 ）法 ：CTAB是一种阳离子去垢剂，它可 以溶解膜与脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来，并使蛋白质 变性，使DNA与蛋白质分离。 DNA纯化（去杂质） 蛋白质： 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或氯仿：异戊醇（24：1） 抽提。 RNA ：常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大分子的RNA。 酚类物质： 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的材料。 多糖： 提取液中加1％PVP。
三、操作步骤
1、细菌 37℃ 过夜培养，取1ml培养物 12000rpm 室温离心 1min。
2、沉淀物加入180ul TE缓冲液，充分重悬细菌；再加入20ul 50mg/ml溶菌酶，混匀后于 30℃温育10min。 3、12000rpm 离心 5min, 弃上清后加入200 ul Buffer BTL，漩涡震荡悬浮细胞。 4、加入25ul 蛋白酶K溶液，振荡器混匀，于55℃温育30min，每隔10min 漩涡震荡一次。 5、加入220ul Buffer BDL，颠倒混匀，于65℃温育10min。 6、加入220ul 无水乙醇，以最大速度漩涡震荡20s。 7、转移样品至DNA 纯化柱中，纯化柱下端安装2ml收集管,12000rpm离心1min使DNA结 合在纯化柱上，弃去收集管。 8、将DNA纯化柱安装到新的2ml收集管中，加入500ul Buffer HB，12000rpm离心1min， 弃去滤液。
实验报告DNA提取与纯化
实验报告DNA提取与纯化实验报告：DNA 提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从不同的生物样本中提取并纯化 DNA，以获取高纯度、高质量的 DNA 用于后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等。
二、实验原理DNA 存在于细胞核内，与蛋白质等成分结合形成染色质。
在提取过程中，需要通过裂解细胞，使 DNA 释放出来，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的 DNA。
常用的提取方法包括酚氯仿抽提法、盐析法、硅胶膜吸附法等。
本次实验采用的是试剂盒提取法，其原理是基于硅胶膜对 DNA 的特异性吸附，在特定的缓冲液条件下，DNA 能够结合到硅胶膜上，而蛋白质、多糖等杂质则被去除。
经过洗涤去除杂质后，用洗脱液将 DNA 从硅胶膜上洗脱下来，从而得到纯化的 DNA。
三、实验材料与设备1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）植物叶片细菌培养液DNA 提取试剂盒无水乙醇异丙醇氯仿蛋白酶 KRNA 酶 A2、实验设备离心机移液器恒温振荡器电泳仪紫外分光光度计四、实验步骤1、样本处理动物组织：称取适量的动物组织，剪碎后加入裂解液和蛋白酶 K，在 55℃恒温振荡器中孵育，直至组织完全裂解。
植物叶片：取新鲜的植物叶片，用液氮研磨成粉末，加入提取缓冲液和蛋白酶 K，在 65℃水浴中孵育。
细菌培养液：离心收集细菌沉淀，加入裂解液和溶菌酶，重悬后在37℃孵育。
2、 DNA 提取将处理后的样本加入到吸附柱中，离心使液体通过吸附柱，DNA 被吸附到硅胶膜上。
加入洗涤液，离心洗涤吸附柱，去除杂质。
加入洗脱液，离心洗脱 DNA，收集洗脱液。
3、 DNA 纯化向洗脱液中加入等体积的异丙醇，混匀后离心沉淀 DNA。
用 70%的乙醇洗涤 DNA 沉淀，离心去除乙醇。
干燥 DNA 沉淀，用适量的 TE 缓冲液溶解 DNA。
4、 DNA 质量检测取少量 DNA 溶液，用紫外分光光度计测定其在 260nm 和 280nm 处的吸光度，计算 A260/A280 的比值，以评估 DNA 的纯度。
dna提取实验报告
dna提取实验报告导言：DNA（脱氧核糖核酸）是人类和其他生物体遗传信息的重要载体。
通过DNA提取实验可以从细胞中分离出DNA，从而进一步研究其结构和功能。
本实验旨在探究DNA提取的原理、步骤和应用，并通过亲自进行实验，加深对DNA提取的理解。
一、DNA提取原理DNA提取的原理基于细胞膜的破裂、细胞核的裂解以及DNA 与其他细胞组分的分离。
这一过程主要包括细胞溶解、DNA纯化和DNA溶解等步骤。
细胞溶解：通过加入试剂体系（如洗涤缓冲液和洗涤液）破坏细胞膜，使细胞内的DNA暴露于溶液中。
DNA纯化：利用盐离子和洗涤液等的特性，将DNA与其他细胞组分分离。
DNA会在高盐浓度下溶于溶液中，而其他细胞组分则难以溶解。
DNA溶解：通过加入合适的缓冲液，使DNA能够在溶液中稳定存在。
二、实验过程1. 实验材料准备本实验所需材料包括：细胞样本、洗涤缓冲液、细胞裂解缓冲液、洗涤液、溶解缓冲液等。
2. 细胞裂解挑选合适的细胞样本（如洋葱或口腔黏膜）并切碎，将细胞样本放入细胞裂解缓冲液中，用细研针搅拌裂解。
3. 细胞裂解液处理加入洗涤缓冲液，并轻轻翻转试管使细胞溶液均匀混合，之后离心离心管以分离上清液和沉淀。
4. DNA纯化将清液转移到新的离心管中，并加入洗涤液。
轻轻翻转试管混合，离心离心管以分离清液和沉淀。
5. DNA溶解将沉淀加入溶解缓冲液中，轻轻翻转试管使其溶解。
三、实验结果与分析通过实验，我们可以观察到DNA溶液呈现出粘稠的透明液体，且能够延展成长丝状。
这表明我们成功从细胞中提取出了DNA。
DNA提取在生物学领域有着广泛的应用。
首先，DNA提取是遗传学研究的基础。
通过DNA提取，可以对生物个体的基因组进行分析，从而了解遗传信息，研究基因突变和遗传疾病等。
其次，DNA提取也常用于法医学和人类学中的个体鉴定。
通过对DNA进行分析，可以确保正确地辨认出身份，并用于破案和家族追溯等方面。
结论：通过本次实验，我们了解了DNA提取的原理和步骤，并成功从细胞中提取出了DNA。
DNA提取实验报告
DNA提取实验报告实验报告：DNA提取实验一、引言DNA提取是生物学实验中常见且重要的步骤，可以从细胞或组织中分离出DNA分子，并将其用于后续的分子生物学研究。
DNA提取可以用于基因组测序、PCR、限制性酶切、基因重组等实验。
本实验旨在通过一系列步骤，从土壤样品中提取纯度较高的DNA。
二、材料与方法材料：1.细菌培养基和试管2.无菌吸管和无菌离心管3.无菌培养皿和微量移液器4.DNA提取试剂盒（包括溶液、溶剂和酶等）5.离心机和冷冻干燥机方法：1.准备土壤样品，将其称取0.5克加入细菌培养基中。
2.震荡培养皿，使土壤样品均匀悬浮在细菌培养基中。
3.将培养皿放入震荡器中，在37°C恒温下震荡培养24小时。
4. 从培养液中取出2ml用无菌离心管离心2分钟，根据菌落情况可调整离心时间。
5. 倒出上清液后，加入0.5ml TE溶液进行洗涤。
6. 离心2分钟后，倒出上清液，加入0.5ml溶胀液进行洗涤。
7. 在离心后，倒出上清液，加入0.5ml各种试剂进行洗涤和裂解。
8.将洗涤和裂解好的液体转移到另一个无菌离心管中，用冷冻干燥机中15分钟。
9.用无菌离心管接着进行DNA纯化、酶切和PCR等实验。
三、结果与讨论本实验成功从土壤样品中提取到了较高纯度的DNA，提取的DNA量为300ng/ul。
通过电泳检测，可以看到DNA条带较为清晰，没有明显的降解。
这说明提取步骤中的洗涤和裂解等操作都较为有效，成功地去除了样品中的杂质和抑制物，使得提取的DNA纯度较高。
此外，实验中使用的试剂盒也起到了很好的作用，提供了高效的DNA提取试剂和相关酶。
DNA提取实验中有几个关键的步骤，包括洗涤、裂解和纯化。
洗涤过程中，TE溶液可以有效去除土壤样品中的盐类和细胞残渣，溶胀液可以去除蛋白质和脂类等杂质。
裂解过程中，酶的作用可以有效裂解细胞壁和细胞膜，释放DNA分子。
纯化过程中，通过离心和冷冻干燥等操作，可以将DNA分子重积到离心管底部，并去除杂质。
实验报告DNA提取与纯化
实验报告DNA提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从给定的生物样本中提取并纯化 DNA，以获取高纯度、高质量的 DNA 样品，为后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等提供可靠的材料。
二、实验原理DNA 存在于细胞核内，与蛋白质等物质结合形成染色质。
在提取过程中，需要通过细胞裂解、去除蛋白质和其他杂质等步骤来分离DNA。
细胞裂解可以使用物理方法（如研磨、超声破碎）或化学方法（如使用裂解液）。
去除蛋白质常用的方法有蛋白酶 K 消化和酚/氯仿抽提。
DNA 在一定浓度的盐溶液中可溶解，而在乙醇中会沉淀，利用这一特性可对其进行纯化。
三、实验材料与试剂（一）实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物叶片。
（二）实验试剂1、细胞裂解液：包含 TrisHCl、EDTA、SDS 等成分，用于破坏细胞膜和核膜，释放 DNA。
2、蛋白酶 K：能分解与 DNA 结合的蛋白质。
3、酚/氯仿/异戊醇混合液：用于去除蛋白质。
4、无水乙醇、70%乙醇：用于沉淀和洗涤 DNA。
5、 NaCl 溶液：提供适当的离子强度。
6、 TE 缓冲液（TrisEDTA 缓冲液）：用于保存 DNA。
（三）实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、涡旋振荡器5、冰箱6、紫外分光光度计四、实验步骤（一）样本处理1、动物组织：将新鲜的动物组织剪碎，放入匀浆器中，加入适量的裂解液，匀浆至组织完全破碎。
2、植物叶片：取适量新鲜叶片，液氮研磨成粉末，加入裂解液。
（二）细胞裂解1、将处理好的样本转移至离心管中，在 55℃水浴中孵育 1 2 小时，期间每隔一段时间轻轻涡旋振荡，以促进细胞裂解。
（三）去除蛋白质1、加入蛋白酶 K，使其终浓度达到一定值，在 55℃继续孵育 1 2小时。
2、冷却至室温后，加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液，充分混匀，然后在离心机中以一定的转速离心一定时间。
3、吸取上清液至新的离心管中，重复酚/氯仿抽提步骤 1 2 次，直至中间层无白色蛋白质沉淀。
分子生物学实验一二报告
分子生物学实验一二报告实验一：DNA提取引言：DNA提取是分子生物学实验中的基础实验，通过提取DNA我们可以进一步进行分子生物学上的一系列实验。
DNA提取的目的是从细胞中分离出DNA，常用于构建基因库、PCR扩增等实验。
材料与方法：1.取一定数量的细胞样本，如细菌、植物、动物组织等。
2.加入细胞裂解缓冲液，将细胞破裂释放DNA。
3.加入蛋白酶K以降解蛋白质。
4.加入酒精使DNA沉淀，并用无菌纯水洗涤DNA沉淀。
5. 用Tris-EDTA缓冲液溶解DNA。
6.用紫外可见光谱仪检测DNA浓度和纯度。
结果与讨论：通过以上步骤，我们成功地从细胞中提取出了DNA。
观察到DNA溶液呈现典型的黄绿色，说明DNA浓度较高。
利用紫外可见光谱仪检测DNA的浓度和纯度，结果显示DNA浓度为2μg/μL，纯度（A260/A280）为1.8，表明提取的DNA质量良好。
实验二：PCR扩增引言：PCR全称聚合酶链式反应，是一种快速、特异性并且高灵敏度的DNA扩增技术。
PCR可以扩增出目标DNA的大量复制品，常用于基因克隆、基因突变分析等实验。
材料与方法：1.准备PCR反应体系，包括目标DNA，引物，聚合酶、缓冲液及dNTPs。
2.将反应体系加入PCR仪中，设置好反应条件（温度、时间）。
3.进行PCR扩增反应。
4.用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
结果与讨论：通过PCR扩增反应，我们成功得到了目标DNA的扩增产物。
在琼脂糖凝胶电泳中观察到明显的目标DNA条带，且相对应的分子量与预期一致。
这表明PCR扩增反应成功地复制出了目标DNA，并得到纯净的PCR产物。
结论：通过DNA提取实验，我们成功地从细胞中提取出了DNA，并通过PCR扩增技术得到了目标DNA的扩增产物。
这些结果验证了我们实验的有效性，并为后续的分子生物学研究奠定了基础。
附注：以上报告仅为示例，实际报告应根据具体实验结果和实验目的进行撰写。
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告：DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，能够从样本中纯化出DNA，用于后续的分析和实验。
本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法，并对提取结果进行分析和评估。
二、实验步骤1. 样本准备：选择合适的样本进行DNA提取，如植物组织、动物组织或微生物培养物。
样本应储存于-80℃的冰箱中，以防止DNA降解。
2. 细胞破碎：将样本取出，加入细胞破碎缓冲液，使用均质机或研钵等方法将细胞破碎，使细胞膜被破坏，释放DNA。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶，将样本中的蛋白质降解，以去除蛋白质的干扰。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀后离心，使混合液分为上下两层，上层为DNA上清液。
5. DNA沉淀：将DNA上清液转移至新离心管中，加入等体积的冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，待DNA逐渐沉淀出来。
6. 洗涤：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除异丙醇和其他杂质。
7. 重溶：将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶，使其溶解。
8. 定量和纯化：使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度，并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。
三、结果分析通过以上步骤，我们成功提取了DNA，并进行了初步的纯化。
下面是对实验结果进行分析和评估：1. DNA提取效果评估：- 可见分光光度计测定DNA浓度：根据光度计读数，我们可以计算出DNA的浓度。
通常，越高的读数代表着更高的DNA浓度。
- 凝胶电泳：通过凝胶电泳，我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。
理想情况下，DNA应该呈现出清晰的条带，并且没有明显的降解现象。
2. 实验结果评价：- DNA浓度：根据光度计读数，我们可以评估DNA提取的效果。
如果浓度较高，说明提取效果较好；如果浓度较低，说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。
- DNA完整性：通过观察凝胶电泳结果，我们可以评估提取的DNA是否完整。
dna提取实验报告
dna提取实验报告DNA提取实验报告。
实验目的，通过本实验，掌握DNA提取的基本原理和方法，了解DNA在生物学研究中的重要性。
实验材料和仪器，鸡蛋白、盐酸、乙醇、玻璃棒、试管、离心机、恒温水浴。
实验步骤：1. 取一只鸡蛋，打破蛋壳，将鸡蛋白倒入试管中。
2. 加入少量盐酸，轻轻摇匀，使鸡蛋白变得透明。
3. 将试管放入恒温水浴中，加热至60摄氏度，恒温10分钟。
4. 取出试管，用玻璃棒搅拌均匀，使蛋白凝固。
5. 加入同体积的乙醇，轻轻摇匀，观察到白色絮状物沉淀于试管底部。
6. 将试管放入离心机，离心5分钟，离心后可见白色DNA沉淀于试管底部。
实验结果与分析：通过以上实验步骤，成功从鸡蛋中提取出了DNA。
实验中，盐酸的作用是使蛋白质变得透明，加热则是使蛋白质凝固，乙醇的加入则有利于DNA的沉淀。
离心机的使用则能够使DNA更好地沉淀于试管底部。
通过本实验，我们不仅了解了DNA提取的基本原理和方法，也对DNA在生物学研究中的重要性有了更深刻的认识。
实验总结：DNA提取实验是生物学实验中的基础实验，通过本实验的操作，我们深入理解了DNA提取的原理和方法，也对DNA在生物学研究中的应用有了更直观的认识。
在今后的学习和科研中，我们将进一步深入研究DNA的结构和功能，探索更多关于DNA的奥秘。
实验注意事项：1. 实验中应注意个人安全，避免盐酸和乙醇的直接接触。
2. 恒温水浴的温度应控制在60摄氏度，避免过高温度损坏DNA。
3. 实验操作时应轻柔，避免对DNA的损伤。
通过本次实验，我们对DNA提取有了更深入的了解，也为今后的生物学研究打下了坚实的基础。
DNA作为生命的密码，其重要性不言而喻，希望通过我们的努力，能够揭开更多关于DNA的奥秘，为人类的生命科学研究做出更大的贡献。
实验一---DNA提取
天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核 中。要从细胞中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把蛋白质 和糖去除，同时除去RNA及无机离子等，从中分离DNA 。
提取植物 DNA 的方法主要采用 SDS 和 CTAB 法，对它们进行稍 加修改就可以应用于 DNA的微量提取。两种方法均采用去污剂 裂解细胞并保护DNA不受内源核酸内切酶降解。
实验材料和试剂
实验材料：新鲜植物组织。 实验所需试剂： DNA提取缓冲液 100 mmol/L Tris-HCl (pH8.0) 50mmol/L EDTA 500 mmol/L NaCl 1.5% SDS 24:1/氯仿:戊醇 2×CTAB buffer 100mM Tris pH8.0 1.4M NaCl 20 mM EDTA pH8.0 2% CTAB 0.2% 巯基乙醇 酚/氯仿（1:1） 氯仿：50 ml 无水乙醇
核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类 似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸 和核苷酸大都呈酸味。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶 于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达 40g/L。DNA在水中为10g/L，呈 黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性 或弱碱性溶液中较稳定。
具体方法简单说来就是利用液氮对植物组织进行研磨，从而破 碎细胞。细胞提取液中含有的 SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜， 使蛋白质变性而沉淀下来。 EDTA抑制 DNA酶的活性。再用酚、 氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。
细胞破碎
①机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法；
dna的提取 实验报告
dna的提取实验报告DNA的提取实验报告引言：DNA（脱氧核糖核酸）是构成生命的基本遗传物质，它携带着生物个体的遗传信息。
DNA的提取是生物学实验中常见的一项重要技术，通过提取DNA，我们可以进一步研究生物的遗传特征、进化历程以及疾病的发生机制等。
本实验旨在探究DNA的提取方法，并通过实际操作来加深对DNA结构和功能的认识。
材料与方法：1. 实验材料：- 鸡蛋白溶液- 酒精- 盐水- 洗洁精- 酶解液- 水浴- 离心机- 显微镜2. 实验步骤：1. 将鸡蛋白溶液倒入试管中，加入适量的盐水，并加入洗洁精，轻轻摇晃混合。
2. 将酶解液加入试管中，再次轻轻摇晃混合，使酶解液与鸡蛋白溶液充分接触。
3. 将试管放入水浴中，保持温度在50℃左右，进行酶解反应。
4. 取出试管，加入等体积的酒精，轻轻旋转试管，观察DNA的析出。
5. 使用离心机将混合液离心，分离出DNA。
6. 将离心后的上清液倒掉，加入适量的盐水，再次离心，以去除残留的酒精。
7. 使用显微镜观察提取得到的DNA。
结果与讨论：经过实验操作，我们成功地提取到了DNA，并观察到了DNA的析出现象。
在实验过程中，酶解液的作用是破坏细胞膜和核膜，使DNA从细胞内释放出来。
酒精的加入则通过与DNA中的水结合，使DNA分子在溶液中析出形成细长的纤维状物质。
DNA提取的关键步骤在于酶解反应的温度和时间的控制。
过高的温度或过长的反应时间会导致DNA的降解，从而影响提取效果。
同时，酒精的加入和离心的速度也会影响DNA的析出和分离。
实验中我们选择了适宜的条件，保证了DNA的提取效果。
DNA的提取方法不仅在实验室中有广泛应用，也在现实生活中有重要意义。
例如，在犯罪侦查中，通过提取作案现场的DNA样本，可以帮助警方追踪犯罪嫌疑人；在医学诊断中，通过提取患者体液中的DNA，可以进行基因检测，帮助医生判断疾病的类型和治疗方案。
总结：通过本次实验，我们深入了解了DNA的提取方法，并通过实际操作加深了对DNA结构和功能的认识。
实验一SDS法提取植物基因组DNA
实验一SDS法提取植物基因组DNA 一材料、试剂和仪器
1材料新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料
2试剂
(1)提取缓冲液
Tris-HCl100mmol/L（pH8.0）
EDTA50mmol/L（pH8.0）
NaCl500mmol/L
灭菌后加β-巯基乙醇至10mmol/L
(2)裂解液20%SDS
(3)高盐溶液5mol/LKAc
(4)RNaseA10mg/ml
(5)异丙醇
(6)灭菌ddH2O或TE
3.仪器:离心机，恒温水浴,台式高速离心机，电泳装置
二实验程序
1、取幼嫩的组织材料1-2g,用蒸馏水冲洗干净，再用灭菌
ddH2O冲洗2次，放入经液氮预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉末状，用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到加有500μL提取液的离心管中,轻轻混匀。
2、向管中加入50μL20%SDS溶液，混匀，不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂，65℃保温10min，并不时摇动。
3、加入150μL5mol/LKAc，混匀，置冰上20-30min。
4、4℃,15000rpm离心15min,转移上清到另一离心管中，加入0.7V的异丙醇，混匀，-20℃沉淀30min。
5、12000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀，吹干后加入适量的灭菌ddH2O或TE溶解DNA。
6、加入1/10体积的RNaseA，37℃保温20min，除去RNA。
7、CI抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30min。
12000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀。
8、用400μL70%乙醇洗一次后，吹干，加入适量的灭菌ddH2O 或TE溶解DNA。
9、电泳检测完整性。
DNA提取实验
DNA提取实验DNA提取是现代生物学研究的基础实验之一，它可以从生物体内分离和纯化DNA分子，为各种分子生物学技术和研究提供重要的基础。
本实验旨在介绍DNA提取的基本步骤和操作技巧。
材料和仪器：1. 新鲜的生物样本（如水果、蔬菜、口腔拭子等）2. DNA提取试剂盒3. 离心管4. 加热器5. 离心机6. 显微镜实验步骤：1. 样本处理：a) 将生物样本取出，如水果则切成小块，口腔拭子可直接使用。
b) 将样本放入离心管中。
c) 使用试剂盒提供的试剂，在样本中加入适量的细胞裂解缓冲液。
d) 轻轻摇动离心管，使样本与缓冲液均匀混合。
e) 将离心管放入加热器中，在60摄氏度恒温加热20-30分钟，以促进细胞的破裂和DNA的释放。
2. 细胞裂解：a) 将加热后的样本离心管取出，稍微晃动离心管使样本充分混合。
b) 加入适量的蛋白酶，用离心管盖密封离心管，并再次摇动离心管混合。
c) 将离心管放入加热器中，以高温（通常为60-65摄氏度）恒温孵育10分钟，以使蛋白酶发挥作用，降解细胞蛋白。
3. DNA沉淀：a) 将加热后的样本离心管取出，加入等体积的冷异丙醇，并摇动离心管使两者充分混合。
b) 将混合溶液离心10-20分钟，以最大速度离心沉淀DNA。
c) 抽掉上层溶液，离心沉淀的DNA。
d) 加入适量的70%乙醇洗涤一次，以去除残留的盐和其他杂质。
e) 将离心管倒置于纸巾上，待乙醇挥发后，加入适量的去离子水重新溶解DNA。
4. DNA纯化：a) 使用显微镜观察提取的DNA溶液中是否有明显的纹理和颜色，以确保DNA提取的成功。
b) 使用测量纯度和浓度的仪器对提取的DNA进行定量分析，并记录结果。
c) 将DNA溶液保存在低温冷冻条件下，以防止DNA的降解和损伤。
实验注意事项：1. 实验前需佩戴实验手套和口罩，防止污染和细菌感染。
2. 操作过程中需注意无菌操作，避免污染。
3. 实验前要确保所有仪器和材料已经正确消毒和清洗。
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实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
2．SDS 法：利用高浓度的阴离子去垢剂SDS（十二烷基磺酸钠，Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS）使DNA 与蛋白质分离，在高温（55～65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
一般生物体的基因组DNA 为107~109bp，在基因克隆工作中，通常要求制备的大分子DNA 的分子量为克隆片段长度的4 倍以上，否则会由于制备过程中随机断裂的末端多为平末端，导致酶切后有效末端太少，可用于克隆的比例太低，严重影响克隆工作。
因此有效制备大分子DNA 的方法必须考虑两个原则：（1）尽量去除蛋白质、RNA、次生代谢物质（如多酚、类黄酮等）、多糖等杂质，并防止和抑制内源DNase 对DNA 的降解。
（2）尽量减少对溶液中DNA 的机械剪切破坏。
几乎所有的DNase 都需要Mg2+或Mn2+为辅因子，故实现（1）尽量去除蛋白质的要求，需加入一定浓度的螯合剂，如EDTA、柠檬酸，而且整个提取过程应在较低温度下进行（一般利用液氮或冰浴）。
为实现（2）需要在DNA 处于溶解状态时，尽量减弱溶液的涡旋，而且动作要轻柔，在进行DNA 溶液转移时用大口（或剪口）吸管。
提取的DNA 是否为纯净、双链、高分子的化合物，一般要通过紫外吸收、化学测定、“熔点”（melting temperature, Tm）测定、电镜观察及电泳分离等方法鉴定。
本实验采用CTAB 法提取DNA 并通过紫外吸收法鉴定。
3材料和试剂：3.1长春花叶片3.2 试剂（1）CTAB 提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na2，1.4mol/LNaCl（如表1），2% CTAB，使用前加入0.1%（V/V）的β-巯基乙醇。
表1 CTAB提取缓冲液配制用HCl 调pH 值。
（2）TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA（pH8.0）。
（3）氯仿/异戊醇：将氯仿和异戊醇按体积24:1的比例混匀，置棕色瓶中，4℃保存。
4 仪器设备离心机、3离心管、紫外分光光度计、微量移液器、吸头、吸水纸、水浴锅、冰箱、电子天平、高压灭菌锅、一次性手套、电泳仪等。
5 方法与步骤：5.1 在提取过程中用到的吸头，提取缓冲液等先高压灭菌（121℃，20min），取出后待用；5.2 取大约指甲盖大小的植物叶片，放入1.5ml的EP管中, 加入液氮，用钢珠研磨成粉末状，再加入600μL的CTAB提取缓冲液，；5.3 65℃水浴锅中水浴40min，加入等体积的氯仿：异戊醇(24:1)，轻轻混匀，颠倒几次，乳化1min。
4℃，11,000rpm离心10min；5.4 吸上清到新离心管中（约400μl），加入等体积预冷异丙醇，混匀，-20℃放置20min沉淀DNA；5.5 5000 rpm常温离心15min，倒掉上清液；5.6 用75%乙醇（900μl）洗沉淀，11,000rpm离心2min，倒掉乙醇，再用乙醇同样处理一次；5.7 置于干燥仪干燥10min，将水分蒸干；5.8 加入50μL去离子水，融解DNA，同时加入RNA酶(按每50μL DNA加入1μL RNase)，37℃30min；5.9 利用分光光度计检测OD260,同时进行1％凝胶电泳检测；5.10 琼脂糖电泳检测DNA：制作1%的琼脂糖凝胶，吸取提取的DNA溶液5μL 电泳检测；5.11 -20℃保存DNA备用；5.12 提取的DNA的浓度检测：取少量待测DNA样品，用蒸馏水稀释1,000倍；用蒸馏水做空白，分别在260nm、280nm测DNA样品的吸光值。
【注意事项】1. 叶片磨得越细越好。
2. 注意移液器的正确使用。
3. 由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此，除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出DNA酶，使DNA 降解。
6. 思考题1．制备的DNA 在什么溶液中较稳定?2．为了保证植物DNA 的完整性，在吸取样品、抽提过程中应注意什么？7 实验结果：结果计算式中OD260nm 为260nm 处的光密度；L 为比色杯光径（cm）；0.020 为1μg/mL DNA 钠盐的光密度。
DNA 的紫外吸收高峰为260nm，吸收低峰为230nm，而蛋白质的紫外吸收高峰为280nm。
上述DNA 溶液适当稀释后，在751 分光光度计上测定其OD260nm、OD230nm 和OD280nm。
如OD260nm/ OD230nm≥2OD260nm/ OD280nm≥1.8，表示RNA 已经除净，蛋白含量不超过0.3％。
8 实验分析：传统DNA提取方法CTAB 法、SDS 法是在裂解细胞的基础上,多次苯酚氯仿等有机溶剂抽提使蛋白质变性沉淀于有机相,而核酸保留在水相,达到分离核酸的目的;加入RNA 酶除去核酸中的RNA; 然后加入异丙醇、乙醇等沉淀DNA;用70 %乙醇漂洗沉淀,除去分离过程中残留的有机溶剂和盐离子,以免影响核酸溶解和抑制后续步骤的酶促反应,最后用TE 溶解DNA 备用。
CTAB 是一种阳离子去污剂,能与核酸形成复合物,此复合物在高盐( > 0. 7 mol/ L) 浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0. 1～0. 5 mol/ L NaCl) 下CTAB - 核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。
通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
经离心弃上清后,CTAB - 核酸复合物再用70 %酒精浸泡可洗脱掉CTAB 。
SDS 是一种阴离子去垢剂,在高温(55～65 ℃) 条件下能裂解细胞,使染色体离析、蛋白变性,同时SDS 与蛋白质和多糖结合成复合物,释放出核酸;提高盐(KAc 或NH4Ac) 浓度并降低温度(冰浴) ,使 SDS - 蛋白质复合物转变为溶解度更小的钾盐形式,使蛋白质及多糖杂质沉淀更加完全,离心后除去沉淀;上清液中的 DNA 用酚/ 氯仿抽提,反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
SDS 法操作简单,温和,也可提取到高分子量的DNA ,但所得到的产物含糖类杂质较多。
基因组DNA 经典的提取方法由于无需昂贵仪器和药品,提取的DNA 纯度能够满足一般分子生物学的需要,一直作为DNA 提取的常规方法。
但这种方法操作步骤复杂,耗时长,易交叉污染,残留在DNA 溶液中有机物质对DNA 聚合酶有抑制作用。
另外,酚、氯仿等有机溶剂易造成环境污染,有损操作者健康。
DNA提取新方法近年来出现了以螯合树脂、特异性 DNA 吸附膜、离子交换纯化柱及磁珠或玻璃粉吸附等基础 DNA 提取新方法。
这些方法主要应用于提取病毒、微生物、人和动物细胞、包埋组织样品、古生物标本及土壤环境样品 DNA 。
已有多篇利用纯化柱和玻璃粉纯化植物基因组 DNA 的报道。
马小军等将CTAB 液提取和氯仿抽提两步的上清液直接通过Wizard 纯化系统纯化得到的DNA ,RAPD 扩增效果良好,产率达2 250μg/ g 。
张博等用硅珠(SiO2) 颗粒吸附DNA 纯化方法,从不同树木叶片中均得到了高质量的 DNA 样品。
黄椰林等对常规CTAB 法提取的DNA 用玻璃粉悬浮液纯化,所获DN 的APCR 产物能直接测序,比较适用于富含黏多糖、单宁、多酚和萜类化合物等次生代谢物的植物样品和长期保存的标本材料。
袁长春等也用玻璃粉吸附法从富含酚类的茶类植物中提取纯净的总DNA。
目前国内外开发了多种商品化的DNA 提取纯化试剂盒,其分离原理有的利用核酸的分子量差异,有的利用特异性膜与DNA 结合达到分离、回收的目的,如离子交换柱、磁珠等。
这些试剂盒针对不同的材料来源设计了不同的提取方法,操作简单、高效, DNA 质量较高,但价格昂贵,提取量少。
著名的国外的试剂盒生产厂家有Sigma2Aldrich、Promega、Invitrogen、 TaKaRa 、Whatman 等,它们针对不同来源的材料如微生物、动物体液、血液和组织、植物、加工产品、转基因产品等开发出一系列的试剂盒。
国内的生物公司发展迅速,如上海生工、北京天为、北京博奥等也开发了系列试剂盒,质量与国外厂家相当,价格较低。
除此之外,由于核酸提取纯化试剂盒制作门槛低,还有大量的生物公司提供试剂盒产品,使用者一定要慎重选择。
DNA 试剂盒经过了几十年的发展,已经不再局限于单纯的提取纯化,有些厂家推出了DNA 提取—扩增 PCR 试剂盒,将DNA 提取和PCR 扩增结合起来,极大的提高了工作效率,如Sigma2Aldrich 公司的Sigma’s Extract2N2Amp Plant PCR kit 等。