【K12教育学习资料】高中生物第1章微生物培养技术第3节测定微生物的数量学案
高三生物一轮复习导学案微生物的培养技术及应用
选择性必修三第1章微生物的培养技术及应用一、你从教材上找到的关键性语句：Ⅰ、微生物的基本培养技术1. 微生物的定义：肉眼难以看清，需要借助光学显微镜或电子显微镜才能观察到的一切微小生物的总称。
3.微生物菌落：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
由单个微生物繁殖形成的纯培养物就是一个单菌落；4.培养基的配制（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。
（2）培养基作用：培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物（3）培养基类型：①按物理状态可分为液体培养基和固体培养基。
②按功能可分为选择培养基和鉴别培养基。
（4）成分：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对、、、、、、、、、、、以及、、、的要求。
5. 无菌技术（1）关键：防止外来杂菌的入侵。
（2）无菌技术工作两个方面：①对操作的_空间、操作者的_衣着_和_手_进行_清洁_和_消毒_；②对用于微生物培养的_器皿_、__接种用具__和__培养基_等进行__灭菌_；（3）无菌技术主要包括消毒和灭菌项目理化因素的作用强度能否消灭芽孢和孢子常用方法消毒较为温和不能煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药物消毒法、紫外线照射灭菌强烈能灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、湿热灭菌法6. 微生物的纯培养（1）培养物：在微生物学中，将接种于_培养基_内，在_合适条件_下形成的__含特定种类微生物的群体_称为培养物。
（2）纯培养物：由_单一个体_繁殖所获得的_微生物群体_称为纯培养物。
（3）纯培养：__获得纯培养物的过程_就是纯培养。
（4）微生物纯培养步骤：配制培养基—灭菌—接种—分离—培养。
Ⅱ、探究.实践：酵母菌的纯培养1.原理：采用__和___将__微生物_分散_在__上，之后得到的__一般是由单个微生物形成的__。
（1）制备培养基：配制培养基—灭菌—倒平板（2）接种和分离酵母菌：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。
高考生物总复习第一单元有机体中的细胞第一章细胞概述第3节测定微生物的数量名师课件中图版必修
解析：选D。在设计实验时，一定要涂布至 少3个平板，作为重复组，才能增强实验的 说服力与准确性，所以A、B两项不正确。C 项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的 计数结果与另两个相差太远，说明在操作过 程中可能出现了错误，因此，不能简单地用 3个平板的计数值求平均值。
要点二 间接计数法在统计微生物数目时的 注意事项 1.设置对照 (1)目的：排除实验中非测试因素对实验结 果的影响，提高实验结果的可信度。 (2)方法：取一个未接种的培养基与接种好 的培养基一起培养。
②为了保证结果准确，要选择一个合适的稀 释倍数，且同一稀释倍数的各个重复组菌落 数要相近，若设置的重复组中结果相差太远, 意味着操作有误，需重新实验。 (3)优点：能观察菌落特征。
例1 在探究培养液中酵母菌种群数量变 化的实验中，需利用计数板对微生物细胞进 行直接计数。计数板是一个特制的可在显微 镜下观察的载玻片，样品就滴在计数室内。 计数室由25×16＝400个小室组成，容纳液 体总体积为0.1 mm3。某同学操作时将1 mL 酵母菌样品加99 mL无菌水稀释，用无菌吸 管吸取少许使其自行渗入计数室，盖上盖玻 片并用滤纸吸去多余菌液，进行观察计数。
所需设备_简__单__，可迅速得到结果 3.优点
能观察到微生物的__形__态__特__征__ 4.缺点：难以计数_微__小___的细菌。 5.适用范围：一般适用于纯培养悬浮液中各种 _单__细_胞__菌_体_____的计数。 二、间接计数法 1.常用方法：_稀_释__平__板_计__数_法______。
2.检测天然水源中细菌总数和大肠菌群数 (1)细菌总数通常是指1 g或1 mL检测样品中 所含细_菌__菌_落______的总数,单位用cfu/g(mL) 表示。
(2)大肠菌群数通常是指每100 g或100 mL检 测样品中所含大肠菌群的实验数值，以 (MPN)表示。大肠菌群是37指在____℃条件下， 24 h内能发酵乳_糖_____，产酸产气的一需类___ 氧或兼_性_厌_____氧型革兰氏阴性无芽孢杆菌的 总称。大肠菌群数的检测，多常管用发酵 __________法，使用乳糖胆盐伊蛋红白－胨美培蓝养 基、___________琼脂培养基(EMB培养基) 和乳糖发酵管。
高中生物选修1《第1章微生物技术第3节微生物数量的测定【实验】测定土壤中微生...》37北师大教案设计
《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学设计教学目标（一）知识与技能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数（二）过程与方法分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性（三）情感、态度与价值观形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯教学重难点教学重点：对土样的选取和选择培养基的配制教学难点：对分解尿素的细菌的计数教学工具多媒体教学过程一、导：创设情景、激趣导入科学家需要一种耐热菌，后来在黄石公园的热泉中发现了，那我们需要分解尿素的细菌可能会在哪里找到呢？二、思：明确问题、独立思考1、在培养尿素分解菌的配方中，为微生物的生长提供碳源的是什么？提供氮源的的是什么？琼脂的作用是什么？2、该培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，其选择机制是什么？3、从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是怎样的？4、利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是什么？5、第二位同学的结果接近真实值。
你认为这两位同学的实验需要改进的操作是什么？6、请设计本实验的对照实验组：7、土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？三、议：组织交流、探究展示〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的的是尿素，琼脂的作用是凝固剂。
〖思考2〗该培养基对微生物具有（具有，不具有）选择作用。
如果具有，其选择机制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。
〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是（平均菌落数÷涂布的稀释液体积）×稀释倍数。
〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度。
〖思考5〗第二位同学的结果接近真实值。
你认为这两位同学的实验需要改进的操作是第一位同学需设置重复实验组；第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需重新实验。
〖思考6〗请设计本实验的对照实验组：方案1：其他同学用A同学的土样进行实验。
高中生物第1章微生物技术第3课时微生物数量的测定同步备课教学案北师大版选修
⾼中⽣物第1章微⽣物技术第3课时微⽣物数量的测定同步备课教学案北师⼤版选修第3课时微⽣物数量的测定[学习导航] 1.阅读教材P17内容，概述测定某种微⽣物数量的⽅法和步骤。
2.结合教材P15～17“测定⼟壤中微⽣物的数量”实验，掌握使⽤平板菌落计数法测定⼟壤中微⽣物的数量。
[重难点击] 1.掌握测定某种微⽣物数量的⽅法和步骤。
2.学会使⽤平板菌落计数法测定⼟壤中微⽣物的数量。
⼀、微⽣物数量测定的⽅法和原理微⽣物数量的测定也是重要的微⽣物技术之⼀，平板菌落计数法是⼀种应⽤⼴泛的微⽣物数量测定⽅法。
1.平板菌落计数法的原理：根据微⽣物在⾼度稀释的条件下，固体培养基上所形成的单个菌落，是由⼀个单细胞繁殖⽽成的，即⼀个菌落代表⼀个单细胞。
2.计算⽅法：从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算⽅法是：同⼀稀释度的菌落平均数÷0.2÷稀释度×10。
3.优缺点(1)优点：能测出样品的活菌数，可⽤于微⽣物的选种与育种、分离纯化及其他⽅⾯的测定。
(2)缺点：操作烦琐、时间较长、测定值常受各种因素的影响。
4.该⽅法统计的菌落数⽐活菌的实际数⽬低，这是因为当两个或多个细胞在⼀起时，平板上观察到的只是⼀个菌落。
1.为什么分离不同的微⽣物要采⽤不同的稀释度？答案⼟壤中各种微⽣物的数量是不同的，为获得不同类型的微⽣物，就需要按不同的稀释度进⾏分离。
2.平板菌落计数法(1)平板菌落计数法根据操作步骤的不同可分为哪两种？答案①涂布平板法：⽤灭过菌的涂布器将⼀定量(⼀般为0.1 mL)的适当稀释过的菌液涂布在琼脂培养基的表⾯，然后保温培养直到菌落的出现。
记录菌落的数⽬并换算成每毫升样品中的活细胞的数量。
②倒平板法：将已知体积(0.1～1 mL)的适当稀释过的菌液加到灭过菌的培养⽫内，然后倒⼊溶化后冷却⾄45 ℃的琼脂培养基，⽔平晃动混匀，待凝固后保温培养到出现菌落，然后与涂布平板法同样计数。
(2)平板菌落计数法中换算样品的含菌数依据什么数据换算？答案依据稀释倍数、取样接种量和菌落数。
中图版选修一 1.3测定微生物的数量 学案
第三节 测定微生物的数量课前预习（10分钟）凡事预则立，不预则废。
一、教学目标1、掌握测定土壤微生物数量的方法。
2、掌握测定土壤微生物数量工具的使用。
3、德育目标：(1)树立热爱大自然，关爱地球生命的观念。
(2)树立生物适应环境，环境影响生物的生物学辨证观点。
二、自主学习1.测定微生物数量的方法可分为两类： 、 。
2.直接计数法：常用的是 ，过程是先将待测样品制成 ，然后去一定量的悬液放在 下进行计数。
根据 来计算出单位体积内的微生物总数。
该方法的优点是：所需 ，可 得到结果，而且在计数的同时能 ，缺点是：难以计数 的细菌。
3.间接计数法：最常用的是 ，又称活菌计数法，是根据 而设计的计数方法。
这种方法在样品中含菌数 的情形下，也可以完成计数。
4.稀释平板计数法的过程：需要将待测样品制成均匀的 ，尽量使样品中的 ，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的 ；或是将一定量的 ，与 培养基混合，倾入 中，摇匀、静置待凝。
经过培养后，就由 生长繁殖形成 ，这样的一个菌落就代表着 。
统计培养基中出现的 ，即可推算出检测样品中的 。
课堂互动学习情境导入：学导结合：一、显微镜直接计数法1、细菌或血球计数板是一种在特定平面上划有格子的特殊载片。
在划有格子的区域中，有分别用粗线和细线分隔而成的方格。
其中有以粗线为界划成的方格 25 （或 16 ）格，这种以粗线为界的格子称为中格。
其内有以细线为界的 16 （或 25 ）小格。
因此，用于细胞计数的区域的总小格数为： 25×16 = 400 ，该 400 个小格排成一正方形的大方格，此大方格的每条边的边长为 lmm ，故 400 个小格的总面积为 lmm 2。
在进行细胞计数前，先取盖玻片盖于计数方格之上，盖玻片的下平面与刻有方格的血球计数板平面之间留有0.1 mm 高度的空隙。
含有细胞的待测样品液被加注在此空隙中。
加注在 400 个小格（ lmm 2 ）之上与盖玻片之间的空隙中的液体总体积应为： 1.0 mm ×1.0mm ×0.1lmm =0.1 mm 3 。
【配套K12】江苏省南京市高中生物 1.1 微生物培养学案(无答案)苏教版选修1
微生物的培养和应用1【课标要求】1、进行微生物的分离和培养2、测定某种微生物的数量3、研究培养基对微生物的选择作用【学习目标】1、通过观察实物、图示和学习课本知识内容，能说出不同种类的培养基及其相关的用途。
2、通过小组讨论活动，能说出培养基的基本成分，并能根据不同的要求，选择不同的培养基。
3、通过学习和借助于生活中的实例，能说出消毒和灭菌的区别。
【教学过程】知识点一、微生物培养基的配制（一）培养基1、微生物：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.微生物包括：病毒、细菌、放线菌、真菌、原生生物2、培养基：为___________微生物而制备的，提供适合微生物_________、_________或__________________的营养基质。
3、培养基的种类：按培养基的化学成分的不同：可分为_________、_________和_________。
按培养基的物理状态：可分为_________、_________和_________。
按培养基的功能：可分为_________、_________和_________。
4、5、各种培养基的配方不同，但一般都含有____________________________________和_________________等最基本的生命物质。
【思考】培养基成分的碳源、氮源各有什么作用？6、在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气等的要求。
例如：培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素；培养霉菌时需要将培养基的PH调至酸性；培养细菌时需要将培养基的PH调至中性或微碱性；培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件。
（二）无菌技术7、获得纯净培养基的关键是防止外来杂菌的入侵。
在培养基的配制需要运用_______和_______技术。
8、灭菌是指__________________________________________________________________。
【优化方案】高中生物 第一章第2、3节微生物的纯培养 微生物数量的测定课件 北师大版选修1
(1)测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106 的培养基中，得到以下几种统计结果，正确 可信的是________。 A．一个平板，统计的菌落数是23 B．两个平板，统计的菌落数是22和26，取平 均值24 C．三个平板，统计的菌落数分别是21、5和 52，取平均值26
D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、 24和25，取平均值25
(2)优点：能测出样品中活菌数，因此又称活 菌计数法
(3)缺点：操作手续烦琐，时间较长，测定值 常受各种因素的影响。
要点突破•讲练互动
要点一
平板划线分离法和涂布分离 法操作注意事项
1．划线分离法中几次灼烧接种环的目的
灼烧时期
目的
取菌种前 杀死接种环上原有微生物
灼烧时 期
目的
杀死上次划线后接种环上残留的菌
【纠错总结】 平板划线分离法和涂布分离 法的比较
平板划线分离法 涂布分离法
概 念
通过接种环在琼 脂固体培养基表 面划线的操作， 将聚集的菌种逐 步稀释分散到培
养基的表面
将菌液进行一系 列的梯度稀释， 然后将不同稀释 度的菌液分别涂 布到琼脂固体培 养基的表面，进
行培养
原 理
由于划线后，线条 末端细菌的数目比 线条起始处要少， 每次从上一次划线 的末端开始，能使 细菌的数目随着划 线次数的增加而逐 步减少，最终能得 到由单个细菌繁殖
解析：选D。用涂布平板分离法对样品中活 菌数目进行统计，只是一种估测，根据此方 法的实验过程可知，在某一稀释度下涂布的 平板菌体数具有一定的偶然性，并不是绝对 均匀，所以取若干个平板菌落数量的平均值 比较接近样品中菌体数的真实值。
易错警示
对平板划线分离法和涂布分离法 这两种常用的微生物分离方法混淆不清 例 用划线分离法或涂布分离法纯化大肠 杆菌时( ) ①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种 ③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌
高中生物第1章微生物技术第3课时微生物数量的测定同步备课课件北师大选修1
2.若某一稀释度下，平板上生长的平均菌落数为80，涂布平板时所用的
稀释液体积为0.1 mL，稀释液的稀释倍数为106，则每克样品中的活菌数
约为
A.8×108
B.8×107
C.8×105
D.8×106
解析 每克样品中的活菌数＝(80÷0.1)×106。
解析 答案
二、土壤中尿素分解菌数量的测定
答案
归纳 总结
要使平板菌落计数法准确，需要掌握的关键步骤有：严格的无菌操作， 否则容易被杂菌污染；稀释液要充分混匀，吸量准确，否则结果不准确； 多做几个重复实验，减少误差。
拓展应用
1.用平板菌落计数法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学 做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值 的是 A.菌落数量最多的平板 B.菌落数量最少的平板 C.菌落数量适中的平板 D.取若干个平板菌落数量的平均值
内容索引
一、微生物数量测定的方法和原理 二、土壤中尿素分解菌数量的测定 当堂检测
一、微生物数量测定的方法和原理
基础梳理
微生物数量的测定也是重要的微生物技术之一，平板菌落计数法是一种 应用广泛的微生物数量测定方法。 1.平板菌落计数法的原理：根据微生物在高度稀释的条件下， 固体 培养 基上所形成的单个菌落，是由 一个单细胞 繁殖而成的，即一个菌落代 表 一个单细胞 。 2.计算方法：从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法 是：同一稀释度的菌落平均数÷0.2÷稀释度×10。
养基 为唯一氮源的 选择 培养基
是否起到了_选__择__作__用__
①称取土样 10 g，放入盛有 90 mL无
菌水并带有玻璃珠的锥形瓶中，充分摇
制备土 匀；②吸取上清液 1 mL，转移至盛有 ①应在 火焰 旁称取土样； 壤样品 9 mL的生理盐水的无菌大试管中，按
【优化方案】高中生物 第一章第2、3节微生物的纯培养 微生物数量的测定课件 北师大版选修1
2.涂布分离法操作比较复杂，且各个细节均 需保证无菌操作，应特别注意 (1)酒精灯与培养皿的距离要适宜。 (2)吸管头不要接触其他任何物体。 (3)吸管要在酒精灯火焰周围使用。 (4)无菌玻璃涂棒末端浸在盛有70%酒精的烧 杯中，取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴 尽，然后将沾有少量酒精的无菌玻璃涂棒在 酒精灯火焰上引燃，注意防火。
2．平板菌落计数法 30～300 (1)计数原则：一般选择菌落数在___________
10～100 (霉菌)的平板进 (细菌或放线菌)、__________
行计数。 (2) 优点：能测出样品中活菌数，因此又称活 菌计数法 (3)缺点：操作手续烦琐，时间较长，测定值 常受各种因素的影响。
要点突破•讲练互动
第2、3节 微生物的纯培养· 微生物数量 的测定
学习导航 1.能进行微生物的分离和培养。
2．会测定某种微生物的数量。
新知初探•思维启动
一、微生物的分离与纯化 1．实验原理
微生物的分离与纯化是将待检测微生物样品通 固体 培养基上，样品中 过划线或涂布接种在______
的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个 菌落 。将单个菌落接种到斜面培养基上， ________ 纯种 。 经培养后，即可得到一个微生物的______
稀释度的菌液接种到平板上，培养一段时间后
稀释倍数、取样接种量 即可形成菌落，根据______________________ 和菌落数 即可换算出样品的含菌数。 __________
(2)实验步骤
90
空白对照
平置 倒置
30～300
想一想
要使平板菌落计数法准确，需要掌握哪几个 关键步骤？ 【提示】 严格执行无菌操作、准确稀释、 定量接种。
高中生物 13 测定微生物的数量(学案)中图版选修1
第三节测定微生物的数量[课标要求]1．研究培养基对微生物的选择作用。
2．进行微生物数量的测定。
[知识梳理]背景知识一、测定微生物数量的方法：1．：常用的是，该方法的优点是：所需，可得到结果，而且在计数的同时能，缺点是：死细胞与活细胞不能区分；细胞密度低于106/ml便不能保证视野中能见到所有细胞；难以计数的细菌。
2．：常用的是，这种方法在样品中含菌数的情况下，也可以完成计数，注意该方法需要将待测样品制成均匀的，尽量使样品中的，应用该种方法可以推算出检测样品中的。
实践案例：土壤中好气性细菌的计数制备土壤稀释液取的土样；制备系列稀释液取样及倒平板该实验的接种方法是。
培养观察记录（实验用到的实验设计原则：平行重复原则、对照实验原则理解实验原则选取的目的）结果：每克土壤样品菌数=探究活动：测定样品中的微生物数量1．检测天然水源中细菌总数和大肠菌群数细菌总数通常是指检测样品中所含的总数。
大肠菌群数通常是指检测样品中所含的实际数值。
2．检测某种食品中的菌落总数和大肠菌群数一般说来，总数越多，说明食品的卫生质量。
3．土壤中分解尿素细菌的计数某些细菌中含有，能将培养基中的分解成，该物质的水溶液会使指示剂呈现。
[复习指要]1、学法指导：本节课应学会微生物数量测定的方法，学会各种方法的具体操作。
间接计数法中的最常用的是稀释涂布平板法，注意该种方法中系列稀释液的制备，掌握间接计数法计数微生物数量的计算方法。
2、疑难解析：以本节实验为例着重复习制备系列稀释液的方法是：将1g土样放入99ml 无菌水中，制成102倍的稀释液，用1ml无菌移液管吸取上述浓度的溶液0.5ml，移入装有4.5ml无菌水的试管中，即配制成103倍的稀释液，用同样的方法可以配制成104、105、106倍的稀释液。
将待测样品进行稀释的目的是使微生物细胞分散开，使实验结果更接近真实值。
[典题解析]1．分析下面培养基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。
2019-2020学年高中生物新同步沪科版选修1学案：第1章 第3节 测定微生物的数量
第三节测定微生物的数量一、测定微生物数量的方法测定微生物数量的方法可分为两类：直接计数法和间接计数法。
前者常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。
该方法适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
后者最常用的是稀释平板计数法，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液并使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后统计培养基中出现的菌落数，从而推算出样品中的活菌数。
利用血球计数板测出的菌体数与平板计数法相比哪个多些？【提示】血球计数板测出的是全部菌体数，而平板计数法只能测出活菌数，而且比实际数偏少。
二、间接计数法的实验设计1．制备土壤稀释液取土壤表层5～10 cm处的土样。
准确称取1 g土样，放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中，振荡20 min后制成102倍的稀释液。
然后进行系列稀释，得到103、104、105、106倍的系列稀释菌液。
2．取样及倒平板3．培养4．观察记录(1)计数时对于细菌、放线菌以每个培养皿内有30～300个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落为宜。
(2)计算每克样品菌数公式：每克土壤样品菌数＝某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数。
细菌培养时所用的稀释液体积一、微生物生长量的测定1.测重量法干重法：将单位体积待测的培养液离心后，用清水洗涤1～5次，放入干燥器中加热干燥，加热温度一般在100～105 ℃之间，再称重。
以细菌为例，一个细胞一般重约10－12～10－13g，也可在较低温度(如40 ℃)下进行真空干燥。
湿重法：将一定量的菌悬液离心或过滤，得到菌体，反复洗涤后称湿重，干重一般为湿重的20%～25%。
2．计数法(1)直接计数法这种方法是利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点是不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都由400个小格组成。
高中生物 第一章 微生物培养技术 第三节 测定微生物的数量学业达标测评 中图版选修1
学业达标测评（三)一、选择题1．下列不属于统计菌数方法的是( ）A．显微镜直接计数法B．活菌计数法C．稀释平板计数法D．标志重捕法【解析】标志重捕法是统计动物种群密度的方法。
【答案】 D2．测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释,其原因是（）A．细菌个体小，真菌个体大B．细菌易稀释,真菌不易稀释C．细菌在土壤中含量比真菌高D．随机的，没有原因【解析】稀释的目的是使平板培养基上菌落数适中，便于计数。
细菌在土壤中含量比真菌高，故稀释倍数高.【答案】 C3．某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）( ）A．2.34×108B．2.34×109C．234 D．23。
4【解析】平板上菌落的平均数×稀释倍数＝每毫升样品中的菌落数,即234×10×106＝2.34×109个.【答案】 B4．下列关于“检测土壤中细菌总数”的实验操作的叙述中，不正确的是( ) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,高温、高压灭菌后倒平板B．取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL涂布于不同的平板上C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300个以上的平板进行计数【解析】本题以“检测土壤中细菌总数”实验为命题点.检测土壤中细菌总数时，要先用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，然后取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释液和无菌水各0。
1 mL，分别涂布于各组平板上,将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时,最后在确定对照组无菌后,为保证实验结果的准确性,应选择菌落数在30～300个的平板进行计数。
2021-2022年高中生物第一章微生物培养技术1.3测定微生物的数量1素材中图版
2021-2022年高中生物第一章微生物培养技术1.3测定微生物的数量1素材中图版单细胞微生物个体生长时间很短，很快进入繁殖阶段，生长和繁殖难以分开，个体生长很难测定，而且实际应用意义不大，因此，它们的生长不是依据细胞大小，而是以群体的生长作为单细胞微生物生长的指标。
群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。
测定细胞数目的方法有显微镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法等。
测量细胞物质的方法有细胞干重的测定、细胞某种成分如氮的含量、RNA和DNA的含量测定、代谢产物的测定等。
总之，测定方法很多，各有优缺点，工作中应根据具体情况加以选择。
一.目的和要求1.了解微生物数量测定常用的方法和平板计数的原理。
2. 掌握血球计数板计数的原理和显微镜直接计数的方法。
3.掌握平板计数的方法和应用范围。
二.基本原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。
此法的优点是直观、快速。
将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。
由于计数室的容积是一定的（0．1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。
由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。
血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。
血球计数板构造如图Ⅷ-1。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格（图Ⅷ-2）；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格（图Ⅷ-1，C）。
但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的，即16×25=400小方格。
每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。
2019-2020学年高中生物新同步沪科版选修1学案：第1章 第3节 测定微生物的数量
第三节 测定微生物的数量一、测定微生物数量的方法测定微生物数量的方法可分为两类：直接计数法和间接计数法。
前者常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。
该方法适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
后者最常用的是稀释平板计数法，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液并使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后统计培养基中出现的菌落数，从而推算出样品中的活菌数。
利用血球计数板测出的菌体数与平板计数法相比哪个多些？【提示】 血球计数板测出的是全部菌体数，而平板计数法只能测出活菌数，而且比实际数偏少。
二、间接计数法的实验设计1．制备土壤稀释液取土壤表层5～10 cm 处的土样。
准确称取1 g 土样，放入盛有99 mL 无菌水的锥形瓶中，振荡20 min 后制成102倍的稀释液。
然后进行系列稀释，得到103、104、105、106倍的系列稀释菌液。
2．取样及倒平板3．培养4．观察记录(1)计数时对于细菌、放线菌以每个培养皿内有30～300个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落为宜。
(2)计算每克样品菌数公式：每克土壤样品菌数＝×稀释倍数。
某稀释倍数的菌落平均数细菌培养时所用的稀释液体积一、微生物生长量的测定1.测重量法干重法：将单位体积待测的培养液离心后，用清水洗涤1～5次，放入干燥器中加热干燥，加热温度一般在100～105 ℃之间，再称重。
以细菌为例，一个细胞一般重约10－12～10－13g，也可在较低温度(如40 ℃)下进行真空干燥。
湿重法：将一定量的菌悬液离心或过滤，得到菌体，反复洗涤后称湿重，干重一般为湿重的20%～25%。
2．计数法(1)直接计数法这种方法是利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点是不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都由400个小格组成。
中图版高中生物选修1 1.3测定微生物的数量_学案设计1
测定微生物的数量【学习目标】1．会直接计数法；2．会间接计数法；3．实践案例：《土壤中好气性细菌的计数》。
【学习重难点】实践案例：《土壤中好气性细菌的计数》。
【学习过程】课中学习1．直接计数法和间接计数法例1．用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。
在某稀释浓度下，某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是（）A．菌落数最多的平板B．菌落数量最少的平板C．菌落数量适中的平板D．取若干个平板菌落数量的平均值2．实践案例：《土壤中好气性细菌的计数》例2．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是（）A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数分别是251和260，取平均值256C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212、256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233通关检测一、选择题1．下列说法不正确的是（）A．科学家从70~80℃热泉中分离到耐高温的Taq DNA聚合酶B．统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，则以M3作为该样品菌落数的估计值C．设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D．同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多2．产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（）A．一个细菌，液体培养基B．许多细菌，液体培养基C．一个细菌，固体培养基D．许多细菌，固体培养基3．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是（）A．筛选出能分解尿素的细菌B．对分离的菌种作进一步鉴定C．培养基中还缺乏酚红指示剂作细菌的营养D．如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素4．下列关于测定土壤中微生物数量的叙述，正确的是（）A．一般选用103~107倍的稀释液分别涂布B．测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释C．测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释D．若第一次测定某种细菌的数量，可以将101~107倍的稀释液分别涂布到平板上培养二、非选择题5．土壤有“微生物的天然培养基”之称，下图表示对土壤中某种微生物进行分离和计数而进行的对样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图。
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第三节测定微生物的数量一、测定微生物数量的方法测定微生物数量的方法可分为两类：直接计数法和间接计数法。
前者常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。
该方法适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
后者最常用的是稀释平板计数法，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液并使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后统计培养基中出现的菌落数，从而推算出样品中的活菌数。
利用血球计数板测出的菌体数与平板计数法相比哪个多些？【提示】血球计数板测出的是全部菌体数，而平板计数法只能测出活菌数，而且比实际数偏少。
二、间接计数法的实验设计1．制备土壤稀释液取土壤表层5～10 cm处的土样。
准确称取1 g土样，放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中，振荡20 min后制成102倍的稀释液。
然后进行系列稀释，得到103、104、105、106倍的系列稀释菌液。
2．取样及倒平板3．培养4．观察记录(1)计数时对于细菌、放线菌以每个培养皿内有30～300个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落为宜。
(2)计算每克样品菌数公式为：每克土壤样品菌数＝某稀释倍数的菌落平均数细菌培养时所用的稀释液体积×稀释倍数。
预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中一、微生物生长量的测定1.测重量法干重法：将单位体积待测的培养液离心后，用清水洗涤1～5次，放入干燥器中加热干燥，加热温度一般在100～105 ℃之间，再称重。
以细菌为例，一个细胞一般重约10－12～10－13g，也可在较低温度(如40 ℃)下进行真空干燥。
湿重法：将一定量的菌悬液离心或过滤，得到菌体，反复洗涤后称湿重，干重一般为湿重的20%～25%。
2．计数法(1)直接计数法这种方法是利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点是不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都是由400个小格组成。
将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品所含的细菌数。
每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×1 000×稀释倍数(2)间接计数法(活菌计数法)稀释平板涂布法，常用来统计样品中的活菌数。
此法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时先将待测样品做一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿上，使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。
说明：①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板上进行计数。
②将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，放入适宜的温度下培养计算菌落数。
为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布、培养计算出菌落平均数。
③统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
④涂布平板法所选择倒平板的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右为最好。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
二、测定土壤中的微生物数量土壤中生活的微生物种类和数量是极其丰富的，这些数量众多的微生物对提高土壤肥力有重要作用。
因此，测定土壤的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个重要指标。
1．实验原理平板菌落计数法是将待测定的微生物样品按比例作一系列稀释后，将其中的微生物充分分散成单个细胞，吸取一定量某几个稀释度的菌液接种到平板上，培养一段时间后，每个单细胞生长繁殖形成单个菌落，根据稀释倍数、取样接种量和菌落数即可换算出样品的含菌数。
2．材料用具土壤样品：尿素，酵母粉，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠、酚红、琼脂，1 mol/L NaOH溶液，无菌吸管，盛有9 mL无菌水的试管，盛有90 mL无菌水并带有玻璃珠的锥形瓶，试管架，无菌培养皿，记号笔，烧杯等。
3．方法步骤(1)制备尿素固体培养基准确称取尿素20 g，酵母粉0.1 g，磷酸二氢钾9.1 g，磷酸氢二钠9.5 g，酚红0.01 g，琼脂20 g，依次加入盛有900 mL蒸馏水的烧杯中，加热溶解后，用1 mol/L NaOH溶液调pH至7.2～7.4，补加蒸馏水至1 000 mL。
(2)制备土壤样品稀释液称取土样10 g，放入盛有90 mL无菌水并带有玻璃珠的锥形瓶中，振荡约20 min，使土样和水充分混合，将土壤悬液制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6不同稀释度的稀释液。
制备土壤样品稀释液时应注意每个吸管只能接触一个浓度的稀释液，且取样前需充分摇匀。
(3)加样取10套无菌培养皿，取10－4、10－5和10－6每种稀释度做3个重复平板，留下一个平板作空白对照。
分别用1 mL无菌移液管精确吸取10－4、10－5、10－6三个稀释度菌悬液各0.2 mL，加至相应编号的无菌培养皿中(如图)。
微生物数量测定的流程图(4)倒平板将菌液移入培养皿后立即倒入溶化并冷却至45 ℃左右的尿素培养基(倒入量约15 mL)，随即快速晃动培养皿，使菌液和培养基充分混匀后平置，待凝。
(5)培养待平板完全凝固后，倒置于恒温箱中37 ℃培养。
(6)统计菌落数培养48 h后取出平板，统计各皿中的菌落数，将结果记录在表格中，计算结果时，应选取每皿菌落数在30～300(如图)的一组平板为代表进行统计。
每皿菌落数示意图(7)计算样品中菌数的公式每克样品的菌数＝同一稀释度的菌落平均数÷0.2÷稀释度×10在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，需利用计数板对微生物细胞进行直接计数。
计数板是一个特制的可在显微镜下观察的玻片，样品就滴在计数室内。
计数室由25×16＝400个小室组成，容纳液体总体积为0.1 mm3。
某同学操作时将1 mL酵母菌样品加99 mL无菌水稀释，用无菌吸管吸取少许使其自行渗入计数室，盖上盖玻片并用滤纸吸去多余菌液，进行观察计数。
(1)在实验中，某同学的部分实验操作过程是这样的：①从静置试管中吸取酵母菌培养液加入计数板进行计数，并记录数据；②把酵母菌培养液放置在冰箱中；③第七天再取样计数，记录数据，统计分析绘成曲线。
请纠正该同学实验操作中的3处错误：①______________________________________________________________。
②______________________________________________________________。
③______________________________________________________________。
(2)在实验前应该对计数板、吸管等器具进行______处理。
(3)如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应采取的措施是____________。
(4)如果观察到如图所示a、b、c、d、e 5个大格共80个小室内共有酵母菌48个，则上述1 mL酵母菌样品中约有酵母菌________个；要获得较为准确的数值，减少误差，你认为该怎么做？__________________。
【解析】对各小题逐项分析如下②应将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养③应连续七天，每天观察、取样计数并记录数据(2)灭菌(3)适当稀释(4)2.4×108多次计数，求平均值1．上题中某同学用一支移液管连续三次取1 mL菌液进行稀释，(过程如图)中间忘记冲洗移液管，计数结果将( )A．偏低B．偏高C．不变D．无法判断【解析】由于移液管未冲洗，下一次使用时会带有上次的高浓度菌液，使计数结果偏高。
【答案】 B图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。
(1)图中选择培养基应以________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。
(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。
该过程采取的接种方法是________________，每克土壤样品中的细菌数量为________×108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较________。
(3)现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。
突变基因转录的mRNA中，终止密码为________，突变基因表达的蛋白含________个氨基酸。
【审题导析】【精讲精析】(1)脲酶能够催化尿素水解释放出氨和二氧化碳，因此选择培养基中应以尿素为唯一氮源。
挑取单菌落接种到加有酚红指示剂的鉴别培养基中，培养一段时间后，菌落周围的氨增加，pH升高，酚红指示剂将变红。
(2)该过程采取的接种方法为稀释涂布平板法。
利用稀释涂布平板计数法对细菌进行计数时，应选择菌落数在30～300的平板，因此平板上长出的细菌菌落平均数为(156＋178＋191)÷3＝175个。
每克土壤样品中的细菌数为175÷0.1×105＝1.75×108。
血细胞计数板计数法能将死细胞计算在内，而稀释涂布平板计数法只能计数活细胞(只有活细胞才能在平板上生长)，故一般血细胞计数板计数法要比稀释涂布平板计数法的结果大。
(3)箭头处插入70个核苷酸，箭头后密码子的解读方式为*AG，UGA，GAA……对比3种终止密码可发现，此处的终止密码为UGA。
从起始密码到终止密码之前共有273＋72个碱基，因此突变基因表达的蛋白含115个氨基酸。
【答案】(1)尿素酚红红(2)稀释涂布平板法 1.75 少(3)UGA 115稀释平板计数法的误差分析(1)稀释时移液管不冲洗，偏大；(2)平板中菌落数太多，(可能重复)偏小；(3)稀释时未混合均匀，可能大可能小。