第十四章 抗生素类药物分析
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抗生素类药物的分析
试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以0.1mol/L枸橼酸溶液-0.2mol/L磷酸氢二 钠溶液-丙酮（60:40:1.5）为展开剂，展开，取出于 105℃加热5分钟后,立即喷以于展开剂配成的0.1%茚三
酮溶液,于105℃加热15分钟后，检视，供试品溶液所
显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液所显主斑点的
增强而向高波数方向位移
VC=O
1815~1740cm-1
3470cm-1 O-H
1780cm-1
例 青霉素钠Ch.P.（20 Nhomakorabea0）【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集222图）一致。 例 青霉素钾 Ch.P.（2010）
【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集223图）一致。
（3）C3位有游离羧基
2. 头孢菌素类
（1）侧链（RCO-）+母核（7-ACA）
（2）分子中含二个手性碳原子（C6、
C7）
RCO NH 侧链 O N S CH2R1 COOH
（3）C4位有游离羧基
（二）性质
1. 酸性 青霉素和头孢菌素分子中有游离
羧基有酸性，大多数青霉素类药物的
pKa在2.5～2.8之间，能与碱反应形成 盐。
对照溶液的制备 取头孢尼西对照品适量，精密 称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含头孢 尼西0.1mg的溶液。 测定法 取本品约0.2g，精密称定，置10ml量瓶 中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。立即精密 量取100~200μl，注入液相色谱仪，以流动相A 为流动相进行测定，记录色谱图。另精密量取 对照溶液100~200μl注入液相色谱仪，以流动相 B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算， 含头孢尼西聚合物以头孢尼西计不得过0.4%。
酮溶液,于105℃加热15分钟后，检视，供试品溶液所
显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液所显主斑点的
增强而向高波数方向位移
VC=O
1815~1740cm-1
3470cm-1 O-H
1780cm-1
例 青霉素钠Ch.P.（20 Nhomakorabea0）【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集222图）一致。 例 青霉素钾 Ch.P.（2010）
【鉴别】（2）本品的红外光吸收图谱应与对
照的图谱（光谱集223图）一致。
（3）C3位有游离羧基
2. 头孢菌素类
（1）侧链（RCO-）+母核（7-ACA）
（2）分子中含二个手性碳原子（C6、
C7）
RCO NH 侧链 O N S CH2R1 COOH
（3）C4位有游离羧基
（二）性质
1. 酸性 青霉素和头孢菌素分子中有游离
羧基有酸性，大多数青霉素类药物的
pKa在2.5～2.8之间，能与碱反应形成 盐。
对照溶液的制备 取头孢尼西对照品适量，精密 称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中含头孢 尼西0.1mg的溶液。 测定法 取本品约0.2g，精密称定，置10ml量瓶 中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。立即精密 量取100~200μl，注入液相色谱仪，以流动相A 为流动相进行测定，记录色谱图。另精密量取 对照溶液100~200μl注入液相色谱仪，以流动相 B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算， 含头孢尼西聚合物以头孢尼西计不得过0.4%。
《抗生素类药物分析》课件
核酸合成抑制
氟喹诺酮类抗生素通过干扰细 菌DNA合成，阻止细菌复制。
IV. 抗生素如何选择
细菌种类
选择抗生素需要根据感染细菌的特性和药物的抗菌谱。
耐药性
了解细菌的耐药性情况，选择对耐药菌有效的抗生素。
患者特点
考虑患者的年龄、病情和过敏史，选择适合的抗生素。
V. 抗生素的副作用
1 过敏反应
有些人对抗生素过敏，可引起皮疹、呼吸困 难等。
农作物种植
农用抗生素可能影响土壤质量和 农产品质量安全。
II. 抗生素的分类
β-内酰胺类 氨基糖苷类 氟喹诺酮类 大环内酯类
青霉素、头孢菌素 链霉素、庆大霉素 左氧氟沙星、环丙沙星 红霉素、阿奇霉素
III. 抗生素的作用机制
细胞壁合成抑制
青霉素通过抑制细菌细胞苷类抗生素通过与细菌 核苷酸结合，阻断蛋白质的合 成过程。
VII. 抗生素的检测
1
质量检测
检测抗生素的纯度和含量，确保药物质量。
2
残留检测
检测农产品、畜产品中抗生素的残留，保障食品安全。
3
新药筛选
通过体外和体内实验，测试新抗生素的抗菌活性。
VIII. 抗生素在动物体内的残留
畜牧业
抗生素残留可能影响畜牧业品质 和人类消费者的健康。
水产养殖
抗生素过量使用可能导致鱼类养 殖污染和耐药细菌产生。
2 肠道紊乱
抗生素破坏肠道菌群平衡，可能导致腹泻、 便秘等问题。
3 肝肾毒性
某些抗生素可能对肝脏、肾脏造成损伤。
4 耐药性
不正确使用抗生素会导致细菌产生耐药性。
VI. 抗生素的使用和管理
合理用药
按医嘱使用抗生素，不滥用或 过量使用。
抗生素类药物的分析)
RCO HN O
S N
CH3
RCO NH
CH3
O
COOH
S
N CH2R1
COOH26
溶解性 青霉素
K+
NHa
青霉素钾 青霉素钠
难溶于水 易溶于有机溶剂
易溶于水 难溶于有机溶剂
27
2. 手性C 旋光性
S
** O N*
**S
N O
（5%头孢唑啉钠溶液［］2D0 –18～–24°）
58
（三）汞量法 ChP
1. 原理 *β-内酰胺类不直接与汞反应 *β-内酰胺类水解产物可与汞发
生定量反应
59
青霉素类O水H解 青霉噻唑酸水O解H 青霉胺
ChP（2000） 青霉素钾 青霉素钠 苯唑西林钠 普鲁卡因青霉素 氯唑西林钠
pH4.6 Hg2
青霉胺络汞
60
CH2 COHN O
NH2 O
S N
CH3 CH3 COOH
18
阿莫西林（羟氨苄青霉素）
S CH3
HO
CH COHN
NH2
N
O
CH3 COOH
19
普鲁卡因青霉素
CH2 COHN O
S N
NH2 CH3
CH3 ·
COOH
(C2H5)2NCH2CH2OOC
20
磺苄西林钠
CH COHN
SO3Na O
S N
CH3 CH3 COONa
水5ml溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀
，放置15分钟，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸盐
S N
CH3 CH3 COONa
青霉胺络汞
突跃2 CH3
抗生素类药物分析—抗生素类药物概述(药物分析课件)
（三）含量测定或效价测定
1.微生物检定法
以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来衡量抗生素效价的一种方法。
优点
1、灵敏度高、需用量小、测定结果直观 2、测定原理与临床一致，适用范围广 3、同一类型的抗生素无需分离，一次测定总效价
缺点
1、操作繁琐 2、培养时间长 3、测定误差大
2.理化方法
适用于提纯的以及化学结构已确定的抗生素
（一）鉴别试验
1.化学方法 利用某些官能团的特性 利用适当的试液与其反应显色 2.物理化学方法 UV、IR、TLC、GC、HPLC等 3.生物学方法 特异的酶反应或其他反应
（二）杂质检查
1.影响产品稳定性的指标 水分、酸碱度、干燥失重 2.控制有机、无机杂质的指标 溶液的澄清度与颜色、重金属、
残留溶剂、炽灼残渣
优点 缺点
1. 操作简单、省时、方法准确 2. 专属性 1. 不一定代表生物效价
2. 易受杂质干扰
3.抗生素活性表示方法
• 抗生素的活性以效价单位表示：每ml或每mg中含有某种抗生素的有效 成分的多少;用单位（u）或微克（ug）表示。
• 如：1mg青霉素钠定为1670单位；1mg硫酸卡那霉素定为670单位。 • 1mg青霉素钾单位（u）=1598u/mg
第十四章 抗生素类药物分析
第一节 概述
抗生素的定义 在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）
的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。
抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物， 对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。
一、抗生素类药物的特点
1.化学纯度低 同系物多：结构相似、分子组成相差若干个
三、抗生素的分类（按结构与性质）
β–内酰胺类
第十四章抗生素
第十四章抗生素药物的分析一选择题（一）单选题相同知识点: 抗生素药物概述1．Ch．P(2005)附录"抗生素微生物检定法"属于（）。
A．化学方法 B．物理方法 C．物理化学方法 D．生物学方法 E．抗生素检定法答案:D2. 抗生素的微生物测定法具有的特点是（）。
A．简单易行 B．准确度高 C．方法专属性好 D．与临床应用一致 E．灵敏度低答案：D3. 属于氨基糖苷类抗生素的药物为（）。
A．阿莫西林 B．头孢羟氨苄 C．罗红霉素 D．四环素 E．庆大霉素答案:E4．罗红霉素属于抗生素的类别（）。
A．氨基糖苷类 B．四环霉素 C．青霉素类 D．β－内酰胺类 E．大环内酯类答案:E相同知识点：β-内酰胺类抗生素的分析5. 可发生羟戊酸铁反应的药物是（）。
A．四环素 B．青霉素 C．红霉素 D．链霉素 E．庆大霉素答案：B6．青霉素属于（）。
A．氨基糖苷类抗生素 B．四环霉素类抗生素C．大环内酯类抗生素 D．β-内酰胺类抗生素 E．生物碱类答案：D7. 汞量法测定青霉素钠含量计算结果时，所利用的青霉素钠与硝酸汞滴定液(0．02mol ／L)的摩尔比为（）。
A．1：2 B．2：1 C．1：1 D．3：1 E．3：2答案:C8. 汞量法测定青霉素钠含量时，判断滴定终点以（）。
A．指示剂变色为准 B．达到化学计量点时为准 C．滴定反应进行完全为准D．第一个滴定突跃为准 E．第二个滴定突跃为准答案:E9. 中国药典05年版规定，青霉素钠的含量测定方法为（）。
A．非水溶液滴定法 B．旋光法 C．紫外分光光度法 D．汞量法 E．碘量法答案：D10. 阿莫西林中阿莫西林聚合物的检查采用高效液相色谱法中的分子排阻色谱法，是根据阿莫西林聚合物与阿莫西林（）。
A．分子大小不同而被分离 B．电荷大小不同而被分离C．吸附系数不同而被分离 D．极性大小不同而被分离E．极性官能团多少不同而被分离答案:A 解题思路：考察重点是对色谱法分离机理的掌握。
抗生素类药物的分析
抗生素类药物的分析1. 引言抗生素是一类用于治疗由细菌引起的感染疾病的药物。
它们通过抑制或杀死细菌的生长来发挥作用。
抗生素类药物的分析对于研究其疗效、剂量和毒性等方面非常重要。
本文将对抗生素类药物的分析方法进行综述。
2. 抗生素的分类抗生素可以根据其来源、化学结构和作用方式进行分类。
常见的抗生素分类包括β-内酰胺类抗生素、四环素类抗生素、氨基糖苷类抗生素等。
每种类别的抗生素在分析方法上可能存在差异。
3. 抗生素分析方法3.1 色谱分析法色谱分析法是一种常用的抗生素分析方法。
它包括气相色谱法、液相色谱法和超高效液相色谱法等。
这些方法的优点是分离能力强、精确度高、灵敏度好。
例如，在β-内酰胺类抗生素的分析中，液相色谱法常用于测定不同种类抗生素的含量。
3.2 光谱分析法光谱分析法是另一种常见的抗生素分析方法。
它包括紫外-可见吸收光谱分析法、红外光谱分析法、质谱分析法等。
这些方法的优点是快速、简便，并且可以获得抗生素分子的结构信息。
例如，在四环素类抗生素的分析中，红外光谱法可以用来鉴定抗生素的结构。
3.3 生化分析法生化分析法是一种用于检测抗生素活性和毒性的方法。
常用的生化分析方法包括抗生素敏感性试验、最小抑菌浓度试验和细菌生长曲线分析等。
这些方法可以用于评估抗生素的疗效和剂量。
4. 抗生素研发与质量控制抗生素的研发和质量控制是抗生素分析中的重要环节。
研发阶段需要对抗生素进行结构解析、药效评价以及药代动力学和药物相互作用等研究。
质量控制阶段需要对抗生素进行质量指标的确定和检验，以确保其药效和安全性。
常用的质量控制方法包括纯度分析、杂质分析和稳定性分析等。
5. 抗生素分析在临床应用中的意义抗生素分析在临床应用中具有重要意义。
通过对抗生素的定量分析，可以确保患者在用药过程中获得正确的剂量；通过对抗生素的质量控制，可以保证抗生素的疗效和安全性。
抗生素分析还可以用于治疗过程中的药物监测，及时调整剂量和用药方案。
抗生素类药物的分析
二. 鉴别试验 2. 化学方法 2.1 羟肟酸铁反应
β-内酰胺类
青霉素 ＋ 盐酸羟胺
醇制 KOH （OH－）
羟肟酸衍生物
中性溶液，铁离子（Fe3＋）红色络络合合物物
17
S ON
S
H2NOH HCl O C N H
NHOH
S
Fe3+/3 H+
O
C NH
3+
Fe 3
NH O （红、棕、褐）
18
β–内酰胺类抗生素
二. 鉴别试验 2. 化学方法 2.2 遇酸呈色
16.2
硫酸-变色酸反应 硫酸-硝酸反应
O R
O N H
H
O
H
OH
N
S H
CH3 CH3
硫酸-甲醛反应ຫໍສະໝຸດ O OHOON
R1
R
N H
H
S H
19
β–内酰胺类抗生素
16.2
二. 鉴别试验 2. 化学方法
α CH2 NH2
COHN O
S N
CH3
CH3 COOH
16.2
21
β–内酰胺类抗生素
16.2
四. 含量测定 1. 碘量法 1.1 原理
青霉素族 头孢菌素族 NaOH 定量4I 过2 量8I
R1
R
N
H
H
S H
四元环张力大 酰胺键易水解
13
β–内酰胺类抗生素
16.2
一. 结构和性质：
❖
强酸性 完全水解
青霉胺＋青霉醛＋CO2 （最终产物）
❖
中强酸性（pH=2），室温 不完全水解
青霉二酸 加热 或增强酸度
最终产物
抗生素类药物的分析
光谱法
原理：氨基糖苷类药物与金属离子、有机试剂或有些染料反应生成离子缔合物产生吸收。 应用：注射溶液中氨基糖苷类药物含量测定 优点：操作简便，仪器价廉，常见离子及氨基酸、糖类均不干扰测定 缺点：有关物质影响较大，最好先做杂质限量试验 文献报道： ⑴紫外-可见分光光度法：酸性双偶氮染料曲利本红与此类药物反应后在紫外-可见光区有强烈吸收 ⑵原子吸收光谱法：与Co、Ni、Cu、Zn 等金属离子配合后通过测定金属离子的含量来间接测定
氯霉素 Chloramphenicol
【检查】 残留溶剂 （甲醛、乙醇） 高效液相色谱：加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液；另精密取甲醛、乙醇，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照残留溶剂测定法测定，使用紫外检测器，按外标法计算，含甲醛、乙醇应符合规定。 毛细管色谱：柱温40-100，常以氮气为载气，采用火焰离子化检测器。
含量测定—液相色谱 分别加甲醇溶解，用磷酸盐缓冲盐（pH7.0）-甲醇（15︰1）定量稀释制成溶液，分别作为供试品溶液和标准品溶液；精密量取供试品溶液与标准品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中红霉素A的含量。药典规定：按无水物计算，不得少于88.0%。
概述
四环类抗生素
01
抗菌谱:四环素为广谱抗生素，用于G+和G-引起的感染
02
抗菌机理：作用于30S亚基，抑制蛋白质的合成
03
不良反应：消化道刺激，牙齿骨骼钙黄沉积
04
结构特点：含有并四苯的基本结构
盐酸四环素 Tetracycline Hydrochlorid
用薄层层析快速鉴别四环类抗生素
01
pH为8.3的5%的EDTA-2Na溶液调制硅藻土G板为薄层固定相，以0.02mol/L的氢氧化钠的丙酮溶液为展开剂，将样品和对照品一起展开，通过计算比移值鉴别。 与钙镁离子形成沉淀； 与铁离子形成红色络合物； 与铝离子形成黄色络合物。
抗生素类药物的分析
青霉素族
OH- R - SH （水解）
pH4.6 Hg 2+
（RS）2 Hg
2、方法
NaOH HNO3 Hg(NO3)2
水解 醋酸盐缓冲液 滴定
V样(总)
样
pH4.6
品
醋酸盐pH缓4冲.6液 Hg滴N定O32 V空降
以未经水解的样品作空白测定
剩余
反应分两步进行： （1）水解反应 (按化学计算量进行) （2）氧化-还原反应 (无固定的量关系， 受温度、PH值和时间等因素影响，应严 格控制反应条件并采用标准品平行对照 测定)
2、方法
+缓冲液+碘液+回滴 V样空 供试液
+碱+酸+缓冲液+碘液+回滴 V样
+缓冲液+碘液+回滴 V对空 对照液
四、含量测定 本类药物多采用理化测定方法进行
含量测定，Chp收载的主要方法有：碘量 法、电位配位滴定法、可见 –紫外分光 光度法、HPLC法等。
（一）碘量法 β-内酰胺类
1、原理
水解产物
定量过量
青霉素族 头孢菌素族
（N水aO解H） 4HHI+2+ 8I
I2＋Na2S2O3 2NaI＋Na2S4O6
（一）聚合物 中国药典对头孢他啶、头孢哌酮钠、
头孢噻肟钠等规定了各自聚合物的检查。
（二）有关物质和异构体
通常采用色谱法（HPLC、反相TLC 法等）检查β-内酰胺类抗生素中的有关 物质和异构体。
（三）吸收度
药典常采用测定杂质吸收度的方法来 控制本类抗生素的杂质含量。
例如：将青霉素钠（钾）配成1.80mg/ml 的溶液，在280nm处的A≦0.10（控制杂 质量）；264nm处的A为0.80～0.88（检 查药物量）。
抗生素类药物的分析
3. 条件
（1）弱酸性： pH4.5 （2）温度：24～26℃
温度＞38 ℃ 未水解的供试品亦消耗碘
（3）水解时间：
以水解20分钟后的耗碘量最大。
S CH3
HO
CH2 COHN
NH2
ON
CH3 COOH
阿莫西林（羟氨苄青霉素）
S
RCO NH 7 6
1 2
N5
3
O
4
CH2R1
COOH
母核（7-氨基头孢菌烷酸）?
7-Aminocephalospoanic Acid, 7-ACA
S CH2 C ONH
NH2
ON
CH3
头孢氨苄 COOH
S
RCO NH 7 6
NH2
ON
CH3
头孢羟氨苄 COOH
S
RCO NH 7 6
1 2
N5
3
O
4
CH2R1
COOH
母核（7-氨基头孢菌烷酸）?
7-Aminocephalospoanic Acid, 7-ACA
S CH2 CONH
S
ON
CH2OCOCH3
COONa
头孢噻吩钠
S CH3
RCO HN 6
1
5
2
7 N4
3 CH3
0.01mol/LNa
2S2O3
例 注射用普鲁卡因青霉素 含量测定
取装量差异项下的内容物，精密称取约 0.12g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻 度，摇匀，精密量取5ml，置碘瓶中，加1mol/L 氢氧化钠溶液1ml放置20分钟，再加1mol/L盐酸 溶液1ml与醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5) 5ml，精密 加入碘滴定液(0.01mol/L) 15ml，密塞，摇匀， 在20～25℃暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定 液（0.01mol/L）滴定至近终点时加淀粉指示液 ，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；
抗生素类药物分析
要求：NC2 ≥2000，C2a峰和C2峰的分离度应符合要求，重复 进样RSD<2.0%
Your company slogan
三、氨基糖苷类
4、含 量 检 测
氨基糖苷类 含量检测
微生物法、HPLC法等
Your company slogan
四、四环素类
1. 化学结构
Your company slogan
抗生素类药物分析
一、概 述
3. 来 源
生物合成（发酵）
化学合成
半合成
4. 抗生素的特点
化学纯度较低 活性组分易发生变异 稳定性差
原因
生产工艺复杂
发酵过程不易控制， 易受污染
Your company slogan
一、概 述
5. 抗生素质量分析
鉴别：物理化学方法、微生物法 检查：水分、异常毒性、热原、细菌内毒素、降压物质等 含量/效价测定：
DC B
O H O O H
O H O O H
O H O H O
脱水四环素类
Your company slogan
四、四环素类
CH3 RCH3 OHR''' HN
CH3 OH
OH-
CONH2
OH OH O OH O
CH3 R CH3 R''' HN
CH3
OH
O
CONH2
OH OH O O O
异四环素
二、β–内酰胺类
3、鉴 别
1）羟肟酸铁反应：
β–内酰胺类 NH2OH·HCl 羟肟酸 Fe3+ 显色
NaOH
H+
2）茚三酮反应
呈
α-氨基 茚三酮
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1250cm-1 C-O
3470cm-1 O-H
（四） 色谱法 对照品对照法 1、 TLC法
对照品 相同条件 比较R f 和斑点颜色 供试品
2、 HPLC法 对照品 相同条件 比较t R 供试品
三、杂质检查
药物 检查项目 检查方法
HPLC法 头孢他啶 聚合物 头孢曲松钠 头孢哌酮钠 头孢噻肟钠 头孢呋辛酯 有关物质和异构体 头孢氨苄 有关物质 青霉素钾（钠） 吸收度
结果判断：供试液如显杂质斑点，与对
照液（2）（3）位臵相同上所的斑点比
较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑 点，与对照液（1）所显的主斑点比较，
其颜色不得更深。
4.青霉素钠（钾）的吸收度检查： 供试液 1.80mg/ml，
结果判断：A280不得大于0.10
四、含量测定 （一 ） 碘量法 ChP 1. 原理
发酵液中杂质
无机盐、脂肪、各种蛋白质、 各种降解产物、色素、热原、
毒性物质
[检查] 增加 异常毒性、细菌内毒素、 热原、降压物质、无菌
含量测定方法 （一）生物学方法 测定抗生素抑菌或杀菌的能力 优点 1、与临床效果一致 2、灵敏度高 3、干扰物质少 缺点 1、操作繁琐 2、培养时间长 2、测定误差大
S CONH N O CH 3 O
分 子 重 排
CH 3 CH 3 COONa
N
pH3.8
SH CH HN CH 3 HC CH 3 C H COOH
N CH N O O CH 3
C C O
2、IR法
以阿莫西林为例
3180cm-1 N-H
β–内酰胺 C=O 1780cm-1 1690cm-1 仲酰胺C=O
境等条件的影响 B、使本法测定结果与微生物检定
法一致
3. 条件 （1）弱酸性 pH4.5 碱↑ I2 → IO3 + I 酸↑ 普鲁卡因与碘在酸性条件 下会产生复盐沉淀
（2）温度 24～26℃ 温度＞38 ℃ 未水解的供试品亦消耗碘
（3）水解时间
以水解20分钟后的耗碘量最大
（4）反应时间
反应20分钟后，耗碘量随时间的 变化较小，可减小含量测定的误 差。
S N CH 3 CH 3 COOK
CH 2
C OHN O
Na
与有机碱(普鲁卡因)成盐 难溶于水
CH3 CH3 COOH NH2
CH2
COHN O N
S
C2H5 2 NCH2CH2OOC
普鲁卡因青霉素
（二）手性C
青霉素类
旋光性 C3 C5 C 6
C7
S ﹡﹡ 1 O
7 6 8 N 4 5
头孢菌素类 C6
（二）化学及物理化学方法 以理化方法测定主药含量 优点 1. 准确度高 2. 简单、快速
缺点 1. 不一定代表生物效价 2. 易受杂质干扰
分类（按结构与性质）：
β–内酰胺类、氨基糖苷类、
四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类
林可霉素类、其他抗生素类
第二节
RCO HN
β–内酰胺类抗生素
醋酸盐缓冲液 pH4.6
Hg (NO3)2
滴定
V空 (降)
以未经水解的样品作空白测定
讨论 3、
（1）水解必须完全 （2）汞盐滴定液用EDTA标定 （3）空白试验 （4）优点 消除已降解产物干扰
不需标准品
计算 4、
含量% V样 T F W样 V空 T F % % W空
降解 失效
例
青霉素的降解反应
H2O/OHˉ
青霉素酶
青霉噻唑酸
HgCl2
100℃
青霉醛 青霉胺
青 霉 素
H2O
pH2
青霉酸
NH2OH pH4
α–青霉噻唑 酰基羟胺酸
CO2
青霉烯酸
头孢菌素类
酸、碱、胺类
-内酰胺酶
降解 失效
二、鉴别试验 （一）呈色反应 1. 羟肟酸铁反应 β-内酰胺类 - 内酰胺类
3. 双缩脲反应
- CONH - 内酰胺类
似肽键
碱性酒石酸铜 （开环分解）
紫
双缩脲（NH3CONHCONH3）是两 个分子脲经 180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。 在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物 ，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接 连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键， 这类化合物都有双缩脲反应。
3）异构体：
3.头孢氨苄中有关物质的检查---反相TLC法
固定相：活化后的硅胶G板臵5%（V/V）正十四 烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干 展开剂：0.1mol/L枸橼酸-0.2mol/L磷酸氢二 钠-丙酮（120：80：3） 供试液：本品 50mg/ml 对照液（1）：本品 0.5 mg/ml 对照液（2）：α-苯甘氨酸 0.5 mg/ml 对照液（3）：7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸 0.5 mg/ml
4. 与重氮苯磺酸反应 酚羟基
头孢哌酮
- C H - OH
重氮苯磺酸
（偶合）
橙黄色
5. 与变色酸-硫酸反应
青霉素 阿莫西林 氨苄西林
H SO
羰基侧链含“ -CH -” HCHO
△（分解）
活泼“-CH2-”
变色酸
显色
（二）各种盐的反应 + + 1. K 、Na 的火焰反应
V空 含量% （ ） T F % W样 W空
V样
（三）可见-紫外分光光度法 1、 酸水解--铜盐法
青霉素族
pH
（水解）
青霉烯酸
Cu
4. 与三硝基苯酚反应
二苄基乙二胺
NaOH
苄星青霉素 二苄基乙二胺 △
三硝基苯酚
CH 2
COHN O N
S
CH 3 CH 3 COOH OH OH
-
CH 2
CH 2
H NCH 2 CH 2 NH
三硝基苯酚
NO2 H 2O
O2 N CH 2 CH 2 NO2
6 7 5
S 1
4
CH3
2 3
A
O
N
B
CH3
COOH
母核（6-氨基青霉烷酸）
青霉素类
RCO NH O
S
1 7
A
6
N
B
4
2 3
5
CH2R1
COOH
母核（7-氨基头孢菌烷酸）?
头孢菌素类
CH 2
COHN O N
S
CH 3 CH 3 COOH
青霉素 （青霉素钾、钠）
CH 2 NH 2
COHN O N
HPLC法 反相TLC法 紫外分光光度法
1.头孢他啶聚合物的测定
固定相：葡聚糖凝胶G-10（ 40~120µ m ）
流动相A：3.5%硫酸铵的0.01mol/L磷酸盐缓冲液 流动相B：0.01%十二烷基硫酸钠 对照品溶液：头孢他啶对照品 100µ g/ml
1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子 用1mg/ml蓝色葡聚糖2000、流动相A测定；重 复性用对照品溶液、流动相B测定。 N不低于 900，拖尾因子0.75~1.5，峰面积的RSD应小于
S
CH 3 CH 3 COOH
氨苄西林 （氨苄青霉素）
HO
CH 2 NH 2
COHN O N
S
CH 3 CH 3 COOH
阿莫西林 （羟氨苄青霉素）
CH2
COHN O N
S
CH3 CH3 COOH
NH2
C2H5 2 NCH2CH2OOC
普鲁卡因青霉素
CH 2 NH 2
C ONH O N
S CH 3 COOH
5.0%。
2）测定方法
进样供试液，用流动相A；进样对照液，
用流动相B。以外标法计算，含头孢他啶聚合
物以头孢他啶计不得超过0.3%。
2.头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查
固定相：ODS 流动相：0.2mol/L磷酸二氢铵-甲醇（62:38）
1）头孢呋辛酯Δ2-异构体的制备：头孢呋辛酯对
照品+流动相 头孢呋辛酯Δ2-异构体。
RCOHN O N
S
CH 3 CH 3 COOH
NaOH
第一步
S NH CH3 CH3
RCOHN Na OOC
COONa
第二步
4 I2 + 5 H 2 O + 2 HCl
CH COOH 2 C + 8 HI + 2 NaCl + CH 3 SO H NHCOR 3
CH 3
CH COOH NH 2
2. 方法 供试液
+ Na
焰色→鲜黄色 + 醋酸氧铀锌→↓黄
焰色→紫色 + 0.1%四苯硼钠 + Ac→↓白
K+
2. 沉淀反应（青霉素盐） 遇酸→↓
青霉素钾 青霉素钠
H
+
青霉素
白
在过量HCl或 有机溶剂中溶解
3. 重氮化 - 偶合反应
H+
芳伯氨基
普鲁卡因青霉素 普鲁卡因 + 青霉素
重氮化-偶合反应
红
第十六章 抗生素类药 物的分析
基本要求
一、掌握β—内酰胺类抗生素结构、性质及分析方法的关
系；熟悉一般鉴别反应原理及含量测定方法原理掌 握维生素B1、C、D、E的含量测定原理和方法。 二、熟悉氨基苷类抗生素结构、性质与药物分析方法的关 系。掌握鉴别反应原理及含量测定方法原理。 三、熟悉四环素类抗生素类结构，性质与药物分析方法的 关系。 四、了解抗生素药物的特点，质量分析方法及其分类。
H NOH • HCl