青鱼生长激素在毕赤酵母中的表达

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ｅｔｎｅｔｄｉｔＰＣ．ｋｗｈｃｏｔｉｓＡＯＸＩｐｏｔｒａｄＰｃｉｉ — ｐｅｅｃｄｎｒｈｓｉｉｏｅｙｒｇｎｓ．ｎｌｉｓｒｎｏｐＩ３５ｉｈｃｎａｎｙｅｒｍｏｅｎｉｈａｗｌｔｅｇｎｏｉｇｆｉｄｎｌｄｈｄｏｅａｅｄｙｏｔＴｅｒｃｍｂｎｎｌｓｄｐＩ．ｋｂＧＨａｉｅｒｚｄｂｅｔｃｉｎｅｄｎｃｅｓｓＳｌＩｔｅｒｎｆｒｅｎｏＨＩ４ｈｅｏｉａｔｐａｍｉＰＣ３５－ｃｗｓｌａｉｅｙｒｓｔｎｏｕｌａｅａ，ｈｎｔａｓｏｎｉｒｏｍｄｉｔＳｍｕａｔｙａｔ１５ｂｌｃｒｐｒｔｎ，ｔｅｒｃｍｂｎｎｒｗｈｈｒｎｅｓｒｅｔｅｙｔｅｓｒｅｉｇｏ４８ａｄｔｎｅｓＧＳｙｅｅｔｏａｉ１ｏｏｈｅｏｉａｔｇｏｏｍｏｅｙａｔｗｅｅｃｒｉｄｂｈｃｅｎｎｆＧ１ｎｔｓｉｆｓｑｅｃｎ．Ｓ — ＡＧＥａｄＥＬＳａｙｉｓｏｄｔａｃＨｅｅｅｐｅｓｏｒｄｃｐｅｒｄｉｎｒｃｌｌｒｓｌｔｏ．ｅｕｎｉｇＤＳＰｎＩＡａｌｓｈｗｅｔＧｇｎｘｒｓｉｎｐｏｕｔａｐａｅｎｉｔｅｌａｏｕｉｎｎｓｈｂａｕＵｎｅｈｐｉｚｔｎｏｒｅｔｔｎｃｎｉｏｓｔｅｒｃｍｂｎｎｒｔｉａｅｅｐｅｓｄｉｄｃｉｎｔ４ｈａｄｐｄｒｔｅｏｔｍｉｉｆｆｍｎａｉｏｄｔｎ，ｈｅｏｉａｔｏｅｎｃｎｂｘｒｓｅｎｉｕｔｉ２ｎＨａｏｅｏｉｐｎｏｍｅ
第４卷第６期１
Ｖｏ．１４１ＮＯ６．
Hale Waihona Puke 淡水渔业
２１０１年１１月
ＮＯ．１１Ｖ２０
ＦｅｈｔｒＦｉｈｅｉｓｒｓｗａｅｓｒｅ
青鱼生长激素在毕赤酵母中的表达
谢帝，臻，初ｒ建设，肖鲁芝。刘王赏，张调义，双庆，
２ＩｓｔｔｏｉｅｎｌｙａｄＮｔｔｎｈｎｓａＵｉｒｔ，Ｃａｇｈ４００；．ｎｔｕｏｃｏｇｎｕｒｉ，ＣａｇｈｎｅｉｉｅｆＢｔｈｏｉｏｖｓｙｈｎｓａ１０３
３ＣｌｇＡｉａｃｎｅａｄＴｃｎｌｙｕａｇｉｌｒｌｎｅｉ，Ｃａｇｈ４０２）．ｏｅｅｏｎｌｉｎｅｈｏｏ，ＨｎｎＡｒｕｔａＵｉｒｔｈｎｓａ１１８ｌｆｍＳｅｃｇｃｕｖｓｙ
Ｅｘｅｓｏｆｂａｋａｐｇｏｈｈｏｍｏｐｒｓｉｎｏｌｃｃｒｒｗｔｒｎｅｉｉｈｉｓｏｉｎｐｃａｐａｔｒｓ
ＸＩｉｚｉ，ＬＵＺｅ，ＷＡＮＧＳａｇｃｕ，ＺＥＤ．ｈＩｈｎｈｎ —ｈＨＡＮＧＪａ．ｈｉｎｓｅ，
和ＥＩＡ检测，在２Ｄ处发现一条与预期蛋白分子量大小一致的特异性条带，并且目的蛋白能与青鱼生长激ＬＳ３ｋ素多克隆抗体特异性结合，说明ｂＧｃＨ在酵母胞内得到正确表达。表达条件优化过程中发现，诱导２４ｈ已有重
组蛋白表达，ｐＨ值４５～７０之间都能表达重组蛋白。在ｐ．．Ｈ值６５．％甲醇、温度３．、０５０℃和培养时间７２ｈ的
ＡｂｔａｔｎｏｄｒｔｍｐｉｈＤｓｒｃ：ＩｒｅａｌｙｔｅｃＮＡｆｂａｋｃｒｒｗｈｈｒｎ，ｔｅｐｉｒｒｅｉｎｄａｃｒｉｇｔｈｅ — ｏｆｏｌｃａｐｇｏｔｏｍｏｅｈｒｍｅｓｗｅｅｄｓｅｃｏｄｎｏｔｅＧｎｇ
ｐＩ３５、电击转入毕赤酵母Ｇ１５菌株、Ｇ１ＰＣ．ｋＳ１４８多克隆子筛选和测序验证等步骤进行了重组生长激素酵母菌诱导表达等相关实验，成功获得重组生长激素酵母菌（ＰＣ．ｋｂＧｐＩ３５．ｃＨ重组酵母菌）。蛋白表达产物经ＳＳＰＧＤ．ＡＥ
ＢｎｅｕｎｅｏｌｋｃｒｒｗｈｈｒｎｅｅＡ３９３）ｈｌｃａｒｗｈｈｒｏｅ（ｃＨ）ｃＮａｏｉａｋｓｑｅｃｆａａｇｏｔｏｂｃｐｍｏｅｇｎ（Ｆ８２８．ＴｅｂａｋｃｒｇｏｏｎｂＧｐｔｍＤＡｗｓｒ —
优化条件下，目的蛋白的表达量高达８３ｍ。９＃Ｌ关键词：青鱼（ｙｏｈｒｎｏｏｉｎ）Ｍｌａｙｇｄｎｐｃｓ；生长激素；毕赤酵母；表达ｐｅ中图分类号：ｓ１９７文献标识码：Ａ文章编号：１０－９７（０１０－１－６００６０．２１）６０９００
ＸＩＡＯａ — ｉＬＳｕｎ — ｎＴｉｏｙ．Ｕｈａｇｑｉｇ ’
（．ｅａｔｅｔｆＢｏｃｎｌｙ＆ＥｖｏｍｎｃｎｅＣａｇｈｎｅｉ，Ｃａｇｈ４００；１Ｄｐｒｎｏｉｅｈｏｇｍｔｏｎｉｎｔｉｃ，ｈｎｓａＵｉｒｔｈｎｓａ１０３ｒｅＳｅｖｓｙ
（．长沙学院生物工程与环境科学系，长沙１４００；１０３
２长沙学院生物技术与营养研究所，长沙４００；．１０３３．湖南农业大学动物科技学院，长沙４０２）１１８
摘要：根据Ｇｎａｋ数据库中登记的青鱼（ｌｈｒｇｄｎｐｃｎ）ｅＢｎＭｙｏａｙｏｏｉｓ生长激素（ｃＨ）ｐｎｅｂＧ基因序列（Ｆ８２８设计特Ａ３９３）异性引物，采用Ｒ —ＣＴＰＲ技术扩增青鱼生长激素ｅＮＤＡ编码区，并通过定向插入含强启动子ＡＸＩ的表达载体Ｏ