肝癌相关标致物高尔基体蛋白GP73的基因序列的克隆、表达、抗体制备及初步应用
新型肝癌标志物高尔基体蛋白73(GP73)
向您致以衷心的感谢和 诚挚的祝福！
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二、GP73是肝硬化患者发生肝癌强预测因子
GP73和AFP在肝硬化患者中诊断肝癌 的预测价值
不同GP73的水平，发生肝癌的风险比
944例肝硬化患者中，GP73>150ng/ml的患者338例（35.8%），GP73<150ng/ml 的患者606例（64.2%）。 以GP73>150ng/ml，AFP>400ng/ml作为诊断肝癌的临界值时，GP73的敏感性 要远好于AFP，但特异性要差于AFP。 1-11个月的随访发现，GP73>150ng/ml的患者发生肝癌的比例是GP73<150ng/ml 患者的3.21倍（相对危险度的精确估计值，odds ratio）。
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GP73已在全国范围内快速推广应用
GP73部分临床应用单位（三甲）：解放军
302医院、地坛医院、山东省立医院、盛京医院、 陆军总医院、福建省肿瘤医院、福州传染病医院、 杭州第六人民医院。。。。。
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肝癌早期诊断套餐
血清指标：AFP/AFP-L3/GP73
＋
影像学诊断
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北京热景生物技术有限公司
GP73能预警肝癌的发生
试验结果：14例GP73阳性肝病（非肝癌患者）在8 个月内第二次诊断有6位确诊为肝癌（见下表）， 另有47例GP73阴性（有3例门诊失访）非肝癌患者， 在8个月内有3例第二次诊断发现肝癌。
肝癌标志物高尔基体蛋白73基因在大肠杆菌中的表达
·论著·我国乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）携带者数量庞大，由乙型肝炎发展所致的肝硬化和肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC)已成为危害国民健康的重要疾病，对肝癌进行早期诊断和治疗是面临的一项重要任务。
甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP）是诊断HCC的重要指标[1]，但约30%的HCC 患者AFP阴性。
高尔基体蛋白73（golgi protein73, GP73）是新近发现的一种HCC相关蛋白[2]，是一种潜在的肿瘤标志物，具有重要的应用价值[3，4]。
我们于2010年8月至2011年7月，应用大肠杆菌表达系统成功表达了GP73序列，并对纯化的GP73的抗原性进行了初步评价，为抗体制备和诊断试剂的开发奠定了实验基础，报告如下。
材料与方法一、材料HCC患者互补DNA（complete DNA,cDNA）质粒、菌株质粒BL21用于质粒的克隆与扩增，由本室肝癌标志物高尔基体蛋白73基因在大肠杆菌中的表达张向颖1刘芳1谢立1*娄金丽1刘凯1陈德喜1修冰水2张贺秋2【摘要】目的克隆、表达和鉴定肝癌标志物高尔基体蛋白73（GP73）基因序列（1028~1327bp）。
方法应用Biosun生物学软件分析GP73全序列，预测其抗原表位，将GP73蛋白基因克隆到表达载体PGEX-4T-2上，构建重组表达质粒PGEX-4T-2/GP73，转化大肠杆菌BL21，异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷（IPTG）诱导表达，利用GST亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，并用蛋白印迹分析技术（Western blot）和酶联免疫吸附测定方法（ELISA）检测其抗原性，并与商品化的GP73抗原进行比较。
结果本研究纯化的GP73蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示其相对分子质量为37kD，与预计大小一致。
肝癌相关标致物高尔基体蛋白GP73的基因序列的克隆、表达、抗体制备及初步应用
肝癌相关标致物高尔基体蛋白GP73的基因序列的克隆、表达、抗体制备及初步应用时间：2009-09-29 作者：解放军三○二医院临检中心李伯安李波刘爱霞李永利马洪滨郭静霞毛远丽来源：本站点击量：606肝细胞癌（HCC）是世界上第五种最常见的癌症。
2001年，全世界HCC的标化发病率为21/100,000，标化死亡率为20.2/100,000。
我们可以看出，HCC的发病率和死亡率几乎是一样的，表明了这一肿瘤的预后是极差的。
在2001年美国癌症状况国家年度报告中，HCC是过去十年中发病率增长最快的癌症[2]。
肝硬化是发展成为HCC的最重要的因素；因此肝硬化患者就成为了高危人群。
预测，在美国接下来20年中，丙型肝炎（HCV）相关的HCC的发病率将会持续上升[3]。
考虑到美国肝硬化患者总体生存率的提高[4]，和HCC患病率的持续增加，医学界就迫切需要一种早期HCC诊断的有效方法。
开发出一种敏感度和特异度更高的血清标志物，用于危险人群的HCC早期诊断，就可能会提高这一致命癌症患者的生存率。
目前，甲胎蛋白（AFP）是唯一的推荐用于肝硬化患者HCC监测的血清标志物。
回顾性分析认为，AFP作为早期HCC监测工具，敏感度为39-64%，特异度为76-91%，阳性预测值为9-32%。
另外，据报道，肝脏超声用于临床研究中早期HCC诊断时，具有78%的敏感度，91%的特异度，和73%的阳性预测值。
然而，肝脏超声的准确性是操作者依赖性的，这就限制了它的价值，从而不能作为一种监测性检验方法。
这说明，我们需要一种更好的用于HCC监测的标志物。
高尔基蛋白-73（GP73），最初被认为是一种滞留性的高尔基体II型跨膜蛋白，主要在许多人体组织的上皮细胞中表达。
在正常的人体肝脏中，GP73只在胆上皮细胞中表达，而肝细胞中则几乎检测不到表达。
然而，临床发现，在患有病毒性或非病毒性肝病的患者的肝细胞中，GP73的表达出现显著的上调。
一项最近的研究发现，可在人体血清中检测到GP73，而且，与非肿瘤肝脏相比，在HCC旱獭模型中，血清和组织中的GP73浓度都上升了。
联合检测三种血清标记物在原发性肝癌诊断中的临床价值
联合检测三种血清标记物在原发性肝癌诊断中的临床价值目的对甲胎蛋白（AFP）、高尔基体糖蛋白-73（GP73）与甲胎蛋白异质体比值（AFP-L3%）这三种血清标记物联合检测在原发性肝癌（PHC）诊断中的临床应用价值进行探讨。
方法从我院2011年1月～2013年12月住院患者中选取248例，对患者的GP73、AFP、AFP-L3水平进行检测。
结果AFP检测的特异度为72.8%，敏感度为85.6%；AFP-L3%检测的特异度为87.5%，敏感度为58.0%；GP73检测的特异度为76.6%，敏感度为69.6%；对三种检测方法进行平行联合检测，最高阴性预测值为93.7%，最高敏感性为95.7%；运用系列试验联合检测法，最高阳性预测值为84.2%，最高特异性为93.7%。
结论将GP73与AFP-L3%血清标记物作为肝癌诊断指标，同时联合AFP，能够有效提高检测的特异度和敏感度。
标签：甲胎蛋白；高尔基体糖蛋白-73；甲胎蛋白异质体比值；原发性肝癌据统计，全球每年死于原发性肝癌的患者超过了65万人，中国肝癌发患者数占全球肝癌患者的55%，而发病率仍然在不断攀升[1]。
肝癌预后差的原因之一是多数患者未能早期发现和早期诊断，不同阶段的原发性肝癌治疗效果和预后有明显差异。
临床肝癌诊断主要通过影像学、病理学以及血清甲胎蛋白（AFP）等进行检测，相对来说，病理检查在肝癌诊断中的准确性更高，但这种方法需要通过体外穿刺或手术来获取病灶组织，这无疑会加重患者的痛苦，故在过去很长一段时间里，血清AFP与影像学是原发性肝癌早期诊断的主要方法，但其诊断效果并不理想，故探索一种新的肝癌血清中的标记物显得非常关键[2]。
鉴于此，本研究从临床实际出发选择GP73、AFP-L3和AFP三种血清标记物，探讨其在原发性肝癌中的诊断意义。
1资料与方法1.1一般资料本次研究对象选取的248例患者，均为我院2011年1月～2013年12月接诊的住院患者，对其进行血样标本采集，其中女性患者91例，男性患者157例，患者年龄为25～84岁，平均年龄为（58±10.5）岁；患者中肝硬化患者71例，肝癌患者118例，健康人群30例，其他对照组患者29例（自身免疫性肝炎患者1例，乙型肝炎患者7例，肝轉移癌患者9例，丙型肝炎患者3例，肝血管瘤患者3例，胆囊炎患者6例）。
高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌中的早期诊断价值研究
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伴 巨 大 脓 肿 形 成 引 流 的 应 用 大 大 提 高 了 临 床 手 术 治
愈率 ， 别 是 Ｖ Ｄ技 术其 独 特 的结 构 制作 在 保 证 负 特 Ｓ
压 传 导 的 有 效 性 、 免 引 流 管 堵 塞 和 窦 道 形 成 等 方 面 避
具有 更大 的 优 越 性 ¨ 。本 治 疗 组 １ ７例 骶 髂 关 节 结
完 成 。 此 法 主 要 适 用 于 关 节 前 、 方 同 时 都 有 较 大 的 后
３ 金 格 勒 ， 曼 ， 伟 斌 ， ． 髂 关 节 结 核 的 临床 特 点 及 诊 治 ［ ］ 阿 盛 等 骶 Ｊ
中 国脊 柱 脊 髓 杂 志 ，０ ８ １ （ ）：９ ４ ０ ２ ０ ， ８ ５ ３ ９— ０ ４ 葛 宝 丰 ， 世 壁 ． 术 学 全 集 （ 形 外 科 卷 ） Ｍ］ 北 京 ： 民军 医 卢 手 矫 ［ 人
术 后 深 部 感 染 等 治 疗 中 的 应 用 ［ ］ 脊 柱 外 科 杂 志 ，０ ０， ８ ： Ｊ． ２ １ ５（ ）
２ ４ —２ ７ ７ ７
３ 骶髂 关 节结 核病 灶清 除术 后持 续负 压 引流 ： ． 关
于结核 脓 肿 的引流 问题 尚存 争议 ， 以前 因害怕造 成 混 合 感染 及 形 成 窦 道 ， 主 张 术 后 引 流 。但 后 期 临 不
溃 在 臀 骶 部 形 成 皮 肤 窦 道 ２例 。
用 Ｖ Ｄ技 术 ７～１ Ｓ ０天 ， 后 随访 ６～ ８个 月 ， 口均 术 ３ 伤
一
期 愈合 ， 后 无结 核复 发 。 术
参 考 文 献
１ Ｏ ｍａ Ａ，Ｇ ｖ ｎ ｅ Ｓ ｅ ｔ ａ ｒｉｉ ｓ Ｊ Ｃ ｉ Ｏ ／ｏ ｅａ ｓ ｎＡ ｏ ｅ ｄ ｒ ．Ｓ ｐｉ ｓｃｏ ｉ ｉ［ ］ ｌ ｒ ｐ Ｒ ｌ ｃ ｌｔ ｎ ｈ ｔ
高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌诊断中的临床价值
高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌诊断中的临床价值摘要: 目的探讨定量测定血清中的高尔基体蛋白( GP73) 对肝癌诊断的临床意义。
方法应用双抗体夹心酶联免疫定量测定方法检测肝癌、治疗后、肝癌复发组、良性肝病、其他恶性肿瘤对照组血清中GP73 的含量,应用临床化学发光法测定甲胎蛋白(AFP) 为参比。
结果肝细胞癌组、肝良性病变组、其他恶性肿瘤组和对照组血清GP73 浓度有统计学意义，且肝细胞癌组浓度高于肝脏良性疾病组、其他恶性肿瘤组和对照组（P＜0.01）；单项检测时，GP73的敏感度和特异度分别是71.3%和85.5%,AFP的敏感度和特异度分别是46.2%和80.3% ,GP73和AFP联合检测时敏感度和特异度分别为83.2%和78.4%;原发性肝癌治疗前GP73 浓度显著高于治疗后(P=0.001)。
结论GP73 对于原发性肝癌有较好的诊断性能，可以作为恶性肝病的独立指标与AFP 互补应用于临床。
关键词: 肝癌; 高尔基体蛋白; 诊断Research on the diagnosis of Golgi protei73 (GP73) in the primary hepatocellular carcinoma【Abstract】Objective:To study the determination of Golgi protein in serum (GP73) on the clinical significance of quantitative diagnosis of liver cancer. Methods: The content of GP73 using the method of double antibody sandwich ELISA method for quantitative determination of liver cancer detection, treatment, recurrence of hepatocellular carcinoma group, benign liver diseases, other malignant tumors, clinical chemistry luminescence determination of alpha fetoprotein (AFP) as reference. Results : liver cell carcinoma group, benign liver disease group, other gastrointestinal malignant tumor group and control group had statistical significance in serum GP73 concentration, and concentration of hepatocellular carcinoma group was higher than that in benign liver diseases, other malignant tumor group and the control group (P < 0.01); single detection GP73 sensitivity and specificity 71.3% and 85.5%, AFP sensitivity and specificity were 46.2% and 80.3%, the combined detection of GP73 and AFP sensitivity and specificity were 83.2% and 78.4%; primary liver cancer before treatment was significantly higher than that of GP73 concentration after treatment (P=0.001). Conclusion: GP73 has better diagnostic performance for primary liver cancer, can be used as an independent index for malignant liver disease and AFP complementary to clinical application. Keywords: Golgi protein; hepatocellular carcinoma; diagnosis肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是一种恶性程度高、进展快、预后差、侵袭性强的恶性肿瘤。
高尔基体蛋白73(GP73)在肿瘤诊断中的临床应用
高尔基体蛋白73（GP73）在肿瘤诊断中的临床应用摘要】原发性肝癌是目前世界上致死率最高的恶性肿瘤之一，在全世界范围内的发病率有逐年上升的趋势。
早期诊断对肝癌患者的预后至关重要。
对于肝癌的高危人群，现在最常用的监测手段是定期检测血浆中甲胎蛋白(AFP)水平和影像学检查如超声等。
然而，甲胎蛋白的敏感性和特异性都不令人满意。
近年来，蛋白组学技术的发展使得筛选新的肿瘤标志物成为可能，各种有希望的新的肿瘤标志物被相继发现，其中高尔基体蛋白73 (GP73)最有可能成为更好的诊断肝癌，尤其是早期肝癌的血清标志物。
在仅有的少数报道中，其敏感性可达69% ，特异性可达90% ，而其异构体敏感性和特异性可达90%和100%。
除此之外，新发现的肝癌患者血清中高表达的标志物有甲胎蛋白异质体(AFP2L3)、异常凝血酶原(DCP) 、α2L2岩藻糖苷酶(AFU)、磷脂酰基醇蛋白聚糖23 (GPC23)、肝细胞生长因子(HGF) 、转化生长因子β1 (TGFβ1)、血管内皮生长因子(VEGF)、粘液素1 (MUC21，KL21)等。
这些新的血清标志物，正在被各种临床研究进行检测，有希望改变肝癌早期诊断和治疗的现状。
我们正在进行GP73的大样本临床研究，取得初步结果。
肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)的增长速度之快已成为一个世界性难题，其发病率在全球位居第4位，总发患者数约56.4万[1]。
在我国，由于乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)携带者数量之庞大，与此相关的HCC患者已占世界的55%左右，其死亡率在恶性肿瘤中排第2位。
乙型肝炎、肝硬化及肝癌在医疗费用及社会负担中占有相当大的比重。
在过去相当长的时间里，早期诊断HCC主要是依靠影像学手段及血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)，但影像学检查对肿瘤体积较小者不易被发现;临床上最常用的AFP也因其敏感性(39%-64%)不高并不令人满意[2]。
高尔基体蛋白73(GP73)的研究进展
高尔基体蛋白73(GP73)的研究进展
赵娣;马茂;高向阳;覃于洪;何妮;韩雪
【期刊名称】《现代医学与健康研究电子杂志》
【年(卷),期】2022(6)6
【摘要】高尔基体蛋白73(GP73)是一类常驻高尔基体Ⅱ型跨膜蛋白,其对于维持人体机能至关重要。
在病毒感染和营养状况波动时上调,GP73能够调节肝内脂肪运输、促进肝内的糖异生及介导肝癌细胞的转移。
临床研究发现GP73水平不仅与病毒性肝炎、非酒精性脂肪肝病、肝纤维化、肝硬化等慢性肝病密切相关,也与肝癌、胆囊癌、肺癌等肿瘤疾病的发生、发展相关。
本研究就近几年来GP73在基础临床诊断的价值和治疗作用作出如下综述。
【总页数】6页(P25-30)
【作者】赵娣;马茂;高向阳;覃于洪;何妮;韩雪
【作者单位】吉林大学第一医院健康管理中心;西安交通大学医学院第一附属医院健康管理中心;中国健康促进基金会;重庆大学附属涪陵医院肝病与转化医学科;贵港市人民医院健康管理中心;城固县中医医院健康管理中心
【正文语种】中文
【中图分类】R256.4
【相关文献】
1.探讨联合检测高尔基体糖蛋白 GP73、甲胎蛋白异质体和甲胎蛋白在诊断原发性肝癌的临床价值
2.Ⅱ型高尔基体膜蛋白GP73的研究进展
3.高尔基体蛋白73
（GP73）在原发性肝癌诊断中的临床价值4.高尔基体蛋白GP73和Ki-67在胆囊癌中的表达及临床意义5.高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌中的早期诊断价值研究
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高尔基体蛋白73标准值
高尔基体蛋白73标准值全文共四篇示例，供您参考第一篇示例：高尔基体蛋白73（Golgi Protein 73，GP73）是一种位于高尔基体和内质网之间的膜蛋白，它在多种生理和病理条件下发挥重要作用。
GP73的标准值对于肝脏疾病的诊断和治疗具有重要的临床意义。
本文将围绕GP73的标准值展开详尽的介绍，以期为读者提供详实的知识和资讯。
我们来介绍一下GP73的一般特征及其生理功能。
GP73是一种高度保守的蛋白质，广泛存在于多个组织和器官中，但其在肝脏中表达量最高。
GP73属于非酶性高尔基体膜蛋白，它参与了泛素化、泛扯化和囊泡转运等细胞生物学功能。
关于GP73的标准值，一般是通过血清或血浆中的浓度来进行检测。
目前临床上对于成年人而言，正常人群GP73的标准值一般在10-20 ng/ml之间。
而对于儿童而言，GP73的标准值可能会有所不同，需要根据年龄和性别的不同而有所调整。
那么，为什么要对GP73的标准值进行检测呢？一方面，GP73作为肝脏疾病的新的生物标志物，对于肝脏疾病的早期诊断和鉴别诊断有着非常重要的价值。
通过检测肝脏疾病患者血清中GP73的含量，可以及时发现肝炎、肝硬化、肝脏肿瘤等肝脏疾病的变化，为临床治疗提供了重要的依据。
对于肝脏移植术后的监测也需要通过检测GP73的标准值来判断肝脏功能的复原情况。
通过不同时间点的检测，可以了解肝脏移植患者的康复情况，是否出现了排斥反应或者肝脏功能障碍等问题。
近年来研究还发现GP73对于代谢性疾病、肿瘤等其他疾病也有一定的参考价值。
部分研究表明GP73与肥胖、糖尿病等代谢性疾病有一定的相关性，因此在未来可能对这些疾病的辅助诊断和治疗提供帮助。
需要注意的是，血清中的GP73标准值受到许多因素的影响，比如性别、年龄、季节、个体差异等都会对其标准值造成影响。
在进行检测时，需要综合考虑患者的整体情况，不能仅仅依赖于GP73的标准值来进行诊断。
GP73的标准值作为一种新的生物标志物，在肝脏疾病的早期诊断、肝脏移植后的康复监测以及其他疾病的辅助诊断中具有重要的临床应用价值。
gp73与肝癌临床诊断和治疗的研究进展
・214・ChineseHepatology,Feb.2020,Vol.25,No.2.综述.GP73与肝癌临床诊断和治疗的研究进展孙振宇袁旦平徐力善高尔基体蛋白73(Golgi protein-73,GP73)是肝癌最有价值的标志之一。
GP73水平的增加与肝硬化、肝癌、乙型肝炎相关的急性慢性肝功能衰竭以及预测肿瘤转移密切相关。
研究表明肝癌患者血清GP73表达水平升高，促进了肝癌的侵袭与迁移。
目前GP73已作为肝癌早期诊断的血清标记物已被纳入肝癌的临床实验室检查。
而随着人们对GP73的深入研究发现,GP73与多种肝癌治疗的药物存在相关性，并且血清GP73含量的多寡也可直接影响到肝癌的发生及发展,这表明GP73或将成为肝癌临床治疗的新靶点。
目前国内外对于GP73的研究主要集中在GP73促进肝癌发生和进展的生物学功能研究，本文就近年来有关GP73与肝癌的临床诊断和治疗的研究进展进行综述。
一、GP73的上调机制GP73最初是在2000年由研究成人巨细胞肝炎的美国学者Kladney RD发现的⑵。
关于GP73在肝癌中的上调机制以及GP73的生物学功能，目前国内外尚无定论。
有研究指出，GP73的升高是由于乙型肝炎病毒所引起的Notch1通路激活所致GP73在诱导小鼠急性肝炎模型中表现出明显升高的趋势,并推测GP73水平的升高可能与血清炎性因子表达水平的升高密切相关刘宁等研究表明,转化生长因子(可以刺激机体应答，促使血清中GP73的表达水平上调,GP73的上调表现在蛋白水平与mRNA水平上5。
可见GP73的上调机制和炎症密切相关,并可能涉及如Notch1等通路的参与，GP73上调的具体机制和相关通路还有待进一步验证和商榷方可下定论。
关于上调后的GP73如何促进肝癌的发展，其研究焦点主要集中在上皮间质化(Endothelialtomesenchymal transition, EMT)之上，相关研究表明在GP73过表达的肝癌细胞系中可以检测到EMT标志物的增加，而在GP73敲低的肝癌细胞系中可以检测到间质上皮化标志物的增加，得出GP73通过上调EMT进而促进了肝癌侵袭性的结论6。
高尔基体蛋白73的单克隆抗体、试剂盒及应用[发明专利]
![高尔基体蛋白73的单克隆抗体、试剂盒及应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/4cd9bab7804d2b160a4ec0dc.png)
专利名称：高尔基体蛋白73的单克隆抗体、试剂盒及应用专利类型：发明专利
发明人：王卫东
申请号：CN202010164717.5
申请日：20200311
公开号：CN111378627A
公开日：
20200707
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及高尔基体蛋白73单克隆抗体、包含该抗体的试剂盒及其在检测高尔基体蛋白73中的应用。
本发明同时涉及检测血清中高尔基体蛋白73水平的方法。
将包含所述GP73单克隆抗体检测试剂盒用于检测人血清中的GP73，灵敏度高，特异性强。
并且，本发明提供的试剂盒和方法在临床上可用于肝硬化的辅助诊断。
申请人：海南众森生物科技有限公司,天津金虹生物科技开发有限公司
地址：570216 海南省海口市南海大道100号美国工业村2-8单元厂房
国籍：CN
代理机构：北京睿阳联合知识产权代理有限公司
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高尔基体蛋白73在原发性肝癌诊断中的价值
高尔基体蛋白73在原发性肝癌诊断中的价值摘要】目的探讨高尔基体蛋白73（GP73）在诊断原发性肝癌中的临床应用价值。
方法收集117例甲胎蛋白阳性患者（>10ng/mL）血清样本，采用酶联免疫吸附法测定GP73含量。
结果高尔基体蛋白73在原发性肝癌组为117.63±25.78ng/mL，显著高于肝硬化组（81.24±18.49ng/mL）、肝炎组（78.12±16.01ng/mL）和对照组（45.49±8.78ng/mL），差异有显著性（P<0.01）；高尔基体蛋白73诊断原发性肝癌的ROC曲线下面积分别为0.881。
结论高尔基体蛋白73可以作为原发性肝癌临床诊断的分子标志物，对临床具有辅助诊断和鉴别诊断价值。
【关键词】原发性肝癌高尔基体蛋白73【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）29-0217-02肝癌是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一。
早诊断、早治疗是提高肝癌患者生存率的最佳途径[1]。
甲胎蛋白(Alpha fetoprotein，AFP)是当前被广泛认可的诊断原发性肝癌最有价值的血清学标志物，但对慢性肝病基础上较为常见的良性病变与小肝癌的鉴别仍较困难。
有文献报道高尔基体蛋白73(Golgiprotein 73，GP73)最有可能成为更好的诊断肝癌，特别是肝癌早期诊断的血清学标记物[2]。
本研究以甲胎蛋白阳性的排除相关肝病、慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌患者为研究对象，检测患者血清中GP73含量，以探讨其对肝癌早期及鉴别诊断的临床应用价值。
资料与方法1.资料选取本院2007年1月－2012年12月住院的AFP阳性（>10ng/mL）患者117例，其中，肝癌患者51例，年龄35～74岁，平均年龄54岁，男41例，女10例；非肝癌患者66例，其中：肝硬化32例，慢性乙型肝炎24例，对照（排除相关肝病）10例；年龄34～82岁，平均年龄58岁，男53例，女13例。
一种新的血清肝癌标志物——GP73
一种新的血清肝癌标志物——GP73肖潇【摘要】血清甲胎蛋白(AFP)检查是目前应用最广泛的肝癌肿瘤标志物,部分肝癌患者AFP检测结果呈阴性.学者们一直在寻找新的血清肝癌标志物,高尔基体蛋白73(GP73)是一种2型高尔基体膜蛋白.众多研究表明,GP73对肝癌诊断的敏感性和特异性均优于AFP,而核心岩藻糖化GP73则更为理想.因此,GP73与AFP和(或)其他肝癌标志物联合检测可能会大幅度提高早期肝癌的诊断率.%Serum alpha-fetoprotein( AFP )examination is the most widely used tumor marker, but some patients with liver cancer AFP test results were negative. Scholars have been looking for new serum tumor markers of liver cancer. The Golgi protein 73( GP73 )is a type 2 Golgi membrane protein, many studies have shown that GP73 sensitivity and specificity for diagnosis of hepatocarcinoma are better than AFP,while the core fucosylated GP73 is more ideal. So GP73 and AFP and/or other tumor markers combined detection may substantially improve the diagnostic rate of early hepatocarcinoma.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2012(018)020【总页数】3页(P3380-3382)【关键词】肝癌;血清肿瘤标志物;高尔基体蛋白73【作者】肖潇【作者单位】第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科,重庆,400042【正文语种】中文【中图分类】R446.61肝癌是全球常见的十种恶性肿瘤之一，全世界每年约有25万人死于肝癌，中国因肝癌死亡的人数占全球死亡人数的45%～50%［1］。
GP73与肝癌关系的研究进展
GP73与肝癌关系的研究进展
吴婧;徐伟文
【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》
【年(卷),期】2013(000)005
【摘要】肝癌是常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高、死亡率高，其早期诊断对于病人的治疗极为重要。
目前临床广为使用的甲胎蛋白检测与影像学相结合的方式，在早期肝癌的敏感性和特异性诊断方面尚存在一些缺陷，寻找更有效的新肿瘤标志物是临床期盼的需求。
高尔基体糖蛋白73（Golgi protein-73， GP73）是存在于高尔基体的一种II型跨膜糖蛋白，在早期肝癌患者血清内表达上调，近年来有很多研究认为GP73是最有潜力的肝癌血清标志物之一。
本文就近年来GP73与肝癌关系的研究进展做综述。
【总页数】8页(P339-346)
【作者】吴婧;徐伟文
【作者单位】南方医科大学临床医学八年制，广东，广州510515;南方医科大学生物技术学院，广东，广州510515
【正文语种】中文
【相关文献】
1.GP73与肝癌关系的研究进展 [J], 顾剑锋;李明峰;顾树南
2.GP73及其与肝癌诊断的研究进展 [J], 朱源荣;陆建华;;
3.新肝癌血清标记物GP73在肝癌介入治疗前后的变化及预后的关系 [J], 马铭;谢明瑞
4.GP73与肝癌临床诊断和治疗的研究进展 [J], 孙振宇; 袁旦平; 徐力善
5.原发性肝癌患者TSGF、GP73水平与预后关系的研究 [J], 何孝敏
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高尔基体糖蛋白GP73基因的构建、表达及鉴定
高尔基体糖蛋白GP73基因的构建、表达及鉴定李新禹;李淑珍;陈莉;单瑞辉;唐晓波【期刊名称】《哈尔滨医科大学学报》【年(卷),期】2011(45)6【摘要】目的重组及表达人高尔基体糖蛋白73(GP73)的融合蛋白,为建立一种新的肝癌诊断方法奠定基础。
方法提取转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞(293细胞)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出GP73基因,将其分别与带有HIS标签的PET-32a及GST标签的PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆并测序鉴定。
进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达GP73融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE 及Western blot鉴定。
结果 293细胞株提取的RNA经RT-PCR、PCR扩增后得到一条255 bp的DNA片段,经测序鉴定为GP73基因序列;并在大肠杆菌中实现了可溶性高表达,Western blot鉴定为GP73融合蛋白。
结论采用原核表达方法可获得高纯度的GP73融合蛋白,为进一步开发GP73诊断试剂打下基础,为肝癌的诊断开辟新途径。
【总页数】4页(P510-512)【关键词】肝癌;GP73基因;克隆【作者】李新禹;李淑珍;陈莉;单瑞辉;唐晓波【作者单位】哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室【正文语种】中文【中图分类】R735.7;Q78【相关文献】1.单纯疱疹病毒糖蛋白D与IL-2基因共表达质粒的构建及其免疫学鉴定 [J], 李伟荣;王得新;王健伟;牛勃;胥显民2.人高尔基体蛋白GP73基因的克隆、表达、单克隆抗体的制备及鉴定 [J], 徐言;曾晓燕;张晓;金秋;张建平;焦永军3.汉滩病毒糖蛋白与人溶酶体相关膜蛋白重组真核表达载体的构建表达鉴定及作为基因疫苗的免疫安全性评价 [J], 张锦鹏;张冠文;宣国云;孟强;谢文宇;高宏;姜东伯;杨琨4.卡氏肺孢子菌主要表面糖蛋白上游保守序列基因microRNA表达载体的构建和鉴定 [J], 梅林;姚云清;朱艳玲;骆晓练;李文桂;陈雅棠5.卡氏肺孢子主要表面糖蛋白UCS基因siRNA表达载体的构建和鉴定 [J], 谭燕;姚云清;王莉妮;唐滢浍;李文桂;马良;陈雅棠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高尔基体糖蛋白73在原发性肝癌中的表达及意义
高尔基体糖蛋白73在原发性肝癌中的表达及意义叶佩灵;吴晓蔓【期刊名称】《海南医学院学报》【年(卷),期】2014(020)001【摘要】目的:探讨血清高尔基体糖蛋白73(GP73)在原发性肝癌患者中的临床应用价值.方法:收集肝癌实验组患者53例、肝病对照组患者88例、肝癌复发监测组患者8例、肝癌疗效观察组13例和健康对照组20例血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测法测定血清GP73的浓度,7600生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(ALT)、直接胆红素(DBIL)、总胆汗酸(TBA)的水平.结果:肝癌实验组血清GP73水平高于肝病对照组及健康对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);血清GP73水平分别与ALT、DBIL、TBA水平高度相关,差异具有统计学意义(P＜0.05);血清GP73水平与门脉癌栓的发生相关,差异具有统计学意义(P＜0.05);肝癌疗效观察组有3例血清GP73浓度随着有效治疗下降;肝癌复发监测组8例GP73随着肿瘤复发而上升,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:血清GP73可作为反映原发性肝癌患者肝损伤的血清指标,对原发性肝癌的辅助诊断、疗效观察、预后判断、复发监测具有临床意义.【总页数】5页(P83-86,89)【作者】叶佩灵;吴晓蔓【作者单位】广州医科大学附属第二医院检验科,广东广州 510260;广州医科大学附属第二医院检验科,广东广州 510260【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.高尔基体糖蛋白73与甲胎蛋白异质体百分比及总胆汁酸在原发性肝癌的表达及其临床应用 [J], 章健;叶迎宾;黄秀香;田楠楠2.高尔基体糖蛋白73、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、甲胎蛋白异质体百分比联合检测在原发性肝癌诊断中的应用 [J], 叶迎宾;黄秀香;郭卫刚;章健;赵斗贵3.血清甲胎蛋白高尔基体糖蛋白73与去r-羧基凝血酶原三项联合检测在原发性肝癌诊断中的应用 [J], 吴晓英4.血清IL-17A与干扰素γ诱导蛋白10在原发性肝癌中的表达及临床意义 [J], 李玮;谢友利;刘雅娟;吴兰梅5.血清醇脱氢酶、分泌型蛋白Dickkopf1、黏附分子1在原发性肝癌患者中的表达及临床意义 [J], 卢伟娜;许怡;王德华;王建民;杨莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血清高尔基体蛋白73在原发性肝癌中的表达及早期诊断意义
血清高尔基体蛋白73在原发性肝癌中的表达及早期诊断意义罗红;毛中鹏;崔玲;王力军;张茶;沈琼【摘要】Objective To explore the expression and clinical significance of serum golgi protein 73 (GP73) in patients with primary hepatic carcinoma (PHC). Methods 47 patients with PHC (group PHC) and 40 patients with liver cirrhosis (group liver cirrhosis) were recruited in this study. SerumGP73 of the two groups were detected using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Alpha-Fetal protein (AFP) of the two groups were detected using the electrochemiluminescence method. The results were compared. Results The serum levels of GP73 (220.44±89.71) μg/L or AFP (404.06±135.43) μg/L was significantly increased in hepatic carcinoma group compared with GFP73 (112.67± 34.89) μg/L and AFP (71.17±16.24) μg/L in liver c irrhotic group, and the differences of the two groups were statistically significant (t= 93.485, t =250.924; average P<0.001). The positive rates of serum GP73 was 85.11% (40/47) and AFP was 61.70% (29/47) in hepatic carcinoma group, while in liver cirrhosis group GP73 with 15.00% (6/40) and AFP with 22.50% (9/40), and the differences of the two groups were statistically significant (χ2 =73.654, χ2 =31.284; average P<0.001). Abnormal serum GP73 levels in Hepatic carcinoma group was related to combined liver cirrhosis and lymph node metastasis (t =2.061, t =2.133; average P<0.05), but not relationship with tumor size and clinical stage was found (t =0.560, t =0.573; average P >0.05 ). Conclusion GP73 is highly expressed in the serum of PHC patients, whichmay be associated with the occurrence and development of liver cancer. Early detection of Serum GP73 should be helpful for early diagnosis of PHC.%目的探讨血清高尔基体蛋白73(GP73)在原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)患者血清中的表达及其临床意义.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测我院收治的47例PHC(肝癌组)及40例肝硬化(肝硬化组)血清中GP73,同时用电化学发光法检测血清甲胎蛋白(AFP),并将检测结果进行对比.结果GP73和AFP测定值肝癌组分别为(220.44±89.71) μg/L、(404.06±135.43)μg/L,肝硬化组分别为(112.67 +34.89) μg/L、(71.17±16.24) μg/L,组间比较差异均有统计学意义(t=93.485,t=250.924；P均＜0.001).GP73和AFP阳性率肝癌组分别为85.11％ (40/47)、61.70％(29/47),肝硬化组分别为15.00％ (6/40)、22.50％(9/40),组间比较差异均有统计学意义(X2=70.654,X2=31.284;P均＜0.001).肝癌组GP73异常与合并肝硬化或淋巴结转移有关(t=2.061,=2.133；P均＜0.05),与肿瘤大小及临床分期无关(t=0.560,t=0.573;P均＞0.05).结论肝癌患者血清高表达GP73,可能与肝癌的发生、发展有关,检测GP73有助于PHC早期诊断.【期刊名称】《临床误诊误治》【年(卷),期】2012(025)012【总页数】3页(P50-52)【关键词】肝肿瘤;高尔基体蛋白73;甲胎蛋白;诊断【作者】罗红;毛中鹏;崔玲;王力军;张茶;沈琼【作者单位】050081石家庄,武警河北总队医院传染科;300162天津,武警医学院附属医院肿瘤外科;050081石家庄,武警河北总队医院传染科;050081石家庄,武警河北总队医院传染科;050081石家庄,武警河北总队医院传染科;050081石家庄,武警河北总队医院传染科【正文语种】中文【中图分类】R735.7原发性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)为世界范围内发病率较高的恶性肿瘤，70% ～85%为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)[1]。
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肝癌相关标致物高尔基体蛋白GP73的基因序列的克隆、表达、抗体制
备及初步应用
时间：2009-09-29 作者：解放军三○二医院临检中心李伯安李波刘爱霞李永利马洪滨郭静霞毛远丽来源：本站点击量：606
肝细胞癌（HCC）是世界上第五种最常见的癌症。
2001年，全世界HCC的标化发病率为21/100,000，标化死亡率为20.2/100,000。
我们可以看出，HCC的发病率和死亡率几乎是一样的，表明了这一肿瘤的预后是极差的。
在2001年美国癌症状况国家年度报告中，HCC是过去十年中发病率增长最快的癌症[2]。
肝硬化是发展成为HCC的最重要的因素；因此肝硬化患者就成为了高危人群。
预测，在美国接下来20年中，丙型肝炎（HCV）相关的HCC的发病率将会持续上升[3]。
考虑到美国肝硬化患者总体生存率的提高[4]，和HCC患病率的持续增加，医学界就迫切需要一种早期HCC诊断的有效方法。
开发出一种敏感度和特异度更高的血清标志物，用于危险人群的HCC早期诊断，就可能会提高这一致命癌症患者的生存率。
目前，甲胎蛋白（AFP）是唯一的推荐用于肝硬化患者HCC监测的血清标志物。
回顾性分析认为，AFP作为早期HCC监测工具，敏感度为39-64%，特异度为76-91%，阳性预测值为9-32%。
另外，据报道，肝脏超声用于临床研究中早期HCC诊断时，具有78%的敏感度，91%的特异度，和73%的阳性预测值。
然而，肝脏超声的准确性是操作者依赖性的，这就限制了它的价值，从而不能作为一种监测性检验方法。
这说明，我们需要一种更好的用于HCC监测的标志物。
高尔基蛋白-73（GP73），最初被认为是一种滞留性的高尔基体
II型跨膜蛋白，主要在许多人体组织的上皮细胞中表达。
在正常的人体肝脏中，GP73只在胆上皮细胞中表达，而肝细胞中则几乎检测不到表达。
然而，临床发现，在患有病毒性或非病毒性肝病的患者的肝细胞中，GP73的表达出现显著的上调。
一项最近的研究发现，可在人体血清中检测到GP73，而且，与非肿瘤肝脏相比，在HCC旱獭模型中，血清和组织中的GP73浓度都上升了。
因此，GP73将成为HCC早期诊断的标志物。
为了建立一个形式化的框架用于指导癌症生物标志物的评估和开发过程，美国国家癌症研究院的早期诊断研究网络采用了一个5期计划[12]。
1期生物标志物开发研究的目的是（a）确定能否在肝病或非肝病患者血清中检测到GP73，（b）确定HCC患者血清中GP73浓度是否比肝硬化患者的更高，（c）比较GP73和AFP的在区分HCC与非肿瘤慢性肝病时所表现的性能特征。
我们根据报道的GP73全基因序列设计、合成巢式PCR引物，从HepG2细胞中分离出GP73的基因片段。
将该片段克隆到pET-28载体中，经过核苷酸序列测定证明该片段与报道序列的同源性为100％。
将该重组载体转染至大肠杆菌BL21中，并诱导表达。
经过蛋白电泳鉴定，重组体细菌裂解后可见外源基因表达带，与预期片段大小一致。
细菌蛋白经纯化后，免疫新西兰白兔制备多抗，同时按常规方法免疫Bablc小鼠，建立杂交瘤细胞系，制备单抗。
并应用饱和硫酸铵法纯化单抗。
将上述制备的应用多抗纤维素DE52纯化后，采用改良过碘酸钠法，用辣根过氧化物酶（HRP）标记纯化的多抗。
将纯化后的单抗按常规方法包被酶联板，按常规ELISA方法，分别加入肝癌患者血清温浴后，再加入酶标多抗温浴后，加入底物显色，建立血清了双抗体夹心ELISA检测GP73的方法，并证实单抗、多抗有共同的抗原结合位点。
随后应用标准矩阵实验，确定ELISA实验中的最佳包被、血清稀释度及酶标抗体浓度确立ELISA检测方案。
随后，根据上述最终确立的ELISA实验方案，对90例健康献血员，92例慢性肝炎患者及68例HCC患者血清进行了检测。
结果显示在献血员、慢肝患者及HCC患者中GP73的阳性率分别为3.33％（3/90）、31.5％（29/92）、75.0％（51/68）统计分析表明各组间阳性率差异具有统计学意义。
通过实验研究，我们获得了与报道序列同源性为100％的GP73基因片段，并通过克隆、表达、纯化获得了GP73的原核表达片段。
随后我们通过免疫兔制备、纯化了多抗，并进一步免疫小鼠后建立了杂交瘤细胞系后制备并纯化了单克隆抗体。
在标记了多抗后，我们建立了双抗体夹心检测GP73的ELISA 方法。
最后，我们检测了健康人群、慢肝及肝癌患者血清中的GP73，发现各组间阳性率差异显著。
我们的研究为进一步确定对GP73在HCC早期诊断中意义，奠定了基础。
下一步我们将建立糖基化GP73的检测方法（根据报道该异质体与肝癌的相关性更显著），并进一步进行病理学及大规模的流行病学调查以确立GP73及糖基化的GP73在HCC早期诊断中的作用。