生化试验技术PPT精品课程讲义
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生物化学检验常用技术(共66张PPT)
4、Lambert-Beer定律的偏离现象
单色光 均匀介质 吸收物质无相 互作用
5、空白溶液的选择
在分光光度法中，为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、抵消比色皿和 试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。
不
蒸 馏 水
试
样
含 待
剂
品
测
元
不
显 色
素
1、溶剂空白：不加样品和任何试剂，用纯溶剂（如蒸馏水或其他有机溶剂）作参比溶液。 选择原则：当显色剂及其它试剂均无色，被测试样中又无其他有色离子时，选用溶剂参比。
常用的固定化技术有：吸附、试剂交联、共价键合、
包埋法(酶与载体聚丙酰胺混合后直接包在电极 敏感部分形成酶凝胶层)。
几种酶电极的品种与性能
测定物质
酶
检测物 测定范围(mol/L)
葡萄糖 葡萄糖氧化酶
尿素(脲)
脲酶
胆固醇 胆固醇氧化酶
L－谷氨酸 谷氨酸脱氢酶 L－赖氨酸 赖氨酸脱羧酶
O2 NH3 H2O2 NH4+ CO2
单色器
滤光片
棱镜
光栅
吸收池
检测器
玻璃比色皿
石英比色皿
显示器
4
(一)、分光光度技术的基本原理
1、吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光 被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透 光度，即：
入射光 I0
透射光 I
T = I/I0
10-4～2*10-2 10-5～10-2 10-5～10-2 10-4～10-1 10-4～10-1
离子选择性电极的分析方法
单色光 均匀介质 吸收物质无相 互作用
5、空白溶液的选择
在分光光度法中，为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、抵消比色皿和 试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。
不
蒸 馏 水
试
样
含 待
剂
品
测
元
不
显 色
素
1、溶剂空白：不加样品和任何试剂，用纯溶剂（如蒸馏水或其他有机溶剂）作参比溶液。 选择原则：当显色剂及其它试剂均无色，被测试样中又无其他有色离子时，选用溶剂参比。
常用的固定化技术有：吸附、试剂交联、共价键合、
包埋法(酶与载体聚丙酰胺混合后直接包在电极 敏感部分形成酶凝胶层)。
几种酶电极的品种与性能
测定物质
酶
检测物 测定范围(mol/L)
葡萄糖 葡萄糖氧化酶
尿素(脲)
脲酶
胆固醇 胆固醇氧化酶
L－谷氨酸 谷氨酸脱氢酶 L－赖氨酸 赖氨酸脱羧酶
O2 NH3 H2O2 NH4+ CO2
单色器
滤光片
棱镜
光栅
吸收池
检测器
玻璃比色皿
石英比色皿
显示器
4
(一)、分光光度技术的基本原理
1、吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光 被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透 光度，即：
入射光 I0
透射光 I
T = I/I0
10-4～2*10-2 10-5～10-2 10-5～10-2 10-4～10-1 10-4～10-1
离子选择性电极的分析方法
《生化实验》课件
实验流程
1
实验准备
清洗仪器、准备试剂和标本，确保实验顺利进行。
2
实验操作
按照操作步骤进行样本处理、反应和测量。
3
数据记录
准确记录实验数据，便于后续分析和结果展示。
实验方案的制定
目标设定
定义实验目标和预期结果，指导实验方案的制定。
调整量
确保实验中只有一个变量改变，其他条件保持恒定。
《生化实验》PPT课件
探索生化实验的奥秘，了解其应用领域和实验室安全知识。学习实验流程、 制定实验方案和数据分析，解答常见问题。
生化实验简介
1 关键性实验技术
学习DNA测序、蛋白质表达、酶活性等生化 实验技术。
2 学术研究工具
了解生化实验在药物研发、基因工程和医学 诊断等方面的应用。
生化实验的应用
实验改进
提出改进实验方案的建议，优 化实验设计和操作。
数据分析和结果展示
统计分析
使用统计方法对实验数据进行分 析，发现规律和趋势。
图表展示
使用图表和图形呈现实验结果， 直观清晰地展示研究发现。
实验报告
撰写详细的实验报告，包括实验 目的、方法、结果和结论。
常见问题解答
实验失败
分析失败原因，如实验条件、 操作技巧和实验材料等。
结果解释
解释实验结果，讨论研究意义 和可能的应用。
医药研究
开发新药物、研究药物代谢和 毒性，为治疗疾病提供科学依 据。
基因工程
编辑基因序列、合成重组蛋白， 促进生命科学研究的进展。
食品安全
检测食品中的有害物质，确保 食品安全和卫生。
实验室安全
1 个人防护措施
佩戴实验室服装、手套和护目镜，避免与实验物质接触。
《生化检验技术基础》PPT课件
深绿 绿色带蓝 蓝色带绿
紫蓝 青紫 深紫 深红 桔红 深黄 绿色带黄 Ultra-violet
精选ppt
可见
9
（3）光学因素的影响
散射是向空间各个方向，而使透射光 减弱。反射可使光能损失，当光线通过 两种不同介质时，则发生反射。当样本 溶液与空白溶液的折射率有较大差异时， 导致吸收值的偏差。
（4）非平行光通过吸收池时，由于光线 的倾斜使厚度L增大而影响测量值。
精选ppt
6
2．影响因素
（1）化学因素的影响
溶液中溶质可因浓度的改变而发生离 解、缔合，与溶剂间的作用等原因而出 现偏离比尔定律的现象。由化学因素引 起的偏离，有时可控制溶液条件设法减 免。此外，能产生荧光的物质也可导致 偏离比尔定律。
精选ppt
7
（2）非单色光的影响
比尔定律的一个重要条件是单色光， 但在比色分析中常有不同波长的光同时 存在。这就使吸光度发生改变，从而偏 离比尔定律。
生化检验技术基础 与进展
上海长征医院实验诊断科
于嘉屏
精选ppt
1
一、比色分析
1．比色分析理论――Beer-Lambert 定律
A = lg（I0/I）＝KCL 或 I＝I0×10-KCL
I0：入射光强度 I：透过光强度 K：常数 C：溶液浓度 L：溶液的厚度
精选ppt
2
（1）郎伯定律
I0
It
l
L
精选ppt
4
透光率（transmittance，T，透射率） T＝I / I0
吸光度（absorbance，A） 光密度（eptical density，D或OD）
A＝lg I0/I＝-lgT T＝10-A＝10-KCL A＝KCL 当L用cm，C用mol/L表示，则K即称之为 摩尔吸光系数，用ε表示。 当C＝1mol/L，L＝1cm，则ε＝A。
紫蓝 青紫 深紫 深红 桔红 深黄 绿色带黄 Ultra-violet
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可见
9
（3）光学因素的影响
散射是向空间各个方向，而使透射光 减弱。反射可使光能损失，当光线通过 两种不同介质时，则发生反射。当样本 溶液与空白溶液的折射率有较大差异时， 导致吸收值的偏差。
（4）非平行光通过吸收池时，由于光线 的倾斜使厚度L增大而影响测量值。
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6
2．影响因素
（1）化学因素的影响
溶液中溶质可因浓度的改变而发生离 解、缔合，与溶剂间的作用等原因而出 现偏离比尔定律的现象。由化学因素引 起的偏离，有时可控制溶液条件设法减 免。此外，能产生荧光的物质也可导致 偏离比尔定律。
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7
（2）非单色光的影响
比尔定律的一个重要条件是单色光， 但在比色分析中常有不同波长的光同时 存在。这就使吸光度发生改变，从而偏 离比尔定律。
生化检验技术基础 与进展
上海长征医院实验诊断科
于嘉屏
精选ppt
1
一、比色分析
1．比色分析理论――Beer-Lambert 定律
A = lg（I0/I）＝KCL 或 I＝I0×10-KCL
I0：入射光强度 I：透过光强度 K：常数 C：溶液浓度 L：溶液的厚度
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2
（1）郎伯定律
I0
It
l
L
精选ppt
4
透光率（transmittance，T，透射率） T＝I / I0
吸光度（absorbance，A） 光密度（eptical density，D或OD）
A＝lg I0/I＝-lgT T＝10-A＝10-KCL A＝KCL 当L用cm，C用mol/L表示，则K即称之为 摩尔吸光系数，用ε表示。 当C＝1mol/L，L＝1cm，则ε＝A。
生化检验实验室基本知识PPT医学课件ppt学习课件
防止溶血的办法：？
因为受细储胞存仍条然件活影着，响仍的进项行目代谢活动，消耗
能量，并产生代谢产物，影响血清成分变化
原则：采血后，2h内尽快将血清与细胞分 离，并检测完毕。为什么
受放置时间影响最大的项目有：
3h增:G高LU：、TCPO、2ALB、CHO、K+、Na+、AST、 8h：AGLLPU、、GCGOT2、TP、K+、AST 24降h:低GL：U、GLCUO、2、TBTIPL、KC+L-、、AASLTT、ALB、TBIL、 CHO、Na+、CL-、ALT、ALP、GGT
2.饮食因素： 下降：Alb、铁、钾、总胆
3.药物因素： 4.溶血因素： 5.储存因素：
受饮食影响的项目
项目：GLU、TG、ALP、血酯、丙酮酸、乳 酸、BUN、UA、转氨酶等
原则：空腹6-12h后采血
受药物影响的项目
药物影响检验结果途径： 1.药物本身对检验方法的影响 2.药物代谢产物对检验方法的影响 3.药物对代谢器官功能的影响 原则：检验受某种药物影响的项目之前3天，
类型：基因芯片、蛋白质芯片和芯片实验室 应用：临床疾病诊断、基因测序、药物筛选
（六）生物芯片技术
操作要点 1.芯片制备：玻片、硅片、聚乙烯板等。用小
牛血清蛋白修饰玻片。表面点上已知序列或 结构的基因或蛋白质 2.样品制备：用生物素或酶标记样品中的待测 基因或蛋白 3.生物分子反应：最适温度、pH、缓冲液 4.芯片信号检测：
1.用于细胞器、病毒的分离
1.制备型
超速离心机 2.用于生物大分子的分子量、沉 2.分离型
降系数、纯度等检测
（四）层析技术
定义：利用不同物质理化性质的差异而建立 起来的技术，由固定相和流动相组成
因为受细储胞存仍条然件活影着，响仍的进项行目代谢活动，消耗
能量，并产生代谢产物，影响血清成分变化
原则：采血后，2h内尽快将血清与细胞分 离，并检测完毕。为什么
受放置时间影响最大的项目有：
3h增:G高LU：、TCPO、2ALB、CHO、K+、Na+、AST、 8h：AGLLPU、、GCGOT2、TP、K+、AST 24降h:低GL：U、GLCUO、2、TBTIPL、KC+L-、、AASLTT、ALB、TBIL、 CHO、Na+、CL-、ALT、ALP、GGT
2.饮食因素： 下降：Alb、铁、钾、总胆
3.药物因素： 4.溶血因素： 5.储存因素：
受饮食影响的项目
项目：GLU、TG、ALP、血酯、丙酮酸、乳 酸、BUN、UA、转氨酶等
原则：空腹6-12h后采血
受药物影响的项目
药物影响检验结果途径： 1.药物本身对检验方法的影响 2.药物代谢产物对检验方法的影响 3.药物对代谢器官功能的影响 原则：检验受某种药物影响的项目之前3天，
类型：基因芯片、蛋白质芯片和芯片实验室 应用：临床疾病诊断、基因测序、药物筛选
（六）生物芯片技术
操作要点 1.芯片制备：玻片、硅片、聚乙烯板等。用小
牛血清蛋白修饰玻片。表面点上已知序列或 结构的基因或蛋白质 2.样品制备：用生物素或酶标记样品中的待测 基因或蛋白 3.生物分子反应：最适温度、pH、缓冲液 4.芯片信号检测：
1.用于细胞器、病毒的分离
1.制备型
超速离心机 2.用于生物大分子的分子量、沉 2.分离型
降系数、纯度等检测
（四）层析技术
定义：利用不同物质理化性质的差异而建立 起来的技术，由固定相和流动相组成
《生物化学实验技术》PPT课件
沉淀蛋白质 的方法还有
哪些？
（2）盐析的影响因素
蛋白质的浓度 、盐浓度、 pH 值、温度等。
本实验球蛋白在半饱和硫酸铵溶液 中沉淀而清蛋白溶解，γ-球蛋白在 33%浓度的硫酸铵溶液中沉淀。
2.层析：
待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相） 时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及 亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配， 并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。
3．染色：2-5 min； 4. 脱色：直至背景漂净为止。
【实验结果】
根据电泳区带出现的位置和条数判 断是何种血清蛋白，如果只是一条 γ-蛋白说明上个实验分离纯化的较 好。
【实验注意事项】
1．不要用手触摸纤维素膜； 2．注意区分醋酸纤维素薄膜的光面和毛
面； 3．点样位置要在1.5厘米以内，不要距边缘
2.无蛋白血滤液的制备原理
COOH
2R
+ H2WO4
NH2
COOH
R
WO4
NH2 2
此方法是生物碱沉淀蛋白质
沉淀蛋白质 的方法还有
哪些？
3.利用吴宪氏法测定血糖的原理
G + Cu2+ OH-
△
Cu2O
+糖氧化物
3Cu2O +3H3PO4.2MO3.12H2O
6CuO +
3H3PO4.2MO2O3.12H2O
【注意事项】
• 1．本实验所用各种玻璃仪器必须洗净烤干后备用。 • 2．各种试剂的加入量要准确。 • 3．严格掌握加入酶液后的保温时间，否则会影响其
产物量的准确度
【思考题】
• 1．为何可以酶活性单位代表酶促反应速度？ • 2．酶促反应的影响因素有哪些？ • 3．何为Km值？如何测定一个酶的Km值？
哪些？
（2）盐析的影响因素
蛋白质的浓度 、盐浓度、 pH 值、温度等。
本实验球蛋白在半饱和硫酸铵溶液 中沉淀而清蛋白溶解，γ-球蛋白在 33%浓度的硫酸铵溶液中沉淀。
2.层析：
待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相） 时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及 亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配， 并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。
3．染色：2-5 min； 4. 脱色：直至背景漂净为止。
【实验结果】
根据电泳区带出现的位置和条数判 断是何种血清蛋白，如果只是一条 γ-蛋白说明上个实验分离纯化的较 好。
【实验注意事项】
1．不要用手触摸纤维素膜； 2．注意区分醋酸纤维素薄膜的光面和毛
面； 3．点样位置要在1.5厘米以内，不要距边缘
2.无蛋白血滤液的制备原理
COOH
2R
+ H2WO4
NH2
COOH
R
WO4
NH2 2
此方法是生物碱沉淀蛋白质
沉淀蛋白质 的方法还有
哪些？
3.利用吴宪氏法测定血糖的原理
G + Cu2+ OH-
△
Cu2O
+糖氧化物
3Cu2O +3H3PO4.2MO3.12H2O
6CuO +
3H3PO4.2MO2O3.12H2O
【注意事项】
• 1．本实验所用各种玻璃仪器必须洗净烤干后备用。 • 2．各种试剂的加入量要准确。 • 3．严格掌握加入酶液后的保温时间，否则会影响其
产物量的准确度
【思考题】
• 1．为何可以酶活性单位代表酶促反应速度？ • 2．酶促反应的影响因素有哪些？ • 3．何为Km值？如何测定一个酶的Km值？
第三章生化检验实验室基本知识ppt课件
二、普通玻璃仪器的清洗
使用过的玻璃仪器的清洗
1. 容器类玻璃仪器 如试管、烧杯、锥 形瓶等。先用自来水洗刷至无污物，再选用 大小合适的毛刷蘸取去污粉（掺入肥皂粉） 或浸入肥皂水内。将器皿内外（特别是内壁） 细心刷洗，用自来水冲洗干净后，蒸馏水冲 洗2～3次，烤干或倒置在清洁处，干后备用。
使用过的玻璃仪器的清洗
一、普通玻璃仪器的使用
（一）量筒 用于不太精确的液体计量。不能用做反 应容器，不能装热的液体。 （二）容量瓶 用于把精确称量的物质配置成准确浓度 的溶液或是将准确容积及浓度的浓溶液稀释 成准确浓度及容积的稀溶液。 容量瓶与瓶塞要配套使用，使用时不要 一次性将溶液加至刻度。容量瓶不能烘烤。
（三）移液管、吸量管
二、水的纯度检查
水的纯度检查包括用电导仪测定其电导 率或电阻率，用特定试剂检测水中残留的 Ca2+、Mg2+、Cl－、SO42－等成分，细菌培养 计数菌落。
1. 电阻率 用电导仪或兆欧表测定，用电 导仪测得的电导率，可与电阻率进行换算。 电导单位为西门子（s），电导是电阻的倒数， 即1s=1Ω－1；每cm长的电导为电导率（s·cm－ 1）。
4. 实验用纯水标准及用途 1976年，CAP 提出了实验用水的三级标准，1985年，NCCLS 又提出了新标准。
第二节 实验用玻璃仪器
实验用玻璃仪器分为容器类和量器类。 容器类玻璃仪器为常温或加热条件下，物质 的反应容器和贮存容器，如试管、烧杯、锥 形瓶、试剂瓶等。量器类玻璃仪器用于计量 溶液体积，不能作为实验容器，如量筒、容 量瓶、移液管、吸量管、滴定管等。
移液管和吸量管是用于准确量取一定体 积液体的量出式的玻璃量器。
移液管用于吸取固定量的溶液。最精确。
吸量管是具有分刻度的玻璃管，用于吸 取非固定量的溶液。
《生化实验基本操作》课件
2 实验操作步骤注意事项
掌握实验操作过程中需要注意的细节，确保实验结果准确可靠。
3 实验安全注意事项
学习实验过程中的安全操作规范和紧急事故应急预案，保障实验人员安全。
实验结果分析
展示实验结果的图像，分析并解释数据，介绍数据统计和分析方法。
1
实验结果的图像展示和解析
使用图像和图表向观众展示实验结果，并进行详细解析。
PCR扩增
使用聚合酶链反应（PCR）扩增DNA片段的基本操 作步骤。
Western blotting
了解Western blotting技术在蛋白质检测中的应用和 操作流程。
实验注意事项
掌握实验前准备工作、实验操作步骤注意事项以及实验安全注意事项，确保操作顺利进行。
1 实验前准备工作
了解实验前的材料准备、设备检查和实验环境准备等重要步骤。
《生化实验基本操作》 PPT课件
生化实验基本操作PPT课件
实验原理介绍
了解生物分子的基本组成、化学性质和特点，以及生化实验的实验原理。
生物分子的基本组成
探索DNA、Rቤተ መጻሕፍቲ ባይዱA、蛋白质等生物分子的基本组成和结构。
生物分子的化学性质和特点
研究生物分子的化学特性，如酶的催化作用和蛋白质的折叠。
生化实验的实验原理
生化实验的应用前景
介绍生化实验在医学、农业和环境保护等领域的广泛应用前景。
参考文献
推荐一些生化实验相关的书籍，以及在线可获取的生化实验资源。 • 生化实验教程 - 张三，ISBN 978-1234567890 • 实验技术手册 - 李四，ISBN 978-0987654321 • 生化实验资源网站
2
数据统计和分析方法
介绍常见的生化实验数据统计和分析方法，如t检验和方差分析。
掌握实验操作过程中需要注意的细节，确保实验结果准确可靠。
3 实验安全注意事项
学习实验过程中的安全操作规范和紧急事故应急预案，保障实验人员安全。
实验结果分析
展示实验结果的图像，分析并解释数据，介绍数据统计和分析方法。
1
实验结果的图像展示和解析
使用图像和图表向观众展示实验结果，并进行详细解析。
PCR扩增
使用聚合酶链反应（PCR）扩增DNA片段的基本操 作步骤。
Western blotting
了解Western blotting技术在蛋白质检测中的应用和 操作流程。
实验注意事项
掌握实验前准备工作、实验操作步骤注意事项以及实验安全注意事项，确保操作顺利进行。
1 实验前准备工作
了解实验前的材料准备、设备检查和实验环境准备等重要步骤。
《生化实验基本操作》 PPT课件
生化实验基本操作PPT课件
实验原理介绍
了解生物分子的基本组成、化学性质和特点，以及生化实验的实验原理。
生物分子的基本组成
探索DNA、Rቤተ መጻሕፍቲ ባይዱA、蛋白质等生物分子的基本组成和结构。
生物分子的化学性质和特点
研究生物分子的化学特性，如酶的催化作用和蛋白质的折叠。
生化实验的实验原理
生化实验的应用前景
介绍生化实验在医学、农业和环境保护等领域的广泛应用前景。
参考文献
推荐一些生化实验相关的书籍，以及在线可获取的生化实验资源。 • 生化实验教程 - 张三，ISBN 978-1234567890 • 实验技术手册 - 李四，ISBN 978-0987654321 • 生化实验资源网站
2
数据统计和分析方法
介绍常见的生化实验数据统计和分析方法，如t检验和方差分析。
第三节 生化试验.ppt
3、结果观察与记录
呈现红色，为阳性，记+
若无红色出现，为阴性，记-
（四） 氰化钾试验
1.原理 氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂,
可与呼吸酶作用使酶失去活性,抑制细菌 的生长,但有的细菌在一定浓度的氰化钾 存在时仍能生长,以此鉴别细菌.
2、试验方法
取培养20～24h的营养肉汤培养液或菌 落1环，接种至对照培养基及氰化钾培养基 内，立即以橡胶塞塞紧，36±1 ℃培养24～ 48h，观察结果。
无菌苔生长，培养基斜面仍为绿色者， 为阴性，记-
（二） 丙二酸盐利用试验
1.原理: 某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐作为唯
一碳源,丙二酸盐被分解成碳酸钠,使培养基变为 碱性,培养基由草绿色变成蓝色，为阳性，以此鉴 别细菌。 2、试验方法
取待检菌新鲜纯培养物，接种于丙二酸钠培养 基上，于36±1 ℃培养48h，观察结果。 3、结果观察与记录 培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,记+; 培养基无颜色变化,为阴性,记-
基中加入少量α-萘酚或肌酸，可加速此反应）
V－P试验葡萄糖源自丙酮酸脱酸乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰
培养基变红
3、结果观察与记录 （1）发酵管出现红色者，为阳性，
记V-P + （2）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，
记 V-P -
（三）甲基红试验（MR）
1、原理 细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢的途径 不同，有的细菌（如大肠杆菌）可使丙酮酸转化 生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等大量酸性产物， 使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示 剂变红色，为甲基红试验阳性 ；有的细菌（产气 肠杆菌）使丙酮酸脱羧后形成醇、醛、酮等中性 产物，培养液pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色， 为甲基红试验阴性。
呈现红色，为阳性，记+
若无红色出现，为阴性，记-
（四） 氰化钾试验
1.原理 氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂,
可与呼吸酶作用使酶失去活性,抑制细菌 的生长,但有的细菌在一定浓度的氰化钾 存在时仍能生长,以此鉴别细菌.
2、试验方法
取培养20～24h的营养肉汤培养液或菌 落1环，接种至对照培养基及氰化钾培养基 内，立即以橡胶塞塞紧，36±1 ℃培养24～ 48h，观察结果。
无菌苔生长，培养基斜面仍为绿色者， 为阴性，记-
（二） 丙二酸盐利用试验
1.原理: 某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐作为唯
一碳源,丙二酸盐被分解成碳酸钠,使培养基变为 碱性,培养基由草绿色变成蓝色，为阳性，以此鉴 别细菌。 2、试验方法
取待检菌新鲜纯培养物，接种于丙二酸钠培养 基上，于36±1 ℃培养48h，观察结果。 3、结果观察与记录 培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,记+; 培养基无颜色变化,为阴性,记-
基中加入少量α-萘酚或肌酸，可加速此反应）
V－P试验葡萄糖源自丙酮酸脱酸乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰
培养基变红
3、结果观察与记录 （1）发酵管出现红色者，为阳性，
记V-P + （2）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，
记 V-P -
（三）甲基红试验（MR）
1、原理 细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢的途径 不同，有的细菌（如大肠杆菌）可使丙酮酸转化 生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等大量酸性产物， 使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示 剂变红色，为甲基红试验阳性 ；有的细菌（产气 肠杆菌）使丙酮酸脱羧后形成醇、醛、酮等中性 产物，培养液pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色， 为甲基红试验阴性。
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、生物技术产品的宿主菌或细胞都有一定
的要求，了解这些，可使分离纯化工作事
半功倍，反之则收效甚微。
20
1．种属
牛胰含胰岛素（insulin)单位比猪 胰 高 ， 牛 为 4000 IU ／ kg 胰 脏 ， 猪 为 3000 IU ／ kg 胰脏。抗原性则猪胰岛素 比牛胰岛素低，前者与人胰岛素相比， 只有1个氨基酸的差异，而牛有3个氨基 酸的差异。
2.原料的粉碎；
3.提取，即从原料中经溶剂分离有效成分，制成粗 品的工艺过程；
4.纯化，即粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、 层析、透析、超离心、膜分离、结晶等步骤进行
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精制的工艺过程；
5.干燥及保存；
6.成品及制剂，即半成品或原料药经精细加 工制成片剂、口服液、针剂、冻干剂等供饮 用或临床应用的各种剂型。
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利用生化制备技术从生物材料中获得 特殊的生物活性物质，如蛋白质、酶、 激素、核酸等生化产品时，通常要注意 以下几个问题：
1．生物材料的组成成分非常复杂
，有数百种甚至更多，各种化合物的 形状、大小、相对分子质量和理化性 质都各不相同，有的迄今还是未知物 ，而且这些化合物在分离时仍在不断 的代谢变化中。
易变性？
2.一般从天然生物材料制作生化物质的过程大体
可分为几个阶段？
3.在制备生化物质前应如何选择原料？
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4.什么叫动态吸附和静态吸附？它们在应用 上有何区别？ 5.对酸性物质的提取，常在什么条件下进行 ？对碱性物质的提取，常在什么条件下进 行？对两性物质的提取，常在什么条件下 进行？ 6.以血清球蛋白为例解释提取制备每步骤的 基本原理？
• 11-14周 • 14-16周 • 15周 生物技术072-073班实验 生物技术071班实验 生物技术072-073班上交 论文及讨论材料等
• 17周
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生物技术071班上交论文
及讨论材料等
第一部分
生化物质的制备分析
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一般从天然生物材料制作生化物质 的过程大体可分为六个阶段：
1.原料的选择和预处理
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2．在生物材料中，有些化合物含量很低
或极微，有的只有1／l0 000，甚至更少。制 备时，原材料用量很大，得到产品很少，与 投料量相比“虎头蛇尾”。近年来，用所谓 “钓鱼法”，利用某些分子特有的专一亲和
力，将某一化合物从极复杂的体系中“钓”
出来，与其他化学分离技术相比具有很大的
优越性。
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3 ．许多生物活性物质，一旦离开了生物 体内环境，很易变性及被破坏，应十分注意保 护这些化合物生物的活性，常选择十分温和的 条件，尽可能在较低温度和洁净环境中进行。 一般来说制备的操作时间长、手续较繁琐。因 为许多大分子在分离过程中，过酸、过碱、重 金属离子、高温、剧烈的机械作用、强烈的辐 射和机体内自身酶的作用，均可破坏这些分子 的结构或生理活性。
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7.干燥离子交换剂应如何进行处理？何谓离子交换 剂转型？
8.动植物总DNA或RNA提取的方法主要有哪些？以猪 脾脏DNA提取为例试述每步骤主要原理是什么？ 如何判断所提取DNA的纯度？ 9.蛋白质浓度测定方法有哪些？如何鉴定所提取蛋 白的纯度？未知蛋白质分子量测定方法有哪些？
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XX级生物技术实验安排
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2．发育生长阶段
幼年动物的胸腺比较发达，老龄 后逐渐萎缩，因此胸腺原料必须采自 幼龄动物。
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3．生物状态
动物饱食后宰杀，胰脏中的胰岛 素含量增加，对提取胰岛素有利，但 胆囊收缩素的分泌使胆汁排空，对胆
汁的收集不利。严重再生障碍性贫血
症患者尿中的 EPO （ erythropoietin,
红细胞生成素）含量增加。
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4．生化分离制备过程几乎都在溶液中进
行，各种温度、pH、离子强度等参数，对溶
液中各种组成的综合影响，常常无法固定， 有些实验或工艺的设计理论性不强，常带有 很大的经验成分。因此，要建立重复性好的 成熟工艺，对生物材料、各种试剂及其辅助
材料等都要严格地加以规定。
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5．生化制备方法最后均一性的证明
与化学上纯度的概念并不完全相同，这 是由于生物分子对环境反应十分敏感，
结构与功能的关系比较复杂，评定其均 一性时，要通过不同角度测定，才能得 出相对“均一性”结论，只凭一种方法 所得纯度的结论，往往是片面的，甚至
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是错误的。
原料选择和预处理
选什么样的原材料应视生产目的而定。 一般要注意以下几个方面:
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• 实验实施要求：平时按各组计划时间分别进行实验 ，组长有义务指导下组相关实验内容，每次实验必 须登记。
• 全班交流：实验结束安排课堂讨论交流，每组准备 一人汇报，一人记录；要求用PPT总结汇报项目实 施、实验创新、疑难点，其他组学生质疑，教师点 评。 • 指导教师：汪财生、斯越秀
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实验项目训练目标
1．要选择有效成分含量高的新鲜材料；
2．来源丰富易得；
3．制造工艺简单易行；
4．成本比较低；
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5．经济效果要好。
如蛋白质原料的选择
蛋白质类生化产品的原料来源有动植
物组织和微生物等，原则是要选择富含所
需蛋白质多肽成分的、易于获得和易于提 取的无害生物材料。
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对天然蛋白质生化产品，为提高其质 量、产量和降低生产成本，对原料的种属 、发育阶段、生物状态、来源、解剖部位
• 通过综合训练，能够系统掌握蛋白质、DNA制备 的基本原理和操作，学习如何进行实验设计，掌 握实验过程中的关键环节，对实验中出现的问题 进行科学的分析；在学习实验技术的同时，自觉 培养分析问题和解决问题能力。
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思考题（课前设疑）
1.如何保持生化物质的生物活性？一般生化物质 在碱性条件下容易变性，还是在酸性条件下容
凡大医治病，必当安神定志，无欲无求，先发大慈恻隐之心，誓愿 普救含灵之苦。 --孙思邈
生化实验技术
*** **大学 **医院
《生化实验技术》
综合设计性大实验
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合作性学习实验实施流程及要求
• 课堂理论学习：辅导相关生化大分子提取分离纯 化基本知识
• 项目发布：了解项目内容
• 网上预约：理论自学——设计实验方案——网上 递交——教师修改及审核——实验室项目实施— —论文上交——教师批阅——评分 • 实验分组：各自组合，最多不超过4人/组，推选 组长，负责平时讨论、项目方案设计及材料收集
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4．原料来源