氮离子注入诱变选育恩拉霉素高产菌株
一种恩拉霉素高产菌株选育方法与流程
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常压室温等离子(ARTP)诱变选育恩拉霉素高产菌株
恩 拉 霉 素 （Ｅｎｒａｍｙｃｉｎ），又 名 恩 来 霉 素 、安 来 霉 素 、持 久 霉 素 。是 １９６６年 日本 武 田药 品工 业 株 式 会 社 的研 究 人 员 从 日本 兵 库 县 西 宫 市 的土 壤 中分 离 出 一 株 杀 真 链 霉 菌 Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｏｕｓ Ｎｏ． Ｂ５４７７发 酵 产 生 的 一 种 多 肽类 抗 生 素 ｎ］．主 要 组 分 有 恩拉 霉 素 Ａ和 Ｂ。１９７４年 ，恩拉 霉 素预 混 剂在 日 本 注册 ．作 为猪 、鸡 的促生 长 剂来 使 用 。 １９９３年 ，日 本 武 田药 品株 式 会 社 向 中 国农 业部 申请 登 记 注 册 。 注册 名称 为 恩拉 霉素 预混 剂 ］。
第 ５４卷 （总 第 ２０５期 ）
秦 艳 飞 等 ：常 压 室 温 等 离 子 （ＡＲＴＰ）诱 变 选 育 恩 拉 霉 素高 产 菌 株
３３
株 中发 酵 的 调 控 主 要 以基 因簇 或 功 能 基 团 协 调 作 用 ．单 一 改 造 基 因位 点 ，难 以在 工 业 发 酵 上 大 幅提 高发 酵水 平 。公 司技 术 中心在 借鉴 国内外先 进 育种 方 法 、手 段 及 发 酵 工 艺 优 化 研 究 的基 础 上 ，在 菌 种 筛选 上 引入 ＡＲＴＰ新 型诱 变设 备 ，结 合微 孔 板 高通 量筛 选 ，节省 人力 、缩 短 菌种筛 选周 期 ］。
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａｓ ｔｏ ｂｅ ｏｒｉｇｉｎａｌ ｓｔｒａｉｎ， ｔｈｅ ＬＡ 一１０ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｅｎｒａｍｙｃｉｎｓ’ ｍｕｔａｇｅｎｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ＡＲＴＰ， Ａ ｒａｐｉｄ ｉｎｉｔｉａｌ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｐｅｅｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｉｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｍｕｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｃｏｎｔｅｎｔ，ｆｅｗ ｉｍｐｕｒ ｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｙ ＨＰＬＣ， ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈ—ｙｉｅｌｄ— ｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｖｅｒｉｆｉｅｄ．
低能N^+离子注入诱变选育云芝高产抗病菌株的研究
１ ． ２ ．质体悬液（ １ ０ ＂ ￣ ＇ ／ ｍ Ｌ ）
涂布于无菌平 皿中央 ， 于 超 净 工 作 台 中 快 速 涂 匀 风 干后 立 即
进行低能 Ｎ 离子 注入。 １ ． ２ ． １ ． ２ 低能 Ｎ 离 子 注 入 离 子 注 人 前 ， Ｌ Ｚ Ｄ 一 ９ ０ ０ 型 离 子 注
息
龟蚪 １ 苗
２ ０ １ ４ （ ２ ）
低能Ｎ 离 子 注 入 诱 变 选 育 云 芝 高 产 抗 病 菌 株 的 研 究
种
化 瓣
摘 要 应 用 低 能 Ｎ 离 子 注 入 筛 选 所 得 高 产 抗 病 融 合 云 芝 菌 株
蒋 益 ‘ 郑 惠 华。 刘广 建 全 卫丰 ‘ 薛 臻 季 宏更 汪 洁
入机开 机预热 ２ ｈ ， 用 紫外线对靶 室持续消毒 ３ ０ ｍｉ ｎ ， 调 节 靶
室真空 度为 ｌ ０ 。Ｐ ａ ， 注入物质 Ｎ 离 子提前加 速到 ２ ０ Ｋ ｅ Ｖ， 后
文章 编 号 １ ０ ０ ０ — ８ ３ ５ ７ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ２ — ０ ０ １ ８ － ０ ３
液体 发酵 生物量及同体栽培子 实体 转化率 、 对病菌 平均 抗性水
平 为初筛 和复筛标准 ． 经遗传稳 定性实 验验证 ， 筛 选 到 了 一 株 云 芝 高产 抗 病 菌 株 ， 其子实体产量较对照菌株提 高了 １ ０ ． ３ ％， 抗 病水 平提高 了 ５ ％。 结 果 表 明 ： 低能 Ｎ 离 子 束 注 入 是 一 种 较 为 理 想 的 云芝 诱 变 育种 手 段 。 关键词 云芝 低能 Ｎ ＋ 离子 诱 变 育 种
１ ． ２ ． ２ 原生质体存活量统计 离子注入后用 ｌ ｍＬ ０ ． ６ Ｍ 蔗 糖
N +注入诱变选育氨肽酶高产菌株及发酵条件初步优化
逐 步 筛选 高酶 活菌 株 ； 高酶 活菌 株进 一步 分离 ， 培养 ，
再通 过发 酵测定 ， 筛选 目标 高产 菌 ｌ 。 ６ Ｊ １ ４ 发 酵条 件 的初 步 优化 ． 在原 有发 酵 培养基 基 础上 ， 一步 优化 碳源 和氮 进 源配 方 ， 定 最 佳 浓 度 、 适 的 碳 氮 比 、 始 ｐ 条 确 合 初 Ｈ
泛应用 于调 味 品和 干 酪 的 生产 、 白水 解 液 的脱苦 、 蛋
７ ２ ｈ。
发 酵培 养 ：３ ±１ ℃ ，２ ／ ｉ 床 振 荡 培 养 （ １ ） ２ ０ ｒｒ ｎ摇 ａ
６ ４ ｈ。
蛋 白质深度 水解 和 多 肽 的 制 备 等方 面 … 。 随着 食 品
工业 的发 展 ， 肽 酶 的应 用 呈 现 出 愈 来 愈 广 阔 的 前 氨
斜 面培养 基 （ ／ ） 麦 汁 培养 基 ， ～６ 麦 汁 ， ｇＬ ： ５ 。
琼脂 粉 １ ７ ｐ ６ ０ ．， Ｈ ．。 种 子培养 基 ： 皮 ： ：ｌ １ 麸 水 ：。 发 酵培 养 基 （ ／ ：玉米 浆 ３ ，麸 皮 ６ ，Ｍｇ ｇ Ｌ） ０ ０ —
Ｓ ・ Ｈ２ ０． Ｏｄ ７ Ｏ ５，ＫＨ２ ０４１ ０，Ｃ Ｃ ２１ ０，ｐ ． 。 Ｐ ，０． ａ １ ． Ｈ６ ８
） ０ ．， ｗ丁５１本实验室保藏 。
米 曲霉 （ ｐｒｉｕ Ａｓ ｇｌ ｓ ｅ ｌ ０
１ 、０ｓ４ 、 ０ｓ８ 不 同时 间作 注 入处 理 － ， ０ｓ２ 、０ｓ ６ 、０ｓ ５ 靶 ｊ
室真 空 度 为 ｌ Ｐ 。取 出 平 皿 ， ５ｍＬ无 菌 水 洗 ０ ａ 以 脱 ， 释涂 布分 离平 皿 ， （ １ ） 培养 ７ 。 稀 于 ３ ±１ ℃ ２ｈ ｌ ３ ３ 高产 菌株 的 筛选 ， ． 从 分 离平皿 中挑 选 生长 状态 良好 、 解 圈相对 较 水 大的单 菌落 ， 别接 斜 面 培养 基 再 培 养 ， 接 二 代 后 分 转 接种 子培养 基 ， 接种 于发 酵摇 瓶 ， 再 经几 轮发 酵测 定 ，
N +和Ti +离子注入井冈霉素生产菌诱变筛选高产菌株的研究
１ ． 初 筛 据文 献报 道 ，形态 为 中心吸水 状 的单 ．１ ４ 菌落发酵生产抗生素水平比其它形态 的高［。本实 ５ 】
１ 材 料 与方 法
１１ 菌种 ． 吸 水 链 霉 菌 井 冈 变 种 （ｔｐｏ ｃｓｈｇｏｃ— Ｓｒ ｔｍｙｅ ｙ ｒｓｕ ｅ ｐｃｓ ａ．ｉｇ ａｇ ｅｓ ｅ．，本 实 验室保 藏 。 ｉ ｒＪｎｇ ｎｇｎｉＹ ｎ） ｕｖ ｓ
方法 得到 的突变菌 株 。菌 种对 这些诱 变手 段 产生 了
固体培养基（・－ ：葡萄糖 １ 、Ｌ 天冬酰胺 ｇ Ｌ） ０ 一 ０５ ２Ｐ ４ ．、琼 脂 １ 、ｐ 自然 。 ．、ＫＨ Ｏ ０５ ５ Ｈ 摇瓶发酵培养基（・－： ｇ 大米粉 ９ 、 Ｌ） ０ 黄豆粉 ２ 、 ０ 花 生粉 １、酵 母粉 １ 、 －Ｐ ４ ．５ Ｎａ １ ．、ｐ ０ ０ ＫＩ Ｏ ０８ 、 Ｃ ５ Ｈ Ｉ ２ １
色 ，低毒 对人 畜无 害的生物 农药 ，井 冈霉素 的应 用
１ 培 养基 ． ２
价值越来越得到认可 。 目 前我国井冈霉素的生产企业多达 ３ 多家 ， ０ 产 品严重供过于求 ，售价逐年下降 ，竞争十分激烈。 井冈霉素生产厂家所用的井冈霉素生产菌株几乎都 是经过紫外诱变【 】 微波诱变 、６ ｏ辐射诱变等 ５、 ’ ６ Ｏ Ｃ
将实验室保存的吸水链霉菌井冈变种的孢子悬 液以不同的稀释度在平板培养基上进行涂布分散 ， ３ ￣培养三 四天 ，挑选形态 圆整的单菌落至斜面培 ８ Ｃ 养二三天 ，接种至发酵培养基中培养 ９～９ ，测 ２ ６ ｈ 定井冈霉素 Ａ的效价。 摇瓶装液量为 ４ Ｌ， ０ ｎ 接种 ｒ
量为一环孢子， 培养温度 ３ ￣ ， ８Ｃ 摇床转速 ２０ ／ ｉ。 ２ ｍ ｎ ｒ
Ｎ＋ Ｔｉ离 子 注 入 井 冈 霉 素 和 ＋
低能N^+离子注入诱变选育琼胶酶高产菌株
第４ １ 卷第 １ 期 ２ ０ １ ３年 ２月
浙 江 工 业 大 学 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｚ ＨＥ Ｊ Ｉ ＡＮＧ ＵＮＩ ＶＥＲＳ Ｉ ＴＹ ＯＦ ＴＥＣＨ ＮＯＬＯＧＹ
Ｖｏ１ ．４ １ Ｎｏ． １ Ｆｅ ｂ． ２Ｏ １３
低 能 Ｎ＋ 离子 注入诱变选育琼胶 酶高产 菌株
在 ２ ３ ． ４× １ ０ ¨ｉ ｏ ｎ ／ ｃ ｍ。诱 变 剂 量 下 ， 筛 选 得 到 １株 高 产 琼 胶 酶 的 菌 株 ＷＬ － １ ５ ， 酶 活 力 达 到
４ ７ ． ３ ｕ／ ｍＩ ， 较 出发 菌株提 高 ５ ３ ． ６ ， 该 菌株 经 ５次传 代 培 养 ， 产 酶 活力 稳 定． 之 后 优 化 了产 酶培
Ｍ ＥＩ Ｊ ｉ ａ ｎ — ｆ ｅ ｎ ｇ ，ＴＡＮＧ Ｚｈ ｏ ｎ ｇ — ｘ ｉ ｕ ，Ｗ Ａ ＮＧ Ｑｉ ，ＹＩ Ｙｕ ，Ｗ ＡＮＧ Ｈｏ ｎ ｇ ，ＹＩ ＮＧ Ｇｕ ｏ — ｑ ｉ ｎ ｇ
（ １ ． Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｚ ｈ ｅ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，Ｈａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ３ １ ０ ０ ３ ２ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ；
养 基 中的 主要成 分 ， 在琼胶 、 Ｎａ ＮＯ。 和 Ｎａ Ｃ １ 的质 量 浓度 分别 为 ２ ． ５ ｇ ／ Ｌ， ６ ． ０ ｇ ／ Ｌ， １ ５ ． ０ ｇ ／ Ｌ时 ， 类
多杀菌素高产菌株的诱变选育
斜 面培养 ：８ ２ ℃恒 温 培养箱 中培 养 ７ １ ｄ —０ 。 种 子 培 养 ： ３ Ｌ单 孢 子 悬 浮液 （ 子 浓 度 至 取 ｍ 孢
１ １ ｍ ）接 于装有 ５ ｍ ０～ ０ 个／ Ｌ ０ Ｌ种 子液 的 ５ ０ Ｌ三 ０ｍ
素水平 主要 决定 于 环境条 件 和 自身 的遗传 因子 两个 方 面 。 良发 酵条件 只能在较低 水平上 提高 目的菌株 改 的产素水 平 ， 通过高产 菌株育 种技术 改变菌 株的部 分 遗传信息 ， 有效地提 高 目的菌株 的产素水平 。 能
下 （ Ｉ ａ １可 以 生 长 。 １ ％Ｎ Ｃ ） ］
科 院物研 所 ）Ｚ ；ＨＷＹ １ ２ 上 海智 城 ） 立式 压力 蒸 ２ １Ｂ（ ； 汽灭 菌器 （ 上海 华 线 ） 高效液 相色 谱 （ ｌ ｃ ） ； Ａ ｔ ｈ ｅ
１ ． 培 养 条 件 ４
与其它抗生 素产生菌一样 ， 多杀菌 素产生 菌 的产
１ ． 离 子束 注入诱 变 ．１ ５ 取 ０５ Ｌ单孢 子悬 浮液 均匀涂 布 于无菌 空 白培 ．ｍ 养皿 上 ， 置于 超净 工作 台风 干制成 菌膜 。 离子 注人 机 为 ＬＤ ０ Ｚ ９ ０多 功 能离 子 注入 机 ，使 用 以能量 １ｋ Ｖ ０ｅ 氮离 子 不 同剂量 进行 注入 ， 靶室 真空 度 为 ｌ ａ 将 ０Ｐ。 培养 皿 置 于靶 台上 ， ５ 脉 冲式 注入 ， 隔 １ ｓ 然 以 ｓ 间 ５，
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｗ ｉ ｈ ｐ ｏ ｅｔ ｓ ｆ ｂ ｔ ａｅ ｂ ｏｏ ｉ ａ ｅ ｔ ｉｅ ｎ ａ ｔ ｆ ｃ ｏ ｇ ｏ ｈ ｍｉ ａ ， ｓ ｉｏ ａ ｓ ａ ｎ ｗ ｓｒ ｃ ： ｔ ｔ ｅ ｒ ｐ ｒｉ ｏ ｏ ｈ ｓ ｆ ｉ ｌｇ ｃ ｌ ｐ ｓｉ ｄ ａ ｄ ｆ ｓ ｆ ｔ ｆ ａ ｒ ｃ ｅ ｃ ｈ ｅ ｃ ｅ ｅ ｌ ｐ ｎ ｓ ｄ ｉ ｅ ｓ ｌ ｃ ｏ ｉｌｇ ｃ ｎ ｅ ｔ ｉ ｅ ｔ ｅ ｍｉｒ ｂ ｏ ｏ ｉ ａ ｉｓ ｃｉ ｄ ．Ａｓ ｔ ｅ ｓａ ｔ ｇ ｓｒ ｉ ａ ｃ ｒ ｐ ｌｓ ｒ ｐ ｎ ｓ ． Ｓ ｓ ｉｏ ａ Ａ６ ｗａ ｂａ ｎ ｄ ｆｏ ｌｂ ｙ ｖ ｈ ｔｒｉ ｔａｎ Ｓ ｃ ａｏ ｏｙ ｏａ ｓ ｉ ｏ ａ ｎ ． ｎ ｓ ｓ ｏ ｔｉ ｅ ｒ ｍ ａ — ｐ ｏａ ｏ ｙ ｒ ｓ ｒ ａｉ ｅ ｔａｎ ｒ ｔｒ ｐ ｅ ｅ ｖ ｔ ｓｒ ｉ Ａ０ ｙ ａｕ ａ ｓ ｌｃ ｉｎ ｖ ｂ ｎ ｔ ｒ ｌ ｅｅ ｔ ．Ｔ ｅ ｏ ｈ ｍｕ ａｉ ｎ ｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｗａ ｃ ｒｉｄ ｕ ｙ ｉ ｏ ｅ ｉ ｎ ｔ ｔ ｂ ｅ ｄ ｎ ｆ Ａ６ ｏ ｓ ａ ｒ ｏ ｔ ｂ ｎ ｔ ｇ ｎ ｏ ｅ ｒ ｂ ａ ｕ ｄ ｒ ｔ ｅ ｃ ｎ ｉ ｏ ｆ ｅ ｅ ｇ ｏ ０ ｋ Ｖ ａ ｄ ｉ ｌｎ ａ ｉｎ ｄ ｓ ｏ １ ｘ１ ‘ ｏ ｓｃ ． ａ ｄ ｍｕ ａ ｔ ｓｒｉ ｅ ｍ ｎ ｅ ｈ ｏ ｄ ｔ ｎ ｏ ｎ ｒ ｙ ｆ １ ｅ ｎ ｍｐａ ｔｔ ｏ ｅ ｆ ． ０ ｉ ｎ ／ ｍ ｎ ｔｎ ｔ ｎ ＡＮ－ ｉ ｏ ４ ａ ０ ９ ｗａ ｂ ａ ｎ ｄ ９ ｓ ｏ ｔｉ ｅ ．Ｔ ｅ ｈ ｎ． ｔ ｅ ｔ ｉ ｈ ｓ ａｎ ＡＮ一 ９ ｗａ ｉ ａ ｉｔ ｄ ｏ ３ ｓ ｕ ｄ ｒ ｄ ｓ ｎ ｅ ｆ ３ ｃ ｒ ０９ ｓ ｒ ｄ ａ ｅ ｆｒ ０ ｎ ｅ ａ ｉｔ ｃ ｏ ０ ｍ ｆ ｍ ａ ｒ ａ ｒ ｏ ＵＶ ５ １ Ｗ ｌｍｐ．Ｅｖ ｎｕ ｌ ， ａ ｓｒ ｉ ａ ｅ ｔ ａｌ ｙ ｔａｎ ＡＮＵ－ ６ ｓ ｏ ｔｉ ｅ ｈ ｏ ｇ ｃ ｍｐ ｓ ｅ ０ ９ ｗａ ｂ ａｎ ｄ ｔ ｒ ｕ ｈ ｏ ｏ ｉ ｍｕ ａ ｅ ｅ ｉ ， ｗ ｔ ｈ ｒ ｄ ｃ ｉｎ ｏ ｐ ｎ ｓ ｄ ｔ ｔ ｇ ｎ ｓｓ ｉ ｔ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔ ｆ ｓ ｉｏ ａ ｈ ｏ ｒ ａ ｈ ｄ ｏ ７ ．２ ｘ ／ ｅ ｃ ｅ ｔ １ ５ ６ １ ｍＬ， ｗ ｉ ｈ ｗａ ｎ ｒ ａ ｅ ．２ ｇ ｈ ｃ ｓ ｉ ｃ ｅ ｓ ｄ ７１ ％ ａ ｄ ０ ２ ％ ｉ ｏ ａｉｏ ｉ ｔ ａ ｆ Ａ６ ａ ｄ ４ ｎ ３ ．２ ｎ ｃ ｍｐ ｒ ｎ ｗ ｔ ｈ ｔ ｏ ｎ ＡＮ－ ９ ｓ ｈ ０ ９， ｒ ｓ ｅ ｔ ｅ ｙ ｈ ｔａｎ ｅ ｐ ｃｉ ｌ ．Ｔ ｅ ｓｒ ｉ ＡＮ ０ ９ ａ ａ ｔｂ ｅ ｈ ｒ ｄ ｔｒ ｈ ｒ ｃｅ ， ａ ｄ ｉ ｃ ｎ ｂ ｕ ｅ ｎ ｔ ｅ ｆ ｒ ｎ ａ ｉｎ ｓｕ ｙ ｖ Ｕ－ ６ ｈ ｓ ｓ ｌ ｅ ｅ ｉ ｙ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｎ ｔ ａ ｅ ｓ ｄ ｉ ｈ ｅ ｍｅ ｔｔ ｔ ｄ ａ ａ ｏ
N +注入中性蛋白酶高产菌株诱变选育的研究
ｏ ｎ ｕ ｔｉｌＭｉｒｂｏｏ ｙ ｏｌｇ ｆ Ｂｉｔｃ ｎ ｌｇ ， ａ ｊｎＵｎｖ ｒｉ ｆ Ｓ ｉｎｅ＆ Ｔ ｃｎ ｌｇ Ｔｉ ｉ ｆ Ｉｄ ｓｒａ ｃｏｉｌｇ ，Ｃ ｌｅ ｅｏ ｏｅｈ ｏｏ ｙ Ｔｉｎ ｉ ｉｅｓｔ ｏ ｃｅｃ ｙ ｅｈ ｏｏ ｙ， ａ ｎ ３ ０ ５ ， ｈｎ ２ Ｃｏｌ ｅｏ ｇｎ ｅｉｇ Ｓ ｅ ｙ ｎ ｒｃ ｌｕ ａ ｉ ｒｉ Ｓ ｅ ｙ ｎ １ １ １ Ｃ ｉａ ０ ４ ７ Ｃ ｉａ ． ｌ ｇ ｆＥｎ ｉｅｒｎ ， ｈ ｎ ａ ｇ Ａｇ ｉｕｔｒ ｌＵｎｖ ｓｔ ｈ ｎ ａ ｇ １ ０ ６ ， ｈ ｎ ） ｅ ｅ ｙ，
Ｍ ｕａｉｎ ｂｅ ｄｎ ｆｎ ｕｒ ｌ ｒｔａｅｐ ｏ ｕ ｉｇｓｒ ｉ ｙＮ ｉ ｌｎａ ｉｎ．Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＺ ｅｉｎ ｉｅ ｓｔ ｔｔ ｒｅ ｉｇｏ ｅ ｔａ ｏｅｓ－ ｒ ｄ ｃｎ ｔａｎ ｂ ｏ ｐ ｍｐａ ｔｔ ｏ ｏ ｒａ ｈ ｊ ｇＵｎｖ ｒｉｙ ｏ ａ
ｉ ｓｃ ” 条 件 下 ， ｏ ．ｍ＿ 的 ｎ 经过 筛 选 最终 获 得 １ 遗 传 稳 定性 良 好 的 高 产 菌株 ＮＰ ３ ， 所 产 中性 蛋 白 酶 活 株 １１其
力 稳 定 在 １ ２ ０ Ｕ． 左 右 ， 出发 菌株 提 高 了 ７ ． ． ５ ３ ｍＬ 较 １ ２ 比较 突 变 菌株 ＮＰ ３ １ １与 出发 菌株 的 产 酶 曲
张 敏 ，赵 丛 ，路 福 平 ，蔡 兴 旺 ，杜 连 祥
（ 天津 科 技 大 学 生 物 工 程 学 院 天 津 市 工 业 微 生 物 重 点 实 验室 ， １ 天津 ３ ０ ５ ； ． 阳农 业 大 学 工 程 学 院 ， 宁 沈 阳 １０ ６ ） ０４７ ２沈 辽 １ １ １
摘
要 ： 用低 能 Ｎ 利 注入 技 术 对 产 中性 蛋 白酶 的枯 草 芽孢 杆 菌 （ ａ ｉ ｕ ｂｉ ｓ 进 行 诱 变选 育 ， Ｂ ｃｌ ｓ ｕ ｔ ｉ） ｌ ｓ ｌ 以提
N +离子注入诱变选育中性蛋白酶高产菌株及发酵条件的研究
基础 发酵 培养基 （ ： ％）豆饼 粉 ３ ５ 薯干 粉 ６５ ．， 、，
麸皮 ５３Ｋ ２ Ｏ ０ ０ ， ａＨ Ｏ ０７ 。 ． ， Ｈ Ｐ ４ ．３Ｎ ｚ Ｐ ４．８
牛奶培养 基 （ ： ％）脱脂奶 粉 １ ， 脂 ２ ０琼 。
在 于低 能离予 注人 生 物 体 时 同时存 在 能量 交 换 、 能
量沉 积 、 量沉 积及 电荷交 换 四大效 应 。 由于 注入 质
离 子的 电荷 数 、 量 数 、 质 能量 和剂 量 的组 合不 同 ， 可
选和存 活率 的计算 。 １４ 突变 株的 筛选 ．
以提供众多的诱变条件 ， 使离子注入诱变具有突变 谱宽 ， 突变率高的特点， 从而可以筛选到符合生产要
－
２ ％， ３℃ －４￣ ～３℃ 变温发酵 ４ ｈ 酶 活力最 高可达 １６ ０ ｍＬ， ０ 以 ２ ０ ０ ２， ９８ ｕ／ 为初始 菌株 的 ２ １ 。 ．倍
关 键词 ： 枯草 芽孢杆 菌 ； 中性蛋 白酶 ； 离子 注入 ； 诱 变选育 中性 蛋 白酶 是一种 能将 大分子 蛋 白质 迅速水 解 成肽类 和部分 游离 氨基酸 的胞外 酶 ， 其最 适作用 ｐ Ｈ 介于 ６０ ． 间 ］ ．～７５之 。作 为一种 生物催 化剂 ， 该
性 宽 ， 广 泛地 应 用于 食 品 、 药 、 被 制 化妆 品 、 涤剂 、 洗
丝纺、 毛皮 软化 等行业 ］ 。
种子培 养基 （ ： 浸 粉 ０ ５ 胰蛋 白胨 ０５ ％）酵母 ．， ．，
葡萄 糖 １ Ｋ Ｐ ４ 、 ５ ＮａＨＰ ４ 、 。 ， Ｈ２ Ｏ ０ ０ ， ２ Ｏ ０ ４
氮离子注入林可霉素产生菌诱变高产菌株
， 文 报 道 氮离 子 注 入 技 术 用 于 林 可 本
霉 素 产 生 菌 的 诱 变 ， 得 了一 定 的 效 果 。 取
分 别 吸 取 ２ 上 述 处 理 孢 子 液 于 直 径 ６ ｍｍ 四 ｍｌ ０
１ １ １ 出发 菌 株 ． ． １ １２ 生 测 检 定 菌 ．．
林 可 霉 素 产 生 菌 ６— 。 ５ １ 藤 黄 八 叠 球 菌 ３ ０ １ ２０ 。
１ ２ 培 养 基 ．
１ ． 斜 面 培 养 基 （／ 淀 粉 ２ ， ．２ １ ｇ Ｌ） ０ ＫＮＯ。１ ＫＣ ， １
０ ．５， ａ ２ Ｎ Ｈ ＰＯ ４０． Ｍ ｇＳＯ ４・ ７ ２ ０．５， ＳＯ ４・ ７ ５， Ｈ Ｏ Ｆｅ Ｈ２ Ｏ
１ ７ 孢 子 诱 变 后 的培 养 ．
刘瑞华 李铁
（ 徽 省 皖 北 药 业 股 份 有 限公 司 ， 宿 州 ２ ４ ０ ） 安 ３ ０ ０
摘要 ： 林 可霉 素 产 生菌 ６— ５１株 经 １ ５ １ ｏ ｓｃ 氮 离 子 束 诱 变 处 理 得 到 ７ — ． × ０ ｉｎ ／ ｍ。 ５８菌 株 。 摇 瓶 相 对 效 其 价 较 出发菌 株 ６— ５１提 高 了 ３ ， 酵 培 养 基 优 化 后 ， 瓶 相 对 效 价 提 高 了 ３ 。 应 用 于 １ ０吨 发 酵 罐 生 产 ， １ 发 摇 ５ ０
１ ３ 试 剂 ．
２ ２ 氮 离 子 束 诱 变处 理 林 可 霉 素 产 生 菌 对 菌 落 类 型 ．
比 例 的 影 响
三 种 不 同 剂 量 处 理 林 可 霉 素 产 生 菌 对 菌 落类 型 比
例 的 影 响 见 表 １ 。
０ １ ｌＬ ｐ ． ． ｍｏ／ Ｈ７ ２磷 酸缓 冲液 。
絮凝剂高产菌株的离子注入诱变选育
责任编辑
常俊 香责任校对来自夏 蓉 絮 凝剂 高产 菌 株 的离 子 注 入诱 变 选 育
张东 李培 辉 ， 睿 ， 李宗义 ， 伟 ， 李宗 秦广雍
Ｍ ｕ ａ ｉｎ Ｂｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｏ ｃ ｌ ｎ ｇ Ｐｒ ｄｕ ｉ ｔ ａｎ ｙ Ｉ ｍ ｐ ａ ａ ｉ ｔ ｔｏ ｅ ｄ ｎ ｆＦｌ ｃ ｕ ａ ｔＨｉ ｈ－ ｏ ｃｎｇ Ｓ ｒ ｉ ｂ ｏｎ Ｉ ｌ ｎｔｔｏｎ
Ｚ ＨＡＮＧ Ｄｏ ｇ－ｕ ｔａ （ ｇｏ ａ ｙＬ ｂ ｒｔ ｙｏ ｏ ｅｍ ｉｅ ｇｎ ｅ ｎ ，Ｚ ｅ ｇｈ ｕＵｎｖｒｉ ， ｈ ｎ ｚｏ ，Ｈｅ ａ ５ ０ ２ ｎ ｈ ｉｅ ｌ Ｒｅｉｎ ｌ ａ ｏａｏ ｆ ｎ Ｂ ａ Ｂｏ ｎ ｉｅｒ ｇ ｈ ｎ ｚｏ ｉｅｓ ｙ Ｚ ｅ ｇｈ ｕ Ｋｅ ｒ Ｉ ｉ ｔ ｎ ｎ４ ０ ５ ） Ａ ｓ ａｔ ｆ ｂｅｔ ｅ ｈ ｉ ａ ｔ ｉ ｐｏｅ ｈ ｏ ｃ ｌ ｉ ｔ ｉ ｉ ｏ ｉ ｏ ｃ ａ ｔ Ｍ ｔ ｄ１ ｔ ｆ ｃ ｕ ｎ－ ｏ ｕ ｉ ｒｉ Ｆ ｂｔ ｃ ｉ ｉ ］Ｔ ｅａ ｗ ｓ ｏ ｍ ｒ ｅ ｃｕａ ｎ ａ ｉ ｔ ｏ ｍ ｃ ｂ ｌ ｃｕ ｎ．［ ｅ ｏ ｗｉ ｏ ｅ ｌ ｔ ｒｄ ｃ ｇ ｔ ｎ Ｊ ｒ Ｏ ｅｖ ｍ ｖｔ ｆ ｌ ｔｇ ｃｖ ｙ ｆ ｒ ａ ｆ ｌ ｌ ｈ ｈｌ ａ ｐ ｎ ｓａ
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N +离子注入诱变选育耐酸性α-淀粉酶高产菌株
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淀粉 酶 的 白 曲霉 工 程 菌 株 ， 通 过 其 培 养 条 并
件 的优 化 ， 分离 纯化 得 到 了粗 酶 ３。但 耐 酸性 ＿ ｌ
收稿 日期 ： ０ ０ ０ — ｌ 修 回 日期 ： ０ ００ — ８ ２ １ ２２ ； ２ １ — ５２
基 金 项 目 ： 家 科技 基 础 条 件 平 台 项 目资 助 （ ０ ５ ＫＡ２ ２ ４ １） 国 ２０Ｄ １０ —０ 作 者 简 介 ： 兴 旺 （ ９ ７ ） 男 ， 江 东 阳 人 ， 士 研 究 生 ． 酵 工 程 专 业 蔡 １７ ， 浙 博 发
N +注入诱变芽孢杆菌选育高产抗菌物质菌株
２ ６ ０ ， ２ ｅｕ ｓｓｏ ｅ ｈｔｔ ｐ ｍ ｌＮ ｉ ｏｅＷＳ ５ ． ×１ｎ Ｎ Ｉ ．Ｒ ｓｌ ｈｗ ｄ ｔａ ｈ ｏｔ ａ ｏ ｄｓ ａ ０×２６× １ｎＮ ， ２ ｎ ｔ ｉ ｉ ．ｉ ｄ ｎ ｔ ｅ ｉ ｎ ． ０ Ｉ ．ａｄ ａｓ ａ ｏ ｈｇ ｙ ｌ 玎 ｒ ｎｆ ｈ ｅ
食 品防腐 剂对 保持 食 品在加 工贮 藏 中的 品质具 有
黑 曲霉 ， 青霉 和 总状 毛 霉 ） 具 有 显 著 的抑 制 效果 ， 点 都
重要 作用 。 目前食 品 中主要 使用 的化 学 防腐剂 有 苯 甲 酸钠 、 山梨 酸钾 。虽然化 学 防腐剂 具 有成本 较 低 、 学 化 性 能稳 定 、 菌 谱 较广 等 优 点¨ ， 是 对 人 体存 在 着 抑 但
ｈｎ ｔ ｎ ｔ ｎｌ ｅｍｅ ｔｔ ｎ ｅ ａａ ｔｒｓｉ ｔ ｔａｎ Ｗａ ｓｕ ｉ ｔａ ｅ ｉｉｉ１． ｅ ｆｒ ｎａ ｏ ｈ ｒｅｅ ｉｔｃ ｏ ｅ ｓｒｉ ｓ ｔ ｄ ｅ ． ａ ｄ ｔｅ ｍｏ ｅ ｏ ｒｄ ｃｎ ｔ ｅｏ ｉｌｓ ｂ ｔｎ ｅ ｈ ａ ｉ ｆ ｈ ｄ ｎ ｄ ｐ ｏ ｕ ｉｇ ａ ｉ ｒ ｂａ ｕ ｓ ｃ ｈ ｆ ｎ ｍｉ ａ ｆｒｔｅ ｓ ｌ ｔ ｔａｎ Ｗａ ／ｅ ｌ ｇ ｙ ｔ ｅ ｉ ｙ ｅ． ｏ ｅ￣ ｅ ｓｒ ｉ ｓ ａＴ ａ＇ ｅ ｓ ｎ ｈ ｓｓｔｐ ｈ ｄ ａ Ｋｅ ｒ ｓ： ｙ ｗｏ ｄ Ｎ ｉｎ ｉ ｌｎ ａ ｏ ｏ ｍｐａ ｔｔ ｎ； Ｂａ ｉ ｕ ｕ ｔｌ ｉ ｃｌ ｓｓ ｂｉｉ ａ ｔｍｉ ｍｂＭ ｕ ｓａ ｃ ； ｍｕａ ｔ ｌ ｓ； ｎ ｉ ｃ ｉ ｓ ｂ ｔｎ ｅ ｔｎ
一种离子束诱变杀真菌素链霉菌选育恩拉霉素菌株的方法[发明专利]
![一种离子束诱变杀真菌素链霉菌选育恩拉霉素菌株的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/418ac4d53968011ca20091a6.png)
专利名称：一种离子束诱变杀真菌素链霉菌选育恩拉霉素菌株的方法
专利类型：发明专利
发明人：李荣杰,尚海涛,郑辉,杨金环
申请号：CN201210533661.1
申请日：20121212
公开号：CN103013977A
公开日：
20130403
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种离子束诱变杀真菌素链霉菌选育恩拉霉素菌株的方法，包括如下步骤：(1)在室温下，将杀真菌素链霉菌斜面孢子制成的孢子悬液均匀涂布于无菌平皿上；(2)用氮离子束对孢子悬液进行脉冲注入；(3)把经步骤(2)处理后的孢子悬液稀释后，涂布于固体培养基中培养；(4)选取生长良好的单菌株接种于液体发酵培养基中培养，选取遗传性状稳定的高产菌株，即得恩拉霉素菌株。
本发明的优点在于采用离子束诱变设备简单、方法易行、操作安全，其诱变效果远较传统的物理化学诱变方法好，用此方法诱变得到的杀真菌素链霉菌，同原始菌株相比，发酵单位提高20～40％。
申请人：安徽丰原发酵技术工程研究有限公司
地址：233000 安徽省蚌埠市淮上区怀五路南侧
国籍：CN
代理机构：北京路浩知识产权代理有限公司
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恩拉霉素高产菌株选育的研究
恩拉霉素高产菌株选育的研究丁亚莲;李春玲;牛春;张萍【摘要】目的进一步提高恩拉霉素发酵生产水平.方法对杀真菌链霉菌RN16-7进行ARTP(常压室温等离子体)等离子与庆大霉素复合处理.结果经大量筛选,得到了恩拉霉素高产突变株RN 16-242,其遗传性状稳定,发酵效价达7423u/mL,比出发菌株RN 16-7(4703u/mL)提高了57.8％.菌株保存,采用甘油管低温保藏法、沙土管保藏法和冷冻真空干燥保藏法进行了比较,结果是甘油管低温保藏法最好.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2018(043)011【总页数】5页(P1384-1388)【关键词】恩拉霉素;杀真菌链霉菌;菌种选育;抗生素【作者】丁亚莲;李春玲;牛春;张萍【作者单位】宁夏泰瑞制药股份有限公司,银川750101;宁夏泰瑞制药股份有限公司,银川750101;宁夏泰瑞制药股份有限公司,银川750101;宁夏泰瑞制药股份有限公司,银川750101【正文语种】中文【中图分类】R978.1恩拉霉素(enramycin)，又名恩来霉素、安来霉素、持久霉素，是由杀真菌素链霉菌(Streptomyces fungicidicus NO.B5477)经发酵获得的次级代谢产物。
1966年，日本武田药品工业株式会社的研究人员，从日本兵库县西宫市的土壤中分离得到。
其代谢产物为多肽类抗生素，由13种氨基酸的17个单体组成，其结构特征是包括巨大内酯环与脂肪酸侧链，通过酰胺键连接而成，属脂肽类化学物质。
根据末端脂肪酸种类的不同，主要成分为恩拉霉素A和恩拉霉素B，还有少量的C和D组分[1-5]。
恩拉霉素杀菌作用强，可以促进动物生长，改善饲料利用率，还因其毒性低、药物残留少，长期使用不易产生耐药性等特点，而被许多国家当作抗生素促生长剂使用，是一种较好的饲料添加剂[6-7]。
ARTP通过射频辉光放电产生各种高能活性离子能使细胞壁和细胞膜的通透性发生改变，损伤到细胞内的DNA，引起菌株突变[8-9]。
低能离子注入诱变选育漆酶高产菌株
低能离子注入诱变选育漆酶高产菌株赵世光;王诗然;薛正莲;汤明礼;余增亮【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2009(18)4【摘要】利用低能N+束注入技术对漆酶产牛菌灵芝菌(Ganoderma lucidum)U60菌丝体进行辐照诱变.通过研究15 keV能量下不同注入剂量与灵芝菌存活率及突变率的生物学效应关系,确定了在2.6×1015-3.9×1015ions/cm2注入剂茸范围内可获得高比例正突变株.选择3.12×1015ions/cm2的注入剂量参数后,经多轮注入诱变,获得了遗传性稳定的漆酶高产突变株UIM-281;发酵产酶实验表明,UIM-281的产漆酶活力峰值分别是出发菌株U60的1.7倍及2.28倍,且产酶发酵周期相对缩短24 h,是工业发酵中更加经济高效的灵芝漆酶发酵菌株.【总页数】6页(P534-538,457)【作者】赵世光;王诗然;薛正莲;汤明礼;余增亮【作者单位】安徽工程科技学院生物化学与工程系,安徽,芜湖,241000;微生物发酵安徽省工程技术研究中心,安徽,芜湖,241000;安徽工程科技学院生物化学与工程系,安徽,芜湖,241000;微生物发酵安徽省工程技术研究中心,安徽,芜湖,241000;安徽工程科技学院生物化学与工程系,安徽,芜湖,241000;微生物发酵安徽省工程技术研究中心,安徽,芜湖,241000;中国科学院离子束生物工程学重点实验室,安徽,合肥,230031;中国科学院离子束生物工程学重点实验室,安徽,合肥,230031【正文语种】中文【中图分类】Q691【相关文献】1.低能离子注入诱变选育盐霉素高产菌株 [J], 武利勤;苗凤香;顾海科;尚宏忠2.低能N+离子注入天冬氨酸转氨酶高产菌株诱变选育的研究 [J], 杨立峰;虞龙;张宁3.漆酶高产菌株的诱变选育及其产酶条件 [J], 黄乾明;谢君;张寒飞;杨菲;杨婉身4.低能N+离子注入诱变选育金耳多糖高产菌株的研究 [J], 蒋益; 郑惠华; 刘广建; 薛璟; 季宏更; 张蕾5.低能N+离子注入诱变选育琼胶酶高产菌株 [J], 梅建凤; 唐中秀; 王琦; 易喻; 王鸿; 应国清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
氮离子诱变产生万隆霉素高产菌株的研究的开题报告
氮离子诱变产生万隆霉素高产菌株的研究的开题报告题目：氮离子诱变产生万隆霉素高产菌株的研究一、背景与意义万隆霉素（WS）是一种广谱抗生素，具有较高的活性，可以用于治疗多种感染症状。
由于WS的使用范围较广，如今已经成为临床口服抗生素的一种重要成分。
因此，WS的研究已经成为目前生物技术领域的热点课题之一。
然而，WS的产量普遍较低，为了满足市场需求，需要通过技术手段来提高WS的生产效率。
氮离子诱变是一种经过前期筛选过滤，产生基因突变的化学诱变方法。
通过该方法，我们可以获得产量较高、品质稳定的WS高产菌株。
因此，该方法具有很大的应用前景。
二、研究目标本研究旨在应用氮离子诱变技术来产生WS高产菌株，采取系统化的研究手段，包括基因序列分析、菌株筛选及WS产量分析等方法，以探究这些策略在提高WS产量方面的实践应用价值。
三、研究内容及方法1.菌株处理：本研究将选择一种WS产量稳定表现的菌株，利用氮离子诱变技术将其获得多个种类的突变体。
2.筛选定位：通过利用不同的生物学和生物化学方法，筛选和定位框架中进行了突变的基因，并进一步验证突变的有效性。
3.鉴定高产菌株：在相关酶活检测、基因表达检测以及产物合成、纯化等多个环节对高产菌株进行鉴定。
4.产量与质量分析：对筛选出的WS高产菌株进行菌株培养、WS提取、含量分析等。
四、研究意义1.本次研究将为WS产量提高提供一种新的思路和方法，具有很大的应用实践价值。
2.通过氮离子诱变，将有助于加速WS高产菌株的培育，满足市场需求，推动WS向工业化方向发展。
3.同时，本研究意义在于展开WS基因背景与生物代谢之间关系的探索，有利于增进我们对于WS生产的详细认识。
五、研究计划1.前期准备：检测菌株的基因序列变异特点，确定常规培养条件。
2.诱变：利用氮离子对WS产量稳定的菌株进行诱变，建立多个突变库。
3.筛选：对突变库进行筛选定位，并进一步验证突变的有效性。
4.高产菌株的鉴定：在相关酶活检测、基因表达检测以及产物合成、纯化等多个环节对高产菌株进行鉴定。
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ｓ ． ｆ ｕ ｎ ｇ ／ ｃ ／ ｄ ／ ｃ ｕ ｓ 发酵产生的一种多肽类抗生素。由杀 真菌素链霉菌发酵生产抗生素恩拉霉素 ， 在上世纪
六十 年代 后 期 就 有 报 道 。１ ９ ６ ６年 日本 武 田药 品工
电荷形成静电吸附而结合在脂质膜上 ， 然后恩拉霉 素分子中的疏水端借 助分子链 的柔性 插入到质膜
畜体 内较少 ， 微量加入即发挥作用 。具有高稳定性 、 低毒性 、 低药物残留， 是 目前 比较理想的新型饲用抗 生素， 可以收到良好的社会效益和环境效益 ， 有广阔 的市场前景。恩拉霉素具有不被动物组织 吸收， 无
同。目前 ， 关于恩拉霉 素的作用机制主要包括 以下 几种 ： １ ）离子通道的形 ； ４ ）抑制细胞壁 的形成 。恩
胞壁缺损 ， 导致细胞 内渗透压升高 ， 细胞外液渗入菌 体， 使细菌变形 、 肿大、 破裂而死亡 ！ 。
由于 恩 拉 霉 素 对 革 兰 氏 阳性 菌 有 强 烈 抑 菌 作
用， 能改变肠道 内菌群分布 ， 有利于饲 料营养 ， 促 进
动 物消 化 吸 收增 重 ， 提高 饲 料利 用 率 ， 在 胃液 低 ｐ Ｈ 条件 下 ， 有很 高 的稳定性 ， 禽 畜长 期 服用不 易 产生 抗
冬氨酸上。根据末端脂肪酸分子的不同分为恩拉霉 素 Ａ和恩拉霉素 Ｂ ， 恩拉霉素是这两种组分 的混合
物 。恩 拉霉 素 的作 用机 制与 传统抗 生 素有很 大 的不
药性能改变肠道 内细菌群落 ， 常作为饲料添加剂 ， 口
服后恩 拉霉 素 只 留在 消化 道 中 ， 不 易被 吸收 ， 残 留禽
中， 进 而 牵引整 个 分子进 入 质膜 ， 扰乱 质膜 上 蛋 白质 和脂 质 原有排 列 秩序 ， 再通 过 恩拉 霉 素 分 子 间 的相
业株 式会 社研 发 ， 自土 壤 中分 离 的放 线 菌 Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍ ｙ － ｃ ｅ ８ ｆ ｕ ｎ ｇ ｉ ｃ ｉ ｄ ｉ ｃ ｕ ｓ Ｎ Ｏ ． Ｂ ５ ４ ７ ７发 酵 生 产 一 种 新 型 抗 生
氮离子对杀真菌放 线茵 Ｓ ． ｆ ｕ ｎ ｇ ｉ ｃ ｉ ｄ ｉ ｃ ｕ ｓ Ｎ Ｌ ６ ２ ９ — ３菌株进行诱变处理 ， 研 究低 能氮离子注入对其存活 率及产恩拉霉素能力的影响。低 能氮离子注入 剂量在 ６ ０ × １ ０ ＂ ｉ ｏ ｎ ｓ ／ ｃ ｍ 时对链霉茵的诱 变效应显
１ ２美 元 ， 效 益 可观 （ 据２ ０ １ ３年 网上 信 息 ） ， 但 竞 争 十 分 激烈 。恩拉霉 索 是一 种 环状 多 肽类 抗 生 素 ， 由１ ３ 种不 同 氨 基 酸 、 １ ７个 氨 基 酸 分 子 和 脂 肪 酸 分 子 组
成， 氨基 酸组成 环 状 多 肽脂 肪 酸分 子 连 在 末 端 的 天
用是维持外形 ， 保持渗透压稳定 ， 主要成分为黏肽 ，
在 革 兰 阳性 菌 中 ， 黏 肽 占细 胞 壁 总 量 的 ６ ５ ％ ～ ９ ５ ％ 。研究 表 明 ： 恩拉 霉 素能 阻止 黏肽 的合 成 ， 使 细
业， 年产 ６ ０ ０ ０多吨。我 国恩拉霉素的出 口量达到 ３ ０ ０ ０ 多吨 ， 创汇４ ０ ０ ０ 多美元 ， 出口单价达到每公斤
氮 离子 注入 诱 变选 育 恩 拉 霉 素 高产 菌 株
蔡作新’ ， 郑传伟’ ， 田伟 波’ ， 魏亚萍 ， 艾咚咚
１ ． 齐鲁制药有限公司 ， 山东 济 南 ２ ５ ０ １ ０ ０ ；
２ 。 山东齐发药业有 限公 司 ， 山东 平阴 ２ ５ ０ ４ ０ ０
摘
要： 利 用 氮 离子 注入 对链 霉 菌的诱 变效 应 ， 筛选 高产 恩拉 霉 素 的 变异 菌株 。 利 用不 同剂 量 的
第４ ５ 卷第３ 期
２ ０ １ ５年 ６月
工
业
微
生
物
Ｖｏ １ ． ４ ５ Ｎｏ ． ３
Ｉ ｎｄ ｕ ｓ ｔ ｒ ｉ ａ ｌ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
Ｊ ｕ ｎ ．２ ０１ ５
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ １ － ６ ６ ７ ８ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ３ ． ０ １ ０
互位移聚合形成跨膜离子通道。细菌细胞壁主要作
素， 当初 定 名 为 Ｅ ｎ ｄ ｕ ｒ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｎ ， 现称 Ｅ ｎ ｒ ａ ｍ ｙ ｃ ｉ ｎ ＿ ｌ ｜ ２ ］ 。
１ ９ ９ ３年 该抗 生 素 在 我 国 注 册 。现 在 恩 拉 霉 素 的 主 要 生产 国就 是 中 国 ， 浙 江 海 正 药 业是 最 大 的生 产 企
著， 试验 得 到 了 ５株 恩拉 霉素 产量较 高的 突变茵株 ， 其 中Ｎ ３ － ６ ４ ３茵株 经连 续传代 ４次 ， 遗传 稳 定 性
较好 ， 其摇 瓶发 酵水 平较 对照提 高 了 ４ １ ％， 放 大发 酵 生 产后 平 均 发 酵水 平提 高 ２ ５ ． ８ ％ 。 离子 注入
诱 变是 获得 高产恩拉 霉 素 突变 菌株 的有 效 方法 。 关键 词 ：链 霉 菌 ；氮 离子 注入 ；恩拉 霉素 ； 诱 变育种 恩拉 霉素 （Ｅ ｎ ｒ ａ ｍ ｙ ｃ ｉ ｎ ） ， 又名 恩来 霉素 、 安来 霉 素、 持 久 霉 素 ，是 由 土 壤 中 分 离 出 来 的 链 霉 菌 拉霉 素分 子 的构成 氨基 酸 中大多数 为 带正 电荷 的氨 基酸 ， 分子 通过 正 电荷 与 细 菌 胞 浆磷 脂 分 子上 的 负
作者简介 ： 蔡作新 （ １ ９ ６ ９一） ， 男， 研发 中心部长 ， 工程师。Ｅ － ｍａ ｉ ｌ ： ｃ ｚ ｈ ｕ ｏ ｘ ｉ ｎ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｎ。 ｒ
一
５８ —
第３ 期
蔡作 新等 ： 氮 离子 注入诱 变选育 恩拉 霉素 高产 菌株