猪口蹄疫ELISA诊断试剂盒质量检测
口蹄疫病毒抗体检测
2019年第7期 吉林畜牧兽医·经验交流·JingYan JiaoLiu口蹄疫病毒抗体检测白 翠，王 楠，王 晶，马晓媛，于钦磊吉林省动物疫病预防控制中心，吉林长春 130062摘 要：口蹄疫是一种急性、高度接触性、烈性的传染病，是由口蹄疫病毒引起的，常常发生在偶蹄动物，偶尔也见于人和其它动物。
世界动物卫生组织已经将该病列为法定申报传染病，我国将其列为一类动物疫病。
我国主要通过实施强制免疫来预防控制该病，疫苗免疫之后所产生的抗体水平是评价免疫效果的重要手段，也可以根据免疫后的 效果来制定合理免疫程序。
本实验室主要通过口蹄疫液相阻断和3ABC非结构蛋白抗体检测试剂盒来进行抗体检测。
关键词：口蹄疫；ELISA；抗体检测我国口蹄疫病毒流行毒株主要为A型、亚洲I型和O型，其中O型口蹄疫病毒基因型众多，流行广泛，严重危害畜牧养殖业发展[1]。
1 液相阻断ELISA方法进行抗体检测液相阻断是应用双抗体夹心法，其试验过程是抗原吸附在载体上，也就是我们常说的包被，包被后加入待测抗体，反应后加相应酶标记抗体，生成抗原抗体复合物，再与底物发生显色反应。
最后通过酶标仪的光谱吸收，测量OD值，计算抗体的量。
本实验室的试剂盒主要是使用兰州兽医研究所（兰兽研）研制开发的，该试剂盒与其它同类型试剂盒相比，许多项指标都已达到了世界口蹄疫参考实验室的同类产品水平，符合率极高。
液相阻断的难点重点在于被检血清的稀释倍数，这个在试剂盒说明书上有具体操作步骤，实验室操作人员可根据说明书进行10份或20份样品的操作。
2 3ABC非结构蛋白抗体检测经抗原纯化过的口蹄疫疫苗，去除了绝大部分3ABC非结构蛋白[2]，因此，用灭活疫苗免疫的健康动物体内正常不会有3ABC非结构蛋白抗体产生，而自然感染的动物体内由于免疫频率的增加和免疫剂量的加大，不仅产生了结构蛋白而且也产生3ABC非结构蛋白抗体。
所以，用该方法可以区分自然感染和免疫抗体。
口蹄疫O型抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 使用说明书
口蹄疫O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书【产品名称】通用名：口蹄疫O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Asia O（ELISA）【包装规格】96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒【预期用途】口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。
本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫O型抗体，可用于口蹄疫O型疫苗免疫效果评价。
【原理】本试剂盒由预包被口蹄疫O型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液、酶标记物及其他配套试剂组成，应用阻断酶联免疫法（ELISA）原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫O型抗体。
实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育，样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原，阻断抗原与板的结合；经洗涤后，再加抗体工作液孵育；经洗涤后加入酶标记物孵育；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫O型抗体。
【试剂盒组成】【储存及有效期】2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。
使用期限为2个月。
【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。
样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用工作洗涤液将待检牛、羊血清先按32倍稀释（如5μl 血清加入155μl 工作洗涤液中，混匀），待检猪血清按16倍稀释（如5μl 血清加入75μl 洗涤液中，混匀），阴、阳性对照不用稀释。
猪口蹄疫病毒(FMDV)Elisa试剂盒说明书
猪口蹄疫病毒(FMDV)Elisa试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T15ng/L – 480ng/L使用目的：本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中口蹄疫病毒(FMDV)含量。
猪口蹄疫病毒(FMDV)Elisa试剂盒说明书实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪口蹄疫病毒(FMDV)水平。
用纯化的猪口蹄疫病毒(FMDV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入口蹄疫病毒(FMDV)，再与HRP标记的口蹄疫病毒(FMDV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的口蹄疫病毒(FMDV)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中猪口蹄疫病毒(FMDV)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶 7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶 8 标准品(960ng/L) 0.5ml×1瓶3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶 10 说明书 1份5 显色剂A液6ml×1瓶 11 封板膜 2张6 显色剂B液6ml×1/瓶 12 密封袋 1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
480 ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液240 ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液120ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液60 ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液30 ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
不同试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体的对比试验
不同试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体的对比试验廖美娜;袁敏【摘要】使用口蹄疫O型正向间接血凝抗体试剂盒(IHA)和2个厂家生产的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒(VP1-ELISA)分别检测接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后不同时间的抗体合格率,以探讨3种抗体检测试剂盒的相关性.结果显示,IHA试剂盒与两种VP1-ELISA的符合率较差,分别为11.7％、12.5％,IHA试剂盒不能用于检测合成肽疫苗免疫抗体;VP1-ELISA试剂盒可以科学评价合成肽疫苗免疫抗体,两种VP1-ELISA试剂盒的平均符合率为93.6％,但是VP1-ELISA (UBI)试剂盒的稳定性高于VP1-ELISA(Z)试剂盒.【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》【年(卷),期】2016(041)001【总页数】4页(P24-26,29)【关键词】猪口蹄疫;O型抗体;试剂盒;对比【作者】廖美娜;袁敏【作者单位】河源市龙川县动物卫生监督所赤光分所,广东河源517349;河源市龙川县畜牧兽医渔业局,广东河源517300【正文语种】中文【中图分类】S851.3口蹄疫（Foot-an-mouth isease，FM）是一种急性、热性、高度接触性传染病[1]，严重危害我国畜牧业的发展[2-3]。
目前，我国对口蹄疫实行预防为主、扑杀为辅的防控政策，对口蹄疫实行强制免疫。
免疫抗体检测是科学评价免疫质量的有效手段，也是制定免疫程序的可靠依据。
在实际工作中，因受到检测方法、检测试剂的不同而导致检测结果常有差异。
近几年，猪口蹄疫O型合成肽疫苗作为一种新型疫苗在市场上得到广泛的应用[4]。
为了选择科学评估此种疫苗免疫质量的检测方法，本试验通过使用猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫猪群后，采集不同时间的血清，分别使用正向间接血凝试验试剂盒（IHA）和2个厂家生产的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒（VP1-ELISA），进行了猪口蹄疫O型抗体检测的对比试验。
口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA试验的测量不确定度评估
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２０１８ 年第 ３５ 卷第 ４ 期
ELISA 试验的测量不确定度进行研究，希望能探 索一种较为合理的 ELISA 检测结果不确定度评估 模式，并为兽医实验室开展相关工作提供借鉴。 1 材料和方法 1.1 样品
口蹄疫病毒 O 型抗体阳性、阴性血清：中国 农业科学院兰州兽医研究所提供。 1.2 试剂
应用液相阻断 ELISA 技术，检测牛、羊或猪 等偶蹄动物血清中口蹄疫病毒 O 型抗体。 2 结果与分析 2.1 数学模型
根据中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫 病毒 O 型抗体液相阻断 ELISA 检测试剂盒说明书 提供的检测结果计算及判定方法，建立数学模型：
定与表示》，并于 2012 年最新修订 [2]。近年《陆生动物诊断试验和疫苗 手册》[3] 中也对测量不确定度提出了要求。
ELISA 具有快速、灵敏和高通量等特点，且 无需昂贵仪器，是目前基层兽医检测部门应用的 主要方法。本文对口蹄疫病毒 O 型抗体液相阻断
口蹄疫病毒 O 型抗体
液相阻断 ELISA 试验的测量不确定度评估
杜 鹃 （北京市动物疫病预防控制中心，北京 102629）
摘 要：为探索一种较为合理的兽医实验室ELISA试验的测量不确定度评估模式，应用液相阻断ELISA试验方 法，对口蹄疫O型抗体进行检测，依据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012），分析试验的不确定 来源并评定各分量的标准不确定度、合成标准不确定度和扩展不确定度。结果显示：最终cutoff临界值与样品判 定浓度的OD450 mm值的比值为1.390，U=0.221（k=2）；测量不确定度的加入提升了测量结果的可信度，并有效 降低了假阳性、假阴性出现的风险；分析不确定度各分量对测量结果的相对贡献，可以找出影响检测质量的主 要因素，从而有利于实验室的质量控制和检测质量的提高。 关键词：口蹄疫病毒O型；液相阻断ELISA；测量不确定度 中图分类号：S852.4 文献标识码：A 文章编号：1005-944X（2018）04-0082-06 DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2018.04.021
不同品牌ELISA试剂盒对口蹄疫抗体检测的试验
不同品牌 ELISA试剂盒对口蹄疫抗体检测的试验摘要：用不同品牌的口蹄疫O型ELISA试剂盒,对免疫口蹄疫疫苗后的猪群进行口蹄疫抗体检测，发现检测结果阳性率各不相同。
结果表明不同品牌试剂盒因制备方法、包被抗原不同对猪群的抗体检测结果不同，所以，建议在实践中用口蹄疫ELISA试剂盒检测抗体效价应根据情况有选择使用。
关键词：试剂盒；抗体效价检测；阳性率；有选择使用；口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus）引起的偶蹄动物烈性传染病，是世界卫生组织（OIE）规定必报的烈性传染病，我国将其排在一类传染病之首。
口蹄疫病毒共有七个血清型，分别为O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2、SAT3型。
每个血清型又有许多不同的亚型，各血清型之间没有交叉保护，同一血清型的各亚型之间仅有部分交叉保护，这使得对口蹄疫的防控更加困难。
目前我国主要流行O型和A型口蹄疫。
目前，我国防控口蹄疫主要采取疫苗免疫与扑杀相结合的综合防治措施，对所有易感动物猪、牛、羊进行口蹄疫灭活疫苗免疫接种。
但是在给动物注射疫苗后能否预防口蹄疫的发生一直的广大养殖户迫切需要知道的问题。
所以免疫后的效果评价就显得特别重要。
目前主要有以下几种检测方法：1.免疫动物攻毒实验；这一方法是判断疫苗免疫效果的金标准，但因需要在生物安全三级实验室内进行，一般养殖企业和研究单位都没法实施。
2.免疫动物血清中和实验；这一方法相对准确些，但同样也受一定条件限制，一般的研究检测单位也不完全具备检测条件。
3.免疫动物血清ELISA抗体检测；这一方法的准确性比前两种方法相对较差，但也是一般检测单位都容易实施的检测方法，因此也被广泛用于疫苗免疫效果的评价。
但由于这一方法的存在的一定的缺陷，评价结果也一直存在争议。
本文所研究的就是使用第三种方法对疫苗免疫效果进行检测，根据检测结果进一步分析这一方法的准确性，对使用单位给予一些指导建议。
口蹄疫病毒抗体检测结果测量不确定度评估
口蹄疫病毒O型抗体ELISA试验的测量不确定度评估李庆新（河南尚码检测技术有限公司）摘要:本试验目的是评定猪口蹄疫病毒O型抗体ELISA检测的不确定度，确保检测结果的准确性及可靠性。
采用的方法是按照《兽医检测实验室ELISA试验测量不确定度评估指南CNAS-GL043-2020》来分析试验的不确定来源并评定各分量的标准不确定度、合成标准不确定度和扩展不确定度。
评估结果显示，标准不确定度为0.0966，扩展不确定度为0.1932，置信水平P=95%，k=2。
试验表明，检测不确定度的主要来源为加样器加样测量和阴性对照测量均值。
在样品测量值处于阳性判定值附近时，需要注意不确定度的存在。
关键词:猪口蹄疫病毒O型抗体；ELISA检测；不确定度评估猪口蹄疫是由口蹄疫病毒引起，表现为蹄冠、趾间、蹄踵皮肤发生水泡和烂斑，部分猪口腔黏膜和鼻盘也有同样病变。
一般多发于冬春季节直接和间接接触都能使猪患病，如病猪、泔水、被污染的饲养用具及运输工具等都能传播。
预防控制猪口蹄疫最有效地方式是采用疫苗免疫，所以在评估猪群疫苗免疫后的免疫抗体水平时，常使用竞争ELISA法检测猪口蹄疫病毒的O型抗体。
在抗体的检测中由于试剂的敏感性和多步骤操作，存在不可避免的不确定度的问题，当抗体检测结果处于判定值附近时，不确定度的引入对正确判定尤显重要。
本文以郑州中道生物技术有限公司生产的猪口蹄疫病毒O型抗体ELISA检测试剂盒为例，分析实验过程中产生的不确定度的因素，评估ELISA检测猪口蹄疫病毒O型抗体不确定度，为临床诊断提供技术支持。
1材料与方法1.1材料猪口蹄疫病毒O性抗体阳性、阴性的血清(郑州中道生物技术有限公司)；临床猪血清来自某规模化猪场；猪口蹄疫病毒O型竞争ELISA抗体检测试剂盒(郑州中道生物技术有限公司生产，批号：20220517)；酶标仪(Infinite F50)。
1.2检测方法（1）向包被板中加入待检样品，设立阳性对照（2孔）、阴性对照（2孔），各孔50μL，然后每孔加酶标结合物50μL，混匀；（2）封板，37℃孵育30min；（3）洗涤液加满每孔，反复洗涤5次，拍干；（4）每孔依次加显色液A和显色液B各50μL，混匀，37℃避光显色10min；（5）每孔加入50μL终止液，终止酶反应，使用450nm波长测量吸光度值。
2种口蹄疫O型抗体阻断ELISA检测试剂盒应用比较
202162种口蹄疫O型抗体阻断ELISA检测试剂盒应用比较朱爱发（桐城市畜牧兽医管理中心，安徽桐城231400）摘要为评估2种常用口蹄疫0型抗体检测试剂盒的性能差异，对2020年春季随机抽检的3家规模养殖场提供的60份猪血清分别用液相阻断ELISA试剂盒和抗体阻断（固相）ELISA试剂盒进行了检测，并比较了2种试剂盒的阳性检出率和符合率遥结果表明，2种方法检测结果总符合率为91.67%，符合程度高遥在基层畜牧兽医部门日常定性检测中，推荐使用抗体阻断（固相）ELISA检测试剂盒遥关键词口蹄疫病毒;液相阻断ELISA；抗体阻断（固相）ELISA；检测试剂盒;符合率中图分类号S855.3文献标识码A文章编号1007-5739(2021)06-0197-02DOI：10.3969/j.iss灶.1007-5739.2021.06.081Comparison of the Application of Two Kinds of Foot-and-mouth Disease O-type AntibodyBlocking ELISA Detection KitsZHU Aifa(Tongcheng Animal Husbandry and Veterinary Management Center,Tongcheng Anhui231400) Abstract In order to evaluate the performance differences of two commonly used foot-and-mouth disease O-type antibody detection kits,60pig serums provided by three large-scale farms randomly selected in the spring of2020were detected with liquid-phase blocking ELISA kits and antibody blocking(solid phase)ELISA kits,and the positive detection rate and coincidence rate of the two kits were compared.The results showed that the total coincidence rate of the two methods was91.67%,which was a high degree of coincidence.In the daily qualitative testing of the grassroots animal husbandry and veterinary departments,it is recommended to use an antibody blocking ELISA detection kit.Keywords foot-and-mouth disease virus;liquid-phase blocking ELISA;antibody blocking(solid phase)ELISA;detection kit;coincidence rate口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的可导致猪、牛、羊等偶蹄动物感染的一种急性、热性、高度接触性传染病叫口蹄疫病毒属小RNA病毒科口蹄疫病毒属，主要有A型、0型、C型、南非I型、南非域型、南非芋型和亚洲I型等7个血清型，其中0型、A型分布较广泛，危害最大。
郑州中道生物猪口蹄疫O型试剂盒(酶联免疫法)说明书
猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书【产品名称】通用名：猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine foot and mouth disease virus (ELISA) 【预期用途】本品采用酶联免疫间接法检测猪血清或血浆中的猪口蹄疫病毒（O型）抗体，适用于评估猪场猪口蹄疫疫苗免疫状况，可用于动物疫病的调查。
【检验方法】1. 配洗液：将50ml洗液（20×）加纯化水稀释至1000ml，充分摇匀后备用。
2. 编号：每次试验应在包被板上设空白对照孔1孔，阴性对照孔2孔，阳性对照孔2孔，其余为待检样品孔。
3. 加样品稀释液：用加样器在包被板的待检样品孔中加入样品稀释液，每孔100μl；空白对照孔、阴性对照孔及阳性对照孔不加样品稀释液。
4. 加样：分别于各待检样品孔加入待检样品10μl，阴性对照孔加入阴性对照血清100μl，阳性对照孔加入阳性对照血清100μl；空白对照孔不加样。
5. 温育（一）：充分混匀，贴上封板膜，37±2℃温育30分钟。
6. 洗板（一）：洗板机洗或手洗，方法如下：①手洗：倾去内容物，用洗液注满反应孔，静置15秒至30秒后吸去或弃去，在毛巾或吸水纸上拍干。
如此洗板重复5次。
②洗板机洗：洗板次数为5次，每次洗液在孔中滞留时间为15-30秒，洗液应注满反应孔，确保每次吸净无残留，全部洗完后在毛巾或吸水纸上拍干。
7. 加酶标结合物：除空白对照孔以外，各孔中加入酶标结合物100μl。
8. 温育（二）：贴上封板膜，37±2℃温育30分钟。
9. 洗板（二）：方法同洗板（一）。
10. 加显色剂：每孔加入显色剂A 50μl，全部加完后再在每孔中加入显色剂B 50μl，混匀。
11. 温育（三）：37±2℃显色10分钟。
12. 终止：显色完毕后立即于每孔加50μl终止液，混匀。
两种试剂盒分别检测猪口蹄疫O型、A型疫苗抗体的对比试验
2018 年第 8 期 兽医实验室
两种试剂盒分别检测猪口蹄疫 O 型、A 型 疫苗抗体的对比试验
杨虹 1 吴聪 2 1. 南昌市动物疫病预防控制中心 2. 江西农业大学动物科技学院
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、 对猪口蹄疫 O 型、A 型疫苗强制免疫为主的综合措施来防控口蹄疫，
2. 血清样品背景。血清来自本市一个接种猪口蹄疫
主要是通过疫苗免疫使动物产生抵抗该病的有效抗体， O 型、A 型二价疫苗的规模化猪场，随机从一次免疫后
以达到预防的目的。疫苗免疫后抗体水平检测是评价疫 28 天的猪群中采集 30 份血样。
苗免疫效果最简单最直接的方法。
病毒时需要宿主细胞 DNA 复制相关的酶参与，只有细胞 处于指数生长前期时其 DNA 复制酶的活性最局，数量 最多。
本研究摸索了利用微载体规模培养 PK-15 细胞增 殖 PCV2 LG 株的条件，根据试验结果确定最佳接毒时 间为细胞接种后 6 h，最佳接毒剂量为 MOI=0.05，在此 条件下增殖病毒含量最高可达 106.5，表明 PCV2 LG 株 适应在 PK-15 细胞内大规模增殖，为以哺乳动物细胞为 基质大规模增殖病毒及制备猪圆环病毒疫苗提供依据。
二、结果
1. 抗 体 检 测 合 格 率。 使 用 VP1-ELISA 诊 断 试 剂 盒 检 测 O 型、A 型 口 蹄 疫 抗 体 合 格 率 分 别 为 86.67%、 80.00%，使用 SPC-ELISA 检测试剂盒检测 O 型、A 型 口蹄疫抗体合格率分别为 90.00%、83.33%（表 1）。
4. 检 测 方 法。 采 集 的 30 份 猪 血 液 样 品 经 4 ℃， 3 000 r/min 离心 3 min 后取上清液，按试剂盒使用说明 书进行检测。
口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测两种实验方法结果对比
异 性 、 稳 定 性 的优 点 ，并 且 检 测 结 果 精 确 ，实 验 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ板 ， ５ ０便 捷 ，是 现 在 口蹄 疫 抗 体跟 踪 监 测 首选 的 实 板 ３～ ５次 ，甩 干 ，加 口蹄 疫 ０型豚 鼠抗 体 工 作
验 方 法 。
液 ，５ ０虬 ／孔 ，封 板 ３ ７℃温 育 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑥ 洗 板
本 次 试 验 用 兰 州 兽 医 研 究 所 生 产 的 口蹄 疫 ０ ３～ ５次 ，甩 干 ，加 兔 抗 豚 鼠 Ｉ ｇ Ｇ — Ｈ Ｒ Ｐ工 作 液 ， 型液相 阻断 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ抗 体 检 测 试 剂 盒 进 行 口蹄 疫 ０ ５ ０儿 ／孔 ，封 板 ３ ７℃ 温 育 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑦ 洗 板 ３～ ５ 型 抗 体 检 测 ，试 验 方 法 是 对 同 一 批 猪 血 清 样 品 分 次 ， 加 入 底 物 Ａ与 底 物 Ｂ等 量 混 合 后 的 混 合
同情 况 下 使 用 不 同 实验 方 法 的建 议 。
① 在 稀 释 板 上 稀 释 样 品血 清 及 阴 阳 性 对 照 血 清 ， ５ ０儿 ／孔 。② 在 样 品血 清 和 阴 阳性 对 照 血 清 中加 入抗原 ，５ ０儿 ／孔 。 ③ 封 板 ， 振 荡 ， 将 稀 释 板
３ ７℃温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ。④ 将 血 清 抗 原 混 合 转 移 到 口
别 进 行 ４℃ 静 置 过 夜 和 ３ ７℃ 温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ，并 且 液 ，５ ０儿 ／孔 ，避 光 反 应 １ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑧ 加 入 终 止 液 ， 其 他 检 测 步 骤 相 同情 况 下 进 行 结 果 对 比 。试 验 结 ５ ０ Ｌ ／孑 Ｌ ，读 取 Ｄ ４ ９ ２ ｎ ｍ 。 果 讨 论 两 种 实 验 方 法 得 出 的检 测 结 果 差 异 和 对 不 ｉ ． ３ ． ２第 二 组 实 验 （ ３ ７℃温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ）步 骤 ：
国家口蹄疫参考实验室诊断检疫技术简介
国家口蹄疫参考实验室诊断检疫技术简介（一）现有诊断检疫技术（试剂盒）本实验室经过多年的研究和实践，建立了病毒分离、补体结合试验（CFT）病毒中和试验（VNT）、血清中和试验等诊断方法，并形成了一套完善的诊断程序，符合国际通用的操作标准。
同时发展了O型口蹄疫正向间接血凝诊断法，口蹄疫和猪水泡病反向间接血凝诊断法，琼脂扩散试验，以及口蹄疫VIA诊断和RT-PCR诊断试剂盒，满足口蹄疫样品的诊断和定型。
近年来，本实验室根据科学技术发展，结合国际组织推荐的口蹄疫诊断检疫技术，研制出了多种试剂盒和检测方法。
1、O型口蹄疫液相阻断ELISA诊断试剂盒液相阻断ELISA是国际兽疫局（OIE）推荐的检测口蹄疫病毒抗体的标准方法。
用分离于我国的口蹄疫O型毒株研制出液相阻断ELISA试剂盒，用于测定牛、猪、羊血清中针对O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体。
本试剂盒主要用途，一是对进出口动物口蹄疫病毒抗体监测；二是监测口蹄疫疫苗免疫抗体，以评价动物群体抗感染能力。
2、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒（3ABC-I-ELISA）区分口蹄疫感染和免疫动物是国际活畜进出口贸易的必检项目，也是OIE 判定疫情国家和非疫情国家的依据。
本试剂盒适用于活畜进出口调运、疫区净化检疫和群体无症状感染评价，检测活畜血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体，以区分感染和免疫动物。
本试剂盒可测出牛感染后长达480天（16个月）的感染抗体，其多项技术指标已超过国外同类产品。
3、口蹄疫多重RT-PCR诊断试剂盒（FMD Multi RT-PCR）本试剂盒适用于病料诊断、反刍活畜和肉品等畜产品染毒检测，特异性扩增病料、O/P液和肉品中的口蹄疫病毒基因片段，确认样品供体是否染毒。
本试剂盒含有三对引物，可扩增多个口蹄疫病毒基因片段，至少适用于口蹄疫O型、A 型和AsiaⅠ型的三个血清型的检测，可查出0.07LD50的病毒量。
4、口蹄疫原位杂交检测法原位杂交是借助核酸分子杂交的方法，在显微镜水平检测和定位特异的核酸片段。
生猪屠宰检疫中口蹄疫鉴别及诊断方法
生猪屠宰检疫中口蹄疫鉴别及诊断方法猪肉作为大众餐桌上的一大肉食种类，就像是人们对蔬菜水果有无农药残留的担忧一样，人们也会担心其是否健康。
当然，在1997年之后我国就对猪肉实行了定点屠宰，集中检疫的政策。
也就是说，居民在市场中购入的猪肉是经过安全检疫的，那么对于疫病检查的工作人员来说，如何更快，更准的对送检猪肉进行检查，保障人民的食品健康安全就成为了被研究的问题。
在对生猪的屠宰检疫中，会进行多项疫病的检验，其中就有口蹄疫病的检验。
本文以生猪屠宰检疫中的口蹄疫病为中心，深入分析实践中应当如何对口蹄疫病进行检查检验，希望能以此更好的投入检验工作中，为居民的餐桌安全保驾护航。
关键字：生猪屠宰;检疫;口蹄疫引言：随着人们经济水平的提升，大家对生活质量的要求一直在不断提高，“衣食住行”方方面面的安全都越来越受到人们的重视。
尤其是新冠疫情的爆发，为人们的饮食安全敲响了警钟，入口食品的安全性越来越受到人们的重视。
在非洲猪瘟之后，我国的猪肉市场价格也受到影响而节节攀升。
正是在这样的时候，猪肉的安全更加引起了人们的关注，检疫人员更加应当重视生猪屠宰检疫这一工作。
对于生猪屠宰检疫的技术分析有利于检疫工作的进行，更有利于保障人民的食品安全。
对口蹄疫的专项分析，更加有利于加强疫病检验人员的工作效率。
本文以生猪屠宰检疫中的口蹄疫为出发点，对口蹄疫进行介绍的基础上，将其与其他疫病的特征进行区分，以便于更好的了解口蹄疫病的特征，及时的进行诊断。
一、猪口蹄疫概述口蹄疫以其传播迅速和传染性强而闻名，一旦传播和爆发，往往会给畜牧业生产和畜产品贸易带来严重的影响。
世界动物卫生组织（OIE）将其列入A类烈性传染病，我国也将其划入严格控制、强制免疫的一类动物传染病。
1.口蹄疫的病原分析口蹄疫，英文全称foot and mouth disease，英文简称FMD，是一种由口蹄疫病毒感染偶蹄类动物而产生的疾病。
患有口蹄疫的動物会出现其口、足等部分部位出现水泡的现象。
口蹄疫病毒O型液相阻断ELISA免疫抗体检测快捷方法
xpenmentaTstudy on online—口蹄疫病毒o型液相阻断ELISA免疫抗体检测快捷方法莫荣艳，熊丽文，梁惠娟，黄钰，黎益图，何涛，覃磊（来宾市动物疫病预防控制中心546100）摘要：应用液相阻断ELISA实验方法检测猪口蹄疫病毒O 型灭活疫苗免疫的猪血清80份,80份样品抗体效价逸1：64有78份，抗体保护率为98%遥通过口蹄疫病毒O型液相阻断ELISA免疫抗体检测快捷方法，能快速、高效的提高工作效率遥关键词：O型口蹄疫;液相阻断ELISA；抗体检测；猪本实验应用液相阻断ELISA检测方法检测猪血清样品80份,快速检测猪的O型口蹄疫抗体效价逸1：64有多少份。
ELISA 抗体效价与免疫动物攻毒保护的关系:猪的抗体效价逸1：64,99%以上保护;抗体效价＜1：4,不保护;效价在1：4~45,50%保护。
1材料和方法检测样品:猪血清80份（样品不能有溶血状态、受污染、破损、变质）,编号为DA1-DA80遥实验器材:酶标仪；37益恒温箱；超纯水仪；移液器；配套移液枪尖;96孔U型微量血凝板;移液槽；吸水纸；检测试剂盒是中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒。
2试剂准备将口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒从冰箱取岀，放置常温解冻,试剂恢复常温后使用遥打开超纯水仪,取岀2L超纯水装在容器备用，按照检测试剂盒说明书，配制25倍PBST浓缩液，用超纯水稀释成1倍PBST（例如：1mL浓缩液加入24mL超纯水）。
打开恒温箱电源，设置温度到37益，温度上升到37益才能按实验要求正常工作。
配制口蹄疫O型病毒抗原:按照抗原配制比例，用PBST稀释液稀释到工作浓度（1：25,即1mL病毒抗原加24mL PBST稀释液）。
3实验操作步骤3.1稀释血清80份血清需要96孔U型微量血凝板共5块，在血凝板边缘标记数字（横向标记为1,2-12，纵向标记为A, B-H），一块板可以稀释16份血清样品。
ELISA法鉴定猪口蹄疫野毒与疫苗
ELISA法鉴定猪口蹄疫野毒与疫苗猪口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，世界动物卫生组织（OIE）将该病列为A类家畜传染病之首，大多数亚洲、非洲、南美洲国家一直都通过注射灭活疫苗的办法来控制该病的流行。
从2001年英国暴发口蹄疫后，欧盟允许在暴发口蹄疫时进行疫苗的紧急接种。
因此，建立准确、快捷的鉴别口蹄疫野毒与疫苗的方法，对该病的控制、食品安全和进出口贸易十分重要。
以下就国内外ELISA法鉴别口蹄疫野毒与疫苗的技术介绍如下：中国农业科学院兰州兽医研究所朱彩珠等利用大肠杆菌表达的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3ABC多肽作为抗原，建立了一种可区分FMDV感染与接种灭活疫苗免疫牛的间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)。
通过对336份正常牛血清、508份注射疫苗牛血清、6O 份人工感染牛血清和58份豚鼠免疫血清的检测，确定了血清抗体阴性与阳性效价的临界值。
336份正常牛血清检测结果，特异性为98.21%；508份接种灭活疫苗1～2次后1～6个月的牛血清检测结果，特异性为98.62%;60份实验性感染牛血清的检测结果显示，I-ELISA 检出率为95.00%(按D值0.400为阳性统计)。
华中农业大学动物医学院阮力等利用大肠杆菌BL21(DE3)表达3B蛋白，建立了间接酶联免疫吸附试验(I-EIISA)区分口蹄疫病毒感染猪与注苗猪的方法。
上海市农业科学院畜牧兽医研究所潘洁等以大肠杆菌表达重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB为检测抗原，研制了口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA检测试剂盒，该试剂盒可用于判定被检动物是否感染口蹄疫病毒。
在1746份免疫猪血清中，3AB-ELISA对免疫猪血清的特异性为98.68%；在1077份健康非免疫猪血清中，3AB-ELISA对健康非免疫猪血清的特异性为98.68%；在36份人工感染猪血清中，3AB-ELISA 对阳性检出率为100%。
口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒与其改进型试剂盒的比对试验
中国动物保健2021.061检测项目口蹄疫O 型抗体。
检验同一生产厂家，同一检测项目，不同试剂盒之间的比对试验（两种试剂盒比对）。
试剂盒1：口蹄疫O 型抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒。
试剂盒2：改进型口蹄疫病毒O 型液相阻断ELISA 抗体检测试剂盒。
2检验依据检验依据：GB/T 18935—2018《口蹄疫诊断技术》液相阻断-酶联免疫吸附试验LpB-ELISA 。
3检测时间2020年11月25日。
4检验人员本中心兽医实验室检验员2名。
5血清来源春秋两防各乡镇上交血清，随机抽取。
6试剂盒说明6.1口蹄疫O 型抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒（以下简称试剂盒1）生产厂家：中国农业科学院兰州兽医研究所，批号：20200903101-1，抗原批号（101/30），有效期至：20210302，使用浓度：1:10。
操作步骤：1）将试剂盒1恢复至室温。
2）在U 型血凝板上按50μL/孔用PBST 工作液将1～10列待检血清从1：2开始稀释至1：64，然后将1：32、1：64两滴度转移到抗原抗体反应板中（每板40份样品），同时按图示稀释阴阳性对照血清，11列阳性血清从1：2稀释至1：256，A12～B12孔从1：2稀释至1：4，然后每孔加入50μL 用PBST 稀释至使用浓度的O 型口蹄疫病毒抗原（1：10，即1份病毒抗原加9份PBST ），病毒抗原对照每孔加100μL 。
振荡混匀，封板，37℃温育90min 。
加入病毒抗原后血清的实际稀释度变为1：64和1：128稀释度。
（布板如表1，40份样品/板）3）将抗原抗体混合物从抗原抗体反应板上依次转移至已包被口蹄疫酶标板上的对应孔，每孔50μL ，封板，37℃温育1h 。
4）用PBST 连续洗板3～5次，拍干。
加入口蹄疫O 型豚鼠抗体工作液，每孔加50μL ，封板，37℃温育30min 。
5）同上洗板3～5次，拍干，按50μL/孔加入兔抗豚鼠IgG-HRP 工作液，封板，37℃温育30min 。
两种试剂盒分别检测猪口蹄疫O型、A型疫苗抗体的对比试验
2018 年第 8 期 兽医实验室
两种试剂盒分别检测猪口蹄疫 O 型、A 型 疫苗抗体的对比试验
杨虹 1 吴聪 2 1. 南昌市动物疫病预防控制中心 2. 江西农业大学动物科技学院
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、 对猪口蹄疫 O 型、A 型二价疫苗免疫抗体进行了免疫效
二、结果
1. 抗 体 检 测 合 格 率。 使 用 VP1-ELISA 诊 断 试 剂 盒 检 测 O 型、A 型 口 蹄 疫 抗 体 合 格 率 分 别 为 86.67%、 80.00%，使用 SPC-ELISA 检测试剂盒检测 O 型、A 型 口蹄疫抗体合格率分别为 90.00%、83.33%（表 1）。
最好的水平。 选择合适的接毒时间至关重要，进行 PCV2 培养时 ,
应在细胞接种或未形成单层之前接种。细胞接种后 0 h 以 MOI 为 0.05 接种 PCV2 病毒，接种病毒时间较早 , 严重影响了细胞的正常生长，病毒毒价较低 ；细胞接种 后 12 h 以 MOI 为 0.05 接种 PCV2 病毒，细胞密度有所 提高，虽然理论上细胞数越多 , 其所收获的病毒也应该 最多 , 但病毒毒价并没有细胞接种后 6 h 接种 PCV2 高。 说明细胞密度并不是决定病毒滴度的决定性因素 , 而是 细胞的生长状态。这主要是由于 PCV2 病毒在增值子代
3. 检 测 试 剂 盒。（1） 猪 口 蹄 疫 O 型 病 毒 VP1 结
2018 年以前，我国对猪一直进行 O 型口蹄疫的强 构 蛋 白 抗 体 ELISA 诊 断 试 剂 盒（VP1-ELISA）：批 号
制免疫，但根据农医发 [2018]1 号文件“农业部关于印发 20180302，购自郑州中道生物技术有限公司 ；猪口蹄疫
病毒时需要宿主细胞 DNA 复制相关的酶参与，只有细胞 处于指数生长前期时其 DNA 复制酶的活性最局，数量 最多。
O型口蹄疫液相阻断 ELISA检测记录(兰州所)
7、结果判定：
(1)试验认可标准：病毒抗原对照至少2孔D492nm值应在1.0-2.0内。阳性对照效价应在1：1024±1内，阴性效价应<1：8
。
(2)临界值计算：抗原对照4孔，弃去最高和最低D492nm值，计算剩余2孔的平均值，再除以2，即50%对照值(临界值)。
3、连续洗ELISA板5次。再将抗原抗体混合物从抗原抗体反应板上按次序转移至ELISA对应孔，50ul/孔，封板37℃温育1h 。
4、同上洗板5次。用豚鼠抗血清稀释液稀释O型口蹄疫病毒豚鼠抗血清至工作浓度，每孔加50ul，封板37℃温育1h。
5、洗板5次。用PBST稀释兔抗豚鼠酶结合物至工作浓度，每孔加50ul，封板37℃温育1h。
2、抗原抗体反应：根据不同需要选择适当布局在抗原抗体反应板上操作。如在U型血凝板上按50ul/孔量用PBST将待检血
清从1：4开始做2倍连续稀释至1：512。同时，按图示稀释阴阳性对照血清，然后每孔加入50ul用PBST稀释到使用浓度的
亚洲1型口蹄疫病毒擵，病毒抗原对照孔加100ul。混匀，封板，4℃过夜。
检验时间 年月 日
年 月日
检验环境 （温度： ℃ 湿度： ﹪） 检验依据 猪瘟防治技 术规范—猪 瘟病毒间接
温度： ℃ 湿度： % 农医发［2012］2号文件
生产厂家 试剂批号
有效期
个月
主要检验步骤及结果判定：
1、用包被缓冲液稀释O型口蹄疫病毒兔抗血清至工作浓度(1：1000)，在ELISA板上每孔加50ul，振荡，封板温室过夜。
xx区 动物疫病预防控制中心
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疫苗免疫动物和口蹄疫病毒感染动物 ， 同时还可 以
检测疫苗免疫动物的抗体水平。在生产实际中， 使
用这两种试剂盒对 田问猪进行监测 ， 对掌握猪群 口
蹄疫的防疫状况有重要作用。
清进行检测 ， 其结果应符合标准规定 。４ Ｏ份 Ｎ ｓ非
作 者简介 ： 郎洪武 （９７年 一 ， ， １６ ）男 蒙古族 ， 副研究员 。 事兽 用生物制品的科研 与监察工作。 从
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２０ ， （ ）３ ３ ，７ｆ洪武 。 ０６４ ５ Байду номын сангаас Ｏ ６－ ８４／１ ｌ ￣ 等
中国兽药杂志
・７・ ３
结构蛋白抗体 阴性参考血清及 ４份猪免疫用 口蹄 ２ 结 果 疫灭活疫苗接种参考血清 ， 用于猪 Ｆ Ｄ Ｓ非结 ２ １ 猪 Ｆ Ｄ Ｐ Ｍ ＶＮ ． Ｍ Ｖ Ｖ １结构蛋白抗体 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ诊断试剂 构蛋 白抗体 Ｅ ＩＡ诊断试剂盒特异性检测 ， ＬＳ 由上海 盒敏感性检验 见表 １ 。敏感 性检 测结果 表 明， 优耐特生物医药有限公司提供 ， 按试剂盒标 明的使 Ｓ Ｏ １０ ＳＩ １１ Ｓ ０ １２批诊断试剂盒 的敏感 Ｈ Ｏ ５ 、Ｉ ０５ 、Ｈ ０５ － Ｏ 用方法对血清进行检测 ， 每份血清 的 Ｏ ４ ／ Ｄ 临界 性均符合规定。
１ 材 料与方 法
１１ 试剂盒 猪 Ｆ Ｄ Ｐ 结构蛋 白抗体 Ｅ Ｉ ． Ｍ ＶＶ １ ＬＳ Ａ
诊断试剂盒 ３ ， 批 批号分别为 Ｓ ０ １０ Ｓ ０ １１ Ｈ ０ ５ 、Ｈ ０５ 、
Ｈ ０５ ； Ｍ Ｖ Ｎ ＬＳ Ａ诊 考实验室（ Ｌ 以及丹麦牲 畜病毒研究所也 曾开 Ｓ ０ １２ 猪 Ｆ Ｄ Ｓ非结构 蛋 白抗体 Ｅ Ｉ ＷＲ ） 批 Ｈ ０４ 、 Ｈ ０４ 、 发出以重组蛋 白为抗原的口蹄疫免疫诊断试剂盒。 断试 剂 盒 ３批 ， 号分 别 为 Ｓ ０ １４ Ｓ ０ １５ Ｐ ｂｉ ｔ ｉ ｒｈ 的试剂盒主要是利用在大肠杆菌所表达出 ｒ ｇ 的ＦＤ Ｍ Ｖ非结构蛋 白 ３ Ｂ Ａ Ｃ多体蛋 白（ ｏ ｐ ｔｎ ｐｌ ｒ ｅ ） ｙ ｏｉ 作为包被抗原－ ］而丹麦牲畜病毒研究所的试剂 ｌ ，
盒是 用昆虫细胞 （ ａｕ ｖｕ— ｆ ｔ ｓ ｔ ｅｓ ｂｃｌ ｉ ｓｎ ｃ ｄｉ ｅ ｌ ） ｏ ｒ ｉｅ ｅ ｎ ｃ ｃ ｌ Ｓ ０ １６ 均 由上海优耐特生物医药有限公司提供 。 Ｈ ０４ ，
１ ２ 血 清 ．
１２ １ Ｖ １ ．． Ｐ 结构蛋 白抗体阳性参考血清 ６份稀 释度分别为 ｌ ５ ｌ １ 、：０ ｌ４ 、 ：０ １ １０的 ： 、 ：０ ｌ２ 、：０ ｌ ６ 、：２ 参考血清 ， 用于猪 Ｆ Ｄ Ｐ 结构蛋 白抗体 Ｅ ＩＡ Ｍ ＶＶ １ ＬＳ
Ｅ ＩＡ诊断试剂盒特异性检测 ， ＬＳ 由上海优耐特生物
医药有限公 司提供 。按试剂盒标 明的使用方法对 血清进行检测 ， 每份血清的 Ｏ ／ Ｄ 。 临界值 均应小
于 １０ ．。
结构蛋白和 Ｎ 非结构蛋 白合成肽作为包被抗原在 ｓ
国际上尚属首次。
利用 ３ Ｂ Ａ Ｃ或 ３ Ｂ重组蛋 白作 为抗原所研制 Ａ
所表达出的 Ｆ Ｄ Ｍ Ｖ非结构蛋 白３ Ｂ多体蛋白作 为 Ａ
包被抗原－ 。美国 Ｕ Ｉ ３ Ｊ Ｂ 公司研制 的试剂盒以 Ｖ １ Ｐ
诊断试剂盒敏感性检测 ， 由上海优耐特生物 医药有 限公 司提供。按 试剂盒标 明的使用方法对参 考血 清进行检测 ， 其结果应符合标准规定。 １２２ Ｐ 结构蛋白抗体 阴性参考血清 ４ 阴 ．． Ｖ １ ｏ份 性参考 血 清 ， 于 猪 Ｆ Ｄ Ｐ 用 Ｍ Ｖ Ｖ １结 构蛋 白抗 体
［ 要】 利用参考血清， 摘 按试剂盒标 明的使用方法， 对上海优耐特生物医药有限公 司提供的 ３ 批猪口蹄疫病毒 Ｖ １ Ｐ 结构蛋 白 抗体和 ３ 批猪 口蹄疫病毒 Ｎ ｓ非结构蛋 白抗体 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ诊断试剂盒
的敏感性和特异性分别进行 了检测。结果表明， ２种试剂盒的敏感性和特异性均符合标准规定。
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中国兽药杂志
２０ ４ （ ）３ ３ ，７ 郎洪武 。 ０６，ｏ ｓ ：６— ８４ ／ 等
猪 口蹄疫 Ｅ ＩＡ诊断试剂盒质量检测 ＬＳ
郎洪武 ， 高金源 ， 永 邓
（ 中国兽医药品监察所 ， 北京 １０ ８ ） ００ １
［ 稿 日 】 ０５ ０ － １ 【 收 期 ２０ － １ ３ 文献标识码 】 Ｂ ［ 文章编号】１０ —１８（０６０ — ０６— ４ ［ ０２ ２０ ２０ ）５ ０３ ０ 中圈分类号】￥５．３ ８４４
［ 关键词］ 猪 ； 蹄疫；ＬＳ 诊断试剂盒； 口 ＥＩ Ａ； 敏感性； 特异性
对 于猪 口蹄 疫 病毒 （ ｏｔ ｎ ｏｔ ｄ ｅｓ Ｆｏ ａｄｍ ｎ ｉ ａｅ ｈ ｓ ｖ ｕ ，Ｍ Ｖ Ｅ Ｉ ｉ ｓＦ Ｄ ） ＬＳ ｒ Ａ试 剂盒的研究 ， 国际上除美 在 国Ｕ Ｉ Ｂ 公司外 ， 英国的 Ｐ ｂｉ ｔ ｉ ｒｈ 世界 口蹄疫标准参 ｒ ｇ
的 ＥＩ ＬＳ Ａ试剂盒 ， 其最大 的缺陷是特异性较差 ， 因
为重组蛋白在纯化过程 中， 常带有表达宿主（ 大肠
杆菌或昆虫细胞 ） 的蛋 白质 ， 能造成非特异性结合
反应 ｊ 。而以人工 合成肽作 为包 被抗原的试 剂
盒则没有这方面的缺陷。
１２ ３ Ｎ ．． Ｓ非结构蛋 白抗体参考血清 ６ 份稀释度 猪 口蹄疫病 毒 Ｖ １ 构蛋 白和 Ｎ Ｐ结 ｓ非结 构蛋 分别为１５ 、：２ 、：７ 、：０ 、：０ ：０ １ １５ １ １５ １３０ １７０和１９０ ：５ 的 白抗体 Ｅ Ｉ Ｌ Ａ诊断试剂盒联合使用 ， Ｓ 可以鉴别诊断 阳性参考血清 ， 份混合阴性参 考血清和 １ １ 份阴性 参考 血 清 ， 于 猪 Ｆ Ｄ Ｓ非 结 构 蛋 白抗 体 用 ＭＶＮ Ｅ ＩＡ诊断试剂盒敏感性检测 ， ＬＳ 由上海优耐特生物 医药有限公司提供 ， 按试剂盒标明的使用方法对血