小鼠5羟色胺(5-HT)说明书
人5羟色胺 5-HT 说明书
人5羟色胺(5-HT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T80ng/L -2400 ng/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中5羟色胺(5-HT)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人5羟色胺(5-HT)水平。
用纯化的人5羟色胺(5-HT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入5羟色胺(5-HT),再与HRP标记的5羟色胺(5-HT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的5羟色胺(5-HT)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人5羟色胺(5-HT)浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(4800 ng/L)0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2400 ng/L 5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液1200ng/L 4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液600ng/L 3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液300ng/L 2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液150ng/L 1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
三、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)
三、5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)1. 5-HT在外周与中枢的分布5-羟色胺(5-hydroxytryptamin ,5-HT) 是1947 年由Rapport 首次在人血浆中发现并命名。
若干年后,Brodie发现利血平可耗竭内源性5-HT,由此提出5-HT可能与NA相同,为中枢的递质。
然而,直到Falck荧光测定技术的应用,才明确了儿茶酚胺的递质功能,同时也揭示了5-HT神经元的胞体定位及向间脑和端脑的纤维投射。
体内的5-HT有90%存在于消化道,绝大部分分布在粘膜的肠嗜铬细胞中,少量存在于肌间丛。
从肠粘膜进入血液中的5-HT主要被血小板摄取,还有一部分5-HT存在于各组织器官中的肥大细胞中。
中枢内5-HT的分布:(如上图所示)B1和B2细胞群主要位于延髓尾侧部中缝苍白核及中缝隐核;B3群细胞大多位于中缝大核;B4群位于第Ⅳ脑室底部,前庭神经核和展神经核的背部;B5群主要位于脑桥中缝核;B6群位于被盖背核的背内侧区,第Ⅳ脑室底头侧部,紧邻中线的细胞群;B7群数量最大,位于中缝背核及内侧纵束的背内侧和腹内侧部分;B8群位于中央上核;B9群主要位于脑内侧丘系及周围的细胞体。
上述可见,B1---B3群位于延髓,B4---B6群主要分布在脑桥,而B7---B9群位于中脑。
此外,5-HT能神经元也存在于儿茶酚胺能神经元的周围,例如,黑质致密部、下丘脑背内侧核、最后区、蓝斑核尾侧部均可见5-HT阳性神经元。
5-HT能神经纤维走向与肾上腺素能纤维走向大致相似,也分上行核下行两部分。
中枢尾侧端5-HT能神经元发出纤维主要投射至脊髓,而近头侧的5-HT能神经元投到前脑和间脑。
脑和脊髓几乎每一区域都接受5-HT能神经纤维的投射。
⒉ 5-HT的合成在5-HT的合成过程中,色氨酸的供应和TPH是限速因素。
TPH只存在与5-HT能神经元,而且含量较少,活性较低,因此是合成5-HT的限速酶。
5-HT
5-HT综合征
5-羟色胺综合征是一种有可能危及生命的不 良药物反应,由治疗性药物使用、故意服药 自杀或意外药物相互作用所致。 这些药物包括: 选择性5-HT再摄取抑制剂(SSRIs) 三环类抗抑郁药(TCAs) 单胺氧化酶抑制剂 其他5-HT能药物过度刺激5-HT1A受体
5-HT综合征
5-羟色胺综合征经常都被描述为一种包 括精神状态改变、自主神经机能亢进和 神经肌肉异常的临床三联征。 但并非所有该病患者都一致存在全部三 种表现。5-羟色胺过多的临床表现可以 从轻微病例的震颤和腹泻到威胁生命病 例的谵妄、神经肌肉强直和高热。临床 医师的难点是,轻微的症状可能很容易 被忽略,而无意中加大致病药物的剂量 或增加具有促5-羟色胺能作用的药物, 则可激起严重的临床恶化过程。
5-HT2A受体
5-HT2A 受体的基因定位于第 13 号染色体q14-21 区,在嗅球、海 马、额叶皮质和梨状内嗅皮质中 密集分布。一些研究表明精神分 裂症患者脑额叶皮质 5-HT2A 受 体的数目减少 。5-HT2A 受体编 码区 t102C 多态性与精神分裂症有 关。
5-HT2C 受体
5-HT2C 受体基因定位于 X 染色体q24 区,分布于脉络膜丛、前嗅核、梨状 区内嗅皮质。纹状体及杏仁核中 5- HT2C 受体可能含有非典型抗精神病药 的作用位点。在 5-HT2C 受体基因编 码区第 68 位的鸟嘌呤被胞嘧啶替换, 使受体蛋白 23 位半胱氨酸被丝氨酸替 代,形成 cys23ser 多态性。
5-羟色氨
陈志伟
2016/3/9
5-羟色胺(5-HT)一种吲哚衍生物 ,英文名:5-hydroxytryptamine, 简称5-HT。它广泛存在于哺乳动物 组织中,特别在大脑皮层质及神经 突触内含量很高,其中主要分布在 松果体和下丘脑中,它是一种抑制 性神经递质。
小鼠5羟色胺(5-HT)说明书
小鼠5羟色胺(5-HT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T8pg/ml-240pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中5羟色胺(5-HT)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠5羟色胺(5-HT)水平。
用纯化的小鼠5羟色胺(5-HT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入5羟色胺(5-HT),再与HRP标记的5羟色胺(5-HT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的5羟色胺(5-HT)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠5羟色胺(5-HT)浓度。
试剂盒组成1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
5-羟基色氨酸-安全技术说明书MSDS
第一部分化学品及企业标识化学品中文名:5-羟基色氨酸化学品英文名:5-hydroxytryptophanCAS No.:56-69-9分子式:C11H12N2O3产品推荐及限制用途:工业及科研用途。
第二部分危险性概述紧急情况概述吞咽有害。
吸入有害。
GHS危险性类别急性经口毒性类别 4急性吸入毒性类别 4标签要素:象形图:警示词:警告危险性说明:H302 吞咽有害H332 吸入有害●预防措施:—— P264 作业后彻底清洗。
—— P270 使用本产品时不要进食、饮水或吸烟。
—— P261 避免吸入粉尘/烟/气体/烟雾/蒸气/喷雾。
—— P271 只能在室外或通风良好处使用。
●事故响应:—— P301+P312 如误吞咽:如感觉不适,呼叫解毒中心/ 医生—— P330 漱口。
—— P304+P340 如误吸入:将人转移到空气新鲜处,保持呼吸舒适体位。
—— P312 如感觉不适,呼叫解毒中心/医生●安全储存:—— P403+P233 存放在通风良好的地方。
保持容器密闭。
—— P405 存放处须加锁。
●废弃处置:—— P501 按当地法规处置内装物/容器。
物理和化学危险:无资料。
健康危害:吞咽有害。
吸入有害。
环境危害:无资料。
第三部分成分/组成信息√物质混合物第四部分急救措施急救:吸入:如果吸入,请将患者移到新鲜空气处。
皮肤接触:脱去污染的衣着,用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。
如有不适感,就医。
眼晴接触:分开眼睑,用流动清水或生理盐水冲洗。
如有不适感,就医。
食入:饮水,禁止催吐。
如有不适感,就医。
对保护施救者的忠告:将患者转移到安全的场所。
咨询医生。
出示此化学品安全技术说明书给到现场的医生看。
对医生的特别提示:无资料。
第五部分消防措施灭火剂:用水雾、干粉、泡沫或二氧化碳灭火剂灭火。
避免使用直流水灭火,直流水可能导致可燃性液体的飞溅,使火势扩散。
特别危险性:无资料。
灭火注意事项及防护措施:消防人员须佩戴携气式呼吸器,穿全身消防服,在上风向灭火。
5-HT的介绍
由于松果体内5-HT 由于松果体内 浓度很高, 浓度很高,是脑内的 50倍,同时 倍 同时HIOMT的 的 浓度也很高, 浓度也很高,5-HT在 在 松果体内有其独特的 代谢过程。 代谢过程。
HT氮位乙酰转移酶 5-HT5-HT氮位乙酰转移酶 (5-HTNAT) N-乙酰基 甲基 甲基5-HT ) -乙酰基-5-甲基
5-羟色氨酸脱羧酶 (5-HTPDC) 羟色氨酸脱羧酶
(5-hydroxytryptophan decarboxylase) - 需磷酸吡哆醛作为辅助因子 - 含量多,活性高,特异性差 含量多,活性高, - 普遍存在于神经系统
HT储存和释放 5-HT储存和释放
5-HT在胞浆合成 HT在胞浆合成 下呈
5-羟色胺
5-Hydroxytryptamine, 5-HT 5-
概述
5-羟色胺: 羟色胺:
(5-hydroxytryptamine,5-HT或serotonin) (5-hydroxytryptamine,5-HT或serotonin) 5-HT 衍生于称之为吲哚的芳香族化合物
5-羟色胺在化学上属吲哚胺类化合物 构成5 吲哚 构成5-HT 乙胺
5-HTNAT含量黑夜时比白昼要多 ~70倍, 含量黑夜时比白昼要多15~ 倍 含量黑夜时比白昼要多 HIOMT在黑夜时比白昼高出 倍 在黑夜时比白昼高出10倍 在黑夜时比白昼高出 素生成加速; 素生成加速;白昼则减少 夏季时节, 夏季时节,昼长夜短 减弱了对垂体的抑制 能力增强, 能力增强,冬季正相反 家禽养殖中利用灯光照射,延长白昼, 家禽养殖中利用灯光照射,延长白昼,也达到褪 黑素生成减少的目的,动物性腺成熟快, 黑素生成减少的目的,动物性腺成熟快,产蛋多 利于养殖业 褪黑素生成减少, 褪黑素生成减少, 动物性腺成熟快,繁殖 动物性腺成熟快, 夜间褪黑
5羟色胺(5-HT)抗凝、扩血管作用机制
动脉硬化与5-羟色胺
动脉粥样硬化
受损血管局部 5-HT浓度上升
5- 羟 色 胺
促5-HT 释放和 血小板活化
Байду номын сангаас
危险 因素
ADP 凝血酶
吸烟 糖尿病 高脂血症
血管内皮受损
安步乐克
5-羟色胺引起动脉硬化病情发展的机理
内皮细胞障碍 血小板凝集 5-HT释放 5-HT2A受体(血管平滑肌) NO诱导抑制 炎症性细胞因子(IL-6),凝固关联因子, 增殖因子(PDGF)等的产生及加强作用 NO的产生下降 血管收缩 血栓的形成 血管平滑肌增殖 血管内膜肥厚 恶性循环 5-HT2A受体(血管平滑肌) 危险因素
5-HT除了能直接收缩血管外,与其他的血管收缩物质(如
组织胺,血管紧张素-Ⅱ,前列腺素F2a和去甲肾上腺素)
还有协同放大的作用。
安步乐克
Raven Press 1982:163-174
血小板上的5-HT受体
在血小板膜上的5-HT受体是5-HT2A受体。
5-HT能激活血小板并强化其它促血小板聚集物质(如胶 原、ADP等)对血小板聚集的作用。
5羟色胺?
安步乐克
5-羟色胺(5-HT)及发现
•5-HT是一种单胺类神经递质,由色胺酸经羟化和脱羧 形成。 •中枢神经系统5-HT参与睡眠、镇痛、呕吐、体温调节 等反应。 •心血管系统5-HT参与血管收缩、血小板聚集和平滑肌 细胞增殖等活动。
安步乐克
血管平滑肌上的5-HT2A受体
在体内大多数动脉平滑肌细胞都分布有5-HT2A受体,调节 血管收缩作用。
广泛认为,在动脉硬化等血管内皮细胞受损的血管内或在侧枝循环内,由5HT1受体介导的血管 扩张作用减弱,相反,由5HT2A受体介导的血管收缩作用增强。
5-羟色胺酸
5-羟色胺酸5-羟基色氨酸1.产品描述5-羟基色氨酸(5-hydroxytryptophan,5-HTP),是从非洲豆科灌木植物加纳谷物的干燥种子中提取的一种天然氨基酸,通过自然地提高血清素的水平,增加人体血液中复合胺的生成,具有抗忧郁症,减缓压力,改善睡眠和减肥等功效。
临床应用:5-羟基色氨酸是纯天然草药处方,目前被用于抗抑郁症;减肥;改善睡眠;缓和经期前综合症;减缓偏头痛、紧张性头痛和慢性头痛、BH4缺乏型苯酮尿症等方面和注意力缺失儿童的辅助治疗,主要有胶囊,片剂和颗粒等剂型。
5-羟基色氨酸已在欧美各大保健品公司得到广泛应用。
2.原料来源豆科灌木植物加纳谷物Griffonia simplicifolia的干燥种子,种子长圆形,长约1.5厘米,宽约1厘米,种皮呈黑色,有皱纹,胚乳黄绿色,略带豆香味,干粒种子重约0.8克。
野生于非洲加纳、象牙海岸和多哥等西非国家,采收时间每年12月到次年2月。
另国家食品药品监督管理局、海关总署联合发布公告对《进口药品目录》进行了调整,自2006年11月1日起,进口加纳籽海关不再验核《进口药品通关单》。
3.加纳籽提取物项目工厂技术方案5-HTP的提取与精制工艺路线:加纳籽→粉碎→水提取→离心过滤→物理脱色→真空浓缩→结晶,重结晶→真空干燥。
选用进口加纳籽为原料,采用物理方法与现代中药提取技术相结合的方法,从加纳籽中提取高质量的有效活性成份,并建立了5-HTP 含量的测定方法。
在提取5-HTP整个过程中采用传统的中药水提工艺,避免了使用有机溶剂而产生对产品和环境的污染,且通过先进的物理脱色方法,经乙醇重结晶去杂而得到高纯度目标产品(形状:灰白色晶状粉末;气味:无味;5-HTP含量>98%;重金属<10ppm;收率约为90%)。
4.产品市场现代医学研究表明,5-HTP是人体内Serotonin荷尔蒙的前驱物质以及色氨酸和复合胺的反应媒介,能发挥镇静作用,促进情绪和神经系统健康,还能抑制食欲,减少脂肪。
5 羟色胺
5-羟色胺最早是从血清中发现的,又名血清素,广泛存在于哺乳动物组织中,特别在大脑皮层质及神经突触 内含量很高,它也是一种抑制性神经递质。在外周组织,5-羟色胺是一种强血管收缩剂和平滑肌收缩刺激剂。在 体内,5-羟色胺可以经单胺氧化酶催化成5-羟色醛以及5-羟吲哚乙酸而随尿液排出体外。
性质
5-羟色胺能与酸作用生成结晶盐。5-羟色胺在脑组织中的浓度较高,它是调节神经活动的一种重要物质。有 些机体组织当受到某些药物作用时,可以释放出5-羟色胺,例如一个利血平分子可以使受作用的组织释放出几百 个5-羟色胺分子,因而产生利血平的一系列生理作用。
作为自体活性物质,约90%合成和分布于肠嗜铬细胞,通常与ATP等物质一起储存于细胞颗粒内。在刺激因素 作用下,5-HT从颗粒内释放、弥散到血液,并被血小板摄取和储存,储存量约占全身的8%。5-HT作为神经递质, 主要分布于松果体和下丘脑,可能参与痛觉、睡眠和体温等生理功能的调节。中枢神经系统5-HT含量及功能异常 可能与精神病和偏头痛等多种疾病的发病有关。
1、摩尔折射率:53.49 2、摩尔体积(mol/cm3):136.7 3、等张比容(90.2K):391.3 4、表面张力(dyne/cm):66.9 5、极化率(10-24cm3):21.20
编号系统
CAS号:50-67-9 EINECS号:200-058-9
形成过程
羟色胺(5-HT)酶联免疫吸附测定试剂盒 说明书
人5羟色胺(5-HT)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中催乳素含量。
实验原理用纯化的催乳素抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的催乳素抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的催乳素呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1、酶标板:一块(96孔)2、标准品(冻干品):2瓶,请临用前15分钟内配制。
每瓶以样品稀释液稀释至1ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为6,000pg/ml,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成6,000pg/ml,3,000pg/ml,1,500pg/ml,750pg/ml,375pg/ml,187.5pg/ml,93.75pg/ml,样品稀释液直接作为空白孔0pg/ml。
如配制3,000pg/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml)6,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、样品稀释液:1×20ml。
4、检测稀释液A:1×10ml。
5、检测稀释液B:1×10ml。
6、检测溶液A:1×120/瓶(1:100)。
临用前以检测稀释液A1:100稀释(如:10检测溶液A/990检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
7、检测溶液B:1×120/瓶(1:100)。
临用前以检测稀释液B1:100稀释。
稀释方法同检测溶液A。
8、底物溶液:1×10ml/瓶。
5-羟色胺(5-HT)又称血清素
注意事项: 1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室
温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中
不要让微孔干燥掉。 3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响 OD 值。 4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。 5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏
1. 加入 10ul 标准品(Standards)、10ul5-HT Biotin 和 40ul Anti mouse 5-HT POD。轻轻混匀 30 秒,
封住板孔,室温温育 45 分钟。 3. 洗板:甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板(每孔内加入 350ul 洗涤液),并去除水滴
并且生物素化的抗小鼠 5-HT 单抗上的生物素与酶标板上 Streptavidin 结合; 加入辣根过氧
化物酶标记的抗小鼠 5-HT,它将与小鼠 5-HT 结合而形成免疫复合物。加入 TMB 显色。小
鼠 5-HT 的浓度与 OD(450nm)成正比。
试剂盒组成:
酶标板(Coated Wells)
96wells Anti- mouse 5-HT Biotin
(在厚叠吸水纸上拍干);反复洗涤 5 次。 4. 每孔加入 100ul 显色液, 轻轻混匀 10 秒,室温温育 20 分钟。 5. 每孔加入 100ul 终止液(Stop Solution)。轻轻混匀 30 秒;30 分钟内在 450nm 处读 OD
5-HT的介绍
在囊泡内高K+浓度条件下,5-HT与SBP紧 密
结合成复合物 利于储存
2021/6/16
18
胞裂外排时,5-HT/SBP复合物与 高Na+的细胞外液接触 5-HT与SBP 复合物迅速解离 发挥递质作用
2021/6/16
2021/6/16
28
由于松果体内5-HT 浓度很高,是脑内的50 倍,同时HIOMT的浓 度也很高,5-HT在松 果体内有其独特的代 谢过程。
2021/6/16
29
5-HT5-HT氮位乙酰转移酶 (5-HTNAT) N-乙酰基-5-甲基5-HT
HIOMT
(褪黑素, melatonin)
褪黑素能抑制垂体促性腺激素的分泌
2021/6/16
21
2021/6/16
22
• 酶降解
5-HT的降解过程是先在单胺氧化酶(MAO)作用下氧化脱氨 而成为5-羟吲哚乙醛,然后经醛脱氢酶快速氧化成5-羟吲哚乙酸 (5-hydroxyindole acetic acid, 5-HIAA)。单胺氧化酶可以 存在于胞内线粒体表面,也可以存在于突触后膜。释放至突触间 隙的5-HT,有一部分被存在于突触后的MAO破坏。在不同种属 ,降解5-HT的MAO类型不同,在大鼠,可能是A型MAO,而B 型无作用,而在猴,降解5-HT的MAO主要是B型,而不是A型 。
阻止色氨酸入脑
5-HT合成? 14
胰岛素
可使血浆中性L-氨基酸含量减少 9%~54% 利于色氨酸入脑
色氨酸 通过5-HT 能神经元膜上高亲和力 神经元
转运系统,主动摄入
脑内 5-HT 含量 脑内 5-HT 含量
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小鼠5羟色胺(5-HT)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T
8pg/ml-240pg/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中5羟色胺(5-HT)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠5羟色胺(5-HT)水平。
用纯化的小鼠5羟色胺(5-HT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入5羟色胺(5-HT),再与HRP标记的5羟色胺(5-HT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的5羟色胺(5-HT)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠5羟色胺(5-HT)浓度。
试剂盒组成
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,
然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月。