实验动物肝组织石蜡切片制作中易发问题探讨

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实验动物肝组织石蜡切片制作中易发问题探讨
柏美玲 宋昱 林群凡 邓爽 胡少青 伍义行
【摘要】 实验动物肝组织石蜡切片在肝病研究、抗肝炎药物药效评价、新药毒理学评价和组织病 理教学中具有十分重要的作用,但石蜡切片制作流程影响因素复杂,且肝组织具有质地较脆导致蜡块 切片容易碎裂等特点,难以制作高质量切片。故本文结合肝组织的特点,重点对常见实验动物肝组织 石蜡切片制作中常见的问题进行了分析总结,并提出了相应的改进措施。
透明剂可替换出组织内的乙醇,使石蜡顺利地渗入组织 中,增强组织的折光系数从而出现透明状态。常用的透明剂 有二甲苯、苯、氯 仿、正 丁 醇、香 柏 油 等。动 物 肝 组 织 常 选 用 二甲苯作透明剂,因二甲苯对神经的麻醉作用及粘膜的刺激 性,使用时应尽量在通风橱内进行,也可用硬脂酸石蜡混合 液代替二甲苯透明[8]。由于二甲苯对组织的收缩性强,作用 迅速,故组织在二甲苯中时间不宜过长,否则组织容易变脆 变硬。透明剂的浸渍时间要根据组织材料块大小及性质而 定。如果透明时间过短,则透明不彻底,石蜡难于浸入组织; 透明时间过长,则 组 织 硬 化 变 脆,不 易 切 出 完 整 切 片。动 物 肝组织若选用二甲苯为透明剂,可分为三阶段( 二甲苯Ⅰ20 min,二甲苯Ⅱ 10 min,二甲苯Ⅲ 10 min) 进行。二甲苯应定
作高质量的切片需要长期的摸索和改进。由于肝组织固有 的特点,肝组织蜡块在切片时较脆易碎,染色后镜下结构常 呈现断裂现象,影 响 了 肝 组 织 原 始 结 构 的 观 察。因 此,不 断 地分析总结肝组织石蜡切片制作的特点,探索肝组织制片的 新技术和新方法,提高肝组织切片制作水平,对教学科研和 临床诊断工作具有重要意义。
参考文献
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包埋是标本经脱水后浸入包埋剂,并使之渗透进入标本 本体的过程。石蜡是常用的包埋剂,包埋用石蜡应与浸蜡用 石蜡熔点一致,并且与样品硬度相近。透蜡温度要恒定,模 具、样品和石蜡之间温差要一致,以保障石蜡充分包围并支 撑样品。为了防止组织未包埋完就已凝固,故包埋温度要略 高,但 温 度 过 高 会 导 致 组 织 收 缩 变 硬 变 脆,不 利 于 切 片[9]。 此外,新购腊 块 可 经 多 次 反 复 加 热,使 其 包 含 的 气 体 蒸 发。 在包埋之前可用高温将石蜡融化,再降低至需要的温度,温 度一般比石蜡熔点高 5℃ ~ 6℃ 即可。动物肝组织包埋温度 为 62℃ 时效果较好。包埋操作要迅速,力求在最短时间内完 成 石 蜡 透 入 过 程,以 免 引 起 组 织 变 硬、变 脆、收 缩 等[10]。 浸 蜡时间不宜过长,否则易造成组织块脆硬,切片如豆腐渣样。 包埋后石蜡的迅速冷却,可防止包埋块中产生结晶以致切片 碎裂等现象发生[11]。 6 染色
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作者单位: 310018 中国计量学院生命科学学院药学系 / 浙江省生 物计量及检验检疫技术重点实验室
止组织死后自溶而产生变化[3]。固定液应以新配为好,选用 福尔马林固定肝组织时间应不少于 4 h,不大于 48 h。此外, 也可采用微波处理法固定组织[4]。 3 脱水
脱水的目的是采用脱水剂将组织内的水份置换出来,以 利于有机溶剂 的 渗 入。常 用 脱 水 剂 是 酒 精,而 正 丁 醇、叔 丁 醇、丙酮及二氧六环等也可做脱水剂。动物肝组织常选用乙 醇作为脱水剂,其优点是比较温和,对组织伤害比较小。肝 组织也可选用正丁醇脱水,其优点是可省去二甲苯透明直接 浸蜡而缩短制作时间,且不会引起组织块过度收缩,但易出 现脱水不足的现象[5]。另 外 将 正 丁 醇 与 乙 醇 按 比 例 混 合 后 作脱水剂效果也较好。脱水剂使用一段时间后,试剂挥发或 者混杂其它杂质会引 起 浓 度 降 低,均 影 响 组 织 脱 水 效 果[6]。 因此,脱水剂要定期更换,更换时最好用比重计测量各级酒 精的浓度[7]。此外,还应注意: ①脱水应逐步进行,顺序颠倒 会极大影响脱水效果; ②在无水乙醇中不得放置时间过长, 否则会引起组织块过度硬化,导致切片时组织破碎; ③更换 脱水剂时,浸泡时间需减去吸水过程中所耽误的时间,以免 脱水不足; ④脱水必须在有盖的玻璃瓶中进行,防止吸收空 气中的水分和酒精挥发,保证脱水彻底。 4 透明
种变化是否有紧密联系还需要进一步的研究。
参考文献
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多,而且差异基本统计学意义( P < 0. 05) 。 3 讨论
通过本文研究发现,辛伐他汀可以使得随意皮瓣增加成 活面积,毛细血管也增加了生长的密度并且可以诱发生成新 的血管,使得缺血皮瓣有了较高的成活率,并能保证其生存 的质量; 在腹腔中将辛伐他汀注入有效地促进了随意皮瓣的 成活[1,2]。而且皮瓣较高比较低,而且安全性高,可以称得上 是物美价廉,能够较为合适的在临床治疗中得到应用。而且 从形态学的方面来看,也较为形象的反应了生成血管时候其 量能的变化[3]。而对于辛伐他汀在皮瓣生长中,其机制和各
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【关键词】 实验动物; 肝组织; 石蜡切片; 存在问题
石蜡切片是组织病理学制片技术中最为常用的方法,广 泛应用于临床诊断和科研教学中。石蜡切片制作涉及取材、 固定、脱水、透明、浸 蜡、包 埋、切 片、染 色、封 片 等 系 列 步 骤, 影响因素众多,且不同组织类型具有不同的特点,每个操作 环节的失误都将影 响 切 片 的 最 终 质 量[1]。 肝 组 织 具 有 细 胞 成分较多、细胞间隙较大、纤维结缔组织较少、质地较脆等特 点,肝组织蜡块在切片时易碎裂,染色后常呈脱水和透明过 度的表现( 如出现大量裂纹等) ,从而影响肝组织原始形态结 构的观察和结果的判断。而实验动物肝组织石蜡切片在肝 病研究、抗肝炎药物药效评价、新药毒理学评价和组织病理 教学中起到了十分重要的作用。因此,本文结合自己的研究 经验,重点对常见实验动物( 大、小鼠) 肝组织石蜡切片制作 的特点和常 见 问 题 进 行 了 分 析 总 结,并 提 出 了 相 应 的 解 决 方法。 1 取材
标本经石蜡包埋后切成 4 ~ 5 μm 厚的薄片,再经脱蜡后 进行染色。苏木素-伊红染色法是石蜡切片常用的染色法之 一,伊红作为对比染色剂不应染得太红,以免细胞核与细胞 质难以区分,故染色时间不能太长; 但也不能染得太淡,否则 细胞质着色不完全,细胞质和细胞核红蓝对比不明显,故染 色时间也不能太短[12]。此外,染色还需注意: ①加温染色时 温度不应 太 高,过 高 则 会 使 物 理 染 色 性 增 强,肝 组 织 选 择 50℃ 、染色 5 min 效果较好; ②染色试剂应及时更换,避免有 效成分减少; ③分化时操作应在镜下控制核的染色,防止分 化液不起作用; ④染色过程中所用乙醇、二甲苯等试剂常有 染色剂混入影响染色效果,应定期更换避免染色剂的污染。 染色结束进行封片,封片时中性树胶滴加要适量,太少或过 稀时均易出现空泡。封片后即可保存或在显微镜下观察。 综上所述,组织切片质量的优劣,直接影响结果的判断,而制
【关键词】 健脑Ⅰ号; 脑缺血再灌注; 大鼠
脑卒中分为缺血性和失血性脑卒中,缺血性脑卒中即广 义的脑梗死,是指突然发生的脑组织局部供血动脉血流灌注 减少或血流完全中断,停止供血、供氧、供糖等,使该局部脑 组织崩解破坏。本文通过用线栓法手术造成大鼠脑缺血再 灌注模型来考察健脑Ⅰ号对大鼠脑缺血再灌注的影响。 1 材料 1. 1 试剂与药物 健脑Ⅰ号,5 g 生药 / ml,本所制剂室提供, 批号 20080910; 川芎嗪片,50 mg / 片,100 片 / 瓶,北京市燕京 药业有限 公 司,批 号 20071206; 2,3,5-氯 化 三 苯 基 四 氮 唑
取材组织面积一般为 1. 5 cm × 1. 5 cm,厚度不超过 0. 3 cm,组织太大或过厚时均可降低脱水效果。取大小鼠肝组织 时,应先进行放血处理,再解剖取肝组织,以防止肝组织内积 血,影响切片效 果。因 肝 组 织 属 于 脆 弱 器 官,应 小 心 使 用 镊 子的弯月面移动或夹取器官,防止镊子尖端损伤肝组织造成 人为破坏。 2 固定
固定的目的 在 于 保 存 组 织 内 细 胞 原 有 的 结 构 和 形 态。 石蜡切片常用固定液有甲醛、乙醇、醋酸、AF 液( 乙醇 + 甲醛 液) 、AAF 液( 醋酸 + 乙醇 + 甲醛液) 等,需根据实验材料的 性质及制片目的不同,选用适宜的固定液[2]。肝组织切片制 作常选择福尔马林作为固定液,因其对肝组织具有较强的穿 透力,可有效抑制溶酶体酶对肝组织的自溶和细菌的繁殖, 保护正常的形态结构。切取标本后应尽快将标本置于盛有 足够固定液的容器内固定,以确保细胞形态上的原始性,防
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期更换,以免 挥 发 或 吸 湿 造 成 浓 度 改 变,影 响 透 明 的 程 度。 此外,如果透明时组织周围出现白色雾状,说明材料中的水 份未被脱净,应退回重新脱水后再透明。 5 包埋
健脑Ⅰ号对大鼠脑缺血再灌注模型的实验研究
廖磊 刘魁的 观察健脑Ⅰ号对大鼠脑缺血再灌注的影响。方法 用线栓法手术造成大鼠脑缺血 再灌注模型。结果 健脑Ⅰ号 1. 0、0. 5 g / kg 剂量能缓解脑缺血再灌注引起的行为改变以及缩小脑梗死 面积。结论 健脑Ⅰ号 1. 0、0. 5 g / kg 对线栓法手术造成大鼠脑缺血再灌注有保护作用。
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