第二章+热灭活微生态制剂

对30例慢性腹泻进行治疗，29例有不同程度的改 善，达96 .6%。特别是对I类慢性肝源性腹泻效果 尤佳。（赵洪涛，1994）

三 ： 国 外 产 品 临 床 试 验

对婴幼儿轮状病毒性肠炎的治疗效果显著。 治疗组有效率达91.7%，补充电解质和水份 组为63.3%，差异显著(P<0.01)。(孙先军， 1996）。
2、热灭活乳酸菌制剂的优点
二 ： 热 灭 活 的 乳 酸 菌
1、收集纯细胞，可制成高浓度制剂，如1001000亿/克甚至更高；
2、灭活的细胞不再担心环境条件的影响；
3、不再担心二度感染；
4、同微胶囊比，生产成本大大降低。 5、同抗生素一起使用有协同作用； 6、不用选育耐高温、耐抗生素菌种。 7、避免了噬菌体的爆发。
3、作用特点
二 ： 热 灭 活 的 乳 酸 菌
1、细胞浓度高，见效快； 2、耐高温、耐抗生素、耐胃酸和胆盐，效果稳定。 3、粘附到肠细胞皮面，竞争性排斥有害菌；
4、选择性抑杀有害菌，而对乳酸菌没有作用。可作 为治疗药物；
5、细胞壁多糖的免疫刺激作用；
6、吸附生物毒素，如黄曲霉毒素；
7、预防与治疗的作用。
品，故又称活菌制剂或微生态制剂。

由活体微生物及其代谢产物制成的有益微生物活性 制剂称作益生素。（袁铁铮和姚斌，2004，中国生 物工程杂志）
乳杆菌(Lactobacillus plantarum/acidophilus)
一 ： 传 统 益 生 素 概 念
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
益生素作用机理-3
一 ： 传 统 益 生 素 概 念

保健：
作用机制理论基础是微生态平衡论、失调论。从微生 态学角度讲，人或畜禽肠胃道疾病是由于体内菌群 平衡失调所引起，使用益生素后体内有益菌群逐渐 增加，并消耗氧气而造成厌氧环境，从而抑制致病 性需氧菌生长。有益菌产生的有机酸降低pH值，产 生溶菌酶、过氧化氢等物质抑制有害菌及毒素的产 生，恢复或维持正常菌群原有的平衡状态，达到保 健的目的。

概念：
(heat-killed)后，仍保持细胞的完整性（或 碎片）作为益生素使用，结果发现同样具有 活菌的效果。后来我们将乳酸菌发酵代谢产
有人尝试将乳酸菌培养好之后，将细胞热灭活
物也加入其中，预防和治疗人和动物腹泻效
果更加理想。
1、发展历史
二 ： 热 灭 活 的 乳 酸 菌

法国Laboratoire du Lactéol公司是这方面的先驱。
0
平均日增重/饲料报酬
三 ： 国 外 产 品 临 床 试 验
平均日增重
饲料效率
600
4
3.9 3.7
weight gain (kg)/ton of feed
+32%
+36%
3.2
百克/天
3
22 %
16 %
400
493
508
373
2
对照 L1组 L2组
200
对照 1L1组
L2组
四、我们的研究
乳杆菌的分离纯化与鉴定 1、从动物粪便中分离出多株乳酸菌； 2、耐酸、耐胆盐试验；可耐受0.6%胆盐，pH值低 至2.0。 3、生长快、产酸量大。 4、发酵产物对沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球 菌有抑制作用。（可能是类抗生素）
4、克服缺点的技术与方法
一 ： 传 统 益 生 素 概 念
1、选育优良菌种或利用芽孢。耐高温、耐酸、耐胆盐 或耐氧等。甚至有的公司在宣传其具有耐药性的乳 酸菌。 2、将活菌制成微胶囊。保护作用，隔离高温、氧气和 胃酸。很有效，但成本高。 3、饲料高温加工后再喷涂。避免高温失活。
二、热灭活的乳酸菌制剂
5、灭活菌益生素菌种要求
二 ： 热 灭 活 的 乳 酸 菌

国家有关部门批准使用的菌种；

对人或动物肠道有很强的粘附能力；
代谢产物对致病菌有抑杀作用； 能产生生长因子，促进产酸菌的生长。 对环境条件有耐受性。



三、国外产品临床试验
——1、人类临床试验

1992-1994年对肠易激综合征的六项症状指标 （腹痛、腹胀、排便次数、粪便稀软、便中带粘 液及排便不完全）以灭活的LB菌处理，达到50% 的有效治愈率。
二 ： 热 灭 活 的 乳 酸 菌

产生的乳酸、类细菌素、类抗生素等物质对 胃肠道致病菌有抑杀作用。而对产酸菌没有 抑杀作用。 German等（1980）发现，有热灭活的LB存 在时，68%的外源菌（沙门氏菌、志贺氏菌、 金黄色葡萄球菌）和64%肠道致病菌的生长 被延迟了10小时。

二 ： 热 灭 活 的 乳 酸 菌
一 ： 传 统 益 生 素 概 念

防治疾病： 竞争性排斥作用（competitive exclusion, CE）;
免疫刺激作用；以IgA为主。 减少胺或氨的产生； 减少致癌致变物质的产生； 代谢产物对致病菌的直接杀灭作用。
4、存在的缺点和问题
一 ： 传 统 益 生 素 概 念
1、受环境条件(温度、水分、酸碱度等)的影响，其活菌 制剂在生产、运输中易失活，从而降低使用效果； 2、饲料加工的高温过程使大量的活菌致死，导致有效成 份损失； 3、饲料中添加的或在治疗过程使用的抗生素和化学合成 抗菌剂，对益生菌同样具有杀灭或抑制作用； 4、进入消化道后不能有效抵抗盐酸、胆盐，来不及到达 肠道或无法长时间定植肠道发挥其功效；二度感染的 可能。 5、对动物肠道疾病的治疗效果仍不尽人意。
假丝酵母 Candida albicans
益生素的作用机理-2
一 ： 传 统 益 生 素 概 念

前因：
益生菌进入畜禽肠道后，在复杂的微生态环境中与近 400种正常菌会合，显现出栖生、偏生、共生、竞 争或吞噬等复杂关系，从而对宿主产生营养、免疫、 刺激生长及生物拮抗等生物作用，以保持胃肠道微 生态环境的平衡，提高动物生长性能，防病治病， 最终取得良好的保健效果或经济效益。 益生素的饲喂作用机理概括起来有三大方面，即保健、 促生长和防治疾病。
医学博士皮埃尔、布卡德(Pierre Boucard)先生于一 九零七年创建。并率先研究和开发出热灭活的乳酸 菌细胞制成的微生态制剂。用于预防及治疗人或畜 禽的腹泻，包括抗生素相关性、细菌性和病毒性腹 泻。目前作为人或动物用药在全球取得了空前成功。 1998年我们首次在国内做了介绍与报道，并于当年 展开研究。
一 ： 传 统 益 生 素 概 念
粪链球菌(Streptococcus faecalis)
一 ： 传 统 益 生 素 概 念
附着在小肠表面
酵母菌(Yeast)
一 ： 传 统 益 生 素 概 念
啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
酵母菌(yeast)
一 ： 传 统 益 生 素 概 念

在基础日粮中添加热灭活乳杆菌制剂，研究其对竹丝 肉鸡免疫性能的影响。结果表明热灭活乳杆菌制剂能 明显地促进竹丝肉鸡法氏囊的生长发育和机体的细胞 免疫水平。 在28日龄时，0.15‰添加组法氏囊指数比对照组高 36.1%，差异显著(P<0.05)；T淋巴细胞的转化率 0.10‰与0.15‰添加组比对照组分别高47.3%、 29.0%，差异均显著(P<0.05)；E-玫瑰花环形成率 0.10‰与0.15‰添加组分别比对照组高39.86%、 24.28%，差异显著(P<0.05)。50日龄时，E-玫瑰花环 形成率0.10‰添加组比对照组高20.75%，差异显著 (P<0.05)。
4、作用机理（免疫刺激作用）
二 ： 热 灭 活 的 乳 酸 菌

给受试动物以灭活的LB菌刺激，使IgA局部水 平显著提高。Lysates由多种细菌与真菌组成。
经热灭活的LB菌对机体免疫活性的刺激作用
120
IgA水平（单位/毫升）
100 80 60 40 20 0 Before Control LB Strain Lysates
治疗使用抗生素后引起的小儿腹泻。治疗 组治愈率达73%；对照组为20%。差异显 著（P<0.01)

2、动物临床试验
三 ： 国 外 产 品 临 床 试 验

试验设计（法国）260只3周龄小猪分成4组， 37天试验
饲料 L1 抗生素 加入 LB添加量 25万个/克饲料
L2 L4
C
加入 不加
加入
50万个/克 250万个/克
二 ： 热 灭 活 的 乳 酸 菌
5、作用机理(刺激产酸菌生长)
二 ： 热 灭 活 的 乳 酸 菌

发酵过程中产生的大量B族维生素（B2）能作 为刺激产酸菌，如乳酸菌生长的生长因子 （growth factor）。
热灭活LB菌对肠道乳芽孢杆菌生长的刺激作用 6
培养24小时的生长指数
5 4 3 2 1 0 Control 0.3billion LB 1.2billion LB

对肠道致病菌的抑制作用
煮沸10min
发酵液 及细胞 煮沸30min
大肠液处理大肠杆菌
四 ： 我 们 的 研 究
大肠杆菌O-78先培养24小时，之后与乳杆菌发酵液同 培养24小时。大肠杆菌全部被灭活。
热灭活乳杆菌对竹丝肉鸡免疫性能 的影响

四 ： 我 们 的 研 究
一 ： 传 统 益 生 素 概 念

促进生长：
其作用机制理论基础是微生物营养论。即产生多种消 化酶，提高饲料转化率和促进肠内营养物质的消化、 吸收；降低大肠菌群数，减少营养物质内耗。产生 的代谢产物可以抑制肠内胺和氨的产生；产生蛋白 酶、淀粉酶、脂肪酶等消化酶，有利于物质的分解； 合成B族维生素，氨基酸、未明促生长因子等营养物 质。
第二章 热灭活乳酸菌微生态制剂