高考生物 第二讲 微生物的培养与应用复习课件 新人教版

2．无菌技术(消毒、灭菌)及操作 (1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵，无菌技术 就是围绕着如何避免杂菌污染进行的。主要包括以下方面：① 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将 用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；③为 避免周围环境微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进 行；④操作时尽量避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接 触。
(2)直接计数法：即利用特定细菌计数板或血细胞计数板， 在显微镜下计数一定容积的样品中微生物的数量。其方法是将 稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数 4～5个格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再 按公式求出每毫升样品所含的细菌数。
3．对照实验的目的及种类 (1)概念：对照实验是指除被测条件(自变量)外，其他条件 (无关变量)都相同的实验。 (2)目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提 高实验结果的可信度，从而证明实验结果的正确性、科学性。
③阳性对照：是给予对照组以已经证明是一种有效因素的 处理因素。例如，研究者正在研究一种新的抗衰老药物，实验 组施用这种抗衰老药物，设置的对照组就用已经被证明有抗衰 老作用的维生素E去处理。 ④自身对照：对照和实验均在同一对象上进行，叫自身对 照。这种向一组研究对象施加一个或数个实验因子，然后测量 前后变化的实验方法又叫单组实验法。 ⑤相互对照：不设对照组，而是几个实验组相互对照，这 种实验又称轮组实验法。
注意：①两种方法具体实验流程请同学们认真复习课本18 页和19页的内容。
[课题2]
土壤中分解尿素细菌的分离与计数
1．筛选菌株的原理与方法 (1)原理：微生物的选择培养，是指利用培养基的组成使适 宜生长的特定微生物得到较快繁殖，或者人为提供目的菌株生 长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生 物生长。 (2)方法：根据目的菌株对生存环境的要求，到相应环境去 寻找。如果要筛选出土壤中分解尿素的菌株，需借助课本所提 供的选择培养基，因为尿素是培养基中唯一的氮源，因此可用 该培养基选择出能够利用尿素的微生物。
2．实验设计与操作步骤 (1)实验流程设计：是实验总体思路的设计，与分解尿素的 细菌的分离和计数实验流程相同，都要经过土壤取样、梯度稀 释、涂布分离。分解尿素的细菌分离计数时只用选择培养基， 而分解纤维素的细菌的分离计数，除经选择培养以增加纤维素 分解菌的浓度和梯度稀释外，还需涂布到鉴别培养基上鉴别， 最后挑选菌落，其实验流程设计如下：
(3)常用的对照方式有：空白对照、阳性对照、标准对照、 自身对照和相互对照。 ①空白对照：空白对照是不给对照组任何处理因素。例 如，用小白鼠进行抗癌药物的实验，给甲组小白鼠注射溶于棉 籽油的抗癌药物，乙组小白鼠只注射等量的棉籽油，在相同条 件下饲养，并观察。这个实验中，甲组为实验组，乙组为对照 组或控制组，这种对照方式叫空白对照。 ②标准对照：不设对照组，而是用标准值或正常值做对照 的方式。例如，泡菜制作中亚硝酸盐的测定或溶液pH的测定。
(3)培养基在提供水、碳源、氮源、无机盐等几种主要营养 物质的基础上，还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质及氧 气的需要，如培养乳酸菌时需在培养基中加维生素，培养霉菌 时需将pH调至弱酸性，培养细菌时将pH调至中性或微碱性， 培养谷氨酸棒状杆菌时要保持充足的溶氧，培养厌氧生物时需 创造无氧环境等。
[课题1]
微生物的实验室培养
1．培养基的配制原则与种类 (1)培养基的配制原则 主要包括三个方面：一要目的明确，要根据微生物的种 类、培养目的等有目的地配制；二是营养协调，各种营养物质 的浓度和比例要搭配合理；三是pH要适宜，不同微生物生活的 适宜pH不同，如细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为 5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。
பைடு நூலகம்
[课题3]
分解纤维素的微生物的分离
1．实验原理 (1)刚果红染色法筛选的原理：请参照课本的内容。(P28) (2)选择培养基与鉴别培养基的应用。(参考课本P29旁栏) 筛选纤维素分解菌的过程中，必须用选择培养基和鉴别培 养基，在获得纤维素分解菌后才能进行染色筛选。 两种培养基的不同表现在成分和种类上，选择培养基是液 体培养基，而鉴别培养基是固体培养基；选择培养基中有纤维 素，来选择产生纤维素酶的微生物，而不能产生纤维素酶的微 生物被淘汰，以此选择作用，鉴别培养基中无纤维素，但加入 了CMCNa，是可溶性纤维素的衍生物，可被Cx酶分解为纤维 二糖，然后在葡萄糖苷酶的作用下分解为葡萄糖，以此鉴定纤 维素分解菌的存在。
2．统计菌落数目的原理及方法 (1)间接计数法(或活菌计数法)：就是最常用的稀释涂布平 板法。 原理：样品稀释度足够高时，培养基表面长出的一个菌 落，它来源于稀释液中的一个活细菌，即一个菌落就代表一个 细菌活细胞。因此通过此法，可大致推测出样品中活细菌的大 约数目。 方法：先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌 液接种到培养皿中的培养基上，经培养后，由单细胞生长繁殖 形成菌落，统计菌落数目，即可算出样品中活菌含量。
(2)消毒与灭菌比较 消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面 或内部一部分对人体有害的微生物(不包括孢子和芽孢)。灭菌 则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽 孢和孢子。其本质区别在于手段的温和与强烈，结果的“部 分”与“所有”。 消毒常用的方法有煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒。 灭毒常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌和紫外 线灭菌等。
3．牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程 各步骤请参考课本16页至17页。请注意顺序。 4．纯化大肠杆菌 纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在 培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即 这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖而来，这就需要接种 时尽量接种单个的大肠杆菌。通常用的方法有二：一是平板划 线法，二是稀释涂布平板法，常用的培养基是牛肉膏蛋白胨固 体培养基。