细菌形态检查.
微生物形态学检验-PPT
➢ 培养特性：在沙氏培养基或营养琼脂上培养5-7日 可见菌落，菌落表面有皱折、呈颗粒状、黄色或深 橙色；在血琼脂平板上菌落较小、凸起、呈白色
肠杆菌科 Enterobacteriaceae
➢ 基本特征：在血琼脂平板上生长，在麦康凯、伊红 亚甲蓝、中国蓝琼脂平板上形成发酵和不发酵乳糖 的菌落；在三糖铁或克氏双糖底层、上层产酸、产 气、氧化酶试验阴性
伤寒沙门氏菌 S.typhi
➢ 形态与染色：革兰阴性杆菌，菌体细长，有周鞭毛
➢ 培养特性：在麦康凯上形成无色、透明菌落，SS平 板上呈无色、透明菌落、但大部分菌落中央呈黑色
肺炎克雷伯氏菌K.pneumoniae
➢ 形态与染色：革兰阴性杆菌，单个、成双或短链排 列，荚膜染色可见外周有透明、环状荚膜
细菌分离培养及鉴定
➢ 细菌分离培养：使细菌在平板上分散生长，便 于观察菌落特征，也易于挑取单个菌落进行生 化鉴定或血清学试验
➢ 细菌鉴定：形态与培养特性：形态、染色、培 养特性和菌落特征是鉴定细菌的初步依据
细菌形态与染色特点
➢ 染色性：革兰阳性、阴性，抗酸染色阳性、阴性等 ➢ 形状、大小和排列：球菌、杆菌、螺形菌，菌体大小、
荧光假单胞菌 P.fluorescens
➢ 形态与染色：阴性杆菌、无芽孢、无荚膜、端鞭毛 ➢ 培养特性：在麦康凯上呈无色半透明菌落，在营养
琼脂上形成荧光色的菌落
恶臭假单胞菌 P.putida
➢ 形态与染色：阴性杆菌、无芽孢、无荚膜、极端鞭毛 ➢ 培养特性：在麦康凯上呈较大无色、湿润菌落，在营
养琼脂上形成黄绿色菌落，紫外线下可见荧光
炭疽芽孢杆菌 B.anthracis
➢ 形态与染色：为致病细菌中最大的革兰阳性杆菌， 两端截平，体外培养后形成长链，排列呈竹节形。 在体内常单个存在或短链，有荚膜，在人工培养基 上可见芽孢，卵圆形并位于菌体中央，菌体不膨大
微生物试验-细菌的人工培养及形态学检查
实验一 细菌的人工培养
一、细菌在自然界的分布
1.空气中细菌的检查：每班两个血平板，标记 方法：在室内选择一处放一个平皿，揭开皿盖，
暴露放置10min，即盖上皿盖，放入37℃温箱 培养24小时，观察结果。
2.人体表面细菌的检查---手 指（每组1个平皿）
方法：取一普通平皿培养 基，一部分标记“前”， 另一部分标记“后”，然 后将手指在标记“前”的 部分沾一下，洗手后在标 记“后”的部分沾一下。 放入37℃温箱培养24h后 观察细菌的生长情况。
呼吸道咽部常驻菌群种类较多，正常人咽部需氧菌 中，甲型链球菌检出率最高，其次是奈瑟球菌属和表 皮葡萄球菌。
二、 理化因素对细菌的影响
1.物理因素对细菌的影响---紫外线
原理：紫外线主要作用于 DNA，使一条DNA链上相邻 的两个胸腺嘧啶以共价键结合成二聚体，从而干扰 DNA 的复制与转录导致细菌变异或死亡。
3.人体内部细菌的检查--咽喉部
方法：用“咳碟法”进行检查，取一个血琼脂平 皿培养基，打开平皿盖，置于口腔前约 10cm， 对着平皿咳嗽几次，标记时间，姓名，然后放 入37℃温箱培养24h后观察菌落特征。
二、外界因素对细菌的影响：
1.物理因素对细菌的影响 ：
紫外线：全班两份普通平板：一组大肠杆菌， 一组葡萄球菌，比较紫外线对G+，G-的抑制作 用。
满足a充足的营无菌
（三）分类：1、按物理性状
分类：
+0.3~0.5%琼脂
+1.5~2.5%琼脂
半固体培养基 液体培养基
固体培养基
观察细菌动力 大量繁殖细菌 细菌的分离和纯化
短期保存菌种
固体平板培养基
液体培养基
固体斜面培养基 半固体培养基
现代微生物学检验基本技术
现代微生物学检验基本技术随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
第一节微生物形态学检查细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。
一、显微镜检查由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1．普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油（浸）镜放大1 000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2．暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3．相差显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4．荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸收滤光片二种。
用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。
细菌的形态学检查
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革兰染色法
结晶紫、碳酸钠初染，30秒 碘液媒染30秒
丙酮酒精数滴，脱色约5秒
碱性复红液2~3滴，5秒钟
待干，镜检。
注：每一步均需 细流水冲洗。
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• 油镜观察结果1000倍
放大倍数：10×100
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• 白色念珠菌革兰染色1000倍
放大倍数：10×100
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革兰氏染色意义：
注明 菌名：大肠杆菌 染色法： 放大倍数：10×100
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细菌形态示意图绘图要求
绘细菌的
形态 排列 染色性 特殊结构
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1.涂片
① 接种环置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌。
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（二）细菌涂片标本的制备
1.涂片
② 取1~2环生理盐水（NS)置于载玻片上，接种 环用火焰烧灼灭菌。
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（二）细菌涂片标本的制备
1.涂片
③ 小指和手掌小鱼肌侧拔掉棉塞，并烧灼试管口灭菌。 用已灭菌冷却的接种环伸入试管中取适量菌，注意勿使沾 有菌液的接种环触及试管壁及试管口。
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（二）细菌涂片标本的制备
3.固定
目的：使细菌蛋白变性，菌 体牢固黏附于玻片上，还可杀 死细菌。
玻片有菌膜一面向上，在火焰的外焰钟摆 样速度通过三次，时间约3秒钟。
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革兰染色法操作步骤：
• 初染 媒染 脱色 复染
初染（结晶紫.碳酸钠） 媒染（碘液）
脱色（95%乙醇） 复染（复红）
• 玻璃折射率： n=1.52
• 香柏油折射率： n=1.515
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二、细菌标本染色检查法
技能点13病料中细菌的形态学检查.
国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库《动物微生物与免疫技术》技能点13 病料中细菌的形态学检查
实训目标
1．病料中细菌的形态学检查实验目标：
通过观察病料中是否有菌，从而初步判断病料是否取自细菌感染病例。
若病料中有菌，根据细菌形态初步鉴定其种类
2．病料中细菌的分离培养实验目标：
用鉴别培养基分离培养后，看是否得到菌落。
若有菌落生长，则根据菌落特征进一步鉴定细菌种类。
仪器及材料疑似大肠杆菌病料、镊子、剪刀、玻片、酒精灯、染色缸及染色架、美兰染液、吸水纸、擦镜纸、香柏油、乙醇乙醚、洗瓶、烙刀、接种环、麦康凯平板、记号笔、温箱、酒精灯等
方法与步骤
1．触片以无菌剪刀、镊子剪取被检组织一小块，以其新鲜切面在玻片上做数个压印或涂抹成适当大小的一薄层。
2．干燥涂片应在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰高处微烤加热干燥。
3．固定火焰固定是最常用的方法，将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（一般4～6次），以手背触及玻片微烫手为宜。
4．美蓝染色在已固定好的抹片上，滴加适量美蓝染色液覆盖涂面，染色2～3min，水洗，晾干或吸水纸轻压吸干和镜检，结果菌体呈蓝色。
微生物实验-细菌的人工培养及形态学检查
三、各种培养基的接种
一）无菌操作
在医疗实践中或微生物试验中防止周围环境中的微生物污 染操作对象，同时防止操作对象的微生物污染周围环境。
1.四种接种方式：接种针用于穿刺接种细菌（半固体培养基），接种环用于固体、 液体培养基的细菌接种。（相对无菌）
2.任何一个实验，操作前均应在器皿上做标记：时间，菌种，
种。 • 生长现象：浑浊、
沉淀、菌膜样生长。
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细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：37℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
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实验一 细菌的人工培养
一、细菌在自然界的分布
1.空气中细菌的检查：每班两个血平板，标记 方法：在室内选择一处放一个平皿，揭开皿盖
Mycosel平板
几种常用培养基
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(5).鉴别培养基：根据各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及代谢产物不同 ，在培养基中加入底物和指示剂来鉴别细菌。
1）蓝色半固体培养基（溴麝香草酚蓝） 2）无色半固体培养基（醋酸铅） 3 ）基础液体培养基
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细菌动力鉴别
细菌生化反应鉴别
鉴别培养基
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(3).选择培养基：培养基中加入某种/些化学物质，能抑制某 类细菌生长而使另一类细菌生长，从而将后者选择出来。 常用于肠道致病菌的分离与选择培养。
(4).厌氧培养基：用于厌氧菌的分离、培养和 鉴定。
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血平板
巧克力平板
MacConkey平板
Байду номын сангаас
X.L.D平板
Sabourand平板
2、按用途分：
(1).基础培养基：含有大多数细菌生长所需要的基本营养成 分。最常用的为肉汤培养基
细菌形态与结构的检查法[技巧]
![细菌形态与结构的检查法[技巧]](https://img.taocdn.com/s3/m/fa965d68a36925c52cc58bd63186bceb19e8ed6e.png)
细菌形态与结构的检查法细菌形态与结构的检查法[适用对象] 中医学（骨伤方向）、针灸推拿学专业[实验学时] 3学时一、实验目的1、学会显微镜油镜的使用和保护方法。
2、认识细菌的基本形态和特殊结构(荚膜、鞭毛、芽胞)。
3、掌握革兰氏染色方法。
4、了解细菌的动力。
二、实验原理1、显微镜油镜的使用原理: 观察细菌必须用放大1 000倍左右的油镜。
油镜的透镜极小，工作焦距最短,光线通过玻璃和空气，由于介质密度不同发生折射，射人镜筒的光线极少，视野暗、物象不清晰。
如在玻片与镜头（透镜）之间加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物像。
2、革兰染色法的原理：主要是革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁有差异，另外革兰阳性菌的等电点比革兰阴性菌低，与碱性染料的亲和力强。
三、仪器设备1、显微镜2、细菌标本片：(1)葡萄球菌(革兰染色)(2)大肠杆菌(革兰染色(3)霍乱弧菌(革兰染色)(4)伤寒杆菌(鞭毛染色)(5)肺炎球菌(荚膜染色(6)破伤风杆菌(芽胞染色)萄球菌、绿脓杆菌的琼脂斜面18～24小时培养物。
4、染色液有结晶紫、碘液、95％酒精、稀释石炭酸复红。
四、相关知识点细菌是一类体积微小的单细胞原核细胞型微生物，活的菌体小而透明，当把细菌悬浮于水滴内，用普通光学显微镜观察时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易是别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及某些细胞结构。
因此，为了研究细菌的形态特征和鉴别不同类群的细菌，细菌的染色及形态构的观察是位生物学实验中十分重要的基本技术。
五、实验步骤显微镜油镜的使用显微镜使用方法①将显微镜平稳的安放在试验台适宜处②用低倍镜对光，调节反光镜，天然光源用平面反光镜，人工光源或光线较弱使用凹面反光镜。
检查染色标本要用强光，应将聚光器升到最高，光圈完全开大；若检查未染色的活体标本则用弱光，聚光器适当下降，光圈适当缩小。
实验二++细菌的形态学检查(1)
实验二细菌的形态学检查【目的和要求】1．熟悉细菌染色的常用染料和一般程序。
2．掌握革兰染色的方法、原理、结果观察及意义。
3．熟悉不染色标本检查法（压滴法和悬滴法）的方法与结果观察。
4．熟悉细菌的特殊染色法。
【试剂与器材】1．菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌。
2．试剂：革兰染色液、细胞壁染色液、芽胞染色液、鞭毛染色液、生理盐水等。
3．其他：载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、香柏油、蜡笔、擦镜纸、脱油剂等。
【实验内容】一、细菌染色的一般程序细菌染色法分单染法和复染法。
单染法是用一种染料去染，所有细菌都染成一种颜色；复染法是用多种染料对细菌进行染色，不同细菌可染成不同的颜色。
大部分细菌染色的基本程序相同，即：涂片→干燥→固定→染色，根据实验目的选择不同的染色方法，在实际工作中，应用最广泛的是革兰染色法。
二、革兰染色1．染色原理（1）等电点学说：革兰阳性菌的等电点（pI2～3）比革兰阴性菌（pI4～5）低，在同一pH条件下革兰阳性菌带负电荷比革兰阴性菌要多，与带正电荷的碱性染料（结晶紫）结合性牢固，不易脱色。
（2）化学学说：革兰阳性菌含有大量的核糖核酸镁盐，与进入胞浆内的结晶紫和碘牢固结合成大分子复合物，不易被95%酒精脱色；而革兰阴性菌含此种物质少，故易被乙醇脱色。
（3）通透性学说：革兰阳性菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层较厚，含脂质少，脱色时，乙醇不易进入，而且95％乙醇可使细胞壁脱水，细胞壁间隙缩小，通透性降低，阻碍结晶紫和碘复合物渗出。
而革兰阴性菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层较薄，含脂质多，易被乙醇溶解，致使细胞壁通透性增高，细胞内的结晶紫与碘复合物易被溶出而脱色。
2．方法（1）涂片：取清洁无油迹的载玻片1张，用蜡笔划线将其分成左右两格。
用接种环先挑取生理盐水1~2环于载玻片每格中央，再分别挑取大肠杆菌和葡萄球菌少许菌落与生理盐水研匀，涂成直径约1.5cm的菌膜。
（2）干燥：让涂片自然干燥，也可在酒精灯火焰较远处微微加热烘干，但切勿靠近火焰。
微生物学基本实验方法和诊断
五、鲎试验(Limulus test, LT)
鲎试验是利用鲎试剂能与微量内毒素反应形成固态 凝胶来检测内毒素的试验。 鲎试剂是鲎血液中的变形细胞溶解物（Limulus amebocytes lysate，LAT），为白色粉末，易溶于 水和生理盐水中。鲎试剂中含C因子、B因子、凝固 酶原和凝固蛋白原等几种参与级联酶反应的成分。 在一定条件下，微量的内毒素即能激活鲎试剂溶液 中的C因子，活化C因子激活B因子，活化B因子使凝 固酶原转变为凝固酶，凝固酶使凝固蛋白原转变成 凝固蛋白，最终导致凝胶的形成。
培养基的种类—按用途分类
（3）鉴别培养基：在培养基中加入特定的底物 和指示剂，即为鉴别培养基。鉴别培养基用来 作细菌的生化试验，以便鉴定细菌，因此这类 培养基是临床细菌检验常的培养基。如糖发酵 培养基、克氏双糖铁培养基（KIA）、动力－吲 哚－尿素（MIU）培养基等。
培养基的种类—按用途分类
（4）选择培养基：在培养基中加入某种化学物质 或抗生素，以抑制某些细菌种类生长，有助于需要 的细菌种类生长。此类培养基主要用于从含菌种类 （主要是正常菌群）较多的标本（如粪便）中分离 培养专性病原菌。如胆盐培养基、SS琼脂、麦康凯 琼脂、中国兰琼脂、伊红－美兰琼脂用于从粪便中 分离培养志贺菌和沙门菌；庆大霉素琼脂、碱性琼 脂用于从粪便中分离培养霍乱弧菌。 （5）特殊培养基：包括培养细菌L型的培养基，培 养厌氧菌的厌氧培养基。这类培养基用于培养营养 要求和生长条件较特殊的细菌。
细菌L型检查
（一）培养基：培养细菌L型的培养基需 具有丰富的营养和高渗生长条件。培养基 常以心脑浸液及牛肉浸液为基础，加入 1~2％蛋白胨、5％NaCl（使致高渗）， pH7.6~7.8、1％琼脂，高压蒸汽灭菌后制 备成固体培养基，必要时高压蒸汽灭菌后 待至60℃左右加入20％无菌马、羊或人血 浆，制备成固体培养基。
临床微生物学检验技术
二、染色标本
· 细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、 排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类，因 此染色标本的检查在细菌的初步鉴定中应用最广，起 着非常重要的作用。
· （一）常用染料：酸性染料、碱性染料、复合染料。 · （二）常用的染色方法：革兰染色、抗酸染色、
荧光染色。
革兰染色
三、生化反应
（一）碳水化合物的代谢试验 1.糖（醇、苷）类发酵试验
原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶， 因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分 解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌 对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力， 可用以鉴定细菌种类。
方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中， 35℃孵育48~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示 剂，立即观察结果。
结果判定：呈现红色者为阳性，桔黄色为阴性，桔 红色为弱阳性。
应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠 埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠 杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌 属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。
3
革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结
晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色；而革
兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形
成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。
2. 染色方法
1 标本涂片、干燥和固定。 2 染色：在已固定细菌涂片上滴加结晶紫染液数滴， 室温作用1min，用细流水轻轻冲洗，甩去积水。再滴 加碘液数滴，室温作用1min，冲洗。滴加95%酒精数滴， 轻轻摇动玻片几秒钟，使均匀脱色，然后斜持玻片， 使脱掉的染料随酒精流去，再滴加酒精，直到流下的 酒精无色为止（约需30s），立即用细流水将酒精冲掉。 再滴加稀释石炭酸复红液复染约30s后用细流水冲洗。 3 标本染色后，晾干或用吸水纸吸干，滴香柏油后 用油镜观察。
细菌形态学检查
每天质控与标本同步进行
染色方法 质控菌株
结果
革兰染色 抗酸染色
ATCC25923（金黄色葡萄球菌） 紫色
ATCC25922（大肠埃希菌）
红色
ATCC14468（耻垢分枝杆菌） ATCC25922（大肠埃希菌）
红色 蓝色
一年一次人员比对，以当次比对职称最高人员结果为参考 标准
阅片
如何阅片
✓ 标本合格与否的判定 ✓ 感染的确认（炎症细胞） ✓ 炎症性质的鉴别（单个核、分叶核或嗜酸细胞） ✓ 感染性质鉴别（细菌、真菌、螺旋体、寄生虫等） ✓ 微生态失衡与否及程度（菌群失调） ✓ 可疑致病菌的确认（根据微生物与炎性细胞的关系）
莫拉菌铜绿假单胞菌、不动杆菌等）需结合镜下涂片及病人临床信息 判断是否为致病菌。 直接涂片镜下观察
白细胞内吞噬细菌与感染相关度高 粘液丝缠绕或包裹的细菌可能为目的菌 未发现吞噬现象可结合标本类型、质量，细菌是否有荚膜，菌群 改变或异位大量定植等分析
谢谢
脓液：同痰涂片 大便：取粘液便或血便少量均匀涂布玻片，不可过厚 无菌体液：标本足量，>1ml，离心或甩片集菌后涂片(3000r/min 15min）
标本量少，直接涂片 病灶组织或干酪块：先用组织研磨器磨碎后再涂片，大小厚度同痰涂片，
注意丝状真菌
质量控制
✓ 涂片的厚薄以镜下见到单层细胞为宜
✓ 染色结果 细胞核、浆清晰，胞内吞噬物清 楚可见
合格的片子肉眼观察痰膜呈亮蓝色，无红色斑块
镜检
抗酸菌呈红色，背景及其他菌呈蓝色
抗酸染色注意事项
染色时避免玻片上的染液干燥 直接涂抹的痰膜厚薄适宜，以透过痰膜看报纸上的5号字迹较模糊为
适宜的厚度 香柏油能溶解复红染料，使萋-尼氏染色褪色，并且容易干燥凝结，
细菌的形态检查主要有哪几种方法 _
细菌的形态检查主要有哪几种方法 ?说起细菌，大家都不陌生，随着科技的高速发展，细菌逐渐走进了人们的生活，无论是男女老少，对于细菌都或多或少知道一些常识。
例如面团需要发酵，则需要酵母；酸奶需要乳酸菌才能变得可口；酒在醋酸菌的作用下才能成为调味品——醋；而腹泻是因为大肠杆菌作祟等等。
更有文章指出人类身体表面细菌覆盖率高达90%！可见，细菌与人们的生活关系十分密切，那么细菌究竟是何方神圣呢？细菌最早是被科学家列文虎克在一位从未刷过牙的老人牙垢上所发现的，只不过那时人们认为细菌是自然界已有的生物。
直到后来，在巴斯德实验之后，人们才知道，细菌是由空气中已有细菌产生的，而不是自行产生，人们才慢慢终于揭开了这位神秘人物的面纱。
1 细菌的构造及其繁殖细菌的结构包括基本结构和特殊结构。
细菌都具有的普遍结构即基本结构，如细胞壁、细胞膜、细胞质以及核质。
而某些细菌特有的结构称为特殊结构，包括细菌的荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
每一种结构都各司其职，有其独特的作用，例如鞭毛是某些细菌的“双腿”。
可以让细菌来去自如；荚膜可以保护细菌不被白细胞吞噬，抵御外部的不利环境等。
按照不同的分类依据，细菌可以被分成许多类型。
按细菌的生活方式来分类，细菌可以分成自养菌和异养菌，其中异养菌包括腐生菌和寄生菌；根据形状可以分为球菌、杆菌和螺旋菌（包括弧菌、螺菌、螺杆菌）；按细菌生存温度分类，可分为喜冷、常温和喜高温三类。
另外，细菌的繁殖速度极快，这是由它们独特的繁殖方式所决定的，即无性二分裂(裂殖)：细菌生长到一定时期，在细胞中间逐渐形成横隔，由一个母细胞分裂为两个大小相等的子细胞。
一般细菌约20到30分钟便分裂一次，即为一代。
不难想象，若是环境适宜，且时间充分的条件下，细菌的繁殖会有多么迅速！用不了多久，世界都是细菌的“殖民地”了。
2 细菌的形态检查方法什么是细菌形态检查？细菌形态检查就是对细菌的菌体形态和菌群的形态进行观察，进而对所检查的细菌的类型进行归属和划分菌属的检查方法。
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实验一细菌形态检查
【目的】
①掌握示教显微镜下所看到的细菌形态和特殊结构。
②掌握细菌涂片制作，革兰染色操作。
③掌握油镜的使用和保护方法，以便娴熟应用油镜观察细菌形态或结构。
一、显微镜油镜的使用和保护法
(一)显微镜油镜的识别
(1)油镜头上都有标记：
①标有100×或90×；(2)有白、黑或红色圆圈；(3)有“油”或HI、oil字。
⑵油镜头比其它接物镜长，孔径最小。
(二)显微镜油镜的使用
①使用显微镜油镜时，勿使镜台倾斜，以免镜油流出。
②在玻片标本上加香柏油(镜油)一滴，置载物台上，使有标本处对准聚光器中央(如肉眼看不清标本所在位置，应先用低倍镜观察)，用移动器或用固定夹固定。
③眼睛从物镜侧面注视，右手转动粗调节器，使载物台上升，油镜头慢慢浸入油中，并几乎与玻片接触，但切勿压及玻片，以防损坏油镜头。
④将聚光器升高，光圈开大，然后眼观镜筒内，两手转动反光镜采光，使视野内光线明亮。
若光源为灯光或阴天采自然光时，则使用凹面镜。
⑤眼观镜筒内，右手持粗调节器，缓慢下降载物台，当看到模糊物象时，再用细调节器调整看清物象。
操作时严防油镜头与玻片相撞。
(三)油镜的保护
①显微镜是贵重精密仪器，使用时要精心保护，不得随意拆散和碰撞。
②取送显微镜时，右手持镜臂，左手托镜座，平端于胸前，然后轻放于桌面上或柜箱内。
③油镜用毕，载物台下降，取出标本片，用擦镜纸将油镜上的油擦净，(用擦镜纸蘸二甲苯擦试，再用擦镜纸擦去二甲苯)擦镜时应顺其直径方向擦，不要转圈擦。
④不用时，将镜头转离聚光器，油镜头朝前呈“八”字形，降下聚光器，对号放入镜箱。
标本片按规定擦去镜油，放入标本盒，如该标本片不再使用，则投入消毒缸内。
⑤防止与强酸、强碱、乙醚、氯仿、酒精等化学药品接触。
(四)油镜加油的原理
由于细菌个体小，必须使用90×或100×的物镜，以保证足够的放大倍数，同时为保证足够的亮度，必须滴加香柏油(因香柏油与玻璃的折光率相近似)，由聚光器出来的光线通过玻璃和镜油，不发生折射，直接进入镜筒，光路见下图所示。
油镜加油的原理
二、细菌不染色标本检查法
【材料】
①变形杆菌、葡萄球菌(8～12h)肉汤培养物。
②凹玻片、载玻片、盖玻片、凡士林、接种环、酒精灯。
【方法】
⑴压滴法
取一张洁净载玻片，用接种环取葡萄球菌和变形杆菌幼龄菌液各2～3环，分别置于玻片二端，加盖玻片，先用低倍镜对光，再用高倍镜观察细菌动力形态。
由于不是染色标本，光线宜暗，即降低聚光器，缩小光圈。
⑵悬滴法
在凹玻片的凹窝周围涂少许凡士林，用接种环取变形杆菌和葡萄球菌菌液，分别置于一盖玻片中央，将凹窝对准盖玻片反扣在盖玻片上，将二者压紧后迅速反转，使菌液悬于盖玻片。
静置片刻后，先用低倍镜，再换高倍镜观察。
观察时光线不宜过强，适当降低聚光器，缩小光圈，以利观察。
悬滴标本的制作
⑶暗视野法
①取下显微镜上原有的明视野聚光器，换装暗视野聚光器；②取2～3环菌液置于载玻片上，加盖玻片(同压滴法)；③在暗视野聚光器上加镜油；④置标本片于载物台上，上升聚光器，使其上面的镜油与载玻片接触；⑤转动反光镜，使光线集中于聚光器上；⑥用低倍镜观察，当视野中有一圆形光环出现时，转动聚光器上的调节螺旋，将光环移至视野中央；⑦换高倍镜观察，用细调节器调节清晰；⑧若用油镜观察，则在盖玻片上加镜油。
【结果】
有鞭毛细菌运动的特点是：有明显的定向运动，从一处泳至另一处（变形杆菌）。
无鞭毛细菌运动的特点是：呈原位的颤动，为环境中液体分子冲击造成（葡
萄球菌）。
三、细菌的基本形态观察（绘图）
注意细菌的大小(放大倍)、形状、排列、染色性。
葡萄球菌链球菌脑膜炎奈瑟菌大肠埃希菌
白喉棒状杆菌炭疽芽胞梭菌霍乱弧菌幽门螺杆菌
四、细菌的特殊结构观察（绘图）
荚膜芽胞鞭毛
肺炎链球菌破伤风芽胞梭菌伤寒沙门菌（注意荚膜和菌体）（注意芽胞的形状和位置）（注意鞭毛的位置、数量）
五、细菌涂片的制作
【目的】
细菌材料须涂布固定于玻片上，经染色后才能观察其形态、结构及染色反应。
【原理】
细菌的化学成分以胶体原浆蛋白为主，涂布在玻片上经火焰温热后可固定于玻片，再经染色冲洗即可被染上颜色，且不易被水冲洗掉。
【材料】
葡萄球菌、大肠埃希菌培养物、玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、火柴、消毒缸。
【方法】
(1)涂片：①于洁净载玻片两端各加一接种环生 葡萄球菌 大肠埃希菌
理盐水；
②以无菌操作法，分别将二种细菌涂布于盐水中。
(如取肉汤培养物涂片，则载玻片上不必加生理盐水)。
⑵干燥：让所涂标本自然干燥或于火焰高处烘干，但切 勿将涂膜烤焦。
⑶固定：将标本通过火焰三次(涂有标本的一面朝上)。
【注意事项】
①玻片要洁净无油，否则菌液不易涂开。
不宜选用厚玻片，以免观察时视野难以调清。
②取菌量宜少，涂片要匀而薄。
水洗时要以细流水徐缓冲洗，避免直接冲洗涂菌处，切勿将未经火焰固定的标本立即染色水洗。
六、革兰染色
【材料】
①葡萄球菌、大肠埃希菌培养物。
②革兰染色液：结晶紫、卢戈碘液、95％乙醇、稀释复红。
③接种环、酒精灯、载玻片、强光灯、显微镜、香柏油(镜油)及拭镜纸等。
【方法】
将细菌标本固定后，先用结晶紫（或龙胆紫）初染，再加碘液媒液，此时各种细菌均被染成深紫色。
然后用95％乙醇脱色，其中有的细菌脱去紫色，有的仍然保持紫色。
最后用沙黄（或复红）液复染。
通过革兰染色将细菌分成两大类：不被乙醇脱色仍保留紫色者为革兰阳性菌（G ＋）；被乙醇脱色后再被复染成红色者为革兰阴性菌（G －）。
【注意事项】
①要掌握好染色时间，尤其是酒精脱色时间，不宜过长或过短，不可使染液干涸。
②选用适龄培养物，以18～24小时为宜，否则影响染色效果。
③细菌染色标本观察后应放入指定的玻片缸中，以便消毒处理。
【镜检结果】
正确使用油镜观察结果并绘图。
葡萄球菌大肠埃希菌
呈色呈色
为革兰性菌为革兰
性菌
【思考题】
1.如何识别油镜头?使用油镜时应注意哪些事项?
2.对革兰染色的成败你有何体会?
3.革兰染色有何临床意义?。