反式白藜芦醇热稳定性与光致异构化的高效液相色谱和液相色谱-电喷雾离子化质谱研究

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（ 北京大学化学与分子工程学院，北京 $""’*$ ） 摘要 ： 应用高效液相色谱 （ :;<= ） 及液相色谱 + 电喷雾 离 子 化 质 谱 （ <=+->?+@> ） 方法对反式白藜芦醇的长期热稳 流 动 相 为 甲 醇 +", "& E 三 定性及光致顺反异构化反应进行了研究。色谱 条 件 为： 采 用 :A4$’B/)+CD> 色 谱 柱 分 离， 氟乙酸水溶液 （ 体积比为 %"- #" ） （ 用 于 :;<= 分 析 ） 及 甲 醇 +& %%") F < 甲 酸 铵 水 溶 液 （ 含 ", $ E 甲 酸 ） （体积比为 %"- #" ） （ 用于 <=+->?+@> 分析） ， 检测波长 ("" 8% ， 进 样 量 !" ! < （ :;<= ） 或 $" ! < （ <=+->?+@> ） ； 质谱检测中设 定为负离子模式。在 # ) #" G 条件下的热稳定性研究表明， 反式白藜芦醇溶液在冷 藏 条 件 下 避 光 保 存 %"" 0 后， 研究了反 式 浓度没有明显下降。通过测定 !&# 及 (%& 8% 紫外光照条件下不同光照时间各个化合物浓度的变化， 白藜芦醇的异构化和其余几个副反应的机理。根据实验结 果 推 测， 白 藜 芦 醇 的 顺 反 异 构 化 是 通 过 一 个 !+ 几 何 状 态完成的， 而另外几个副反应则是通过自由基历程完成的。 关键词 ： 高效液相色谱法； 液相色谱 + 质谱联用； 反式白藜芦醇； 热稳定性； 光致异构化 中图分类号 ： C%&’. . . 文献标识码 ： H9 9 9 文章编号 ： $""" +’*$( （ !""# ） "% +"&’( +&# # $］
氧化和防癌抗 癌 的 生 理 活 性
， 反式白藜芦醇成
了研究的热点。尤其是对于葡萄酒等各类含有反式 白藜芦醇的功能性 食 品， 其分析方法的开发与研究 的相关 文 献 非 常 多
［ % # "& ］
。但是对于白藜芦醇顺反
之间转化的定量研究 的 相 关文 异构体 （ 结构见图 " ） 献并不多， 且目的一 般 在 于 考 察 食 品 或 药 品 中 白 藜 芦醇在通常环境中的长期稳定性［ "$ ］。
3/-!4+ ） 、 桑 属（ 2#-4+ ） 、 山毛榉科假山毛榉属 （ ?#,(#’/&4+ ） 、 松科 松 属 （ 6*04+ ） 等诸多种属植物
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色
谱
第 !! 卷
体内的、 天然存在的二苯乙烯衍生物， 具有相当高的 抗细菌及抗真菌 活 性
［"］
环境下以进行热稳定性实验。储存过程中各样品均 避光放置。 ! ! 移取 "!% ! $ 储 备 液， 用 水 ’ 甲 醇 定 容 于 !% -$ 石英容量瓶中以进行光照实验。光照时保持样品瓶 一直固定不变。 与紫外灯的相对位置 （ & A- ） ! ! 在进行 热 稳 定 性 实 验 前， 先 吸 取 ’) % -$ 的 试 液作为对照样品进行 "#$% 测定。在热稳定性实验 中， 选择 !$ C 的 整 数 倍 作 为 取 样 的 时 间 间 隔， 每次 同样吸 取 ’) % -$ 的 试 液， 立 即 以 "#$% 测 定 其 中 反式白藜芦醇的浓 度， 并对整个色谱图进行峰面积 归一化， 得到反 式 白 藜 芦 醇 色 谱 峰 面 积 的 权 重。 共 取样 !! 次， 时 间 为 第 " 日 至 第 "& 日， 第 "% 日 至 第 !! 日， 以及第 !% 日。 ! ! 在进行 光 照 实 验 前， 先 吸 取 ’) % -$ 的 试 液 作 为对照样品进行 $%’+) 测定。在光照实验 中， 选择 不同 时 间 点 吸 取 ’ H % -$ 的 试 液， 立 即 进 行 $%’+) 测定。 用 于 !%$ ,- 光 照 实 验 的 取 样 时 间 点 为 ’) !% ， ’) % ， "， !， &， $， (， *， "! ， "( ， !’ ， !$ C ；用 于 &(% ,- 光照 实 验 的 取 样 时 间 点 为 ’ H !% ， ’H %， "， !， &， $， (， +， "’ ， "! ， "( ， !’ ， !$ C 。 ! $ $" 标准工作曲线 ! ! 制作 "#$% 标准工作曲线所用的反式白藜芦醇 的质量 浓 度 序 列 如 下： ") ’ ， !) ’ ， $) ’ ， () ’ ， +) ’ ， "’) ’ -0 I $ 。各浓度溶 液 均 由 储 备 液 以 水 ’ 甲 醇 稀 释 "’’ 倍至 "’ -0 I $ 后， 再用水 ’ 甲醇稀释至需要浓度。 ! ! 制作 $%’+) 标 准 工 作 曲 线 所 用 的 反 式 白 藜 芦 醇的 质 量 浓 度 序 列 如 下： ’) ! ， ’) % ， ") ’ ， !) ’ ， %) ’ ， "’) ’ -0 I $ 。配制方法同上。 ! $ %" 色谱与质谱条件 ! ! 热 稳 定 性 实 验 的 "#$% 条 件： 流 动 相 为 甲 醇’ ’) ’% E 三氟乙酸水溶 液 （ 体 积 比 为 (’ , $’ ） ， 流速为 ’) % -$ I -1, ； 柱恒温为 !% & ， 进样量为 !’ ! $ ， 检测 波长为 &’’ ,- 。 ! ! 光致异构化研究中 $%’()*’+) 条 件： 流动相为 甲 醇 ’% --B2 I $ 甲 酸 铵 水 溶 液 （ 含 有 ’) " E 甲 酸 ） （ 体积 比 为 (’ , $’ ） ， 流 速 ’) % -$ I -1, ； 柱 恒 温 !% &， 进样量 "’ ! $ 。 +) 采 用 负 离 子 模 式 检 测， 电极 电压 %’’ K ， 毛 细 管 电 压 J & %’’ K ， 碎 裂 电 压 %!) K； 雾化 气 （ L! ） 压 力 &$) % M#7 （ %’ 8;1 ） ， 流 量 "’ $ I -1, ， 雾化 气 温 度 &!% & 。 扫 描 范 围： "!’ # !(’ ! " #； 扫描速度： + "’’（ ! " # ） I ;。
图 ! " 白藜芦醇的顺反异构体结构 !"#$ !" %&’()&(’*+ ,- ’*+.*’/&’,0 "+,1*’+
! ! 本文采用高效液相 色 谱 法 （ "#$% ） 对不同环境 温度 （$， !’ ， $’ & ） 下反式白藜芦醇的稳定性进 行 了 评价； 采用液相色谱 与 电 喷 雾 离 子 化 质 谱 的 联 用 方 ， 对经 !%$ ,- 及 &(% ,- 紫 外 光 照 法 （ $%’()*’+) ） 射的反式白藜芦醇 的 光 致 异 构 化 反 应 进 行 了 研 究， 并对几个副反应的机理进行了初步的探讨。
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