吸收放散

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(医学课件)吸收放散实验

(医学课件)吸收放散实验
• 热放散法常用于ABO血型正反定型不符, ABO亚型的鉴定,全凝集或多凝集红细 胞的定型,以及新生儿溶血病的诊断等。
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乙醚放散试验
实验原理
已知
致敏
抗原
的红
细胞Leabharlann 受检者 血清乙醚已致敏 红细胞
放散液
除去乙醚 后鉴定
抗体
22
试剂
1、受检者血清 2、相应抗原的红细胞(抗凝血) 3、乙醚(分析试剂) 4、AB型血清
8
注意事项
1、试验所用抗A及抗B血清效价不宜过 高,应先将抗血清效价稀释到32倍为宜。 若抗血清效价太高,抗血清被A亚型红 细胞吸收后效价下降不明显,难以判断 结果。
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2、红细胞经洗涤压实,盐水应尽量去 尽,以免抗血清被稀释。 3、吸收试验的温度应根据抗原抗体反 应的最适温度来确定。ABO系统以4℃ 为宜,Rh系统以37℃为宜。
• B亚型的放散液鉴定方法相似。
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注意事项
1、为了获得最大量的抗体,应加大吸收血 清量。 2、放散时,应严格注意温度和时间。温度 过高红细胞易溶解;温度过低,抗体从红 细胞上放散不完全。
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3、放散液中抗体易变性,故应立即进行鉴 定。若需保存,应将抗体放散于AB血清或 牛白蛋白溶液中。
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临床应用
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结果判定
1、吸收后,抗A效价较未吸收抗A效价 显著降低或消失者为A型(同理判定B 型),若吸收后抗A和抗B都显著下降为 AB型,若吸收后抗A和抗B效价都无显著 差异者为O型。
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2、若试验目的是鉴定A亚型, 则按受检 红细胞的吸收强度,A1>A2>A3>Ax>Am的规 律来判定。B亚型鉴定与此类似。
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临床应用

吸收放散实验 ppt课件

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的红
细胞
受检者 血清
乙醚
已致敏 红细胞
放散液
除去乙醚 后鉴定
抗体
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试剂
1、受检者血清 2、相应抗原的红细胞(抗凝血) 3、乙醚(分析试剂) 4、AB型血清
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操作步骤
1、取直抗阳性患者的红细胞1ml,用生理 盐水洗涤3次(最末一次洗涤尽量弃去上 清液),离心。 2、取1体积压实红细胞,加1体积AB型血 清或生理盐水和2体积乙醚,颠倒混匀 10min,然后以3000rpm离心5min。
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2 、离心去掉上清液,以4°C冷盐水洗 涤红细胞3~4次,倾去洗涤液,留取压 实红细胞。用1/2容积的生理盐水, 置 56°C水浴10分钟,每隔15秒振摇1次, 使吸附在红细胞上的抗体充分放散。
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3、立刻以3000rpm离心,离心式套管内 放温水,使温度尽量保持在56℃,分离 得到的上清液即为放散液。
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注意事项
1、试验所用抗A及抗B血清效价不宜过 高,应先将抗血清效价稀释到32倍为宜。 若抗血清效价太高,抗血清被A亚型红 细胞吸收后效价下降不明显,难以判断 结果。
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2、红细胞经洗涤压实,盐水应尽量去 尽,以免抗血清被稀释。 3、吸收试验的温度应根据抗原抗体反 应的最适温度来确定。ABO系统以4℃ 为宜,Rh系统以37℃为宜。
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临床应用
• 本试验用以间接证明红细胞上血型抗 原及其强度,常用于ABO亚型鉴定、 全凝集或多凝集红细胞定型以及某种 原因引起红细胞血型抗原减弱时的定 型等。
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ABO疑难定型

ABO疑难定型

ABO疑难定型一、ABO疑难血型鉴定的方法(一)正反定型:正定型:-A, -B,-AB, -H, -A1反定型:Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下(二)型物质测定型物质准备:1~2ml唾液,沸水煮10分钟,离心后得到的上清。

标清的调制:标清用盐水稀释至其效价为1:16中和:将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测:用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断:如果抗-A被中和,则被检者为A型,如果抗-B被中和,则被检者为B 型。

(三)吸收放散吸收用RBC:盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。

吸收用的标准血清将压积RBC和标清按等体积比例混合,在相应的温度条件下(4℃)孵育1小时,每隔15分钟混匀一次用盐水洗涤孵育后的细胞6次,得到压积RBC,加入等量盐水。

56℃水浴震荡10分钟,离心获得上清即为放散液。

用标准试剂红细胞检测放散液。

(四)O型筛选红细胞的应用抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型 R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选目的: 在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血(五)自家冷凝集血样的ABO定型正定型用红细胞的准备:血样采集后,立即离心,获得压积红细胞用37℃温盐水洗涤红细胞45℃热放散3分钟巯基试剂处理: 破坏IgM抗体自家冷凝集血样的ABO定型反定型用血浆或血清的准备血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体用自身红细胞吸收去除自身冷抗体用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体(六)获得性B1. 获得性B及多凝集现象获得性B:肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面多凝集现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)2. 获得性B产生的主要机理二、ABO正反定型不符的问题分析(一)ABO定型问题经常发生的情况为:1. 明显缺失应该出现的抗-A或抗-B:(1) 新生儿血样(2) 免疫缺陷、免疫紊乱(3) 前带现象(4) 血型型物质过多(5) 抗原太弱,常规方法检查不出来,相应血清中无抗体(6) 亚型,反应是混合视野2. 由于试剂被污染,或试剂中有额外抗体3. 明显多出抗原(或多出抗体)(1) 亚型,如A2型可能血清中有抗-A1(2) 自家凝集(3) 获得性B(二)引起ABO正反定型不一致的原因分析1. 技术因素:(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污染或失效的试剂(5) 离心速度不当2. 存在IgM性质的自家冷抗体由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人,在低于37℃时血细胞自发凝集,影响正反定型。

放散试验标准操作规程(sop)

放散试验标准操作规程(sop)

放散试验标准操作规程一、目的:为规范红细胞放散试验的技术操作,保证结果的准确性,从而辅助血型的鉴定以及保证交叉配血的正确进行。

二、适用范围:输血科负责进行红细胞放散试验来检测血型弱表达抗原及抗体特异性等试验的技术人员。

三、原理:红细胞血型抗原和抗体的结合是可逆的,通过改变某些物理条件就可使结合在红细胞血型抗原上的抗体分离出来,即放散。

再通过检测放散液中的抗体,可鉴定其特异性或者间接鉴定红细胞抗原。

四、步骤和方法:<1>热放散试验1、将已进行吸收试验的压积红细胞用生理盐水洗涤4次,每次将洗涤后生理盐水除尽,最后一次洗液留作对照。

2、加入与压积红细胞等容量的生理盐水,充分混匀后56℃轻摇10min(15—30s摇动一次),56℃保温1300g离心3min,立即取上清液即放散液备用。

<2>乙醚放散试验1、将已进行吸收试验的压积红细胞用生理盐水洗涤4次,每次将洗涤后生理盐水除尽,最后一次洗液留作对照。

2、加入与压积红细胞等容量的生理盐水后再加入2倍于压积红细胞体积容量的分析纯乙醚,密封后用力颠倒摇动1min,小心放气减压置于37℃30min,每10min摇动1次后以1000g 离心5min。

3、离心后分成3层,最上层是乙醚,中层是红细胞基质,下层是深红色放散液(含血红蛋白)。

留取下层放散液置于37℃水浴中30min挥发残存乙醚备用。

4、根据试验目的检测放散液中抗体,与最后一次洗液做对照(洗液中应检不出任何抗体)。

<3>结果判断:若最后一次洗液未检出抗体,而放散液中检出相应抗体,则试验为阳性,表明红细胞表达目标抗原或者血清中存在相应抗体。

反之为阴性。

五、注意事项:1、如最后一次洗液中可检出抗体,表明红细胞洗涤不充分,应继续洗涤。

2、放散液中抗体易变性,故尽快进行鉴定。

如果放散液需要保存,改用不规则抗体筛选阴性的AB型血清或6%牛血清白蛋白。

3、放散试验方法较多,热放散法是最简便和实用的方法。

ABO血型疑难定型

ABO血型疑难定型

ABO疑难定型ABO系统是唯一一个在红细胞上缺乏相应抗原的情况下其血清或血浆中存在对应抗体的最重要的血型系统。

因此ABO定型必须进行正反定型并且正反定型结果相一致的前提下才能准确鉴定ABO血型。

在正定型试验中,一般我们使用抗-A和抗-B来检测红细胞上是否存在A和/或B 抗原,反定型试验中使用A和B型标准试剂红细胞来检测血清/血浆中是否存在抗-A和/或抗-B 抗体。

一般而言,正反定型的结果互相一致。

但在一些特殊的情况下,正反定型的结果相互不一致,在本文中分析了ABO正反定型不一致的原因,并对不同的原因加以分析解决,即分别在正定型和反定型中增加一些试剂来更进一步的细化检测红细胞上的抗原和血清/血浆中可能出现的抗体,并通过型物质测定及吸收放散等方法来准确定型。

一、ABO疑难血型鉴定的方法(一)正反定型:正定型:-A, -B,-AB, -H, -A1反定型:Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等) A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下(二)型物质测定型物质准备:1~2ml唾液,沸水煮10分钟,离心后得到的上清。

标清的调制:标清用盐水稀释至其效价为1:16中和:将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测:用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断:如果抗-A被中和,则被检者为A型,如果抗-B被中和,则被检者为B型。

放散试验

放散试验

3、 放散液中抗体易变性,故应立即进行鉴定。 若需保存,应将抗体放散于AB血清或牛白 蛋白溶液中。
临床应用
热放散法常用于ABO亚型的鉴定,全凝集 或多凝集红细胞的定型,类B的放散实验以 及新生儿溶血病的诊断等。
乙醚放散试验原理
已知 致敏 抗原
的红 细胞
受检者 血清
乙醚
已致敏 红细胞
放散液
除去乙醚 后鉴定 抗体
红细胞上 有无相应 抗原及其
强度
间接判定待检 红细胞血型 及其亚型种类
试剂
抗A及抗B分型血清。 2%A型及B型红细胞。 受检红细胞。
操作步骤
1、吸收液的制备: 取受检红细胞用生理盐水洗涤3次,末次洗
涤后将盐水倒尽,取压实红细胞1份,与等 量抗A血清混合, 另取1份与等量抗B血清混 合,置4℃冰箱至少1小时,每10分钟摇动试
管1次(红细胞充分吸收抗体),离心后取
上清液(即吸收液)。
2、倍量稀释:
排列10mm×60mm小试管4排,每排5支, 每管各加生理盐水0.2 ml。第1、3两排第1 管分别加己吸的收抗A及抗B血清 0.2 ml; 第2、4两排第1管分别加未吸收的抗A及抗 B血清0.2 ml;分别作2~32的倍量稀释。
4 、将放散液用2%A型和B型试剂红细胞鉴 定抗体,即可检出受检红细胞的血型。
结果判定
鉴定A亚型:用已知A亚型红细胞按放散 液抗体的强度A1<A2<A3<Ax<Am,判 定受检红细胞A亚型的型别。
B亚型的放散液鉴定方法相似。
注意事项
1、为了获得最大量的抗体, 应加大吸收血清 量。
2 、放散时,应严格注意温度和时间。温度过 高红细胞易溶解;温度过低,抗体从红细胞 上放散不完全。
8、将放散液放置37℃水浴30min(除尽乙 醚),然后鉴定抗体。

吸收放散试验标准操作规程

吸收放散试验标准操作规程

吸收放散试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面可能存在的弱血型抗原、鉴定、分离血清中可能存在的混合抗体,辅助红细胞血型及混合抗体特异性的鉴定。

(二)检验原理抗体与相应抗原在适合条件下可以发生凝集或致敏,但这种结合是可逆的,如果改变某些物理条件时,抗体可以从结合的红细胞上解脱下来。

表达弱血型抗原(A或B等)的红细胞与相应抗体反应不出现凝集现象,但可以吸收相应的抗体,被吸收的抗体在适当条件下可以放散出来,与具有对应正常抗原的红细胞发生反应,检测和鉴定该放散出来的抗体,可以证明相应抗原的存在,也可以将混合抗体得到分离。

(三)适用范围1.弱血型抗原的鉴定(本操作规程主要选取弱A/B抗原鉴定制定相应试验流程)。

2.混合血型抗体的分离与鉴定。

3.新生儿溶血病的诊断。

(四)设备性能参数参见KA-2200血清学专用离心机、B600-A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书。

(五)器材与试剂1.器材B600-A型离心机、KA-2200台式离心机、电热恒温水浴箱、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

2.试剂生理盐水、抗A和抗B标准血清(经过筛选后)、抗人球蛋白试剂(市售单克隆或多克隆)、3%反定试剂红细胞。

(六)标本要求抗凝全血经B600-A型离心机在1 760g条件下,离心5分钟后压积红细胞应≥2ml。

(七)校准步骤参见KA-2200血清学专用离心机、B600-A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书中校准要求执行。

(八)操作程序1.吸收试验(1)生理盐水洗涤lml压积红细胞至少3遍,最后1次洗涤后,尽量弃去试管中红细胞沉淀上的所有上清盐水。

(2)如怀疑是弱A(或弱B)抗原红细胞,在洗涤后的红细胞中加入lml抗A(或抗B)血清。

(3)将红细胞与抗体试剂充分混匀,在4℃条件下孵育2小时,期间不时轻摇试管,混合红细胞与抗体血清。

(4)使用B600-A型离心机在1 760g条件下,离心5分钟,将所有上清(抗A或抗B试剂)转移到另一支试管中。

吸收放散试验

吸收放散试验

放散试验原理
抗原与抗体的结合是可逆的。在物理条件 改变时,抗体又会从抗原抗体复合物上分离下 来,将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试 验称为放散试验
吸收试验的方法
冷吸收
一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞 加一份被检血清,混匀后置 4℃ 冰箱吸 收1~2小时 (ABO、MN、P系统等)
热吸收 混匀后置37℃水浴箱中吸收(Rh系统等)
其优点是适用于一般化验室,缺点是放散 液中含有较多游离白蛋白。
热放散试验方法
将疑有抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤3-4 次,最后一次尽量压积红细胞和吸取红细胞上 层的生理盐水。
在压积红细胞中加等量生理盐水(也可用AB 血清或6%白蛋白),置 56℃水浴箱中7~8分 钟,期间摇动数次。
取出后立即高速离心,3000 转/分2分钟;取 上清液(樱红色的上清液即为放散液),与已 知红细胞试验。按不同试验要求做试验,将放 散液作为抗体使用。
放散抗体时,应不断摇动,促使抗体从抗原抗体复
合物上分离下来
乙醚放散试验
主要应用于温自身抗体(IgG)或同种抗体 引起的直抗阳性,以及用于分离IgG抗体混合物
其最大优点是适用于检查获得性溶血性贫 血,鉴定Rh抗体效果最好,不宜用于 ABO 抗 体鉴定
乙醚放散试验方法
取经洗涤3次的受检压积红细胞1份加1份生理盐水,
酸放散
放散试验的应用
鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体 在溶血性贫血和可疑输血反应中,用来
鉴定产生直抗阳性的红细胞 制备少量的单特异性抗体 从病人红细胞上去除抗体,制备可用于
自身吸收或鉴定血型及交叉配血次测试 验中使用的红细胞
吸收试验(absorption test)
抗原与抗体的结合是特异性的,因此具有抗体活 性的血清加入相应抗原后,抗体的活性下降或消失, 这种作用称为吸收试验

吸收放散法在ABO疑难血型鉴定中的应用

吸收放散法在ABO疑难血型鉴定中的应用
和显 微镜 下观察 凝集反 应结 果 。
1 4 流 式细胞 术 检 测 抗 体 方 法 吸取 样 本 1 2的 . 、
血 清 和该样 本放 散液 各 5 l分 别加 入 标准 红 细 胞 0 , 5 l4℃孵 育 l r每 隔 1 i 0 , h, 5 n振摇 一次 ; a r 生理盐 水
疑难血 型是 保 障 输 血 安全 的最 重 要 的环 节 。 目前 ,
绝大多 数实验 室 并 没有 开 展 基 因鉴 定 AB 血 型 的 O 技 术工作 , 于 AB 对 O疑难 血 型的鉴 定仍 然依 赖 于血 清 学 的 方法 , 而吸 收 放散 法 是 免 疫血 清 学 实 验 中非 常 重要 的技术 手段 。
次 , P S 至 总 量 为 30t, 加 B 0 L 以标 准 红 细 胞 加 入 1 F TC标 记 的羊 抗 人 IM 为 阴性 对 照 , 流式 细 胞 I g 用 仪检 测 。
2 , 生 , 偿 献 血 后 , 样 经 血 ( , 2 学 无 血
蛋 白试 验 为 阴性 , 样 本 的 放散 液 与 A 或 B标 准 细胞 发 生 凝 集 , 4倒 正反 定 型相 符 。流 式 细 胞 术 检 测 显 示
放 散 液 中抗 体 的 含 量 高 于待 测血 清 。结 论 吸 收 放 散 法 能 够 起 到 浓 缩 抗 体 的作 用 , 可 以 用 于检 测 抗 既 原 , 可 以用 于检 测 抗 体 。 灵 活 运 用 吸 收放 散 法 , 够 准 确 鉴 定 A1 血 型 。 也 能 3 0
【 键 词 】 AB 疑 难 血 型 正 反 定 型 不 符 吸 收 放 散 法 关 0
临床输血 工作 中的一项 主要 工 作任 务就 是鉴 定 AB O血 型 , 样本 一般 来 源 于无偿 献 血 人群 和临 床 其 需要输 血 的患 者 。 因此 , 准确 鉴 定血 型尤 其是 AB O

两种ABO血型、RhD血型鉴定方法的比较

两种ABO血型、RhD血型鉴定方法的比较

两种ABO血型、RhD血型鉴定方法的比较输血是临床抢救和治疗病人过程中有效的辅助手段之一,而准确的血型鉴定试验,是确保输血安全的基础和前提。

传统的血型鉴定方法有玻片法、纸板法、试管法。

玻片法操作简单、方便,适于血型普查,但反应时间长,易忽略较弱凝集而导致血型鉴定的错误。

纸板法是玻片法的改良形式,可以同时进行ABO正反定型和RhD血型鉴定,但其结果易受环境湿度、温度、观察时间等多重因素影响。

试管法是经典的ABO、RhD血型鉴定方法,其结果准确可靠,但其操作难以规范化,不适于批量标本的处理。

而微柱凝胶技术不仅反应结果可靠,特别是在引入自动血型分型系统以后,消除了人为因素对实验结果的影响,实现了血型鉴定实验的规范化、信息化。

我科于2016年3月—2016年12月,采用纸板法、自动微柱凝胶技术两种方法鉴定2600例患者ABO、RhD血型。

现将结果报告如下。

1.材料和方法1.1 一般资料1.1.1标本:2600名患者男性1357名,女性1243名,年龄0~86岁,血样采用EDTA-K2抗凝真空无菌采血管1.1.2试剂:抗-A、抗-B(长春博德生物技术有限责任公司),抗-D标准血清(海尔施生物医药股份有限公司),抗-H血清(上海血液生物医药有限责任公司)0.8%A、B反定型标准红细(长春博迅生物技术有限责任公司),3%A/B试剂红细胞(上海血液生物医药有限责任公司),人源抗-A、抗-B血清(本室自制),ABO/RhD血型鉴定卡(长春博迅生物技术有限责任公司),凹型ABO/RhD血型鉴定纸板(长春博德生物技术有限责任公司)。

1.1.3仪器:XK—550血库专用离心机(四川蜀科仪器有限公司),博迅血型卡分型系统(长春博迅生物技术有限责任公司)1.2 方法1.2.1纸板法ABO血型鉴定:实验步骤参照玻片法[1],在标有抗A、抗B、抗D凹型检测孔内分别加入抗A、抗B、抗D标准血清1滴,再分别加入受检者3%~5%红细胞悬液1滴,玻璃棒搅匀;在标有Ac、Bc的凹型检测孔内分别滴加受检者血浆1滴,再分别滴加A型、B型3%试剂红细胞,肉眼观察来判断结果。

吸收放散试验及抗体增强方法在ABO疑难血型鉴定中的应用研究

吸收放散试验及抗体增强方法在ABO疑难血型鉴定中的应用研究

吸收放散试验及抗体增强方法在 ABO疑难血型鉴定中的应用研究【摘要】目的:在ABO疑难血型鉴定中应用吸收放散试验及抗体增强方法的价值做研究。

方法:试验时间2020年2月至2021年2月,取ABO疑难血型28例作为试验标本,并经抗体增强方法、不规则抗体筛选、呼吸放射试验、直接抗人球蛋白试验检验,对血型抗原、血清中抗体检出情况进行观察。

结果:28例患者中,有17例ABO正反定型不符的患者,11例低效价血清患者。

结论:吸收放散试验可实现浓缩血清、初步纯化抗体的效果,抗体增强方法可使低效价血清抗体的凝集强度增加,吸收放散试验及抗体增强方法应用在输血相容性检测中,对ABO疑难血型鉴定具有准确的检测价值,对部分交叉配血不合情况予以解决。

【关键词】吸收放散试验;抗体增强方法;ABO疑难血型鉴定在临床输血相容性检测中,ABO血型鉴定属于必检项目中最重要的一项,其检测目的主要为保证临床输血治疗的安全性,因此ABO血型鉴定准确性可作为临床输血安全的前提和重要措施[1]。

在大部分医院输血科实验室中未充分普及ABO 血型基因检测工作,鉴定ABO疑难血型和交叉配血试验中完全依赖血清学方法实施检测。

吸收放散试验的检测方法主要为输血相容性检测的常用方法,其属于准确性高的技术方式,在临床实际检测中,第一时间指出吸收放散试验在检测低效价血清抗体工作时,放散液、试剂红细胞的凝集强度降低,且操作时间较长,流程相对繁琐。

因此在此组试验中使用吸收放散试验及抗体增强方法鉴定ABO疑难血症,将抗原抗体减弱的凝集强度逐渐将混合外观凝集MF~1+增加至3+,将血型抗原抗体减弱、冷凝集素、亚型对检测结果造成的干扰予以排除[2]。

为使ABO疑难血型鉴定的准确性提升,现分析吸收放散试验及抗体增强方法检测的意义,并作如下报道。

1.一般数据与方法1.一般数据于2020年2月至2021年2月时段开展此次试验,并取28例ABO疑难血型作为试验标本,其中男性人数16例、女性人数12例,年龄值域21~69岁,均值(45.35±5.12)岁;整体一般数据,并对其进行比对结果无差异(p>0.05);全部人员均自愿签订同意书,并保证积极配合试验进行,将其上报于我院伦理委员会,得到批准认可。

吸收放散试验

吸收放散试验
吸收放散试验
精选课件
1
吸收试验原理:抗原与抗体的结合是特异性的,因 此具有抗体活性的血清加入相应抗原后,抗体的活 性下降或消失,这种作用称为吸收试验。
放散试验原理:抗原与抗体的结合是可逆的,在物 理条件改变时,抗体又会从抗原抗体复合物上分离 下来,将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验 称为放散试验。
释放试验
结论

不能证实为由血型免 疫性抗体引起的HDN

可以证实为HDN

可疑为HDN

可以证实为ABO HND

可以证实为ABO HND

可以证实为ABO HND

可以证实为ABO HND
+ 精选课件
可以证实为ABO H6 ND
7. 制备少量的单特异性抗体 8. 从病人红细胞上去除抗体,制备可用于自身吸收或
鉴定血型及交叉配血次侧试验中使用的红细胞 9. 证实被不完全抗D抗体遮断的新生儿红细胞的血型
精选课件
5
根据三项试验结果判断ABO新生儿溶血病 (排除O细胞阳性情况)
直-
- + - - + + +
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吸收放散试验的应用
3. 可在多种抗体中通过吸收试验移走某种不需要的抗 体,保留某种需要的特异性抗体,达到获取单一特 异性抗体的目的。
4. 克服自身抗体的干扰 ,如用自身红细胞吸收血清 中的自身抗体,解决配血困难。
5. 鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体
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吸收放散试验的应用
6. 在溶血性贫血和可疑输血反应中,用来鉴定产生直 抗阳性的红细胞
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2
吸收放散试验的应用
1. 用于间接证明红细胞上的血型抗原及其强度,解决 红细胞定型困难的问题。常用于ABO亚型的鉴定、 全凝集或多凝集红细胞的定型以及某种原因引起红 细胞血型抗原或抗体减弱时的定型。

吸收放散试验在疑难配血中的应用

吸收放散试验在疑难配血中的应用

吸收放散试验在疑难配血中的应用作者:马淑贤等来源:《中国实用医药》2014年第33期【摘要】目的通过采用吸收放散试验的方法来解决疑难配血中的问题,为安全输血提供质量保障。

方法利用吸收放散试验的方法,做ABO血型正反定型不一致的鉴定,不规则抗体的筛查与鉴定,高效价的冷凝集素测定,再进行交叉配血。

结果在15例疑难配血中,ABO正反定型不一致7例,其中 ABO血型抗原减弱3例, ABO亚型2例,自身抗体2例;不规则抗体4例,其中有抗-E 2例,抗-D 1例,抗-C 1例;高效价冷凝集素1例;ABO血型变异2例,肝素影响1例。

利用吸收放散试验排除以上干扰后,再进行交叉配血,结果显示有14例配血相合,准予输血, 1例当日无法配血相合,但改日配血相合,并给予输血,并无输血不良反应。

结论吸收放散试验即可以检测抗原,也可以检测抗体。

灵活运用吸收放散试验,能准确地鉴定ABO血型,不规则抗体筛查与鉴定和高效价的冷凝集素的测定,能有效地解决疑难配血中的问题,保证安全输血。

【关键词】疑难配血;吸收放散试验;ABO血型;不规则抗体;高效价的冷凝集导致配血困难的主要原因有ABO血型正反定型不一致,不规则抗体,高效价的冷凝集素。

要想解决这些问题,就可以利用吸收放散试验的方法来解决,因为吸收放散试验是免疫血清学试验中非常重要的技术手段,吸收即为用红细胞(抗原)在最适的条件下充分吸收抗体,而放散就是将吸附于红细胞上的抗体用物理或化学的方法使其脱离下来。

所以,吸收放散试验即可以用于检测抗原,也可以用于检测抗体。

灵活运用吸收放散试验,能准确地鉴定ABO血型,不规则抗体筛查与鉴定和高效价冷凝集素的测定,能有效的解决疑难配血中的问题,保证安全输血。

1 材料与方法1. 1 材料本院临床疑难配血患者,共15例典型病例。

1. 2 试剂与仪器 ABO单克隆正反定型试剂, RH血型定型试剂,不规则抗体筛查与鉴定试剂,凝聚胺试剂,微柱凝胶卡(LISS/coombs),微柱孔内含有低离子介质及抗人球蛋白试剂;恒温水浴箱,免疫微柱孵育箱及离心机等。

《吸收放散实验》课件

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结果解释
根据实验结果,对实验现象和数据进行解释和推理,得出科 学结论。
04
实验结果与讨论
实验结果展示
实验数据记录
详细记录实验过程中的各项数据 ,包括吸收率、放散率、时间等

数据图表
将实验数据以图表形式展示,便于 观察和分析。
实验现象描述
对实验过程中观察到的现象进行详 细描述,如颜色变化、温度变化等 。
分光光度计
用于测量物质在特定波长下的 吸光度,从而推算其浓度。
离心机
用于制备实验样本,使样本中 的物质分离。
恒温水浴
用于控制实验温度,确保实验 条件的一致性。
实验试剂
待测物质的标准溶液
用于校准实验仪器和建立标准曲线。
缓冲液
用于维持实验环境的酸碱度,确保实验结果 的准确性。
实验样本
待测的未知溶液或样品。
参考文献
参考文献1
张三, 李四. 吸收放散实验在药物研 究中的应用[J]. 中国药理学通报, 2019, 35(12): 1567-1571.
参考文献2
王五, 赵六. 药物吸收与放散的机制研 究[M]. 北京: 科学出版社, 2018: 123145.
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THANKS
实验结论3
实验结果还表明,药物C在特定 条件下的吸收和放散效果与预期
不符,需要进一步研究。
实验总结
实验总结1
通过本次实验,我们深入了解了吸收放散实验的原理、方法和应 用,提高了实验技能和药物研究能力。
实验总结2
实验过程中,我们需要注意控制实验条件,确保实验结果的准确性 和可靠性。
实验总结3
在未来的药物研究中,我们可以利用吸收放散实验来评估其他药物 的药效和作用机制,为新药研发提供有力支持。

吸收放散实验[研究材料]

吸收放散实验[研究材料]
21峰谷书屋乙醚放散试验实验原理受检者血清已知抗原的红细胞致敏已致敏红细胞乙醚放散液除去乙醚后鉴定抗体22峰谷书屋试剂1受检者血清2相应抗原的红细胞抗凝血3乙醚分析试剂4ab型血清23峰谷书屋操作步骤1取直抗阳性患者的红细胞1ml用生理盐水洗涤3次最末一次洗涤尽量弃去上清液离心
主要内容
吸收试验
试验原理 试剂
峰谷书屋
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2 、离心去掉上清液,以4°C冷盐水洗 涤红细胞3~4次,倾去洗涤液,留取压 实红细胞。用1/2容积的生理盐水, 置 56°C水浴10分钟,每隔15秒振摇1次, 使吸附在红细胞上的抗体充分放散。
峰谷书屋
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3、立刻以3000rpm离心,离心式套管内 放温水,使温度尽量保持在56℃,分离 得到的上清液即为放散液。
峰谷书屋
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峰谷书屋
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3、放散液中抗体易变性,故应立即进行鉴 定。若需保存,应将抗体放散于AB血清或 牛白蛋白溶液中。
峰谷书屋
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临床应用
• 热放散法常用于ABO血型正反定型不符, ABO亚型的鉴定,全凝集或多凝集红细 胞的定型,以及新生儿溶血病的诊断等。
峰谷书屋
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乙醚放散试验
实验原理
已知
致敏
抗原
的红
峰谷书屋
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临床应用
• 本试验用以间接证明红细胞上血型抗 原及其强度,常用于ABO亚型鉴定、 全凝集或多凝集红细胞定型以及某种 原因引起红细胞血型抗原减弱时的定 型等。
峰谷书屋
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放散试验
1、ABO血型IgM类抗体常用热放散法。 2、Rh血型IgG类抗体常用乙醚放散法。
峰谷书屋
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热放散试验
实验原理
操作步骤 注意事项 临床应用

吸收放散试验及抗体增强方法在ABO疑难血型鉴定中的应用效果

吸收放散试验及抗体增强方法在ABO疑难血型鉴定中的应用效果

吸收放散试验及抗体增强方法在 ABO疑难血型鉴定中的应用效果摘要:目的:分析在ABO疑难血型鉴定中将吸收放散试验法和抗体增强法进行应用的临床效果。

方法:本次研究工作以我院患者为例展开,时间为2021年1月——2022年1月,共选取50例患者为研究对象,均为ABO疑难血型患者。

对患者展开回顾性分析,给予患者吸收放散试验和抗体增强试验,对其临床鉴定结果进行观察分析。

结果:在50例患者中,有27例患者为A抗原减弱,9例患者为AB抗原减弱,9例为B亚型,5例为A亚型。

在吸收放散实验中,ABO血型抗原凝集强度在MF-1,其中有9例检测出IgM型抗A,6例患者检测出IgM型抗B。

同时,共有30例低效价血清患者,其中A型血血清抗B抗体患者人数为9例,B型血血清抗A抗体人数有9例,O型血血清抗体人数有12例。

结论:在ABO疑难血型鉴定中将吸收放散试验法和抗体增强法进行应用,其临床效果显著,可保证鉴定准确性,增强临床输血安全性。

关键词:吸收放散试验;抗体增强法;ABO疑难血型鉴定就ABO血型鉴定来说,其是临床中针对输血项目前所展开的必要检查项目,可保证患者输血安全性。

但是从实际发展情况来看,大部分基层医院输血过程仍然缺乏对基因普及的使用和重视,大多依然采用ABO疑难血型的检测依然以血清检验方法为主。

吸收放散试验是临床当前应用在疑难血型鉴定中的主要方法,检测准确性较高,但是从临床发展情况来看,此方法在低效价血清抗体检测中,其试剂红细胞与放散凝集强度较低,还需要将此方法与其他方法进行联合应用[1]。

本研究则基于此,以我院患者为例,将吸收放散试验法与抗体增强方法进行联合应用,探究其临床应用效果。

1一般资料和研究方法1.1一般资料分析此次研究工作以我院患者为例展开,时间为2021年1月至2022年1月,患者选取均为ABO型疑难血型患者,人数为50例,患者中,男性人数有26例,女性人数有24例,患者中,年龄最大的为68岁,年龄最小的为22岁,患者对应的平均年龄为(43.23±3.23)岁。

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试剂 红细胞
放散
物理条件 的改变 (加热)
抗体
确型别
试剂
1、 抗A和抗B分型血清。
2 、2%A型和B型试剂红细胞盐水悬液。 3 、受检红细胞。
操作步骤
1、受检红细胞与抗A和抗B血清吸收见吸 收试验。
2 、离心去掉上清液,以4°C冷盐水洗 涤红细胞3~4次,倾去洗涤液,留取压 实红细胞。用1/2容积的生理盐水, 置 56°C水浴10分钟,每隔15秒振摇1次, 使吸附在红细胞上的抗体充分放散。
注意事项
1、试验所用抗A及抗B血清效价不宜过 高,应先将抗血清效价稀释到32倍为宜。 若抗血清效价太高,抗血清被A亚型红 细胞吸收后效价下降不明显,难以判断 结果。
2、红细胞经洗涤压实,盐水应尽量去 尽,以免抗血清被稀释。 3、吸收试验的温度应根据抗原抗体反 应的最适温度来确定。ABO系统以4℃ 为宜,Rh系统以37℃为宜。
3、立刻以3000rpm离心,离心式套管内 放温水,使温度尽量保持在56℃,分离 得到的上清液即为放散液。 4、将放散液用2%A型和B型试剂红细胞鉴 定抗体,即可检出受检红细胞的血型。
结果判定
• 鉴定A亚型:用已知A亚型红细胞按放 散液抗体的强度A1<A2<A3<Ax<Am, 判定受检红细胞A亚型的型别。
• B亚型的放散液鉴定方法相似。
注意事项
1、为了获得最大量的抗体,应加大吸收血 清量。 2、放散时,应严格注意温度和时间。温度 过高红细胞易溶解;温度过低,抗体从红 细胞上放散不完全。
3、放散液中抗体易变性,故应立即进行鉴 定。若需保存,应将抗体放散于AB血清或 牛白蛋白溶液中。
临床应用
• 热放散法常用于ABO血型正反定型不符, ABO亚型的鉴定,全凝集或多凝集红细 胞的定型,以及新生儿溶血病的诊断等。
乙醚放散试验
实验原理
已知 抗原 的红 细胞 已致敏 红细胞
致敏
乙醚 除去乙醚 后鉴定 抗体
受检者 血清
放散液
试剂
1、受检者血清 2、相应抗原的红细胞(抗凝血) 3、乙醚(分析试剂) 4、AB型血清
操作步骤
1、取直抗阳性患者的红细胞1ml,用生理 盐水洗涤3次(最末一次洗涤尽量弃去上 清液),离心。 2、取1体积压实红细胞,加1体积AB型血 清或生理盐水和2体积乙醚,颠倒混匀 10min,然后以3000rpm离心5min。
2、倍量稀释: 排列10mm×60mm小试管4排,每排5支, 每管各加生理盐水0.2 ml。第1、3两 排第1管分别加己吸的收抗A及抗B血 清 0.2 ml;第2、4两排第1管分别加 未吸收的抗A及抗B血清0.2 ml;分别 作2~32的倍量稀释。
3、第1、2两排每管各加2%A型红细胞 盐水悬液0.2ml,第3、4两排每管各加 2%B型红细胞盐水悬液0.2ml。 4、将试管振摇使红细胞充分混匀,置 室温1小时(或1000rpm离心1min), 观察凝集反应。
3、离心后即分成三层,最上层是乙醚, 中层是红细胞基质,下层是具有抗体的 放散液,其色深红。 4、用清洁的吸管吸出放散液。 若有混 浊,可再离心1次。 5、将放散液放置37℃水浴30min(除尽 乙醚),然后用谱细胞鉴定抗体。
临床应用
• 本试验主要适用于鉴定Rh抗体,临 床上常用于RH新生儿溶血病的诊断。
临床应用
• 本试验用以间接证明红细胞上血型抗
原及其强度,常用于ABO亚型鉴定、 全凝集或多凝集红细胞定型以及某种 原因引起红细胞血型抗原减弱时的定 型等。
放散试验
1、ABO血型IgM类抗体常用热放散法。
2、Rh血型IgG类抗体常用乙醚放散法。
热放散试验
实验原理
分 型血 清 待检 红细胞
凝集或 致敏
结果判定
1、吸收后,抗A效价较未吸收抗A效价 显著降低或消失者为A型(同理判定B 型),若吸收后抗A和抗B都显著下降为 AB型,若吸收后抗A和抗B效价都无显著 差异者为O型。
2、若试验目的是鉴定A亚型, 则按受检 红细胞的吸收强度,A1>A2>A3>Ax>Am的规 律来判定。B亚型鉴定与此类似。
主要内容
试验原理 试 剂 操作步骤 注意事项 临床应用
吸收试验
加热放散法 放散试验 乙醚放散法
试验 操作 注意 临床
原理 步骤 事项 应用
试验原理 操作步骤 注意事项 临床应用
吸收试验原理
待 检 红 细 胞
已知 效价 的抗 A或 抗B 血清
滴定
已知抗原 的红细胞 比较吸收 前后血清中 抗体效价 红细胞上 有无相应 抗原及其 强度
吸收液
间接判定待检 红细胞血型 及其亚型种类
试剂
• 抗A及抗B分型血清。
• 2%A型及B型红细胞。 • 受检红细胞。
操作步骤
1、吸收液的制备: 取受检红细胞用生理盐水洗涤3次,末 次洗涤后将盐水倒尽,取压实红细胞1 份,与等量抗A血清混合,另取1份与等 量抗B血清混合,置4℃冰箱至少1小时, 每10分钟摇动试管1次(红细胞充分吸 收抗体),离心后取上清液(即吸收 液)。
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