肾纤康对肾间质纤维化大鼠Smad信号通路的影响
TGF-β1Smads信号转导通路与肾间质纤维化
TGF-β1/Smads信号转导通路与肾间质纤维化肾间质纤维化是各种肾脏疾病进入终末期的共同病理损害，以肾间质中细胞及胶原成分集聚增多、伴有肾小管萎缩或扩张、变形及肾小管和间质毛细血管的丧失为特征。
[ 1]所以采取各种措施阻止和延缓肾间质纤维化的发生发展是临床防治肾间质纤维化保护肾功能的重要目标之一。
越来越多的证据表明TGFβ/ Smad 信号转导通路在肾纤维化的发生、发展中起重要作用。
[ 2]为此，本研究将TGF-β1/Smads信号转导通路与肾间质纤维化间的相互作用作一综述。
一、肾间质纤维化的机制肾小管萎缩和消失, 肾间质淋巴和单核细胞浸润及纤维组织增生, 称为肾小管间质纤维化( tubulo interst it ial fibro sis)。
1.1 肾间质纤维化的分子基础哺乳动物体内已发现许多促肾间质纤维化的分子,同时也存在抗肾间质纤维化的分子促肾间质纤维化的分子有转化生长因子β（TGF-β），结缔组织生长因子（CTGF），血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)，内皮素-1( ET–1)，血小板源性生长因子( PDGF)等。
抗肾间质纤维化的分子有γ- 干扰素( IFN -γ)，肝细胞生长因子(HGF)，基质金属蛋白酶(MMPS)，松弛素(relaxin)等[3]1.2上皮间质转化（EMT）与肾间质纤维化上皮-间质转化指上皮组织在发生局部损伤后诱发的上皮细胞向间质细胞表型的转化。
包括失去上皮粘附特性, 表达a-SMA、肌动蛋白重排, 瓦解小管基底膜, 增强细胞移动性和侵袭性，[4]最终进入间质组织。
.肌成纤维细胞是完全分化的成纤维细胞，是产生平滑肌肌动蛋白的细胞，超过1/3的肌成纤维细胞的形成和肾小管上皮细胞（TEC）发生的EMT有关，是EMT的主动来源。
所以EMT可能是导致肾间质纤维化发生的最重要的机制之一。
然而，一些研究表明，肝细胞生长因子[14]和骨形态形成蛋白-7是上皮间充质转化的抑制因子，能抑制上皮间充质转化的发生。
TGF-β1介导的Smad和ERK信号通路在肾纤维化中的研究进展
中国免疫学杂志2022年第38卷TGF -β1介导的Smad 和ERK 信号通路在肾纤维化中的研究进展郭帅方敬陈志强（河北中医学院，石家庄050000）中图分类号R392.11文献标志码A文章编号1000-484X （2022）06-0766-05［摘要］肾纤维化的发生发展受到生长因子、细胞因子、趋化因子等多种因素的调控。
TGF -β1是目前已知的最重要的致纤维化因子。
TGF -β1/Smad 和TGF -β1/ERK 信号通路是传导TGF -β1的主要信号通路，在肾纤维化中发挥着重要作用。
因此，本文结合最新研究成果就TGF -β1/Smad 和TGF -β1/ERK 信号通路在肾纤维化中的作用及其二者之间的相互关系进行综述。
［关键词］肾纤维化；TGF -β1/Smad 信号通路；TGF -β1/ERK 信号通路；作用机制Research progress of Smad and ERK signaling pathway mediated by TGF -β1in renal fibrosisGUO Shuai ，FANG Jing ，CHEN Zhiqiang.Hebei University of Chinese Medicine ，Shijiazhuang 050000，China［Abstract ］The occurrence and development of renal fibrosis is regulated by growth factors ，cytokines ，chemokines and otherfactors.TGF -β1is the most important fibrogenic factor at present.TGF -β1/Smad and TGF -β1/ERK signaling pathways are the main signaling pathways of TGF -β1，which play an important role in renal fibrosis.Therefore ，combined with the latest research results ，thefunction of TGF -β1/Smad and TGF -β1/ERK signaling pathway in renal fibrosis and the relationship between them was reviewed in this paper.［Key words ］Renal fibrosis ；TGF -β1/Smad signaling pathway ；TGF -β1/ERK signaling pathway ；Mechanism肾纤维化是慢性肾脏疾病的最终共同途径，以细胞外基质（extracellular matrix ，ECM ）的过度沉积为主要特征，与患者的长期预后密切相关。
中药通过调控TGF-β_Smad信号通路防治肾间质纤维化的机制探讨
中药通过调控TGF-β/Smad信号通路防治肾间质纤维化的机制探讨发布时间：2023-01-03T03:22:36.040Z 来源：《中国医学人文》2022年28期作者：唐玮蔚粟敏王琳袁秋菊汤婷* [导读] 肾间质纤维化是各种慢性进行性肾脏疾病发展为终末期肾功能衰竭的共同路径和主要病理表现唐玮蔚粟敏王琳袁秋菊汤婷*（长沙医学院基础医学院湖南长沙 410219）肾间质纤维化是各种慢性进行性肾脏疾病发展为终末期肾功能衰竭的共同路径和主要病理表现[1]。
其主要病理改变有肾小管萎缩或扩张、变形，肾间质成纤维细胞增生，胶原及纤维连结蛋白等细胞外基质（extracellular matrix, ECM）在肾间质内过度沉积[2]。
积极防治肾间质纤维化，对慢性肾脏疾病的转归具有重要意义。
目前，国内外尚无拮抗肾间质纤维化的特效药物，转化生长因子β（transforming growthfactor-β, TGF-β）拮抗剂、TGF-β抗体、胶原合成抑制剂等治疗方法因治疗效果不显著、毒副作用大、费用高昂等原因，仍然无法广泛应用。
近年来传统中医药防治慢性肾脏疾病取得了令人瞩目的成效，在传统中医理论指导的基础上，充分发挥天然药物的独特作用和优势，运用辨证论治的思想体系，并借鉴生物化学与分子生物学、蛋白质组学、基因组学、网络药理学、方剂学等学科的先进研究手段和方法，筛选出诸多具有肯定临床疗效和研究前景的药物。
从单味中药及其有效活性成分到中药复方，对其预防和治疗肾间质纤维化的功效均有广泛的报道，深入分子水平阐明这些中医药的药理基础和作用机制，对研发新的药物靶点和创新肾脏疾病治疗思路有着重要意义。
1.TGF-β/Smad信号转导通路虽然目前肾间质纤维化的发病机制尚未被完全阐明，但各种致纤维化的细胞因子和生成因子被认为在促纤维化过程中发挥重要作用。
其中TGF-β是目前公认且已知作用最强的促纤维化因子，其过表达被认为是肾间质纤维化发展的中心环节[3]。
肾络通对肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响
表达增加有关。肾络通及缬沙坦对其有一定的抑制作用， 肾络通与缬沙坦联合用药， 且 其作用比单一用药更强。
【 关键词 】 活血祛瘀剂 ； 疾病模型 ， 动物 ；肾小球硬 化症 ， 病灶性 ； 皮细胞 ； 上 肾小管 ；一 ａ 平滑肌肌动蛋
白 ；角蛋 白
【 喇彰 ｝ 】Ｒ 盟；菊５ 号 一 Ｒ 卿皿 ３姐 ３邬 强一 Ｒ 旦 谳镝 】Ａ 【 ４ ４ ５ ５ 殛 鸸 文章商 碰！２ （Ｉ２ １ 一 剐 一 １ Ｉ１ １ 阱 ９ ９～２ ２ ５
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肾络通 ２ （ｇｄ经 口灌服 ］ ６ ｋ・） 与模型组［ 予等量 ０ ９ ．％氯化钠注射液经 口灌服 ］并设假 手术组 ， ， 每组 ｌ ０只大鼠。 行 Ｈ 、ａ ｏ Ｅ Ｍ ￣ ｎ染色观察实验 大鼠梗 阻侧 肾脏组织形态学改变， 并用免疫组化及原 为杂交方法检测 实验 大鼠梗 阻 侧 肾脏 ａ 一平滑肌肌动蛋 白（ —Ｓ Ａ Ｚ ￥蛋 白（ Ｋ 在蛋 白或基 因水平的表达。结果 ａ Ｍ ）￣ Ｃ） 模型组及 各治疗组与假 手术组比较均呈现程度 不同的病理损 害（Ｐ ＜０ ０ ）ａ ＭＡ的表达也增 加（Ｐ ＜０ ０ ） Ｃ ． ， —Ｓ ５ ． ， Ｋ的表达 明显减 少 ５ （ ＜００ ） Ｐ ． 。各 治疗组与模型组比较 ， ５ 病理损 害减轻 （Ｐ ＜００ ） ａ Ｍ ． ， —Ｓ Ａ表达 明显减 少（Ｐ ＜００ ） Ｃ ５ ．５ ， Ｋ表达
Smad信号通路影响的研究的开题报告
来氟米特对肾小球硬化中TGF-β/Smad信号通路影响的研
究的开题报告
题目：来氟米特对肾小球硬化中TGF-β/Smad信号通路影响的研究
研究背景：
肾小球硬化是一种严重的肾脏疾病，其特征是肾小球细胞的增殖和基质蛋白的合成。
在肾小球硬化的发展过程中，TGF-β/Smad信号通路发挥着重要的作用。
TGF-β/Smad信号通路能够刺激肾小球内皮细胞、间质细胞和肾小球系膜细胞的胶原蛋白合成，加剧肾小球硬化的程度。
因此，探索影响TGF-β/Smad信号通路的药物，对肾小球硬化的治疗具有重要意义。
研究目的：
本研究旨在探讨来氟米特对肾小球硬化中TGF-β/Smad信号通路的影响，以期为肾小球硬化的治疗提供理论支持。
研究内容：
1. 建立肾小球硬化模型。
2. 分为对照组、低剂量组、高剂量组，每组10只大鼠，其中低剂量组和高剂量组分别以4mg/kg和8mg/kg的剂量灌胃来氟米特，对照组灌胃等量的生理盐水，每日一次，连续8周。
3. 采用光镜和电子显微镜观察大鼠肾脏组织的结构变化。
4. 采用RT-PCR和Western blot分析TGF-β/Smad信号通路相关基因和蛋白的表达水平。
5. 结果分析。
研究意义：
通过对来氟米特对肾小球硬化中TGF-β/Smad信号通路的影响进行研究，可以为肾小球硬化的治疗提供新的思路和策略。
同时，也为相关药物的研发提供参考。
中药对肾间质纤维化BMP—7／smads信号通路影响研究概况
中药对肾间质纤维化BMP—7／smads信号通路影响研究概况肾间质纤维化是多种肾脏疾病发展至终末期引起肾衰竭的共同病理变化，内源性拮抗因子骨形态发生蛋白7（BMP-7）可从多个靶点对肾间质纤维化（RIF）起到明显的抑制作用，其中由smads蛋白介导的BMP-7/smads信号通路是其延缓肾间质纤维化的途径之一。
从BMP-7入手研究抗肾间质纤维化的治疗是目前重要的一个突破口。
现就中药对BMP-7/smad信号通路转导在RIF的研究进行综述，为临床中医药治疗提供参考。
标签：中药；BMP-7/smads；肾间质纤维化肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis，RIF）是目前临床上多种慢性进行性肾脏疾病进展至终末期引起肾功能衰竭的共同病理变化。
肾间质纤维化的形成涉及细胞、细胞因子等多个因素的作用，最后导致大量细胞外基质（Extracellular Matrixc，ECM）在肾间质内沉积。
骨形态发生蛋白（bone-morphorgenetic proteins，BMP）是一种分泌性多功能蛋白，是转化生长因子超家族的成员之一。
BMPs家族成员包括20多种蛋白，而其中BMP-7又与骨、肾脏、眼疾病以及其治疗密切相关[1-6]。
smad是细胞内的信号传递蛋白，现在发现哺乳动物的smad信号蛋白有8种，将其根据结构和功能的不同分为受体激活型Smads（R-smads），通用型Smads（Co-smads）和抑制性Smads（I-smads）三类。
其中Smad1，5，8，4，6，7蛋白又参与骨形态发生蛋白（BMP）和活化素（actinvin）等的信号转导[7]。
目前，BMP-7被认为是重要的抗肾纤维化因子，其可以抑制肾小管上皮细胞转分化、抑制细胞外基质的形成、抑制肾脏上皮细胞凋亡、直接抑制TGF-β1表达、影响TGF-β1/ Smads信号通路的转导、调节促炎性因子等而发挥抗纤维化的作用[8-12]。
Smad信号转导通路的影响的开题报告
化浊解毒法对肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号转导
通路的影响的开题报告
题目：化浊解毒法对肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号转导通路的影
响
摘要：
肝纤维化是肝脏长期损伤、炎症和再生反应的结果，导致肝脏结构
和功能的改变。
化浊解毒法是传统中药中应用广泛的一种治疗肝病的方法。
它具有清热解毒、化瘀消肿、润燥解毒、滋阴养肝等作用。
本研究
旨在探究化浊解毒法对肝纤维化大鼠TGF-β/Smad信号转导通路的影响。
方法：
将健康SD大鼠和用二甲基亚砜诱导肝纤维化大鼠随机分组，分别注射化浊解毒法和生理盐水。
观察每组大鼠的肝组织病理学变化，检测相
关指标，包括肝功能指标、炎症因子和氧化应激指标，并通过Western blot等方法检测TGF-β/Smad信号转导通路的相关蛋白表达水平。
预期成果：
预计化浊解毒法可以显著减缓肝纤维化大鼠的肝功能损伤、减少炎
症反应和氧化应激损伤，并且可以通过下调TGF-β/Smad信号转导通路
的相关蛋白表达水平来减轻肝纤维化。
意义：
本研究可以探索化浊解毒法在治疗肝纤维化中的作用机制，为开发
新型的中药治疗肝病提供理论依据。
TGF-β1介导的Smad通路在肾脏纤维化中的作用及机制
研究论著TGF-β1介导的Smad 通路在肾脏纤维化中的作用及机制赵亚亚,钟成,李悦,宋伟伟,赵卫红*(南京医科大学第一附属医院老年肾科,南京210029) 摘要:目的探讨TGF-β1介导的Smad 通路在肾脏纤维化中的作用及机制㊂方法不同浓度的TGF-β1刺激肾小管上皮细胞48h ,分别光镜㊁Western Blot ㊁细胞免疫荧光观察肾脏纤维化相关指标变化,以及Smad 通路蛋白表达情况等㊂结果光镜下TGF-β1浓度为10ng /ml 时,可明显诱导肾小管上皮细胞纤维化,并且Western Blot ㊁细胞免疫荧光显示其α-SMA 表达量增加,E-cadherin 表达量减少;Smad 通路中,p-Smad2㊁p-Smad3表达量增加㊂肾脏纤维化的细胞模型中,Zeb1㊁Snail 的表达量增加,miR-200c 的表达量降低㊂结论一定浓度的TGF-β1可诱导肾小管上皮细胞纤维化,其主要通过激活下游的Smad 通路,可能与Zeb1㊁Snail 的表达量增加㊁miR-200c 的表达量降低有关㊂ 关键词: TGF-β1; Smad ; 肾脏; 纤维化 中图分类号:R572.2 文献标志码:A 文章编号:1001-5248(2018)04-0427-05基金项目:国家重点基础研究发展计划(No.2013CB530803)国家自然科学基金资助项目(No.H0511-********,81670677)中华医学会临床医学科研专项资金(No.150********)作者简介:赵亚亚(1990-),女,硕士研究生㊂从事肾脏纤维化及肾脏老化㊁血液透析时机研究㊂*通信作者E-mail:zhaoweihongny@The Role and Mechanism of TGF-β1-mediated Smad Pathway in Renal FibrosisZHAO Yaya,ZHONG Cheng,LI Yue,SONG Weiwei,ZHAO Weihong(Division of Nephrology,Department of Geriatric,the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029,China) ABSTRACT :Objective To clarify the role of TGF-β1-mediated Smad pathway in renal fibrosis.Methods different concen⁃trations of TGF-β1stimulate renal tubular epithelial cells 48hours,light microscopy,Western Blot,cell immunofluorescence observation of renal fibrosis Changes in indicators,and Smad pathway protein expression.Results The expression of α-SMA was increased and the expression of E-cadherin was decreased by Western Blot and immunofluorescence at the time of TGF-β1con⁃centration of 10ng /ml,which could significantly induce fibrosis of renal tubular epithelial cells.p-Smad2,p-Smad3expression increased in the Smad pathway.In addition,the expression of Zeb1,Snail was increased in the cell model of renal fibrosis.Con⁃clusion A certain concentration of TGF-β1can induce renal tubular epithelial fibrosis,which mainly through the activation of thedownstream Smad pathway may be related to the increased expression of Zeb1,Snail,and the decreased expression of miR-200c. KEY WORDS :TGF -β1;smad ;kidney ;fibrosis 随着人们生活方式的改变,慢性肾脏病(chronickidneydisease,CKD)已经成为威胁人类公共健康的主要疾病之一㊂肾小管间质纤维化是慢性肾脏疾病进行性发展的关键因素,细胞炎症介质释放㊁氧化应激等也参与了其病理过程〔1〕㊂肾小管上皮细胞间充质转化(epithelial myofibroblast transdifferentiation,EMT)是肾小管上皮细胞失去上皮细胞表型,细胞间连接消失,细胞骨架重新构建,细胞迁移及浸润能力增强,转化为间质细胞的过程〔2〕㊂转化生长因子β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)是促进肾脏纤维化的关键因子,Smad 蛋白是其TGF-β家族下游重要的信号转导蛋白,多项研究表明TGF -β1/Smad 通路在肾脏纤维化的过程中起到关键性的作用〔3〕,本研究进一步验证TGF -β1/Smad 通路在肾脏纤维化中的作用及机制,从而预测相应的靶基因,为延缓或防止肾脏纤维化提供新的治疗方案㊂1 材料与方法1.1 材料 人肾脏近曲小管上皮细胞HK-2(美国ATCC 公司),胎牛血清(FBS,杭州四季青生物工程材料有限公司),DMEM /F12培养基(Gibco 公司),从Peprotech 公司购买TGF-β1㊁α-SMA㊁E-cadher⁃in㊁Smad 2㊁p-Smad 2㊁Smad 3㊁p-Smad 3等㊂1.2 细胞培养及分组 HK-2细胞于含10%FBS 的DMEM /F12培养基中,并置于37℃㊁5%CO 2条件下使其贴壁培养㊂细胞融合至80%~90%时,用0.25%胰酶消化㊂分组:(1)HK-2组;(2)HK-2+TGF -β1(5ng /ml )组;(3)HK -2+TGF -β1(10ng /ml)组;(4)HK-2+TGF-β1(15ng /ml)组㊂1.3 Western Blot 检测各组蛋白表达量 各组分别取30μg 蛋白,进行凝胶电泳(SDS-PAGE)直至蛋白电泳至槽的下端,将蛋白电转移至0.22μm 的PVDF 膜上㊂5%的牛奶封闭(4℃,2h),分别用一抗α-SMA(1∶500)㊁E-cadherin(1∶500)㊁Smad 2(1∶500)㊁p-Smad 2(1∶500)㊁p-Smad 3(1∶500)㊁Smad 3(1∶500)㊁GAPDH(1∶1000)孵育(4℃,过夜),洗膜(10min,3次)后,以1∶10000稀释的二抗室温孵育2h,再次洗膜(10min,3次)㊂ECL 底物化学发光(Multi Sciences)显色后,用Tanon Gis 软件进行分析㊂1.4 细胞免疫荧光 HK2细胞制成均匀细胞悬液,接种于放置有玻片的6孔板中,每孔约3ml 细胞悬液㊂37℃孵育24h,待细胞接近60%~70%汇合,PBS 洗3次㊂4%多聚甲醛固定30min(室温),血清封闭液,37℃,60min㊂一抗4℃过夜㊂滴加0.01MPBS 1∶100稀释的生物素化二抗,37℃,60min㊂滴加0.01M PBS 1∶100稀释的SABC -FITC,30min,PBS 洗3遍,将玻片移至载玻片上,加入抗荧光淬灭剂,甘油封片,荧光显微镜观察㊂1.5 RT -PCR 收集HK-2细胞后,加入Trizol 试剂(Invitrogen,美国)裂解细胞,提取RNA,后采用Takara 逆转录试剂盒对总RNA 进行逆转录㊂得到的cDNA 进行常规PCR 反应,从而检测目的基因的表达水平㊂1.6 统计学处理 采用SPSS 19.0统计学软件处理及分析数据,组间比较采用两独立样本的t 检验,P <0.05表明差异有统计学意义㊂2 结果2.1 不同浓度TGF -β1诱导肾脏纤维化模型2.1.1 光镜下细胞形态学改变 以不同浓度(5ng /ml㊁10ng /ml㊁15ng /ml)的TGF-β1分别刺激HK-2细胞,可见诱导48h 后,随浓度增加HK-2细胞的正常铺路石样形态消失,呈成纤维细胞形态改变,即细胞排列不规则㊁长梭形改变,5ng /ml 时细胞形态变化不大,10ng /ml 时细胞纤维化形态较明显,15ng /ml 时细胞凋亡现象明显(图1)㊂2.1.2 Western blot 检测TGF-β1诱导HK-2时的α-SMA㊁E-cadherin 蛋白水平变化 Western blot 结果显示:随着TGF-β1浓度的增加,α-SMA 的蛋白表达量相较对照组增加,E-cadherin 的表达量减少,差异有统计学意义(P <0.05),TGF -β1浓度为15ng /ml 时细胞凋亡较多,因此α-SMA㊁E-cadherin 蛋白表达量相较前组变化不大(图2)㊂图1 不同浓度的TGF-β1刺激肾小管上皮细胞后的形态学改变图2 不同浓度TGF-β1刺激HK-2细胞后的蛋白表达情况与无TGF-β1刺激组比较:*P <0.05,**P <0.012.1.3 细胞免疫荧光检测TGF-β1诱导HK-2时的α-SMA㊁E-cadherin 蛋白水平变化 细胞免疫荧光结果显示:TGF -β1刺激HK -2细胞,相较其它组,10ng /ml 时细胞α-SMA 的蛋白表达量(红色荧光)相对较多㊁E -cadherin 的蛋白表达量(绿色荧光)相对较少(图3)㊂且与对照组相比,差异有统计学意义(P <0.05)㊂2.2 TGF -β1诱导肾脏纤维化的机制 Western blot 检测smad 通路的相关蛋白表达水平,结果显示:HK-2组低表达p-smad2/3;TGF-β1刺激后,p-smad2/3表达量增加,且有统计学意义(P <0.05)(图4)㊂对于TGF-β1诱导的纤维化模型组,Zeb1㊁snail 高表达,且具有统计学意义(P <0.05)(图5-A),并且纤维化模型组中,miR-200c 的表达量降低(图5-B)㊂图3 不同浓度TGF-β1刺激HK-2细胞后的细胞免疫荧光检测结果与无TGF-β1刺激组比较:*P <0.05,**P <0.01,***P <0.000图4 不同浓度TGF-β1刺激HK-2细胞后的Western Blot 结果与无TGF-β1刺激组比较:*P <0.05,**P <0.01图5 TGF-β1诱导HK-2细胞后的Western Blot 及RT-PCR 结果与无TGF-β1刺激组比较:*P <0.05,***P <0.0003 讨论 肾脏纤维化是慢性肾脏病患者最主要的病理特征,表现为细胞外基质的大量沉积,炎症细胞浸润,成纤维细胞增生,导致肾间质的纤维化及肾小球硬化㊂其中上皮细胞间充质转化(EMT)即血管内皮细胞向肌成纤维细胞的转分化是导致肾纤脏维化发生的重要因素〔4〕,近年来发现TGF-β1/ Smad信号通路可介导EMT的发生,从而促进肾脏纤维化的发展㊂转化生长因子-β1(TGF-β1)作为TGF-β超家族的一员,是一种具有多项调节功能的纤维形成生长因子,几乎可在体内所有细胞内合成,在EMT过程中起到关键性作用㊂有研究表明,TGF-β可引起miRNA和DNA甲基转移酶的表观遗传学异常,从而抑制Klotho并增强肾纤维化〔5〕㊂又有研究表明, TGF-β1诱导肾脏EMT,而miR-200b可以逆转肾脏纤维化的进展〔6〕㊂我们课题组前期的实验表明,骨髓间充质干细胞(MSC)及其分泌的微泡(MV)可延缓TGF-β1诱导的肾脏纤维化,α-SMA在mRNA 和蛋白水平表达量降低,E-cadherin在mRNA和蛋白水平表达量增加〔7-8〕㊂Smads是TGF-β家族的下游信号转导蛋白,可以将TGF-β信号介导的相关蛋白由细胞膜直接转导到核内,活化的Smad2㊁Smad3与Smad4形成三聚体,进入细胞核内,促进转分化相关基因高表达,从而引起细胞组织纤维化㊂Dalia等〔9〕在研究米氮平抑制5-HT引起的肝脏纤维化过程中发现,p-Smad3表达量下降,说明米氮平可以抑制TGF-β介导的smad通路在肝脏纤维化中的作用㊂另有研究表明,在体外,Smad2和Smad3受较多致纤维化因子的影响,通过基因敲除Smad3后,可以抑制小鼠和细胞的纤维化进展〔10〕㊂此外,Li等〔11〕在研究TGF-β1诱导的肾脏纤维化模型中,Smad信号通路起到关键性的作用,p-Smad2表达增加,Smad7蛋白表达降低,并且过表达Smad7可以抑制TGF-β信号的传导,主要是由于其竞争性的与TβRⅠ结合,降解活化的TβRⅠ,从而反馈性抑制Smad2/3的磷酸化㊂这表明TGF-β1/Smad信号通路在肾间质纤维化的发生发展中起到关键作用,我们的研究再次证实了在TGF-β1介导下肾小管上皮细胞通过Smad通路诱导肾脏纤维化,与以往的研究相符㊂转录因子snail是一种含有锌指结构的DNA结合蛋白,能诱导上皮细胞间质转分化,其激活后进入细胞核与E-钙黏蛋白启动子中特异性的DNA序列结合,使E-钙黏蛋白的转录受到抑制,其蛋白表达下降,最终导致上皮细胞转分化〔12〕㊂ZEB家族也属于锌指蛋白类,过表达Zeb1能够下调上皮细胞连接蛋白㊁E-钙黏蛋白的表达㊂有研究表明,Zeb1和Zeb2通过与E-cadherin基因启动子上游的序列特异性结合,从而抑制E-cadherin表达,导致上皮细胞向间质细胞表型转化,即发生EMT的现象〔13〕㊂另有多项研究表明,miR-200家族可以通过下调ZEB的表达进而抑制肿瘤细胞EMT的进展〔14-15〕㊂目前,最新研究表明,miR-200可以通过抑制锌指蛋白转录子snail1来促进细胞维持上皮表型,抑制EMT进程〔16〕㊂本研究中,TGF-β1诱导的肾脏细胞纤维化的模型中,snail㊁Zeb1的蛋白表达较对照组升高,促进上皮间充质转分化的发生,miR-200c的表达量降低,由此我们推测过表达miR-200c可能在延缓肾脏纤维化的进程中起到一定的作用,此方面的研究相对较少,我们课题组还在进一步的研究中㊂本研究明确了TGF-β1诱导肾脏纤维化,并探讨其相关机制,适宜浓度的TGF-β1可以诱导肾脏细胞纤维化,主要是由于激活Smad通路及其下游相关蛋白的表达增加,但仍需要深入研究,以便为临床上延缓肾脏纤维化提供更加明确的理论依据㊂参考文献:〔1〕 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移植肾纤维化与TGFβ1-Smadp38MAPK信号通路的研究进展
收稿日期:２０１９Ｇ１０Ｇ０８基金项目:河南省高等学校重点科研项目计划(１９A ３６００１０)作者简介:汪绪祥(１９９０ ),男,硕士研究生,主要从事肾移植的基础与临床研究.通信作者:王锁刚,副主任医师,副教授,E Ｇm a i l :w a n g s u o g a n g２００５＠１２６．c o m .移植肾纤维化与T G F β１ＧS m a d /p ３８M A P K 信号通路的研究进展汪绪祥a ,王锁刚b(河南中医药大学a ．第一临床医学院２０１７级硕士研究生;b ．第一附属医院泌尿外科,郑州４５０００３)摘要:慢性移植肾病(C A N )是移植肾远期失去功能或者功能不全的首要原因,严重影响了异体肾移植受者的生活质量和长期存活,而移植肾纤维化是C A N 病理改变的核心.T G F β１ＧS m a d /p ３８MA P K 信号传导途径可以介导肾小管上皮Ｇ间质转分化的全过程.如何预防和减缓移植肾纤维化进展至C A N 仍是世界性的难题.文章总结了移植肾纤维化与T G F β１ＧS m a d /p ３８MA P K 信号通路的关系以及防治C A N 的理论和实验依据.关键词:慢性移植肾病;移植肾纤维化;T G F β１ＧS m a d /p ３８MA P K 信号通路;机制中图分类号:R ６９２㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:２０９５Ｇ４７２７(２０２０)０６－００８２－０４D O I :１０．１３７６４/j．c n k i ．n c d m．２０２０．０６．０１８R e s e a r c hP r o g r e s s i nT r a n s p l a n t e dK i d n e y Fi b r o s i s a n dT G F β１ＧS m a d /p ３８M A P KS i g n a l i n g P a t h w a y W A N GX u Ｇx i a n g a ,W A N GS u o Ｇg a n gb(a ．M a s t e r sD e g r e e ２０１７o f t h eF i r s t C l i n i c a lM e d i c a l C o l l e g e ;b ．D e p a r t m e n t o f U r o l o g y o f th e F i r s tA f f i l i a t e d H o s p i t a l ,H e n a nU n i v e r s i t y o f C h i n e s eM e d i c i n e ,Z h e n gz h o u ４５０００３,C h i n a )A B S T R A C T :C h r o n i c a l l o g r a f t n e p h r o p a t h y (C A N ),a l e a d i n g c a u s eo f l o n gＧt e r ml o s so f f u n c t i o n o r d y s f u n c t i o n i n t r a n s p l a n t e dk i d n e y s ,s e r i o u s l y a f f e c t s t h e q u a l i t y o f l i f e a n d l o n gＧt e r ms u r v i v a l o f a l l o g e n e i ck i d n e y t r a n s p l a n t r e c i p i e n t s ．T r a n s p l a n t e dr e n a l f i b r o s i s i s t h ec o r eo f p a t h o l o gi c a l c h a n g e s i nC A N．T h eT G F β１ＧS m a d /p ３８MA P Ks i g n a l i n gp a t h w a y m e d i a t e s t h ew h o l e p r o c e s so f r e n a l t u b u l a re p i t h e l i a l Ｇm e s e n c h y m a lt r a n s i t i o n ．H o w t o p r e v e n ta n ds l o w t h e p r o gr e s s i o n o f t r a n s pl a n t e d r e n a l f i b r o s i s t oC A Ni s s t i l l aw o r l d w i d e p r o b l e m．T h i s a r t i c l e r e v i e w s t h e r e l a t i o n Ｇs h i p b e t w e e nt r a n s p l a n t e dr e n a lf i b r o s i sa n d T G F β１ＧS m a d /p ３８MA P K s i g n a l i n g p a t h w a y a n d s u mm a r i z e s t h e o r e t i c a l a n d e x pe r i m e n t a l b a s i sf o r t h e p r e v e n t i o na n d t r e a t m e n t o fC A N．K E Y W O R D S :c h r o n i c a l l og r a f t n e ph r o p a t h y ;t r a n s pl a n t e d r e n a l f i b r o s i s ;T G F β１ＧS m a d /p ３８MA P Ks i g n a l i n gp a t h w a y ;m e c h a n i s m ㊀㊀针对各种原因导致肾脏功能衰竭,肾脏移植已成为终末期肾脏疾病(E S R D )的最佳治疗方法.随着肾移植技术㊁组织匹配和器官保存技术逐步改进以及新型免疫抑制剂的应用,围术期并发症和急性排斥反应的发生率均大大降低,极大地增加了肾脏移植后的近期生存比率.造成慢性移植肾病(C A N )㊁使患者重返透析和再移植的主要原因是肾小管间质和内膜纤维化并最终导致肾衰竭[１].肾脏纤维化的不可逆转导致需要肾脏移植的患者人数增加,进一步加剧了器官短缺的矛盾.研究移植肾纤维化的机制,寻找有效的措施来促进和改善移植受体和移植肾的长期存活是重要的研究课题.２８南昌大学学报(医学版)２０２０年第６０卷第６期㊀J o u r n a l o fN a n c h a n g U n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e s )２０２０,V o l ．６０N o ．６１㊀移植肾纤维化在C A N发生发展中的作用㊀㊀纤维化过程是一个复杂的病理过程,涉及多种常见因素,累及许多重要器官,如肾㊁肝㊁肺㊁心以及皮肤等.尽管纤维化疾病可以发生在不同器官中,但其发生过程却非常相似.各种原发性和继发性肾脏疾病可引起肾间质炎性细胞浸润㊁成肌纤维细胞聚集㊁肾小管间质细胞活化㊁肾小管上皮细胞肌细胞转分化(T E MT)和凋亡.生长因子与细胞因子失衡㊁血管活性物质和纤维化细胞因子的过度表达㊁细胞外基质(E C M)的产生增加共同导致正常的组织破坏,严重损害肾功能并最终发展为终末期肾病[２Ｇ３].移植肾纤维化是慢性移植肾病的核心要素,也是判断移植物损伤程度的重要指标.但是与最初的肾纤维化相比,移植肾纤维化的影响因素更多,形成过程更为复杂.２㊀移植肾纤维化的发生机制㊀㊀肾小管间质纤维化是最重要的间质病变,是多发性C K D发展为终末期肾病的常见途径.有研究[４]表明肾间质成纤维细胞主要有３种来源:１)肾脏固有的间质细胞;２)循环获得的间充质细胞;３)肾小管上皮间质转分化而来.肾小管上皮间质转分化在肾小管间质纤维化中的作用越来越受到重视.肾小管上皮间质转分化是指病理条件下肾小管上皮细胞外环境的失衡ң上皮细胞形态表达抑制㊁成肌纤维细胞表型基因释放ң上皮细胞的基底膜被破坏,最终各种因素互相作用互为因果使得这些细胞失去其原始的上皮特性并变成间充质表型.细胞失去了离子和液体的转运功能,并转化为成纤维细胞,从而重塑了基质.瘢痕的形成主要是由于成纤维细胞的作用使E C M过度聚集所致.肾小管间质纤维化的病理生理过程主要包括细胞激活和损伤阶段㊁纤维形成的信号转导阶段㊁纤维形成阶段和肾脏损害阶段,这与瘢痕形成的机制非常相似.移植肾间质纤维化是由作用在移植肾上的多种致病因素共同导致的,导致肾功能下降,并逐渐发展为肾功能衰竭.肾功能恶化的程度与肾小球滤过率成正比.近年来研究[５Ｇ８]发现肾间质纤维化的主要机制包括:激活肾小管上皮细胞向间充质细胞的转分化㊁激活血管紧张素系统(R A S)和缺血缺氧,直到后期大多数移植的肾脏疾病都会有相应的症状和体征.移植肾间质纤维化是不可逆的㊁逐步的发展.因此,如何在确定病因后采取有效措施延缓肾间质纤维化的发展已成为国内外器官移植专家学者当前研究的重点和难点.大量研究[９Ｇ１１]表明,肾间质纤维化的发病机制主要归因于肾间质过剩中E C M的积累导致肾组织和结构破坏,而这一切根本原因是各种致病因素和损伤后导致修复功能障碍引起的移植肾损害.移植肾纤维化可能是由于多种原因引起的,例如移植肾的内在细胞和免疫细胞凋亡㊁炎症反应㊁氧化应激反应以及纤维化细胞因子失调.可以看出移植肾纤维化是多种因素共同作用的结果,涉及局部的微环境和全身的血液动力学㊁免疫学㊁新陈代谢等多种因素,围绕它的研究有利于揭示移植肾纤维的发生机制.３㊀T G Fβ１ＧS m a d/p３８M A P K信号通路在移植肾纤维化形成中的作用㊀㊀转化生长因子β１(T G FＧβ１)是一种多功能生长因子,由２个通过二硫键连接的分子量为１２５００的亚基组成的二聚体.其在体内可以通过肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞和多种细胞合成并在许多生理过程中起着非常重要的作用,如细胞增殖㊁凋亡和E C M产生的调节.T G FＧβ的３个亚型(T G FＧβ１㊁T G FＧβ２和T G FＧβ３)与Ⅱ型T G FＧβ受体结合,从而促进Ⅰ型T G FＧβ受体的募集和酸化,最终激活下游通路.T G FＧβ亚型在结构和生理功能上仍然存在矛盾或者重叠的方面,例如它可以促进肿瘤的进展. T G FＧβR１激酶激活后ң磷酸化受体调节的S m a d s (R S m a d s)ң形成R S m a d s与常规S m a d s(C oＧS m a d s)的寡聚复合物ң寡聚复合物转移到细胞核中ң细胞核中作用调节靶基因的转录ң激活抑制型S m a d s(IＧS m a d s),IＧS m a d s对T G FＧβ信号传导的传递产生负调控.在哺乳动物中,S m a d２和S m a d３是T G FＧβ激活素特异性IＧS m a d s,而S m a d１/５/８是骨形态发生蛋白(B M P)特异性RＧS m a d s.有研究[１２Ｇ１５]表明T G FＧβ主要通过S m a d３㊁C O L１A２㊁C O L３A１㊁C O L５A１㊁C O L６A１㊁C O L６A３和C O L２A１的启动子区域中的S m a d３结合序列诱导E C M的积累,这可能取决于S m a d３的作用导致T G FＧβ诱导的细胞外反应.T G FＧβ是调节细胞生长和转化㊁促进炎性细胞浸润(单核细胞,巨噬细胞,淋巴细胞)㊁刺激成纤维细胞分泌E C M成分㊁抑制胶原酶转录并增加金属蛋白酶组织抑制剂(T I M P S)合成的多肽,其能降低基质金属蛋白酶２(MM PＧ２)㊁基质金属蛋白酶９(MM PＧ９)的活性并抑制E C M的降解,在肾间质中E C M的沉积中起重要作用[１６].T G FＧβ超家族成员的受体包括Ⅰ型和Ⅱ型受体,并且属于丝氨酸/苏氨３８汪绪祥等:移植肾纤维化与T G Fβ１ＧS m a d/p３８MA P K信号通路的研究进展酸激酶受体家族.在肾小管上皮细胞中,引起肾纤维化的T G FＧβ１的下游信号主要包括S m a d蛋白/整合素连接激酶(S m a d/I L K)㊁p３８MA P K和单体G蛋白/丝氨酸或苏氨酸激酶(R h o A/R o c k３)途径.作为诱导E MT的最有效的细胞因子,T G FＧβ１主要通过T G FＧβ/S a m d信号传导途径调节细胞核下游基因的表达[１７].p３８M A P K(α㊁β㊁γ和δ)即丝裂原活化蛋白激酶途径,是M A P K家族的成员,可以被各种环境应激反应和炎性细胞因子激活.其他M A P K级联膜的近端成分是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(M A P K K K),它是典型的M A P K激酶的激酶(M E K K)或混合谱系激酶(M L K).M A P K K K磷酸化并激活MK K３/６,后者是p３８MA P K激酶.MK K３/６也可以在凋亡因子的刺激下被凋亡信号调节酶１(A S K１)直接激活. p３８MA P K参与调节热休克蛋白(H S P２７)㊁MA P K 活化蛋白激酶Ｇ２(MA P K A P KＧ２或者MK２)㊁MA P K活化蛋白激酶Ｇ３(MA P K A P KＧ３或者MK３)和其他几个转录因子,包括重组人活化转录因子Ｇ２(A T FＧ２)㊁重组人细胞信号转导与转录激活因子Ｇ１(S T A T１)㊁M a x/M y c复合体㊁肌细胞增强因子Ｇ２(M E FＧ２)和E L KＧ１蛋白等[１８].p３８MA P K途径参与了糖尿病肾病发病的整个过程[１９].p３８MA P K途径可以在高葡萄糖环境中直接激活,并与该途径的上游因子T G FＧβ１相互作用.一方面,p３８MA P K信号通路可以增强T G FＧβ１的活性导致E C M中主要成分纤维连接蛋白(F N)的表达增加;另一方面,T G FＧβ１可以使p３８MA P K自磷酸化并激活其下游转录因子环状单磷酸腺苷结合蛋白(C R E B).C R E B可以与下游F N激活结合使用,亚基上的环状腺苷单磷酸反应上调了F N m R N A的表达,从而增加了F N的表达,进一步加重了肾纤维化的发生,最终导致了C K D[２０].因此,p３８MA P K信号转导通路T G FＧβ１的相互作用在整个C K D肾纤维化的形成中起着重要作用.T G FＧβ１/p３８MA P K通路的表达与肾纤维化密切相关,p３８MA P K蛋白是MA P K中的信号传导途径,它可以激活核转录因子.T G FＧβ１与p３８MA P K有协同作用,T G FＧβ１可以增强p３８MA P K 的生物学功能.在慢性肾间质纤维化发展过程中, T G FＧβ１是肾间质纤维化的主要激活剂,而p３８MA P K在细胞基质和细胞核中含量丰富.在肾间质纤维化中,p３８MA P K可以作用于T G FＧβ１途径以促进肾间质纤维化,两者之间的相互作用抑制炎性介质的产生和分泌,从而进一步加重肾间质纤维化程度,加重肾脏损害并促进肾间质纤维化的发展.肾间质纤维化的预防和治疗主要通过影响促纤维化因子的活性,阻断T G FＧβ１和p３８MA P K途径来影响肾间质纤维化的进展[２１Ｇ２５].近年来,对移植肾纤维化的探索已进入细胞分子科学的水平.由于上皮细胞周围环境的变化以及导电通路之间的相互作用,各种导电通路的相互作用机制还有待进一步研究.４㊀移植肾纤维化的防治进展㊀㊀目前尚无真正有效的方法治疗移植肾纤维化.因此,深入研究预防和治疗肾纤维化的实用策略,积极控制肾纤维化的临床进展以及改善并延长移植肾的长期存活率已成为国内外学者研究肾纤维化的病理机制的重点和热点.但是,目前在治疗C A N的方法中尚无统一的临床途径,其主要的治疗方法包括[２６]:限制蛋白质饮食㊁增加或减少环孢素(C s A)的剂量或使用他克莫司(F K５０６)替代C s A㊁调节激素和免疫抑制药物的剂量㊁血管紧张素转化酶抑制剂(A C E I)或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(A R B)的应用㊁调控血压㊁调控血脂和抗凝等.然而,由于C A N 的影响因素众多㊁机制更为复杂,传统的凭经验增强的免疫抑制疗法不能有效地预防C A N[２７].因此,深入研究实用的C A N综合防治策略可以提高移植肾的长期生存率,提高移植肾患者的生活质量.预防和治疗C A N发展为终末期肾脏疾病是一个世界性的问题.预防和治疗C A N的主要措施是早期有效的药物干预细胞转导,以此抑制肾间质和动脉内膜纤维化的发生.尽管免疫抑制疗法取得了巨大的进步,通过新的免疫抑制剂杀死淋巴细胞和抑制淋巴细胞的增殖和活化实现抗排斥,但尚未有效预防抗原依赖性和非抗原依赖性因子,并且大多数免疫抑制剂的价格昂贵㊁对C A N缺乏疗效会引起严重的不良反应,例如骨髓抑制㊁肝功能损害㊁感染㊁高血压㊁高脂血症和高血糖症.总之,目前尚无真正有效的C A N药物治疗方法,因此从源头上探索预防和延缓肾纤维化移植和抑制C A N发生发展的有效策略是亟待解决的问题.５㊀展望㊀㊀肾纤维化的移植在C A N的发生发展中起重要作用.T G Fβ１ＧS m a d/p３８MA P K信号通路在肾纤维化发展中起重要作用,因此有必要寻找有效的药４８南昌大学学报(医学版)２０２０年１２月,第６０卷第６期物来调节T G Fβ１ＧS m a d/p３８MA P K信号,该途径已成为治疗C A N的研究目标.若能够缓解供体器官短缺的矛盾,为社会和患者节省大量的医疗资源和巨额资金,对于帮助建设和谐社会㊁健康中国具有重大的经济和社会意义.因此当下及将来的目标是:探索针对性强㊁疗效确切㊁不良反应少的新方法或者新药,力求做到防治并举并完善一整套在科学上可行㊁安全有效㊁易于掌握和低成本的方法并推广应用.参考文献:[１]㊀S T E G A L L M D,C O R N E L L L D,P A R K W D,e ta l．R e n a la l l o g r a f th i s t o l o g y a t１０y e a r sa f t e rt r a n s p l a n t a t i o ni nt h et a c r o l i m u s e r a:e v i d e n c e o f p e r v a s i v ec h r o n i c i n j u r y[J]．A m J T r a n s p l a n t,２０１８,１８(１):１８０Ｇ１８８．[２]㊀Y A N G M,C H E NG,Z H A N GX,e t a l．I n h i b i t i o n o f c l a s sⅠH D A C sa t t e n u a t e s r e n a l i n t e r s t i t i a l f ib r o s i s i n am u r i n em o d e l[J]．P h a r m aＧc o l o g i c a lR e s e a r c h,２０１９,１４２(１４２):１９２Ｇ２０４．[３]㊀L U X i a n y u a n,Z O U W e i,D O N G Y a q i a n,e t a l．A n t iＧr e n a l f i b r oＧs i s e f f e c to f a s p e r u l o s i d i ca c i dv i aT G FＧβ１/s m a d２/s m a d３a n d N FＧκBs i g n a l i n gp a t h w a y s i n a r a tm o d e l o f u n i l a t e r a l u r e t e r a l o b s t r u c t i o n[J]．P h y t o m e d i c i n e,２０１９,５３(５３):２７４Ｇ２８５．[４]㊀L IM,Z H O U H,D I J,e t a l．I L K p a r t i c i p a t e s i n r e n a l i n t e r s t i t i a lf i b r o s i sb y a l t e r i ng th e p h e n o t y p eo fr e n a l t u b u l a re pi t h e l i a lc e l l s v i aT G FＧβ１/s m ad p a t h w a y[J]．E u rRe v M e dP h a r m a c o lS c i,２０１９,２３(１):２８９Ｇ２９６．[５]㊀L A N R,Z HA N G Y,WU T,e ta l．X i a oＧX uＧM i n g d e c o c t i o n r e d u c e d m i t o p h a g y a c t i v a t i o n a n d i m p r o v e d m i t o c h o n d r i a lf u n c t i o n i n c e r e b r a l i s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o n i n j u r y[J]．B e h a vN e u r o l,２０１８,２０１８:４１４７５０２．[６]㊀J A N K A U S K A SSS,S I L A C H E V D N,A N D R I A N O V A N V,e t a l．A g e d k i d n e y:c a nw e p r o t e c t i t?A u t o p h a g y,m i t o c h o n d r i aa n d m e c h a n i s m so f i s c h e m i c p r e c o n d i t i o n i n g[J]．C e l lC y c l e,２０１８,１７(１１):１２９１Ｇ１３０９．[７]㊀X UJ,Y U TT,Z HA N GK,e t a l．H G Fa l l e v i a t e s r e n a l i n t e r s t iＧt i a l f i b r o s i s v i a i n h i b i t i n g t h eT G FＧβ１/S MA D p a t h w a y[J]．E u r R e vM e dP h a r m a c o l S c i,２０１８,２２(２２):７６２１Ｇ７６２７．[８]㊀WA A S D O R P M,D ER O O I JD M,F L O R Q U I NS,e t a l．P r o t eＧa s eＧa c t i v a t e d r e c e p t o rＧ１c o n t r ib u t e s t or e n a l i n j u r y a n d i n t e rＧs t i t i a l f i b r o s i sd u r i n g c h r o n i co b s t r u c t i v en e p h r o p a t h y[J]．JC e l lM o lM e d,２０１９,２３(２):１２６８Ｇ１２７９．[９]㊀张璐,王慧娟,孙可一,等．I LＧ１７在肾间质纤维化中的作用初探[J]．现代免疫学,２０１２,３２(４):２９３Ｇ２９８．[１０]㊀林智峰,杨晓萍．肾间质纤维化与整合素连接激酶[J]．实用医学杂志,２００７(１５):２４４２Ｇ２４４４．[１１]㊀郭文杰,许静．肾脏纤维化的发病机制和治疗新进展[J]．国际泌尿系统杂志,２００７(３):４２２Ｇ４２５[１２]㊀P A L M,S A C H D E V A M,G U P T A N,e t a l．L e a de x p o s u r e i nd i f fe r e n to r g a n sof m a mm a l sa n d p r e v e n t i o n b y C u r c u m i nＧN a n o c u r c u m i n:a r e v i e w[J]．B i o lT r a c eE l e m R e s,２０１５,１６８(２):３８０Ｇ３９１．[１３]㊀C A R O C C IA,C A T A L A N O A,L A U R I A G,e t a l．L e a d t o x i c iＧt y,a n t i o x i d a n t d e f e n s e a n d e n v i r o n m e n t[J]．R e vE n v i r o nC o nＧt a m T o x i c o l,２０１６,２３８:４５Ｇ６７．[１４]㊀WA N G H,WA N GZK,J I A O P,e t a l．R e d i s t r i b u t i o no f s u bＧc e l l u l a r c a l c i u ma nd i t sef f e c t o n a p o p t o s i s i n p r i m a r y c u l t u r e so f r a t p r o x i m a l t u b u l a r c e l l s e x p o s e d t oL e a d[J]．T o x i c o l o g y,２０１５,３３３:１３７Ｇ１４６．[１５]㊀H O R B E L T D,D E N K I S A,K N A U SP．A p o r t r a i to fT r a n sＧf o r m i ng G r o w t hF a c t o rβs u p e r f a m i l y s i g n a l l i n g:B a c k g r o u n dm a t t e r s[J]．I n t JB i o c h e m C e l l B i o l,２０１２,４４(３):４６９Ｇ４７４．[１６]㊀L V X H,Z H A O D H,C A I SZ,e t a l．A u t o p h a g yp l a y s a p r oＧt e c t i v e r o l e i n c e l l d e a t ho f o s t e o b l a s t s e x p o s u r e t o l e a dc h l oＧr i d e[J]．T o x i c o l L e t t,２０１５,２３９(２):１３１Ｇ１４０．[１７]㊀S U IL,Z H A N G R H,Z H A N GP,e t a l．L e a d t o x i c i t y i n d u c e sa u t o p h a g y t o p r o t e c ta g a i n s tc e l ld e a t ht h r o u g h m T O R C１p a t h w a y i nc a r d i o f i b r o b l a s t s[J]．B i o s c iR e p,２０１５,３５(２): e００１８６．[１８]㊀L I AW GJ,C H I A N G CS．I n a c t i v e T l ka s s o c i a t i n g w i t hT a k１i n c r e a s e s p３８MA P Ka c t i v i t y t o p r o l o n g t h eG２p h a s e[J]．S c iR e p,２０１９,９(１):１８８５．[１９]㊀C O U L T H A R D L R,WH I T E D E,J O N E S D L,e ta l．p３８(MA P K):s t r e s sr e s p o n s e sf r o m m o l e c u l a r m e c h a n i s m st ot h e r a p e u t i c s[J]．T r e n d sM o lM e d,２００９,１５(８):３６９Ｇ３７９．[２０]㊀G O NÇA L V E S G L,C O S T A P E S S O AJ M,T H I E M E K,e ta l．I n t r a c e l l u l a r a lb u m i n o v e r l o a d e l ic i t s e nd o p l a s m i c re t i c u l u ms t r e s s a n dP K CＧd e l t a/p３８MA P K p a t h w a y a c t i v a t i o nt oi nＧd u ce p o d o c y t e a p o p t o s i s[J]．S c iR e p,２０１８,８(１):１８０１２．[２１]㊀D O L I V O D M,L A R S O N S A,D OM I N K O T．C r o s s t a l kb eＧt w e e nm i t o g e nＧa c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e i n h i b i t o r sa n dt r a n sＧf o r m i n gg r o w t hf a c t o rＧβs i g n a l i n g r e s u l t s i nv a r i a b l ea c t i v aＧt i o no f h u m a nd e r m a l f i b r o b l a s t s[J]．I n t JM o lM e d,２０１９,４３(１):３２５Ｇ３３５．[２２]㊀G UL,W A N G Y,Y A N GG,e t a l．R i b e s d i a c a n t h u mP a l l(R D P)aＧm e l i o r a t e sU U OＧi n d u c e d r e n a l f i b r o s i s v i a b o t h c a n o n i c a l a n d n o nＧc a n o n i c a l T G FＧβs i g n a l i n gp a t h w a y s i n m i c e[J]．JE t h n o p h a rＧm a c o l,２０１９,２３１:３０２Ｇ３１０．[２３]㊀T I A N Y,H A N Y X,G U O H F,e ta l．U p r e g u l a t e d m i c r o RＧN AＧ４８５s u p p r e s s e s a p o p t o s i so f r e n a l t u b u l a r e p i t h e l i a l c e l l si nm i c ew i t h l u p u s n e p h r i t i s v i a r e g u l a t i n g t h eT G FＧβＧMA P Ks i g n a l i n gp a t h w a y b y i n h i b i t i n g R h o A e x p r e s s i o n[J]．JC e l lB i o c h e m,２０１８,１１９(１１):９１５４Ｇ９１６７．[２４]㊀K E R RJ S,A D R I A A N S EBA,G R E I G N H,e t a l．M i t o p h a g ya n da l z h e i m e r s d i s e a s e:c e l l u l a ra n d m o l e c u l a r m e c h a n i s m s[J]．T r e n d sN e u r o s c i,２０１７,４０(３):１５１Ｇ１６６．[２５]㊀Z HO U Q,L I H,L I H,e ta l．M i t o c h o n d r i a le n d o n u c l e a s eG m e d i a t e sb r e a k d o w no f p a t e r n a lm i t o c h o n d r i au p o nf e r t i l i z aＧt i o n[J]．S c i e n c e,２０１６,３５３(６２９７):３９４Ｇ３９９．[２６]㊀L I UZ,Y A N G Q,W E IQ,e t a l．T h e p r o t e c t i v e e f f e c t o fm i RＧ３７７i n h i b i t o r a g a i n s t r e n a l i s c h e m i aＧr e p e r f u s i o n i n j u r y t h r o u g h i n h i b iＧt i o n o f i n f l a mm a t i o n a n d o x i d a t i v e s t r e s s v i a aV E G FＧd e p e n dＧe n tm e c h a n i s mi nm i c e[J]．M o l I mm u n o l,２０１９,１０６:１５３Ｇ１５８．[２７]㊀S U N Y,Z HA N GT,Z HA N GY,e t a l．I s c h e m i c p o s t c o n d i t i o nＧi n g a l l e v i a t e s c e r e b r a l i s c h e m i aＧr e p e r f u s i o n i n j u r y t h r o u g h a cＧt i v a t i n g a u t o p h a g y d u r i n g e a r l y r e p e r f u s i o n i n r a t s[J]．N e u r oＧc h e m R e s,２０１８,４３(９):１８２６Ｇ１８４０．(责任编辑:钟荣梅)５８汪绪祥等:移植肾纤维化与T G Fβ１ＧS m a d/p３８MA P K信号通路的研究进展。
Smad23在大鼠肾间质纤维化中的表达及促红细胞生成素的保护作用的开题报告
Smad23在大鼠肾间质纤维化中的表达及促红细胞
生成素的保护作用的开题报告
一、研究背景及意义
肾间质纤维化是肾脏疾病常见的病理表现之一，严重影响肾脏功能，从而导致肾功能衰竭。
纤维化是由于连续的损伤和修复导致的过度成纤
维细胞增生和基质沉积，严重影响器官功能。
因此，在深入了解肾间质
纤维化发生机制的基础上，寻找有效的防治方法显得尤为必要。
Smad23是TGF-β/Smad信号通路的重要成员，已被证明参与普通
肾小球硬化和膜不透性肾病的发生发展。
目前，关于Smad23在肾间质
纤维化中的作用和其与EPO的关系仍存在争议，需要进一步深入阐述。
二、研究内容
本研究旨在探究Smad23在大鼠肾间质纤维化中的表达及促红细胞
生成素的保护作用。
采用经旋转法制备的模型糖尿病大鼠肾间质纤维化
模型，利用免疫组化、Western blot、ELISA等方法检测Smad23在模型大鼠中的表达水平，并观察EPO对肾间质纤维化的保护作用。
此外，还
将开展组织学、生化和功能实验，以评估模型大鼠的肾功能和肾间质纤
维化的严重程度。
三、研究意义
通过本研究，可以深入探索Smad23在肾间质纤维化中的作用和与EPO之间的关系，为深入研究肾间质纤维化发生的机制提供重要的实验
依据。
同时，本研究的结果有望为肾间质纤维化的治疗提供新的思路和
策略，从而为维护人们的肾脏健康做出积极贡献。
肾康注射液对肾间质纤维化大鼠氧化应激状态的影响
肾康注射液对肾间质纤维化大鼠氧化应激状态的影响发表时间：2014-04-17T10:12:18.607Z 来源：《中外健康文摘》2013年38期供稿作者：朴明姬[导读] 综上所述，U U O 大鼠存在明显的氧化应激状态，肾康注射液可以减轻氧化应激反应，这对早期防治肾间质纤维化有重要的临床指导意义。
朴明姬（大连大学附属中山医院肾内科辽宁大连 116001）【摘要】目的研究肾康注射液对肾间质纤维化大鼠氧化应激状态的影响。
方法采用单侧输尿管梗阻(UUO) 诱导肾间质纤维化大鼠模型，将36 只10 周龄 SD 大鼠随机分为3 组: 假手术组、UUO 组和治疗组（肾康注射液组）。
三组大鼠于术后20 天处死，取左肾组织做HE 染色观察和评价炎症程度，检测左肾组织总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力、丙二醛（MDA）含量，检测大鼠血尿素氮（BUN）和肌酐(Scr)。
结果大鼠行单侧输尿管结扎20 天后, 对照组肾脏病理未见明显炎症改变,UUO 组梗阻侧肾脏明显肿大，肾实质变薄，肾间质水肿，弥漫炎细胞浸润，肾小管扩张或萎缩，肾间质纤维化。
与假手术组相比UUO 组肾组织中T-SOD 和GSH-Px 明显下降，但MDA 明显升高。
肾康注射液治疗后，肾组织T-SOD 和GSH-Px 活性显著性升高、MDA 含量显著下降。
结论单侧输尿管梗阻可以诱导大鼠肾间质纤维化，氧化应激（OS）参与肾间质纤维化形成，肾康注射液可以减轻肾间质纤维化大鼠氧化应激状态。
【关键词】肾康注射液肾间质纤维化氧化应激【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）38-0081-02肾间质纤维化是各种炎症和非炎症性肾脏疾病进展的最终结局，是所有慢性进行性肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同形态学特点[1-2]。
目前认为肾间质纤维化受多方面因素的影响，如蛋白尿、高血糖、高血压、缺氧、药物等。
补肾化瘀汤对肾纤维化大鼠肾组织中α-SMA表达的影响
补肾化瘀汤对肾纤维化大鼠肾组织中α-SMA表达的影响宋朝功;田晓红;赵琪【摘要】目的:探讨补肾化瘀方对肾纤维化大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法:将24只大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾化瘀方组和代文组,采用单侧输尿管结扎(UUO)的方法建立肾纤维化大鼠模型;分别于UUO术后28天采用免疫组化方法观察模型大鼠肾组织α-SMA的表达变化.结果:与假手术组相比,模型组大鼠肾组织α-SMA表达于28天出现明显增高(P<0.01);用药后,补肾化瘀汤组和代文组α-SMA表达与模型组相比均明显降低(P<0.01);补肾化瘀汤组和代文组无明显差异(P>0.05).结论:补肾化瘀汤组能够通过降低肾组织中α-SMA表达防治肾纤维化.【期刊名称】《中国民康医学》【年(卷),期】2011(023)009【总页数】3页(P1081-1082,1084)【关键词】补肾化瘀汤;大鼠;肾纤维化;α-平滑肌肌动蛋白【作者】宋朝功;田晓红;赵琪【作者单位】河南省第一荣康医院,河南,新乡,453003;河南省第一荣康医院,河南,新乡,453003;河南大学淮河医院干部病房【正文语种】中文【中图分类】R-332慢性肾脏病的发病率呈逐年增高的趋势,肾功能的恶化很大程度上取决于肾间质损伤的范围和程度[1]。
肾纤维化是各种肾脏疾病进展至终末期肾功能衰竭的共同通路,是由多种原因引起的细胞外基质成分在肾间质内过度沉积和肾间质成纤维细胞的增生。
因而,对其机制及其防治的研究越来越受到国内外研究者的重视[2]。
经临床验证,补肾化瘀汤可以延缓肾功能减退,但其机制尚需进一步研究。
因此,本课题以UUO模型大鼠为研究对象,观察补肾化瘀汤对 UUO模型大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达的影响,来探讨其防治肾纤维化的机制。
1.1 实验动物普通级雄性 SD大鼠 24只,周龄 4～6周,体重180～220 g,购于河南省实验动物中心,饲养于河南中医学院动物实验中心动物实验室,标准饮食,自由饮水,每笼 6只,适应性饲养 1周。
慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠的影响
慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠的影响张静;孙升云;葛茂功;朱诗平;冯伟峰【期刊名称】《光明中医》【年(卷),期】2022(37)20【摘要】目的观察慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠肾组织Smad2、P-smad2及SARA蛋白表达的影响。
方法选用健康雄性Wistar大鼠60只,腺嘌呤灌胃21 d建立肾间质纤维化模型,将其随机分为正常模型组和(按1 ml/100 g体质量给予生理盐水经口灌服)氯沙坦组,慢肾康宁高、中、低剂量组。
于治疗第30天大鼠腹主动脉取血。
生化检测血清肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量。
行HE染色观察实验大鼠肾脏组织形态学改变并用Western blot检测Smad2、P-smad2及SARA表达水平。
结果模型组Scr、BUN和24 h MTP均明显高于正常组(P<0.05);各治疗组Scr、BUN和24 h MTP均明显低于模型组(P<0.05);慢肾康宁高剂量组与氯沙坦组Scr、BUN和24 h MTP差异均无统计学意义(P>0.05);各治疗组与模型组比较,Smad2、P-smad2蛋白显著下降,SARA蛋白显著升高;慢肾康宁高剂量组SARA蛋白显著高于氯沙坦组(P<0.05)。
结论慢肾康宁可降低肾间质纤维化大鼠的Scr、BUN,减少24 h MTP,具有肾功能保护作用,其机制可能与下调Smad2、P-smad2及上调SARA蛋白表达水平而发挥抗间质纤维化的作用有关。
【总页数】5页(P3705-3709)【作者】张静;孙升云;葛茂功;朱诗平;冯伟峰【作者单位】广州市天河区棠下街道社区卫生服务中心中医科;暨南大学附属第一医院中医科;河南医学高等专科学校附属医院介入科【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织NF-κB表达的影响2.温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织NF-κB表达的影响3.慢肾康宁方对慢性肾衰大鼠肾组织氧化应激状态及Caspase-3,JNK,p66Shc蛋白表达影响4.益肾化瘀方对肾间质纤维化大鼠肾组织羟脯氨酸表达的影响5.益肾降浊化瘀方对肾间质纤维化大鼠肾组织Smad2、CHIP水平的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Smad7与肾间质纤维化
Smad7与肾间质纤维化
杨宁
【期刊名称】《国际泌尿系统杂志》
【年(卷),期】2005(025)006
【摘要】肾间质纤维化是导致各种慢性肾脏疾病发展至终末期肾功能衰竭的共同机制,其中转化生长因子β在此过程中发挥重要的作用.Smad蛋白家族是转化生长因子β细胞内信号转导重要的分子,其中Smad7能够抑制TGF-β的信号转导,介导细胞内负反馈,从而阻断TGF-β介导的肾间质纤维化.
【总页数】4页(P837-840)
【作者】杨宁
【作者单位】610041,成都,四川大学华西医院肾脏科
【正文语种】中文
【中图分类】R692.32
【相关文献】
1.p-Smad2/3、Smad7在大鼠实验性肾间质纤维化模型中的表达 [J], 任韫卓;段惠军;史永红;高峰;曹延萍
2.温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响[J], 李建省;王宝蕊
3.依那普利对大鼠肾间质纤维化中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的作用 [J], 宁旺斌;陶立坚;刘春燕;孙剑;肖云;胡静;陈继英;郑旋;王维
4.Smad7基因与肾间质纤维化 [J], 高岑;马跃荣
5.AcSDKP抗肾间质纤维化作用及对TGF-β1、Smad7表达的影响 [J], 张祖隆;熊世红
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肾康注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响
肾康注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响田晓;孟晓华;董科;冯晓明;徐湜潺;王玉浔;史国辉【摘要】目的研究肾康注射液对梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化的防治作用.方法采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导肾间质纤维化的动物模型,以血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)作为阳性对照,将大鼠随机分为:模型组(UUO)、肾康组、缬沙坦组,术后第14天处死大鼠,收集血清测定肌酐、尿素氮水平,肾组织用HE染色及免疫组化半定量检测各组肾间质的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达.结果肾康组、缬沙坦组的肾小管间质TGF-β1、α-SMA的表达均明显低于UUO组；两治疗组组间比较,肾康组对TGF-β1、α-SMA表达的抑制作用同于缬沙坦组.结论中药肾康可减轻肾间质纤维化.【期刊名称】《中国疗养医学》【年(卷),期】2013(022)001【总页数】2页(P12-13)【关键词】肾间质纤维化;α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);转化生长因子-β1(TGF-β1)【作者】田晓;孟晓华;董科;冯晓明;徐湜潺;王玉浔;史国辉【作者单位】唐山河北联合大学附属医院肾内科,063000【正文语种】中文肾间质纤维化是各种肾脏疾病进入终末期的共同病理损害，采取各种措施阻止肾间质纤维化的发生是临床防治肾小管间质病变、保护肾功能的重要目标之一。
以往对多种中药单味药或复方制剂的研究均显示中药可能在不同的慢性肾脏病治疗中具有改善肾功能、减轻肾间质纤维化的功效。
本研究目的在于对于肾康注射液的抗肾脏纤维化作用的探讨。
1 材料与方法1.1 药品缬沙坦胶囊由诺华制药公司提供，肾康注射液由西安世纪盛康药业有限公司提供。
本研究中选用的药物剂量均为以往相关研究已证实的有效剂量[1-2] 。
1.2 主要试剂第一抗体包括兔抗人转化生长因子-β1、小鼠抗人α-平滑肌肌动蛋白。
第二抗体为生物素标记的山羊抗兔lgG(ZB 2010)及马抗小鼠lgG(ZB 2020)，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
“慢肾康”对纤维化肾组织基质成分的影响
“慢肾康”对纤维化肾组织基质成分的影响
桂华珍;张雅丽
【期刊名称】《贵阳医学院学报》
【年(卷),期】1999(024)004
【摘要】为进一步了解“慢肾康”减轻肾纤维化的机制，在检测肾组织形态的基础上，用免疫组化方法了分析肾组织基质成分的变化。
发现，治疗组动物肾小球中纤维连接蛋白沉积明显少于对照组，而胶原ＩＶ型的减少不显著。
肾间质中纤维连接蛋白，胶原Ⅲ型和Ⅳ型也减少，但两组间无显著性差异，研究表明“慢肾康”通过减少纤维连接蛋白在肾小球内的沉积而减轻肾小球纤维化程度。
【总页数】3页(P369-371)
【作者】桂华珍;张雅丽
【作者单位】贵阳医学院病理生理教研室;贵阳中医学院一附院
【正文语种】中文
【中图分类】R277.529.1
【相关文献】
1.实脾固肾化瘀方对阿霉素肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1/Smads信号通路的影响[J], 王高强;米秀华;沈丽萍;张玮;李珺;倪家庆
2.“慢肾康”抗肾纤维化的实验研究 [J], 桂华珍
3.慢肾1号方对IgA肾病小鼠肾组织系膜区PDGF、TGFβ1因子表达的影响 [J], 解建国;徐小曼
4.慢肾康宁方对慢性肾衰大鼠肾组织氧化应激状态及Caspase-3,JNK,p66Shc蛋
白表达影响 [J], 何铃;朱诗平;金鑫;聂玲辉
5.大黄素对肾纤维化大鼠肾组织中基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达的影响 [J], 李冬梅;孙禄;刘巍;孙玲娣
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肾康注射液对梗阻性大鼠肾间质NF-KB和TGF-β1表达影响的研究
肾康注射液对梗阻性大鼠肾间质NF-KB和TGF-β1表达影响的研究张雯萍;冯树明;孙贺英【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2006(000)029【摘要】目的研究肾康注射液对梗阻性大鼠肾间质NF-KB和TGF-β1的表达情况的影响,为临床用药提供依据.方法采用单侧输尿管结扎(UUO)肾间质纤维化模型,将Wistar大鼠72只随机分为三组:假手术组、模型组和治疗组.于术后第5天、第10天、第15天,处死各组大鼠8只,在光镜下观察肾脏组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾小管间质中NF-KB和TGF-β1的表达情况.结果同模型组相比,治疗组可明显降低NF-KB和TGF-β1在肾间质中的表达.结论肾康注射液可通过降低NF-KB和TGF-β1在肾间质中的表达,抑制肾间质纤维化,从而具有延缓慢性肾功能衰竭的作用.【总页数】2页(P35-36)【作者】张雯萍;冯树明;孙贺英【作者单位】河北省保定市第三医院,071000;徐水县妇幼保健院,072550;河北大学医学部,河北,保定,071000【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响[J], 李建省;王宝蕊2.温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响[J], 李建省;王宝蕊;3.GBE对大鼠肾间质成纤维细胞TGF-β、CTGF及α-SMA过表达的抑制作用 [J], 韩璐;胡涛;丁雪峰;杨玉4.肾康注射液对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质转化生长因子-β1和骨形成蛋白-7表达的影响 [J], 蓝天座;闵亚丽;朱春玲;郭碧林;卢涛5.甘草酸18α体调节梗阻性肾病大鼠肾间质中CTGF和TGF-β1表达的实验研究[J], 李开龙;张建国;王慧民;陈菁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Smad信号通路在肾小球硬化中的作用研究的开题报告
TGF-β/Smad信号通路在肾小球硬化中的作用研究的开题
报告
一、研究背景
肾小球硬化是一种复杂的肾脏疾病，其发病机制尚不完全清楚。
研究表明，TGF-β/Smad信号通路在肾小球硬化中发挥了重要作用。
TGF-β1是TGF-β家族中最重要的成员之一，可以促进细胞增殖、分化和胶原蛋白合成等生物学过程。
TGF-β1通过Smad信号转导途径发挥其生物学作用。
当TGF-β1结合其受体后，Smad2和Smad3被激活并磷酸化，随后与Smad4结合形成Smad复合物进入细胞核，转录一系列靶基因，最终促进肾小球硬化。
二、研究目的
本研究旨在通过建立肾小球硬化模型，探讨TGF-β/Smad信号通路在肾小球硬化中的具体生物学作用，为临床治疗提供依据。
三、研究内容
1. 构建动物模型：选择实验鼠建立肾小球硬化模型。
2. 采用免疫组化法检测TGF-β1表达：通过检测模型组和对照组中肾小球区域TGF-β1的表达水平，探讨TGF-β1在肾小球硬化中的作用。
3. Western blot检测Smad信号通路蛋白：通过检测Smad2、Smad3和Smad4等相关蛋白的表达水平，探讨TGF-β/Smad信号通路在肾小球硬化过程中的作用。
4. 比较两组动物血肌肝酶、血尿素氮、血肌酐及肾组织病理学改变等指标，确定肾小球硬化模型的建立情况。
四、研究意义
本研究将探讨TGF-β/Smad信号通路在肾小球硬化中的作用，为深入了解肾小球硬化病理生理机制提供可靠的理论依据。
此外，该研究还将为寻找针对该信号通路的新型治疗方法提供思路。
Smad信号通路在肾小球硬化中的作用研究的开题报告
TGF-β/Smad信号通路在肾小球硬化中的作用研究的开题报告题目：TGF-β/Smad信号通路在肾小球硬化中的作用研究研究背景和意义：肾小球硬化是慢性肾脏疾病的一种常见表现，其病理特征是肾小球内膜和基底膜增厚、系膜细胞增生、积累和胶原沉积。
这样的改变导致肾小球滤过膜的功能逐渐受损，影响肾脏的滤过和调节功能，长时间发展甚至会导致肾功能衰竭。
目前，人们对于肾小球硬化的发生和发展并不完全清楚，但有研究表明，TGF-β/Smad信号通路在其中扮演了至关重要的角色。
TGF-β/Smad是一种重要的信号通路，其在细胞周期调控、细胞增殖、细胞分化以及细胞凋亡等生物学过程中发挥着重要的作用。
然而，当这种信号通路被激活时，它也可能导致肾小球硬化和其他一些病理生理事件的发生。
因此，通过深入研究TGF-β/Smad信号通路在肾小球硬化中的作用机制，不仅可以揭示疾病发生和发展的本质，更有可能为肾小球硬化的治疗提供新的治疗策略。
研究内容和方法：本研究主要针对TGF-β/Smad信号通路对于肾小球硬化发生和发展中的作用进行深入探究。
具体包括以下内容：1. TGF-β/Smad信号通路的激活与肾小球硬化的相关性验证。
采用实验室大鼠模型，利用免疫组化和蛋白质印迹等方法，探究TGF-β/Smad 信号通路的激活与肾小球硬化的发生和发展之间的相关性。
2. TGF-β/Smad信号通路对系膜细胞增生和胶原沉积的影响研究。
采用细胞外基质的染色和传统的组织学检查等手段，研究TGF-β/Smad信号通路在调节系膜细胞增生和胶原沉积中的作用机制，以及相关蛋白质的表达变化。
3. TGF-β/Smad信号通路调控细胞凋亡的研究。
采用流式细胞仪等技术研究TGF-β/Smad信号通路与细胞凋亡之间的关系，探究TGF-β/Smad能否调控肾小球内的细胞凋亡和坏死。
预期结果和意义：通过本研究，预计可以深入探究TGF-β/Smad信号通路在肾小球硬化中的作用机制，并从分子和细胞水平上解析其调控肾小球硬化进程中的作用。
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提供 ， 含生 药 １ ８ 。肾纤康 组成 ： １ｍｌ ．８ｇ 黄芪 、 黄 、 大 当归 、 莪 术、 水蛭等 。苯那普利 每片 含量 １ ， 京诺 华 制药有 限公 ０ｍｇ 北 司生 产 。 １ ２ 实验试剂 ．
１ ． ・ ｎ ・ ， ２ ．５ｇ ｋ ・ ） 苯 ｄ 即 ３ ５ ・ｇ ｄ ， 寻找抗 肾间质纤维化 的药物 已成 为预 防和治 疗慢 性 肾衰 竭 的 分别予 肾纤康 （２ ５ｌｌ 那普利 （０ｒｇ ｋ ・ － ） １ ・ｇ ｄ １ 混悬液灌 胃， ｎ 术后 ２周末处 死各组大 焦点。近年分子生物学研究认为 ， 细胞 因子和细胞信 号通路表
异有统计学意义（ Ｐ＜０ ０ ） 肾纤康组与苯那普利组 肾问质 Ｔ Ｆ一 、ｍａ２ Ｓ ｄ Ｓ ｄ ．５ 。 Ｇ Ｓ ｄ 、ｍａ３、ｍａ７面积 比差异无统计 学意 义（ Ｐ＞ ００ ） ．５ 。结论 ： 肾纤康通过 下调 Ｔ ～ 、ｍ ｄ 、 ｍａ３ ’ 间质的表 达及 增加 Ｓｎｄ ＧＦ Ｓ ａ ２ Ｓ ｄ 在 ｇ － ｒａ７的表达 而抑制单侧输尿管梗 阻（ ＵＯ） Ｕ 大鼠肾间质纤维化 ， 肾纤康可调节 Ｔ Ｆ一晶／ ｍａ 信 号转导通路有 关 ， 与 Ｇ Ｓ ｄ 其作用与苯那普利差异无统计学意义。 ［ 关键词 ］ 肾纤康 Ｓ ｄ信 号通路 肾间质 纤维化 ｍａ
中国中西医结合。 肾病杂 志 ２ １ ０ ０年 ９月第 １ 卷第 ９期 １
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Ｎ． ｏ
・
８１ － ７
肾纤 康 对 肾间质 纤维 化 大 鼠 Ｓ ｄ信 号通 路 的影 响 ｍａ
张 琼① 胡琼 丹① 李 小军① 张 茂平① 张 军①
苯那普利组 ， 用左侧输尿管梗 阻方法造模 ， 采 用免 疫组 织化 学方法作 肾间质 Ｔ Ｆ一岛、 ｒ ｄ 、ｍａ３ Ｓ ａ７检 测 ， Ｇ Ｓｎ ２ Ｓ ｄ 、 ｍ ｄ ａ 并观察 肾
脏 病 理 学 变 化 。 结果 ： 型 组 和 各 治疗 组 肾 间质 Ｔ Ｆ一 、ｍａ２ Ｓ ｄ 模 Ｇ Ｓ ｄ ｍａ３面积 比增 加 ，ｍａ７面积 比减 少 ， Ｓ ｄ 与假 手 术 组相 比 差 异有统计学意义（ Ｐ＜００ ） ．５ 。与模型组相 比， 药物 治疗组肾间质 ＴＧ 、ｍａ２ Ｓ ｄ Ｆ一 Ｓ ｄ 、ｍａ３面积 比减 少，ｍａ７面积 比增加 ， Ｓ ｄ 差
［ 摘 要 ］ 目的 ： 究 肾纤康 对单侧输尿 管梗 阻（ 研 ＵＵＯ） 大鼠 肾组 织转化 生长 因子 岛（ Ｇ ） Ｓ ｄ 、 ｍａ３ Ｓ ｄ Ｔ Ｆ一 、 ｍａ２ Ｓ ｄ 、 ｍａ７
表 达 的 影 响 ， 讨 肾纤 康 防 治 肾 间质 纤 维 化 的 作 用 机 制 。 方 法 ： ４ 探 将 ０只 大 鼠 随 机 分 为 ４组 ， 即假 手 术 组 、 型 组 、 纤 康 组 、 模 肾
１ 实验 材 料
１１ 实验药物 ．
肾纤康 由泸州医学 院附属中医 院制剂室
（ Ｆ—Ｂ、 ｍａ２ Ｓ ｄ 、 ｍａ７多 克 隆 抗 体 ， 释 度 均 为 ＴＧ １ Ｓ ｄ 、 ｍａ３ Ｓ ｄ 稀 １ １０ ， 过夜 ， Ｂ ：０ ）４℃ Ｐ Ｓ冲洗 ３次 ；５ 滴 加过量 羊抗兔 ＩＧ， （） ｇ 室 温 １ｈ Ｐ Ｓ冲洗 ３次 ；６滴 加 Ｓ Ｂ ，Ｂ （） Ａ Ｃ复合 物 ， 温 １ｈ Ｐ Ｓ冲 室 ，Ｂ 洗 ；７ Ｄ 显色 、 （ ） Ｎ３ 苏木紫 复染 、 水 、 脱 透明 、 封固 。以 Ｐ Ｓ代替 Ｂ 抗 作为阴性 对照。
切断输尿管 ， 逐层缝合皮肤 ， 即制备 ＵＵ Ｏ模型 。 肾纤维化是各种 肾脏疾病 发展 到终末期 肾衰 竭 的共 同病 丝线结扎后 ， 理 基 础 ， 要 表 现 为 肾 间 质 成 纤 维 细 胞 增 生 和 细 胞 外 基 质 的过 主 ２ ２ 动物处理 假 手术组 和模 型组用洁净 自来 水每天灌 ． 次 灌水量 同各组用 药量 。药 物组 于术前 １天 ， 术后 每 日 度集聚。肾间质纤维化程度与 肾功能受损程 度呈高度相 关性 ， 胃 １ ，
信号传导通路 中重要的下游转录 因子 ， 通过对 受 Ｔ Ｆ一８调控 Ｇ
２ ４ １ 尿素氮 、 ．． 血肌酐 的检测 尿素氮 采用 ＧＬ ） 【Ｈ动力
学法 ， 血肌酐采用酶法 ， 由泸州医学院附属中医院检验科 测定 。 的Ｓ ｄ ｍａ 信号通道 的干预成为延缓和逆转肾 问质纤维化的新的 ２４ ２ 免疫组织化 学染色 Ｓ Ｂ ．． Ａ Ｃ法 （ ） ｎ厚的石蜡 １ ４ｔ ａ 可能 靶 点 。 切片常规脱蜡水化 ；２ 浸入 ３ （） ％过氧化氢 ５ｍ ｎ 去除内源性过 ｉ（ 材 料 与 方 法 氧化氢酶活性） （ ） ％正常羊 血清 封闭 ；４ 滴 加稀释 的 １ ；３ １ （） 抗
达和传导异常在引起 肾问质纤维化 的发病机制 中有重要作 用 ，
而 在 多种 细胞 因子 中 ， 化 生 长 因 子 一￣ Ｔ Ｆ一口 在 肾 间 质 纤 转 （Ｇ ）
鼠。每组随机选 ８只大 鼠取左侧肾脏作各项指标检查 。
２ ３ 标本 采集 方法 将 各 组 大 鼠水 合 氯醛 腹腔 注射 麻 ． 醉， 从颈 总动脉采 血 ， 离心分 离血 清 ， 检测 尿素氮 、 血肌 酐。断 维化 的病理过程 中贯穿始终 。肾纤康是我 院院内制剂 ， 应用于 颈处死所有 大 鼠， 左 肾上 极 肾组 织 作 常规 石 蜡 切 片 （ 厚 取 片 临床 已 ６年 ， 前期研究 已表 明该药通过阻断 Ｔ Ｆ一 的生成减 Ｇ ４ｔｎ ， ＨＥ染色 ， ）作 ａ 免疫组化检查 。 少肾问质 Ｃ ｌ Ｆ ０Ⅲ、 Ｎ的表达 ， 减少细胞外基质 的合成 ， 而达到 从 ２ ４ 指 标 检测 方 法 ． 抗 肾 问质 纤 维 化 的 作 用 … 。Ｓ ｄ 、ｍａ３ Ｓ ｄ ｍａ２ Ｓ ｄ 、ｍａ７是 Ｔ ＧＦ—Ｂ