M5酶标仪简介 - 360文档中心

《酶标仪系列》课件

数据波动较大
检查样本是否均匀，仪器放置是否稳定，以及周围环境是否干扰。
04
酶标仪的市场与前景
酶标仪的市场现状
酶标仪市场规模
全球酶标仪市场规模持续增长，预计未来几年将保持稳定增长态势。
酶标仪市场应用领域
酶标仪广泛应用于生物医药、食品安全、环境监测等领域。
酶标仪市场结构
酶标仪市场主要由国外品牌和国内品牌构成，国内品牌占比逐渐提升。
酶标仪系列采用光化学原理，通过酶与底物反应生成有色物质，再通过检测器检测光密度变化，计算出酶活性。
酶标仪系列具有高灵敏度、高精度、高重复性等特点，能够满足各种不同检测需求。
酶标仪系列还具有自动进样、自动清洗等功能，大大提高了检测效率和准确性。
酶标仪系列的应用案例
酶标仪系列在生物医药领域广泛应用，如药物筛选、药物代谢研究等。
究提供有力支持。
医学诊断
用于检测各种疾病标志物，如肿瘤标志物、心血管疾病标志物等，为临床诊断提供依据。
食品安全检测
用于检测食品中的有害物质、农药残留等，保障食品安全。
环境监测
用于检测水体、土壤等环境中的有害物质，为环境保护提供
数据支持。
02
酶标仪系列介绍
酶标仪系列的产品种类
01
02
03
04
。
清洗反应孔

imark酶标仪产品资料

imark酶标仪伯乐酶标仪伯乐680酶标仪酶标仪酶标仪价格酶标仪原理mk3酶标仪酶标仪的用途bio tek酶标仪多功能酶标仪伯乐680酶标仪mk3酶标仪酶标仪的用途bio tek酶标仪酶标仪的使用方法多功能酶标仪全波长酶标仪

新一代iMark酶标仪，是一款阅读速度快、软件功能强大、预装有与Checkmark性能校验板兼容的校验规程、内置打印机、体积小巧的酶标仪。iMark能单独使用内置软件独立完成试验或者通过软件和PC联机使用。iMark酶标仪可以满足多种应用，如使用显色底物的ELISA反应、蛋白浓度测定（Bradford和Lowry法），以及DNA浓度定量测定等。自带软件提供用户登录、程序与数据的储存、曲线拟合和报告等功能。自带软件包和PC 软件包为Checkmark IQ/OQ 校验组合套件提供预设程序，并为Bio-Rad 的传染性绵性脑病（TSE）( 如牛绵状脑病BSE等)试剂盒提供规程与报告功能。

新一代iMark酶标仪性能特点：多语言界面，LCD显示（英文、日文、中文和俄文）。独特的光源保护电路，灯泡寿命长达3000小时。适合于阅读平底、U形底或V形底微孔板或8孔、12孔联管板。阅读前自动校准。宽波长范围适合不同的应用领域。可做常规测量，精确测量，中心测量。多种报告类型：原始数据，吸光度，浓度定量报告，定性报告，半定量报告，曲线，动力学报告等9种。定性报告数据直观全面，定量报告包括多达8种曲线形式。速度可调的板震荡功能。易于操作的8位滤光片轮，预装有4块滤光片。设计小巧，外围打印机可通过标准打印机接口连接。自我诊断功能可检测开机时灯泡是否正常工作。电动进样门。内置的高兼容热敏图文打印机节约空间，易于操作。USB2接口用于连接外接PC。4套标准滤光片：405、450、490和630nm。另外可根据用户需求选配。与Bio-Rad Checkmark性能校验套件（需单独订货）配套组成IQ、OQ工具，可进行各项性能校验。

酶标仪简介

廖荣刚

什么叫酶标仪

即酶联免疫检测仪(ELISA Reader)是酶联免疫吸附试验的专用仪器.

酶标仪类型⏹单通道和多通道⏹全自动和半自动

酶标仪的工作原理

在特定波长下，检测被测物的吸光值。特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。

操作流程

12345

酶免实验洗板机洗板

报告采集标本酶标仪测定

酶标仪、洗板机使用注意事项⏹1、酶标板内没有血凝块和杂质

⏹2、洗板要干净，不能有残留物

⏹3、酶标仪使用完后要清洗管道和清洗头⏹4、对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，

以达到最佳效果。

⏹5、出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪

酶标仪应用

血液学检验

血小板相关抗体的检验

血清纤维蛋白降解产物的测定

肿瘤

⏹甲胎蛋白AFP

⏹癌胚抗原CEA

⏹前列腺特异抗原PSA

⏹胰癌、胆道癌、胃癌CA19-9 ⏹卵巢癌CA125

⏹乳腺癌CA15-3

病毒

肝炎病毒、艾滋、

不孕抗体

⏹抗精子抗体⏹抗宫内膜抗体⏹抗卵磷脂抗体

优生优育抗体

⏹风疹病毒的检测RV

⏹巨细胞病毒的检测CMV

⏹单纯疱病毒的检测抗HSV（Ⅰ、Ⅱ）⏹弓形虫（体）病毒的检测TOXO

两对半

⏹①HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性：急性或慢性乙肝。

⏹②HBsAg、HBcAb阳性：无症状HBV（乙肝病毒）携带、急性

HBV感染。

⏹③HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性：急性乙肝趋向恢复、无症

状HBV携带者。

⏹④HBsAg、HBcAb阳性：表示有既往感染，已获得免疫力。

⏹⑤HBsAb阳性：被动或主动免疫，对HBV有免疫力。

美国MD-SpectraMax M5 多功能酶标仪

标题美国ＭＤ－SpectraMax M5 多功能酶标仪

信息描述有效期:2011-12-22

目前世界上功能最强也是精度最高的单体台式酶标仪。并且具有SpectraMax M2的所

有特性。三模式比色皿插槽，可检测吸光度（Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光（TRF)、

荧光偏振（FP)、和化学发光（Lum)。两个单色器可使吸收度波长范围达200~1000nm,FI、

TRF和Lum波长范围250~850nm和FP波长范围400~750nm,步进波长1nm。可读取

6、12、24、48、96和384孔微孔板。提供终点检测、动力学、单孔扫描和光谱扫描四

种测读模式。

技术参数:

光密度测读模式：波长范围 200~1000nm，精确选择波长1nm；带宽 <= 4nm；波长准

确度 ±2.0nm；波长重现性 ±0.2nm；测读范围 0~4.0 OD；光分辨度：0.001 OD；测读

准确度(微孔板) <±0.006 OD±1.0%,0~2.0 OD；(比色杯) <±0.005 OD±1.0%,0~2.0 OD；

测读精确度 <±0.003 OD±1.0%,0~2.0 OD；杂散光 <0.05% 230nm；微孔盘测读时间 18

秒；温度范围室温+4~45度。在此的基础上增加了对时间分辨荧光（TRF)、荧光偏振（FL)、

和化学发光（Lum)的测量支持。

时间分辨荧光法（TRF）：波长范围 280~850nm，单色器递增量1nm；数据采集可调；

测读次数：1~100flashes，测读延迟0~600usec，读取数据积分时间50~1500usec；发

酶标仪技术参数

酶标仪（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）被广泛应用于生物医学领域中的临床诊断、免疫学研究、生物化学分析、环境污染检测等领域。它能够对微量物质进行快速、灵敏、精确的检测，其技术参数对其检测效能和质量起到至关重要的作用。下面将介绍酶标仪技术参数的相关内容。

灵敏度

酶标仪的灵敏度是指能够检测到被检测物质的最小浓度。酶标仪的灵敏度一般指所检测的抗原或抗体浓度等效于0.1~1.0 ng/mL。然而，灵敏度标准并不是一成不变的，取决于酶标仪所检测的物质、体积、应用场景等因素。因此，判断酶标仪的灵敏度是否合格应该结合实际情况进行。

动态范围

酶标仪的动态范围是指在确定范围内，所检测的物质浓度与信号强度的线性关系。一般来说，酶标仪的动态范围应该覆盖到所检测物质的信号值的最大值的

1/2~1/3，以确保它能够准确地测量低至高浓度的样品。对于不同品牌和型号的酶标仪，动态范围可能会有所不同。

精度和准确性

精度和准确性是酶标仪技术参数中的重要指标。精度是指同一样品重复测量的结果的一致性，包括实验的内部精度和实验间的精度。而准确性是指测量结果与真实值的接近程度，即有多少误差。酶标仪的精度和准确性如果偏差过大，则无法保证测量结果的可靠性。

读数模式

读数模式是指酶标仪在测量过程中所采用的各个波长对应的光学技术。根据需求可以选择单波长或多波长等模式。选择何种读数模式要根据具体需要来决定，并非说多波长模式比单波长模式优劣。事实上，它们各有优劣势，用户需充分考虑自己的实验需求来选择最适合自己的酶标仪。

M5介绍

国内超声市场部
M-5产品介绍
组织谐波成像
对不同条件就诊者提供
更佳的成像效果，
强大的临床功能
降低噪声，更清晰的显
示组织边界
国内超声市场部
M-5产品介绍
双实时B+C、三同步
强大的临床功能
可以更好的追踪血流运动情况专业的COM Express平台提高了整机的运算速度，多倍信号并行处理
技同时提高时间分辨率；帧复合、精细血管成像、自动伪差去除等技术使彩色血流状态更理想
国内超声市场部
M-5产品介绍
3D成像（Smart3D™ ）
三维重建全面展示。。。。。。
强大的临床功能
多角度旋转
橡皮檫功能任意修剪
国内超声市场部
M-5产品介绍
宽景成像（iScape™）
强大的临床功能
国内超声市场部
M-5产品介绍
各种检查模式快速切换
高效快捷的工作流程
国内超声市场部
M-5产品介绍
M-5十大卖点
1、国内第一家具有完全自主知识产权的全数字化便携式彩超，M5使中国成为除美国外国际上第二个能掌握笔记本便携彩超技术的国家
2、所有便携机中独家采用最新INTEL迅驰Com Express平台－－速度快、图像处理能力强、系统稳定、功耗低、抗电磁干扰 3、首家真正在便携机上采用空间复合成像技术 4、镁合金材料铸造机身－－机体纤薄轻巧、坚固耐用、防腐蚀、抗电磁干扰 5、机器虽小、功能强大－－采用众多高端台式机的先进技术（如：发射频谱精确控制、加权发射、宽波束发射、宽景成像、自由臂3D等）

M5酶标仪简介.ppt

SpectraMax M5 随仪器有一块紫红色的适配板，在检测96 孔板和384 孔板光吸收以及荧光顶读的时候必须预先置于插槽中，然后再进行检测。
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一、软件操作步骤简介
• 仪器检测参数设定-Setting
五种读板模式
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一、软件操作步骤简介
• 仪器检测参数设定-Setting
四种检测类型
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二、检测样品分组设定
单击Template，出现如下对话框
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二、检测样品分组设定
设定空白
选中所用微孔A1 & A2 点击Groups 栏中的下拉菜单选中blank 结果结果如图所示则其他的数据结果均显示为扣除本底(A1&A2 平均值)的结果
检测后的微孔板和比色皿不要长期置于仪器插槽中，检测后从仪器中取出，避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。如果为有腐蚀性或挥发性溶液，请带盖检测。
对于可见光吸收检测，使用全透明微孔板；紫外光吸收检测，使用紫外可透全透明微孔板；荧光强度和荧光偏振，使用黑色不透明板，需要检测底读的用黑色底透微孔板；化学发光和时间分辨荧光，使用白色不透明微孔板。
令 ‘View’下拉菜单内含关于页面显示的命令 ‘Protocols’下拉菜单内含超过120 种可以应用于各类生化和细胞实验的模版 ‘Control’下拉菜单内含开关插槽，震板，温控等命令 ‘Window’下拉菜单内含页面排列的命令 ‘Help’下拉菜单内含软件版本号，SoftMax Pro User Guide 和Formula

多功能酶标仪中荧光检测技术介绍

荧光分析技术是一种强大的分析手段，广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中，是多功能酶标仪的重要应用，如TECAN(M1000、M200等)，Thmeral(Varioskan Flash)，Bio-tek（Synergy 4等），MD（M2、M5）都可以应用于荧光检测。

1.概述

室温下，大多数分子处于基态的最低振动能级，处于基态的分子吸收能量（光能、化学能、电能或热能）后跃迁至激发态，激发态不稳定，将很快衰变到基态，以光的形式放出能量，这种现象称为“发光现象”。分子发光包括荧光，磷光，化学发光，生物发光等。受到光照时发光，光照切断时发光立即消失的叫荧光，光照切断时，发光逐渐变弱以致消失的叫磷光，吸收化学反应的化学能量而发光叫化学发光，由生物能转变为光辐射的称作生物发光。

由于发光物质不同荧光有分子荧光和原子荧光之分，分子荧光为带光谱，原子荧光为线光谱，通常所说的荧光为分子荧光。通过测定所发射荧光的特性和强度，可以对物质进行定性、定量分析。

2.荧光检测技术

2.1荧光强度(FI)

荧光强度与荧光物质的浓度成正比，这是荧光分析法是量分析的依据。在生物学上的应用非常广泛，可以进行生物大分子定量，酶活性分析，荧光免疫分析，细胞学分析（细胞增殖，细胞毒理，细胞吸附等）和分子间相互作用。

2.1.1细胞凋亡检测

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。

酶标仪工作原理及使用方法

酶标仪简介：

酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下，用一般光电比色计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。

酶标仪原理：

酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同. 图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图.光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光，进入塑料微孔极中的待测标本.该单色光一部分被标本吸收，另一部分则透过标本照射到光电检测器上，光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号.电信号经前置放大，对数放大，模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算，最后由显示器和打印机显示结果. 微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板，从而实现自动进样检测过程.而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测，因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路，从而使仪器更小巧，结构也更简单.

微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，孔内都包埋着相应的抗原或抗体，微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液.

光是电磁波，波长100nm~400nm称为紫外光，400nm~780nm之间的光可被人眼观察到，大于780nm称为红外光。人们之所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光，但对绿色不吸收，反射出来，所以植物呈现为绿色。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。

酶标仪使用

实验二酶标仪检测金属离子对SOD 酶活性的影响

一实验目的

通过SpectraMax M5 酶标仪的演示使用，了解该型号酶标仪的结构；掌握酶标仪的操作步骤与softMax Pro v5.0.1版本软件的使用。

二实验指导要点

1.酶标仪仪器安装连接

2.仪器使用、保养注意事项

3.软件操作步骤

三仪器设备及实验材料

SpectraMax M5 酶标仪、softMax Pro v5.0.1版本软件、SOD提取液

四仪器检测参数设定

1 SpectraMax M5 酶标仪构造

酶标仪需要用专门连接线(仪器自带)与电脑连接，并有连接线两边插头、仪器背面的插口和电脑背面的9针串口(COM)。

2仪器使用、保养注意事项

电源要求：酶标仪对电源要求很高，我们要求的电源有接地，并通过不间断电源UPS来对仪器和电脑接点，防止：1）大电流的冲击，2）电压不稳，3）突然断电。

保养要求：

有良好的电源，保持24小时开机。

保持避光和干净的室内环境，维持一定的湿度(30%-80%)。

维持室内比较恒定的温度，以20-22度为最适宜。

适用6-384孔板。96孔微孔板内每孔可检测100-300ul溶液，最佳检测体积为200ul。

384孔微孔板内每孔可检测50-100ul溶液，最佳检测体积为80ul。

检测后的微孔板和比色皿不要长期置于仪器插槽中，检测完后就从仪器中取出，避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。如果为有腐蚀性或挥发性溶液，请带盖检测。

对于可见光吸收检测，使用全透明微孔板；紫外光吸收检测，使用紫外可透全透明微孔板；荧光强度和荧光偏振，使用黑色不透明板，需要检测底读的用黑色底透微孔板；化学发光和时间分辨荧光，使用白色不透明微孔板。

酶标仪

近年来，随着多功能酶标仪在国内各高校实验室逐渐推广开来，多功能酶标仪品牌和型号也逐渐多了起来，乱花渐欲迷人眼。除了三大传统优势品牌PE、MD和TECAN，还出现了众多后来者插足此市场，如收购了芬兰雷勃的Thermo、从发光起家的Berthold、针对药筛领域的BMG以及新兴的BioTek等品牌。各品牌都有各自的一个甚至多个系列产品线，特性各不相同，选购时各种技术参数、技术指标令人眼花缭乱。

本文尝试从用户实际使用的角度，探讨应该如何看待花样繁多的参数特性，希望能帮助大家找到真正合适自己的多功能酶标仪。

1.滤片Vs光栅

多功能酶标仪的分类方法众多，但最简单的莫过于用他们的滤光方式来作分界线。

一般来说，酶标仪可以分为滤光片型和光栅型两大类。当然也有一些型号，例如Synergy4和EnVision等在一台机器里面同时装上了滤光片和光栅。但是滤片和光栅并不能同时完成同一个检测，还是想用光栅的时候用光栅，该用滤片的时候用滤片；还有一些实验非用其中一个不可，另一模块实现不了的。所以这类仪器本质上还只是把滤片和光栅放在了一起，并没有使两者糅合而产生新的技术突破。

总体来说，滤片技术由于发展已久，配合二向色镜（其实也就是另一模式的滤光反光滤镜）等光路系统，可以实现大部分实验的需要。目前常规多功能酶标仪中最高的检测灵敏度就是用滤光片型做出来的，例如TECAN Infinite F500的荧光检测的灵敏度可以达到0.04 fmol/孔（荧光素，384孔/80ul）。

但是滤光片型仪器由于受限于滤片的波长和数量限制，不可能满足日益增加的实验类型的检测需要，而且有时需要对物质的吸收、激发和发射光谱进行研究，所以后来就诞生了光栅型的仪器。

酶标仪基本知识及其检测原理

2010-03-07 23:35:27 作者：佚名来源：互联网浏览次数：1 网友评论 0 条酶标仪基本知识及其检测原理，文章简要介绍了酶标仪的原理和及应用。

光是电磁波，波长100nm-400nm称为紫外光，400nm-780nm之间的光可被人眼观察到，大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是为光照射到物上被物反射回来。绿色植物之所以是绿色，是为植物吸收了光中的红色光谱。酶仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。

检测单位：

光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量定量系。

检测单位用OD值表，OD是opticaldelnsity（光密度）的缩写，表被检测物吸收掉的光密度，OD=10g（1/trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-be er法则，OD值与光强度下述系：

E=OD=logⅠ0/Ⅰ其中E表被吸收的光密度，Ⅰ0为在检测物之前的光强度，Ⅰ为从被检测物出来的光强度。

OD值由下述公式计算：

E=OD=C×D×E

其中：C为检测物的浓度；D为检测物的厚度；E为摩尔子。

在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造检测结果的不准确。此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。

但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。

化学发光法检测细胞活性(Molecular Devices)

介绍

在SpectraMax ® L和SpectraMax ®

M5酶标仪上应用Promega CellTiter-Glo化学发光法

检测细胞活性

MD公司的SpectraMax ® L及SpectraMax ® M 5型号酶标仪结合P r o m e g a 公司的CellTiter-Glo化学发光细胞活性检测试剂盒能进行快速灵敏的活细胞数量测定。CellTiter-Glo检测法使用了萤光素酶，需要ATP使其反应发光。发光信号强度由ATP量决定，而ATP的多少取决于活细胞数目。SpectraMax ® L及M5酶标仪均能提供96孔和384孔化学发光检测功能。

方法

准备CellTiter-Glo试剂

使用前将CellTiter-Glo缓冲液和底物在室温中平置解冻。然后将缓冲液倒入装有底物的棕色瓶中，并按照CellTiter-Glo操作手册中指示，温和颠倒瓶子以混匀。细胞计数及产生发光信号

用含10%胎牛血清和L-谷氨酰胺的Ham ’s F12培养基培养CHO-K1细胞。胰酶消化后使细胞悬浮在培养基中，并进行细胞计数。用96孔板检测时，每孔中加入100ul细

作者 Cathy Olsen, Ph.D., MDS Analytical Technologies,1311 Orleans Drive, Sunnyvale, CA 94089.材料：

1.CellTiter-Glo化学发光细胞活性检测试剂盒(Promega公司，货号G7570)，包括CellTiter-Glo缓冲液和CellTiter-Glo底物(冻干粉)

多功能酶标仪中荧光检测技术介绍

荧光分析技术是一种强大的分析手段，广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中，是多功能酶标仪的重要应用，如TECAN(M1000、M200等)，Thmeral(Varioskan Flash)，Bio-tek（Synergy 4等），MD（M2、M5）都可以应用于荧光检测。

1.概述

室温下，大多数分子处于基态的最低振动能级，处于基态的分子吸收能量（光能、化学能、电能或热能）后跃迁至激发态，激发态不稳定，将很快衰变到基态，以光的形式放出能量，这种现象称为“发光现象”。分子发光包括荧光，磷光，化学发光，生物发光等。受到光照时发光，光照切断时发光立即消失的叫荧光，光照切断时，发光逐渐变弱以致消失的叫磷光，吸收化学反应的化学能量而发光叫化学发光，由生物能转变为光辐射的称作生物发光。

由于发光物质不同荧光有分子荧光和原子荧光之分，分子荧光为带光谱，原子荧光为线光谱，通常所说的荧光为分子荧光。通过测定所发射荧光的特性和强度，可以对物质进行定性、定量分析。

2.荧光检测技术

2.1荧光强度(FI)

荧光强度与荧光物质的浓度成正比，这是荧光分析法是量分析的依据。在生物学上的应用非常广泛，可以进行生物大分子定量，酶活性分析，荧光免疫分析，细胞学分析（细胞增殖，细胞毒理，细胞吸附等）和分子间相互作用。

2.1.1细胞凋亡检测

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。

化学发光法检测细胞活性(Molecular Devices)

介绍

在SpectraMax ® L和SpectraMax ®

M5酶标仪上应用Promega CellTiter-Glo化学发光法

检测细胞活性

MD公司的SpectraMax ® L及SpectraMax ® M 5型号酶标仪结合P r o m e g a 公司的CellTiter-Glo化学发光细胞活性检测试剂盒能进行快速灵敏的活细胞数量测定。CellTiter-Glo检测法使用了萤光素酶，需要ATP使其反应发光。发光信号强度由ATP量决定，而ATP的多少取决于活细胞数目。SpectraMax ® L及M5酶标仪均能提供96孔和384孔化学发光检测功能。

方法

准备CellTiter-Glo试剂

使用前将CellTiter-Glo缓冲液和底物在室温中平置解冻。然后将缓冲液倒入装有底物的棕色瓶中，并按照CellTiter-Glo操作手册中指示，温和颠倒瓶子以混匀。细胞计数及产生发光信号

用含10%胎牛血清和L-谷氨酰胺的Ham ’s F12培养基培养CHO-K1细胞。胰酶消化后使细胞悬浮在培养基中，并进行细胞计数。用96孔板检测时，每孔中加入100ul细

作者 Cathy Olsen, Ph.D., MDS Analytical Technologies,1311 Orleans Drive, Sunnyvale, CA 94089.材料：

1.CellTiter-Glo化学发光细胞活性检测试剂盒(Promega公司，货号G7570)，包括CellTiter-Glo缓冲液和CellTiter-Glo底物(冻干粉)

多功能酶标仪中荧光检测技术介绍

荧光分析技术是一种强大的分析手段，广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中，是多功能酶标仪的重要应用，如TECAN(M1000、M200等)，Thmeral(Varioskan Flash)，Bio-tek（Synergy 4等），MD（M2、M5）都可以应用于荧光检测。

1.概述

室温下，大多数分子处于基态的最低振动能级，处于基态的分子吸收能量（光能、化学能、电能或热能）后跃迁至激发态，激发态不稳定，将很快衰变到基态，以光的形式放出能量，这种现象称为“发光现象”。分子发光包括荧光，磷光，化学发光，生物发光等。受到光照时发光，光照切断时发光立即消失的叫荧光，光照切断时，发光逐渐变弱以致消失的叫磷光，吸收化学反应的化学能量而发光叫化学发光，由生物能转变为光辐射的称作生物发光。

由于发光物质不同荧光有分子荧光和原子荧光之分，分子荧光为带光谱，原子荧光为线光谱，通常所说的荧光为分子荧光。通过测定所发射荧光的特性和强度，可以对物质进行定性、定量分析。

2.荧光检测技术

2.1荧光强度(FI)

荧光强度与荧光物质的浓度成正比，这是荧光分析法是量分析的依据。在生物学上的应用非常广泛，可以进行生物大分子定量，酶活性分析，荧光免疫分析，细胞学分析（细胞增殖，细胞毒理，细胞吸附等）和分子间相互作用。

2.1.1细胞凋亡检测

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。