动物实验基本技术

行实验，但应保证雌雄动物的实验数据均应具有统计学意义；若条件不允许，考
虑到雌性动物的生理因素，选择雄性动物进行实验为好，但必须使用雌性动物进
行的实验除外。
三、实验动物被毛的去除
（一）剪毛法
剪毛法是动物实验中被毛去除中最常用也是最基本的方法。如外科手术时，
需剪毛；犬前肢内侧头静脉取血时需剪毛。剪毛时，用剪毛剪紧贴皮肤依次将毛
如某减肥茶的减肥效果实验，动物的体重是此实验中主要的观察指标，因此随机
分组后，各组的平均体重应趋于一致。
为确保实验结果具有统计学意义，实验分组时应注意各组动物的数量不可太
少，一般需进行统计学处理的实验数据，各组动物至少不可少于 6 只，若再考虑
到实验过程中出现意外等情况，动物数量还需适当增加。
实验分组时还应考虑到动物性别的影响。如果条件允许，可选择雌雄各半进
一种染色法编号的原则是“先左后右，先上后下”。左前腿部记为 1 号，左 侧腰部记为 2 号，左后腿部记为 3 号，头部记为 4 号，腰背部记为 5 号，尾部记
为 6 号，右前腿部记为 7 号，右侧腰部记为 8 号，右后腿部记为 9 号，不涂色的 为 10 号。用单一颜色可标记 1-10 号。如果动物数量超过 10 只，可用两种颜色 共同标记，即一种颜色代表十位，另一种颜色代表个位，这样可标记到 99 号。
第一节 动物实验前的准备
一、 实验动物的编号与标记
编号与标记通常是动物实验开始时需要进行的第一项工作。编号的目的是使 个体易于识别，便于实验者观察每个动物的变化，并为下一步进行的分组工作做 好准备。无论何种编号方法，良好的标记方法都应满足号码清晰、耐久、简便和 适用的要求。
（一）染色法 染色法是使用化学药品在动物明显体位被毛上进行涂染以识别动物的方法。
第十一章 动物实验基本技术
内容提要：动物实验是生命科学研究的基本手段，是药物安全性评价的必要途径。 熟练的动物实验操作技术和技巧，是顺利完成动物实验并取得准确、可靠结果的 保证。本章详细介绍了实验动物的保定技术、麻醉方法、给药途径和方法、样本 的采集方法以及试验结束如何人性化处理实验动物等技术措施，旨在为从事动物 实验相关人员提供系统的良好操作规范。 关键词：保定；标记；麻醉；采血；安乐死。
（一）小鼠的捉取与固定 小鼠性情比较温顺，一般不会主动咬人。在小鼠较安静时打开鼠笼盖，一般
情况下用右手在靠近鼠尾尾根部捏住并将其提起，放在较粗糙的平面或鼠笼盖 上，轻轻地向后拉鼠尾，当其向前爬行时，用右手拇指和食指捏住小鼠颈部皮肤
和两耳，捏住的皮肤要适量，太多太紧小鼠会窒息，太少太松小鼠会回头咬伤实 验者。捏住后翻转右手，掌心向上，将鼠体置于右手掌心中，左手拉住小鼠尾部， 用左手无名指或小指压紧尾根，使小鼠身体成一条直线（图 10-2）。此种抓取固 定方法适用于肌肉注射、腹腔注射、灌胃等操作。
二、 实验动物的分组
（一）随机分组的原则及方法 动物编号后，通常需要根据实验要求进行分组。动物随机分组一般使用随机
数字表或用计算器产生随机数字来进行。随机数字表的使用方法如下：如从某群 体中需要抽取 10 个个体作为样本，可以随机在随机数字表上定一点。假定落在 16 行 17 列的数字 76 上，那么可以向上或向下或向左或向右，依次找到 42、22、 98、14、76、52、51、86，把包括 76 在内的这 10 个号的个体按号作为样本，作 为研究总体的依据。使用计算器产生随机数时，当按下 RND 键时，随机数产生。 产生的随机数值是 0.000—0.999。显示的数前两个小数位用作一个样本个体， 如产生的随机数是 0.288,表明第 28 个数据作为一个样本个体，重复按键操作， 直至产生所需的样本大小。
（4） 硫化钠 10g、生石灰 15g，溶于 100ml 水中，此配方适用于犬等大动物的 脱毛。
四、实验动物的抓取和固定
实验人员在进行动物实验时，必须以正确和适宜的方式抓取动物，禁止对动 物采取突然、粗暴的抓取方法，以免实验人员被动物咬伤或造成动物呼吸困难、 体温升高、组织损伤甚至死亡。抓取与固定动物应充分了解动物的生活习性并根 据其习性采用相应的抓取固定方法。抓取操作时先慢慢友好地接近动物，注意观 察其状况，待动物安静下来时方可抓取。抓取过程中应小心仔细、大胆敏捷，不 可犹豫不决，动作应准确、熟练、温柔，以正确的方法确实达到抓取和固定动物 的目的。必要时实验人员可戴上手套等防护用具。由于不正确的抓取和固定方法 可能导致动物体内某些生理、生化指标的改变，因此正确的抓取和固定方法是动 物实验成功与否的最基本要素。
（二）穿耳孔法 穿耳孔法是用动物专用耳孔器在动物耳朵的不同部位打一小孔或打成缺口
来表示一定号码的方法。这种编号方法适用于长期实验及体毛颜色较深不易着色 的动物。打孔原则为左耳代表十位数，右耳代表个位数。应用打孔法时常用消毒 滑石粉涂抹在打孔局部，以防止孔口愈合。
（三）剪趾法 剪趾法是将小鼠左右前肢或左右后肢脚趾按不同排列方式代表不同的数字
（七）针刺法 针刺法是采用人工针刺号码打号，然后涂以酒精黑墨即可。可用于在家兔、
犬等的耳部进行标记。目前有市售动物专用打号器，原理与此相同，带有不同数 字和符号的针刺字号可根据需要选择使用。
（八）剪尾法 剪尾法是将动物尾尖部剪去，一般用于大鼠、小鼠的分组，但仅限于将两组
动物区分开，无法给每只动物编号。需要指出的是若需进行尾尖取血，此法不适 用。
剪刀剪短，用大小适中的棉球或纱布块蘸脱毛剂在脱毛部位涂成薄层，2-3min
后，用镊子轻轻刮除脱毛剂，用温水洗去该部位脱下的毛，然后用纱布将水擦干，
涂抹一层甘油。若脱毛剂在皮肤上停留时间过长，脱毛后可能导致皮肤红肿。
常用的脱毛剂配方：
（1） （2） （3）
硫化钠 3g、肥皂粉 1g、淀粉 7g，加水适量调成糊状。 硫化钠 8g、淀粉 7g、糖 4g、甘油 5g、硼砂 1g，加水 75ml。 硫化钠 8g、溶于 100ml 水中。 以上三种脱毛剂配方适用于家兔、大鼠、小鼠等小动物的脱毛。
而进行标记的方法。一般习惯从左向右第一趾为 1 号，第二趾为 2 号，第三趾为 4 号，第四趾为 7 号。若第一、二趾同时剪去为 3 号；若第一、四趾同时剪去则 为 8 号，以此类推。右脚表示个位数，左脚表示十位数，可从 1 号编至 99 号。 若再配合穿耳孔法，左耳表示千位，右耳表示百位数，可编至 9999 号。剪趾编 号方法的优点是各种毛色的小鼠都适用，避免了黑色、棕色等小鼠用染色法标记 不易分辨的缺点。但此法的不足之处在于，小鼠脚趾剪去太多，容易因失血过多 导致健康状况不良，影响实验结果。一般剪趾后，应用干棉球止血后，再用碘酒 消毒即可。
（五）挂腿圈法 挂腿圈法首先将号码冲压在圆形或方形金属牌上，金属牌常用不生锈的铝板
制成，或者可使用市售的打好号码和记号的铝制牌。然后将金属薄片固定在拴腿 的皮带圈上，将此圈固定在动物的腿的上部。此法适用于鸡等禽类的编号，简便、 实用。
（六）烙印法
烙印法是用烙印钳将号码烙压在大、中型动物无体毛部位或明显部位，如耳、 面部、鼻部、四肢等，然后用酒精为溶剂的染料涂布。需要注意使用此法编号时 烙号部位的污染问题，应预防感染。
染色法一般适用于白色大鼠、白色小鼠、豚鼠和白色家兔等动物的短期实验。常 用的染液有 3%-5%的苦味酸溶液（黄色）、2%的硝酸银溶液（咖啡色）、0.5%的中 性品红溶液（红色）。标记时，用棉签或卷着纱布的玻璃棒或止血钳等蘸取少量 上述溶液，在动物体的相应部位逆毛流方向涂上有色斑点。若实验时间较长采取 此种编号方法时，可能由于动物之间被毛互相摩擦，尿、水浸湿被毛等原因致有 色斑点颜色变浅甚至消失，需在实验进行当中补涂染液，使编号清晰。
（三）拔毛法
拔毛法是用拇指、食指将所需部位被毛拔去，家兔进行耳缘静脉注射时常用
此法。
（四）脱毛法
大动物做无菌手术或观察局部病理变化时常用脱毛法。脱毛法指采用化学脱
毛剂将动物需进行实验部位的毛脱去。脱毛剂一般主要由硫化钠或硫化钡加滑石
粉等成分配制而成，另外也可使用市售的脱毛剂。脱毛时，脱毛部位的被毛先用
入二组，方法同上。仍采用随机方法，从 10 后面接着写，为 61，除以 5，余数
为 1，则将第一个三组的兔，即第 2 号兔调入二组，调整后各组兔的编号为：
组别 兔的编号
一 3 9 10 12
二 1 246
三 5 7 8 11
若将动物随机分为四组或更多的组，分组原则基本一致。
（二）分组的注意事项
动物随机分组的要目的在于使某实验中的某主要指标平均分配到各个组中，
4
56字：08 27 01 50 15 29 39 39 43 79 69
10
除 3 余数：2 0 1
2
0200110
1
组别 ：二 三 一 二 三 二 三 三 一 一 三
一
调整组别：二
以 3 除各随机数字，若余数为 1，则该兔归一组；余数为 2，归入二组；余
数为 0，归入三组。结果一组为 4 只，二组为 3 只，三组为 5 只。三组多一只调
（九）剪毛法 剪毛法是将动物背部的被毛用剪刀剪去，用于标记，此法编号标记清楚、可
靠，便于试验人员观察，常用于大中型动物的编号。 动物的编号方法虽然有一定的原则及规范，但在实际工作中需灵活应用，有
时常常两种编号方法互相配合使用，如运用染色法对每只动物进行编号后，再用 挂牌法标记分组情况，挂在笼子外面。而编号也不仅仅局限于上述 9 种方法，在 确保编号清晰、简便、耐久、适用的前提下，根据具体实验的特点，实验者可因 地制宜的给动物编号。
动物实验是根据研究目的,恰当地选用标准的实验动物品种、品系,进行各种 科学实验,观察和记录动物的反应过程或反应结果, 以探讨或检验生命科学中未 知因素的专门活动。生物医学的每一次重大发展与进步，几乎都与动物实验息息 相关。现代医学各领域中许多最重要的进步都是以动物实验研究与探索为基础 的。对新药进行药效和安全性评价时，需要借助动物实验；对新出现的疾病需要 做出对策时，动物实验有时是关键的决定因素。因此动物实验已成为医学、药学、 生物学、畜牧学、兽医学等生命科学研究的基本手段之一，尽管在不同领域有不 同的目的和应用，但其中所涉及的动物实验基本操作技术和实验方法是相通的。 因此研究人员掌握基本的动物实验技能是实验成功的前提与保证。