灵芝真菌固态发酵产三萜类化合物的工艺条件
灵芝多糖和三萜的提取工艺研究_徐雪峰
Study on Extraction Process of Polysaccharide and Triterpenoid from Ganoderma lucidum
XU Xue-feng，ZHANG Yu，YAN Hao，ZHANG Xu-yuan （ College of Biological and Chemical，Hainan Institute of Science ＆ Technology，Haikou 571126，China）
指标提取率 /%
1． 02 1． 46 1． 51 1． 43 1． 47 1． 44 1． 08 1． 22 1． 62
7
表 9 微波提取多糖正交试验结果分析
项目
因素
A
B
C
指标提取率 /%
1
1
1
1
1． 18
2
1
2
2
1． 56
3
1
3
3
1． 40
4
2
1
2
1． 23
5
2
2
3
1． 21
6
2
3
1
1． 20
1 试验材料与仪器
材料为海南赤芝子实体，购自于药材市场，经 鉴定，干燥、切片、粉碎过 60 目筛。齐墩果酸为标 准品，其他各种试剂均为分析纯。
CX － 100 型万能高速粉碎机（ 上海晟喜制药 机械有限公司） ； 电子天平（ 赛多利斯科学仪器有 限公司） ； HH － 2 型恒温水浴锅（ 江苏金坛环宇科 学仪器厂） ； 超声波清洗机（ 宁波海曙五方超声设 备有限公司） ； CW － 2005 型超声 － 微波组合反应 器（ 上海仙象仪器仪表有限公司） ； UV － 1800PC － DS 型紫外分光光度计（ 上海美普达仪器有限公 司） ； TDL － 80 － 2B 型低速台式离心机（ 上海安亭 科学仪器厂） 。
灵芝中三萜类化合物的提取及质量控制研究
灵芝中三萜类化合物的提取及质量控制研究作者：杨丽丽马爱群来源：《西部论丛》2017年第04期摘要：灵芝是一种具有悠久历史的传统珍贵药材，具有极高的药用价值。
其中，三萜类化合物作为灵芝主要活性物质之一，在抗HIV、抗炎、保肝、抗肿瘤等方面发挥着独特的生物活性。
同时，灵芝三萜类物质也是确定灵芝相关商品质量和品质的重要指标和保证，应用前景十分可观。
灵芝三萜类化合物的提取一直是人们研究的重点，其提取过程比较复杂，质量控制难度大，近年来提取技术不断提高，如何有效控制三萜类化合物质量依然是一个难题。
为此，本文对灵芝中三萜类化合物提取方法进行分析，并探讨质量控制方法，为灵芝中三萜类化合物提取能够提供参考信息。
关键词：灵芝三萜类化合物提取质量控制1.前言灵芝是名贵的药材，其化学成分主要为三萜化合物、多糖、生物碱类、核苷类等，化学成分十分复杂，为此，要提取当中三萜化合物难度比较大。
三萜化合物属于次生代谢的产物，药理活性较强，具有良好的抗炎、抗肿瘤等作用，近年来，人们对灵芝中三萜类化合物的要求不断增多，但是对其提取方法及其质量控制的研究比较少，为此，本文对此进行研究。
2.三萜类化合物结构分析及药理作用三萜类化合物的基本核由30个碳原子组成，其结构由六个异戊二烯单位聚合而成。
三萜类化合物多为四环三萜和五环三萜，少数为链状、单环、双环和三环三萜。
四环三萜常见的结构类型有达玛烷型、羊毛脂烷型、葫芦烷型、甘遂烷型、环阿屯烷型；五环三萜主要包括齐墩果烷型、乌苏烷型、何伯烷型、羽扇豆烷型和木栓烷型。
目前，灵芝中发现三萜类化合物近135种，灵芝三萜类化合物属于高度氧化的羊毛甾烷衍生物，它们具有高脂溶解度，存在于灵芝的中性和酸性组分中。
在灵芝中三萜类化合物的结构中，它们通常含有羟基，在紫外光谱中具有多种波长的特征吸收。
灵芝酸是灵芝中三萜类化合物中的一种重要活性成分。
根据官能团和侧链的不同，又可分为灵芝酸、灵芝内酯、灵芝醇、赤芝酸等基本骨架。
灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜动力学研究
灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜动力学研究摘要：基于Logistic方程和Luedeking-Piret方程，对灵芝（Ganoderma lucidum）菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜动力学进行研究。
通过检测发酵过程的菌丝体量、基质浓度和产物浓度，进行最优参数估计和非线性拟合。
得到菌丝体生长、产物灵芝三萜生成和底物总糖消耗的动力学模型和模型参数。
对动力学模型的拟合曲线进行分析，发酵实验值与模型预测值能较好地拟合，所建立的液态深层发酵动力学模型能较好地反应灵芝菌丝体发酵过程。
关键词：灵芝；深层发酵；动力学模型；非线性拟合灵芝（Ganoderma lucidum）是中医药中的一种珍贵的传统药用真菌。
灵芝中三萜类化合物是近年来研究的热点，具有保肝、抗肿瘤、消炎抗菌、抗衰老、降低胆固醇等多种生理功能[1-4]。
从灵芝子实体中提取分离的三萜类化合物数量极为有限，而采用液体发酵技术生产三萜类化合物具有生产周期短、成本低、含量稳定、主要组分与野生灵芝中的基本一致、适合工厂化生产等特点[5-6]，因此液体发酵技术已成为获取灵芝三萜类化合物的最有效方法。
发酵动力学研究的是发酵过程状态变量随发酵时间变化及控制变量之间的规律[7]。
建立深层发酵动力学模型，对发酵过程工艺条件研究、反应过程操作优化和控制具有重要意义和实用价值，可以为小罐试验数据放大、从深层发酵过渡到补料深层发酵提供理论依据[8]。
从工程角度出发，建立模型的目的是为了更深刻地了解微生物复杂的反应本质，使用模型来发现适宜的操作条件，为反应器的优化和控制服务[9]。
研究发酵动力学是实现发酵过程最优控制的前提条件，也是研究发酵过程放大及从分批发酵过渡到流加发酵、连续发酵的理论基础。
动力学模型的建立，离不开模型参数的估算。
目前常用数学模型的参数拟合方法有线性转化法、非线性拟合法和遗传算法。
非线性拟合法能直接拟合，但当动力学方程存在多个局部极值的情况下容易陷入局部最优，拟合值的准确性值得商榷。
豆渣固体发酵生产灵芝菌丝粉条件优化及三萜化合物含量的测定
关键 词 ： 灵芝 茵 丝粉 ； 三 萜化合 物 ； 固体 发 酵 ； 液 体发 酵 ； 豆渣
中图分类号 ： Ｒ ２ ８ ４
文献标识码 ： Ａ
文章编号 ： １ ６ ７ ２ － ４ ４ ７ Ｘ（ ２ ０ １ ４ ） ０ ３ － ０ ０ ５ ９ － ０ ４
器厂） ：
发 育条件 ” ， 选用料糖比 、 培养温度 、 菌丝满瓶后 再培 养时间作 为豆渣 固体法灵芝菌丝体培养 的考
察因素 ， 取 其 各 自不 同 的 水 平进 行 正 交 实验 ， 以单 位 重量 菌丝 粉 三萜 化合 物 含量 作 为评 价 指 标 ， 实 验 设计 见 表 １
表１ 灵芝培养基及培养条件的因素水平表
Ｈ Ｈ— ｓ ４数 显 电热恒 温水 锅 （ 金 坛 岸 头仪 都仪
器厂 ） ：
冰箱。
１ ． ２ 实 验方 法 １ ． ２ ． １ 灵芝 菌丝 粉生 产工 艺流程
固体 发 酵法 ： 斜 面 菌种一 原 种一 接 种一 培 养一
灵芝菌丝培养物一６ ０ 烘干一粉碎一过筛一样品灵
可现 菇蕾 （ 菌丝老化 ） 的 固体 法 灵 芝 菌丝 体 的营 养
７ ２ １ 分 光光度计 （ 上海天普 分析仪 器有限公 司 ） ： Ｄ Ｈ Ｇ 一 ９ １ ２ ３ Ａ型 电热 恒温 鼓 风 干燥 箱 （ 上 海三 发科 学仪器 有限 公 司 ） ； Ｔ ＨＺ 一 ８ ２ Ｂ型气 浴恒温 振 动器 （ 江苏 金坛 医 疗仪
一
齐墩果酸标准对照品溶液 ：精确称取 １ ０ ５ ％干 燥至恒重的齐墩果酸对照 品 Ｏ ． ０ ０ ４ ６ ｇ于 １ ０ ｍ ｌ 容量 瓶 中， 用 乙酸 乙酯定 容 ； 香草醛 （ 天津市光复精细化工研究所 ） ， 香草醛 溶液 ： ５ ｇ香草 醛用 １ ０ ０ ｍｌ 冰 醋 酸进 行 溶解 ；硫酸 溶 液（ Ｖ Ⅳ） ： 取水 ２ ８ ｍ ｌ ， 加硫酸至 １ ０ ０ ｍ ｌ 。 Ｍ Ｊ 一 １ ６ ０ Ｂ — Ｉ Ｉ 型恒温 恒 湿培 养箱 （ 上海跃 进医 疗 器械厂 ） ： Ｙ Ｘ ２ ８ ０ Ａ型高压蒸汽灭菌器 （ 上海三 申医疗器 械有限公司） ： Ｆ Ａ ２ １ ０ ４ 一 Ｂ型电子天平 （ 上海越平科学仪器有 限公 司 ） ； ｐ Ｈ 一 ３ ０ ０ 型酸度计 （ 上海天达仪器有限公司） ； Ｓ Ｗ— Ｃ Ｊ — Ｉ Ｃ型超净工作台 （ 苏州安泰空气技术
灵芝三萜类化合物提取纯化及检测技术研究进展_吕超田
灵芝( GANODERMA) 为担子菌亚门、层菌纲、多孔菌目、 多孔菌科、灵芝属的子实体，作为传统中药已有 2000 多年的 历史，《本草纲目》对其药性和功效作了详尽的记述［1］。灵芝 三萜化合物，是从灵芝中分离得到的另一类具有重要生物活 性的成分，具有较强的生理活性，如增强免疫力，延缓衰老， 抗肿瘤、抗 病 毒，保 肝 护 胆，降 低 胆 固 醇、降 血 脂、降 血 糖 等［2］，目前已分离到的灵芝酸类化合物有 130 余种［3］。目前 对灵芝酸的发酵工艺及药理作用研究较多，而对其提取纯化 方法和检测技术的研究相对较少。由于提取纯化直接影响 到灵芝酸制品的质量和药理作用，方便快捷的检测技术也有 利于灵芝酸制品的推广和应用，因此笔者就近年来国内对其 研究的进展作简要介绍。 1 灵芝三萜类化合物的提取方法 1． 1 有机溶剂浸提 灵芝三萜类化合物，难溶于水、易溶于 有机溶剂，传统以甲醇、乙醇等有机溶剂浸提为主［4］。袁媛 等用无水乙醇在热水浴中回流浸提灵芝子实体中的灵芝三 萜，得到最佳工艺条件: 溶剂为无水乙醇，用量为 18 倍量，时 间为 2 h，温 度 为 80 ℃ ; 在 最 佳 条 件 下，三 萜 的 提 取 率 达 94． 47%［5］。张宪民等以提取率和灵芝醇 A 量为指标，以提 取溶剂、提取方法、提取时间和提取次数为因素，采用正交试 验设计，得到最佳提取工艺: 以氯仿或丙酮为提取溶剂，加热 回流提取 3 次，每次提取 3 h，三萜类物质的提取率则相对较 高，而糖、氨基酸等大极性物质的提取率较小［6］。王林等采 用单因素试验设计确定了灵芝菌丝体中胞外灵芝酸的正丁 醇提取工艺，得最适提取工艺: 乙醇沉淀上清液用正丁醇在 25 ℃ 、pH 值为 4． 0 的条件下萃取，静置 24 h，得胞外灵芝酸 最大得率为 0． 67 g / L［7］。 1． 2 超声波辅助提取 超声波是指频率为 2 × 104 ～ 1 × 107 Hz 的声波，其在媒质中传播时，通过机械作用、空化作用和 热作用，产生力学、热学、光学、电学和化学等一系列效应，可 用于植物有效成分的提取［8］。用超声波提取灵芝三萜，可提 高提取率，缩 短 提 取 时 间。姚 松 君 等 以 赤 灵 芝 子 实 体 为 原
灵芝发酵粉中三萜化合物提取与测定
灵芝发酵粉中三萜化合物提取与测定胡琼方;董建生;高文庚【摘要】试验采用超声波辅助提取灵芝发酵粉中三萜类化合物,运用分光光度法测定其得率.通过单因素和Box-Benhnken设计研究乙醇浓度、浸泡时间、料液比、超声时间、超声功率、超声温度对灵芝三萜类化合物得率的影响.研究结果表明,灵芝三萜化合物提取的最佳工艺参数为:料液比为1:42(g/mL),95 %乙醇溶液中浸泡100 min后,超声功率为210 W下43℃超声提取17 min.在最优工艺条件下进行3次验证试验,测得三萜化合物平均得率为0.6128 mg/g.研究结果为灵芝发酵类产品的在线监测提供理论依据.%Triterpene compounds in Ganoderma lucidum powder were extracted by ultrasonic wave and the yield was determined by spectrophotometry. The effects of ethanol concentration, soaking time, solid-liquid ratio, ultrasonic time, ultrasonic power and ultrasonic temperature on the yield of Ganoderma lucidum triterpenoids were studied respectively.Based on the single-factor experiments,and ultrasonic power as significant factors,according to the design principle of Box-benhnken,the response surface of the experiment optimization design.The optimal process parameters were as follows:the ratio of solid to liquid was 1:42(g/mL),immersed in 95 % ethanol for 100 min,the temperature of ultrasound was 43℃,and the ultrasonic power was 210 W for17min.validation experiments were carried out at these optimum conditions,the average yield of triterpenoids measured was 0.612 8 mg/g.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)010【总页数】6页(P104-109)【关键词】灵芝;三萜类化合物;超声波提取;响应面【作者】胡琼方;董建生;高文庚【作者单位】山西农业大学食品科学与工程学院,山西太谷030801;山西瑞芝生物科技有限公司,山西运城044000;运城学院生命科学系,山西运城044000【正文语种】中文灵芝（Ganoderma lucidum）别名赤芝、丹芝，灵芝属真菌，其作为药用已有两千多年历史，在《本草纲目》和《神农本草经》中均有记载。
灵芝中三萜类有效成分的提取技术
灵芝中三萜类有效成分的提取技术任奕（本溪化学工业学校，辽宁本溪１１７００４）摘要：以灵芝三萜类成分的提取工艺研究成果为基础，介绍溶剂提取、超声波提取、酶解提取等传统提取方法，以及高压超临界ＣＯ２提取、高压脉冲电场提取等现代提取方法的研究进展，为进一步开展灵芝相关研究提供参考。
关键词：灵芝；三萜类成分；提取工艺；提取率中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ文章编号：1674-1161（20２０）０２-00５２-0２灵芝（ＧａｎｏｄｅｒｍａＬｕｃｉｄｕｍＫａｒｓｔ）是孔菌科真菌灵芝的子实体，为我国传统的药食兼用的大型真菌，其孢子、菌丝和子实体均可利用，具有祛病延年、滋补强壮的作用。
灵芝三萜化合物是从灵芝中分离出来的一类具有生物活性的成分，具有较强的生理活性，能够增强免疫力、延缓衰老、抗肿瘤、抗病毒、降低胆固醇等。
为有效提取灵芝中的三萜类成分，诸多学者对相关提取工艺进行研究和优化，旨在为灵芝三萜类成分的开发利用提供数据支持和试验基础。
１灵芝三萜类成分的提取技术１．１溶剂提取法溶剂提取法包括乙醇热提、乙醇回流提取、冷凝回流提取和索氏提取等。
其中乙醇回流提取法较为常用。
李康等为确定破壁灵芝孢子粉中总三萜的最佳提取工艺，并对其体外抗肿瘤活性进行评价。
最佳提取工艺条件为：９５％乙醇，液料比６０∶１，在８５℃条件下回流提取２ｈ，提取２次，总三萜的含量可达６．４５％。
段晓颖等优选灵芝总三萜最佳提取与精制工艺参数时，以灵芝总三萜、灵芝酸Ａ为考察指标，通过均匀设计确定总三萜提取最佳工艺参数。
灵芝总三萜提取工艺为８倍量，用９００ｍＬ／Ｌ乙醇提取３次，每次１００ｍｉｎ，提取率达８８．３９％。
１．２超声辅助提取法超声波辅助提取是利用超声波的空化作用、机械作用和热效应等加速细胞内有效物质的释放、扩散和溶解，不仅提取率高，而且能够避免高温对有效成分的影响。
王石磊等选取云南文山产的竹灵芝作为研究对象，考察乙醇浓度、温度、料液比、提取时间等不同提取条件对灵芝中三萜类成分提取得率的影响，再利用正交试验法优化提取条件，最终确定最佳提取条件为：乙醇浓度１００％，料液比１∶２０，浸提温度４０℃，提取时间２０ｍｉｎ，提取得率达１．８％。
灵芝菌丝中三萜酸的提取研究
灵芝菌丝中三萜酸的提取研究摘要：采用经典回流法试验了灵芝（Ganoderma lingzhi）发酵菌丝体中三萜酸的提取工艺。
单因素试验表明：灵芝菌丝三萜酸最佳提取溶剂为无水乙醇、液料比为10：1（mL/g）、提取时间2 h、提取次数为2次。
在单因素试验基础上，采用Box-Behnken试验设计结合响应面分析法对灵芝菌丝三萜酸的提取工艺进行优化，建立了预测三萜酸提取的多项式模型：y=0.52+0.022A+0.027B+0.064C+0.02lAB-0.013AC+0.010BC-0.056A2-0.094B2-0.0 57C2，经响应面最优分析，菌丝三萜酸提取的最优工艺参数为液料比为11：1（v/m，mL/g）、提取时间2 h、提取次数3次。
在此条件下，灵芝菌丝三萜酸提取率可达0.537 mg/g干菌丝，与预测值（0.542 mg/g干菌丝）相比，相对标准偏差为0.65%。
关键词：灵芝菌丝；三萜酸；Box-Behnken设计灵芝为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，其学名现已订正为Ganoderma lingzhi，是我国名贵的药用真菌之一。
现已证实灵芝多糖和三萜是灵芝的关键药效成分。
现代药理学研究揭示灵芝三萜具有抗肿瘤、抗艾滋病病毒HIV-1、抑制真核DNA聚合酶、抑制U46619诱导的血小板凝集、抑制前列腺增生、止痛、镇静、解毒保肝和抗菌等功能。
其中灵芝三萜酸是指弱酸性三萜，如灵芝酸、赤芝酸等三萜成分，是灵芝三萜的主要活性组分。
然而近十几年来，对有关灵芝三萜的研究主要集中在灵芝子实体中三萜组份的分离、鉴定和药理作用方面，但对灵芝菌丝体中三萜特别是三萜酸的高效提取技术研究相对较少。
因此，笔者通过液体发酵获得灵芝菌丝体，在单因素试验基础上采用响应面分析法优化其中的三萜酸提取条件，为今后放大生产提供参考。
1 材料与方法1.1 材料与试剂灵芝菌种CCGMC5.616购买于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
熊果酸标准品[美国Aladdin阿拉丁试剂（上海）有限公司]；香草醛（上海国药集团化学试剂有限公司）；无水乙醇，香草醛，冰乙酸，高氯酸，氯仿，碳酸氢钠均为国产分析纯。
基于油酸诱导的高产三萜灵芝菌丝体发酵条件优化
关键词 ： 灵 芝 菌丝 体 ， 三萜， 发 酵 条件 ， 响应 面
Ｏｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｇａ ｎ ｏ ｄ ｅ ｒ ｍａ ｌ ｕ ｃ ｉ ｄ ｕ ｍ ｍｙ ｃ ｅ ｌ ｉ ｕ ｍ’ Ｓ ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｈ ｉ ｇ ｈ ｔ ｒ ｉ ｔ ｅ ｒ ｐ ｅ ｎ ｏ ｉ ｄ ｓ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｏ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｊ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ
２ ． Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ， Ｈａ ｒ ｂ ｉ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｃ ｏ ｍｍｅ ｒ ｃ ｅ， Ｈａ ｒ ｂ ｉ ｎ １ ５ ０ ０ ７ ６， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ；
３ ． 杭 州市原种 场 ， 浙 江杭 州 ３ １ １ １ １ ５ ）
摘 要： 本 文对 油酸促进灵芝茵丝体高产灵 芝三萜发 酵条件进行 了优化 ， 旨在提 高灵 芝三 萜的产量 。实验进行 了碳
源、 氮源等 单因素的 筛选 ， 利用Ｃ Ｃ Ｄ实验设 计对培 养基进行 优化 ， 以及 对发 酵条件单 因素进行 了优化 。实验结 果表 明， 促进灵 芝菌丝体 高产灵芝三 萜的最优 条件 为 ： 培养基 成分 为 可溶性 淀粉 ３ ． ４ ％、 鱼蛋 白胨 ０ ． ７ ２ ％、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ０ － ３ ％、
Ｓ ＵＮ Ｂｉ ｎ ｇ — ｑ ｉ ｎ ， Ｑｒ Ｎ Ｋｅ － ｘ ｌ ｎ ２， Ｗ ＡＮＧ Ｇｕ ｉ －ｒ ｏ ｎ ｇ ， ＨＥ Ｇｕ ｏ —ｑ ｉ ｎ ｇ ’
树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺研究
树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺研究林倩倩;赵淑杰;朱鹤【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)018【摘要】[目的]研究树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺条件.[方法]采用微波萃取法、浸提法、回流法和超声法研究了树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺条件,然后通过单因素试验和中心组合试验对提取工艺条件进行了优化,并比较了不同提取方法对三萜化合物的提取效率的影响.[结果]微波萃取法的最佳提取条件为:乙醇浓度75％,提取时间15 min,提取温度75℃,料液比1∶20(g/ml)；在此条件下三萜类化合物的平均提取率为0.748％；浸提法、回流法和超声法中三萜类化合物的提取率分别是微波萃取法的74％、80％和83％.[结论]微波萃取法具有试剂用量少、时间短和提取效率高的优点,是树舌灵芝中三萜类化合物的最佳提取方法.【总页数】4页(P9669-9671,9804)【作者】林倩倩;赵淑杰;朱鹤【作者单位】吉林农业大学资源与环境学院,吉林长春130118;吉林农业大学资源与环境学院,吉林长春130118;吉林农业大学资源与环境学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S567【相关文献】1.枇杷花中三萜类化合物的提取工艺研究 [J], 陈建琴2.枣果中三萜类化合物提取工艺研究 [J], 苗利军;刘孟军;刘晓光;耿建暖;王静;宁强3.响应面法优化超声提取毛花猕猴桃根中三萜类化合物的工艺研究 [J], 林水花;吴建国;郑燕枝;吴岩斌;邹秀红;吴锦忠4.猕猴桃根中三萜类化合物的提取工艺研究 [J], 田娜;陈颖韬;吴文杰;张盛;刘硕谦5.超声循环提取灵芝中三萜类化合物的研究 [J], 黄书铭;杨新林;张自强;徐建兰;朱鹤荪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
灵芝发酵菌丝三萜类化合物含量的测定_王伟
从 表 ２ 中 可 以 看 到 １．０ｍｌ 为 高 氯 酸 最 佳 用 量 。 ２．１．４ 温度的选择
分别加 ０．４ｍｌ 标准液于具塞磨口试管中， 在上述 实验结果的基础上， 改变恒温水浴温度， 其它条件不 变， 分别测定不同反应温度下的吸光度。
从 表 ３ 中 我 们 可 以 看 到 吸 光 值 在 ６０￣８０℃范 围 内 相对比较稳定， 故选 ７０℃为测试温度。 ２．１．５ 时间的选择
骤进行。 ［参 考 文 献］ ［１］ 罗俊， 林志彬等． 灵芝三萜化合物药理作用研究 进展［Ｊ］． 药学学报，２００２， ３７（ ７） ： ５７４￣５７８． ［２］ 王帮武， 杨新林等． 灵芝酸性组分的提取分离及 抑菌活性研究［Ｊ］． 北京理工大学学报，２００２， ２２（ １） ． ［３］ 曾祥丽， 包海鹰等． 灵芝三萜类成分及药理学研 究进展［Ｊ］． 菌物研究，２００４， ２（ １） ： ６８￣７７． ［４］ 赵复中， 庄碧年， 钱雯． 生药膜荚黄芪中总皂苷含 量测定［Ｊ］． 南京医科大学学报，１９９４， １４（ ２） ： ２１５￣５１７． ［５］ 帕里达， 堵年生， 等． 比色法测定琐琐葡萄中总三 萜类成分的含量［Ｊ］． 华西药学杂志，２００２， １７（ ６） ： ４７５．
2结果与分析21比色条件的选择211波长的选择准确称取标准液04ml于具塞磨口试管中水浴加热挥去溶剂再试管中分别加020ml5香草醛冰醋酸溶液08ml高氯酸混匀密塞于70水浴恒温加热20min取出后立即冰水冷却以终止反应加冰醋酸1000ml摇匀在分光光度计上扫描得吸收光谱选择最大吸收波长550nm为测定波长
１ 材料与方法
１．１ 试剂 高氯酸 ＡＲ ｄ 津 市 东 方 化 工 厂 ； 冰 醋 酸 ＡＲ 沈
阳市联邦试剂厂； 香草醛 ＡＲ 沈阳市试剂三厂； ５％香 草 醛－ 冰 醋 酸 溶 液 ： 称 取 香 草 醛 ０．５ｇ， 加 入 冰 醋 酸 １０ｍｌ， 溶 解 即 可 ； 齐 墩 果 酸 的 标 准 溶 液 ： 精 确 称 取 干 燥 至 恒 重 的 齐 墩 果 酸 １０ｍｇ， 置 于 ５０ｍｌ 的 容 量 瓶 中 ， 加甲醇定容至刻度。 １．２ 仪器
论灵芝三萜类化合物的提取工艺发展
论灵芝三萜类化合物的提取工艺发展发布时间：2022-07-26T03:36:11.270Z 来源：《科学与技术》2022年第30卷第3月第5期作者：潘淇，胡明华，江忠远，谭奇奇[导读] 灵芝是一种十分昂贵且珍贵的药材，在我国已经有十分悠久的药用历史。
其中三萜酸就是灵芝体内的次生代潘淇，胡明华，江忠远，谭奇奇（遵义师范学院化学化工学院贵州遵义 563002）摘要：灵芝是一种十分昂贵且珍贵的药材，在我国已经有十分悠久的药用历史。
其中三萜酸就是灵芝体内的次生代谢产物，也是灵芝体内的活性成分之一，拥有特别显著了药理活性。
超临界CO2提取、大孔树脂分离和高速逆流色谱都是近年来灵芝三萜提取方法的高新技术。
关键词：灵芝三萜；提取分离；影响因素；研究现状[作者简介：潘淇(1980．10一)，男，(侗)，贵州遵义人，硕士研究生，副教授，遵义师范学院教师。
基金来源：主持贵州省级教学内容与课程体系改革项目《化学师范生校地实践教学合作指导模式的研究——以遵义师范学院为例》]灵芝是食药兼备的一种真菌，具有补中益气、扶正固本、祛病延年、滋阴涵阳等功效。
现代药理医学表明，灵芝三萜类化合物拥有保脾肝、抗病毒、抗癌、抗艾滋病及艾滋病蛋白酶活性、调节免疫力、控制血管紧张素转化酶、抗氧化性等功效。
现在许多国内外的研究学者都已经开始深入研究灵芝化学成分，并且取得了不错的成效。
因此，研究三萜化合物的提取分离有着很大的理论和实际意义。
1灵芝三萜类化合物的提取1.1溶剂提取法灵芝三萜化合物性质并不稳定，因此在提取分离和纯化之上难度比较大。
一般情况下则常用CH3OH、CH3CH2OH、石油醚、氯仿、丙酮或乙酸乙酯等有机溶剂在常温或高温下回流提取。
每一种溶剂来提取效果都不一。
Iksoo Lee等用CH3CH2OH回流分离提取灵芝三萜类化合物，CH3OH浸膏用水溶解经正己烷和氯仿反复萃取，得到三萜类粗提取物为2%。
侯敏娜等用正交试验设计方法来研究灵芝三萜的最优提取方法，得到最优的提取工艺为：用5倍的95%CH3CH2OH回流提取分离3次，每次的时间为1.5h，经过紫外分光光度法，得到灵芝三萜化合物的总含量为9.07%。
灵芝发酵工艺流程
灵芝发酵工艺流程灵芝（学名：Ganoderma lucidum），又称灵芝菌、仙灵芝、灵芝蘑菇，是一种具有重要药用价值的真菌。
灵芝含有多种生物活性成分，如多糖、三萜类化合物、有机酸等，具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、免疫调节等多种保健功效。
为了提高灵芝的药用价值，常常使用发酵工艺对灵芝进行处理，以增加其药用成分的含量和活性。
下面将详细描述灵芝发酵工艺的步骤和流程。
1. 选材和前处理灵芝的发酵工艺首先需要选择优质的灵芝菌种。
优质的菌种应具有良好的生长性能和药用成分含量。
一般来说，灵芝的菌种可以通过菌丝培养或孢子培养获得。
选好菌种后，需要进行前处理。
前处理的目的是除去灵芝表面的杂质和微生物，以减少发酵过程中的污染。
前处理步骤包括： - 清洗：将灵芝放入清水中，用手轻轻搓洗，除去表面的泥沙。
- 消毒：将清洗后的灵芝放入热水中煮沸，消除表面的细菌和真菌。
2. 发酵基质的准备发酵基质是灵芝发酵的重要组成部分，它提供了菌丝生长所需的营养物质。
常用的发酵基质包括木质素、豆粕、麦麸等。
发酵基质的准备包括以下步骤：•研磨：将木质素等固态基质研磨成粉末状，以增加其表面积，便于菌丝的附着和生长。
•调配：将研磨好的基质与水按一定比例混合，形成适宜的湿度和营养物质含量。
3. 发酵罐的准备和灭菌发酵罐是进行灵芝发酵的容器，它需要具备一定的通气性和温湿度控制功能。
发酵罐的准备和灭菌包括以下步骤：•清洗：将发酵罐用清水洗净，去除表面的污垢。
•灭菌：将洗净的发酵罐放入高温高压灭菌器中，进行高温高压灭菌，以杀灭罐内的微生物。
4. 菌种接种和发酵在发酵罐中进行灵芝的发酵，需要先将选好的菌种接种到发酵基质中。
接种时需要注意无菌操作，以防止污染。
接种完成后，将发酵罐放入恒温恒湿的发酵室中，进行发酵。
发酵的过程中，需要控制发酵罐内的温度、湿度和通气量。
一般来说，灵芝的发酵温度为25-30摄氏度，湿度为70-80%。
通气量要适度，以保证菌丝的正常生长和代谢。
灵芝三萜提取工艺研究
灵芝三萜提取工艺研究
袁媛;杨毅;开桂青;潘见
【期刊名称】《安徽化工》
【年(卷),期】2007(033)004
【摘要】研究灵芝中三萜的提取工艺.方法:采用单因素试验法和正交试验法,以灵芝三萜的提取率为考察指标,考察溶剂浓度、溶剂用量、温度、时间等因素对提取率的影响.结果:浸提温度是影响三萜提取率的主要因素.最佳工艺条件:溶剂为无水乙醇,溶剂用量为18倍量,时间2 h,温度80℃,此条件下三萜提取率达94.47%.结论:该工艺的三萜提取率高,可用于灵芝中三萜的提取.
【总页数】3页(P27-29)
【作者】袁媛;杨毅;开桂青;潘见
【作者单位】合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心,安徽,合
肥,230009;合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心,安徽,合肥,230009;合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心,安徽,合肥,230009;合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心,安徽,合肥,230009
【正文语种】中文
【中图分类】S567.3+1
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灵芝真 菌固态发酵产三萜类化合物的工艺条件
张志才 何林 富 黄 达明
江苏大学食品与生物工程学院生物工程研究所
摘 要 采用单 因子 试验 和 响应 面法优化 灵芝真 菌 固态发酵产 灵 芝三 萜类化合 物 （ 芝酸 ） 灵 的
３ 艺条 件 。 于 ３因素 ３水平的 中心组合设 计， － 基 得到 了描述 灵 芝真 菌 固态发 酵的灵 芝酸产 量与操作
２ １ 而 和 Ｍ 对 灵芝 酸 的产 量都 提 高 约 ２２ １ ｇ ０ ５ 。灵
５ Ｏ ５ Ｏ ５
高 ．可 能是 灵芝 真 菌 菌体 与 发酵 基 质 的接 面较 少 ，
Ｏ
发 酵速 率较 慢 。 当接 种量在 ｌ ０％ ～２ ０％， 同时 间 相 内对灵 芝 酸的产 量影 响不 大 。
高氯 酸 、 冰醋酸 、 香草 醛 、 无水 乙醇 、 乙酸 乙酯 、 乙 冰 酸和 三氯 甲烷 均为 国产分析 纯试剂 。
收稿 日期 ：０ ９—０ ２０ ６— １ ７ 通信作者 ： 张志 才
６ 饲料研究 Ｆ Ｅ） Ｆ Ｉ Ｒ ８ Ｅ １ Ｒ ． ¨｛ Ｓ． Ａ
∽０ ｌ２
量 浓度 。 ２３ 发 酵时 间对产 灵芝 酸 的影 响 － 灵芝 生 长 发酵 前 期 主要 以菌丝 细 胞生 长 为 主 ，
一
３ ｏ ０
酒 精 粗 提 物 质 量
７ Ｏ
望 ２０ ５
皿Ｉ２ ０ 旺 ０ ｛
６ 面 ５
６ 瞧 ０
５ ５
塞１ ５ ０
１０ ０ ５ Ｏ
＋ 灵 芝 酸含 量
芝 在 生长 和代 谢 产 物 阶段 ， ＋ Ｍｇ 是 其 生 长 的必 Ｉ和 （ ２
需 因子 ， 不添 加 Ｋ 或 Ｍｇ 时， 芝 发 酵 过 程 中 Ｋ 在 。 灵
暑 蟋 ／ 黏
和 Ｍｇ＋ ２ 质量 浓 度 可 能 还 没 达 到 其 生 长 的所 需 的质
纤 维酶 从 而分 解 麦 草秸 秆 纤 维 素成 为 糖 类物 质 供 灵芝 真菌 自身生 长 。 同时 ， 芝真 菌能 产生 胞外 和 灵
胞 内灵芝 酸 。灵芝 真菌 固态发酵灵 芝产灵 芝酸一 方 面对灵芝 酸 的生产 是个新 的尝试 。另一面 可有效利 用 秸秆 资源 ． 芝 真菌 固态 发酵 秸秆产 物 中还 富含 灵 灵 芝多糖 和灵芝 菌 体蛋 白等 物质 ， 灵芝 真 菌 固态 发 酵秸秆 产物 可作 为功 能性秸秆 饲料 。
１ ． 灵 芝酸 的测定 ．３ ２ 吸取 乙酸 乙酯定 容液 １ ，０ 水 浴蒸 干， ｍＬ １０ｏ Ｃ 然 后 加 入 ５％香 草 醛 一冰 乙 酸 溶液 ０４ ｍ ． Ｌ和 １ｍ Ｌ 高 氯酸 ，０℃水 浴 中加热 １ ｎ后 移 入冰 水 浴 中， ６ ５ｍｉ
熊果 酸标 准 品， 于 中 国药 品生 物 制 品检定所 ： 购
组 别 图２ ３种 金 属 离 子 对 灵 芝 发 酵 产 灵 芝 酸
ｌ０ ８
不添加离子
测 定 实验 室用 水 为 ｐ ．， 相 同料 水 比加 入 基料 Ｈ６ 按 ２ 中 ， 究不 同起 始 ｐ 对灵 芝酸 产 量 的影 响 ， 果见 研 Ｈ 结
图 ５
饲 料 研 究 Ｆ Ｅ Ｅ Ｅ Ｃ ｜ Ｅ ＤＲ Ｓ ＡＲ ＩＮＯ．｝２０ ６ １ ０５ ） ９
能降解秸 秆 的可 能性 ； 东平对 灵芝 液体 发 酵产纤 孙 维 素酶 的提取 及性 质分 析进 行研 究 ， 明 了灵 芝能 证 产纤 维素 酶 。 而进 一 步证 实 了灵芝 真菌 能 降解 秸 从
秆 。试验 以麦草 秸秆 为碳 源 ， 使灵 芝真 菌诱 导产 生
１ ． 标准 曲线 的绘 制 ．１ ２
为 氮 源 的 固体 发 酵 培养 物 获 得 的纤 维 素 酶 酶 活较 高 ． 能在 酶水 解无 定 型纤 维素 成为纤 维 素寡糖 的 可 过 程 中 ， Ｉ Ｏ 起 到 明显 的促 进作 用 。从 图 ７可 （￣ Ｎ ＆Ｓ
芝酸 的生成不 利 。 始 ｐ 起 Ｈ为 ６时 ， 酒精 精提物 质量 可达 到最 大值 ． 胞外 内总 三萜 的 含量也 可达 到最 大
次 ， 酸 氢 钠 层 用 ６ ｍ ｌｍ 碳 ｏ／ Ｌ盐 酸 调 ｐ 至 ２ ３， Ｈ ～
ｌ 材料与方法
１１ 试 验 材 料 ． １１１ 灵 芝 菌 种 ． ．
灵芝 菌种 ＪＵ ０ ， Ｓ ９ 江苏 大学生 物工 程研究 所分 离纯化 。灵芝 的研究 过 程 中发 现 ， ３种金 属 离 子 Ｚ 、 ｎ Ｋ 和 Ｍｇ 对 灵 芝 纤 维 素 酶 酶 活有 较 明显 的促 进 作 ２ 用 。在发 酵 的料 水 中按其 研 究得 出 的质量 浓度 分别
添 加 １ ｇｍＬ的 Ｚ Ｍ ，． ｇ ．ｍ ／ ６ ｎ 和 ０２ ｒ ／ ４ａ ｍＥ的 。 从 图 ２可见 ： 添加 Ｚ 灵芝 酸 的产量 几 乎没 有影 响 ， ｎ对
２０ ４
缸
２５ 起 始 ｐ 对 产 灵 芝 酸 的 影 响 ． Ｈ
链 ２０ ２
２０ ０
发 酵 前 把 配 置 好 的营 养 液 ，用 １ｍｏ Ｌ的 Ｈ １ ｌ ／ Ｃ
和 １ｍ ｌ ｏ／ Ｌ的 Ｎ Ｏ 调 ｐ 为 ３、 ５ ６、 和 ８ 并 ａＨ Ｈ ４、 、 ７ ，
添加ｚ“ 添加Ｍ ２ 添加 ｎ ｇ ｔ
利 用麦 草 秸 秆资 源 ， 而所 产 的灵 芝 酸 在此 期 间 能 从
达 到一 个峰值 。
一
一
灵 芝 酸 含 量
发酵 过 程 失 质 量
２ 结果与讨论
２１ 灵 芝 酸 标 准 曲 线 ．
根据试 验 方法 中标 准 曲线 的绘 制方 法 ，从 图 １
可 见 ： ＝ ．０ 一 ．０１３Ｒ ＝ ．９ ｙ Ｏ０ ３５ Ｘ ００ ， ０９ ９ ３。
参数间的二次响应面模型。 在起始 ｐ ． ， Ｈ６ ４以料水比 １ ． ，Ｎ ４ Ｏ 质量浓度为 １ ７％ ２ ：２ （Ｈ） １２ Ｓ ． 灵芝真菌 ０ 固态发酵时， 由回归方程预测在此条件下的灵芝酸产量的理论值为 ２２ ５ｔ ／。模型优化条件下 ７． ｇ ５ ｘｇ 的灵芝真菌固态 ２ｋ 发酵所得灵芝酸含量 （ ０ ３Ｉ ／ －灵芝真菌固态 ２ ｇ ｇ ２ ． ｇ ） ７ ０ ｘ ｇ￣ ０ｋ 放大发酵所得灵芝
耵 资 开 与 用 源 发 利
∞ 卿 扣留
如 ∞ ０ Ｏ ∞ ∞ ∞ 如 ∞
从 图 ５可见 ：起始 ｐ Ｈ小 于 ５或大 于 ７时对灵
２７ Ｎ ４Ｓ 量浓度对灵芝发酵产 灵芝酸 的影响 ． Ｈｈ Ｏ 质 ｆ ｆ Ｈ ） Ｏ 作为 灵芝 生长 的氮 源 ， Ｎ－） Ｏ 作 Ｎ ４Ｓ ２ 以（ Ｉ ： ＬＳ
Ｏ
菱
当后期 菌丝 发 育 到 一 定 程 度 ， 图 ３可 见 ： 验 中 从 试 发 酵 时 间 为 ８～１ ４ ｄ时平 均 每 天 发 酵 失 质 量 比其
５ ； 藿
４ ０
接 种 量／ ％
２０ ８
图 ４ 接 种 量 对 灵 芝 发 酵 产 灵 芝 酸 的 影 响
望２０ ６
２ ｌ ｌ
图 ３ 发 酵 时 间 对产 灵芝 酸 的影 响
∞ ２４ 图 ｌ 灵 芝 酸标 准 曲 线 ∞ ∞ 卯 ∞ ∞ ０ ．
接种 量对 灵芝 发酵 产灵芝 酸 的影 响 接 种 量对 灵 芝 发 酵产灵 芝 酸 的影 响 研究 中 ． 所
２２ ３种 金属 离子 对灵 芝发 酵产 灵芝 酸 的影 响 ． 江苏大学生物工程研究 所 在 前 期 的 灵 芝 纤 维 素
１１ 主 要 仪 器 ．３ ．
灵芝 酸 活 性 物质 提 取 过 程 中 主要 通 过 液态 发
酵来 提取 固态发酵工 艺 的报 道较少 。段 明星等进 行
了灵芝 纤维 酶 的性质 和纯 化研 究 ， 明了灵 芝真 菌 证
７２ ５ Ｃ可见紫 外分光 光度计 ； 转蒸发 仪 。 旋
１ 试 验 方 法 ． ２
接种 子 是 江 苏 大 学 生 物 工 程 研 究 所 前 期 经 优 化研 究 的产 灵 芝 产 纤 维 素 酶 和 木 聚 糖 酶 活 性 都 较 高 的 固态 培 养基 培养 的菌 种 ， 灵芝 真 菌 固态 培养 基 培养
７ｄ后接 人 到灭过 菌 的发 酵基质 中。从 图 ４可见 ： 接 种 量 为 ５％时 ． 同的发 酵 时 间 内灵 芝 酸 的产 量不 相
酸含 量（６ ． ｇｇ 本 与理 论值相 符 。 ２ ８６ ４ ／基 ）
关键词 灵 芝 灵 芝酸 固 态发 酵 单 因子试验 响 应分析
中图分类号 ： １ ．５ Ｓ８ ６３
文献标 志码 ： Ｂ
文 章编号 ：０ ２ ２ １ （０ ９１ － ０ ８ ０ １ ０ — ８ ３２ ０ ）１ ０ ６ — ３
０３ ＿５ ０３ －０ ０２ ．５ ０２ ．０ ０１ ．５ ０Ｉ ．Ｏ ＯＯ ．５
２ ４ ｂ 子 ｌ Ｕ ｌ ｊ ｌ ２ ４ Ｏ
固 态 发 酵 时 问， ｄ ∞ 删如
灵 芝 酸 对 照 品质 量 浓 度 ／ｐ ３・ （￣ ｍＬ ） ｇ ２
溶 液 Ｏ Ｌ后 和 １ｍＬ高 氯 酸 ，０℃水 浴 中加 热 ．ｍ ４ ６ １ ｉ 移入 冰水 浴 中 ， ５ｍ ｎ后 并加 入 ５ｍＬ冰 乙酸 ， 摇匀
后 置 于室 温 。 １ ｉ 用 分 光 光度 计 在 ５ ８１ａ ５ ｍ ｎ后 ４． ｍ 波长下 测定其 吸光 度 。
１ ． 灵 芝 酸 的 提 取 ．２ ２
称 取灵 芝 真菌固态发酵产 物１ ０ｇ用 １ ０倍 ９ ５％ 乙醇 ， ５ ℃水 浴 回 流 ４ ｈ， 复 ３次 ， 醇 提 取 ８ 重 乙 液 冷却后 合并 过 滤 ， 空浓 缩 至干 ， 到浸 膏 。 真 得 浸膏 用 １ ５倍 体 积 氯 仿 溶 解 ，移 至 分 液 漏 氯 仿 ， 再 用 氯 仿 洗 残 渣 ２次 ， 并 氯 仿 液 ． 空 浓 缩 至 合 真 原 体 积 １１ 用 饱 和 碳 酸 氢 钠 萃 取 氯 仿 液 ４ ／０：