1第一章 血液标本采集和血涂片制备
(二)血液标本的采集和血涂片的制备 - 副本
真空采血管使用中常见问题及处理办法
1 溶血 原因：负压相对较大，采血初始，血速度快，RBC相互 撞击可致破裂
措施：采血时，使血液沿管壁缓缓流下
2 漏血 原因：采血管乳胶护套松动或针头刺出乳胶护套，采血 针密封 不严。
措施：采血前检查并安紧乳胶护套，遇有针头刺出则重新 套好针头， 以保持其密闭性。
3 血流不畅 原因：内无负压或不够。 措施：更换采血管。
注射器静脉采血注意事项
(1) 用注射器抽血应避免大力拉、推针拴，以免血细 胞因受过度挤压而增加溶血。
(2) 抽血时大力抽拉针拴，还易使血液产生气泡。气 泡是导致溶血、蛋白酶失活的重要原因之一。
(3) 如果使用注射器抽血，应先卸除针头，再沿试管 壁将血液轻缓地注入试管。
(4) 通过针头将血液推入试管（血液细胞二次通过针 头），尤其是用力推送，将增加血液细胞受挤压而 破碎的机会，导致溶血。
• 采用专用真空采血装置。优点：无血液外 溢和污染，标本转运方便, 减少了溶血 现象，保护血液有形成分，标本原始性状 的完整性。
静脉采血部位：
坐位或卧位体表的浅静脉 、肘
部静脉、手背静脉或内踝静脉、 股静脉。颈外静脉（婴幼儿）
采血的器材
• 试管 • 注射器 • 消毒器材 • 双向采血针
真空采血管
第一章 血液标本采集和血涂片制备
第一节血液标本采集
一 血液标本采集的一般要求
• 检验申请单：包括患者和医生的信息 及采集运送收集者的信息和时间
• 标本采集和处理的具体要求 • 标本信息的完整性 • 标本拒收
一、标本采集的要求
• 检验申请单:患者信息,申请者信息,采 样及送检信息
• 标本采集和处理要求 • 标本信息的完整性 • 标本的拒收
七年级(初一)生物 第一章血液标本采集和血涂片制备
临床检验讲义第一章血液标本采集和血涂片制备1．血液标本采集和抗凝剂血液在循环系统中不断地流动，与全身各系统的组织器官均有密切的联系，参与机体的功能活动，维持正常的新陈代谢和内外环境的平衡。
在病理情况下血液中各成分质和量的改变不仅能反映造血系统的疾患，而且能直接或间接地提示全身或局部组织器官的病变。
很多因素会影响到血液标本检测，如患者的活动情况和精神状态、药物、年龄、性别、种族、标本采集的时间以及是否吸烟等都会明显影响检测结果。
此外，血液标本的分析应密切结合临床，例如，患者有严重腹泻或呕吐时，红细胞计数可因脱水而增高。
（1）采血方法：血标本的正确采集是获得准确、可靠的实验结果的关键。
血液标本的采集分为皮肤采血法、静脉采血法和动脉采血法，所有的采血技术均要求保持血液标本的完整性。
不同的采血法无论细胞成分或化学组成，多存在不同程度的差异，因此在判断和比较结果时必须予以考虑。
1）静脉采血法：当所需血量较多或采用全自动血液分析仪测定时，通常使用静脉采血法。
位于体表的浅静脉几乎均可作为采血部位，通常采用肘部静脉；如肘部静脉不明显时，可改用手背静脉或内踝静脉，必要时也可从股静脉采血。
2）皮肤采血法：此法所采之血实质是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，也含有细胞间质和细胞内液。
主要用于各种微量检查或一般常规检查，多选择手指为采血部位。
世界卫生组织（WHO）推荐取左手无名指指端内侧血液做血液一般检验。
婴幼儿手指太小可用脚拇趾或足跟采血。
严重烧伤患者，应选择皮肤完整处采血。
为避免交叉感染，应严格实行一人一针制，有利于采血的质量控制。
皮肤采血的主要缺点是易于溶血、凝血和可能混入组织液，检查结果重复性差。
3）真空采血法：又称为负压采血法。
各种真空定量贮存抗凝试管，根据需要标有不同的色码备用，适于不同的检验项目。
该法采用封闭式采血，血样无需容器之间的转移，减少了溶血现象,能有效保护血液有形成分，保证待验血标本原始性状的完整性，使检验结果更接近真实,为临床诊断提供可靠依据。
主管检验师资格考试考点总结——临床检验基础血液样本采集和血涂片制备
主管检验师资格考试考点总结——临床检验基础血液样本采集和血涂片制备一、考纲要求血液样本采集和血涂片制备1.血液生理概要（1）血液组成掌握（2）血液理化性质了解（3）血液特性了解（4）血液生理功能掌握2.采血方法（1）静脉采血法掌握（2）皮肤采血法掌握（3）真空采血法掌握（4）方法学评价掌握（5）质量控制熟练掌握3.抗凝剂选择熟练掌握4.血液涂片制备（1）载玻片的清洁掌握（2）血涂片的制备掌握5.血液细胞染色（1）瑞氏染色法掌握（2）吉姆萨染色法掌握6.方法学评价（1）血涂片制备掌握（2）血液细胞染色掌握7.质量控制（1）血涂片制备熟练掌握（2）血液细胞染色熟练掌握二、考点知识（一）【血液生理概要】1.血液组成2.【血液标本类型】①全血--临床血液学检查②血浆--全血+抗凝剂+离心③血清--全血+离心（静止）（1）不加抗凝剂，无纤维蛋白原应用于：化学和免疫学检测、血栓与止血检查（2）血浆与血清的区别：血浆抗凝出凝血；血清清白缺因子（二）【采血方法】（一）静脉采血法1.概述通常采用肘部静脉、手背静脉、内踝静脉或股静脉。
小儿可采颈外静脉血液。
为避免血小板激活，要使用塑料注射器和硅化处理后的试管或塑料试管。
2.操作方法和注意事项准备→检查→消毒→穿刺→抽血→放血与混匀（1）准备采血前应向患者耐心解释，以消除其疑虑和恐惧心理。
（2）检查静脉采血前要仔细检查针头是否安装牢固，针筒内是否有空气和水分。
（3）消毒先用30g/L碘酊棉签自所选静脉穿刺处从内向外、顺时针方向消毒皮肤，待碘酊挥发后，再用75%乙醇棉签以同样方法拭去碘迹。
（4）穿刺使针头斜面和针筒刻度向上，沿静脉走向使针头与皮肤成30°角斜行快速刺入皮肤，然后以5°角向前穿破静脉壁进入静脉腔。
见回血后，立即去掉压脉带。
（5）抽血针栓只能外抽，不能内推，以免形成气栓。
（6）放血与混匀取下注射器针头，将血液沿试管壁缓缓注人抗凝管中，防止溶血和泡沫产生。
血液标本采集和血涂片制备
第一章血液标本采集和血涂片制备1.血液检验有哪些标本类型及应用范围？答：有全血标本（静脉全血，应用最多，成人肘前静脉，腕静脉，小儿新生儿颈静脉，股静脉；动脉全血，血气分析；毛细血管全血，微量取血），血浆标本（血浆化学成分测定和凝血实验），血清标本（临床化学和免疫学检测，与血浆相比，仅缺少纤维蛋白原），分离或浓缩的血细胞成分（特殊的检验项目，如分离单个核细胞）。
2.临床有哪些主要采血方式及其应用范围？答：采血部位分，皮肤采血；静脉采血；动脉采血。
采血方式分普通采血（非真空系统对浅静脉穿刺）和真空采血（负压采血，计量准确，传送方便，封闭无菌，容易保存）。
3.使用真空采血管有哪些优点和用途？答：真空采血系统应用最符合分析前的质量控制要求和实验室生物安全防范，因此正在普及应用。
真空采血系统由持阵器；双向采血针；采血管构成，可进行一次进针，多管采血。
有全血的紫色（玻管）血液学试验，紫色（塑管）血液学和免疫学血液学试验，黄色（血培养），浅蓝色（凝血试验），黑色（红细胞沉降）；有血清的红色（玻管）化学血清学免疫血液学试验，红色（塑管）化学血清学免疫血液学试验急诊化学试验，金黄色（化学试验），有血浆的绿色（化学试验），浅绿色（化学试验），灰色（葡萄糖试验）。
4.常用的抗凝剂各自有什么特点和用途？答：常用抗凝剂有乙二胺四乙酸（EDTA）：与钙离子结合，全血细胞计数；枸椽酸盐：钙离子结合，血沉，凝血，输血保养液；肝素：加强抗凝血酶3，血气分析，红细胞渗透脆性；草酸盐：钙离子结合，血浆标本抗凝；促凝剂：激活凝血蛋白酶加速血液凝固，缩短血清分离时间，适用急诊化学检验；分离胶，形成隔层，快速分离清晰血清标本。
5.如何避免患者状态对检验结果的影响？答:了解标本采集前患者的状态和影响结果的因素，并将要求和注意事项告诉患者，要求给与配合，使所采集的标本尽可能少收非疾病因素的影响，并在标本采集过程中，注意患者的生理状态、饮食和药物对检验结果的影响。
第一章 血液标本采集和血涂片制备
第一章血液标本采集和血涂片制备通过本章学习，你将能回答关于“血液标本采集和血涂片制备”的下列问题：第一节血液标本采集正确采集血液标本是获得准确、可靠检验结果的关键，在自动化检验仪器普遍应用的现代临床实验室，分析前质量管理是全程质量管理的重点。
《医学实验室－质量和能力的专用要求－ISO/IEC15189》文件把“分析前程序”定义为：按照时间顺序，从临床医嘱开始，到分析检验程序终止时的步骤。
包括：检验申请、患者准备、原始样品采集、运送到实验室并在实验室内传输。
血液标本的采集和处理是分析前质量控制的主要环节，是十分重要的基础性工作。
一、标本采集的一般要求（一）检验申请单检验申请单或电子申请表中应包括患者最基本的信息，以识别患者和经授权的申请者，同时应提供相关的临床信息。
患者相关的临床信息至少应包括姓名、性别、年龄，以备解读检验结果之用。
（二）标本采集和处理具体要求实验室管理文件应向负责采集标本的人员提供标本采集和处理具体要求。
这些要求应包括在标本采集手册中（表1-1）。
表1-1 正确采集和处理标本具体要求（三）标本信息完整性标本应可通过检验申请单溯源到特定的个体，实验室不应接收或处理缺少适当标识的检验申请单。
1．如果标本标识不明确，或者标本不稳定（如脑脊液、活检标本等），不便重新采集的标本或属于紧急情况，实验室可先处理标本，但是不发送检验报告，直至申请检验医师或标本采集人员承担标本鉴别和接收的责任，或者提供适当的信息。
2．根据申请检验项目的特性以及实验室的相关规定，标本应在一定时间范围内送检。
急症或危重患者的标本要特别注明和标识。
3．根据标本采集手册的规定，标本应保持在一定的温度范围内，并含有规定的防腐剂，以确保标本的完整性。
4．所有接收的标本应当记录在登记本、工作表、计算机或其他类似系统中，并记录标本接收的日期和时间、接收人员等。
（四）标本拒收实验室应当制定标本接收和拒收的标准文件。
因不同的检验项目对标本的要求不同，故应分别制定拒收标准。
临检基础职业考试刷题 第一章 血液样本采集和血涂片制备
第一章血液样本采集和血涂片制备一、选择题（一）、A1型题（标准型）1.静脉采血法的采血部位首选：A. 肘部静脉B. 手背静脉C. 内踝静脉D. 股静脉E. 颈静脉2.WHO推荐成人皮肤采血部位为：A. 无名指指端内侧B. 中指和无名指指端内侧C. 中指指端内侧D. 耳垂E. 大拇趾3.血细胞分析中最常用的染色法为：A. 吉姆萨染色B. 瑞氏染色C. HE染色D. 罗氏染色E. PAS染色4.溶解瑞氏染料的有机溶剂是：A. 丙酮B. 无水乙醇C. 甲醇D. 二甲苯E. 乙二醇（二）、A1型题（否定型）1. 血清中不含有下列那种成分：A. 球蛋白B. 白蛋白C. 纤维蛋白原D. 无机盐E. 激素2. 静脉采血标本溶血的原因不包括以下那种情况：A. 容器不洁B. 抽血过快C. 与水接触D. 剧烈震荡E. 有组织液混入3. 下列那一种抗凝剂不能与血液中的钙离子结合：A. EDTA-K2B. 草酸钠C. 草酸铵D. 肝素E. 枸橼酸钠（三）、B1型体（配伍题）问题1~3A. EDTA-K2B. 肝素C. 枸橼酸钠D. 双草酸钠E. 草酸胺1. 适用于全血细胞分析用的抗凝剂为：2. 红细胞沉降率测定所用的抗凝剂为：3. 用于凝血功能测定用的抗凝剂为：二、判断题1. 耳垂采血的测定结果与手指采血、静脉采血的测定结果一致。
三、名词解释1. 抗凝和抗凝剂四、论述题1.试述瑞氏染色法的原理及PH值对其的影响？。
第一章血液标本采集和血涂片制备2012.2.13
真空采血采集步骤
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真空采血常用器材及用途
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真空采血容器色泽及应用范围
颜 色 抗凝剂 灰 草酸盐、氟化钠 黄 绿 肝素 红 蓝 枸橼酸盐 紫 乙二胺四乙酸盐 应用范围
全血、血浆，抑制糖原分解的酶
生化、免疫检验 全血、血浆 血清 全血、血浆，凝血一般检查 全血、血浆
钾盐用于血细胞、血小板和血液学检查
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一、制备血涂片的玻片要求
玻片要求：清洁、干燥、中性、无油腻 新玻片： 重铬酸钾洗液或稀盐酸10%浸泡
24小时，然后清洗。
旧玻片： 推片： 肥皂水泡，煮沸20分，清洗，烘干。 光滑
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二、血涂片制备方法
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两种推片方式
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三、一张良好的血涂片要求
良好的血片：厚薄适宜，头体尾分明， 分布均匀，边缘整齐、 两边留有一定的空隙。 影响因素：血量（多——厚） 速度（快——厚） 角度（大——厚），一般30—45度。
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常用抗凝剂
3.肝素（heparin）：钠盐或锂盐 原理：由肥大细胞和嗜碱性粒细胞产生，加强
抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶的作用， 从而阻止凝血酶形成
适用：血液流变学、RBC脆性、血气分析、生
化分析
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常用抗凝剂
肝素（heparin）
用量：15IU/1mlBlood 特点：抗凝效果强；
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真空采血法特点：
干净安全：钴60照射，保证内壁100%无菌；去离子水和去污剂冲洗，内
壁无致热源；并经硅酮处理；超净室内组装：标本溶血或被外源性物质污 染的可能性极小
简便快捷：不需配制添加剂，平均减少采血时间20%，检验操作时间12%；
减少患者不适：可实现一针多管操作
第一章血液标本采集和制片
第一节 血液标本的采集
（二）静脉采血法
1、普通静脉采血
注意事项
①严格无菌操作，止血带压迫时间不超 过1min,抽血时避免气泡。
②以检查项目要求选择是否空腹采血。
③出血性疾病要用硅化或塑料注射器和 试管。
④应拔下注射针头后,将血沿试管壁注 入试管。
化学，不适于血库
钾测定 化学 血沉 铅测定 血库
P10 表1-3
三、血液标本的抗凝
抗凝：应用物理的或化学的方法，除 掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血 液凝固，称抗凝。
抗凝剂（物质）：能够阻止血液凝固 的化学试剂或物质。
三、血液标本的抗凝
（一） 枸橼酸钠 机理：与血中钙离子形成可溶性螯合 物，从而阻止血液凝固。 浓度：109mmol/L(32.0g/L)，
添加抗凝剂 无 EDTA 枸橼酸钠
肝素钠、肝素锂、 肝素铵 氟化钠、草酸钾
多茴香脑磺酸钠 (SPS) 无抗凝剂或肝素 钠、EDTA 分离胶／凝块激 活剂
分离胶／肝素锂 凝血酶 枸橼酸钠 肝素钠 无
注意事项 凝块形成约需30min 须颠倒混匀6～8次 须颠倒混匀；血液与抗 凝剂比例为9:1 根据实验需要．选择不同 类型的肝素 不能用于其他化学检查
106mmol/L(30.8g/L)
三、血液标本的抗凝
（一）枸橼酸钠 用途：
1. 止 凝 血 象 检 查 ， 血 液 保 养 液 用 109mmol/L按1:9比例。
2.血沉测定，用106mmol/L与血按1:4 比例。（ICSH国际血液学标准化委员会推 荐）
缺点：不适于血细胞计数。
三、血液标本的抗凝
最新临床血液学检验(第五版)1第一章 血液标本采集和血涂片制备电子教案
* 假设HCT为0.50
第三节 血涂片制备与染色 外周血涂片检查是最有益的血液系统疾病 检查手段，能为临床提供大量的信息。 因此，血涂片制备和染色的质量直接影响 血细胞形态的检验结果。 一张合格的血涂片应该是厚薄适宜，血膜 头、体、尾分明，分布均匀，两侧留有一定的 空隙，边缘整齐。
一、血涂片制备
（二）标本采集和处理的具体要求 实验室应向负责采集标本的人员提供标本采集和 处理的具体要求（表1-4）。
（三）标本信息完整性与接收 血液标本可通过检验申请单溯源到特 定的个体，实验室不应接收或处理缺少标 识的检验申请单和标本（表1-4-1）。
三、血液标本采集及检测结果的影 响因素
（一）饮食和生理状态 患者饮食和生理状态对检验结果的 影响见表1-5。
第一节 血液标本采集
正确采集血液标本是获得准确、可靠检验 结果的关键。
在自动化检验仪器应 用普遍的现代临床实验室 中，基础性的血液标本的 采集和处理是检测前质量 保证的主要环节。
一、血液标本类型
二、血液标本采集方法 血液标本的采集方法按采集部位可分为皮肤采 血法、静脉采血法和动脉采血法。 （一）皮肤采血法 主要用于需要微量血液的检验项目和婴幼儿血 常规检验。皮肤采血法所获得的血液标本是微动脉 血、微静脉血和毛细血管血混合的末梢全血。
（五）检测后血液标本的处理 根据《实验室生物安全通用要求》要 求： ①将操作、收集、运输及处理废弃物 的危险减至最小。 ②将其对环境的有害作用减至最小。
第二节 血液标本采集的质量保证
标本采集是检测前质量管理的主要内容，检 测前的大部分工作是由患者、医生、护士、运送 人员及检验人员在实验室以外的空间和进入检验 过程前完成的，临床实验室难以监控这一过程中 的每个环节。
1第一章血液标本采集和血涂片制备
（3）染色方法与结果判断：染色方 法见表1-11-1。
2．Giemsa染色法 （1）染色原理：与Wright染色法基 本相同。Giemsa染色法加强了天青的作 用，提高了噻嗪类染料的效果。 （2）试剂：染液放置越久，其染色 效果越好。
（3）染色：Giemsa染色法的步骤与方 法见表1-11-2。
2）pH值的影响：血细胞多种成分属 于蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所 带电荷随着溶液的pH而定。因此，血细 胞染色对氢离子浓度十分敏感。
染色时常用缓冲液（pH6.4～6.8）来调节 染色时的pH值，以达到满意的染色效果（表111）。
（2）试剂 1）Wright染液： Wright染液是由伊 红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇的作用： ①溶解伊红和亚甲蓝。 ②具有很强的脱水作用，可以固定红 细胞形态，提高对染料的吸附作用，增强 染色效果。 2）磷酸盐缓冲液（pH 6.8）
3．Wright-Giemsa染色法 WrightGiemsa染色法结合了Wright染色法和Giemsa 染色法的优点。在Wright染液配方的基础上， 每1.0g Wright染料添加0.3g Giemsa染料。染 色步骤与Wright染色法相同。
【方法学评价】血涂片染色的方法学评 价见表1-12。
需要注意的是，标本拒收不但造成 检验费用增高和时间浪费，还可能延误 诊治甚至危害患者。因此，涉及血液标 本采集的所有工作人员，都必须在标本 采集、转运和处理各个环节进行全面而 规范的培训。
（四）血液标本保存 血液标本保存应当在规定的时间 内、确保标本特性稳定的条件下，按 要求分为室温保存、冷藏保存、冷冻 保存（表1-3-3）。
一、血液标本采集环境要求与生物安全 （一）环境要求 应该人性化设置，空间宽敞，光线明亮， 通风良好，血液标本采集的台面高低和宽度 适宜，座位舒适。 （二）生物安全 1．防止交叉感染 2．环境消毒
第1章 血液样本采集和血涂片制备
第一章血液样本采集和血涂片制备第一节血液生理概要本节要点:（1）血液组成（2）血液理化性质（3）血液特性（4）血液生理功能（一）血液的组成血液由血细胞（红细胞、白细胞、血小板）和血浆组成。
离体后血液自然凝固，分离的淡黄色透明液体称为血清。
血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体称为血浆。
血清与血浆差别是：血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ（纤维蛋白原）、Ⅱ（凝血酶原）、Ⅴ、Ⅷ等。
全血适用于临床血液学检查，如血细胞计数、分类和形态学检查等。
血浆适用于血浆生理性和病理性化学成分的测定，特别是内分泌激素测定；血浆除钙离子外，含有其他全部凝血因子，也适用于血栓与止血的检查。
血清适用于临床化学和临床免疫学检查。
（二）血液理化性质（基础知识，相关专业知识，了解）1.血量：指存在于血液循环系统中全部血液的总量，相当于血浆量与血细胞量的总和。
正常人血量约为70±10ml／kg体重，成人约4～5L，约占体重的6%～8%，其中血浆占55%，血细胞占45%。
小儿血量与体重之比略高于成人，男性比女性血量稍多，但女性妊娠期间血量可增加23%～25%。
2.颜色：血液的红色来自红细胞内血红蛋白。
动脉血氧合血红蛋白含量较高，呈鲜红色；静脉血还原血红蛋白含量高，呈暗红色。
严重贫血者血液红色变浅。
严重CO中毒或氰化物中毒者血液呈樱红色。
餐后，尤其是高脂膳食后，血浆呈乳白色。
溶血患者血浆呈红色。
3.酸碱度：随人体饮食中摄入的酸性或碱性物质、体内代谢产生的酸性物质，如乳酸、乙酰乙酸、β-羟丁酸、H3P04、H2S04等影响，血液pH波动在很小范围内。
正常人血液pH为7.35～7.45，动脉血pH7.40，静脉血pH为7.35。
4.比密和渗透量（1）血液比密：正常男性约为1.055～1.063，女性约为1.051～1.060，相对粘度为4～5；血浆比密约为1.025～1.030；血细胞比密约为l.090。
血液比密与红细胞含量、红细胞内血红蛋白含量有关。
实验一血液标本采集和血涂片制备
中性杆状核粒细胞
嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
姬姆萨染色法
[原理]
吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结 果与 瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色 较好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色 较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释 吉姆萨液代替缓冲液，按瑞特染色法染10min。或先 用瑞特染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。
巴氏染色法
❖ 是2.选择静脉 3.消毒 4.扎压脉带 5.穿刺 6.抽血 7.放血 8.采血完毕
(a)刺入静脉 (c)针头抽出
(b)静脉抽血 (d)注入试管
耳垂： 不宜使用
手指
成人：左手无名指或中指指端内侧(WHO) 婴幼儿：大拇趾
或 足跟 内外侧缘
严重烧伤患者：皮肤完整处
血液标本的采集
二、器材与试剂：无菌一次性采血针、一次性微量吸管、
消毒干棉球、无菌干棉球、小试管、75%乙醇、生理盐水等。
血液标本的采集
三、操作步骤
1、准备 2、按摩 3、消毒
按摩：轻轻按摩采血部位，使其自然充血。 消毒：用75%乙醇消毒棉球消毒。 针刺：待酒精挥发干后，用左手拇指和食指
【试剂】
瑞特染料 1.0g 吉姆萨染料 0.3g 甲醇（AR) 加至500ml
先将瑞特染料和吉姆萨染料充分研磨混匀，甲醇溶 解倒入容器中，未溶解完的继续加入甲醇研磨，重复 多次，最后把染液加至500ml。
[染色方法]
血片加滴加染液5滴，并立即将染液盖满血膜， 2min后加入pH6.4-6.8磷酸盐缓冲液（同瑞氏染液） 10滴，10min后用流水冲洗干净，待干后镜检。
图1-3 血涂片制备示意图（上：侧面观，下：正面观）
血涂片制备
第一章--血液样本采集和血涂片制备
第一章血液样本采集和血涂片制备一、血液生理概要1、血液组成：由血细胞(红细胞、白细胞、血小板)和血浆组成血浆：血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体血清：离体后的血液自然凝固析出的淡黄色透明液体两者区别:血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ(纤维蛋白原)、Ⅱ(凝血酶原)、Ⅴ、Ⅷ等；血浆除钙离子外，含有其他全部凝血因子。
全血适用于临床血液学检查，如血细胞计数、分类和形态学检查等。
血浆适用于血浆生理性和病理性化学成分的测定，特别是内分泌激素测定，也适用于血栓与止血的检查。
血清适用于临床化学和临床免疫学检查。
2、血液理化性质：血量：正常成人4-5L，约为70±10ml／kg体重，占体重的6%-8%，其中血浆占55%，血细胞占45%。
颜色：动脉血氧和血红蛋白含量较高，呈鲜红色；静脉血还原血红蛋白含量较高，呈暗红色。
严重贫血者颜色变浅，严重一氧化碳或氰化物中毒者，呈樱桃红色。
pH：正常人7.35-7.45。
动脉血为7.40，静脉血为7.35 血液比密：男性为1.055-1.063，女性为1.051-1.060。
血浆为1.025-1.030，血细胞为1.090。
血液比密与红细胞含量、血红蛋白含量有关，血浆比密和血浆内蛋白浓度有关。
血浆渗透压：290-310mOsm／(kg·H2O)。
3、血液特性：红细胞的悬浮稳定性、黏滞性、凝固性4、生理功能：运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能二、采血方法1、静脉采血法2、皮肤采血法(曾称毛细血管采血法)3、真空采血法(又称负压采血法)：采血装置分：套筒式、头皮静脉式三、抗凝剂选择抗凝：用物理或化学的方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，以阻止血液凝固。
抗凝剂或抗凝物质：能够阻止血液凝固的物质。
常用抗凝剂和使用方法如下：1、乙二胺四乙酸(EDTA)盐：常用有钠盐)(EDTA-Na2·H2O)或钾盐(EDTA-K2·H2O)，能与血液中钙离子结合成鳌合物，使Ca2+失去凝血作用，阻止血液凝固。
血液标本采集与血涂片制备
二、血液标本采集方法
按采集部位分为： 皮肤采血 静脉采血 动脉采血 按采血方式分为： 普通采血法 真空采血法
1、皮肤采血法（毛细血管采血法）
（1）部位：手指、耳垂 （2）方法：采血针皮肤采血法、激光皮肤采血法
（3）注意事项： 注意消毒；取血时可稍加挤压，但切勿 用力挤压，以免混入组织液；采血动作要快； 第一滴血因混入组织液相对较多，多弃去不 用；条件允许尽可能静脉采血； 激光皮肤采血法禁止在易燃易爆性气体 环境下使用；禁止将激光窗口对准采血部位 以外的身体其他位置；采血时防护罩要紧贴 采血部位；激光采血器透镜工作50次后要进 行清洁。
第三节 血液涂片制备和细胞染色
血液涂片制备 细胞形态和检验结果 染色 的 质量 厚薄适宜 头、体、尾明显 良好的血片 分布均匀 边缘整齐 两端留有空隙， 以便注明编号及日期。
一、血涂片制备
1.手工推片法 （1）薄血膜推片法：临床常用的方法 （2）厚血膜推片法：适用于疟原虫、微丝蚴 的检查
2.自动推片法
（二）血液标本运送
标本拒收的原因
1.医嘱原因 2.标本原因：
3.条码原因 4.收费原因 5.送检地点原因
标本接收记录
不合格标本记录（标本拒收）
（四）血液标本保存
（五）检测后血液标本的处理
根据《实验室生物安全通用要求》：
1.将操作、收集、运输及处理废弃物的危险减至最小； 2.将其对环境的有害作用减至最小。
2、静脉采血法：
⑴采血部位：肘正中静脉 ⑵★普通采血法：
注意事项：根据检查项目、所需采血量选择 试管‘严格执行无菌操作；严禁在输液、输 血的针头、皮管内抽取血标本；抽血时切忌 将真栓回推，以免注射器中的气泡进入血管 形成气栓；抽血时不宜过度用力，以免产生 气泡而溶血。
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（三）采血操作
1．采血时间
2．采血部位
3．采血时体位 4．压脉带的使用 （四）其他 1．输液。 2．溶血（表1-6） 3．某些抗凝剂对标本的影响
4．低温保存对标本的影响
* 假设HCT为0.50
第三节 血涂片制备与染色
外周血涂片检查是最有益的血液系统疾病
检查手段，能为临床提供大量的信息。
因此，血涂片制备和染色的质量直接影响
转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆形 血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红 细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干 燥后即可染色并用显微镜检查。 本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。
2．自动涂片法 目前有许多型号的自
动血液分析仪，配备有血涂片仪和染色仪，
可以按照检验人员的指令执行自动送片、 取血、推片、标记和染色等任务。
（1）染色原理 1）物理吸附与化学亲和作用：血涂片染 色过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。 由于血细胞内不同结构所含有的化学成分不同， 对各种染料的亲和力也不同（表1-10）。
2）pH值的影响：血细胞多种成分属 于蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所 带电荷随着溶液的pH而定。因此，血细
胞染色对氢离子浓度十分敏感。
（3）染色方法与结果判断：染色方
法见表1-11-1。
2．Giemsa染色法
（1）染色原理：与Wright染色法基
本相同。Giemsa染色法加强了天青的作
用，提高了噻嗪类染料的效果。 （2）试剂：染液放置越久，其染色 效果越好。
（3）染色：Giemsa染色法的步骤与方
法见表1-11-2。
3．Wright-Giemsa染色法 WrightGiemsa染色法结合了Wright染色法和Giemsa 染色法的优点。在Wright染液配方的基础上， 每1.0g Wright染料添加0.3g Giemsa染料。染 色步骤与Wright染色法相同。
触式采血法。该方法具有感染机会少、痛感轻和工作
强度低等优点。
（二）静脉采血法 静脉采血法是临床广泛应用的采血方法，所 采集的静脉血能准确反映全身血液的真实情况， 因其不易受气温和末梢循环变化的影响，而更具 有代表性。
静脉采血法根据采血方式可分为普通采血法
和负压采血法。
1．普通采血法 血方法。
普通采血法，即传统的静脉采
识的检验申请单和标本（表1-4-1）。
三、血液标本采集及检测结果的影 响因素 （一）饮食和生理状态
患者饮食和生理状态对检验结果的
影响见表1-5。
（二）药物 药物干扰检验结果主要有4条途径： ①影响待测成分的物理性质。 ②参与检验过程的化学反应。 ③影响机体组织器官生理功能和（或）细 胞活动中的物质代谢。 ④对机体器官的药理活性和毒性作用。
需要注意的是，标本拒收不但造成 检验费用增高和时间浪费，还可能延误 诊治甚至危害患者。因此，涉及血液标 本采集的所有工作人员，都必须在标本
采集、转运和处理各个环节进行全面而
规范的培训。
（四）血液标本保存 血液标本保存应当在规定的时间 内、确保标本特性稳定的条件下，按
要求分为室温保存、冷藏保存、冷冻
2．负压采血法
负压采血法又称
为真空采血法，具有计量准确、传送 方便、封闭无尘、标识醒目、刻度清 晰、容易保存、一次进针多管采血等 优点。
（1）主要器材：负压采血系统由双向采 血针、采血管构成（图1-1）。负压采血管的 种类和用途见表1-2。
（2）静脉
选择和消毒：
与普通静脉采
血法相同。
图1-1 负压采血系统
最基本的信息，以识别患者和经授权的申请
者，同时应提供相关的临床信息。相关的临 床信息至少包括姓名、性别、年龄，以用于 解读检验结果。
Байду номын сангаас
（二）标本采集和处理的具体要求
实验室应向负责采集标本的人员提供标本采集和
处理的具体要求（表1-4）。
（三）标本信息完整性与接收 血液标本可通过检验申请单溯源到特
定的个体，实验室不应接收或处理缺少标
剂的水中煮沸20min，用热水将肥皂和血膜洗去，再
用自来水反复冲洗，擦干或烤干后备用。
（二）血涂片制备方法 1．手工推片法
（1）薄血膜推片法（表1-4-2）：临
床常用的方法，主要用于观察血细胞形态
及仪器法检测结果异常的复查。
（2）厚血膜涂片法：取新鲜血液1滴于载
玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外旋
图1-2 多管血液标本采集顺序
（三）动脉采血法 动脉采血法的步骤与方法、注意事项 见表1-2-4、表1-2-5。
三、血液标本的处理、运送与保存
（一）血液标本检测前预处理 1．分离血清或血浆 2．分离细胞 3．添加剂的选择 为了快速获得血清有时还要使用促凝剂和分离胶 等。常用添加剂的用途和特点见表1-3。
血细胞形态的检验结果。 一张合格的血涂片应该是厚薄适宜，血膜 头、体、尾分明，分布均匀，两侧留有一定的 空隙，边缘整齐。
一、血涂片制备
（一）载玻片要求 制备血涂片使用的载玻片要有很好的清洁度。 新载玻片常有游离碱质，应用铬酸清洗液或10% 盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗。 已用过的载玻片可在含有适量肥皂水或合成洗涤
第一章 血液标本采集和血涂片制备
第一节
结果的关键。
血液标本采集
正确采集血液标本是获得准确、可靠检验 在自动化检验仪器应 用普遍的现代临床实验室 中，基础性的血液标本的 采集和处理是检测前质量 保证的主要环节。
一、血液标本类型
二、血液标本采集方法 血液标本的采集方法按采集部位可分为皮肤采 血法、静脉采血法和动脉采血法。 （一）皮肤采血法
保存（表1-3-3）。
（五）检测后血液标本的处理 根据《实验室生物安全通用要求》要 求： ①将操作、收集、运输及处理废弃物
的危险减至最小。
②将其对环境的有害作用减至最小。
第二节
血液标本采集的质量保证
标本采集是检测前质量管理的主要内容，检
测前的大部分工作是由患者、医生、护士、运送
人员及检验人员在实验室以外的空间和进入检验
过程前完成的，临床实验室难以监控这一过程中
的每个环节。
一、血液标本采集环境要求与生物安全
（一）环境要求
应该人性化设置，空间宽敞，光线明亮，
通风良好，血液标本采集的台面高低和宽度
适宜，座位舒适。
（二）生物安全
1．防止交叉感染
2．环境消毒
二、血液标本采集的过程要求
（一）检验申请单
检验申请单或电子申请表中应包括患者
主要用于需要微量血液的检验项目和婴幼儿血
常规检验。皮肤采血法所获得的血液标本是微动脉
血、微静脉血和毛细血管血混合的末梢全血。
1．采血针皮肤采血法
（1）器材准备
（2）部位选择：采血针皮肤采血法的部位与评价
见表1-1。
（3）采血方法 ：见表1-1-1。
（4）注意事项：见表1-1-0。
2．激光皮肤采血法 激光皮肤采血法属于非接
（二）血液标本运送 血液标本的运送可采用人工运送、 轨道传送或气压管道运送等，无论采用 哪种运送方式，都应该注意以下3个原
则。
实验室要制定标本接收的标准文件。 因不同的检验项目对标本的要求不同， 还要制定拒收标准。因“让步”而接收 的不合格标本，其检验报告单上应注明 标本存在的问题，在解释结果时必须特 别说明。
【方法学评价】血涂片染色的方法学评
价见表1-12。
【质量保证】染色过深、过浅与血
涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、 染液浓度、pH密切相关。Wright染色的
质量保证见表1-13。血涂片染色不佳的
原因及纠正措施见表1-14。
【方法学评价】良好的血涂片是血细
胞形态学检查的前提。血涂片制备的方法
学评价见表1-7。
【质量保证】薄血膜推片法的质 量保证项目与评价见表1-8，血涂片质 量问题及可能的原因见表1-9。
（一）染料 1．碱性染料、酸性染料和复合染料，其组成与特 点见表1-10-0。
（二）染色方法
1．Wright染色法
染色时常用缓冲液（pH6.4～6.8）来调节
染色时的pH值，以达到满意的染色效果（表111）。
（2）试剂
1）Wright染液： Wright染液是由伊
红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇的作用：
①溶解伊红和亚甲蓝。 ②具有很强的脱水作用，可以固定红 细胞形态，提高对染料的吸附作用，增强 染色效果。 2）磷酸盐缓冲液（pH 6.8）