单克隆抗体25176ppt课件
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《单克隆抗体技术》课件
单克隆抗体的制备与纯化
单克隆抗体是通过杂交瘤细胞在体外培养或注射到动物体内进行体内培养产生的，经过一系列的分离 和纯化过程，最终获得高纯度、高特异性的单克隆抗体。
制备过程中通常采用各种层析技术、沉淀技术等对抗体进行分离和纯化，以确保获得高质量的单克隆 抗体。
单克隆抗体的鉴定与质量控制
鉴定是通过对单克隆抗体的免疫学特 性、生物学活性和分子结构等方面进 行检测和评估，以确定其特异性和质 量。
总结实验过程和结果，分析存在的问题和改 进方向，为后续实验提供参考和依据。
感谢您的观看
THANKS
生物标记物
用于研究细胞生物学、分子生物学 等领域。
03
02
生物药物
用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等 。
免疫分析
用于检测生物样品中的抗原、抗体 等。
04
02 单克隆抗体技术的原理
杂交瘤细胞系的建立
杂交瘤细胞系的建立是单克隆抗体技 术的核心步骤之一，通过将免疫脾细 胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细 胞。
通过抗原-抗体反应检测杂交瘤细胞产生的 抗体特异性。
克隆筛选
通过选择性培养基筛选出能够产生所需抗体 的杂交瘤细胞克隆。
细胞培养与抗体纯化
将筛选出的杂交瘤细胞进行培养，并采用蛋 白质纯化技术获得单克隆抗体。
实验结果分析与总结
结果分析
对实验结果进行统计分析，评估杂交瘤细胞 的抗体产生能力和特异性。
总结
这些杂交瘤细胞既具有脾细胞无限增 殖的能力，又具有产生特异性抗体的 能力，从而为单克隆抗体的制备提供 了稳定的细胞源。
杂交瘤细胞的筛选与克隆化
在筛选过程中，通过抗原-抗体反应检 测杂交瘤细胞产生的抗体，筛选出能 够产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞 。
《单克隆抗体》课件
05
单克隆抗体的未来发展
新型单克隆抗体的研发
总结词
随着生物技术的不断发展，新型单克 隆抗体的研发将更加活跃，以满足更 多治疗需求。
详细描述
新型单克隆抗体将通过基因工程技术 、蛋白质工程技术等手段进行设计和 优化，以改善其疗效、降低副作用和 降低生产成本。
单克隆抗体与其他技术的结合应用
总结词
单克隆抗体将与其他治疗手段和技术相结合，以实现更有效的疾病治疗和诊断 。
03
类型
IgG、IgM、IgA等。
单克隆抗体的发现和发展历程
1901年
Ehrlich提出“侧链学说”，认为抗体是 由细胞产生的化学物质。
1986年
FDA批准第一个单克隆抗体药物上市， 用于治疗非霍奇金淋巴瘤。
1975年
Kohler和Milstein首次成功制备出单克隆 抗体。
2014年
FDA批准第一个全人源单克隆抗体药物 上市，用于治疗类风湿性关节炎。
生物治疗
总结词
单克隆抗体在生物治疗中具有显著疗效 ，可用于治疗癌症、自身免疫病等多种 疾病。
VS
详细描述
通过靶向肿瘤细胞表面抗原或免疫系统中 的特定分子，单克隆抗体能够发挥抗癌作 用。例如，针对某些癌症的单克隆抗体药 物能够抑制肿瘤生长、扩散和转移，提高 患者生存率和生活质量。此外，在自身免 疫病治疗中，单克隆抗体也具有良好疗效 ，能够调节免疫系统，缓解单克隆抗体的概述 • 单克隆抗体的制备 • 单克隆抗体的特性 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的未来发展
01
单克隆抗体的概述
单克隆抗体的定义
01
单克隆抗体
由单一B细胞克隆产生的具有 高度特异性识别抗原表位的抗
(培训课件)单克隆抗体PPT幻灯片
• 种类：氢氧化铝佐剂、短小棒状杆菌、脂多 糖、细胞因子、明矾等，其中弗氏不完全佐 剂（羊毛脂：石蜡油=1:5）和弗氏完全佐剂 （弗氏不完全佐剂＋灭活的分枝结核杆菌） 是目前动物实验中最常用佐剂。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
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6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
单克隆抗体技术讲解PPT课件
8
局限性 ： （1）固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范 围 （2）反应强度不如多克隆抗体 （3）制备技术复杂、费时费工、价格较高
9
三、单克隆抗体技术的应用
1.检验医学诊断
（1）病原微生物抗原抗体的检测：乙肝表面抗原试纸
（2）肿瘤抗原的检测
（3）免疫细胞及其亚群的检测 （4）激素测定：早孕检测试纸、女性排卵检测试纸 （5）细胞因子的测定 （6）其他：吗啡类毒品检测试纸等
抗体工程制药
单克隆抗体的制备
1
掌握：单克隆抗体的概念和特点、制备原理， 制备方法及基本过程 熟悉：单克隆抗体技术的应用 了解：单克隆抗体的发展
2
主要内容
1.单克隆抗体的发展 2.单克隆抗体的概念和特点 3.单克隆抗体技术的应用
4.单克隆抗体的制备过程
3
没有单克隆抗体前人类所遇见的问题
银屑病
手口足病
陷细胞可以在此培养基中生存。是常用的骨髓杂交瘤细胞选择性培
养对筛选方法的要求： 多——大量样品一次检测； 快——迅速取得检测结果； 准——检测结果可靠性高； 灵——检测方法灵敏度高。 常用筛选方法： ELISA、IFA等
15
6. 克隆化过程
方法：有限稀释法 克隆建立的标准：连续两次以上100%阳性孔 饲养细胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾细胞
2.蛋白质的提纯
3.肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术
10
四、单克隆抗体制备过程
致敏淋巴细胞的准备
骨髓瘤细胞的准备
细胞融合 选择性培养 抗体分泌细胞的筛选 克隆化过程
单克隆抗体的制取
11
1.致敏淋巴细胞的准备
动物选择：品系、年龄、性别、健康状态 抗原接种：方式—体内、体外 剂量—0.5-100g 次数—视抗原而定 间隔—视抗原而定 佐剂—视抗原而定 收集时间：末次接种后72 h
单克隆抗体-公开课课件
B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋 巴细胞
【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的
（ D）
• B淋巴细胞
B．T淋巴细胞
C．骨髓瘤细胞
D．杂交瘤细胞
【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下
列实验步骤中错误的是（ B ）
A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋 巴细胞
B．用纤维素酶×处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
行常用__聚__乙__二__醇_____或___灭__活__的__病__毒__的诱导。
(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 3 种
类型的C细胞，因此需用____选__择__性__培养基筛选出D细 胞用于培养，D细胞的名称是 杂交瘤细胞 ，其特点
是___既__能__无__限__增__殖__又__能__产__生__特__异__性__抗__体__________。
二、单克隆抗体
1.抗体是由何种细胞产生的？ 效应B细胞（浆细胞）
2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分 泌多种抗体吗？
每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一 种特异性抗体 3.一种抗原侵入机体之后，引起 机体免疫反应产生的抗体只有一 种吗？
动物在免疫反应过程中，体 内产生的特异性抗体种类可多达 百万种以上
Ø出现在抗原分子表面、决定 抗原特异性Байду номын сангаас特殊化学基团.
（3）该方案的目的是__制__备__单__克__隆__抗__体___________。
3、治疗疾病和运载药物
主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗 癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。
“生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物
单抗导向，药物为弹头
【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单
《单克隆抗体制备》课件
02
单克隆抗体制备的流程
免疫动物
免疫动物选择
选择适合的动物作为免疫原注 射的宿主，如小鼠、大鼠等。
免疫方案设计
根据免疫原的性质和目的，设 计合适的免疫方案，包括免疫 途径、免疫次数、免疫剂量等 。
免疫原注射
将免疫原物质注射到选定的动 物体内，激发免疫反应。
杂交瘤细胞的培养
脾细胞与骨髓瘤细胞融合
免疫学研究
细胞生物学研究
单克隆抗体可以用于标记、分离和鉴定细胞，研究 细胞的生长、分化和凋亡等过程。
单克隆抗体是免疫学研究的重要工具，可用 于研究抗原、抗体和免疫反应的机制。
蛋白质组学研究
单克隆抗体可以用于蛋白质的检测、纯化和 相互作用研究，推动蛋白质组学的发展。
单克隆抗体的未来发展与挑战
技术创新
单克隆抗体的应用
01
02
03
04
生物研究
用于免疫学、细胞生物学和分 子生物学等领域的基础研究， 如检测、分离和纯化等。
医学诊断
用于疾病诊断和治疗监测，如 免疫组织化学、酶联免疫吸附 试验和放射免疫分析等。
生物制药
用于药物研发和生产，如治疗 性抗体、诊断试剂和疫苗等。
生物安全
用于检测和预防生物恐怖袭击 和传染病爆发，如检测生物武 器和病原微生物等。
特点
单克隆抗体在结构和功能上均具有高 度一致性，使其在生物研究和医学诊 断治疗中具有广泛应用。
单克隆抗体的特性
80%
高度特异性
单克隆抗体能够特异性识别和结 合抗原，具有极高的选择性。
100%
高纯度
单克隆抗体由单一B细胞克隆产 生，纯度高，避免了多克隆抗体 中不同抗体的交叉反应。
80%
《单克隆抗体应用》课件
单克隆抗体的特性
总结词
单克隆抗体具有高度特异性、一致性和稳定性。
详细描述
由于单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的，因此它具有高度特异性，能够与特 定的抗原结合。此外，由于单克隆抗体的生产过程是高度控制的，因此其质量和 性能具有一致性和稳定性。
02
单克隆抗体的应用领域
生物医学研究
抗体标记技术
利用单克隆抗体与特定抗原的结 合特性，对生物样本中的抗原进 行标记，用于检测、定位和追踪 抗原的表达和分布。
利用单克隆抗体标记的免疫细胞对肿瘤进行攻击，提高肿瘤治疗的疗效和患者的生存率。
03
单克隆抗体的研究进展
新药研发
肿瘤免疫治疗
利用单克隆抗体作为肿瘤免疫治 疗的靶点，通过激活免疫系统来 攻击肿瘤细胞。
自身免疫性疾病治
疗
针对自身免疫性疾病，如类风湿 性关节炎、红斑狼疮等，单克隆 抗体可以抑制免疫反应，缓解症 状。
《单克隆抗体应用》ppt课件
CONTENTS
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的应用领域 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的挑战与前景 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的免疫球蛋白。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种细胞是由免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融 合而成。这种杂交瘤细胞能够大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体。
免疫疗法
单克隆抗体可以与免疫疗法结合，通过调节免疫 反应来增强抗肿瘤效果。
基因治疗
通过将基因导入单克隆抗体，可以实现更精确的 靶向治ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ，提高治疗效果并降低副作用。
单克隆抗体技术PPT课件
单克隆抗体技术的最主要优点是可以用不纯的抗原 分子大量制备纯一的单克隆抗体。
单克隆抗体
（monoclonal antibody, McAb）
通过B细胞杂交瘤技术, 获得特异性针 对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的 抗体。 细胞克隆：由一个细胞增殖而成的细胞集团。
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够 分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性 抗体的能力。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤 细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化， 这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生 长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞 的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养 或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一 的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技 术。
细胞融合方式
• 物理融合法： 电融合、激光融合 • 化学融合法 ：PEG融合 • 生物融合法 ：仙台病毒
5. 杂交瘤细胞及阳性孔的筛选
细胞培养器皿中培养5天后，用HAT培养基 换液一次，第10天用HAT培养基换液，等到融 合细胞覆盖孔底10%-50%时，常规间接ELISA方 法筛选阳性孔，共获50多个对上述抗原有反应 的阳性孔。
杂交瘤技术
通过融合经免疫的小鼠脾细胞 和建系小鼠骨髓瘤细胞，以获得同时具 有抗体分泌功能和保持细胞永生性特征 的杂交瘤细胞克隆。是获取单克隆抗体 的主要技术途径。
单克隆抗体制备原理
用缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转化酶 （HGPRT-）或胸腺嘧啶核苷酸酶（TK-）的瘤细 胞变异株与脾脏的B细胞融合。采用HAT选择性 培养基对融合细胞进行培养和筛选。
HAT选择性培养基： 培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthine H，氨基喋呤
Aminoopterin A及胸腺嘧啶核苷Thymidine T。
单克隆抗体
（monoclonal antibody, McAb）
通过B细胞杂交瘤技术, 获得特异性针 对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的 抗体。 细胞克隆：由一个细胞增殖而成的细胞集团。
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够 分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性 抗体的能力。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤 细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化， 这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生 长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞 的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养 或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一 的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技 术。
细胞融合方式
• 物理融合法： 电融合、激光融合 • 化学融合法 ：PEG融合 • 生物融合法 ：仙台病毒
5. 杂交瘤细胞及阳性孔的筛选
细胞培养器皿中培养5天后，用HAT培养基 换液一次，第10天用HAT培养基换液，等到融 合细胞覆盖孔底10%-50%时，常规间接ELISA方 法筛选阳性孔，共获50多个对上述抗原有反应 的阳性孔。
杂交瘤技术
通过融合经免疫的小鼠脾细胞 和建系小鼠骨髓瘤细胞，以获得同时具 有抗体分泌功能和保持细胞永生性特征 的杂交瘤细胞克隆。是获取单克隆抗体 的主要技术途径。
单克隆抗体制备原理
用缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转化酶 （HGPRT-）或胸腺嘧啶核苷酸酶（TK-）的瘤细 胞变异株与脾脏的B细胞融合。采用HAT选择性 培养基对融合细胞进行培养和筛选。
HAT选择性培养基： 培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthine H，氨基喋呤
Aminoopterin A及胸腺嘧啶核苷Thymidine T。
单克隆抗体(monoclonalantibody)PPT课件
稀释方法获得产特定单克隆抗体的克隆
克隆化是指将抗体阳性孔进行克隆，目的是将抗体 分泌细胞、抗体非分泌细胞、特异性抗体分泌细胞 和无关抗体分泌细胞分开
大量获得单克隆抗体的方法
3. 单克隆抗体的应用
3.1 作为生物治疗的导向武器
将针对某一肿瘤的单克隆抗体与化疗药物或放疗药物连接， 利用单抗的特异导向作用，将药物带到靶器官，直接杀伤 靶细胞 抗肿瘤细胞毒剂，化疗药物、细菌毒素、植物毒素或放射 同位素等
杂交瘤细胞的筛选：HAT培养基筛选 讨论：细胞融合后，体系中会存在哪些细胞？
HAT系次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤 （aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三 种物质
单克隆抗体的选择及克隆化
杂交瘤细胞及阳性孔的筛选，用多孔细胞培养板筛选， 稀释度要保证每个孔不多于1个细胞，通过抗原抗体 杂交法检测阳性反应
由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混 合物。如:免疫血清（含多种特异性抗体）
Monoclonal antibody: 第二代抗体
由单一克隆B细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子某一特定抗原决定簇
的特异性抗体。特异性强、灵敏度高。 Genetic engineering antibody: 第三代抗体
在DNA水平对Ig基因进行切割、拼接或修饰，导入受体细胞表达的抗体。
思考题:
1. 单克隆抗体和普通抗体有何区别 2）作为一种新型免疫抑制 剂，治疗自身免疫疾病和抗器官移植排斥反应
3.4 作为研究工作的探针
利用单抗的特异性，将其作为探针，从分子、细胞和器官 等不同水平，研究抗原物质的结构与功能，从理论上阐明 机理 用荧光物质标记单抗作为探针，快速确定与其结合的相应 生物大分子在细胞中的位置和分布
单克隆抗体制备课件
细胞培养：选择合适的细胞 系进行培养
克隆化：将杂交瘤细胞进行 克隆化培养
抗体纯化：通过亲和层析法 纯化抗体
抗体鉴定：通过ELISA法鉴 定抗体的特异性和亲和力
PART FOUR
单克隆抗体在诊断试剂中的应用 单克隆抗体在免疫诊断中的应用 单克隆抗体在肿瘤诊断中的应用 单克隆抗体在传染病诊断中的应用
PPT,a click to unlimited possibilities
汇报人：PPT
CONTENTS
PART ONE
PART TWO
单克隆抗体：由 单一B细胞克隆产 生的抗体
特性：特异性强， 只识别一种抗原
制备方法：杂交 瘤技术、基因工 程等
应用：疾病诊断、 治疗、科学研究 等
制备过程：通过细胞融合技术， 将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合，形成杂交瘤细胞
产生来源：单克隆抗体是由 B淋巴细胞产生的
筛选：通过筛选，得到能够产 生特异性抗体的杂交瘤细胞
培养：将杂交瘤细胞进行培养， 使其大量增殖，产生大量的单 克隆抗体
PART THREE
确定抗原：选择合 适的抗原，如蛋白 质、多肽等
纯化抗原：通过离 心、层析等方法纯 化抗原
抗原处理：对纯化 后的抗原进行化学 修饰，如偶联、标 记等
PART FIVE
特异性强：能够识别并结合特异性 抗原
稳定性好：不易受环境因素影响
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
灵敏度高：能够检测低浓度的抗原
应用广泛：可用于疾病诊断、治疗 和预防
制备过程复杂，需要较高 的技术水平
成本较高，需要大量的资 金投入
制备周期较长，需要较长 的时间才能得到结果
存在一定的风险，如免疫 反应、过敏反应等
克隆化：将杂交瘤细胞进行 克隆化培养
抗体纯化：通过亲和层析法 纯化抗体
抗体鉴定：通过ELISA法鉴 定抗体的特异性和亲和力
PART FOUR
单克隆抗体在诊断试剂中的应用 单克隆抗体在免疫诊断中的应用 单克隆抗体在肿瘤诊断中的应用 单克隆抗体在传染病诊断中的应用
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汇报人：PPT
CONTENTS
PART ONE
PART TWO
单克隆抗体：由 单一B细胞克隆产 生的抗体
特性：特异性强， 只识别一种抗原
制备方法：杂交 瘤技术、基因工 程等
应用：疾病诊断、 治疗、科学研究 等
制备过程：通过细胞融合技术， 将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合，形成杂交瘤细胞
产生来源：单克隆抗体是由 B淋巴细胞产生的
筛选：通过筛选，得到能够产 生特异性抗体的杂交瘤细胞
培养：将杂交瘤细胞进行培养， 使其大量增殖，产生大量的单 克隆抗体
PART THREE
确定抗原：选择合 适的抗原，如蛋白 质、多肽等
纯化抗原：通过离 心、层析等方法纯 化抗原
抗原处理：对纯化 后的抗原进行化学 修饰，如偶联、标 记等
PART FIVE
特异性强：能够识别并结合特异性 抗原
稳定性好：不易受环境因素影响
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
灵敏度高：能够检测低浓度的抗原
应用广泛：可用于疾病诊断、治疗 和预防
制备过程复杂，需要较高 的技术水平
成本较高，需要大量的资 金投入
制备周期较长，需要较长 的时间才能得到结果
存在一定的风险，如免疫 反应、过敏反应等
《单克隆抗体》【公开课教学PPT课件 高中生物】
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
为什么“甲流”康复者或接 种疫苗1月以上者的血浆会成为 救治重症“甲流”患者的妙药？
血浆中的抗体会与“甲流” 病毒反应，从而将病毒消灭。
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
一、单克隆抗体
➢ 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白
• 能产生抗体的细胞是浆细胞
➢ 单克隆
由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂)形成的一个细胞 群
B淋巴细胞尽管可以产生多达百万种以上的特异性 抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体
怎样才能获得大量的单一性抗体呢？
做为科学家的你，如何设计生产方案？
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
G. Kohler
• 能产生单一抗体 • 其寿命仅有几天，无法长期体外培养
B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
无限增殖
细胞 杂交瘤 融合 细胞
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培
养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ）
A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞
C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）
宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来单克隆抗体22动物细胞工程宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来教学目标单克隆抗体单克隆抗体的应用宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来教学目标知识目标1学会运用动物细胞融合技术2简述单克隆抗体制备的过程3了解单克隆抗体在医学实践中的应用并说其应用实例能力目标让学生尝试设计单克隆抗体的制备过程指导学生掌握获取知识和探索生物科学的基本方法使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力
产生抗体 无限增殖
为什么“甲流”康复者或接 种疫苗1月以上者的血浆会成为 救治重症“甲流”患者的妙药？
血浆中的抗体会与“甲流” 病毒反应，从而将病毒消灭。
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
一、单克隆抗体
➢ 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白
• 能产生抗体的细胞是浆细胞
➢ 单克隆
由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂)形成的一个细胞 群
B淋巴细胞尽管可以产生多达百万种以上的特异性 抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体
怎样才能获得大量的单一性抗体呢？
做为科学家的你，如何设计生产方案？
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
G. Kohler
• 能产生单一抗体 • 其寿命仅有几天，无法长期体外培养
B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
无限增殖
细胞 杂交瘤 融合 细胞
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培
养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ）
A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞
C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）
宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来单克隆抗体22动物细胞工程宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来教学目标单克隆抗体单克隆抗体的应用宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来教学目标知识目标1学会运用动物细胞融合技术2简述单克隆抗体制备的过程3了解单克隆抗体在医学实践中的应用并说其应用实例能力目标让学生尝试设计单克隆抗体的制备过程指导学生掌握获取知识和探索生物科学的基本方法使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力
产生抗体 无限增殖
抗体—单克隆抗体(免疫学检验课件)
体技术的基本原理
利用B细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。 基本原理：由两种细胞融合后产生的杂交细胞可 同时保持双方亲代细胞的主要生物学特征。
同时应用了淋巴细胞产生抗体的克隆选择学 说（一种克隆产生一种抗体）和细胞代谢缺陷补 救的机制。
致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
杂交瘤
二、制备单克隆抗体的基本方法
1.两种亲本细胞的选择与制备； 2.细胞融合； 3.杂交瘤细胞的筛选、培养； 4.杂交瘤细胞克隆化与细胞冻存； 5.单克隆抗体的大量制备； 6.纯化及鉴定。
聚乙二醇
HAT: 次黄嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T) HGPRT：次 黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶
三、单克隆抗体在医学中的应用
单克隆抗体
单克隆抗体
单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)是由
单个B细胞克隆产生的仅针对一种抗原表位的高特异 性抗体。
Geoveges Kohler1946-
Cesar Milstein1927-
1975年Kohler 和Milstein首先报道了细胞杂交技术， 该项成果荣获1984年度诺贝尔医学奖与生理学奖。
1.单克隆抗体的特性 高特异性 高均一性
对环境敏感 弱凝集反应和不呈现沉淀反应
2.单克隆抗体的应用 应用于： 临床诊断 检验诊断试剂， 临床治疗 治疗肿瘤等 研究工具 探针 鼠源单克隆抗体，限制了人体内的应用。
利用B细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。 基本原理：由两种细胞融合后产生的杂交细胞可 同时保持双方亲代细胞的主要生物学特征。
同时应用了淋巴细胞产生抗体的克隆选择学 说（一种克隆产生一种抗体）和细胞代谢缺陷补 救的机制。
致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
杂交瘤
二、制备单克隆抗体的基本方法
1.两种亲本细胞的选择与制备； 2.细胞融合； 3.杂交瘤细胞的筛选、培养； 4.杂交瘤细胞克隆化与细胞冻存； 5.单克隆抗体的大量制备； 6.纯化及鉴定。
聚乙二醇
HAT: 次黄嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T) HGPRT：次 黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶
三、单克隆抗体在医学中的应用
单克隆抗体
单克隆抗体
单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)是由
单个B细胞克隆产生的仅针对一种抗原表位的高特异 性抗体。
Geoveges Kohler1946-
Cesar Milstein1927-
1975年Kohler 和Milstein首先报道了细胞杂交技术， 该项成果荣获1984年度诺贝尔医学奖与生理学奖。
1.单克隆抗体的特性 高特异性 高均一性
对环境敏感 弱凝集反应和不呈现沉淀反应
2.单克隆抗体的应用 应用于： 临床诊断 检验诊断试剂， 临床治疗 治疗肿瘤等 研究工具 探针 鼠源单克隆抗体，限制了人体内的应用。
单克隆抗体公开课课件
单克隆抗体公开课课件
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的制备技术 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的抗体 分子。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种杂交瘤细胞是由一 个单一的B细胞与骨髓瘤细胞融合而成。这种杂交瘤细胞能够 大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体，因此这种抗体具有 高度特异性。
02
单克隆抗体的制备技术
杂交瘤技术
杂交瘤技术是制备单克隆抗体的经典方法，通过将免疫小 鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞的无限增殖能力，又具有免 疫脾细胞的抗体产生能力，通过筛选和克隆化培养，可以 得到单一抗体分泌的杂交瘤细胞。
杂交瘤技术制备的单克隆抗体具有高度特异性，可用于诊 断和治疗疾病。
食品安全与环境监测
02
通过单克隆抗体检测食品和环境中的有害物质，保障公共卫生
安全。
生物恐怖袭击应对
03
针对生物恐怖袭击的威胁，利用单克隆抗体快速识别和清除生
物武器中的毒素和病原微生物。
TH疾病的重要手段。目前，已有多种单克隆抗体药物获得批
准上市，为患者提供了新的治疗选择。
02
单克隆抗体药物的靶点选择
靶点选择是单克隆抗体药物研发的关键环节，针对不同的靶点，可以设
计出具有不同作用机制的单克隆抗体药物。目前，针对肿瘤细胞表面抗
原、细胞内信号转导通路等靶点的研究较为广泛。
03
单克隆抗体药物的疗效评估
单克隆抗体的制备过程
总结词
单克隆抗体的制备过程包括免疫动物、杂交瘤细胞的制备、筛选和克隆化、抗体生产以 及纯化。
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的制备技术 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的抗体 分子。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种杂交瘤细胞是由一 个单一的B细胞与骨髓瘤细胞融合而成。这种杂交瘤细胞能够 大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体，因此这种抗体具有 高度特异性。
02
单克隆抗体的制备技术
杂交瘤技术
杂交瘤技术是制备单克隆抗体的经典方法，通过将免疫小 鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞的无限增殖能力，又具有免 疫脾细胞的抗体产生能力，通过筛选和克隆化培养，可以 得到单一抗体分泌的杂交瘤细胞。
杂交瘤技术制备的单克隆抗体具有高度特异性，可用于诊 断和治疗疾病。
食品安全与环境监测
02
通过单克隆抗体检测食品和环境中的有害物质，保障公共卫生
安全。
生物恐怖袭击应对
03
针对生物恐怖袭击的威胁，利用单克隆抗体快速识别和清除生
物武器中的毒素和病原微生物。
TH疾病的重要手段。目前，已有多种单克隆抗体药物获得批
准上市，为患者提供了新的治疗选择。
02
单克隆抗体药物的靶点选择
靶点选择是单克隆抗体药物研发的关键环节，针对不同的靶点，可以设
计出具有不同作用机制的单克隆抗体药物。目前，针对肿瘤细胞表面抗
原、细胞内信号转导通路等靶点的研究较为广泛。
03
单克隆抗体药物的疗效评估
单克隆抗体的制备过程
总结词
单克隆抗体的制备过程包括免疫动物、杂交瘤细胞的制备、筛选和克隆化、抗体生产以 及纯化。
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抗体治疗疾病的机制
• 抗原失活
• 免疫效应细胞 吞噬
• 抗原表面弱化 易受补体破坏
单抗研发的演变历程
鼠单抗 100% 鼠源 OKT-3 Panorex Zevalin
鼠/人嵌合单抗 (66-75 % 人源) ReoPro, Rituxan Remicade Simulect
人源化单抗
(90-95 % 人源)
发明单克隆抗体技术
Nobel Prize in 1984
抗体发展的三个阶段
多克隆抗血清 单克隆抗体 基因工程抗体
抗原 免疫
传统抗血清
所有抗体混合
31 2 4
BA LB /c
1234
脾脏 淋巴結 B 細胞
31 2 4
细 胞
鼠 单 抗
工
程
杂
交人
瘤 技
单 抗
术
大鼠 小鼠
产量高、操作比 小鼠麻烦 少用
抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹
研究 医疗 检验
以免疫转印法检测 特定抗原 以毒素连结抗体攻击 病变細胞 以 ELISA 侦测特定 病原体
SDA批准进入临床的治疗用单抗
•抗T细胞免疫毒素 •抗C-ALL免疫毒素 •131I-抗肝癌单克隆抗体 •抗人CD25单克隆抗体 •抗乙脑单克隆抗体 •抗流行性出血热抗体 •抗人CD3单克隆抗体 •抗人IL-8单克隆抗体
易操作、多用
HAMA反应
人人杂交瘤 人鼠杂交瘤
人B细胞、骨髓瘤 细胞融合
人B细胞、鼠骨髓 瘤细胞融合
杂交瘤制备人单抗的问题：染色体易丢失、抗体分泌不稳定
• 美国已上市16种单克隆抗体药物
• 2002年销售额 29亿美元
• 2005年
90亿美元
• 我国的单克隆抗体药物市场还处于起步阶 段。
抗体药物销售趋势图
● 蛋白质性 抗原決定基 含有六个以上氨基酸
1 多克隆抗血清
白蛋白
球蛋白
a1 a2
b
（a）
（b）
（c）
对健康人用疫苗进行主动 免疫，免疫前（a）和免 疫后10天 （b）分别采血 并对血清蛋白进行凝胶电 泳分析。免疫前血清中的 g 球蛋白条带较宽，免疫 之后则相对集中。Bruton 氏病患者血清蛋白中的 球蛋白条带缺失（c）。
Zenapax, Mylotarg, Herceptin, Campath100%
人源
Synagis
抗体攻击病毒
凝 集 细 菌
抗 SARS 的单抗 SARS-CoV
Epitope, Antigenic determinant
抗原決定基
● 一个抗原分子上可能有数个抗原決定基 ● 每個 抗原決定基 至少誘生一種專一性抗体
NS稀释至 2～5%
绵羊红细胞的制备流程图
摇动 1520min
周可
4℃
保
存
3
NS洗涤3 次 2000r/mi n
10min
取适量
100℃水浴 2～2.5h 杀菌
Hale Waihona Puke 无菌试验液体培养或 斜面培养 37℃24h
细菌细胞抗原的制备流程图
O菌体抗原
杂交瘤技术过程
可生产有用抗体的 淋巴細胞 若与 癌细胞融合，则形成稳定而可培 养的细胞株。
癌细胞 可培养生长
浆细胞 B cell 可分泌抗体 一個 B cell 只 产生一种抗体
YY Y
Y YY
YYY
YY YY Y
YY YY
细
胞
融合瘤
融
合
Hybridoma
两组染色体混在一起
也可以培养生長 产生专一性抗体
1 3
2 4
m m
m m
1 23
4
12 34
取出脾細胞
+ 癌細胞
细胞融合
单抗
各抗体分开
(3) 鼠单抗人源化
将小鼠Ig基因敲除，转染人Ig基因，在 小鼠体内产生人Ab，再经杂交瘤技术， 产生大量完全人源化抗体
●恒定区人源化——人-鼠嵌合抗体
●可变区人源化——人改型抗体
●用抗体库技术进行人源化
鼠单抗人源化