实验一 3.5一二硝基水杨酸比色定糖法
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。
一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。
2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。
(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。
3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。
将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。
在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。
(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。
(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。
(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。
(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。
(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。
(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。
二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。
然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。
在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。
还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。
三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。
3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖
3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖：
(1)准备：3,5-二硝基水杨酸溶液、标准糖溶液和丙酮溶液。
(2)试验步骤：
① 将滴定管中的空白样加入3ml的丙酮溶液，轻摇均匀；
② 加入0.2ml的3,5-二硝基水杨酸溶液，轻摇混匀；
③ 加入4ml的0.5mol/L的硝酸溶液，轻摇均匀；
④ 加入一定量（0.02ml-0.2ml）的标准糖溶液，轻摇均匀，继续滴定；
⑤ 采用530nm处的吸光度值比较试样和标准曲线，求出样品中含有还原糖的浓度。
(3)结果判断：根据标准曲线求出样品中含有还原糖的浓度，可以得出样品中还原糖的含量。
实验一 3.5一二硝基水杨酸比色定糖法
实验一3．5一二硝基水杨酸比色定糖法【目的和要求】1．掌握3，5一二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。
2．用3，5一二硝基水杨酸定糖法测定山芋粉中的总糖及还原糖。
【原理】3，5一二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干扰较小。
【操作方法】一、葡萄糖标准曲线的绘制将上述各管溶液混匀后，用72型分光光度计（520nm）进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值。
以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制出标准曲线。
二、山芋粉中总糖和还原糖含量的测定1．样品中还原糖的提取：准确称取2g山芋粉，放入100ml烧杯内，加入85％乙醇50ml，混匀，在50℃恒温水浴中保温30min，过滤，滤渣再用85％乙醇提取二次。
将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入100ml容量瓶中，用水定容，备用。
2．样品中总糖的水解及提取：准确称取出芋1g，放入大试管中，加入1ml 6mol盐酸和15ml蒸馏水。
混匀，在沸水浴中加热半小时后，用碘化钾－碘溶液检查水解程度，若已水解完全，则不呈现蓝色。
冷却后加入酚酞指示剂1滴。
以10％氢氧化钠中和至溶液呈微红色。
过滤并定容至100ml 。
再精确吸取上述溶液10ml ，放入100ml 容量瓶中，定容，备用。
将各管混匀后，按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式推算出山芋粉内还原糖与总糖的百分含量。
还原糖％＝还原糖毫克数×样品稀释倍数 ×100样品重量【试剂和器材】一、试剂（1）3´，5´一二硝基水杨酸试剂（又称DNS 试剂）：甲液——溶解6.9g 结晶酚于15.2ml 10％氢氧化钠中，并稀释至69 ml ，在此溶液中加入6.9g 亚硫酸氢钠。
乙液——称取255g 酒石酸钾钠，加到300 ml 10％氢氧化钠中，再加入880 ml 1％ 3，5一二硝基水杨酸溶液。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
实验一还原糖和总糖的测定35二硝基水杨酸比色法
掌握还原糖和总糖测定的基本原理， 学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的 使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类， 单糖 都是还原糖， 双糖和多糖不一定是还原糖， 如乳糖和麦芽糖是还原糖， 蔗糖和淀粉是非还原 糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原 性的双糖和多糖， 可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定， 再分别求出样品中还 原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨基 -5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关 系，利用分光光度计，在 540 nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样 品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时， 每断裂一个糖苷键需加入一分子水， 所 以在计算多糖含量时应乘以 0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料 小麦面粉 (1000 g) 2 .主要仪器(1具塞玻璃刻度试管：20 mL X 11 ( 2)滤纸 (3)烧杯：100 mL X2 ( 4)三角瓶：100 mL X 1 ( 5)容量瓶：100 mL X3 (6)刻度吸管：1mL X 1 ； 2 mL X 2; 10 mL X 1 (7)恒温水浴锅(8)煤气炉 (9)漏斗 (10)天平 (11)分光光度计3. 试剂(1) 1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80 C 烘至恒重的分析纯葡萄糖 100 mg,置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后， 转移到100 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL ,混匀，4C 冰箱中保存备用。
( 2) 3,5-二硝基水杨酸( DNS )试剂3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂：称取6.5 g DNS 溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入 1000 mL 容量瓶中，加入 2 mol/L 氢氧化钠溶液 325 mL ,再加入45 g 丙三醇，摇匀，冷却 后定容至 1000 mL 。
生物化学实验
一、实验目的
1．掌握3，5 二硝基水杨酸法定糖的原理及方法。 2．用3，5 二硝基水杨酸比色法测定红薯中总糖。 3．熟悉分光光度计的原理及使用方法。
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二、实验原理
定 是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基和酮 基的糖类。 糖类的测定方法有物理方法和化学方法两类。 由于化学方法比较准确，常常使用之。还原糖的测
实验三 酵母RNA的提取及含量测定
一、实验目的 1.掌握RNA提取的原理及方法。 2.学会使用地衣酚法测定RNA的含量。 二、实验原理 一般的生物细胞中同时含有DNA和RNA，在酵母 中 RNA比 DNA的 含 量 高 得 多 ， DNA则 少 于 2％ (O． 03％～O．516％)，故在实验室常用酵母作为RNA提 取的材料。若要制备具有生物活性的RNA，常用苯 酚法；若对生物活性没有要求，则可使用浓盐法， 稀碱法等。
脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应 称为双缩脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相 似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。 ¡ 双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含有一个 肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2， —CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基 团的物质以及乙二酰二胺等物质也有此反应。NH3也干扰此 反应，因为NH3与Cu2+可生成暗蓝色的络离子Cu（NH3） 42+。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反 应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
实验四
外界因素对酶活性的影响
一、实验目的 1.了解外界因素对酶活性及酶促反应速度的影响 2.加深对酶特性的认识。 二、实验原理 酶的化学本质是蛋白质，它极易受外界条件 的影响而改变它的构象及性质，因而也必然会影 响到它的催化活性。酶对温度、 pH、酶浓度及 某些离子浓度等变化很敏感。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
百度文库- 让每个人平等地提升自我实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
3,5 -二硝基水杨酸比色法测还原糖含量
一、概述还原糖是一类可溶于水的碳水化合物，通常具有甜味。
在食品加工和生产中，还原糖的含量是一个重要的指标。
测定食品中还原糖的含量对于保障产品质量和食品安全具有重要意义。
而3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的方法来测定还原糖的含量。
二、3,5-二硝基水杨酸比色法原理3,5-二硝基水杨酸比色法是利用还原糖与3,5-二硝基水杨酸在酸性溶液中发生还原反应，生成带有黄色的还原糖-3,5-二硝基水杨酸络合物。
通过比色测定络合物的吸光度，可以间接测定还原糖的含量。
这种方法的优点是操作简便、灵敏度高、准确性较好，因此被广泛用于食品、医药等领域的还原糖含量测定。
三、实验步骤1. 样品制备：将待测食品样品制成均匀的糊状。
2. 提取还原糖：将制好的样品用水提取，得到含有还原糖的提取液。
3. 混合试剂：将3,5-二硝基水杨酸试剂与提取液进行混合，使其发生化学反应生成还原糖-3,5-二硝基水杨酸络合物。
4. 比色测定：用比色计测定络合物的吸光度，据此计算出还原糖的含量。
四、实验注意事项1. 实验操作中需注意安全，避免接触到有毒化学品。
2. 实验操作要严格按照步骤进行，避免操作失误。
3. 比色计要保持清洁，以确保测定结果的准确性。
五、实验结果分析通过3,5-二硝基水杨酸比色法测定出的还原糖含量可以作为食品加工和质量控制的重要数据。
实验结果的准确性和稳定性对于保障产品质量和食品安全具有重要意义。
六、实验应用3,5-二硝基水杨酸比色法不仅在食品加工领域有重要应用，还在医药、化工等领域具有广泛的应用。
对该方法的研究和实际应用具有重要价值。
七、结论3,5-二硝基水杨酸比色法是一种简便、灵敏度高的测定还原糖含量的方法，具有较好的准确性和实用性。
在食品加工和生产中，该方法有着重要的应用价值，能够为保障产品质量和食品安全提供重要数据支持。
八、参考文献1. Zhang, Y.; Wu, X.; Chen, Z. A. M. Determination of Reducing Sugars in Low Concentrations by 3,5- dinitrosalicylic Acid Method in Tapered Microfluidic Channels. Anal. Chem. 2017, 89, 9750-9756.2. Miller, G. L. Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of Reducing Sugar. Anal. Chem. 1959, 31, 426-428.以上就是3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量的一些基本内容，该方法的简便性和高灵敏度使其成为食品加工和生产中常用的一种检测手段。
还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法实验_百替生物
碳水化合物
实验一 还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原
糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶
解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸
水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄
糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨
基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，
（3）显色和比色
取 4 支 20mL 具塞刻度试管，编号，按表 2 所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作 标准曲线的 0 号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
表 2 样品还原糖测定
管号
还原糖待测液 （mL）
总糖待测液 （mL）
蒸馏水 （mL）
DNS
光密度值
（mL） （OD540nm）
提取液总体积 查曲线所得葡萄糖毫克数×
测定时取用体积 还原糖（%）=
样品毫克数
×100
查曲线所得水解后还原糖毫克数×稀释倍数
总糖（%）=
×0.9×100
样品毫克数
六、附 注
1． 离心
时对称位置的离心管必须配平。
2． 标准曲线制作与样品测定应同时进行显色，并使用同一空白调零点和比色。
糖的定量测定
ห้องสมุดไป่ตู้,5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成 二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成 棕红色的氨基化合物 的氨基化合物: 棕红色的氨基化合物:
在一定范围内,棕红色物质颜色的深浅程度 在一定范围内, 与还原糖的量成正比.因此, 与还原糖的量成正比.因此,我们可以利用 比色法测定样品中还原糖以及总糖的含量. 比色法测定样品中还原糖以及总糖的含量. 该法是半微量定糖法,操作简便,快速, 该法是半微量定糖法,操作简便,快速,杂 质干扰较少. 质干扰较少.
3,样品中含糖量的测定 ,
支大试管, 取4支大试管,分别按下表加入各种试剂. 支大试管 分别按下表加入各种试剂.
测定样品中含糖量时各试剂的用量
项 目 样品量(ml) 样品量 ) 蒸馏水( ) 蒸馏水(ml) DNS试剂 试剂(m1) 试剂 加热 冷却 蒸馏水(ml) 蒸馏水
光 密 度 (O.D.520) . 21.5
空白 0 2.0 1.5
1
2
3 1.0 1.0 1.5
1.0 1.0 1.0 1.0 1.5 1.5
均在沸水浴中加热5min 均在沸水浴中加热 立即用流动冷水冷却
21.5 21.5 21.5
3,样品中含糖量的测定 ,
将各管混匀后, 将各管混匀后 按制作标准曲线时同样的操作测 定各管的光密度, 定各管的光密度 在标准曲线上查出相应的糖含 量, 按下述公式计算出山芋粉总糖百分含量. 按下述公式计算出山芋粉总糖百分含量.
2,制作葡萄糖标准曲线 ,
将以上各管溶液混匀后,用分光光度计 将以上各管溶液混匀后, (520nm)进行比色测定,用空白管溶液调零点, 进行比色测定, 进行比色测定 用空白管溶液调零点, 记录光密度值,以葡萄糖浓度为横坐标,光密 记录光密度值,以葡萄糖浓度为横坐标, 度为纵坐标,绘制出标准曲线. 度为纵坐标,绘制出标准曲线.
3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖含量
3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖含量
3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用于测定糖含量的方法。
该方法基于糖的还原性，利用糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成一个特定的有色产物，通过测量这个有色产物的吸光度，可以确定糖的含量。
下面是该方法的步骤：
1. 准备一定浓度的3,5-二硝基水杨酸溶液。
可以将一定量的3,5-二硝基水杨酸粉末溶解在适量的溶剂（如醇）中，制备出一定浓度的3,5-二硝基水杨酸溶液。
2. 准备样品溶液。
将待测糖溶解在适量的溶剂中，制备出合适浓度的糖溶液。
3. 反应。
将一定量的样品溶液与一定量的3,5-二硝基水杨酸溶液混合，在适当的温度下进行反应。
4. 吸收测量。
将反应后的溶液用比色皿装入分光光度计中，设置波长（通常为540 nm），测量吸光度。
5. 构建标准曲线。
根据已知浓度的糖溶液，按照上述步骤测量吸光度，并绘制出吸光度与糖浓度之间的关系图。
可以根据标准曲线来确定未知样品中糖的含量。
需要注意的是，该方法只适用于对还原性糖进行测定，不适用
于非还原性糖的测定。
同时，实验过程中要注意操作规范和安全，避免接触有毒物质。
植物组织中总糖及还原糖的测定
实验材料：苹果（约0.5 g） 仪器：水浴锅；可见分光光度计等。 试剂： 1 mg/mL葡萄糖标准液 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂(碱性) 6M HCl和6M NaOH
葡萄糖标准曲线的绘制
还原糖的提取
样品含糖量的测定:
四、实验步骤：
1、葡萄糖标准曲线的绘制: 取7支试管，按下表操作，以标准葡萄糖含量为横坐标，对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
3-氨基-5-硝基水杨酸 (棕红色,A540)
3,5-二硝基水杨酸 (DNS)
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质(3-氨基-5-硝基水杨酸)颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
六、思考题：
管号
葡萄糖标准液mL
蒸馏水mL
DNSmL
沸水浴
光密度值OD540nm
葡萄糖含量（μg）
0(参比溶液)
0
1
1.0
5min 冷却
0.114
0
1
0.2
0.8
200
.4
600
4
0.8
0.2
800
5
1.0
0
1000
1.0ml
χ1
还原糖提取液
蒸馏水 mL
4
2、还原糖的提取
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
糖的定量测定
�
还原糖mg/ml×提取液体积×稀释倍数 ×提取液体积× 还原糖
总糖 =
样品重量
×100% %
四,实验要求
1.实验过程中所有的试管要干净 加入各种试剂量 实验过程中所有的试管要干净, 实验过程中所有的试管要干净 要准确. 要准确. 2.试剂不可倒出试剂瓶,用干净的移液管吸取, 试剂不可倒出试剂瓶, 试剂不可倒出试剂瓶 用干净的移液管吸取, 用后盖好瓶塞,防回原处. 用后盖好瓶塞,防回原处. 3.分光光度计使用:溶液不要倒太多 毛边不要 分光光度计使用: 分光光度计使用 溶液不要倒太多; 对着透光处; 用后用自来水冲洗干净, 防回原处. 对着透光处 用后用自来水冲洗干净 防回原处. 4.移液管使用:有色看外边缘 无色看中间凹处. 移液管使用: 移液管使用 有色看外边缘, 无色看中间凹处. 5.实验室中所有的仪器上面不能放置烧杯,试管, 实验室中所有的仪器上面不能放置烧杯, 实验室中所有的仪器上面不能放置烧杯 试管, 试剂瓶等,以防试剂污染仪器. 试剂瓶等,以防试剂污染仪器.
三,实验操作 1,样品总糖的水解及提取 ,
准确称取山芋粉 克,放入大试管中,加入 准确称取山芋粉1克 放入大试管中, 山芋粉 10ml 6N HCl和15ml蒸馏水,混匀.在沸水浴加 蒸馏水, 和 蒸馏水 混匀. 溶液检查水解程度. 热30min后,用KI-I2溶液检查水解程度. 后 完全水解后, 冷却并加入酚酞试剂一滴, 完全水解后 冷却并加入酚酞试剂一滴 以 10% NaOH中和至溶液呈微红色 先用双层纱布 中和至溶液呈微红色 中和至溶液呈微红色, 过滤, 再用滤纸过滤并定容至100ml.精确吸取上 过滤 再用滤纸过滤并定容至 . 述溶液10ml放入 放入100ml容量瓶,稀释至刻度 备用. 容量瓶, 述溶液 放入 容量瓶 稀释至刻度, 备用.
实验一植物中总糖的测定
实验一植物中总糖的测定——3，5-二硝基水杨酸比色法实验目的（1）掌握总糖定量测定的基本原理（2）熟悉3，5-二硝基水杨酸定糖法的基本操作实验原理各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解性质不同，可将植物样品中的单糖、双糖、多糖分别提取出来。
再用水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3，5-二硝基水杨酸共热，3，5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖醛酸及其他产物。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的颜色深浅成比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，通过标准曲线，便可求出样品中总糖的含量。
多糖水解时，在单糖残基上加了一个分子水，因而在计算中需扣除已经加入的水量，测定所得的总糖量乘以0.9即为实际的总糖含量。
实验材料、仪器与试剂1．实验材料面粉2．实验仪器刻度试管或比色管，刻度吸管，恒温水浴锅，烧杯，容量瓶，电子天平，分光光度计，三角瓶。
3．试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取500mg分析纯葡萄糖，置于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到500ml的容量瓶中。
以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）a:3，5-二硝基水杨酸试剂：取6.5g3，5-二硝基水杨酸溶于少量热蒸馏水中，溶后移入1000ml 容量瓶中，加入325ml 2mol/L氢氧化钠溶液，再加入45g 丙三醇，摇匀，冷却，定容至1000ml。
b:3，5-二硝基水杨酸试剂：将6.3g 3，5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L 氢氧化钠溶液加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000ml，储于棕色瓶中备用。
（3）碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml70%乙醇中。
实验一-还原糖和总糖的测定-3-5-二硝基水杨酸比色法
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计）.还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3，5—二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3—氨基—5—硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计，在540 nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量.由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0。
9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉（1000 g）2．主要仪器(1）具塞玻璃刻度试管:20 mL×11 （2）滤纸（3）烧杯：100 mL×2 （4)三角瓶：100 mL×1 (5)容量瓶：100 mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2 mL×2；10 mL×1 （7)恒温水浴锅（8）煤气炉(9）漏斗（10)天平（11）分光光度计3．试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80 ℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg,置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
(2）3,5-二硝基水杨酸(DNS）试剂3,5－二硝基水杨酸(DNS）试剂：称取6。
5 g DNS溶于少量热蒸馏水中,溶解后移入1000 mL容量瓶中，加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL，再加入45 g丙三醇,摇匀，冷却后定容至1000 mL。
实验一-3--5--二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖
实验一3, 5 -二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖1、实验目的：掌握还原糖和总糖测定的基本原理掌握比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
2、实验原理：在NaOH和丙三醇存在下，3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
3、实验步骤：（一）葡萄糖标准曲线制作1. 取6个试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水2. 向各试管中分别加入DNS试剂1 ml，充分混合，放入沸水浴中加热煮沸2 min 进行显色，取出试管放入盛有冷水的烧杯中迅速冷却。
3.向各管中分别加入8 ml蒸馏水，充分混合。
4.以空白管（0号管）做对照，于540nm 波长下调0，然后测定各管的OD 值。
5.以光吸收值作为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。
如果该直线不通过零点，必须重做。
（二）还原糖的制备1. 称取2g玉米粉，把它放入一个100ml的三角瓶中，然后加入20~30ml蒸馏水，搅拌均匀。
2. 把三角瓶放于一个50℃水浴中保温30 min，不时搅拌。
3. 拿出三角瓶，将三角瓶内含物转入50ml的容量瓶中：过滤，定溶，充分混合，滤出液即为还原糖提取液。
(三) 样品总糖的水解和提取1. 取1g玉米粉，放在100ml三角瓶中，加15ml水溶解，再加10ml 6mol/L 盐酸，混匀。
2. 将三角瓶置于沸水浴中加热煮沸30 min。
3.取出1~2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈现蓝色。
4.拿出三角瓶，冷却，过滤，滤出液即为总糖提取液。
5.加入3-5滴酚酞指示剂，混匀，用6mol/L的NaOH中和至溶液呈微红色。
将中和后的溶液转入100 ml的容量瓶中定容。
（四）样品中含糖量的测定1. 取5支试管，编号，按下表向每支试管中加入试剂。
实验一还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一．目的1.掌握还原糖定量测定的基本原理；2.学习比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度计的使用方法。
二．原理在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。
三．仪器.试剂和材料1.仪器：（1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂；（1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH3.材料：食用面粉四．操作步骤将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。
在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。
以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定（1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。
过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。
放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。
待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。
以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。
3,5-二硝基水杨酸比色定糖法
实验一 3，5-二硝基水杨酸比色定糖法目的要求1.掌握 3，5-二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。
2.用 3，5-二硝基水杨酸定糖法测定山芋份中的总糖度及还原糖。
3.熟悉 721型分光光度计的原理及使用方法实验原理3， 5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验操作方法一、葡萄糖标准曲线的制定取9支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂：将上述各管溶液混匀后，在721分光光度计上用520纳米进行比色测定，用空白管溶液调零点。
记录光吸收值。
以葡萄糖浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制出标准曲线。
二、山芋粉中总糖和还原糖含量的测定1.样品中还原糖的提取：准确称取2克山芋粉，放入100毫升烧杯内，加入85%乙醇50毫升，混匀，在50℃恒温水浴中保温30分钟，过滤，滤渣再用85%乙醇提取二次。
将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入100毫升容量瓶中，用水稀释到刻度，备用。
2.样品中总糖的水解及提取：准确称取山芋粉1克，放入大试管中，加入10毫升6N盐酸和15毫升蒸馏水。
混均，在沸水浴中加热半小时后，用碘化钾-碘溶液检查水解程度。
若已水解完全，则不呈现蓝色。
冷却后加入酚酞指示剂1滴，以10%氢氧化钠中和至溶液呈微红色。
过滤并定容至100毫升。
再精确吸取上述溶液10毫升，放人100毫升容量瓶中，稀释刻刻度，备用。
3.样品中含糖量的测定：取7支大试管，分别按下表加入各种试剂：将各管混匀后，按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式计算出山芋粉内还原糖与总糖的百分含量。
试剂和器材一 、试剂（1）3，5-二硝基水杨酸试剂 （又称DNS 试剂）：甲液：溶解6.9克结晶酚于15.2毫升IO%氢氧化钠中，并稀释至69毫升，在此溶液中加入6.9克亚硫酸氢钠。
食品化学实验
取7支25×250 mm试管分别按下表加入试剂：
项目
管号
样品溶液（ml） 蒸馏水（ml） 3·5－二硝基水杨酸试剂（ml）
空白
还原糖
总糖
0
1
2
3
4
5
6
0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
2
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
加完试剂后，其余操作均与制作标准曲线时相同。测定后，取样品 的OD平均值在标准曲线上查处相应的糖量。
因硫酸作用甚缓，需加硫酸铜作为催化剂，并加硫酸钾 以提高溶液之沸点。
蛋白质是由氨基酸所组成，含有C、H、O及一定量的N和 少量的S，所有这些元素在蛋白质中都有一定的比例，其平均 值（百分比）是碳为50.6-54.6；氢为6.5-7.3；氧为21.523.5；氮为15.0-17.6；硫为0.3-2.5。
2 样品中总糖和还原糖含量的测定
以测定藕粉中总糖和还原糖含量为例。 (1) 样品中还原糖的提取：
准确称取4 g藕粉，放在100 mL烧杯中，先以少量水调成糊 状，然后加50－60 mL蒸馏水，于50 ℃恒温水浴中保温20分钟， 过滤，将滤液收集在100 mL容量瓶中，再定容至100 mL。
(2) 样品中总糖的水解及提取：
思考题
1、试述粗脂肪与脂肪概念的区别。 2、为什么待测粗脂肪的试样须干燥？
实验三 油脂过氧化值的测定
一、原理
过氧化值指油脂中的过氧化物总含量，是油脂中不 饱和脂肪酸与空气中的氧发生氧化作用所产生的氢过氧 化物，为油脂氧化过程的中间产物，它很不稳定,能继续 分解成醛、酮类和氧化物等,使油脂进一步酸败变质。氢 过氧化物对人体健康有害，过氧化值超标的油脂不能食 用。因此，过氧化值是油脂初期氧化程度的标志，是反 映食用油脂新鲜度和氧化酸败程度的重要指标。
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1．样品中还原糖的提取：准确称取2g山芋粉，放入100ml烧杯内，加入85％乙醇50ml，混匀，在50℃恒温水浴中保温 30min，过滤，滤渣再用85％乙醇提取二次。将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入100ml容量瓶中，用水定容，备用。
2．样品中总糖的水解及提取：准确称取出芋1g，放入大试管中，加入1ml 6mol盐酸和15ml蒸馏水。混匀，在沸水浴中加热半小时后，用碘化钾－碘溶液检查水解程度，若已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入酚酞指示剂1滴。以10％氢氧化钠中和至溶液呈微红色。过滤并定容至100ml。再精确吸取上述溶液10ml，放入100ml容量瓶中，定容，备用。
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实验一 3．5一二硝基水杨酸比色定糖法
【目的和要求】
1．掌握3，5一二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。
2．用3，5一二硝基水杨酸定糖法测定山芋粉中的总糖及还原糖。
【原理】
3，5一二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
（3）未知葡萄糖溶液 [冰箱保存备用] （4）6mol盐酸溶液 （5）10％氢氧化钠溶液 （6）碘化钾－碘溶液（碘试剂） （7）酚酞指示剂 （8）85％乙醇
二、器材
（1）试管和试管架 （2）碱滴定管（50 ml）。 （3）铁台 （4）滴定管夹 （5）吸量管（1 ml和2 ml）和吸量管架 （6）容量瓶(100 ml) （7）铜水浴锅 （8）玻璃漏斗和烧杯 （9）铁三脚架 （10）量筒（10 ml、100ml） （11）电热恒温水浴 （12）煤气灯 （13）玻璃棒 （14）白瓷板 （15）72型分光光度计
【思考题】
1．比色测定的操作要点是什么？方法的基本原理是什么？
2．72型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么？
比色测定时为什么要设计空白管？
总糖包括哪些化合物？
还原糖％＝ 还原糖毫克数×样品稀释倍数 ×100 样品重量 总糖量＝ 水解后还原糖毫克数×样品稀释倍数 ×100 样口品重量
【试剂和器材】
一、试剂
（1）3′，5′一二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）：
甲液——溶解6.9g结晶酚于15.2ml 10％氢氧化钠中，并稀释至69 ml，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。
该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干扰较小。
【操作方法】
一、葡萄糖标准曲线的绘制
取9支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂：
数 量 管号
项目 空白 1 2 3 4 5 6 7 8 含糖总量（mg） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 0.1％葡萄糖标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 DNS 试剂(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 加 热 均 在 沸 水 浴 中 加 热 5 min 冷 却 立 即 用 液 动 冷 水 冷 却 蒸馏水(ml) 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 光密度（D520） 将上述各管溶液混匀后，用72型分光光度计（520nm）进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值。以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制出标准曲线。
3．样品中含糖量的测定：取7支大试管，分别按下Fra bibliotek加入各种试剂：
数 量 管号
项目 空白 1 2 3 4 5 6 样品量（ml） 0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 蒸馏水(ml) 2.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 DNS 试剂(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 加 热 均 在 沸 水 浴 中 加 热 5 min 冷 却 立 即 用 液 动 冷 水 冷 却 蒸馏水(ml) 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 21.5 光密度（D520） 将各管混匀后，按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式推算出山芋粉内还原糖与总糖的百分含量。
乙液——称取255g酒石酸钾钠，加到300 ml 10％氢氧化钠中，再加入880 ml 1％ 3，5一二硝基水杨酸溶液。
将甲液与乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，在室温下放置7－10天以后使用。
（2）0．1％葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100 ml，冰箱保存备用。