鲎试剂分类
细菌内毒素测定技术—鲎试剂灵敏度复核和方法验证试验
知识点：鲎试剂灵敏度复核试验
二、鲎试剂灵敏度的复核 在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低
知识点：鲎试剂灵敏度复核试验
当λc在0.5λ~2λ（包括0.5λ和2λ）时，方可用于内毒素 检查。但是注意要以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
知识点：干扰试验
一、干扰试验 是为了确定供试品在多大的稀释倍数或 浓度下对内毒素和鲎试剂的反应不存在干扰作用，为产 品能否用细菌内毒素检查法提供依据，并且验证供试品 的配方和工艺有变化，鲎试剂来源改变或供试品阳性对 照结果呈阴性时，供试品是否存在干扰作用。
编号
内毒素浓度
被加入内毒素的溶液 平行管数
A
无
供试品溶液
至少2
标准曲线的中点（或附近点
B
）的浓度（设为λm）
C
至少3个浓度 （最低一点设定为λ）
供试品溶液 检查用水
至少2 每一浓度至少2
D
无
检查用水
至少2
A 为稀释倍数不超过MVD 的供试品溶液。B 为加入了标准曲线中点或 靠近中点的一个已知浓度内毒素的，且与溶液A 有相同稀释倍数的供 试品溶液。C 为如“标准曲线的可靠性试验”项下描述的，用于制备 标准曲线的标准内毒素溶液。D 为阴性对照。
浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，用EU/ml 表示。当使用新批号的 鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进 行鲎试剂灵敏度复核试验。
复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考察检 验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。
细菌内毒素试验（鲎试验）的全面解析
细菌内毒素试验（鲎试验）的全面解析一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素(Exotoxin)；它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。
产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。
如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。
另一类为内毒素(Endotoxin)，是革兰氏阴性菌的细胞壁的产物。
细菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。
和热原的关系热原(pyrogen)系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。
热原是否就是内毒素？细菌内毒素是热原的一种，即细菌性热原。
细菌内毒素被认为是热原的本质，此事在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。
但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。
热原反应：含有热原的注射剂注入人体可引起发热反应，使人体产生发冷、寒战、体温升高、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。
来源和控制方法1、细菌内毒素的特性2、去除细菌内毒素的方法(1)吸附法此法是利用活性炭对热原的吸附作用达到去除作用的方法。
常用的吸附剂中，活性炭对热原的吸附作用最强，一般用量为总容量的0.1%-0.5% ，将溶液加热到70℃左右保温一定时间效果更好。
使用的活性炭应符合药典规定要求。
(2)蒸馏法此法是利用热原具有不挥发性而达到去除目的。
因此，凡适于蒸馏的药品均可用蒸馏法除去热原。
(3)热破坏法此法是利用热高温能破坏热原质达到去除目的。
因此，凡适用于高温处理的如热原检查试验中接触药液的容器，可用180℃干烤3小时，或250℃干烤30min以上。
(4)强酸强碱处理法此法利用强酸强碱能破坏热原而达到去除的目的。
(5)其他，也可以采用过滤等方法去除热原。
凝胶法鲎试剂内毒素检测试剂
产品描述：凝胶法鲎试剂内毒素检测试剂Gel Clot LAL Assays产品介绍：内毒素检测Endotoxin Detection提供内毒素检测LAL(Limulusamebocytelysate)试剂及各种仪器，此类产品广泛用于工业药品制造厂家。
可检测各种规格的内毒素含量。
Lonza公司可提供各种单独或组合装的试剂检测盒,以及内毒素标准品、检测用水、检测仪器。
为适应市场的需要Cambrex公司还不断推出各种新的检测方法及试剂。
：1)凝胶法：定性、半定量、更高的灵敏度。
2) 荧光法：快速、高灵敏度、简单、较大范围内定量3) 端点显色法：快速、简便、小范围内定量。
4) 内毒素检测精密移液器、试管架、无热源吸头、无热源试管、无热源微板、动态检测仪器。
其中重组因子C ----内毒素激活的胶凝级联反应中最重要的成分。
PyroGene™重组因子C 的内毒素侦测有较佳的状态, 不会检测到β(1,3)-聚葡萄醣体的活动，不受季节、环境、动物血、不同批次差异性的影响。
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订货信息货号描述灵敏度EU/ml规格PYROGENT® Gel Clot LAL Assay80 tests = 5×16 tests/vial of lysate250 tests = 5×50 tests/vial of lysateN104 0.03 250 testsN183-06 0.06 80 testsN194-06 0.06 250 testsN183-125 0.125 80 testsN184-125 0.125 250 testsN184-25 0.25 250 testsPYROGENT® Gel Clot LAL Single Test Vials25 single test vials of lysateN189-06 0.06 25 testsN189-125 0.125 25 testsN189-25 0.25 25 testsPYROGENT® Plus Gel Clot LAL Assay（含对照）1×10 ng/vial endotoxin64 Tests = 4×16 tests/vial of lysate200Tests = 4×50 tests/vial of lysateN294-03 0.03 200 testsN283-06 0.06 64 testsN294-06 0.06 200 testsN283-125 0.125 64 testsN294-125 0.125 200 testsN284-25 0.25 200 testsPYROGENT® Plus Gel Clot LAL Single Test Vials1×1 ml vial endotoxin24 single test vials of lysateN289-06 0.06 24 testsN289-125 0.125 24 testsN289-25 0.25 24 testsPYROGENT® Ultra Gel Clot LAL Assay200Tests = 4×50 tests/vial of lysate5×5 ml liquid endotoxin standardsN594-03 0.03 200 testsN594-06 0.06 200 testsN594-125 0.125 200 testsControl Standard Endotoxin for Gel Clot LALEndotoxin(E. coli) for Gel Clot AssaysStrain O55:B5N185 5 vials×2.5 mg/vial*N186 5 vials×10 ng/vial* high potency for depyrogenation studies。
鲎试剂简介
鲎试剂简介
鲎试剂是由海洋生物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品，含有能被微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原，凝固蛋白原，能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素和（1,3）-β-葡聚糖激。
目前，鲎试剂广泛用于制药、临床以及科研等领域，用于细菌内毒素和真菌葡聚糖检测。
目前使用的鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。
鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。
这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”，可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病；在制药和食品工业中，可用它对毒素污染进行监测。
此外，鲎的肉、卵均可食用。
鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测和真菌（1,3)-β-D-葡聚糖检测。
鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。
目前能生产鲎试剂的主要有美国、日本、中国等国家。
中国药典和美国药典的内毒素检测要求
鲎试剂－LAL，中国药典和美国药典的内毒素检测要求鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。
鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。
目前国际上销售的鲎试剂有两种，一种称美洲鲎试剂（Limulus Amebocyte Lysate），缩写为LAL，由美国生产；另一种称东方鲎鲎试剂（Tachypleus Amebocyte Lysate），缩写为TAL。
实验证明：美洲鲎试剂-LAL比东方鲎试剂LAL更纯洁，检测效果更好。
TAL检查内毒素有很多方法，目前应用最广泛的是凝胶法，此外还有动态浊度法﹑显色基质法,比色法等。
其用途有以下几方面：1. 药检：用于注射药品﹑放射性药物﹑生物制品﹑注射器及生产工艺流程中的内毒素检测；2. 临床：用于检测病人各种体液中的内毒素含量；3. 其他：用于检测水或食品中的内毒素含量。
2005年版中国药典《细菌内毒素检查法-鲎试剂法》(鲎试剂－LAL法)本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
细菌内毒素国家标准品系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及设置的各种阳性对照。
凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。
定量测定用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。
鲎试剂凝胶的原理-概述说明以及解释
鲎试剂凝胶的原理-概述说明以及解释1.引言1.1 概述鲎试剂凝胶是一种常用的实验工具，用于生物学和生物化学领域的分离和分析。
它具有很高的分辨率和灵敏度，被广泛应用于DNA、RNA和蛋白质的电泳分离。
鲎试剂凝胶的原理是基于电泳的原理。
电泳是利用电场使带电粒子在溶液中移动的现象。
在鲎试剂凝胶中，电泳的基本原理是将分子沿着凝胶基质中的通道移动，根据分子的大小和电荷差异进行分离。
鲎试剂凝胶通常使用琼脂糖或聚丙烯酰胺等材料制备而成。
这些材料可以形成细小的孔隙结构，使得分子可以在凝胶中移动。
通过改变凝胶的浓度和孔隙大小，可以调节分子在凝胶中的运动速度和分离效果。
鲎试剂凝胶的制备方法有多种，常见的包括连续电泳法、间断电泳法和双向电泳法等。
其中，连续电泳法是最常用的方法，通过将凝胶浸泡在缓冲液中，使其与电源相连，利用电场将分子分离出来。
鲎试剂凝胶在实验中有许多优势，例如分离效果好、操作简单、成本低廉等。
然而，也存在一些局限性，比如分离速度较慢、无法分离高分子量的分子等。
总之，鲎试剂凝胶作为一种常用的实验工具，在生物科学研究中起着重要的作用。
它的原理简单明了，制备方法多样，可以满足不同实验需求。
未来，随着科学技术的不断发展，鲎试剂凝胶的分离效果和操作方便性可能会得到进一步改善，为生物学和生物化学领域的研究提供更加有效的工具。
1.2文章结构1.2 文章结构本文将分为三个主要部分进行讨论。
第一部分是引言，将概述鲎试剂凝胶的原理以及本文的目的。
在概述部分，将介绍鲎试剂凝胶的基本概念和应用范围，以便读者对其有一个初步的了解。
在文章目标部分，将明确本文的目的是解析鲎试剂凝胶的原理，以便读者能够更深入地理解该技术的工作原理和作用机制。
第二部分是正文，将重点探讨鲎试剂凝胶的制备方法和原理解析。
在鲎试剂的定义和应用范围部分，将详细介绍鲎试剂的定义、特点和广泛应用的领域，以展示其重要性和广泛性。
在鲎试剂凝胶的制备方法部分，将介绍不同的制备方法，包括材料选择、混合比例、反应条件等，以帮助读者了解制备过程。
2005年版中国药典 《细菌内毒素检查法》
凝胶法鲎试剂使用说明书【名称】通用名：鲎试剂英文名：（简称）汉语拼音：本品主要成份为因子、因子、凝固酶原、凝固蛋白原。
【用途】专用于细菌内毒素检查。
【性状】本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水和生理盐水中易溶。
【原理】本品为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，在适宜的条件下（温度，值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。
【用法】．材料和设备选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。
准备若干支ⅹ玻璃反应试管（若使用规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（±℃）。
．实验操作稀释细菌内毒素工作品：取内毒素工作品（冻干品）支，按细菌内毒素工作品使用说明书进行操作。
试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于试剂中，轻轻振摇至少至试剂完全溶解。
注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。
检查操作取分装有鲎试剂溶液的×试管或复溶后的支规格的鲎试剂原安瓿支，其中支作供试品管，支作阴性对照管，支作阳性对照管，支作供试品阳性对照管。
每支供试品管加入供试品；阴性对照管加入检查用水；阳性对照管加入浓度为λ的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入含λ内毒素的供试品。
封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入±℃的恒温器中孵育±分钟，然后取出观察结果。
试管在孵育期间应避免任何的振动。
结果判断将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转°时，管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。
阴性对照管均为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。
【注意事项】.本品仅用于体外细菌内毒素检测，禁止用于注射、口服等。
. 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在℃干烤至少，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
鲎试剂凝胶法
遮光，在冷处保存。
【包装】
(1)1ml 安瓿；(2)2ml 安瓿；(3)5ml 安瓿；(4)7ml 抗生素瓶；(5)10ml 抗生素瓶 【有效期】
稀释内毒素标准品时应按其使用说明用漩涡混合器混合适当的时间。 2.2 检品稀释 当检品需要控制的内毒素限值大于鲎试剂的灵敏度值时，需要用检查用水对检品进行稀释，计算公式如下：
MVD：检品的最大有效稀释倍数 L：检品需控制的内毒素限值（Eu/ml） λ：鲎试剂灵敏度值（Eu/ml） [举例]：某检品需要控制的内毒素限值为 5Eu/ml，使用灵敏度 λ=0.25Eu/ml 的鲎试剂作细菌内毒素检查。
二年
【批准文号】
(94)卫药准字 SJ-01 【生产企业】
企业名称：湛江安度斯生物有限公司
地 址：广东省湛江市人民大道中 38 号 邮政编码：524022 电 话：（0759）3380672 传 真：（0759）3391072
E-mail:zacb@ 网 址：
若阳性对照管为阴性表明鲎试剂或标准内毒素已失效或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确或标准内毒素的稀释有误
鲎试剂说明书
【名称】 通用名：鲎试剂 英文名：Tachypleus Amebocyte Lysate (TAL) 汉语拼音：Hou Shi Ji 【性状】 本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水中易溶。 【原理】 本品为鲎科动物东方鲎（Tachypleus Tridentatus, Leach）的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，内含能被 微量细菌内毒素激活的凝固酶原（Proclotting enzyme）和凝固蛋白原（Coagulogen）。在适宜的条件下（温 度，pH 值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。凝胶法鲎试 剂是根据反应所形成凝胶的程度来限量检测细菌内毒素。 【用途】 用于细菌内毒素检查。 【使用方法】 1. 实验准备 1.1 选择所需规格及灵敏度的鲎试剂，细菌内毒素标准品以及细菌内毒素检查用水。 1.2 10×75mm 反应试管（若使用 0.1ml 规格的鲎试剂无需准备此试管）和大口径稀释试管若干支，以及移液器具。 实验所用器皿须经 250℃干烤至少 1 小时或其它适宜的方法除去可能存在的外源性热原。 1.3 水浴恒温器或干热恒温器，漩涡混合器，试管架，计时器。实验开始前应把恒温器温度调到 37±1℃。 2. 实验操作 2.1 内毒素标准品稀释 取内毒素标准品（冻干品）1 支，开启，按使用说明加入检查用水溶解后分步稀释至所需浓度备用。 如下稀释方法供参考：
光度法鲎试剂
光度法鲎试剂一、介绍光度法鲎试剂1.1 光度法鲎试剂的定义光度法鲎试剂是一种用于测量光密度的试剂物品。
它能够将光通过溶液进行吸收，并通过测量吸光度来定量分析样品的浓度。
1.2 光度法鲎试剂的种类光度法鲎试剂有多种种类，包括酶标板鲎试剂、光度计鲎试剂和分光光度计鲎试剂等。
不同种类的试剂适用于不同的实验需求。
二、光度法鲎试剂的应用2.1 光度法鲎试剂在生物学研究中的应用光度法鲎试剂在生物学研究中起着重要作用。
例如，在酶动力学研究中，可以通过测量底物和产物的浓度差来确定酶的活性。
光度法鲎试剂可以对这些底物和产物进行分析，从而获得准确的数据。
2.2 光度法鲎试剂在医学诊断中的应用光度法鲎试剂也被广泛应用于医学诊断中。
例如，在血液分析中，通过测量特定指标物在血液中的浓度来判断疾病的程度。
光度法鲎试剂能够提供准确的浓度测量结果，帮助医生做出正确的诊断。
3.1 光的吸收和透射光度法鲎试剂的工作原理基于光的吸收和透射。
当光通过溶液时，溶液中的物质会吸收部分光的能量，使得光强度减弱。
通过测量光的强度变化，可以推断出溶液中物质的浓度。
3.2 Lambert-Beer定律光度法鲎试剂在测量时通常遵循Lambert-Beer定律。
该定律表示溶液中吸光度与溶液浓度和光的路径长度成正比。
通过校准曲线可以将吸光度转换为溶液中物质的浓度。
四、使用光度法鲎试剂的步骤4.1 样品的制备首先，需要制备符合实验要求的样品。
例如，在血液分析实验中，需要从患者身上采集血样，并对血液进行处理，以去除可能干扰测量的物质。
4.2 光度计的校准在进行测量之前，需要对光度计进行校准。
校准过程包括设置空白值和参考值，以确保测量结果的准确性。
4.3 加入光度法鲎试剂将样品与适量的光度法鲎试剂混合，充分搅拌以保证试剂与样品均匀混合。
4.4 测量和记录测量值将混合液倒入光度计的比色皿中，并选择合适的波长进行测量。
记录测量值并进行数据分析。
5.1 优点1.精确度高：光度法鲎试剂能够提供准确的浓度测量结果。
[精华]鲎试剂试验方法
![[精华]鲎试剂试验方法](https://img.taocdn.com/s3/m/28cbff01caaedd3383c4d3b4.png)
[精华]鲎试剂试验方法鲎试剂实验方法鲎试剂按实验方法可分为:凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。
此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。
使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。
厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。
使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。
特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。
目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。
因此不列为独立品种。
动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。
这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。
根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。
浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。
终点浊度法未见商品化产品。
动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
动态浊度法的特点为:1. 能准确定量。
2.检测范围宽，可达4个数量级。
3.灵敏度高达0.005EU/ml。
4. 操作简便，系统自动检测分析，一步即成。
5. 经济实用，试剂样品需要量少，可降至50μL。
6. 和微生物检测系统Elx808(配套IU)及专用软件TALgent使用，一次可同时检测多达96个样品。
基因重组级联显色法鲎试剂
基因重组级联显色法鲎试剂
鲎试剂又叫粒细胞染色剂，它可以用来进行细胞内基因重组试验。
在细胞基因组学及遗传学研究中，利用基因重组级联显色法(CGLF)来检测和定位基因
的位置是一种广泛采用的技术。
CGLF通过使用鲎试剂中的分子表达载体，将特定的基因或遗传标记分离开来，从而实现细胞中的基因洗牌和定位。
鲎试剂是一种显色体外系统，可以显示出染色质上基因重组的位置，用于基因位点准
确定位和基因定量定量分析。
鲎试剂通常由细胞外子受体蛋白、酶、快速枯草芽孢杆菌及日龙流感病毒等组份组成，其中最重要的成分是快速枯草芽孢杆菌的作用和日龙流感病毒的作用。
快速枯草芽孢杆菌在鲎试剂中的作用是通过感染细胞，使细胞产生核酸分子，它们含
有特定序列的毒性基因片段，毒性基因片段可以识别识别特定细胞上的特定基因。
日龙流感病毒会被特定细胞内的基因识别，并且会引起基因重组，从而释放出特定序
列的酶，用于特定遗传标记的测定。
鲎试剂是一种非常有效的细胞外基因洗牌和定量检测技术。
它可以快速地检测基因的
位置，并精确地实现基因的重组，为基因分析和基因编辑技术提供良好的支持。
另外，它
也可以用于诊断性异常变异和聚合物测定，为基因检测提供重要的参考依据。
显色基质鲎试剂盒使用说明书 (终点显色法,含偶氮化试剂)
显色基质鲎试剂盒使用说明书(终点显色法，含偶氮化试剂)【用途】显色基质鲎试剂( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate , CE TAL )用于体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。
【原理】鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。
在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm）。
在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。
同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax = 545nm），避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。
【检测限】按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1 EU/ml和0.01EU/ml -0.1EU/ml两个区间( 反应时间T 1 和T 2 见出厂检验报告) 。
【试剂盒组成】细菌内毒素工作品，2支鲎试剂， 1.7ml/支，2支显色基质，1.7ml/支，2支偶氮化试剂1，10ml/支，2支偶氮化试剂2，10ml/支，2支偶氮化试剂3，10ml/支，2支HCl (反应终止剂)，50ml/瓶，1瓶细菌内毒素检查用水，50ml/瓶，2瓶【贮存】阴凉处, 最佳2-8℃,避光贮存。
【用法】1 .材料和设备1.1 试剂鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1 、偶氮化试剂2 、偶氮化试剂3、HC l ( 反应终止剂) 、细菌内毒素检查用水。
1.2器材旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架。
恒温水浴箱（37±1℃）、分光光度计。
注意：接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。
鲎试剂标准
鲎试剂标准本品为鲎科动物东方鲎（Tachyplecus tridentatus）的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品。
本品含能被微量细菌内毒素激活的凝固酶原（Proclotting enzyme），凝固蛋白原（Coagulagen）其灵敏度以细菌内毒标准品或工作标准品测定，应为标示量的50％－200％。
（一）性状本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水生生理盐水中易溶。
（二）鉴别1．取本品按装量加水溶解后，加茚三酮试液《中国药典1990年版》（二部附录162页）0.25ml，加热煮沸1－2分钟，显蓝色紫色。
2．取本品按装量加水溶解后，再加水适当稀释，照分光光度法《中国药典1990年版》（二部附录24页）测定，在270±1nm的波长处有单一吸收峰。
3．取本品按装量加入内毒检查用水溶解后，吸取0.1ml加入0.1ml细菌内毒素工作标准品或标准品50EU，混匀后，于37℃水浴中放置1小时，有凝胶形成。
（三）检查干燥失重：取本品约0.1在g ，在66℃减压干燥至恒得，减失重量不得过5％（中国药典1990年版二部附录55页）。
自身凝集：取本品4支，按装量加入配带的鲎试剂溶剂，溶解后，分别从每支取0.1ml，再分别加入配带的鲎试剂溶剂0.1ml，混匀后，于37±1℃水浴中放置4小时，不得形成凝胶，若有2管以上形成凝胶，判为不合格；若仅有1管形成凝胶，照同样方法，另取8支重复检查，8支均不得形成凝胶。
缓冲能力：任意取5％、10％葡萄糖注射液，氯化钠注射液无菌注射用水或注射用水适量，加稀盐酸调节pH使供试品溶液pH值为2.90-3.00，取此溶液适量与等量鲎试剂溶解液混匀，重复测定，pH值应为6.00-8.00。
（四）灵敏度测定预测：1．取细菌内毒素工作标准品1支，按说明溶解燕稀稀释成1→8等比系列稀释液。
2．取同一批鲎试剂若干支，分别按标示量加入配带的试剂溶剂制成鲎试剂溶液。
取10×75mm试管若干支，分别加入0.1ml鲎试剂溶液，加入内毒素稀释液0.1 ml ，每一稀释液最少作2管，同时作2管阴性对照。
鲎试剂标准
鲎试剂标准本品为鲎科动物东方鲎（Tachyplecus tridentatus）的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品。
本品含能被微量细菌内毒素激活的凝固酶原（Proclotting enzyme），凝固蛋白原（Coagulagen）其灵敏度以细菌内毒标准品或工作标准品测定，应为标示量的50％－200％。
（一）性状本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水生生理盐水中易溶。
（二）鉴别1．取本品按装量加水溶解后，加茚三酮试液《中国药典1990年版》（二部附录162页）0.25ml，加热煮沸1－2分钟，显蓝色紫色。
2．取本品按装量加水溶解后，再加水适当稀释，照分光光度法《中国药典1990年版》（二部附录24页）测定，在270±1nm的波长处有单一吸收峰。
3．取本品按装量加入内毒检查用水溶解后，吸取0.1ml加入0.1ml细菌内毒素工作标准品或标准品50EU，混匀后，于37℃水浴中放置1小时，有凝胶形成。
（三）检查干燥失重：取本品约0.1在g ，在66℃减压干燥至恒得，减失重量不得过5％（中国药典1990年版二部附录55页）。
自身凝集：取本品4支，按装量加入配带的鲎试剂溶剂，溶解后，分别从每支取0.1ml，再分别加入配带的鲎试剂溶剂0.1ml，混匀后，于37±1℃水浴中放置4小时，不得形成凝胶，若有2管以上形成凝胶，判为不合格；若仅有1管形成凝胶，照同样方法，另取8支重复检查，8支均不得形成凝胶。
缓冲能力：任意取5％、10％葡萄糖注射液，氯化钠注射液无菌注射用水或注射用水适量，加稀盐酸调节pH使供试品溶液pH值为2.90-3.00，取此溶液适量与等量鲎试剂溶解液混匀，重复测定，pH值应为6.00-8.00。
（四）灵敏度测定预测：1．取细菌内毒素工作标准品1支，按说明溶解燕稀稀释成1→8等比系列稀释液。
2．取同一批鲎试剂若干支，分别按标示量加入配带的试剂溶剂制成鲎试剂溶液。
取10×75mm试管若干支，分别加入0.1ml鲎试剂溶液，加入内毒素稀释液0.1 ml ，每一稀释液最少作2管，同时作2管阴性对照。
内毒素的检测-鲎实验
内毒素的检测-鲎实验
【实验原理】
鲎试验是检测内毒素的一种试验方法，试验灵敏，能检出微量（0.0001μg/ml）内毒素。
鲎是一种冷血动物，其血细胞的溶解产物与内毒素相遇即被凝固，机制尚不清楚，可能是溶解物中含有凝固蛋白原和一种高相对分子质量的凝固酶原，凝固酶原经内毒素激活转化成凝固酶，此酶使蛋白酶原变为凝固蛋白，再通过交联酶的作用，相互聚合形成纤维状凝胶。
【实验材料与仪器】
1.鲎试验试剂一套，待检测样品；
2.大肠杆菌内毒素（阳性对照）、无菌蒸馏水、待检液等；
3.吸管、小试管、试管架等。
【实验方法】
1.将鲎试剂按要求加入等量的不含有热原质的无菌蒸馏水，振摇2～3min使之溶解。
2.在试验管、阳性对照管及空白对照管中各加溶解物0.1ml。
3.试管中加待检液0.1ml，阳性对照管加大肠杆菌内毒素0.1ml，空白对照管加溶解水0.1ml，置37℃水浴1h后观察结果。
【实验结果】
1.阳性对照管出现凝固，空白对照管无变化时，试验结果正确，再观察待检测样品管。
2.试验管出现凝固为阳性，证明有内毒素存在，如未出现凝固，证
— 1 —
明无内毒素存在。
— 2 —。
鲎试剂细菌内毒素检查用水
3.供试品溶液的配制
注意事项： 1、供试品溶液的浓度如以 **mg/ml表示，此
**mg/ml是指供试品溶液中活性物质的浓度。 2 、样品初试时一般按照样品的估计百分含量
试验操作过程应防止微生物和内毒素的污染。
3.供试品溶液的配制
按各药品项下规定，取供试品，精密称定于称 量瓶(事先已除去外源性内毒素)中，按其效价 或含量，用各药品项下规定的稀释剂稀释至规 定浓度，充分摇匀使完全溶解，放置 5～10分 钟，再摇匀,放置备用。
3.供试品溶液的配制
一般要求供试品溶液的pH值在6.0～8.0的范围 内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试 品，需调节被测溶液的pH值，可以使用酸、 碱溶液或适宜的缓冲液调节pH值。酸或碱溶 液须用细菌内毒素检查用水在已经去除内毒素 的容器中配制，缓冲液必须经过验证不含内毒 素或干扰因子。
鲎试剂与分类
鲎试剂：鲎血液变形细胞裂解物冷冻干燥制备而成 鲎试剂的种类：
依据鲎的种类分：
美洲鲎试剂（LAL） 中国鲎试剂（TAL） 圆尾鲎试剂（CAL）
依据检查方法分：
凝胶法鲎试剂和定量法鲎试剂
依据内毒素和鲎试剂反应的专一程度分：
普通鲎试剂和特异性鲎试剂
凝胶法鲎试剂与内毒素的反应机理
鲎试验的发现
1956年Johns Hophins 大学动物学家 Frederik. Bang发现革兰阴性细菌的粗制品 能使鲎的血细胞凝聚。
1963～1964年 Jack.Levin和Bang对细菌引 起鲎血凝聚进行研究，用内毒素和鲎血细胞 溶解物证明鲎血凝聚机制是一种酶反应。
多位学者对鲎血细胞溶解物（LAL）进行研 究，阐释了凝聚机制
细菌内毒素的发现
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鲎试剂分类
按原料来源分
一种是由美洲鲎血液提取的称美洲鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate)，缩写为LAL，由美国生产;另一种是由东方鲎血液中提取的称东方鲎鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate)，缩写为TAL。
TAL与LAL有相同的功效。
按实验方法分
细菌内毒素检查法包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者又包括浊度法和显色基质法。
则鲎试剂可分为：凝胶法鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂。
凝胶法鲎试剂通过与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂则都是定量检测内毒素的。
按使用特点分
普通鲎试剂灵敏度0.5～0.125EU/ml，适用于仅需要检测内毒素限量的样品。
高灵敏度鲎试剂灵敏度0.06～0.015 EU/ml，适用于内毒素限量较低的样品细菌内毒素检查。
特异性鲎试剂灵敏度0.5～0.015EU/ml，适用于成分较为复杂，会对鲎试剂产生干扰的样品。
定量法鲎试剂最低检测限0.03～0.005 EU/ml，适用于需要对内毒素进行定量测定的样品。