醋酸纤维薄膜法血清蛋白电泳的影响因素分析与对策
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验影响因素分析及改进
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验影响因素分析及改进作者：于乐军刘晨光来源：《中国教育技术装备》2013年第12期摘要血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是高校生物化学实验必开实验项目之一，但实验影响因素较多。
针对影响实验的各种可能因素进行分析并提出相应改进对策，以期为提高本实验的成功率提供一些可供借鉴的经验。
关键词血清蛋白；醋酸纤维薄膜；实验仪器中图分类号：Q5-33 G642.423 文献标识码：B 文章编号：1671-489X（2013）12-0132-03血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维薄膜为支持物，利用血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等各种蛋白质的氨基酸组分、立体构象、相对分子质量和等电点不同，在电场中的移动速率不同，通过电泳分离的一种方法[1]。
因为其具有微量、快速、简便、分离清晰、对样品无吸附现象等优点，成为生物化学实验课必开的实验项目之一。
但在实际的操作中，影响实验的因素较多，除了电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度、电渗现象等因素外，实验课课前准备工作是否到位以及实验过程中学生的实验操作水平也直接影响实验结果的准确性和完整性。
笔者结合多年实验教学经验和他人研究工作，对整个实验操作过程中需要注意和改进的地方进行阐明，期望为提高实验的成功率提供一些可供借鉴的经验。
1 实验课课前准备1.1 实验材料1）血清。
本实验室一直以小牛血清代替人血清用于实验课程的教学，取得较好的实验效果。
且有研究证实[2]，牛血清代替人血清进行醋酸纤维素薄膜电泳，其结果与人血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳结果相近，实验稳定，重复性好。
小牛血清相较于宝贵的人血清，较易获得且储存稳定，组分纯净，没有其他杂质干扰，为实验结果的准确性提供了很好的保证，用于实验课教学完全可以达到预期的实验目的和要求。
实验用血清标样的质量问题是直接影响电泳结果的关键要素[3]。
用不新鲜或溶血血清标样进行电泳，容易造成电泳图谱区带不清晰，更有甚者会出现拖尾现象。
影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验结果的常见因素及相应对策
影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验结果的常见因素及相应对策贺智英【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2011(8)34【摘要】Cellulose acetate film electrophoresis is widely used in clinical examination and medical experimental teaching, but many factors affect the results. The analysis discussion is directed to the various factors in the experiment and concrete measures for improvement are put forward in order to obtain the ideal map for the analysis of the clinical examination and laboratory teaching.%醋酸纤维薄膜电泳被广泛应用于临床检验及医学实验教学中,但影响实验结果因素很多.针对实验过程中容易出现各种影响因素进行分析探讨并提出具体改进措施,以便得到理想的图谱,为临床检验及实验教学提供分析依据.【总页数】2页(P162-163)【作者】贺智英【作者单位】延安大学医学院,陕西延安,716000【正文语种】中文【中图分类】R446.11【相关文献】1.血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验影响因素分析及改进 [J], 于乐军;刘晨光2.影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳操作因素探讨 [J], 徐文俊3.血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的影响因素分析 [J], 程驰;赵兴秀4.醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的方法改进研究 [J], 刘选梅;陈江5.信息化教学《醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白》实验中的应用 [J], 潘晓瑜;朱俊访;韩晋辉;程宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素.
影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素:【 1】电泳介质 pH 的影响:对于蛋白质及氨基酸等两性物质,电泳介质的 pH 影响蛋白质的电泳情况即可决定蛋白质的带电量(Q 。
pI-pH<0,分子带正电荷,向负极泳动;pI-pH>0,分子到负电荷,向正极泳动;pI-pH=0,兼性离子,净电荷为零。
pH 偏离等电点越远,分子所带净电荷越多,其泳动速度越快。
所以,当┃ pI-pH ┃接近零时,分子处于等电状态,不移动,影响条带清晰度,从而影响实验分离效果。
【对应注意点】由于血清蛋白质的等电点多在 pH 4~6 之间,因此,分离血清蛋白常用 pH 8.6的巴比妥缓冲液或者三羟甲基氨基甲烷 (Tris 缓冲液。
【 2】缓冲溶液的离子强度:离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰;离子强度高,电泳速度慢,但区带分离较清晰。
离子强度过低,缓冲溶液的缓冲量小,不易维持 pH 的恒定;离子强度过高,则降低蛋白质的带电量使电泳速度减慢。
所以,当离子强度过低时,电泳速度虽快,但易引起分离区带不清晰; 当离子强度过高时,虽分离区带清晰,但点用速度过慢,所以要选择合适的离子强度。
【对应注意点】离子强度的选择要合适, 一般常用的离子强速为 0.02~0.2之间。
【 3】电场强度的影响:电场强度和电泳速度成正比关系。
电场强度一每厘米的电势差计算,也称电势梯度。
电场强度越高,则带电离子的移动速度越快。
随着电场强度的增高,电流强度增加,产热也增多。
产热的不良后果:①引起水的蒸发,改变溶液 pH 及离子强度②引起介质温度高,可使蛋白质变性。
另外,当电场强度过高时,电泳速度也会很快,分离区带将不清晰。
【对应注意点】电泳实验要控制在一定范围之内, 进行高压电泳时, 必须装备有效的冷却装置。
【 4】电渗:在电场中,由于多孔支持物吸附水中的离子使支持物表面相对带电,在电场作用下,溶液就像一定方向移动,此种现象称作电渗。
乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白失败原因
乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白失败原因乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白失败的原因可能有很多种，以下是一些可能的原因：
1. 样品不纯：如果血清样品中存在过多的杂质，可能会干扰电泳分离过程，导致蛋白分离效果不佳。
2. 操作不当：在进行电泳分离时，如果操作不当，例如加样量不准确、电泳槽中缓冲液不合适、电压过高或过低等，都可能导致蛋白分离效果不佳。
3. 薄膜质量问题：乙酸纤维素薄膜的质量也会影响电泳分离的效果。
如果薄膜的孔径过大或过小，或者存在其他质量问题，都可能导致蛋白分离效果不佳。
4. 血清蛋白变性：在电泳分离前，血清蛋白需要进行变性处理，如果变性处理不当，可能会导致蛋白分离效果不佳。
5. 电泳温度不适宜：电泳过程中的温度也会影响电泳分离的效果。
如果温度过高或过低，都可能导致蛋白分离效果不佳。
为了解决这些问题，可以采取以下措施：
1. 对血清样品进行预处理，去除杂质，提高样品纯度。
2. 严格按照操作规程进行电泳分离，确保加样量准确、电泳槽中缓冲液合适、电压控制在适宜范围内。
3. 选择质量好的乙酸纤维素薄膜，确保其孔径适宜且无质量问题。
4. 对血清蛋白进行正确的变性处理，使其能够更好地进行电泳分离。
5. 控制电泳温度在适宜范围内，确保电泳分离的效果。
实验二 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
3.点样：
点样前，取一张干净的滤纸，在距一边1.5cm处用铅 笔划一条平行线作为点样标志区。 点样时，用毛细管吸取血清，在盖玻片一端均匀涂抹， 使样品连续、均匀、适量，把盖玻片在薄膜毛面上轻而温 和地印一下（盖章法）。点样区距阴极端1.5cm（见图）。 此步是实验的关键。
1.5cm 6.5cm
点样区
10-15min后，调节电流强度0.5mA/cm膜宽度（8片薄膜则
为8mA），电泳时间50-80min。电泳后，调节旋钮使电流 为零，关闭电泳仪切断电源。
5.染色：
电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的 培养皿中浸泡5min，染色时可置于摇床，染色液用后回收 到原瓶。
6.漂洗：
将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次，直 至背景蓝色脱尽，条带清晰为止，取出薄膜放在滤纸上， 用吹风机冷风吹干或者自然晾干。
7.透明
将干燥的薄膜浸入透明甲液2min后转入乙液1min，取 出后贴于干净玻璃板上，中间不能有气泡，等待至薄膜透 明，如果透明太慢可用乙液淋洗一次。透明后冷风吹干燥， 置于自来水下冲洗，等薄膜湿润后用刀片从一角撬开并轻 轻取下，滤纸吸干水分后即可。如需长期保存可在液体石 蜡中浸润。
8.记录和分析实验结果
β－球蛋白
γ－球蛋白
5.12
6.85～7.3
90,000～150,000
156,000～950,000
～12
12～20
缓冲液pH=8.6
pI＜pH
血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动
醋酸纤维薄膜电泳
• 醋酸纤维薄膜作为支持介质
• 醋酸纤维薄膜：将纤维素的羟基乙酰化为醋酸酯， 溶于丙酮后制成有均一细密微孔的薄膜，其厚度 为0.1～0.15mm
血清醋酸纤维薄膜电泳实验常见的问题分析
血清醋酸纤维薄膜电泳实验常见的问题分析电泳是带电颗粒在电场的作用下，向着与带电颗粒电性相反的电极迁移的现象。
电泳法可用于分离、鉴定或提纯许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等，因此电泳法已成为开展生物化学和分子生物学研究工作的一种常规的不可缺少的工具。
电泳法(血清醋酸纤维薄膜电泳分离及测定)作为一项基本方法，已成为医学生生物化学实验教学常规开设的实验内容，该法操作简便，快速、价廉，样品用量少，实验技术成熟，分辨能力强，没有吸附现象、效果直观，便于保存等优点，但影响电泳图谱的因素较多，学生在实验中操作不当等，均可导致实验失败而得不到理想的电泳图谱。
因此，为了达到预期的实验效果、提高学生对电泳实验的动手能力，根据我校学生血清醋酸纤维薄膜电泳（cellulose acetate membrance electrophoresis，CAME）实验的实际情况，本文对CAME实验中电泳图谱常见的问题进行分析，以期为CAME实验教学提供参考。
1.出现五条以上的区带在CAME实验中，有的同学电泳实验结果看起来很“完美”，有“许多”区带——五条以上（实验结果应是五条区带，分别是清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白），为什么会有这种现象呢？原来出现的“许多”区带（五条以上）正是在点样中出现的，有的同学在点样过程中实施“二次”点样［１］。
CAME实验包含准备、点样、平衡、电泳、染色、漂洗、定量（该步骤没要求）等步骤，其中点样成功是获得清晰电泳图谱的关键。
在试验中，为了便于学生操作，我们应用玻片进行点样，有的同学没有擦干玻片两侧的血清；有的同学觉得点样量太少，又重复进行一次点样。
没擦干玻片两侧的血清，导致玻片两侧有两个点样面，后者进行的“二次”点样不可能在同一个位置，在进行电泳时，有的区带“跑”得快，有的“跑”得慢，区带与区带之间有的重叠，有的未重叠，因而分离出五条以上的区带（事实上，在某一区带并不是同一种蛋白质）；有的同学进行多次（两次以上）点样所得到的电泳图谱成片。
影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳操作因素探讨
影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳操作因素探讨人体血清蛋白的组成可分为:A—白蛋白,G—球蛋白(其中包括:α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白和γ球蛋白)。
正常人血清中各种蛋白质的含量有其正常值范围,血清中白蛋白与球蛋白的百分比A/G值大于1,而异常人血清的A/G值小于1。
定量分析时灵敏度高,同时还便于照相和保存等特点。
因此近年来在医学临床化验中得到广泛采用。
然而,在实际的应用中由于影响其操作的因素甚多,常常导致薄膜上各条蛋白质区带分离不清晰,或蛋白质分离不完全,直接影响对血清蛋白的定量分析结果的准确性。
本文针对这一问题结合其原理及主要操作环节进行分析。
2操作原理采用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法,叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
醋酸纤维素薄膜具有泡沫状的结构,有强的渗透性,力,其厚度仅为120微米。
人体血清经点样器点样于薄膜的一端,,点均低于pH=7,因此在pH=816所以将点样端置于电泳槽的负极端后,接通电源,,。
又由于各种血清蛋白的等电点不相同,在同一pH,同时各种蛋白质还存在分子量的大小差异,。
蛋白质分子量小,而所带电荷数多,则移动速度快;反之亦然。
可以对人体血清的各种蛋白质进行分离。
分离出的蛋白质经过氨基黑染色,漂洗后便可在薄膜上形成各条蛋白质的染色区域色带,再根据这些色带的颜色深浅,染色区域的大小,经比色后可以定性或定量测定各蛋白带的含量。
3影响因素分析311血液样品处理方式的影响电泳使用的血液样品必须确保新鲜,不能发生溶血反应。
从患者身上采集的血液样品应即时分离出血清,以避免出现溶血现象。
为了尽快分离出血清,常常采用的方法是迅速地将采集到的血液样品采取离心分离,同时分离出的血清应尽快进行电泳,以避免血清蛋白变性沉淀或被微生物污染。
312醋酸纤维薄膜的选择的影响醋酸纤维素薄膜具有泡沫状的结构,薄膜的质地好坏将直接影响血清蛋白在薄膜上的分离。
而薄膜在生产,加工、包装、运输、裁剪等过程中常常会导致薄膜表面受损,影响其质地均匀。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验一．实验原理1、电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。
在一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此，可使它们分离。
2、影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象。
3、影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点的大小和形状。
4、采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。
5、醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。
6、本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。
以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。
其中清蛋白的泳动速度最快，其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。
二．实验仪器和试剂✧器材醋酸纤维素薄膜（3×8cm），培养皿，载玻片，电泳仪，电泳槽，粗滤纸，镊子✧材料新鲜血清（未溶血）✧试剂1、巴比妥缓冲液（pH 8.6，离子强度0.06）：巴比妥1.66g, 巴比妥钠12.76g，加水至1000ml。
置4℃冰箱保存，备用。
（已配置）2、染色液：氨基黑10B 0.5g, 甲醇50ml, 冰醋酸10ml，蒸馏水40ml，混匀。
3、漂洗液：含95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，混匀。
4、NaOH溶液：称取NaOH 16g，定容至1000ml。
生物化学--实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳定量分析
实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳定量分析【目的要求】1.掌握血清蛋白电泳及其比色定量的基本原理、操作程序、技术要领和影响定量结果的主要因素及其排除2.熟悉血清蛋白醋纤膜电泳图谱的含义及临床意义。
3.了解血清蛋白醋纤膜电泳图谱的透明和扫描定量分析。
【实验原理】血清中各组分蛋白质的等电点均低于pH8.6，将其放在醋纤薄膜载体上，置于有pH8.6的电极缓冲液通过的电场中作电泳时都带负电荷、向正极移动。
由于它们等电点不同，荷电量不等，分子大小各异，在电场中移动速度不同而被彼此分离。
电泳膜经染色、漂洗后，便呈现出五条不连续的区带蛋白电泳图谱，从正极端起，依次为：清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白。
由于蛋白质含量与吸附的染料有一定正比关系，据此，剪下各条谱带，用碱液洗下蛋白质吸附的染料，进行比色分析，即可求出血清样品中各区带蛋白质的百分含量。
此外，也可对透明处理过的电泳图谱进行扫描分析，依据扫描曲线中各区带的面积与总面积之比，亦可求算出各区带蛋白质的百分含量。
【实验准备】一、器材1.电泳仪和醋酸纤维薄膜电泳槽2.醋酸纤维薄膜（8.0×2.0 cm）3.721分光光度计4.万用电表5.加样器、无损伤薄膜镊、铅笔、滤纸、染液缸、漂洗缸、载玻片等6.试管（10cc）及试管架二、试剂1.pH为8.6，离子强度0.06的巴比妥电极缓冲液称取巴比妥钠12.76g，巴比妥1.66g，加水溶解并定容至1000ml即成。
2.氨基黑10B染色液取氨基黑10B 0.5g溶于50ml甲醇中，再加入冰醋酸10ml，蒸馏水40ml。
3.漂洗液用95%乙醇45ml加冰醋酸5ml、蒸馏水50ml混匀，室温贮存。
4.0.4mol/L NaOH溶液5.透明液：A液：15ml冰醋酸+85ml 95%乙醇；B液：25 ml冰醋酸+75ml 95%乙醇。
【实验操作】一、电泳详细操作步骤及要求见Ⅰ-03常规电泳技术训练。
影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素.
影响血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验分离效果的因素:【 1】电泳介质 pH 的影响:对于蛋白质及氨基酸等两性物质,电泳介质的 pH 影响蛋白质的电泳情况即可决定蛋白质的带电量(Q 。
pI-pH<0,分子带正电荷,向负极泳动;pI-pH>0,分子到负电荷,向正极泳动;pI-pH=0,兼性离子,净电荷为零。
pH 偏离等电点越远,分子所带净电荷越多,其泳动速度越快。
所以,当┃ pI-pH ┃接近零时,分子处于等电状态,不移动,影响条带清晰度,从而影响实验分离效果。
【对应注意点】由于血清蛋白质的等电点多在 pH 4~6 之间,因此,分离血清蛋白常用 pH 8.6的巴比妥缓冲液或者三羟甲基氨基甲烷 (Tris 缓冲液。
【 2】缓冲溶液的离子强度:离子强度低,电泳速度快,分离区带不易清晰;离子强度高,电泳速度慢,但区带分离较清晰。
离子强度过低,缓冲溶液的缓冲量小,不易维持 pH 的恒定;离子强度过高,则降低蛋白质的带电量使电泳速度减慢。
所以,当离子强度过低时,电泳速度虽快,但易引起分离区带不清晰; 当离子强度过高时,虽分离区带清晰,但点用速度过慢,所以要选择合适的离子强度。
【对应注意点】离子强度的选择要合适, 一般常用的离子强速为 0.02~0.2之间。
【 3】电场强度的影响:电场强度和电泳速度成正比关系。
电场强度一每厘米的电势差计算,也称电势梯度。
电场强度越高,则带电离子的移动速度越快。
随着电场强度的增高,电流强度增加,产热也增多。
产热的不良后果:①引起水的蒸发,改变溶液 pH 及离子强度②引起介质温度高,可使蛋白质变性。
另外,当电场强度过高时,电泳速度也会很快,分离区带将不清晰。
【对应注意点】电泳实验要控制在一定范围之内, 进行高压电泳时, 必须装备有效的冷却装置。
【 4】电渗:在电场中,由于多孔支持物吸附水中的离子使支持物表面相对带电,在电场作用下,溶液就像一定方向移动,此种现象称作电渗。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的影响因素分析
Ｋｅ ｒ ｓ ａ ｅａｅ ｃ ｌ ｌｓ ｍｂ ａ ｅ ｅ ｅ ｔｏ ｈ ｒ ｓｓ ｓ ｒ ｍ ｐ ｏｅ ｎ ｉｆｕ ｎ ｉ ｇｆ ｃｏ ； ｙ ｗｏ ｄ ： ｃ ｔｔ ｅｌ ｏ ｅ ｍｅ ｒ ｎ ｌｃ ｒｐ ｏ ｅ ｉ ； ｅ ｕ ｒ ｔｉ ； ｎ ｅ ｃｎ ａ ｔｒ ｕ ｌ
师 ，主要 研 究 方 向 ： 分 子 免 疫 学 、动 物 传 染 病 和微 生 物 学 。
第 １ ０卷
第 ３期
程
驰 ，等 ：血 清 蛋 白醋 酸 纤 维 薄 膜 电 泳 的 影 响 因 素 分 析
・２ ・ ５
保证 分 离效果 。 １ ２ 电泳缓 冲液 ．
明显 的边 缘效 应 ，并 有拖 尾现 象 。如采用 改制 较窄 的订 书针 端面 或毛 细管 点样 ，效果 明显优 于载 玻片 端面 点样 ¨ 。在 实验 教 学 中 ，笔者 用 宽 度 打 磨 成
一
球蛋 白和 一球 蛋 白 。但 溶血 标本 则表 现 为清蛋 一球蛋 白和 ｐ一球 蛋 白含量 升 高且
白含量 下 降 ，
区带分 离不 清 ，随溶血 程度 的增加 ，血红 蛋 白浓度
达 到 ２５ ／ ．０ｇＬ时 ，仅 一球 蛋 白和 Ｂ一球蛋 白区带
重 叠 ，呈现 出 电泳 扫 描 图 中 的 仅 一Ｂ桥 ，严 重 溶
３ 电泳时的影响因素
３ １ 搭 桥 ．
薄 膜在 滤纸 桥上 的位 置歪斜 会 引起 区带歪斜 和 边 流 。 当薄 膜 两 端 与 盐 桥 接 触 不 紧密 ，存 在 小 缝 隙 ，薄 膜不 同位 置 电 阻 不 一 致 而 导 致 电 流 强 度 不 同 ，出现 同一 区带 的不 同位点 的迁移 速度 差异 而造
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验常见的问题及对策
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验常见的问题及对策血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的生物化学实验方法，通过此实验可以对血清中的蛋白质进行分离和鉴定。
然而，在进行这一实验时，常常会遇到一些问题，例如电泳过程中出现异常带、电泳图不清晰等。
这些问题的出现会影响实验结果的准确性和可靠性，因此在进行血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验时，必须要注意相关问题及对策。
一、电泳图不清晰在进行血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验时，有时候会出现电泳图不清晰的情况。
这可能是由于电泳电压设置不当、电泳时间过长或电泳缓冲液配制不正确等原因造成的。
针对这一问题，我们可以采取以下对策：1. 检查电泳电压设置是否合适，过高或过低的电压都会导致电泳图不清晰，应该合理调整。
2. 根据实验要求，适当控制电泳时间，避免过长的电泳时间导致电泳图不清晰。
3. 检查电泳缓冲液的配制是否正确，保证缓冲液的pH值和离子浓度符合实验要求。
二、异常带出现在血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验中，有时候会出现异常带，这可能是由于样品加载不均匀、电泳条件设置不当或电泳系统不稳定等原因导致的。
针对这一问题，我们可以采取以下对策：1. 在加载样品时，一定要保证加载均匀，避免出现异常带的情况。
2. 检查电泳条件，包括温度、湿度等环境因素，保证电泳条件的稳定性。
3. 定期检查电泳系统的工作状态，确保系统处于良好工作状态。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验中常见的问题及对策是电泳图不清晰和异常带出现。
通过采取相应的对策，可以有效解决这些问题，保证实验的准确性和可靠性。
在进行实验时，我们需要注意实验条件的控制，确保实验的稳定性和可重复性。
只有这样，才能得到准确可靠的实验结果，为后续的研究工作提供可靠的数据支持。
对于血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验常见问题及对策的个人观点和理解，我认为在实验过程中，需要对实验条件进行严格控制，包括但不限于电泳电压、电泳时间、缓冲液配制和样品加载等，以确保实验的准确性和可靠性。
影响血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验结果的常见因素及相应对策
１３缓 冲 液的 因素 ．
实 验结 果产 生 影响 而得 不 到理 想 的 图谱 ， 且 还 造成 很 大浪 并 费 。 者结 合 多年 的实 验教 学经 验 对影 响本 实验 结果 的常见 笔 因素进 行分析探讨 ， 提出了相应 的解 决对策 。现 报道 如下 ： 并
【 ｓｒｃ】 ｅｌｌｓ ｃｔｔ ｆｍ ｅｅｔ ｐ ｏｅｉ ｉ ｗ ｄｌ ｓｄｉ ｌ ｉａ ｅａ ｎｔ ｎａ ｄｍ ｄｃｌ ｘ ｅｉ ｎａ ｔａｈｎ ， Ａｂｔａ ｔ Ｃ ｌ ｏｅａｅａｅｉ ｌｃｒ ｈｒｓ ｉｅｙｕｅ ｃｉ ｃｌ ｘｍｉａｉ ｎ ｅ ｉａ ｐ ｒ ｕ ｌ ｏ ｓｓ ｎ ｎ ｏ ｅ ｍｅ ｔ ｅｃ ｉｇ ｌ
增加嘲， 因此 应采用 清 亮无 溶血 的血 清标 本 。 １． ． ３点样 标 本 的替 代 有 文 献报 道 。 ２ 在实 验 教学 中用 鸡 蛋 白 （ 鸡蛋 清： 缓冲 液： ：） 替血 清作 为点样 样 品 ， 样量 约 ３仙 ， ｌ 代 ９ 加 ｌ 可取 得 卵 转铁 蛋 白 、 白蛋 白、 菌 酶 和 卵黏 蛋 白 ４条 电泳 卵 溶 区带圈 用 鸡蛋 白作 为实 验材 料 ， 取材 方便 ， 。 既 又能 节 约成本 。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
电泳：带电粒子在电场中Βιβλιοθήκη 其与本身电荷相反电极移动现象。
ν=
V d
q ·6πr
η ν-带电粒子移动速度；q-电荷量；
r-球形分子半径； η-溶液黏度。
V d
-电场强度
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
第1页
不一样分子所带电荷种类及数量不一样，在 相同电场强度及溶液（η）中经过一定时间必定 会泳动到不一样位置。所以，含有各种成份混合 物若进行电泳，则各成份在电场中将被逐一分开， 并集中到特有位置上面形成紧密区带，使混合物 成份到达分离目标。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
第7页
二、试验操作
1、仪器和薄膜准备
2、点样
- 点样区
+
1.5cm
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
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3、电泳
将点好样薄膜点样面朝下置于电泳槽上, 使点 样端置于负极,而另一 端置于正极。平衡10分钟， 打开电泳仪开关，调整电流为4-6mA，电压为100120V,电泳40-60分钟。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
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醋酸纤维薄膜电泳是以醋酸纤维薄膜为支持物 电泳。
醋酸纤维薄膜含有均一泡末状结构，渗透性强， 用它作为支持物进行电泳含有简单、快速、定量轻 易、样品量少、对样品无吸附和拖尾现象、电泳区 带清楚等优点 。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
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蛋白质是两性电解质，在不一样pH值缓冲溶液 中带有不一样电荷。当pH<pI时，蛋白质为正离子， 在电场中向负极移动；当pH>pI时，蛋白质为负离子， 在电场中向正极移动；当pH= pI时，蛋白质既不向负 极移动也不向正极移动。
4、染色：3-8分钟
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
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论 著醋酸纤维薄膜法血清蛋白电泳的影响因素分析与对策翁闪凡1,庄锡伟2(1.广东省佛山科学技术学院医学院 528000;2.广东省佛山市禅城区中心医院 528000) 【摘要】 目的 对醋酸纤维薄膜法(CA)血清蛋白电泳实验过程中各种影响因素进行分析,并采取相应措施,确保电泳结果达到预期效果。
方法 采用CA进行检测。
结果 对实验过程的影响因素进行分析并采取相应改进措施后,实验结果图谱清晰可见。
结论 通过对实验各种影响因素进行处理,可以使实验效果更佳。
【关键词】 血清蛋白; 电泳; 影响因素; 醋酸纤维薄膜法中图分类号:R446.1文献标志码:A文章编号:167229455(2010)0620502202Analysis of the influence factors in the detection of serum protein with cellulose acetate membrane electrophoresis W EN G S han2f an1,Z HUA N G X i2wei2.1.Medical I nstitute of Foshan S cience and Technolog y College,Guang dong528000,China;2.【Abstract】 Objective This article is to analyse the various factors in the detection of serum protein by meansof cellulose acetate membrane electrophoresis experiment,and take appropriate measures to ensure that the results of electrophoresis can be achieved successf ully.Methods Cellulose acetate film electrophoresis method is adopted.R e2sults After the analysis of the factors affecting the process and taking the appropriate measures for improvement,the experimental results map is clearly visible.Conclusion Better results could be obtained through dealing with the vari2ous factors in the experiment.【K ey w ords】 serum protein; electrophoresis; influencing factors; cellulose acetate membrane method CA法血清蛋白电泳是生物化学及生物化学检验实验教学的主要内容之一,也是医院临床检验科开展的重要诊断技术项目。
在医学院校开展该教学实验课过程中,由于学生对实验操作不熟练,最终学生做出的电泳图谱效果总是不理想。
近年来,由于药品与介质材料质量欠佳的问题,临床检验科开展此项目时,没有在试剂配制和操作方面进行及时、适当地改进,因此常常导致电泳结果准确性降低,影响检验报告的真实性。
作者在多年的实验教学中发现影响本操作结果的因素很多,除了生物化学教科书[1]中列出的及文献已报道的外[2,3],还有因材料质量发生改变,以及从试剂配制到图谱清洗过程中的一些细节处理不当也会直接影响电泳的结果。
作者在多年的教学实践中进行探索,采取了一系列措施来消除影响电泳效果的各种因素,从而获得了良好的电泳效果,现报道如下。
1 影响因素分析与对策1.1 实验材料1.1.1 支持物介质 影响因素:作者多年来一直采用浙江台州路桥四甲生化塑料厂出产的,包装为每盒50张的醋酸纤维素薄膜作实验材料支持物介质。
近年来发现该厂的醋酸纤维薄膜比以前生产的要薄,柔韧性降低,每盒中有出现薄膜厚度不一、薄膜粗面细孔不均匀、脆性不一的现象,薄膜开封后不容易保存、容易出现黄斑点并伴随脆性加大。
由于薄膜上述因素的影响,导致实验时薄膜在浸泡环节中容易皱缩、若薄膜光滑面向下浸泡还容易卷起;用镊子、玻棒等器材压薄膜使之浸于液面时偶尔会出现被压点不吸液现象;待薄膜点样前用滤纸吸去多余液体后薄膜被压点出现白色斑点。
这样的薄膜在电泳时会出现区带不均匀、甚至在白色斑点处蛋白质不泳动而影响区带图谱的效果。
针对上述问题,作者采取改变薄膜点样前准备工作措施来应对。
将8cm×12cm规格的醋酸纤维素薄膜裁为8cm×3 cm规格大小,将裁好的纤维素膜条粗面向下逐条平稳放入巴比妥缓冲应用液中,让薄膜自然湿润沉下液面(或用手轻摇装液外盒以加速膜条的沉降率)。
纤维素薄膜浸润操作的注意事项:不能用镊子、玻棒等器材按压纤维素薄膜沉下液面;不能同时将多条纤维素薄膜一起放进缓冲液盒;不能将纤维素薄膜光滑面向下放入缓冲液中。
经这一环节的细微处理后浸润效果显著,继续进行实验,结果电泳图谱各条蛋白质区带均匀清晰,效果理想。
1.1.2 染料氨基黑10B (1)影响因素:近年来市面上购买的染料氨基黑10B质量不能保证,杂质比较多,导致染料在配制时不容易完全溶解,甚至会有少量颗粒不溶解沉在烧杯底部。
实验证明新鲜配制的染色液染色效果差,染色漂洗后过了一个晚上蛋白质膜条就会褪色。
(2)对策:针对上述情况,在染料配制过程中,称取比生化教科书上的配方多30%量的氨基黑10B,用研钵研磨10～20min使之成细粉末后,按生化教科书上配法加入其他试药溶解。
用玻棒搅拌溶解后贮存在棕色瓶中,放阳光下晒2～3h后室温存放。
如条件允许,染色液最好不用新鲜配制,配好后贮存半年再用染色效果会更佳。
实验染色时,染色时间比原来长一些,保证不少于10min。
1.1.3 缓冲液 (1)影响因素:电泳试剂p H值为8.6、离子强度0.06的巴比妥2巴比妥钠缓冲应用液的配制比较麻烦,因为巴比妥药粉在常温下不溶解,需用电炉加热煮沸蒸馏水才能溶解。
溶液配好后还需冷却才能使用。
(2)对策:作者在缓冲液的配制方法上进行了改进,先配成离子强度高的贮存液,待每次实验时再稀释成应用液,这样可以省去每次配巴比妥缓冲液的时间。
配法如下:p H值为8.6巴比妥缓冲液(离子强度0.1)贮存液称巴比妥18.4g,巴比妥钠103g,加入2L蒸馏水,用电炉加热煮沸,待溶液溶解后加入蒸馏水至5L。
加入麝香草酚防腐。
p H8.6巴比妥缓冲液(离子强度0.06)应用液:取上述巴比妥缓冲液贮存液按C1V1=C2V2公式加蒸馏水稀释即可。
1.1.5 漂洗液 (1)影响因素:漂洗液因成分冰乙酸容易挥发,放置时间过长会导致溶液浓度降低,漂洗效果明显下降。
(2)对策:漂洗液必须新鲜配制,最好临用前配制,注意不能长时间敞开在空气中;如需过夜,必须要用试剂瓶包装、封盖、防止挥发。
1.1.6 实验标本血清 (1)影响因素:作者曾经做过溶血标本与正常标本蛋白电泳图谱比较分析的研究,发现健康者溶血标本电泳图谱出现6条区带,即在健康者合格标本的电泳图谱5条区带的α2与β之间多出了一条粗而染色均匀的区带。
这条区带是否为溶血因素造成的血红蛋白区带还有待进一步的研究。
但这条区带的出现确实会影响患者标本结果的准确性分析。
作者还采用残留血清与新鲜血清作电泳图谱的比较。
发现两者在同一条件下,残留血清蛋白质电泳图谱区带不清晰,比较离散、甚至有拖尾现象;新鲜血清蛋白质电泳图谱区带清晰,均匀紧密、没有拖尾现象。
因此,实验标本血清的质量问题是直接影响电泳结果的关键要素。
(2)对策:实验标本采用新鲜合格的血清标本,不能用溶血血清标本或残留血清标本进行实验。
如新采取血清标本不是马上用,则必须放4℃冰箱贮存保鲜,但时间最多不能超过1个星期。
1.2 实验操作1.2.1 点样与平衡 (1)影响因素:点样量与点样技术是本实验项目成败的关键因素。
点样量太多会使电泳区带分离不开,点样量太少会使各种蛋白质区带太细,染色后各区带颜色较淡,不好辨认。
总的来说点样量应坚持宜少不宜多的原则,李丽的研究结果加样量控制在1.0μL/cm最佳[425]。
点样时不注意技巧很容易使电泳失败。
这也是学生做本实验失败的主要原因。
另外,将点样后的薄膜置于电泳槽架上不通电称平衡(或通电前准备),平衡操作时必须注意细节,否则也会影响电泳效果。
(2)对策:点样技巧如下①先用滤纸轻轻吸去浸透的醋酸纤维素薄膜表面多余的液体。
学生操作时要强调不能用力按滤纸,避免把薄膜的水份吸得太干而影响电泳效果。
②然后辨别醋酸纤维素膜条的光滑面与粗糙面,将粗面向上平放在滤纸上,在薄膜粗面距一端2cm处用铅笔画一线作点样线,并在点样线右下角写上样品标记,作好点样前准备工作。
③最后用点样器(载玻片的横侧面)均匀蘸取血清后,(点样器的持法必须与点样时的动作一致,保持垂直拿取而不能晃动歪斜,避免血清滑动不均匀而影响点样效果。
)点样时垂直将血清点在薄膜的粗面点样线上,使血清全部渗入膜内后,用两手指按住薄膜两端再提起点样器,以避免薄膜与点样器一起被提起而影响点样后血清的位置。
平衡操作的几点注意事项:(1)将点样后的薄膜迅速置于电泳槽架上,点样端置于负极侧,膜条粗面向下,点样线的血清不能粘住纱布,避免电泳时出现电渗现象影响电泳结果。
(2)膜条与纱布需贴紧,膜条须充分展开,每条薄膜之间要留有空隙。
(3)平衡时间必须充足(要使每条薄膜完全湿润,没有干燥的白色现象)。
1.2.2 电泳时间、电压大小及稳定性 (1)影响因素:电泳通电过程中必须密切监视电泳仪电压的稳定性,如果电泳仪电压不稳定会影响电泳效果,同时电压不同所要求的电泳时间也不同。
电泳时间过30min后要注意观察血清蛋白质泳动的情况,不能让清蛋白泳出薄膜外,否则将功亏一篑。
(2)对策:据董彩霞的研究报道:最佳电压与时间为110V、60min[2]。
作者根据自己在南方广东地区多年的实践和研究经验总结得出:电泳时电压大小、时间长短并不是一成不变的,它们与室内温度有密切关系。
夏天室内温度高用110V、40min;冬天室内温度低用120V、50min即可。
如果电泳时间超过60min,清蛋白会泳出醋酸纤维薄膜。
2 方 法本实验采用醋酸纤维素薄膜法[1]。
3 结 果通过对本实验的上述影响因素进行分析与采取相应的对策措施,结果电泳图谱区带均匀清晰率达90%以上,实验成功率相较以前明显提高,实验结果理想。
CA法血清蛋白电泳是检验医学学生实验教学的必修内容,也是临床检验开展常规诊断项目。