猪源产细菌素肠球菌的分离鉴定

其产 生 菌一起在 平衡肠 道 茵群 中具有 重要 意义 。
关键 词 ： 肠 球 菌 ；细菌素 ；生理 生化 ； １ ６ Ｓ ｒ Ｄ ＮＡ 序 列分析 ； 分 离鉴 定
中图分类号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６ １ １ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章 编号 ： １ ０ ０ ７ — ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ６ ０ ０ ２ ６ ０ ７
性 的菌株 采 用形 态学和生理 生化 特征观 察 并结合 １ ６ Ｓ ｒ Ｄ ＮＡ 序 列 分 析 、 遗传进 化树 比较 ， 结 果显 示 ， 分 离 菌
为革 兰 阳性 ， 圆形或 卵圆形 的球 菌 ， 生理 生化及 糖发 酵符合 肠球 菌属 的特征 ； １ ６ Ｓ ｒ Ｄ ＮＡ 序列 与 Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ中
一
ｌ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材 料
１ ． １ ． １ 菌株 、 培养基及试剂 大肠 埃 希 菌 （ Ｅ． ｃ ｏ ｌ ｉ
ｋ ８ ８ ） 、 金黄 色葡萄球菌 （ Ｓ ｔ ａ ｐ ｈ ｙ ｌ ｏ ｃ ｃ ｏ ｃ ｕ ｓ ａ ｇ ｌ Ｙ ｔ ｄ ｌ Ａ Ｓ ） 由 北 京农学 院 动物 科 学 技 术学 院 微 生 物 实验 室 提 供 ，
标 准菌 株粪肠 球菌 Ｂ 和 屎 肠 球 菌 Ｂ 由 中科 院 微 生
种 发 酵糖产 生 大 量乳 酸 的 兼 性厌 氧 乳 酸 菌 ， 与 厌
氧、 培养保 存条 件苛 刻的 双歧杆 菌等 乳 酸菌 相 比， 更
适 合 于生产 和应 用 。作 为 乳 酸 菌 ， 肠 球 菌参 与 了食
进行 筛选 ， 获得 对 大肠 埃希 菌及金 黄 色葡萄球 菌均 有抑制作 用的 １ ２株 细 菌 ， 在排 除酸 、 过 氧化 氢等 因素作 用 后仍 具有较 强抑 茵 活性 ， 表 明发 酵液 中还 有其 他抑 茵活性 物质 的存在 ， 用蛋 白酶 处理上 清液后 抑 茵效价 明显 下降， 表 明这种 抑 菌物 质具 有蛋 白质性质 ， 能够被 蛋 白酶 降 解 ， 初 步确 定 为一 种 细 菌素 类物 质 。具有 抑 菌活
菌 具 有 抑 制 活 性 ］ 。 本 研 究 从 北 京 优 良地 方 品 种 北 京 黑 猪 胃肠 道 分
缘 的细菌 ， 细菌 素 产 生菌 的免 疫 蛋 白对 其 细 菌 素 有
自身抗 性 ｌ Ｉ Ｊ ］ 。乳 酸链球 菌 肽 Ｎｉ ｓ ｉ ｎ是 世界 上 公 认 安
离筛 选对 大肠埃 希菌 和金黄 色葡 萄球 菌具 有抑 菌 活 性 的细菌 素产 生 菌 ， 采 用微 生 物 学 和 分子 生 物 学 方 法综 合鉴 定分 离 菌株 ， 以期 获 得 可 应用 动 物 生 产 和 活 菌生物 制剂 的优 良菌种 ， 为 产 细 菌 素 菌株 在 饲 料 添 加剂 中的应 用提供 理论 和实 践依据 。
全 的防腐 剂 ， 已有 ５ ２个 国家 和地 区使 用 Ｎｉ ｓ ｉ ｎ作 为 食 品防腐剂 ， Ｎｉ ｓ ｉ ｎ抑 菌谱 窄 ， 仅 对革 兰 阳性 菌 有 抑
菌作用 ， 能抑制链 球菌 属 、 葡 萄球 菌 属 、 小 球 菌属 、 梭 菌属 和 芽胞杆菌 属 的细菌 等 ］ 。Ｎｉ ｓ ｉ ｎ的商 品化 促 进 了其 他种 类细 菌素 的研究 及其 在食 品 防腐 剂之 外 领域 的开 发和应 用 。肠球 菌作为 动 物肠 道 的优势 菌 群， 具 有 耐胆盐 、 耐 酸 及 耐 高 温 等微 生 物 学 特 征 ， 是
（ １ ． 北 京 农 学 院动 物 科 学 技 术 学 院 ， 北京 １ ０ ２ ２ ０ ６ ； ２ ． 兽医学（ 中 医药 ） 北 京市 重 点 实 验 室 ， 北京 １ ０ ２ ２ ０ ６ ；
３ ． 农业应用新技术北京市重点实验室 ， 北京 １ ０ ２ ２ ０ ６ ）
摘 要 ： 为 了分 离鉴 定 产 细 菌 素 类 乳 酸 茵 ， 采 用双层 琼脂扩散 法 ， 对 从 健 康 猪 胃肠 道 分 离到 的 ５ ６株 细 菌
动 物 医学进展 。 ２ ０ １ ３ ， ３ ４ （ ６ ） ： ２ ６ — ３ ２
Ｐｒ ｏｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｎ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａｒ ｙ Ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
猪 源产 细 菌 素肠 球 菌 的分 离鉴 定
瑞 。 ， 崔德 凤 。
屎肠球 菌 Ｆ Ｊ ７ ４ ９ ７ ４ ０ 、 粪 肠球 菌 Ｆ Ｊ ７ ４ ９ ３ ７ ８同 源 性 为 ９ ９ ． ３ ～１ Ｏ ０ 。综合 判 定 Ｅ ２ 、 Ｅ ３ 、 Ｅ ４ 、 Ｅ ５ 、 Ｅ ６ 、 Ｅ ７ 、 Ｅ ８ 、
Ｅ ｌ ０和 Ｅ １ １ ９株 分 离茵为 粪肠球 茵 ， Ｅ １ 、 Ｅ ９和 Ｅ １ ２ ３株 分 离茵为屎 肠球 菌 。细菌素作 为潜在 的抑 茵物 质 ， 与
菌 素的研究 仍 较少 ， 更 未 见 替代 抗 生素 作 为 饲 料 添 加剂 的报道 。近 年来 细菌素 已被用 于 病原 菌 的预 防
和 治疗等 研究 。Ｍｏ ｒ ｏ ｖ ｓ ｋ ｙ Ｍ 等 从 犊 牛 和羔 羊 分 离 的葡萄球 菌产 生 的细菌素 对瘤 胃球 菌 和大 肠埃 希
品发酵 ， 如乳 酪 、 香肠 ， 同样 也 应 用 于 青贮 饲 料 的发 酵， 由于肠球 菌产 生 细 菌 素 的 多样 性 和食 品保 鲜 及
我 国是 一个 畜牧 业 大 国 ， 也是 动物 产 品消 费 大 国 。动 物性食 品抗 生素 超标 而导致 的出 口损失 以及 公共卫 生安 全 问题引起 了人们 的广泛 关 注 。细菌 素 是某 些细菌 核糖 体 合 成 的初 级 代 谢 产 物 ， 是 一 类 具
有 抑 菌 活 性 的 多 肽 或 蛋 白质 ， 抑 菌 范 围 不 局 限 于 近