生化实验七综合性实验之三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳(ppt)
实验三,血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
四、试剂
• 1． 硼酸缓冲液（PH8.6,离子强度0.075mol/L） • 硼酸5.6025g，四硼酸纳5.6099g，氯化钠1.3163g，加 蒸馏水至1000mL • 2．染色液 300mL 含氨基黑10B 0．25 g，甲醇50 mL，冰醋酸10 mL,水 40mL(可重复使用)。 • 3．漂洗液 2000mL 含甲醇或乙醇45 mL、冰醋酸5 mL、水50 mL。 • 4.透明液(现用现配） 无水乙醇:冰醋酸＝7:3
醋酸纤维薄膜电泳是近几年来推广的一种新技 术。它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样 品无拖尾和吸附现象等优点。目前已广泛应用于 血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球 蛋白、同工酶的分离及测定方面。
三、器材
1、醋酸纤维薄膜(2×8 cm) 2、常压电泳仪 3、 点样器(市售或自制) 4、培养皿(染色及漂洗用) 5 粗滤纸 6、玻璃板 7、竹镊
•
在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料 量成正比，故可将各蛋白质区带剪下，分别用 0.4mol/LNaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定 其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密 度计扫描，测定其相对含量。 • 本实验采用的醋酸纤维薄膜电泳，是以醋 酸纤维薄膜为支持物的电泳方法。醋酸纤维素是 纤维素的羟基乙酰化形成的纤维醋酸酯。将它溶 于有机溶剂 (如：丙酮、氯仿、乙酸乙酯等)后， 涂成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维 薄膜。该膜具有均一的泡沫状结构，有强渗透性、 其厚度约为120μm。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、 γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体 构象、相对分子质量、等电点及形状不同（见下 表），在电场中移动速度不同。由表可知，血清 中5种蛋白质的等电点大部分低于pH7.0所以在 缓冲液（pH值8.6）中，它们都电离成负离子， 在电场中向阳极移动。
实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳要点
实验三血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳一、目的：1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法2、学会常用电泳的使用方法3、了解用醋酸纤维薄膜作支持物的优点及使用范围二、原理：由于各种血清蛋白质的等电点不同，因此在pH8.6的缓冲液中，各种血清蛋白质所带电荷量不同，同时由于它们的分子量也不同，造成电泳迁移率不同，所以在醋酸纤维薄膜上，电泳后，可将各种血清蛋白质分离开。
三、器材：醋酸纤维薄膜（2×8cm）、电泳仪、点样器（盖玻片）、培养皿、粗滤纸、玻璃板（载玻片）、镊子等。
四、试剂：巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07。
巴比妥钠12.7g、巴比妥1.66g于蒸馏水中加热溶解后再加水至1000ml）氨基黑染色液（氯基黑10B0.5g、甲醇50ml、冰醋酸10ml、蒸馏水10ml）漂洗液（95％乙醇45ml、冰醋酸5ml、蒸馏水50ml）血清五、操作：1、识别标记：将薄膜切成2.5×8cm的小片。
在薄膜无光泽面(正面)的一端约2cm处用铅笔划一线，以标明点样位置。
2、浸泡：用镊子将薄膜无光泽面向下，漂浮于巴比妥缓冲液面上(缓冲液盛于培养皿中)，使膜条自然浸湿下沉。
大约10min。
3、点样：取出薄膜，用滤纸将表面的明水吸干，然后平铺在载玻片上（无光泽面朝上），将盖玻片先在小培养皿中的血清中沾一下，再在距膜条一端2cm处轻轻地水平落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
4、电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上（先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲溶液内。
用缓冲溶液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸桥）。
点样端靠近负极，盖严电泳室，160V，45min。
5、染色：将膜条取出，放在显色液中显色10min。
6、漂洗：将膜条放在漂洗液中漂洗数次，至底色脱净为止，可得到清晰电泳图谱。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常用的蛋白质分析技术，用于分离和鉴定血清中的蛋白质。
该技术基于蛋白质在醋酸纤维素薄膜中的电泳迁移率不同，通过电泳移动距离的差异来区分不同的蛋白质。
在实验中，首先将血清样品加入醋酸纤维素薄膜上，然后通过电泳使蛋白质在薄膜上迁移。
在电泳过程中，蛋白质会根据电荷性质和分子大小而发生迁移。
随着电泳时间的增加，蛋白质会在薄膜上形成不同的带状图案。
最后，对薄膜进行染色或银染等处理，可以观察到蛋白质带的数量和位置，从而识别和定量不同的蛋白质。
讨论血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果时，需要注意样品的质量和纯度对实验结果的影响。
同时，对蛋白质带的数量和位置进行定量分析时，需要使用专业的图像分析软件。
此外，该技术也可以与其他蛋白质分析技术如质谱联用，提高分析的准确性和灵敏度。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清醋酸纤维素薄膜电泳一、目的要求1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及操作过程。
2.了解猪血清蛋白质的各种成分。
3.熟悉猪血清中各种蛋白质相对含量的测定原理和方法。
4.熟悉分光光度计的工作原理及使用方法。
二、实验原理1.电泳的基本原理电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。
许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。
电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
电泳过程必须在一种支持介质中进行。
自由界面电泳没有固定支持介质，所以扩散和对流都比较强，影响分离效果。
于是出现了固定支持介质的电泳，样品在固定的介质中进行电泳过程，减少了扩散和对流等干扰作用。
最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜。
由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变，进而影响其电泳迁移的速度，所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行，缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。
2.醋酸纤维素薄膜醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜,待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。
本实验采用醋酸纤维素薄膜作为介质。
3.蛋白质蛋白质是由氨基酸组成的，其分子中除两端的游离氨基和羧基外，侧链中尚有一些解离基，作为带电颗粒它可以在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷。
蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量，又受所处溶液的pH影响。
当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
续：试剂
漂洗液：甲醇45ml、冰醋酸5ml和蒸馏 水50ml，混匀。适用于氨基黑10B染 色的漂洗。 透明液：称取柠檬酸21g和N-甲基-2-吡 咯烷酮150g，以蒸馏水溶解，并稀释 至50ml。亦可选用十氢萘或液体石蜡 透明 （注明各试剂的作用)
实验操作
1. 准备：将巴比妥缓冲液加入电泳槽的电极室内， 是正负极室的吖液面等高，电泳支架宽度正好 适合醋纤薄膜的长度，用四层纱布或滤纸做盐 桥，一端浸入缓冲液中，一端搭在支架上。 2. 浸膜：先于膜条无光泽面距一端1.5cm处用铅笔 轻划一直线（点样线），再将薄膜无光泽面向下 浸泡于巴比妥缓冲液中，浸透为止（约 10~20min）。当膜条无可见的白斑或点状的不 透明区时，取出，将薄膜无光泽面向上，平放 于干净滤纸，薄膜上再放一张干净滤纸轻轻吸 去多余的缓冲液。
实验原理
• —PH＜PI时，蛋白质带正电荷，移向负极 – PH＝PI时，蛋白质不带电荷 – PH＞PI时，蛋白质带负电荷，移向正极 • 迁移率：是指单位电场强度是离子运动的 速度，也称电泳度。 • 醋酸纤维素薄膜电泳：以醋酸纤维素薄膜 为支持物的电泳。醋酸纤维素是纤维素的 醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而成。 将醋酸纤维素溶于丙酮等有机溶液中，可 涂布形成均一细密的微孔薄膜，厚度约 0.1~0.15mm。
临床意义
• 血清蛋白通过醋酸纤维素薄膜电泳，通常 可以分离得到（Alb）、α 、β 、γ-球蛋白。 正常人血清中各种蛋白组分的浓度差别较 大，所以在许多病理情况系会发生细微的 变化，往往没有特意的临床诊断价值。分 析各种疾病的电泳分析结果，可看出显著 变化。
• 血浆蛋白是血浆中最主要的固体成分, 含量为60～80g/L ,绝大部分由肝脏合 成,仅γ球蛋白由浆细胞合成正常值: – 白蛋白57%—72% –α1球蛋白2%—5% –α2球蛋白4%—9% –β球蛋白6.5%—12% –γ球蛋白12%—20%
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳课件
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 1.5cm
9
3. 搭桥：首先将双层纱布铺好，分别放置于电泳槽两端， 其下端要浸入缓冲液中。然后，将点好样的薄膜光面 向上平直地贴于电泳槽的支架上。注意桥的方向，点 样的一端位于负极，点样线不能搭在滤纸上。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
3
影响带电粒子电泳速率的因素： 1. 带电量 F=qE 2. 分子量 3. 形状
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
4
2.电泳分离蛋白质的原理
蛋白质的两性解离：
pH小于pI
pI
+OH-
+H-
pH大于pI
+OH+H-
等电点 —— 即 pI ( isoelectric point）
当pH距离pI越远时，所带电量越多。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
5
血清蛋白质的等电点为4.8~7.5，均低于8.6，因此 电泳时常采用pH8.6的缓冲液。此时，蛋白质解离带 负电荷，在电场中向正极移动。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
6
3.醋酸纤膜薄膜电泳分离血清蛋支持物的一种电泳 技术。
1.定性观察：染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
2.定量测定：光密度仪扫描法，洗脱比色法
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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六、临床意义
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳在临床上常用于分析 血、尿等样品中的蛋白质，供临床上诊断肝、肾等疾病 参考。
1．肝硬化时清蛋白明显降底，α2和β-球蛋白无显 著变化，而γ球蛋白可显著增加。正常生理情况，清蛋 白与球蛋白之比约为1.5~2.5∶1，而肝硬化时有可能出 现清∶球＜1的情况，常称为清、球比例倒置，说明肝 功能严重受损。
实验三,血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
• 3．电泳 在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽 内的液面等高，将将点好样的薄膜 (无光泽面朝 下)两端平悬于电泳槽支架的滤纸桥 (先剪裁尺寸 合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支 架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端 浸入电极槽的缓冲液内。用缓冲液将滤纸全部润 湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸 桥，它是联系醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的 “桥梁”。) 上。膜条上点样的一端靠近负极。 盖严电泳室。平衡10min后，通电。调节电压至 160V，电流强度0．4～0．7 mA／cm(毫安／厘 米)膜宽，电泳时间约为60分钟。
六、注意事项
• 1、 保持醋酸纤维素薄膜的清洁，避免用手直接 接触薄膜。
• 2、 点样量要适宜，2次左右即可，盖玻片的边 缘应避免出现明显液滴。点样要尽量点在一条直 线上。（此步是实验的关键,点样前应在滤纸上 反复练习,掌握点样技术后再正式点样。）
• 3、 电泳时间不低于1小时。
• 4、 点样处不要搭在滤纸上，以免血清渗入滤纸。
• 5、 醋酸纤维素薄膜应绷直，避免电泳槽隔离板 的干扰。
• 6、 不可同时接触正负极，防止触电。
结果分析：
• 1、 区带不分离，没有出现理论上的5条带。 原因：电泳时间不够，电压偏低，点样量过多。
• 2、 区带不清晰，颜色很浅。 原因：点样量不够。
• 3、 区带不平行，弯曲、间断。 原因：点样时未点在一条直线上；醋酸纤维素 薄膜上的醋酸纤维素粉涂布不均匀。
•
本实验采用的醋酸纤维薄膜电泳，是以醋
酸纤维薄膜为支持物的电泳方法。醋酸纤维素是
纤维素的羟基乙酰化形成的纤维醋酸酯。将它溶
于有机溶剂 (如：丙酮、氯仿、乙酸乙酯等)后，
涂成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维
生化实验(七)----综合性实验之三----血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 2013
附：电渗
原因：
固体支持物多孔，带可解离化学基团，常吸附溶液中正离子或负离子， 使溶液相对带负电或正电。
如以滤纸作支持物时，纸上纤维素吸附OH- 带负电荷；而与纸接触的水溶 液因产生H3O+带正电荷。
因此，若样品质点在电场中移向负极，结果质点的表现速度比其固有速 度要快，若质点是移向正极，则表现速度比其固有速度要慢， 可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。甚至，当电 渗作用大于电泳时，样品质点可“不进反退”，向电泳相反方向移动。
带负电粒子
正极
带正电粒子
负极
电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术。
1. 球形带电颗粒在电场作用下所受的力
• • •
电场力 F = XQ (X－电场强度，Q－粒子所带电荷)
阻力 F' = 6πrηv (r－粒半径，η－介质粘度，v－粒运动速度)
当 F= F'，(电泳达平衡)，XQ = 6πrηv
四、实验试剂和材料
1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH=8.6，离子强度 0.075)： 称取1.66g巴比妥和12.76g巴比妥钠,置于大烧杯中，加 蒸馏水约600ml，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定溶至 1000ml。置4℃保存，备用。 2、染色液：称取0.5g氨基黑，甲醇50ml，冰醋酸10ml， 蒸馏水加至100ml。 3、漂洗液：取无水乙醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水50ml， 混匀置塞试剂瓶内贮存。 3、0.4N氢氧化钠：称取氢氧化钠16.0g，蒸馏水加至 1000ml
+
白蛋 白(A)
α1
α2
β
γ
血清蛋白的 pI 大多在 7.5 以下，在 pH8.6 的巴比妥缓冲液 中以负离子形式存在，并且蛋白质的分子量、立体构象、等电 点及形状也有差异，在电场中迁移速度不同，可以在醋酸纤维 薄膜上分离成 A、α1、α2、β、γ五条区带。
实验三血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳课件
9
4.醋纤膜分离血清蛋白质的原理
醋酸纤维素薄膜电泳是采用醋酸纤维素薄膜作支 持物的一种电泳技术。
醋酸纤维素薄膜是纤维素的羟基乙酰化形成的纤 维素醋酸酯，具有均一的泡沫状结构，渗透性强， 对分子移动阻力小，用它做区带电泳的支持物，用 样量少，分离清晰，对染料无吸附作用，应用范围 广，快速简便 ,且染色后的薄膜可用乙醇和冰醋酸 溶液浸泡透明，透明后的薄膜便于保存和定量分析。
2.点样：毛面向上，用点样器，在距膜一端约2cm处， 与边缘平行直线状点加3~5μL待分离血清。注意取 样适量、均匀；血清线位置适当，粗细均匀，不能 有明显扩散现象。
实验三血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 2cm
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不同的点样方式
✓正确点样：直、细
-
+
姓 名
2cm
实验三血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
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二、实验原理
1.电泳的基本原理
电泳——是带电质点在电场力作用下发生定向移动 的现象。 电泳技术——是利用电泳现象进行物质分离、纯化 及鉴定的技术。
实验三血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
4
电泳速度的方向：
正 F´ F 负
极
–
极
电泳速度的大小：当F=F'时，粒子在电场中匀速运动。
电场力 F=QE 摩擦力 F´= 6πrV
因此，目前被广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红 蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。
实验三血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
10
醋纤膜分离血清蛋白质的方法
以醋酸纤维素薄膜作为支持介质，于薄膜一端 加微量血清，膜两端连接于缓冲液。电泳分离后 再经染色处理，可将血清蛋白质分成五条主要的 区带，从正极依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白。
血清蛋白质醋酸纤PPT资料(正式版)
血清蛋白组分的相对百分数：
A%=A/T×100% T—吸光度总和
α1%=α1/T×100% α2%=α2/T×100%
β%=β/T×100% γ%=γ/T处理
1. 市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片，薄膜的浸润 与选膜是电泳成败的关键之一。为防止指纹污染， 取膜时应戴指套或用夹子。所选薄膜应厚薄均匀， 否则应弃去不用，以免造成电泳区带扭曲，界线 不清，背景脱色困难，结果难以重复。
6.85-7.50
分子量
69000 α1：20000 α2：30000 90000-150000 156000-300000
白蛋白(A) α1
α2 β
γ
三、实验器材
1. 电泳仪：为电泳提供直流电源。 2. 电泳槽：为电泳提供场所。多用有机玻璃制成，电极用铂丝。 3. 血清加样器 ：可用盖玻片或X胶片或微量加样器。 4. 醋酸纤维素薄膜：2cm×8cm 5. 其它： 培养皿（直径9-10cm）、滤纸、玻璃板、镊子等。
① 薄膜的准备 ② 电泳槽的准备 ③ 点样 ④ 电泳 ⑤ 染色与漂洗脱色
操作步骤：
1. 准备：将巴比妥缓冲液加入电泳槽的电极 室
内，使正负极室的液面等高，电泳支架宽度正 好适合醋纤薄膜的长度，用四层纱布或滤纸做 盐桥，一端浸入缓冲液中，一端搭在支架上。
2. 膜的预处理：将薄膜切成2×8cm，先于膜
于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因 而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度 也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此，可 使它们分离。
➢ 影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液 的pH值、溶液的离子强度和电渗现象
➢ 影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷 的量、质点的大小和形状
常见的电泳技术：
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蛋白质名称
等电点
分子量
清蛋白
4.88
69000
α
5.06
α 1－ 200000
α 2－ 300000
β
5.12
90000－ 150000
γ
6.85－ 7.50
156000－ 300000
血 清 在 pH8.6 的 缓 冲 体 系 中 电 泳 1h 左 右 ， 染 色 后 可 显 示 5
条 带 。 清 蛋 白 泳 动 最 块 ， 其 余 依 次 α 1、 α 2、 β 、 γ 球 蛋 白 。
生化实验七综合性 实验之三血清蛋白 醋酸纤维素薄膜电
泳(ppt)
（优选）生化实验七综合性实 验之三血清蛋白醋酸纤维素薄 膜电泳
二、实验原理：
（一）电泳(electrophoresis) ：带电粒子在电场中 向与其电性相反的电极方向泳动的现象。
正极
带负电粒子 带正电粒子
负极
电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术。
为降低热效应对电泳影响，可控制电压或电流，也可安装 冷却散热装置。对高压电泳增设冷却系统，防样品变性。
■ 影响电泳迁移率的因素：
外加电流、电压
ANODE
+
-
+
Voltage
CATHODE
-
Friction
Charge
分子量 分子形状 分子的等电点
在确定的条件下，某物质的迁移率为常数， 是该物质的化学特征常数
（三）血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳原理
1. 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支 持物的电泳方法。
2. 血清中各种蛋白质的等电点在pH4.0～7.3之间， 在pH8.6的缓冲溶液中均带负电荷，在电场中向 正极泳动。
3. 血清中各种蛋白质的等电点不同，所以带电荷 量也不同。此外各种蛋白质的分子大小各有差 异，因此在同一电场中泳动的速度不同。分子 小而带电荷多者，泳动较快；反之，则较慢。
+
白蛋 α1
α2 β
γ
白(A)
血 清 蛋 白 的 pI 大 多 在 7.5 以 下 ， 在 pH8.6 的 巴 比 妥 缓 冲 液
中以负离子形式存在，并且蛋白质的分子量、立体构象、等电
点及形状也有差异，在电场中迁移速度不同，可以在醋酸纤维
薄 膜 上 分 离 成 A、 α 1、 α 2、 β 、 γ 五 条 区 带 。
单位电场强度时粒子运动的速度
带电粒子的迁移率在一定条件下取决于粒子本身的性质： 即与其所带电量成正比；与其半径及介质粘度成反比。
移动速度: v = d / t (cm / 秒) 电场强度: X = E / l (伏特 / cm) (单位距离内电势差)
2. 两种不同物质的电泳分离
迁移率U
=
v
/
电泳法：利用在电场的作用下，由于待分离样品 中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状 等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速 度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的方法 和技术。
（二）影响电泳速度的因素
⒈ 样品本身
带电量：Q 越多，v 越大。 分子大小： r 越小，v 越大。
形状：球形分子 > 纤维状分子。
X
=
d/t ——
=
dl ——
(单位: cm2·伏特-1·秒-1)
E / l Et
物质 (A) 在电场中移动的距离为dA = UA ·Et / l 物质 (B) 在电场中移动的距离为dB = UB ·Et / l
两物质移动距离的差为
Δ d = dA - dB = (UA – UB) ·Et / l
小，v 变小；I 越小，样品电流越大，v 越大，
但样品易扩散。
⒋ 支持介质：惰性材料，有一定坚韧度，易保 存；吸附力要小；无电渗作用。
电渗：液体对固体的相对移动，由缓冲液的水分子 和支持介质的表面之间所产生的一种相关电荷所引
起。电渗与电泳方向相同，v 变大；反之变小。
简言之，在电场作用下液体对于固体支持物的相对 移动称为电渗（electro-osmosis）。
定量----将染色后的区带分别剪开，将其溶与碱液，进行比色测定，计算各区带的百分数。
4. 醋酸纤维素薄膜
① 具有均一的泡沫状结构（厚约120m），渗透 性强，对分子移动的阻力很弱。
② 用其作支持物进行电泳，具有微量、快速、简 便、分离清晰、对样品无吸附现象等优点。
➢ 可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。甚至，当电 渗作用大于电泳时，样品质点可“不进反退”，向电泳相反方向移动。
⒌ 温度：过高，产热增加、水分蒸发，对电泳不利。
产生热量(Q=I2Rt)对电泳技术不利，因产热可促使支持介 质上溶剂蒸发，而影响缓冲溶液离子强度。
温度升高，介质粘度下降，分子运动加剧，自由扩散变快， 迁移增加。
1. 球形带电颗粒在电场作用下所受的力
• 电场力 F = XQ (X－电场强度，Q－粒子所带电荷)
• 阻力 F' = 6πrηv (r－粒半径，η－介质粘度，v－粒运动速度) • 当 F= F'，(电泳达平衡)，XQ = 6πrηv
移项得 v / X = Q / 6πrη
迁移率 = Q / 6πηr v / X ,
物质 A 和 B 能否分离取决于两者迁移率。 如两者的 U 相同，则不能分离；如有差别则能分离。
两物质的分离距离：与电压和电泳时间成正比，
与电场的距离成反比。
小结：
带电粒子的迁移率在一定条件下取决于粒子本 身的性质：即与其所带电量成正比；与其半径 及介质粘度成反比。
两物质的分离距离：与电压和电泳时间成正比， 与电场的距离成反比。
附：电渗
原因：
➢ 固体支持物多孔，带可解离化学基团，常吸附溶液中正离子或负离子， 使溶液相对带负电或正电。
➢ 如以滤纸作支持物时，纸上纤维素吸附OH- 带负电荷；而与纸接触的水溶 液因产生H3O+带正电荷。
➢ 因此，若样品质点在电场中移向负极，结果质点的表现速度比其固有速 度要快，若质点是移向正极，则表现速度比其固有速度要慢，
⒉ 电场强度：X 越大，v 越大。
d = U ·Et / l
U = v / X = Q / 6πηr
V = d / t = U ·E / l = U ·X = Q ·E / (6πηr ·l )
⒊ 缓冲液
成分：性质稳定，不易电解。
pH：pH - pI 越大，Q 越多，v 越大。
离子强度：0.02～0.2M。I 越大，样品电流减