巴氏染色技术要点

巴氏染色

巴氏（Papanicolaou）染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。其适用于上皮细胞及间皮组织的标本。是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法。该染色法不但具有显示细胞核结构清晰，分色明显，透明度好，胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。对如何染好巴氏染色，笔者有以下几点体会，报告如下。

1 EA 36染液pH值的测试

EA 36染液的酸碱度对巴氏染色的成功起着关键性作用，EA 36染液由伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等染料配成。伊红、亮绿、桔黄及俾麦棕等属于酸性染料。在溶媒中其发色团是负离子部分。发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而使胞浆显蓝色、绿色、桔黄色或红色。但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的pH值而改变的。在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电）。在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电）。所以必须把染液pH值调至5.2为宜［1］。EA 36染液pH的调节，可用石蕊试纸法，也可用酸度计测试。当然用酸度计法最为准确。但以上方法均比较麻烦，同时还要受到仪器设备的限制，不方便。本文采用一种简单方便的方法。即用10%磷钨酸及饱和碳酸锂溶液直接测试。具体做法是，拿一张滤纸先滴少量染液于纸上，若滴染液处呈紫色，说明染液偏碱，则滴加少量10%磷钨酸。若显绿色，说明染液偏酸，则滴加少量饱和碳酸锂。并充分混匀。直至染液滴在纸上既显绿色又有红色，颜色鲜艳为宜。用此法测试染液pH同用石蕊试纸法测试一样，同样可获得满意的染色效果。磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力。同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂。可中和分色及蓝化时可能留下的少量酸或碱。保证染色达到理想效果。

2 分色

分色或酸化，对染色效果也很重要。分色目的是去掉胞浆中染上的多余的苏木素，使胞核着色显示特异性。因此，经分色后的胞浆在镜下观察应无色为佳。若胞浆中还残留有苏木素染料，会影响EA 36染液的着色。结果会出现该红的胞浆不红，该绿的胞浆不绿，或不红不绿的现象。看不到红蓝相间现象。因此，掌握好分色是关键。分色时间不能过短或过长。太短胞浆中苏木素除不尽，太长会把核上的苏木素也退掉。每次应在数秒内完成。盐酸浓度应偏低（0.5%为好）。这样便于掌握分色的时间。

3 蓝化或碱化

蓝化的目的是使胞核着色更具有特异性。经蓝化后的胞核紫中带蓝。这与红色的胞浆对比更鲜明。蓝化所用的碳酸锂是一种弱碱。因此，蓝化过程中碳酸锂还可中和分色时可能残留下的少量盐酸。为EA 36的着色创造良好条件。所以蓝化时间可适当长些，以肉眼观察涂片变蓝为好［2］。

若涂片经EA 36染色后，镜下观察效果不理想时。根据涂片着色情况，可于EA 36染液中滴加少量10%磷钨酸或饱和碳酸锂后重染EA 36 3～5min而补救。比如:角化细胞浆不红，就滴加10%磷钨酸。若角化前细胞浆也变红，就滴加饱和碳酸锂如此边复染边镜下观察，直至获得最佳染色效果为止。