实验六 细胞核的分离与核酸的鉴定
1-细胞生物学实验
如镜台测微尺1mm处(全长)与目镜测微尺75 刻度(150小格)重合，则:
目镜测微尺每小格的实际长度=
1 150
mm
=0.0067mm=6.7μm
④同样的方法标定高倍镜下目镜测微尺 每小格的实际长度
计算公式如下:
目镜测微尺每小格的实际长度
镜台测微尺长度 ＝
目镜测微尺格数
＝ 30×10μm 200
(4)测量细胞并计算核质比
五、实验操作
1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液， 将组织剪成约1mm立方的小块。
2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄 的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉 动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧 杯中。（这两步操作略）
3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液2ml，2000rpm离 心10分钟。（每组1管）
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞 内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
2.方法 取酵母悬液一滴于洁净玻片上，滴一滴0.2％亚甲基
蓝染液，加盖片，2分钟后于显微镜下观察细胞。
3.结果 死细胞被染成蓝色，活细胞不着色。
实验作业
画图记录细胞吞噬实验所见结果
实验三
细胞核与线粒体的 分级分离
实验内容
实验一、细胞的形态结构与显微测量 实验二、细胞生理活动的实验观察 实验三、细胞核与线粒体的分级分离 实验四、细胞分裂的形态观察 实验五、细胞原代培养 实验六、细胞计数及死活细胞的鉴定 实验七、综合设计性实验
实验一
细胞的形态结构与显微测量
实验目的
(一) 观察并了解细胞的基本形态。 (二)掌握临时制片和显微绘图的方法。 (三)了解显微测微尺的原理及使用方法
实验六 细胞核的分离与核酸的鉴定
2、核酸的水解 、
磷酸 核酸 核苷酸 碱基 戊糖 • 定糖法（戊糖的差异） 定糖法（戊糖的差异）
（1）核糖核酸的鉴定
RNA
CHO
H C OH H C OH H C OH CH2OH
ＯＨ¯ ＯＨ 水解
β－ D－核糖 －
浓HCl
HC HC O
CH C CHO
＋ 3H2O
β－ D－核糖 －
CH3
糠醛
CH3 HC CH C C O O OH CH3
沸水浴(10′) 沸水浴
冷却
加入5%三氯 加入 三氯 醋酸 (8ml) 2000r/min； 2000r/min；5′
搅匀后离心 上清液
2．鉴定：取试管三支，编号，按下表操作: ．鉴定：取试管三支，编号，按下表操作 1 2 3 编 号 细胞质水解液（滴） 细胞质水解液（ 核液水解液（ 核液水解液（滴） 5％三氯醋酸（滴） ％三氯醋酸（ 3,5一二羟基甲苯液（滴） 一二羟基甲苯液（ 一二羟基甲苯液 20 10 30 20 10 30 30 30
一、分离细胞质与细胞核
１.破碎细胞
机械法 细胞破碎的方法 物理法 高速组织捣碎机 玻璃匀浆器 研钵 超声匀浆器 冻融法 自溶法 酶处理 表面活性剂处理法
化学法
２.离心技术 离心技术
利用各细胞器在一定介质中的沉降速度的差 利用各细胞器在一定介质中的沉降速度的差 可采取离心的方法，将细胞器分离出来。 异，可采取离心的方法，将细胞器分离出来。
实验6 实验6
细胞核的分离与核酸的鉴定
（Separation of cell nuclei and identification of nucleic acids） ）
遵义医学院生物化学教研室 曹桂群
细胞核质分离提取的方法
温馨小提示：本文主要介绍的是关于细胞核质分离提取的方法的文章，文章是由本店铺通过查阅资料，经过精心整理撰写而成。
文章的内容不一定符合大家的期望需求，还请各位根据自己的需求进行下载。
本文档下载后可以根据自己的实际情况进行任意改写，从而已达到各位的需求。
愿本篇细胞核质分离提取的方法能真实确切的帮助各位。
本店铺将会继续努力、改进、创新，给大家提供更加优质符合大家需求的文档。
感谢支持！(Thank you for downloading and checking it out!) 阅读本篇文章之前，本店铺提供大纲预览服务，我们可以先预览文章的大纲部分，快速了解本篇的主体内容，然后根据您的需求进行文档的查看与下载。
细胞核质分离提取的方法（大纲）一、引言1.1研究背景1.2细胞核质分离提取的意义二、细胞核质分离提取的基本原理2.1细胞结构概述2.2核质分离提取的基本过程三、细胞核质分离提取方法3.1物理方法3.2化学方法3.3生物方法四、细胞核质分离提取实验步骤4.1细胞样品的制备4.2核质分离4.3核质提取4.4核质纯化4.5核质质量检测五、细胞核质分离提取方法比较与选择5.1不同方法的优缺点5.2方法选择依据六、细胞核质分离提取在科研中的应用6.1基因组学研究6.2蛋白质组学研究6.3细胞信号传导研究七、实验注意事项及常见问题7.1实验操作注意事项7.2常见问题及解决方法八、总结与展望8.1细胞核质分离提取技术进展8.2未来发展方向与应用前景一、引言1.1研究背景细胞核质分离提取技术是细胞生物学与分子生物学领域中的一项基础性技术，广泛应用于基因表达调控、基因功能研究、基因调控网络构建等方面。
随着科学技术的不断发展，对细胞核质分离提取技术的要求也越来越高，需要更加精确、高效的方法来满足科研工作的需求。
细胞核质分离提取技术的研究与发展，有助于我们深入理解基因表达调控机制，为疾病的诊断、治疗和预防提供新的思路和方法。
核质分离实验报告
一、实验目的1. 理解核质分离的原理和方法。
2. 掌握使用差速离心法进行细胞核和细胞质分离的操作步骤。
3. 熟悉显微镜观察细胞核和细胞质的结构。
二、实验原理细胞是生命活动的基本单位，细胞内的各种细胞器具有不同的结构和功能。
细胞核是细胞的控制中心，含有遗传物质DNA；细胞质是细胞核以外的所有细胞结构的总称。
核质分离实验是细胞生物学实验中的一个基本操作，通过差速离心法将细胞核和细胞质分离，便于对细胞核和细胞质进行进一步的研究。
三、实验用品1. 细胞悬液：取新鲜动物细胞或植物细胞，用生理盐水洗涤后制成细胞悬液。
2. 差速离心机：用于进行差速离心操作。
3. 显微镜：用于观察细胞核和细胞质的结构。
4. 试管：用于盛装细胞悬液和离心后的沉淀物。
5. 移液器：用于移取细胞悬液。
6. 离心管：用于盛装细胞悬液和离心后的沉淀物。
7. 生理盐水、缓冲液、蔗糖等试剂。
四、实验步骤1. 取适量细胞悬液，加入离心管中，充分混匀。
2. 将离心管置于差速离心机中，进行差速离心。
具体操作如下：a. 首先进行低速离心（例如1000g，10分钟），以去除细胞碎片和细胞膜等杂质。
b. 然后进行中速离心（例如3000g，10分钟），以分离细胞核和细胞质。
c. 最后进行高速离心（例如10000g，10分钟），以进一步纯化细胞核。
3. 离心完成后，取出离心管，轻轻倒掉上清液，保留沉淀物。
4. 将沉淀物加入适量的生理盐水，混匀后制成细胞核悬液。
5. 取适量细胞核悬液，滴加于载玻片上，用盖玻片封片。
6. 将载玻片置于显微镜下观察细胞核的结构。
7. 取适量细胞质沉淀物，加入适量的生理盐水，混匀后制成细胞质悬液。
8. 将细胞质悬液滴加于载玻片上，用盖玻片封片。
9. 将载玻片置于显微镜下观察细胞质的结构。
五、实验结果与分析1. 显微镜下观察细胞核，可见细胞核呈圆形或椭圆形，核膜清晰，染色质分布均匀。
2. 显微镜下观察细胞质，可见细胞质呈均匀的透明状，含有细胞器、线粒体等结构。
第六章DNA和RNA的提取
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除
（二）基因组DNA的提取－ CTAB法
组份
CTAB提取缓冲液的改进配方
Tris-HCl EDTA NaCl （pH8.0） （pH8.0） 100 mM 20 mM 1.4M CTAB 3%(W/ V) PVP40 5%(W/ V) β-巯基乙醇 2%（V/V） 使用前加入
主要方法： (1)浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离。 1）用1M 氯化钠提取,得到的DNP粘液 2) 与含有少量异戊醇的氯仿一起摇荡,使乳化 3) 离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相 中间，而DNA位于上层水相中 4) 用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
质粒DNA的提取
使用处于对数期的新鲜菌体 （老化菌体导致开环质粒增加）
质粒DNA－碱裂解法
碱裂解法原理
染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分 子，而质粒DNA为共价闭合环状分子； 当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共 价闭环的质粒DNA在回到中性pH时即恢复其天然构象； 变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉 淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相 中，从而可通过离心将两者分开。
磁珠
磁性微粒挂上不同基团可吸附不同的目的 物，从而达到分离目的。
（三）基因组DNA－其它方法
浓盐法：
利用RNP和DNP在盐溶液中溶解度不同，将二者分离
有机溶剂抽提法：
有机溶剂作为蛋白变性剂，同时抑制核酸酶的降解作用
密度梯度离心法：
利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物
《生物化学》课程实验教学大纲
《生物化学》课程实验教学大纲课程名称：生物化学课程编号：437007总学时：82 总学分： 4.5开设时间：第三学期适用专业：生物技术、食品科学与工程主撰人：审核人：一、实验性质、目的与任务1、生物化学实验是以生物为研究对象，利用生物化学的原理和方法，阐明生物生长，发育，遗传变异机制，揭示生命现象和本质，并为人类服务的一门实验科学，是农学、食品科学与工程专业、生物技术学科相关专业本科生及与中学生物学教师及科技人员重要的专业基础技术。
2、本课程是在植物生物学、动物生物学、微生物学等普通生物学实验有比较全面了解及一定基础训练基础上而开设的实验技术实验，是生物技术、农学、食品科学与工程专业的专业基础课，是深入学习上述三个专业专业知识的必备课程。
3、掌握层析技术、核酸的分离及组分鉴定、酶的特性、透析技术、等电点分离蛋白质等生物化学技术。
二、教学基本要求：1、掌握还原糖与非还原糖的鉴别方法；2、掌握测定酶的最适pH、最适温度等的方法；3、掌握蛋白质与糖的透析技术；4、掌握层析原理、蛋白质层析方法；5、掌握等电点纯化蛋白质的方法；6、掌握核酸组分鉴定的方法；7、掌握滴定法测定Vit C的方法（还原型Vit C的测定方法）。
三、实验项目与类型：四、实验教学内容及学时分配：实验一糖类的颜色反应4学时1、实验目的了解糖类颜色反应的原理；学习应用糖类颜色反应鉴别还原糖与非还原糖的方法。
2、方法原理（1）Molish（莫氏）反应糖与强酸的作用形成糠醛及其衍生物。
糠醛及其衍生物与α-萘酚反应作用生成紫色的化合物，原理是羰基于酚类进行了缩合，这样，将糖与浓酸作用后再与α-萘酚反应作用就能生成紫色的化合物，可鉴别糖（多羟、醛基）。
Molish反应非常灵敏，0.001%葡萄糖和0.0001%蔗糖即能呈现阳性反应。
因此，不可使碎纸屑或滤纸毛混入样品中。
过浓的糖溶液，由于硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈紫色。
需稀释糖溶液后重做。
第六章核酸的分离与纯化
三、鉴定、保存与应用
（一）核酸的鉴定
1．浓度鉴定核酸浓度的定量鉴定可通过紫外分光光度法与荧光光度法进行。
（1）紫外分光光度法：紫外分光光度法是基于核酸分子成分中的碱基均具有一定的紫外线吸收特性，最大吸收波长在250nm～270nm之间。这些碱基与戊糖、磷酸形成核苷酸后，其最大吸收波长不变。由核苷酸组成核酸后，其最大吸收波长为260nm，该物理特性为测定溶液中核酸的浓度奠定了基础。在波长260nm的紫外线下，1个OD值的光密度大约相当于50µg/ml的双链DNA，38µg/ml的单链DNA或单链RNA，33µg/ml的单链寡聚核苷酸。如果要精确定量已知序列的单链寡核苷酸分子的浓度，就必须结合其实际分子量与摩尔吸光系数，根据朗伯-比尔定律进行计算。若DNA样品中含有盐，则会使A260的读数偏高，尚需测定A310以扣除背景，并以A260与A310的差值作为定量计算的依据。紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25µg/ml的核酸溶液。
2．纯度鉴定紫外分光光度法还是荧光光度法，均可用于核酸的纯度鉴定。
生物化学与分子生物学实验指导书
生物化学实验指导书生命科学与工程学院目录实验一总糖的测定 (2)实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应 (5)实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应 (9)实验四氨基酸的分离鉴定―纸层析法 (13)实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (15)实验六酪蛋白的制备 (18)实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (20)实验八肝细胞核中核酸（RNA和DNA）的分离与测定 (22)实验九紫外吸收法测定DNA含量 (25)实验十维生素C的定量测定 (26)实验十一酶的特性 (29)实验十三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 (37)实验十四植物体内的转氨基作用 (40)实验十五SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (44)实验十六葡聚糖凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (50)实验十七质粒DNA的提取 (55)实验十八质粒DNA的酶切 (57)实验十九 PCR基因扩增 (59)实验二十琼脂糖凝胶电泳检测DNA (61)实验二十一真核生物基因组DNA制备 (63)附录 (65)实验一总糖的测定一、目的掌握直接测定法测定总糖的原理和方法。
二、原理样品经处理除去蛋白质等杂志后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖，以直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。
三、器材1.电炉2.滴定管3.锥形瓶4.容量瓶四、试剂1.6mol/L 盐酸溶液2.%甲基红乙醇溶液：称取甲基红，用60%乙醇溶解并定容至100ml。
3.20%氢氧化钠溶液。
4.%转化糖标准溶液：称取105℃烘干至恒重的纯蔗糖，用水溶解并移入1000ml 容量瓶中，定容，混匀。
取50ml 于100ml 容量瓶中，加6mol/L盐酸5ml，在68-70℃水浴中加热15min，取出于流动水下迅速冷却，加甲基红指示剂2 滴，用20%NaOH 溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。
此溶液每毫升含转化糖1mg。
5.费林氏A液：称取15g（CuSO4·5H2O）及次甲基蓝，溶于水并稀释到1L。
1-细胞生物学实验
五、实验操作
1. 取猪肝1g，放入小烧杯中，加4ml 0.25M蔗糖缓冲液， 将组织剪成约1mm立方的小块。 2. 将剪碎的组织移入匀浆器的外管中，再将内管（带柄 的活塞）插入外管中，缓慢而均匀地施力，上下旋转拉 动，匀浆7-10分钟，然后用六层纱布过滤回洗净的原烧 杯中。（这两步操作略） 3. 每组取1个5ml离心管，加入匀浆液 2ml，2000rpm离 心10分钟。（每组1管） 接下去的操作见下面的流程图。 健那绿染色：各取10μlD4悬浮液和健那绿染液在载玻片 上混合，10分钟后加盖玻片，观察线粒体。 改良苯酚品红染色：取10μlD6涂片，滴10μl改良苯酚品 红染液，5分钟后加盖玻片，观察细胞核。
2.细胞核的分离提取
3.高速离心分离提取线粒体
操作步骤 装有上清液的高速离心管→ 17000rpm 离心 20 分 钟 → 弃 上 清 ， 留 取 沉 淀 物 → 加 入 0．25mol／L蔗糖－0.003 mol／L氯化钙液1ml， 用吸管吹打成悬液→17000rpm离心20分钟→将 上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入 0.1ml 0． 25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙 溶液混匀成悬液→取上清液和沉淀物悬液，分 别滴于载玻片上，各滴一滴 0.02 ％詹纳斯绿 B 染液盖上盖片染20分钟→油镜下观察，颗粒状 的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。
(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。
2 . 总长度为 1mm，分为 100 等份，每一个格的长度为 0.01mm(10μm)。
(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且 左端对齐(0刻度重合)。
核酸分离鉴定_实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握核酸分离与鉴定的原理和方法。
2. 了解核酸的组成和结构。
3. 学会使用实验仪器和试剂，进行核酸的分离与鉴定。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA。
DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成和调控。
核酸的分离与鉴定是分子生物学研究的基础。
核酸分离与鉴定主要包括以下步骤：1. 核酸提取：利用细胞破碎技术，将细胞内的核酸释放出来。
2. 核酸纯化：去除杂质，得到纯净的核酸。
3. 核酸鉴定：通过物理、化学或生物学方法，鉴定核酸的种类和结构。
本实验以酵母细胞为实验材料，采用碱法提取RNA，并通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法进行鉴定。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母细胞2. 试剂：0.04mol/L NaOH溶液、酸性乙醇溶液、琼脂糖凝胶、缓冲液、核酸染料、DNA/RNA Marker等四、实验步骤1. 核酸提取（1）称取1g干酵母细胞，加入2ml 0.04mol/L NaOH溶液，研磨至匀浆状。
（2）加入4ml 0.04mol/L NaOH溶液，混匀，转移至离心管中。
（3）沸水浴加热30min，冷却后离心（2000r/min，15min）。
（4）取上清液，加入等体积的酸性乙醇溶液，混匀，静置2h。
（5）离心（2000r/min，15min），弃去上清液。
（6）加入70%乙醇洗涤沉淀，离心（2000r/min，15min），弃去上清液。
2. 核酸鉴定（1）紫外分光光度法：取适量RNA溶液，在260nm和280nm波长下测定吸光度值，计算RNA浓度。
（2）琼脂糖凝胶电泳：将提取的RNA与DNA/RNA Marker混合，加样至琼脂糖凝胶孔中，电泳（100V，30min）。
观察电泳结果，判断RNA的纯度和完整性。
五、实验结果与分析1. 紫外分光光度法测定结果显示，RNA浓度为0.5mg/ml。
2. 琼脂糖凝胶电泳结果显示，RNA条带清晰，无杂质带，表明RNA纯度和完整性良好。
高中生物实验总结
高中生物实验总结实验一观察DNA和RNA在细胞中的分布实验原理：DNA 绿色，RNA 红色分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA 主要分布在细胞质中。
实验结果: 细胞核呈绿色,细胞质呈红色.实验二物质鉴定还原糖+ 斐林试剂砖红色沉淀脂肪+ 苏丹III 橘黄色脂肪+ 苏丹IV 红色蛋白质+ 双缩脲试剂紫色反应1、还原糖的检测（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。
（2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。
（3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）★模拟尿糖的检测1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸3、结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。
4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。
2、脂肪的检测（1）材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。
（2）步骤：制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央↓染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）↓制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）↓镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）3、蛋白质的检测（1）试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液）（2）步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)考点提示：（1）常见还原性糖与非还原性糖有哪些？葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。
生物化学实验6.细胞核的分离与纯化及RNA、DNA的定量测定
离心管必须先平衡后才对称放入离心机， 倾倒上清液 时要求 一次性倒出，不要反复倾倒，防止震荡沉淀，影响结果。
脱氧核糖
CHO
H
CH2
N
硫酸
-H2O
CH2
CO
CH2OH
ω －羟基－γ－酮基戊醛
蓝色化合物
试剂与器材
1、0.25mol/L蔗糖柠檬酸（含3.3 mmol/L CaCl2） 称取蔗糖86g及CaCl2363mg，用1.5％拧檬酸液溶解并稀释 至1000ml。
2、0.88mol/L蔗糖柠檬酸液（含3.3mmol/LCaCl2） 称取蔗糖301g及CaCl2363mg，用1.5％柠檬酸液溶解并稀释 至1000ml。
④ 加入Tris－HCl－NaCl核洗液5ml洗涤沉淀，以2000r/min离心 10min，除去上层液。得到的白色沉淀即为纯化的肝细胞核。
⑤ 加5ml 0.02mol/L的NaOH使细胞核溶解为核液，保留，待测定核 酸。
半个肝脏＋1.5%柠檬酸溶液4.5ml，制成匀浆 单层纱布过滤1次
细
胞
核
上清液
DNA、RNA在细胞中的分布：
胞核内(98%)
DNA 胞质内(2%)
胞核内(10%)
RNA 胞质内(90%)
结论：DNA主要存在于细胞核， RNA主要存在于细胞质。
肝脏 剪成小块 0.9%NacL
洗涤
取出
剪碎
1.5%柠檬酸 4.5mL
研磨
过滤 肝匀浆 1次
滤液
离心
3500r/min 15min
细胞质液
冷却 离心
2000r/min;5min
高中生物24个实验归纳
高中生物24个实验归纳【原创实用版】目录1.实验一：观察植物细胞的质壁分离与复原2.实验二：观察细胞的有丝分裂3.实验三：观察减数分裂4.实验四：观察受精作用5.实验五：观察 DNA 和 RNA 在细胞中的分布6.实验六：观察蛋白质的提取和分离7.实验七：观察淀粉酶对淀粉的分解作用8.实验八：观察光合作用9.实验九：观察叶绿体的结构10.实验十：观察线粒体的结构11.实验十一：观察细胞膜的透过性12.实验十二：观察细胞质的流动13.实验十三：观察细胞核的结构14.实验十四：观察染色质的形态变化15.实验十五：观察基因的分离和组合16.实验十六：观察基因突变17.实验十七：观察基因表达调控18.实验十八：观察生物的伴性遗传19.实验十九：观察生物的染色体变异20.实验二十：观察生物的基因组结构21.实验二十一：观察生物的转录和翻译22.实验二十二：观察生物的生长和发育23.实验二十三：观察生物的免疫反应24.实验二十四：观察生物的生态学特性正文高中生物课程涉及广泛的知识内容，实验是其中重要的一部分。
本文将对高中生物 24 个实验进行归纳总结，帮助大家更好地理解与掌握这些实验的内容。
实验一和实验二主要关注细胞的结构和分裂。
通过观察植物细胞的质壁分离与复原以及细胞的有丝分裂，学生可以加深对细胞壁、细胞膜、染色体等结构的理解。
实验三至实验七关注细胞的减数分裂、受精作用和生物大分子的研究。
观察减数分裂、受精作用，可以了解有性生殖的基本过程；通过观察 DNA 和 RNA 在细胞中的分布、蛋白质的提取和分离、淀粉酶对淀粉的分解作用，可以学习到核酸、蛋白质等生物大分子的基本性质和功能。
实验八至实验十关注光合作用、线粒体的结构和功能。
通过观察光合作用、线粒体的结构，可以了解细胞能量代谢的过程和场所；通过观察细胞膜的透过性、细胞质的流动，可以学习到细胞膜的功能和细胞质的运动。
实验十一至实验十五关注细胞核、染色体、基因的研究。
实验 细胞器的分离
• ①、②、③片，自然干燥后，放入Giemsa染 液缸中染色 5min，用蒸馏水洗去染液，镜检。 • ④片先滴 1—2 滴健那绿 B 于玻片上，挑少许 沉淀在染液中混匀，染5min，加盖片镜检。
• ⑤片先滴 1—2 滴健那绿 B 于玻片上，滴一滴 上清液在染液中混匀，染 5min，加盖组织； 2.过滤匀浆液的纱布事先用预冷蔗糖液 浸湿； 3.收集液体要避免吸到脂肪层； 4.标记玻片。
三、实验步骤:
蛙肝 ↓冷生理盐水10ml洗，吸干水分，放在小烧杯中 ↓加入预冷蔗糖液(少于9ml)，剪碎 匀浆
↓纱布过滤至15ml离心管，溶液体积14ml。
滤液→做涂片①
↓2000 rpm离心10 min
沉淀 上清液 →做涂片② ↓加预冷蔗糖液至10ml，吹打均匀 ↓5ml,11000 rpm离心10 min，弃上清液 混合液 沉淀 ↓2000 rpm离心10 min，弃上清液 ↓加2ml预冷蔗糖液，吹打均匀 沉淀 混合液 ↓加1ml蔗糖液，混匀 ↓11000 rpm离心10 min 做涂片③ 沉淀 上清液 ↓ ↓ 取少许于载片, 取1滴于载片 加健那绿B 混匀④ 加健那绿B 混匀⑤
实验报告：
1.绘制1-5号涂片镜下形态图；
2.分析比较不同涂片间结果的差异及原因。
用另一玻片轻触液滴前端
载玻片
约1/4处，滴加液滴
图示：涂片制作过程
实验六 细胞器的分离: 细胞核与线粒体的分级分离
一、实验目的
1. 了解用差速离心的方法分级分离细胞组分 的原理和过程。 2. 熟悉离心机、匀浆器的使用方法。
二、实验原理
差速离心：根据被分离物质的体积差异，逐渐提高离心 速度以分离大小不同的细胞器的方法。体积大的沉降快， 反之，则慢。
实验六细胞器的分离与观察
0.34mol/L蔗糖溶液-0.5mmol/Mg（Ac)2溶液、
0.88mol/L蔗糖溶液-0.5mmol/Mg（Ac)2溶液、
95%乙醇溶液、丙酮、PBS液、
甲基绿
Байду номын сангаас
-派洛宁染液、中性红-詹纳斯绿染液。
四、实验方法与步骤
1.细胞核的分离
（1）组织匀浆:将饥饿24h的大白鼠处死,立即剪开腹 部,迅速取出肝组织浸入预冷的生理盐水,洗去血污,用滤 纸吸干。称取0.5g肝组织,在小烧杯中剪碎,用预冷的 0.25mol/L蔗糖溶液洗涤数次。将烧杯中的悬浮肝组 织倒入匀浆管中进行匀浆,匀浆过程要在冰浴中进行。 匀浆完毕,移入1.5ml离心管中。
细胞器分离过程中的悬浮介质常使用水溶性的 蔗糖溶液，因为它比较接近细胞质的分散相， 在一定程度上，能保持细胞器的结构和功能， 保持酶的活性，避免细胞器的聚集。
沉淀
转速x时间
A 150g x 20min
B 1000g x 20min
C 3000g x 6min
D 10000g x20min
E 105000g x120min
（2）离心：低温离心机中进行。 每次离心前 一定要在天平（托盘天平）上将两离心管配平。 第一次以600g离心10min。将其上清夜移入 Eppendorf管中，盖好盖子置于冰浴中，留待 后面使用(分离线粒体)。沉淀使用1ml预冷的 0.25mol/L蔗糖溶液离心洗涤2次，每次 1000g离心10min。
r为离心机中轴到离心管远端
的距离
n为离心机每分钟的转速
（r/min）
1000g=9.8牛（N）
离心技术类型
离心技术可用于细胞器的分离。
离心技术一般包括：差速离心和密度梯度离 心
实验十六动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定实验报告
实验十六：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定__实验报告实验十六：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定一、实验目的1.掌握动物组织中核酸的提取方法；2.了解核酸的基本组成成分；3.学会利用分光光度计测定核酸含量；4.通过实验，加强理论与实践的结合，提高实验技能。
二、实验原理核酸是生物体内的一种重要生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两种。
在动物组织中，DNA主要存在于细胞核中，而RNA主要存在于细胞质中。
核酸的提取通常采用酚-氯仿抽提法，其原理是利用两种物质的极性差异进行分离。
酚（Phenol）是一种弱酸，可与水形成氢键，但与氯仿（Chloroform）不溶，因此可以将酚相和水相分离。
在水相中，氯仿与水互不相溶，而酚与氯仿互溶，因此可以将酚从水相中去除。
通过多次抽提，可以将DNA和RNA有效分离。
三、实验步骤1.实验准备（1）实验材料：动物组织（肝脏、肌肉等）、研钵、离心管、移液器、枪头、称量纸、酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇、70%乙醇、0.15mol/L NaCl溶液、0.01mol/L Tris-HCl缓冲液（pH=7.0）、0.001mol/L EDTA溶液（pH=8.0）、0.04mol/L Na2HPO4溶液（pH=7.0）、0.04mol/L NaH2PO4溶液（pH=7.0）、双蒸水。
（2）设备仪器：冷冻高速离心机、漩涡振荡器、电子天平、烘箱、分光光度计。
2.实验步骤（1）样品制备：称取50-100mg动物组织，在研钵中研磨成粉末状，加入适量双蒸水，漩涡振荡器混匀。
将悬浊液转移到离心管中，以12000rpm离心10分钟，弃上清液。
用70%乙醇洗涤沉淀两次，4℃下8000rpm离心10分钟，弃上清液。
将沉淀物真空干燥后保存。
（2）核酸提取：在沉淀物中加入适量酚-氯仿混合液（体积比1:1），用枪头充分振荡混匀。
将混合液转移到离心管中，以12000rpm离心10分钟，将水相和酚相分离。
核酸的检测实验报告
一、实验目的1. 了解核酸的基本概念和特性。
2. 掌握核酸提取、纯化及检测的方法。
3. 学会使用紫外分光光度计进行核酸定量分析。
二、实验原理核酸是生物细胞中重要的生物大分子，包括DNA和RNA。
DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于细胞质中。
核酸的检测方法主要包括提取、纯化和定量分析。
1. 提取：通过化学或物理方法将核酸从细胞或其他生物材料中分离出来。
2. 纯化：去除提取过程中产生的杂质，提高核酸的纯度。
3. 定量分析：通过紫外分光光度计测定核酸的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌细胞、提取缓冲液、乙醇、RNAase抑制剂等。
2. 仪器：紫外分光光度计、离心机、电子天平、移液器、研钵、试管等。
四、实验步骤1. 核酸提取（1）将大肠杆菌细胞加入提取缓冲液中，充分振荡混匀。
（2）将混匀后的细胞溶液转移至离心管中，离心5分钟，弃去上清液。
（3）向离心管中加入等体积的70%乙醇，充分混匀。
（4）再次离心5分钟，弃去上清液。
（5）将沉淀用少量提取缓冲液溶解，转移至新的离心管中。
2. 核酸纯化（1）向含有核酸的离心管中加入等体积的70%乙醇，充分混匀。
（2）离心5分钟，弃去上清液。
（3）将沉淀用少量RNAase抑制剂溶液溶解，转移至新的离心管中。
3. 核酸定量分析（1）使用紫外分光光度计测定核酸溶液的吸光度。
（2）根据标准曲线计算核酸浓度。
五、实验结果与分析1. 核酸提取：通过观察离心管中的沉淀，可判断核酸是否成功提取。
2. 核酸纯化：通过观察离心管中的沉淀，可判断核酸是否成功纯化。
3. 核酸定量分析：根据标准曲线，计算核酸浓度。
六、实验讨论1. 在核酸提取过程中，注意细胞破碎程度，以确保核酸充分释放。
2. 在核酸纯化过程中，注意去除杂质，提高核酸纯度。
3. 在核酸定量分析过程中，注意标准曲线的制作和吸光度的测定。
七、实验结论通过本实验，成功提取、纯化和定量分析了大肠杆菌细胞中的核酸。
实验结果表明，核酸提取、纯化和定量分析方法在生物研究领域具有重要意义。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
冷却 比较各管颜色
5％三氯醋酸（滴）
3,5一二羟基甲苯液（滴）
10
30
10
30
30
30
（3）脱氧核糖核酸的鉴定
1.水解：取离心管二支，编号，按下表操作： 1 2 编 号 细胞质（滴） 核 液（滴） 20 20 混合各管 冷却 离心
2000r/min;5′
1mol/L过氯酸(滴）
20
2
3
1．规范操作，防止滴管、试剂的污染。 2. 细核悬液的平铺要轻柔；
3. 浓酸的取用要小心；
4. 使用离心机注意平衡，转速从低到高；
低速
加速
高速
缺点：①分离效果差，不能一次得到纯颗粒； ②壁效应严重，特别是当颗粒很大或浓度很高 时，在离心管一侧会出现沉淀；
③颗粒被挤压，离心力过大、离心时间过长会使
颗 粒变形、聚集而失活。
差速沉降离心法一般用于分离沉降速度相
差较大（一般为10倍）的颗粒。
密度梯度离心法的理论依据
• 每种纯样品成份在介质溶液中的沉降速度可以表为： V=d2÷18×(σ-s)÷η×ω2r。
细胞器沉降先后顺序先后是细胞核、线粒
体、溶酶体和其他微体、核糖体和大分子。
差速沉降离心法 √
离心方法
密度梯度区 带离心法
速率区带离心法 √
等密度区带离心法
差速沉降离心法
(differential centrifugation)
采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心， 使沉降速度不同的颗粒，在不同的离心速度及不同离心时 间下分批分离的方法。
DNA、RNA在细胞中的分布：
胞核内(98%) DNA 胞核内(10%) RNA
胞质内(2%)
胞质内(90%)
结论：DNA主要存在于细胞核， RNA主要存在于细胞质。
2、核酸的水解
磷酸
核酸
核苷酸
碱基
戊糖
• 定糖法（戊糖的差异）
（1）核糖核酸的鉴定
RNA
CHO
H C OH H C OH H C OH CH2OH
1.掌握离心技术的原理及离心机的使用； 2.熟悉提取分离细胞核、细胞质的方法； 3.熟悉鉴定核酸的方法；
一、分离细胞质与细胞核
１.破碎细胞
机械法 细胞破碎的方法 物理法 高速组织捣碎机 玻璃匀浆器
化学法
研钵 超声匀浆器 冻融法 自溶法 酶处理 表面活性剂处理法
２.离心技术
利用各细胞器在一定介质中的沉降速度的差 异，可采取离心的方法，将细胞器分离出来。
待测样品
（2） 核糖核酸的鉴定
1.水解：取离心管二支，编号，按下表操作： 1 2 编 号 细胞质（滴） 核 液（滴） 20 20 混合各管
沸水浴(10′)
冷却
加入5%三氯 醋酸 (8ml)
1mol/LKOH（滴）
20
20
搅匀后离心
2000r/min；5′
上清液 2．鉴定：取试管三支，编号，按下表操作: 1 2 3 编 号 细胞质水解液（滴） 核液水解液（滴） 20 20 立即混合各管
待分样品的沉浮行为如何确定？
• 当σ>S时 V>0即样品顺离心力方向沉降
σ<S时 V<0即样品逆离心力方向上浮 σ=S时 V=0即样品停止沉降或上浮，“稳定”在 这一位置 用这个公式可以很好地解释在速率区带离心法或
等密度区带离心法中单一样品的沉降（或上浮）
行为。
速率区带离心法
人为地加入不同密度的活性物质，形成一个较为平缓的 介质梯度，将样品加在介质中进行离心，在一定的离心力下 根据颗粒的沉降速度不同最后分配到梯度中某些特定位置上， 形成不同区带的分离方法。 此法用于分离具有一定沉 降速度差的颗粒（沉降速度差 为20% 或更少）或分子量相差 3倍的蛋白质。适用于分离密 度相似而大小有别的样品。
优点：a. 分离效果好，可一次获得较纯颗粒。 b. 适应范围广,能象差速离心法一样分离具有沉降
系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒。
c. 颗粒不会挤压变形。 缺点：a.离心时间较长；
b.需要制备梯度；操作严格，不易掌握。
二、核酸的鉴定
1、核酸的种类及其分布
核酸的种类： DNA、RNA 请思考？
实 验 流 程 图
上层液
沉淀
加入1ml 0.25mol/L 蔗糖柠檬酸溶液 核悬液 沿壁缓铺于8ml 0.88mol/L蔗糖柠檬酸液面上
离心：2000r/min；5′
鉴定
沉淀
沉淀
上层液（弃去）
核洗液5ml洗涤沉淀，离心：2000r/min，5 ′
上层液（弃去）
初步纯化的细胞核
5ml 0.02mol/L NaOH溶解细胞核
ＯＨˉ 水解
β－ D－核糖
浓HCl
HC HC O
CH C CHO
＋ 3H2O
β－ D－核糖
CH3
糠醛
CH3 HC HC O CH C C O OH CH3
HC HC O
CH C CHO
+
HO OH
糠醛
3，5－二羟基甲苯
绿色化合物
（2）脱氧核糖核酸的鉴定
DNA
CHO CH2 CHOH CHOH CH2OH
V： 是某一时刻样品的沉降速度（厘米/秒）；
d： 样品颗粒的直径（厘米）； σ ：样品颗粒的密度（克/厘米3）； s： 介质溶液的密度（克/厘米3）； η ：介质溶液的粘性系数（克/厘米·秒）； ω ：离心机重轴的旋转角速度（1/秒），ω =2π N÷60，N：转/分； r：颗粒所在位置与旋转轴心之间的距离，即离心半径（厘米）；
等密度区带离心法
样品在密度较高、密度梯度较为陡峭的介质溶液中 进行离心，具有不同密度的颗粒向上浮起，一直移动 到与它们的密度相等的等密度点的特定梯度位置上， 形成几条不同的区带，这就是等密度区带离心法。
此方法适用sity gradient centrifugation)
20
上清液 2．鉴定：取试管三支，编号，按下表操作: 1 2 3 编 号 细胞质水解液（滴） 核水解液（滴） 20 20 20 20 立即混合各管 冷却 比较各管颜色
1mol/L过氯酸（滴）
二苯胺试剂（滴）
20
20
表1.核糖核酸的鉴定
试管编号 现 象
1
2
3
表2.脱氧核糖核酸的鉴定
试管编号 现 象
1
脱氧核糖 硫酸 -H2O
Ｈ＋ 水解
β－D－２－脱氧核糖
CHO CH2 CH2 C O CH2OH
H N
蓝色化合物
ω －羟基－γ－酮基戊醛
（1）分离细胞质与细胞核 （2） 核酸的鉴定
0.5g肝组织 ＋ 少许石英砂研磨
加5ml的1.5%柠檬酸溶液，研磨，双层纱布过滤
肝匀浆，倾入离心管
离心：3000r/min；10′