酵母菌的计数方法和应用
酵母菌计数
酵母菌计数简介酵母菌是一种单细胞真核生物，它们在酿酒、发酵和食品加工等过程中起着重要的作用。
为了控制和监测这些过程，我们需要对酵母菌的数量进行准确计数。
本文将介绍几种常用的酵母菌计数方法，并提供一些实用技巧和注意事项。
方法一：显微镜计数法显微镜计数法是最常用且准确的酵母菌计数方法之一。
具体步骤如下：1.取一定数量的酵母菌样品，通常采用培养液或悬浮液。
2.在显微镜下观察样品，并设定合适的倍数。
通常使用40倍或100倍的镜头。
3.使用显微镜的目镜网格或计数室，在一个区域内计数酵母菌的数量。
4.重复以上步骤，直到计数了足够多的区域。
5.将计数得到的酵母菌数量求平均，乘以相应的倍数，得到样品中的总酵母菌数量。
需要注意的是，在进行显微镜计数时，要保持显微镜的透明度，以便更清楚地观察和计数酵母菌。
此外，在计数过程中，应避免重复计数和漏计。
方法二：涂布法涂布法是一种简单快捷的酵母菌计数方法，适用于大批量的样品。
具体步骤如下：1.准备培养基。
选择适合酵母菌生长的培养基，可以是液体培养基或固体培养基。
固体培养基通常是琼脂糖培养基。
2.取一定数量的酵母菌样品，将其均匀地涂布在培养基上。
3.使用细菌铲或棉签，将酵母菌样品均匀涂布在培养基表面。
4.将涂布好的培养基放置在适当的条件下，如温度、湿度等，并进行培养。
5.在适当的培养时间后，观察涂布培养基上酵母菌的生长情况，并计算酵母菌的数量。
涂布法的优点是操作简单、快捷，适用于大样本量的计数。
但由于酵母菌的生长情况可能受到很多因素的影响，因此在进行计数时需要注意控制这些影响因素，如温度、湿度等。
方法三：电子计数法电子计数法是一种利用电子计数器对酵母菌进行计数的方法。
具体步骤如下：1.准备电子计数器。
选择适合的电子计数器，并与适当的软件相结合，以便更准确地进行计数。
2.取一定数量的酵母菌样品，并将其放置在电子计数器中。
3.打开电子计数器，开始对酵母菌样品进行计数。
4.计数完成后，软件会自动计算和显示酵母菌的数量。
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液得制备与使用(以白色念珠菌为示例)白色念珠菌(0)代↓传代培养↓实验菌液得制备:沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基,培养温度20～２5℃,培养时间2~3天↓计数培养基适用性检查:胰酪大豆胨琼脂培养基,培养温度３0～3５℃,培养时间不超过5天,接种量不大于10０cｆu↓计数方法适用性试验:胰酪大豆胨琼脂培养基(ＭPＮ法不适用),培养温度３０～３5℃,培养时间不超过５天,接种量不大于10０cfu 注:当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌与酵母菌总数时,应进行培养基适用性检查,检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.１菌种试验用菌株得传代次数不得超过５代(从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性。
1。
2菌液制备(按表1规定程序培养各试验菌株)取白色念珠菌得新鲜培养物↓用pH7、0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得菌悬液取黑曲霉得新鲜培养物↓加入3～５ｍｌ含0.０５%聚山梨酯80得pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱↓采用适宜得方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0。
05％聚山梨酯80得pＨ7.０无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0。
９%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置,应在2小时内使用;若保存在２~8℃,可在24小时内使用、稳定得黑曲霉孢子悬液可保存在2~８℃,在验证过得贮存期内使用、1。
３阴性对照为确认试验条件就是否符合要求,应进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长,应进行偏差调查、2、培养基适用性检查按表1规定,接种不大于100cｆu得菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表１规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时,用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上得菌落平均数与对照培养基上得菌落平均数得比值应在0。
酵母菌大小的测定及计数实验流程
酵母菌大小的测定及计数实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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酵母菌的计数
* *
16个中格
探究培养液中酵母菌种群数量
♣ 酵母菌的计数 （2）计算： 每毫升培养液中的酵母菌细胞数是多少？ 所数小方格中细胞总数x400x104x稀释倍数 酵母细胞个数/mL= 所数的小方格数
的动态变化
例1 :在用血球计数板（2mm×2mm方格）对某一稀释 50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片 下的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为16，据此 估算10mL培养液中有酵母菌 2x107 个。
探究培养液中酵母菌种群数量
的动态变化
♣ 酵母菌的计数 （6）讨论：计数前还应有哪些步骤？需注意些什么？
酵母菌培养： ♠培养液配制 ♠灭菌 ♠接种
配制质量分数为5％的葡萄糖溶液（葡 萄糖20g，1000 mL水），分装到5个 烧杯中（200mL/烧杯） 用高压蒸汽灭菌锅将培养液和取样、计 数时所用的滴管分别灭菌。贴标签。 接种时要在酒精灯附近，用灭菌干净的 1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌 母液，往每个烧杯中加入。（注意：滴 加量不要太多，避免初始菌数过多。） 将烧杯置于28℃的恒温箱中培养
的动态变化
探究培养液中酵母菌种群数量
的动态变化
♣ 酵母菌的计数 （4）血球计数板的清洗：
• 使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗， 切勿用硬刷洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。 镜检，观察每个小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。 若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
探究培养液中酵母菌种群数量
例2:酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球 计数板每个大方格容积为0.1mm3 ，由400个小 方格组成。现对某一样液进行检测，如果一个 小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 稀释 后 再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格 中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母 菌总数有 2×108 个。
探究培养液中酵母菌种群数量的变化
探究培养液中酵母菌种群数量的变化1、实验原理：1．在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。
2．养分、空间、温度和有毒排泄物等是影响种群数量持续增长的限制因素。
3．酵母菌计数方法：抽样检测法。
先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。
多余培养液用滤纸吸去。
稍待片刻，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。
注意：从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。
仪器介绍：血细胞计数板血细胞计数板的构造血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。
玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室其中共有400个小格，供微生物计数用。
这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。
血细胞计数板的使用以计数酵母菌为例(1)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(3)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内.(4)计数；五点取样法3.计算公式酵母细胞数/ml=每个小格酵母菌数目×400×104×稀释倍数注释：培养的时间不同取样酵母菌的稀释倍数是不同的。
2．方法步骤：提出问题→作出假设→讨论探究思路→制定计划→实施计划→按计划中确定的工作流程认真操作，做好实验记录→分析结果，得出结论→将记录的数据用曲线图表示出来。
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液的制备和使用（以白色念珠菌为示例）白色念珠菌（0）代↓传代培养↓实验菌液的制备：沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20～25℃，培养时间2～3天↓计数培养基适用性检查：胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu↓计数方法适用性试验：胰酪大豆胨琼脂培养基（MPN法不适用），培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基适用性检查，检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.1菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
1.2菌液制备（按表1规定程序培养各试验菌株）取白色念珠菌的新鲜培养物↓用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液取黑曲霉的新鲜培养物↓加入3～5ml含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱↓采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
1.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
2.培养基适用性检查按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表1规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好3计数方法适用性试验供试液制备：水不溶性非油脂类供试品↓取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基↓制备成1:10供试液。
酵母菌数量的测定—显微镜直接计数法
五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室 平均
菌数
A
B
值 （个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
） 第一
室 第二
室
15
六、思考题 能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可 以，如何进行？如果不可以，请说明原 因。
16
式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材 血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、 酿酒酵⺟菌液
8
四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边 缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作 为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来 计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下 才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有 机溶剂脱水干燥）。
4
5
血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。 每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分 成25个小方格。 规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分 成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍 数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。
2020版《中国药典》微生物限度计数—酵母菌及霉菌
2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。
(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，35℃条件下培养4天；接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25℃条件下培养4天。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。
2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。
1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。
2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。
每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。
胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。
同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
霉菌(酵母菌)总数测定方法
霉菌（酵母菌）总数测定方法
设备和材料：高压灭器、恒温水浴45℃、吸管1mL和10mL、试管20mL、三角瓶500mL和250mL、培养箱30~35℃、菌落计数器、放大镜
培养箱：25~28℃，培养基选用玫瑰红钠琼脂培养基。
1.供试液与稀释按细菌总数测定项下规定得方法进行
取供试液1：100和1：1000的稀释液个1mL分别注入平皿内，每个稀释液各用2~3个平皿，加入稀释液后，将熔化并冷却至45~50℃的虎红琼脂培养基倾入平皿内，充分摇匀，凝固后，翻转平板至25~28℃培养72小时，24、48、72小时计数，以72小时为准，计算平板内生长的霉菌落数。
若有根霉或毛霉蔓延已生长，为避免影响其它霉菌的同时，应及时将此平板取出计数。
2.酵母养菌霉菌菌数报告
酵母菌、霉菌计数，应选取带有菌丝体的菌落和酵母菌菌落进行点数，先点清每个平板上生长的菌落数，再求出每一稀释度的平均菌落数。
判定结果时，应选取平板上的菌落数即清楚可数，平均又在30~100个范围以内的菌落数，乘以稀释倍数后，做为供试品的霉菌总数报告之。
若有两个稀释度的菌落数皆在30~100个以内或三个稀释度皆不在此范围之内，应参照细菌总数测定的规则报告之。
若不合格同细菌总数测定。
依据：中国药典2005年版二部附录ⅪJ。
酵母菌大小的测定和细胞计数
(二)酵母细胞计数原理 微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法 和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直 接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。 后者是在乎板上长成菌落后再计数，反应较真实， 但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接计 数。计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法及 计算公式运算后，即可得出实际数值。
2.目镜测微尺的标定 (1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺 的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相 重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数。
(2)25格x16格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数／ml=80小格内酵母细胞个数／ 80×400×104×稀释倍数
4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬 物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95％ 的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。 通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。 若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
4.酵母菌大小的测定 (1)取下物镜测微尺，换上酵母菌水浸制片。 (2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格， 然后换算出菌体的实际长度。
(3)在同一标本上测定5-10个菌体，求其平均值。
(二)酵母细胞数的测定操作方法 1.血球计数板的构造 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制 玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个 平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔 为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网 上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格 为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和 宽各为1m，深度为，其体积为0.1mm3。
2020版《中国药典》微生物限度计数—酵母菌及霉菌
2020版药典微生物限度计数—酵母菌及霉菌2020版本药典(1)菌液制备取白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加5ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，使用移液枪吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氣化钠溶液制成103cfu/ml的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后保存在2℃冰箱，在24小时内使用。
(2) 计数培养基适用性检査接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂培养基平板，35℃条件下培养4天；接种不大于l00cfu的白色念珠菌和黑曲霉的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，25℃条件下培养4天。
每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
(3) 计数方法适用性试验1) 供试液制备取供试品10g，用胰酪大豆胨液体培养基制备成1:10供试液。
2) 接种和稀释按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。
所加菌液的体积不超过供试液体积的1%。
1、试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每lml供试液中含菌量不大于l00cfu。
2、供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
3、菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
3) 供试品中微生物的回收取20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，注人直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用无菌操作台风干的方法使培养基表面干燥。
每一平板表面接种上述照“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液0.1ml。
胰酪大豆胨琼脂培养基平板在35℃条件下培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在25℃条件下培养4天。
同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。
霉菌与酵母菌计数方法版药典
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液的制备和使用（以白色念珠菌为示例）白色念珠菌（0）代↓传代培养↓实验菌液的制备：沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20～25℃，培养时间2～3天↓计数培养基适用性检查：胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu↓计数方法适用性试验：胰酪大豆胨琼脂培养基（MPN法不适用），培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu 注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基适用性检查，检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
菌液制备（按表1规定程序培养各试验菌株）取白色念珠菌的新鲜培养物↓用无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液取黑曲霉的新鲜培养物↓加入3～5ml含％聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱↓采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含％聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
2.培养基适用性检查按表1规定，接种不大于100cfu的菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表1规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好3计数方法适用性试验供试液制备：水不溶性非油脂类供试品↓取供试品，用无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基↓制备成1:10供试液。
实验：应用血细胞计数板对酵母菌进行计数
数据整理
02
03
数据校验
我们将实验数据整理成表格，方 便后续分析。
在数据整理过程中，我们进行了 数据校验，确保数据的准确性和 可靠性。
数据处理与图表绘制
数据处理
我们对实验数据进行处理，包括数据 清洗、数据转换和数据变换等。
图表绘制
根据处理后的数据，我们绘制了图表， 包括柱状图、折线图和饼图等，以便 更好地展示数据和发现数据之间的关 系。
实验应用血细胞计数 板对酵母菌进行计数
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 实验结论 • 参考文献
01
实验目的
掌握血细胞计数板的使用方法
了解血细胞计数板的构造和原理
血细胞计数板是一种用于细胞计数的工具，由一块载玻片和一块盖玻片组成， 上面刻有方格，用于放置细胞悬液。通过显微镜观察，可以对细胞进行计数。
03
实验步骤
准备实验材料
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04
血细胞计数板：用于计数酵母 菌的数量。
显微镜：用于观察和计数酵母 菌。
试管、吸管、培养皿等：用于 制备酵母菌悬液。
无菌水、营养琼脂培养基等： 用于培养和制备酵母菌。
制备酵母菌悬液
将营养琼脂培养基倒入培养皿 中，待其冷却凝固。
用接种环取少量酵母菌，轻 轻划线在培养基上，放置在
学习正确使用血细胞计数板的方法
在实验过程中，需要掌握如何制备细胞悬液、如何将细胞悬液滴加到计数室、 如何进行显微镜观察等操作步骤。
学习酵母菌的计数方法
了解酵母菌的形态特征
酵母菌是一种单细胞真菌，具有椭圆 或球形的细胞形态，通过出芽方式进 行无性繁殖。
学习酵母菌的计数方法
计算酵母菌数量的方法
计算酵母菌数量的方法
1 酵母菌数量的计算
酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）是用来酿酒和烘焙的有用微生物。
它的数量的计算对于酿酒业和食品行业来说是非常重要的。
幸运的是，计算酵母数量变得非常容易。
1. 微观法
微观法是计算酵母数量最常用的方法。
它需要使用显微镜，使用合适的放大倍数，然后计数酵母单胞菌数量。
然后根据进行计数的界面面积和放大倍数来计算酵母总数。
2. 全自动计数器
全自动计数器能够自动检测酵母菌并进行计数，这种方法省时省力且准确率较高，可大大提高效率。
3. 稀释探定法
稀释探定法是最近开发的方法之一，它利用抗体结合的技术，采用试管中的稀释液和酵母溶液混合，在特定温度下进行反应，采用酵母酸抗体检测，然后根据检测结果计算酵母的数量。
总之，酵母数量的计算已经变得非常容易，使用合适的技术可以快速准确地计算出酵母菌的数量。
关于酵母菌的计数若干问题解析
关于酵母菌的计数若干问题解析关于酵母菌的计数若干问题解析酵母菌的计数是近几次高频考点，血细胞计数板的规格和计数方式始终是个难点，需要进行总结。
有的学生担心教材中提到的计数计算，其实，需要搞清楚血细胞计数板的原理。
利用血细胞计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数法，计得的是活菌体和死菌体的总和。
计数的操作步骤关于计数室每个计数室分为九个大方格，每个大方格有2mm×2mm×0.1mm 或1mm×1mm×0.1mm，浙科版默认第一种，共有400小格。
中央的大方格用于酵母菌的计数。
两种规格的血细胞计数板大方格、中方格和小方格典例解析试题1：将获得的肿瘤细胞培养液稀释100倍后，用血细胞计数板（规格为2mm×2mm×0.1mm）计数，观察到的计数室中细胞分布如图。
问题：培养液中肿瘤细胞的密度是个/mL。
答案：3.6×107解析：通过统计四个角上的总肿瘤细胞数为9+9+10+8＝36个（统计按照教材上的要求），计算出大方格的总数为36×4＝144个，144/0.4mm3×103mL×100倍＝3.6×107个。
（个人认为，此题的肿瘤细胞数目偏少，值得商榷）例题2：酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球计数板每个大方格容积为0.1mm3，由400个小方格组成。
现对某一样液进行检测，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先后再计数。
若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有个。
答案：稀释 2×108（5×400/0.1mm3×103×10mL）计数的操作1．稀释：将酵母菌培养液进行适当的稀释；若菌液不浓，可不必稀释。
2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品：在清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴入一小滴（将计数室充满即可），让菌液沿缝隙自行渗入计数室。
酵母菌大小测定及显微镜直接计数[指南]
![酵母菌大小测定及显微镜直接计数[指南]](https://img.taocdn.com/s3/m/455b9f37ae45b307e87101f69e3143323968f51b.png)
实验一：酵母菌大小测定一、实验器材1、菌种：酵母菌液体培养物2、仪器和其他物品目镜测微尺，镜台测微尺，普通光学显微镜，擦镜纸，载玻片，滴管等。
二、实验目的及要求1、学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。
2、掌握对不同形态细菌大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。
三、基本原理微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。
微生物大小测定需借助测微尺---目镜测微尺和镜台测微尺，两者配合使用。
镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每个小格10μm。
镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格地相对长度。
目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。
测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。
由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。
因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞实际大小。
四、操作步骤1、装目镜测微尺(换目镜)把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝上放在目镜镜筒内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。
※双目显微镜的左目镜通常配有屈光度调节环，不能被取下，因此使用双目显微镜时目镜测微尺一般都安装在右目镜中。
2、校正目镜测微尺（1）放镜台测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。
（2）校正先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。
生物论文：实验酵母菌培养及计数
实验酵母菌培养及计数实验目的1．设计酵母培养条件，培养设计可行的实验方案的能力，培养科学的思维方式。
2．通过培养酵母，观察、收集数据，利用数学方法处理和解释数据、主动构建科学模型。
探究酵母种群数量变动，亲身体验和理解知识的形式过程，感悟种群变动内在规律性，发展科学探究能力。
3．实验过程通过合作交流，信息共享，使全体学生共同发展；培养求真务实、客观公正的科学态度。
实验用具烧杯、试管、玻璃棒、滴管铁架台、酒精灯、纱布、灭菌锅、培养箱显微镜、计数板等课时2（培养基配制、接种一课时，培养后计数、分析一课时）准备工作查阅相关资料，准备好实验器具、材料、设计好实验方法和培养条件，设计计数的时间与方法，设计研究结果的记录表格。
实验步骤1、培养基的配制。
可采用豆芽计蔗糖培养基。
配制方法是：称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加水1000ml，煮沸约半小时，用纱布过滤。
用水补足原量，再加入蔗糖50g，煮沸溶化。
98kPa灭菌20min。
2、培养。
无菌条件下接种适量啤酒酵母（或其他酵母），在25°C、有氧、无菌条件下培养24h。
3、计数。
可采用显微镜直接计数法计数。
具体步骤如下：①取样。
从接种后开始，每隔1h吸取一次样液，连续吸取24 h。
培养后期，菌体浓度变大，可适当稀释（记录稀释倍数）。
②加样品。
将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，用无菌的细口滴管将啤酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室。
注意不可有气泡产生。
③显微镜计数。
静止5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍物镜找到计数室所在的位置，然后换成高倍镜进行计数。
每个计数室选5个中格（可选4个角和中央的中格）中的菌体进行计数。
位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。
如遇酵母出芽，芽体大小达到母体细胞一半时，即作为两个菌体计数。
为了减小误差，计数一个样品要至少从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。