LAMP原理培训PPT
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LAM 技术及应用
LAMP技术及应用
湖北省疾控中心结防所 周丽平
2020/3/6
LAMP技术
环介导等温扩增法(loop mediated isothermal amplification , LAMP ) ,是一种在恒定温度下实现核酸 的指数级扩增的技术
已经被用来快速检测动物病原(病毒、细菌、寄生虫) LAMP技术因其特异、敏感、简便、快捷、检测方式对
2020/3/6
LAMP法在结核菌检测中的应用 技术特点：
➢ 适宜的检测对象 以临床上引起结核感染的结核分枝杆菌复合群为检测 对象，可避免假阳性过高。
➢ 反应管预装反应体系 扩增及检测在全封闭反应管中进行，有效降低气溶胶 污染；用户操作简便、减少操作误差。
➢ 结果易读 产物和显色液直接显色即可肉眼判断结果。
沉淀的产生来肉眼直接判断扩增反应是否进行。（图B）
➢ 通过荧光染料检测 有时，通过肉眼观察白色沉淀来检测会存在一定的误差，所
以也可通过添加荧光染料，如溴化乙锭(EB)、SYBR GreenI等进行 染色，来检测扩增是否发生。（图C）
2020/3/6
2020/3/6
LAMP法在结核菌检测中的应用 靶标限定: 结核分枝杆菌复合群
交叉引物发 RNA等温扩增法等
地市级
省、自治区
结核分枝杆菌及是否对 利福平和异烟肼耐药 基因芯片 溶解曲线 线性探针
湖北省疾控中心结防所 周丽平
2020/3/6
LAMP技术
环介导等温扩增法(loop mediated isothermal amplification , LAMP ) ,是一种在恒定温度下实现核酸 的指数级扩增的技术
已经被用来快速检测动物病原(病毒、细菌、寄生虫) LAMP技术因其特异、敏感、简便、快捷、检测方式对
2020/3/6
LAMP法在结核菌检测中的应用 技术特点：
➢ 适宜的检测对象 以临床上引起结核感染的结核分枝杆菌复合群为检测 对象，可避免假阳性过高。
➢ 反应管预装反应体系 扩增及检测在全封闭反应管中进行，有效降低气溶胶 污染；用户操作简便、减少操作误差。
➢ 结果易读 产物和显色液直接显色即可肉眼判断结果。
沉淀的产生来肉眼直接判断扩增反应是否进行。（图B）
➢ 通过荧光染料检测 有时，通过肉眼观察白色沉淀来检测会存在一定的误差，所
以也可通过添加荧光染料，如溴化乙锭(EB)、SYBR GreenI等进行 染色，来检测扩增是否发生。（图C）
2020/3/6
2020/3/6
LAMP法在结核菌检测中的应用 靶标限定: 结核分枝杆菌复合群
交叉引物发 RNA等温扩增法等
地市级
省、自治区
结核分枝杆菌及是否对 利福平和异烟肼耐药 基因芯片 溶解曲线 线性探针
UV lamp讲解
次氯酸纳
NaOCl + H2O NaOH + HOCl
HOCl and ClO- 紫外吸收光谱
250
HOCl
Molar Absorption -1 -1 Coefficient / M cm
200 150 100 50 0 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 Wavelength / nm
Hydrochloric Acid Oxygen Nitrogen
氯胺分解最佳紫外波长
MCA
Hanovia Medium-Pressure Arc Tube Low-Pressure Lamp
DCA
TCA
180
200
220
240
260
280
300
320
Wavelength (nm)
谢谢
欢迎讨论
ClO-
余氯脱除光化学机理
自由氯 (此氯酸或次氯酸根) UV 分解波长范围
2 HOCl + h → O2 + 2 HCl 2 OCl- + h → O2 + 2 Cl-
(290 - 350 nm)
UV 剂量要求：
1 log 余氯脱除需 900mJ/cm2UV
8.1氯胺（氯臭）分解
氯胺分解
UV
LED照明灯具基础培训ppt课件
红色光： 630nm - 620nm - 橙红 橙色光： 605nm - 琥珀色光 绿 色 ： 525nm - 纯绿色 蓝 色： 470nm - 460nm-鲜亮蓝色； 450nm - 纯蓝色 ； UV-A型紫外线光： 370nm -几乎是不可见光，受木质玻璃滤 光时显现出一个暗深紫色。
四、驱动电流 LED在其电流极限参数范围内流过LED的电流越大，它的发光亮度就越高.即 LED的亮度与它的工作电流成正比.但如果流过LED的电流超出极限参数范围,LED 就会出现饱和,不仅使发光效率大幅降低,而且使用寿命也会缩短 五、光线分布处理 LED是一个方向性的点光源，如何创造性地应用LED的这个特点，营造一个舒适的光环境是LED灯光学设计技术的核心。LED光源本身一般会有透镜或者透射材料，用于提高光线出射效率，同时满足出光约120度的配光分布，一般称为一次光学设计。但是为了满足室内照明的各种需求，需要将光根据需要重新分配，采用何种方式将LED发出的光进行二次分配，以达到舒适的光环境，也是影响LED品质的重要因素。
恒流精度： 恒流精度意指当驱动电源的输入电压在一定范围内变化时，输出电流波动值与 额定输出电流之比，通常用百分数来表示.如某LED驱动电源额定输出电流0.45A, 当输入电压在AC80~264V变化时，测得输出电流在0.43-0.45之间变化,那么恒流 精度=(0.45-0.43)÷0.45≈0.045 =4.5%.恒流精度越高,则LED工作越稳定,反之,则 会出现频闪现象，更为严重的还会导致LED失效。 电磁兼容： 电磁兼容（EMC）是指设备或系统在所处的电磁环境中能正常工作并且不对 该环境中任何其他事物构成不能承受的电磁骚扰的能力（如导致收音机无法正常 播放、导致电视画面出现杂迅等现象）。
四、驱动电流 LED在其电流极限参数范围内流过LED的电流越大，它的发光亮度就越高.即 LED的亮度与它的工作电流成正比.但如果流过LED的电流超出极限参数范围,LED 就会出现饱和,不仅使发光效率大幅降低,而且使用寿命也会缩短 五、光线分布处理 LED是一个方向性的点光源，如何创造性地应用LED的这个特点，营造一个舒适的光环境是LED灯光学设计技术的核心。LED光源本身一般会有透镜或者透射材料，用于提高光线出射效率，同时满足出光约120度的配光分布，一般称为一次光学设计。但是为了满足室内照明的各种需求，需要将光根据需要重新分配，采用何种方式将LED发出的光进行二次分配，以达到舒适的光环境，也是影响LED品质的重要因素。
恒流精度： 恒流精度意指当驱动电源的输入电压在一定范围内变化时，输出电流波动值与 额定输出电流之比，通常用百分数来表示.如某LED驱动电源额定输出电流0.45A, 当输入电压在AC80~264V变化时，测得输出电流在0.43-0.45之间变化,那么恒流 精度=(0.45-0.43)÷0.45≈0.045 =4.5%.恒流精度越高,则LED工作越稳定,反之,则 会出现频闪现象，更为严重的还会导致LED失效。 电磁兼容： 电磁兼容（EMC）是指设备或系统在所处的电磁环境中能正常工作并且不对 该环境中任何其他事物构成不能承受的电磁骚扰的能力（如导致收音机无法正常 播放、导致电视画面出现杂迅等现象）。
灯具分类照明培训 教学PPT课件
低压钠灯
High-pressure sodium lamp
高压钠灯
Lighting Source
Metal Halide Lamp 金卤灯
Tungsten halogen lamp 卤钨灯
LED 灯珠
PART
灯具分类
灯具分类（从安装位置分）
-- 室内灯具
筒灯
条形灯 天棚灯
灯盘
-- 户外灯具
路灯
Lawn light 草坪灯
Recessed light 埋地灯
PART
应用场景分类
应用场景分类
Industrial Lighting 工业照明
特点： 专业性 对参数的要求严格 定制化尺寸 利润高 销售量小
Commercial Lighting 商业照明
特点： 通用性 标准参数 标准尺寸 利润低 销售量大
8. 户外场景
特点： 配合建筑设计，凸显轮廓 适合产品： 壁灯 投光灯
Residential Lighting 家居照明
特点： 个性化 多样性参数 多样性尺寸 利润较 销售量较大
应用场景分类
Roadway Lighting 道路照明
特点： 光线分布宽而均。 具有防水、防锈、
防爆特点。 安装维修方便。 多用于工程项目。
Landscape lighting 景观照明
特点： 照明功能+艺术装饰
High-pressure sodium lamp
高压钠灯
Lighting Source
Metal Halide Lamp 金卤灯
Tungsten halogen lamp 卤钨灯
LED 灯珠
PART
灯具分类
灯具分类（从安装位置分）
-- 室内灯具
筒灯
条形灯 天棚灯
灯盘
-- 户外灯具
路灯
Lawn light 草坪灯
Recessed light 埋地灯
PART
应用场景分类
应用场景分类
Industrial Lighting 工业照明
特点： 专业性 对参数的要求严格 定制化尺寸 利润高 销售量小
Commercial Lighting 商业照明
特点： 通用性 标准参数 标准尺寸 利润低 销售量大
8. 户外场景
特点： 配合建筑设计，凸显轮廓 适合产品： 壁灯 投光灯
Residential Lighting 家居照明
特点： 个性化 多样性参数 多样性尺寸 利润较 销售量较大
应用场景分类
Roadway Lighting 道路照明
特点： 光线分布宽而均。 具有防水、防锈、
防爆特点。 安装维修方便。 多用于工程项目。
Landscape lighting 景观照明
特点： 照明功能+艺术装饰
LAMP兄弟连Linux课件PPT 270页【高级版】
权限管理命令：umask
命令名称：umask 命令所在路径：/bin/umask 执行权限：所有用户 语法：umask [-S] -S 以rwx形式显示新建文件或目录缺省权限 功能描述：显示、设置文件的缺省权限 范例： $ umask $ umask -S
文件搜索命令：which
命令名称：which 命令所在路径：/usr/bin/which 执行权限：所有用户 语法：which [命令名称] 功能描述：显示系统命令所在目录 范例：$ which ls
文件处理命令：mv
范例： $ mv file1 file3 将当前目录下文件file1更名为file3 $ mv file2 dir2 将文件file2移动到目录dir2下
文件处理命令：rm
命令名称：rm 命令英文原意：remove 命令所在路径：/bin/rm 执行权限：所有用户 语法：rm -r [文件或目录] -r 删除目录 功能描述：删除文件
命令行远程管理工具： Putty、SecureCRT 用户登录成功后，系统缺省的主提示符， 普通用户为“$”；超级用户root为“#”。 用户退出系统的方法有两种： 1 ) 键入命令：exit或logout 2 ) 在提示符下按Ctrl+D组合键
Linux 常用命令
文件命名规则
1）除了 / 之外，所有的字符都合法。 2）有些字符最好不用，如空格符、制表符、 退格符和字符 @ # $ & ( ) - 等。 3）避免使用 . 作为普通文件名的第一个字符。 4）大小写敏感。
lamp原理
lamp原理
气体放电灯（Lamp）原理是利用气体放电产生光的现象。该原理基于气体分子在电场作用下的激发跃迁和复合过程。
当电压施加到灯的两个电极上时，形成了一个电场。在普通的气体放电灯中，灯内充满了惰性气体（如氩气、氖气等）。气体分子在电场的作用下，被激发到高能级态。当分子从高能级态退回到低能级态时，会释放出光子。这些光子具有特定的能量和频率，从而产生可见光或紫外光的辐射。
在灯内部的一个电极上覆盖有电子发射物质（如石墨），这个电极称为阴极。当电压升高到一定程度时，阴极表面的电子被电场加速并发射出来，形成电流。这些发射出的电子被称为自由电子。
自由电子沿着电场方向移动，通过碰撞或电场的作用，会将气体分子激发到高能级态。激发态的分子非常不稳定，会迅速退回到低能级态，释放出光子。这些光子会沿着各个方向散射，并最终通过灯体外壳发出光线。
普通气体放电灯中的光谱是由气体分子的能级结构决定的。不同的气体和气体混合物的能级结构不同，因此其辐射的光谱也不同。例如，氖气灯产生的是黄光，而氩气灯则发出紫色光。
总结来说，气体放电灯原理是利用气体分子在电场作用下被激发和复合过程中释放出的光子产生光。通过控制电压和气体类型，可以改变光源的颜色和亮度。
背光源知识培训
单颗LED发光
LED阵列发光
侧背光的工作原理
问题：如何做到
面出光
下面从侧背光光路分析其工作原理。
点光源入射
全反射效应：
导光板多是由PMMA或透明PC料制造的，它的折射系 数N1=1.4916，大于空气的折射系数N2=1；当光线 从导光板射向边界时,只要入射角Ⅰ1大于某一角度时， 光线不再有折射分量，而是全部被反射回导光板中 （如图），根据折射定理：求临界角I0
PMMA常用于手工样品。
透明PC料强度高、可弯折性能 好，可耐温高，一般适用于结构较复 杂产品。
透明PC料规格一般有：PC1250Y、 LC1500
LC1500
彩屏背光通常选用
PC1250Y
一般用于普通侧背光
BACK
在导光板下平面制造按一定规律分布的网状小凸 (凹)点的网点.
当光线射到网点上后,全反射现象被破坏,光线形成 一束漫反射光线而射出导光板
❖ 1、普通侧背光反射片 ❖ 2、彩屏背光反射片
BACK
1、普通侧背光反射片
普通侧背光使用白色反射片,常用型号如E20系列、E60L （常用于大尺寸产品）、RW188等；厚度从0.05~0.2mm， 可以根据需要选择。
此类白色反射片的材质一般为E60L：發泡性PET+TiO2，為 Toray專利。
白色反射片外观如右图所示。 此类反射片的反射率约为80%~90%，具有一定的透光性。
LED(lamp)培训教材
Design Dept.
Light Emitting Diode
LAMP物料簡介
PAGE 14
Design Dept.
LAMP物料組成
膠
支架 銀膠
晶片
LED LAMP
金線
PAGE 15
Design Dept.
LAMP物料-晶片
正面陽極 P- layer N-layer GaP N-substrate
PAGE 8
Design Dept.
LED基本知識
• LED運用-發光字
PAGE 9
Design Dept.
LED基本知識
• LED運用-景觀燈條
PAGE 10
Design Dept.
PAGE 11
Design Dept.
LED特性
• LED特點：
體積小
功效高
壽命長
LED 特點
耗電量低
環保
相應速度快
自動Baidu Nhomakorabea膠短烤機
PAGE 29
Design Dept.
LAMP製作流程-封膠流程
灌膠
粘膠
PAGE 30
Design Dept.
LAMP製作流程-封膠流程
插入支架
離模
PAGE 31
Design Dept.
LAMP製作流程-長烤
LAMP,bDNA,NASBA技术原理与应用比较——北京蓝谱
BJLP
北京藍譜生物有限公司
LAMP方法与其他基因扩增法的比较
LAMP Temperature ◎ 65℃ ℃ Isothermal Number of primers Number of enzymes Special reagents Detection Amplification time Total cost △ ◎ ◎ 4 1 None ○ ◎ ◎ △ PCR 60℃⇔95℃ Thermal cycler 2 1 None ○ △ ○ ◎ TMA 40℃ Isothermal 2 2 or 3 NTP △ △ △ ◎ SDA 60℃ Isothermal 4 2 dNTPαS △ ○ ◎ △ LCR 60℃⇔95℃ Thermal cycler 4 1 or 2* None
BJLP
北京藍譜生物有限公司
常用反应体系
FIP,BIP: F3,B3: loopF,B: dNTP: Betaine: Tween20: (NH4)2SO4: MgSO4: KcL: Tris-Hcl(pH8.8): Bst : 40pmol 5pmol 20pmol 1.4mM 0.8M 0.1% 10mM 8mM 10mM 20mM 8U
BJLP
BJLP
二、NASBA技术原理与应用
北京藍譜生物有限公司
BJLP
北京藍譜生物有限公司
LAMP
实验设计流程 将疱疹病毒打入鲤鱼，使其感染病毒，提取DNA （以 野 生型鲤鱼做对照）。 LAMP引物设计（由网站设计） 利用设计引物克隆目的基因片段 LAMP检测病毒条件优化 温度（60-65） Mg2+ （6\8\10mM ） 甜菜碱（0.8、1.2、1.4M）——Mg2+ 8mM LAMP 特异性 提取不同病毒的DNA进行 LAMP灵敏度 反应底物稀释-1—-7 作为模版进行反应，以传统 pcr作为对照 对鲤鱼的KHV检测 提取不同部位的DNA，用传统pcr及LAMP方法进 行检测
郑州蓝宝石生物科技有限公司 研究开发的不开盖LAMP扩增产物纳米指示剂， 能完全避免交叉污染引起的假阳性以及引物二聚体 引起的假阳性。 性价比低，实用性不高
SYBR Green I 该核酸染料可集合与dsDNA双螺旋小沟中，集合后 荧光效果明显（黄色变为绿色）
鲤ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ疱疹病毒
锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus），简称KHV。 因其主要是由DNA类疱疹滤过性病毒感染所引起， 又名鲤鱼肾炎及鳃坏疽病毒。 感染后行动迟钝，食欲不振，身体糜烂可致死。
LAMP
A loop-mediated isothernal amplification 环介导等温扩增PCR
原理
LAMP优点
灵敏度高 （比传统的PCR方法高2～5个数量级） 反应时间短 （30～60分钟就能完成反应） 操作简单（ 不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、 酶和模板混合于反应管中，置于水浴锅或恒温箱中 63℃左右保温30～60分钟，肉眼观察结果）
LAMP技术及应用
LMP技术的发展历程
1990年代：LMP技术开始出现主要应用于小型网站和论坛
2000年代：LMP技术逐渐成熟被广泛应用于大型网站和电子商务平台
2010年代：LMP技术继续发展出现了许多新的框架和工具提高了开发效率和性能
2020年代：LMP技术在云计算、大数据和人工智能等领域得到了广泛应用成为现代互 联网技术的重要组成部分
数据库管理：LMP技术中的MySQL数据库可以用于管理各种数据如 用户数据、产品数据、订单数据等。
云计算平台：LMP技术可以用于搭建云计算平台提供计算、存储、 网络等服务。
03
LMP技术的工作原理
LMP技术的反应原理
• LMP技术是一种基于DN的检测技术用于检测生物样品中的特定基因或基因突变。
• LMP技术的反应原理主要包括以下几个步骤： . 引物设计：设计一对或多对特异性引物用于识别目标基因或 基因突变。 b. 反应体系：将生物样品、引物、DN聚合酶、dNTPs等反应成分混合形成反应体系。 c. 反应过 程：在反应体系中引物与目标基因或基因突变结合DN聚合酶催化DN链的合成形成大量目标基因或基因突变 的拷贝。 d. 检测：通过荧光定量PCR等方法检测目标基因或基因突变的拷贝数从而判断样品中是否存在目标 基因或基因突变。
汇报人：
LMP技术在云计算中的应用
云计算平台：LMP技术在云计算 平台中的应用如WS、zure等
环介导等温扩增技术
环介导等温扩增技术
胡星星 20150511 2015.10.20
主要内容
• 定义 • 原理 • 操作步骤 • 优缺点及
PPT课件
2
定义
环介导等温扩增技术（loopmediated isothermal amplification， LAMP）是指在等温（60-65℃）条件下，利 用链置换DNA聚合酶短时间（通常<1h）内 进行核酸扩增，是一种“简便、快速、精 确、低价”的基因扩增方法。
8
延伸循环步骤
•
产物(10)和(10’)进入延伸循环步
骤，分别形成(11)和(11’)；内部引物又可以(11)
和(11’)作为模板，引导链置换DNA 的合成，使
产物的序列不断延伸、环化、再延伸，最终的产
物是一些具有不同茎长度茎环结构的DNA 和带有
许多环的折叠结构的DNA 的混合物。
PPT课件
9
LAMP法实验室常规操作步骤
PPT课件
17
PPT课件
18
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10
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11
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12
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13
优缺点
• 优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）； 反应时间短（30～60分钟就能完成反应）；临床使用不需 要特殊的仪器（试剂盒研发阶段推荐用实时浊度仪）；操 作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、 酶和模板混合于反应管中，置于水浴锅或恒温箱中63℃左 右保温30～60分钟，肉眼观察结果）。
胡星星 20150511 2015.10.20
主要内容
• 定义 • 原理 • 操作步骤 • 优缺点及
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2
定义
环介导等温扩增技术（loopmediated isothermal amplification， LAMP）是指在等温（60-65℃）条件下，利 用链置换DNA聚合酶短时间（通常<1h）内 进行核酸扩增，是一种“简便、快速、精 确、低价”的基因扩增方法。
8
延伸循环步骤
•
产物(10)和(10’)进入延伸循环步
骤，分别形成(11)和(11’)；内部引物又可以(11)
和(11’)作为模板，引导链置换DNA 的合成，使
产物的序列不断延伸、环化、再延伸，最终的产
物是一些具有不同茎长度茎环结构的DNA 和带有
许多环的折叠结构的DNA 的混合物。
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LAMP法实验室常规操作步骤
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优缺点
• 优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）； 反应时间短（30～60分钟就能完成反应）；临床使用不需 要特殊的仪器（试剂盒研发阶段推荐用实时浊度仪）；操 作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、 酶和模板混合于反应管中，置于水浴锅或恒温箱中63℃左 右保温30～60分钟，肉眼观察结果）。
相关主题
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(4)
3’ F3c F2c F1c
Байду номын сангаас
5’ F3 F2 F1
＋
5’
解离链
F1c F2 F1
(5)
F1
F2
5F’ 1c5’
环状构造
(6) 5’ F1c F2 F1
3’ F1 F2c F1c
(7) 5’ F1c F2 F1
3’ F1 F2c F1c
＋
(8)
F2c
F1c 解离连
F1 3’
环状构造
B1 B2 B3 5’ B1c B2c B3c 3’
离心后放入仪器 62.5℃ 35分钟反应
判定结果
通过浊度上升判断
观察荧光
22
小结：
扩增反应在等温条件（60～65℃）下连续进行
⇒ 可以使用简便、廉价的扩增装置
扩增效率高、可在短时间内完成扩增
⇒ 可在短时间内得出结果
有非常高的特异性
⇒ 可得出“扩增反应发生=有目的菌存在”的结论
产生大量扩增产物，检测方法简便。
Calcein
Mg++ PPi + Mn++
Mn2P2O7
－＋
13
误区：染料采用SYBR Green I
反应前加入：抑制LAMP反应 反应后加入：违背了LAMP不开盖原则 SYBR Green I染料灵敏度高，20pg的DNA也能检测出， 不能特异性地指示LAMP产物
14
实验室方法建立阶段
dNTPs
DNA Polymerase Mg2+, DNA
P2O74- + 2 Mg2+
DNA-(dNMP)n + nPPi
Mg2P2O7
PPi = P2O7
( White precipitate)
11
LAMP法结果判断方式① ----目视检查混浊
dNTPs
DNA Polymerase Mg2+, DNA
⇒ 无需用电泳、特殊探针等，可通过浊度仪、荧光目 视方法确认扩增结果
从扩增到检测可在1个反应试管内（封闭系统）完成
⇒ 可防止由于扩增产物产生的污染。
从RNA经一步反应可完成扩增
⇒ 无需另外进行逆转录反应
23
LAMP法的应用
24
LAMP法的应用领域
灵活运用能够简单、快速地进行基因扩增的特征，在各个领域得到广 泛应用。
3’
B1c B2c B3c
B1c B2c B3c 3’
3’ B2
B1c 5’
BIP 结合
B1c B2c B3c 3’
B2
B1c
B3 Primer 5’ 结合
B1c B2c B3c 3’
B1 B2 B3 5’
B1 B2
5’B1c
环状构造
6
LAMP法的原理 ②
扩增循环
(8)
F1c
B1
F1c F2 F1
• 感染症以外应用
胃癌微转移术中快速诊断
• H.pylori • 真菌
（PubMed检索 keyword「LAMP isothermal amplification」）
进行引物设计，确立LAMP法检测体系→学会报告、论文发表
26
LAMP法试剂盒产品
★细菌・原生动物
环境卫生检查用
Loopamp 军团菌检测试剂盒E （公定法収載） Loopamp クリプトスポリジウム检测试剂盒 Loopamp ジアルジア检测试剂盒
21
流感试剂 操作简介
试剂准备
核酸抽取
LAMP反应
扩增试剂（反应试管），取出需要的 管数（样本＋2）备用
试剂分注
用采样棉签在抽取试剂重搅拌 后，作为样品
添加样品、对照
加样 10μL
引物溶液 新型流感用(H1P)
or 甲型流感用(FluA)
添加引物 15μL
将引物溶液分注到反应试管中
倒置后静置2分钟，颠倒混合5次
5’ B1c B2
Loop Primer F F2
F1 5’
F1c
(11)
B1c B2c B2
3’ B1 B1c
9
环引物的应用 ②
RNA
PS A
癌症转移标志基因
DNA
CYP2C19 公牛特异性序列
HBV
λDNA
快速法（Loop Primer ：有） 标准法（Loop Primer ：无）
10
LAMP法结果判断方式① ----目视检查混浊
F1c 5’
F2 3’ FIP结合
(2) 3’ F3c F2c F1c
5’ F2 F1 F1c
(3)
3’ F3c F2c F1c
F3 Primer
F2 F1
结合
5’ F1c
B1 B2 B3 5’
B1 B2 B3 5’ B1c B2c B3c 3’ B1 B2 B3 5’ B1c B2c B3c 3’
10^7 0.6
10^6
0.5 10^5
0.4
10^4
Turbidity
0.3
10^3
0.2
10^2
0.1
0 0
-0.1
10^1
NC
20
40
60
80
100
120
140
Time
引物选择：
①反应时间短；②扩增效率高；③阴性对照出峰时间是阳 性最低检出限出峰时间的1.5倍以上。
17
LAMP方法建立阶段所需的试剂
例如・・・
食品领域
・食物中毒致病菌的检测 ・食品的卫生管理 ・食物中毒的防止
临床领域
・病原菌・病毒的检测 及鉴定 ・通过SNP多态性分型 决定用药量
农业领域
・植物病害的早期发 现及蔓延防止 ・转基因作物的检测
环境领域
・环境、水中病原微生物 的检测
工业领域
・工业产品用大量 DNA的生产成为可能
畜牧业领域
•Loopamp® 军团菌检测试剂盒C
★病毒 Loopamp H5亜型インフルエンザウイルス检测试剂盒（体外診断用医薬品） Loopamp SARS冠状病毒检测试剂盒（体外診断用医薬品） Loopamp 诺如病毒GI 检测试剂盒 Loopamp 诺路病毒GII 检测试剂盒 Loopamp 引物组WNV Loopamp 引物组Avian Flu H5 Loopamp 引物组Avian Flu H7 Loopamp 引物组KHV （指針収載） H1 pdm 2009引物组（干燥剂形用） FluA引物组（干燥剂形用）
Loopamp H5亚型禽流感检测试剂盒
27
应用LAMP法的诊断试剂
•Loopamp® SARS冠状病毒检测试剂盒
2003年12月、作为体外诊断用医药品开始销售
•Loopamp® H5亚型禽流感病毒检测试剂盒
2008年11月、作为体外诊断用医药品开始销售
•Loopamp® 支原体P检测试剂盒
2010年5月24日、生产销售许可取得
B1 B1c
B2
B2c
B1
F1c F1 F2c F2 F1c F1
B1 B2 B1c
B1c
F2
BIP B1c B2c B1
B1
(10)
B2 B2c B1c
F1
B1c
B2 B2c
F1c
B1
BIP B1c
(11)
7
动画演示
8
环引物的应用 ①
(8)
F1c
F2 F2c F1 3’
F1c
Loop Primer B B1
Purified HBV genomic DNA was used as a template.
Turbidity
15
推荐理由
采用闭管扩增，可从源头上控制气溶胶污染
实时检测，可根据各引物反应时间、效率筛选 最佳引物及反应浓度
LAMP反应时间的确定
16
误区：选择阴性对照不反应的引物
0.8
0.7
F1c
F1 F2c F1c FIP
F1
F2c F2
B2
F2c F2
F1
B1c
F1c
F1c FIP
(9)
F1c
F2c
F2
F1 F1c
F1
B1 B2 B1c F1c F2 F1
B1c B2c B1 B1
B2 B2c
B1c
F1 F2c F1c F1
F2c F2 F1c
B1c BB11cB2 B2c B1
B1c
结果判定的考虑：
不仅仅通过实时浊度，荧光・目视法也能进行结果判断。
20
简易操作过程（以甲型流感为例）
提取咽拭子
放在抽取液中
加入反应引物
加入样本
用干粉试管 提取样本
干粉状试剂 （可常温保存）
1小时之内
新型 A型
颠倒混合5次
RT-LAMP 反应 35分钟
结果判断 目测或浊度仪
检测完成
LAMP=快速、简便、高特异、低成本
DNA 扩增
•模板 DNA •引物
FIP F3 BIP B3 •Bst DNA 聚合酶
•dNTPs •反应缓冲液
RNA 扩增
•模板RNA •引物
FIP F3 BIP B3 •Bst DNA聚合酶 •逆转录酶 •dNTPs •反应缓冲液
18
LAMP法实验室常规操作步骤
样本
DNA/RNA 抽取、提纯
样本中 RNA/DNA的抽取
否判断
△ ２区域 ２ 引物 △ 需其他检测步骤
◎ 无需特殊试剂
◎ 无需特殊试剂
简单、快速、准确的基因扩增法
3
LAMP法的引物设计
4
LAMP法使用的酶
链置换型DNA聚合酶: Bst DNA Polymerase
•扩增对象为双链DNA时，其中一条链解离的同时进行链伸长。 •LAMP法使用最适温度65℃的聚合酶。
引物 ①
双链DNA 聚
引物 聚
双链DNA解离的同时・・・ ②
解离下来的单链DNA 引物
聚 持续链伸长 ③
5
LAMP法的原理 ①
哑铃状模板构造的形成过程
3’ F3c F2c F1c Target DNA B1 B2 B3 5’
5’ F3 F2 F1
B1c B2c B3c 3’
(1)
3’ F3c F2c F1c
检测 应
基因扩增 检检 测测
LAMP
一 步 扩增 反 应 检测
2
LAMP法和PCR法的比较
温度 时间 产物量 特异性
检测 试剂
LAMP
PCR
◎ 反应全程恒温
△ 必须要有热循环
◎ 约１５～６０分钟
△ ２～３小时
◎ 约１０１０倍 (100亿倍) △ 约１０７倍 (1千万倍)
◎
极高 ６区域 ４ 引物
无需其他检测步骤， ◎ 根据扩增反应发生与
★SNPｓ（单碱基多型） Loopamp P450タイピング试剂盒(CYP2C19＊2) Loopamp P450タイピング试剂盒(CYP2C19＊3) Loopamp P450タイピング试剂盒(CYP2C9＊3)
★其他 Loopamp 牛胚胎性别判断试剂盒
Loopamp 诺如病毒GⅡ 检测试剂盒
食品・环境检测用 Loopamp 沙门氏菌检测试剂盒 Loopamp 肠道出血性大肠杆菌检测试剂盒（公定法収載） Loopamp ベロ毒素(VT)タイピング试剂盒 Loopamp 大肠杆菌O157检测试剂盒
Loopamp L.monocytogenes 检测试剂盒 Loopamp カンピロバクター 检测试剂盒 Loopamp 引物组 A.acidoterrestris Loopamp 引物组 冷水病菌（指針収載）
・雌雄性别判断
・病原微生物的检
测 ・遗传病的发现
25
II. LAMP法について
LAMP法的应用例（科研）
论文报告（科研・临床对象）
• 细菌・真菌・寄生虫
• 结核菌、耐酸菌 • 肺炎链球菌 • 支原体 • 流感嗜血杆菌 • 百日咳菌 • 绿脓杆菌（MDR）
• 病毒
HSV CMV VZV EBV HHV-6 HHV-7 HHV-8
约半小时
扩增 检测
1. 试剂调配 2. 样本DNA/RNA添加 3. LAMP反应（扩增） 4. 检测
目视检测（荧光） 实时浊度检测
约1.5小时 以内
19
临床诊断试剂操作步骤
样品前处理的考虑：
核酸提取简单化。例如流感检测试剂盒仅需把棉签在试剂中搅拌即 可完成抽取步骤。
反应液的考虑：
干燥剂型产品，实现了试剂调配过程的简单化；并且使试剂的常 温保存成为可能（区别于传统冷冻保存）。
----推荐采用标准法LAMP检测
Turbidity
0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0 -0.1 0
10 20 30 40 Time (min)
106 105 104 103 Time (min)102 101
0
50 60
copies/reaction
Real-time turbidimeter LA-320c
LAMP技术原理及应用
北京蓝谱生物科技有限公司
米佳 E-mail: mijia@beijinglanpu.com
Tel: 010-82101210/11 Mob: 15601353246
http://www.beijinglanpu.com
1
基因检测的流程
从样本中抽取、提纯 DNA、RNA
PCR
扩增 二 步 反
• MRSA • 疟疾 • 肠毒毒素大肠杆菌
腮腺炎病毒 麻疹病毒 RSV
• 组织侵袭性大肠杆菌（EIEC） 日本脑炎病毒
• 伪膜性结肠炎
• Enterococcus faecalis • 口腔细菌（齿周炎病菌）
细小病毒B19 风疹病毒
登革热病毒
• 绿脓杆菌
埃博拉病毒 腺病毒 流感病毒 HPV HAV
P2O74- + 2 Mg2+
DNA-(dNMP)n + nPPi
Mg2P2O7
PPi = P2O7
( White precipitate)
12
LAMP法结果判断方式②
----目视检查绿色荧光
UV
UV
fluorescence
quenching
Calcein
Mn++
dNTPs
Mg++
LAMP amplification