LAMP原理培训PPT
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LAMP技术 PPT
类型的文件，普通文本格式（仅含序列）, FASTA格式和GenBank 格式文件。 • 第二，从下面三个选项中选择定参数设定（引物设计条件）条件。基于GC含量的自
动判断, 起始的参数是特定的：如果GC含量小于或等于45%.，则选取AT丰度高的区,如 果GC含量高于60%，则选取GC丰度高的区,其它情况是标准设定状态。 • 设计合适的引物是进行LAMP反应的关键，通过考虑碱基组成，GC含量，二级结构 的形成，Tm值等因素可以通过Pimer Explore)(一种专门设计LAMP引物的软件)来设计 LAMP反应的引物。
LAMP技术
10
• 利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷 酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核 苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于 ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处 终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调 整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终 止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处 理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。DNA的复制需要：DNA聚合 酶，双链DNA模板，带有3'-OH末端的单链寡核苷酸引物，4种dNTP（dATP、dGTP、 dTTP和dCTP）。聚合酶用模板作指导，不断地将dNTP加到引物的3'-OH末端，使引 物延伸，合成出新的互补DNA链。如果加入一种特殊核苷酸，双脱氧核苷三磷酸 （ddNTP），因它在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基，故不能同后续的dNTP形成磷酸 二酯键。如，存在ddCTP、dCTP和三种其他的dNTP（其中一种为α-32P标记）的情况 下，将引物、模板和DNA聚合酶一起保温，即可形成一种全部具有相同的5'-引物端和 以ddC残基为3’端结尾的一系列长短不一片段的混合物。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分 离制得的放射性自显影区带图谱将为新合成的不同长度的DNA链中C的分布提供准确信 息，从而将全部C的位置确定下来。类似的方法，在ddATP、ddGTP和ddTTP存在的条 件下，可同时制得分别以ddA、ddG和ddT残基为3‘端结尾的三组长短不一的片段。将 制得的四组混合物平行地点加在变性聚丙烯酰胺凝胶电泳板上进行电泳，每组制品中 的各个组分将按其链长的不同得到分离，制得相应的放射性自显影图谱。从所得图谱 即可直接读得DNA的碱基序列。与DNA复制不同的是sanger测序中的引物是单引物或 者是单链
动判断, 起始的参数是特定的：如果GC含量小于或等于45%.，则选取AT丰度高的区,如 果GC含量高于60%，则选取GC丰度高的区,其它情况是标准设定状态。 • 设计合适的引物是进行LAMP反应的关键，通过考虑碱基组成，GC含量，二级结构 的形成，Tm值等因素可以通过Pimer Explore)(一种专门设计LAMP引物的软件)来设计 LAMP反应的引物。
LAMP技术
10
• 利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷 酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核 苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于 ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处 终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调 整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终 止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处 理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。DNA的复制需要：DNA聚合 酶，双链DNA模板，带有3'-OH末端的单链寡核苷酸引物，4种dNTP（dATP、dGTP、 dTTP和dCTP）。聚合酶用模板作指导，不断地将dNTP加到引物的3'-OH末端，使引 物延伸，合成出新的互补DNA链。如果加入一种特殊核苷酸，双脱氧核苷三磷酸 （ddNTP），因它在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基，故不能同后续的dNTP形成磷酸 二酯键。如，存在ddCTP、dCTP和三种其他的dNTP（其中一种为α-32P标记）的情况 下，将引物、模板和DNA聚合酶一起保温，即可形成一种全部具有相同的5'-引物端和 以ddC残基为3’端结尾的一系列长短不一片段的混合物。经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分 离制得的放射性自显影区带图谱将为新合成的不同长度的DNA链中C的分布提供准确信 息，从而将全部C的位置确定下来。类似的方法，在ddATP、ddGTP和ddTTP存在的条 件下，可同时制得分别以ddA、ddG和ddT残基为3‘端结尾的三组长短不一的片段。将 制得的四组混合物平行地点加在变性聚丙烯酰胺凝胶电泳板上进行电泳，每组制品中 的各个组分将按其链长的不同得到分离，制得相应的放射性自显影图谱。从所得图谱 即可直接读得DNA的碱基序列。与DNA复制不同的是sanger测序中的引物是单引物或 者是单链
环介导等温扩增技术原理ppt课件
与PCR技术相比核酸等温扩增对仪器的要 求大大简化，反应时间大大缩短，更能满足 快速简便的需求。
3
特异性高 分析速度快 成本低 突变率低 不需要升温降温过程，一台的加热器即可操作 检测核酸成分比检测微生物本身危险性小 方便诊断
4
环介导核酸等温扩增技术（LAMP） 滚环扩增技术 RCA 单引物等温扩增 SPIA 依赖解旋酶的等温扩增技术 HAD 链替代扩增 SDA 交叉引物扩增技术 CPA 核酸依赖性扩增检测技术 NASBA Qβ复制酶反应
形 成
基 础 结 构
14
LAMP
15
16
Effect of reaction time on the LAMP nes1,D NA marker(DL2000) with2000,1000,750 ,500,250 and 100bP:lanes2一 5,LAMP amPlification Produets for 15 min,30min,45min,6 0min,respectively:l ane6,without DNA template in the reaction.
LAMP技术以其特异性强、灵敏度高、快速、 准确和操作简便等优点在核酸的科学研究、疾 病的诊断和转基因食品检测等领域得到了日益 广泛的应用。
8
60—65℃是双链DNA复性及延伸的中间温度， DNA在65℃左右处于动态平衡状态。利用引物 合成的DNA链取代模板互补链。
①扩增目的片段时依赖的是一种具有链置换特 性的Bst DNA聚合酶
②需四条能够识别靶序列六个特异区域的引物 ③LAMP法并不需要对双链DNA进行预变性及
进行温度循环。
9
针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3’ 端的F3c、F2c 和Flc区以及5’ 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种 引物。
3
特异性高 分析速度快 成本低 突变率低 不需要升温降温过程，一台的加热器即可操作 检测核酸成分比检测微生物本身危险性小 方便诊断
4
环介导核酸等温扩增技术（LAMP） 滚环扩增技术 RCA 单引物等温扩增 SPIA 依赖解旋酶的等温扩增技术 HAD 链替代扩增 SDA 交叉引物扩增技术 CPA 核酸依赖性扩增检测技术 NASBA Qβ复制酶反应
形 成
基 础 结 构
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LAMP
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Effect of reaction time on the LAMP nes1,D NA marker(DL2000) with2000,1000,750 ,500,250 and 100bP:lanes2一 5,LAMP amPlification Produets for 15 min,30min,45min,6 0min,respectively:l ane6,without DNA template in the reaction.
LAMP技术以其特异性强、灵敏度高、快速、 准确和操作简便等优点在核酸的科学研究、疾 病的诊断和转基因食品检测等领域得到了日益 广泛的应用。
8
60—65℃是双链DNA复性及延伸的中间温度， DNA在65℃左右处于动态平衡状态。利用引物 合成的DNA链取代模板互补链。
①扩增目的片段时依赖的是一种具有链置换特 性的Bst DNA聚合酶
②需四条能够识别靶序列六个特异区域的引物 ③LAMP法并不需要对双链DNA进行预变性及
进行温度循环。
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针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3’ 端的F3c、F2c 和Flc区以及5’ 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种 引物。
灯具标准基础知识培训PPT学习教案
十六灯具上的标记和相应的位置要
求
标记 类别
内容
允许的标记位置
不允许的 标记位置
a类标记
换光源时需要看 的信息(见表3.1第 1列)
换光源时看得到，
应标记在灯具的外 表需或换光源时卸 下的罩盖反面
灯具的 安装面
b类标记
安装时要看的标 灯具外表面或在安
记，见3.1表第2 装期间要卸下的罩
列
盖或部件的反面
要点 电压不是安全特低电压+基本绝 缘+没有地线 电压不是安全特低电压+基本绝 缘+有地线
电压不是安全特低电压+双重绝 缘(或加强绝缘)+无地线
电压为安全特低电压+无地线
第3页/共80页
2021/6/26
4
五、按防触电保护型式分类中的 几个注意问题（一）
1、灯具应只属于一个类别。 2、额定电压超过250V的灯具不应划分为0类。 3、在恶劣条件下使用的灯具不应划分为0类。 4、轨道安装的灯具不应划分为0类。 5、非普通灯具不应划分为0类。 6、 0类灯具可以有部分或全部基本绝缘组成的绝缘材
滴水(垂直滴水)应无有害影响 当外壳从正常位置向上倾斜15° 时,垂直滴水 应无有害影响 与垂直成60° 范围以内的淋水应无有害影响 从任何方向朝外壳溅水应无有害影响
用喷嘴以任何方向朝外壳喷水应无有害影响 猛烈海浪或强烈喷水时，进入外壳的水不应达 到有害的量 以规定压力和时间将外壳浸入水中时，进入的 水不应达到有害的量 设备应适于按制造厂规定的条件下长期潜水 注：通常指水密型，但对某些类型设备也可允 许水进入，但不应达到有害程度
第7页/共80页
2021/6/26
8
九、正确使用IP代码的规定
LAMP常识培训
16
6. LAMP的构成部件
LENS PROJECTION
（透镜）
BASE PLATE （基座）
Lens （面罩）
汽研总院 总师办
Chery Chief Engineer’s Office
SHIELD
BULB
（遮光罩）
REFLECTOR （反射镜）
BULB (H11) LOW（近光灯灯泡）
LOW BEAM (PROJECTION LAMP)（近光灯）（透镜式）
20
6. LAMP的构成部件
汽研总院 总师办
Chery Chief Engineer’s Office
6-4, Hi. Mtd. Stop LAMP（高位制动灯）- BULB（灯泡）
COVER （盖子/壳体）
LENS （面罩）
REFLECTOR （反射镜）
BASE PLATE （基座）
T/SCREW （自攻钉）
17
6. LAMP构成部件
Glare Area （发光面积）
有效配光范围
汽研总院 总师办
Chery Chief Engineer’s Office
BULB(H9) FOR HIGH （远光灯灯泡）
HIGH BEAM（远光灯）
18
6. LAMP的构成部件
6-2, REAR COMBI. LAMP（后尾灯） - BULB（灯泡）
FLANGE （装饰板）
STRIP （密封条）
HOUSING （壳体）
IN-LENS （内面罩）
汽研总院 总师办
Chery Chief Engineer’s Office
LENS （面罩）
MT’G BOLT （安装螺栓）
SHIELD （遮光罩）
6. LAMP的构成部件
LENS PROJECTION
（透镜）
BASE PLATE （基座）
Lens （面罩）
汽研总院 总师办
Chery Chief Engineer’s Office
SHIELD
BULB
（遮光罩）
REFLECTOR （反射镜）
BULB (H11) LOW（近光灯灯泡）
LOW BEAM (PROJECTION LAMP)（近光灯）（透镜式）
20
6. LAMP的构成部件
汽研总院 总师办
Chery Chief Engineer’s Office
6-4, Hi. Mtd. Stop LAMP（高位制动灯）- BULB（灯泡）
COVER （盖子/壳体）
LENS （面罩）
REFLECTOR （反射镜）
BASE PLATE （基座）
T/SCREW （自攻钉）
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6. LAMP构成部件
Glare Area （发光面积）
有效配光范围
汽研总院 总师办
Chery Chief Engineer’s Office
BULB(H9) FOR HIGH （远光灯灯泡）
HIGH BEAM（远光灯）
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6. LAMP的构成部件
6-2, REAR COMBI. LAMP（后尾灯） - BULB（灯泡）
FLANGE （装饰板）
STRIP （密封条）
HOUSING （壳体）
IN-LENS （内面罩）
汽研总院 总师办
Chery Chief Engineer’s Office
LENS （面罩）
MT’G BOLT （安装螺栓）
SHIELD （遮光罩）
灯具基础知识培训教材课件
IP防护等级
◆IP防护等级 第一个号码 防尘等级
0 无防护 无特殊的防护 1 防止大于50mm的物体侵入
防止人体不慎碰到灯具内部零件，防止直径大于50mm物体侵入 2 防止大于12mm的物体侵入
防止手指碰到灯具的内部零件 3 防止大于2.5mm的物体侵入
防止直径大于2.5mm的工具、电线或物体的侵入 4 防止大于1.0mm的物体侵入
灯具
➢ 照明基础知识教程（三）
什么是灯具？？？
灯具
灯具 是为光源提供必要的电气连接， 并控制光源、光线的投照方式， 同时又能起到保护光源，提高 照明效率的照明工具
灯具
灯具 是为光源提供必要的电气连接， 并控制光源、光线的投照方式， 同时又能起到保护光源，提高 照明效率的照明工具
灯具
灯具 是为光源提供必要的电气连接， 并控制光源、光线的投照方式， 同时又能起到保护光源， 提高照明效率的照明工具
4、方向射灯
5、射灯及导轨灯
灯具分类
➢ 室内照明-冷光杯及反射嵌灯
常用光源： MR16、MR11
灯具分类
➢ 室内照明-节能筒灯
常用光源： ESB、PL
灯具分类
➢ 室内照明-商业斗胆灯
常用光源： MR16、AR111、ESB
灯具分类
➢ 室内照明-办公支架灯
常用光源： T5、T8、PL
灯具分类
太阳能电池板是太阳能发电系统中的核心 部分，也是太阳能发电系统中价值最高的 部分。其作用是将太阳的辐射能力转换为 电能，或送往蓄电池中存储起来，或推动 负载工作。太阳能电池板的质量和成本将 直接决定整个系统的质量和成本。
灯具分类
➢ 太阳能系统各部件的作用 （二）太阳能控制器：
太阳能控制器的作用是控制整个系统的工 作状态，并对蓄电池起到过充电保护、过 放电保护的作用。在温差较大的地方，合 格的控制器还应具备温度补偿的功能。其 他附加功能如光控开关、时控开关都应当 是控制器的可选项。
lamp原理
lamp原理
气体放电灯（Lamp）原理是利用气体放电产生光的现象。
该原理基于气体分子在电场作用下的激发跃迁和复合过程。
当电压施加到灯的两个电极上时，形成了一个电场。
在普通的气体放电灯中，灯内充满了惰性气体（如氩气、氖气等）。
气体分子在电场的作用下，被激发到高能级态。
当分子从高能级态退回到低能级态时，会释放出光子。
这些光子具有特定的能量和频率，从而产生可见光或紫外光的辐射。
在灯内部的一个电极上覆盖有电子发射物质（如石墨），这个电极称为阴极。
当电压升高到一定程度时，阴极表面的电子被电场加速并发射出来，形成电流。
这些发射出的电子被称为自由电子。
自由电子沿着电场方向移动，通过碰撞或电场的作用，会将气体分子激发到高能级态。
激发态的分子非常不稳定，会迅速退回到低能级态，释放出光子。
这些光子会沿着各个方向散射，并最终通过灯体外壳发出光线。
普通气体放电灯中的光谱是由气体分子的能级结构决定的。
不同的气体和气体混合物的能级结构不同，因此其辐射的光谱也不同。
例如，氖气灯产生的是黄光，而氩气灯则发出紫色光。
总结来说，气体放电灯原理是利用气体分子在电场作用下被激发和复合过程中释放出的光子产生光。
通过控制电压和气体类型，可以改变光源的颜色和亮度。
LED(lamp)培训教材
出貨批號
LOT NO.: E L L 8 7 0 0 0 9
E:系統代碼（ERP） L: 倉別 L:監管倉 L: LAMP 8：年份 08年 7：月份 7月 0009：流水號 F:完稅倉
Bin Code(G) F G
Max 6.05 8.47
Dominant Wavelength(D), Unit:nm@20mA Bin Code(G) Min G17 G18 567 569
© 2008 PARA Corporation
背面陰極
P -Electrode P -t ype GaN Active Layer N-t ype GaN N-Elect rode Sapphire 356 P assivation
PAGE 16
Design Dept.
LAMP物料-支架
PAGE 17
Design Dept.
LAMP物料-銀膠、膠、金線
LED(Lamp)知識簡介
Black He
Deputy Manager heyang@
July, 2008
© 2008 PARA Corporation
Design Dept.
目錄
LED基本知識及特性 LAMP物料簡介及選擇
LED(lamp) 知識
LAMP製作流程介紹 LAMP電氣特性說明
PAGE 22
Design Dept.
Light Emitting Diode
LAMP製作流程介紹
PAGE 23
Design Dept.
LAMP製作流程-總圖
擴晶
短烤
長烤
包裝
QA
固晶
封膠
切一
分 BIN
入庫
LAMP技术及应用
琼脂糖凝胶电泳法
由LAMP原理可知，LAMP反应的最终扩增产物是茎环DNA组 成的混合物，即有若干倍茎长度的茎环结构和类似花椰菜的结构。 因此，LAMP扩增产物在2％的琼脂糖凝胶糖上呈现的是典型的梯 状条带。（图A）
肉眼观察法
在LAMP反应过程中，可以通过产生的副产物焦磷酸镁白色 沉淀的产生来肉眼直接判断扩增反应是否进行。（图B）
LAMP法使用的酶
链置换型DNA聚合酶: Bst DNA Polymerase
扩增对象为双链DNA时，其中一条链解离的同时进行链延长。 LAMP法使用最适温度65℃的聚合酶。
LAMP法的引物设计
LAMP法的原理
LAMP法的原理
LAMP法所需的试剂
LAMP法常规操作步骤
LAMP法的检测方法
LAMP法在结核菌检测中的应用 靶标限定: 结核分枝杆菌复合群
临床上感染人类的是结核分枝杆菌复合群，包括结核分枝 杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、非洲分枝杆菌、卡氏 分枝杆菌。 对检测对象的准确限定能避免假阳性过高而增加治疗成本， 长远来说，更有利于避免耐药性的产生。 gyrB基因作为结核分枝杆菌重要的功能基因，在复合群进 化过程中非常保守，LAMP法检测即以gyrB基因作为靶标。
比传统PCR大大节省了时间和实验操作步骤。
LAMP法和其他PCR法的比较
LAMP法和其他PCR法的比较
技术特点
特异性高 4条引物靶向目标基因6个区段，特异性高于PCR和qPCR 灵敏度高 扩增模板可低至每测试10拷贝或更少。 检测时间短 恒温扩增，省却温度循环，扩增时间60min。 设备简易，可同时检测多批样本 不需特定或高端检测仪器，恒温设备即可，例如水浴锅， 可以随时放入后续批次样本。
由LAMP原理可知，LAMP反应的最终扩增产物是茎环DNA组 成的混合物，即有若干倍茎长度的茎环结构和类似花椰菜的结构。 因此，LAMP扩增产物在2％的琼脂糖凝胶糖上呈现的是典型的梯 状条带。（图A）
肉眼观察法
在LAMP反应过程中，可以通过产生的副产物焦磷酸镁白色 沉淀的产生来肉眼直接判断扩增反应是否进行。（图B）
LAMP法使用的酶
链置换型DNA聚合酶: Bst DNA Polymerase
扩增对象为双链DNA时，其中一条链解离的同时进行链延长。 LAMP法使用最适温度65℃的聚合酶。
LAMP法的引物设计
LAMP法的原理
LAMP法的原理
LAMP法所需的试剂
LAMP法常规操作步骤
LAMP法的检测方法
LAMP法在结核菌检测中的应用 靶标限定: 结核分枝杆菌复合群
临床上感染人类的是结核分枝杆菌复合群，包括结核分枝 杆菌、牛分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、非洲分枝杆菌、卡氏 分枝杆菌。 对检测对象的准确限定能避免假阳性过高而增加治疗成本， 长远来说，更有利于避免耐药性的产生。 gyrB基因作为结核分枝杆菌重要的功能基因，在复合群进 化过程中非常保守，LAMP法检测即以gyrB基因作为靶标。
比传统PCR大大节省了时间和实验操作步骤。
LAMP法和其他PCR法的比较
LAMP法和其他PCR法的比较
技术特点
特异性高 4条引物靶向目标基因6个区段，特异性高于PCR和qPCR 灵敏度高 扩增模板可低至每测试10拷贝或更少。 检测时间短 恒温扩增，省却温度循环，扩增时间60min。 设备简易，可同时检测多批样本 不需特定或高端检测仪器，恒温设备即可，例如水浴锅， 可以随时放入后续批次样本。
LAMP技术剖析
• • •
3 LAMP的特点 LAMP与以往的核酸扩增方法相比具有如下优点： (1)操作简单，LAMP核酸扩增是在等温条件下进行，对于中小医院只需要水浴锅即可， 产物检测用肉眼观察或浊度仪检测沉淀浊度即可判断。对于RNA的扩增只需要在反应 体系中加入逆转录酶就可同步进行(RT．LAMP)，不需要特殊的试剂及仪器。 (2)快速高效，因为不需要预先的双链DNA热变性．避免了温度循环而造成 的时间损失．核酸扩增在l h内均可完成，添加环状引物后时间可以节省1／2，多数情 况在20。30 rain均可检测到扩增产物。且产物可以扩增至109倍，达0.5 mg／mL．应 用专门的浊度仪可以达到实时定量检测。 (3)高特异性，由于是针对靶序列6个区域设计的4种特异性引物。6个区域中任何区域 与引物不匹配均不能进行核酸扩增。故其特异性极高。 (4)高灵敏度，对于病毒扩增模板可达几个拷贝，比PCR高出数量级的差异。
•2.引物的Trn值
• 引物的Tm值采用近邻分析法(the nearest-neighbor method)来计算，这种方法是目前 认为计算值最接近真实值的一种方法。计算Tm值的时候会受到盐浓度(salt concentration), 寡核苷酸的浓度等实验条件的影响，所以最好是在确定的实验条件下来计算Tm值。
•2．扩增原理 • 60—65℃是双链DNA复性及延伸的中间温度，DNA在65℃左右处于动态平衡状态。因此，DNA在此 温度下合成是可能的。利用4种特异引物依靠一种高活性链置换DNA聚合酶。使得链置换DNA合成在不 停地自我循环。扩增分两个阶段。 • 第1阶段为起始阶段，任何一个引物向双链DNA的互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离， 变成单链。上游内部引物FIP的F2序列首先与模板F2c结合（如图B所示），在链置换型DNA聚合酶的作 用下向前延伸启动链置换合成。外部引物F3与模板F3c结合并延伸，置换出完整的FIP连接的互补单链 （如图C所示）。FIP上的F1c与此单链上的Fl为互补结构。自我碱基配对形成环状结构（如图C所示）。 以此链为模板。下游引物BIP与B3先后启动类似于FIP和F3的合成，形成哑铃状结构的单链。迅速以3’ 末端的Fl区段为起点．以自身为模板，进行DNA合成延伸形成茎环状结构。该结构是LAMP基因扩增循 环的起始结构。 • 第2阶段是扩增循环阶段。以茎环状结构为模板，FIP与茎环的F2c区结合。开始链置换合成，解离出 的单链核酸上也会形成环状结构。迅速以3’末端的B1区段为起点，以自身为模板。进行DNA合成延伸及 链置换．形成长短不一的2条新茎环状结构的DNA，BIP引物上的B2与其杂交。启动新一轮扩增。且产 物DNA长度增加一倍。在反应体系中添加2条环状引物LF和LB，它们也分别与茎环状结构结合启动链置 换合成，周而复始。扩增的最后产物是具有不同个数茎环结构、不同长度DNA的混合物。且产物DNA为 扩增靶序列的交替反向重复序列。
LAMP技术及应用PPT参考幻灯片
➢ 肉眼观察法 在LAMP反应过程中，可以通过产生的副产物焦磷酸镁白色
沉淀的产生来肉眼直接判断扩增反应是否进行。（图B）
➢ 通过荧光染料检测 有时，通过肉眼观察白色沉淀来检测会存在一定的误差，所
以也可通过添加荧光染料，如溴化乙锭(EB)、SYBR GreenI等进行 染色，来检测扩增是否发生。（图C）
安徽省胸科医院&安徽省结防所
19
LAMP法在结核菌检测中的应用
临床试验
—— LAMP法和对照试剂（TB-qPCR）对比结果
➢ 阳性一致率=88.56% ➢ 阴性一致率=93.06% ➢ 总符合率=91.36%
安徽省胸科医院&安徽省结防所
20
WHO 认为LAMP法的检测结果优于痰涂片检测。在 已有肺结核症状的检测者中进行对比，TB-LAMP法比 痰涂片检测法多检出15%的患者。对比WHO近年推荐 的其它快速检测法，如果把TB-LAMP法用于对痰涂片 检测阴性患者的复查，TB-LAMP法检出率要高40%。
➢ 结果易读 产物和显色液直接显色即可肉眼判断结果。
安徽省胸科医院&安徽省结防所
18
LAMP法在结核菌检测中的应用
临床试验
—— LAMP法和对照试剂（BD快速培养）对比结果
➢ 灵敏度＝89.54% ➢ 特异性＝98.93% ➢ 总符合率＝95.31%
阳性结果预期值＝98.13% 阴性结果预期值＝93.77%
5
LAMP法的引物设计
安徽省胸科医院&安徽省结防所
6
LAMP法的原理
安徽省胸科医院&安徽省结防所
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LAMP法的原理
安徽省胸科医院&安徽省结防所
8
LAMP技术特点
沉淀的产生来肉眼直接判断扩增反应是否进行。（图B）
➢ 通过荧光染料检测 有时，通过肉眼观察白色沉淀来检测会存在一定的误差，所
以也可通过添加荧光染料，如溴化乙锭(EB)、SYBR GreenI等进行 染色，来检测扩增是否发生。（图C）
安徽省胸科医院&安徽省结防所
19
LAMP法在结核菌检测中的应用
临床试验
—— LAMP法和对照试剂（TB-qPCR）对比结果
➢ 阳性一致率=88.56% ➢ 阴性一致率=93.06% ➢ 总符合率=91.36%
安徽省胸科医院&安徽省结防所
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WHO 认为LAMP法的检测结果优于痰涂片检测。在 已有肺结核症状的检测者中进行对比，TB-LAMP法比 痰涂片检测法多检出15%的患者。对比WHO近年推荐 的其它快速检测法，如果把TB-LAMP法用于对痰涂片 检测阴性患者的复查，TB-LAMP法检出率要高40%。
➢ 结果易读 产物和显色液直接显色即可肉眼判断结果。
安徽省胸科医院&安徽省结防所
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LAMP法在结核菌检测中的应用
临床试验
—— LAMP法和对照试剂（BD快速培养）对比结果
➢ 灵敏度＝89.54% ➢ 特异性＝98.93% ➢ 总符合率＝95.31%
阳性结果预期值＝98.13% 阴性结果预期值＝93.77%
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LAMP法的引物设计
安徽省胸科医院&安徽省结防所
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LAMP法的原理
安徽省胸科医院&安徽省结防所
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LAMP法的原理
安徽省胸科医院&安徽省结防所
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LAMP技术特点
《LAMP原理及应用》幻灯片
只能有两种结果：扩增和不扩增 靶序列长度控制在300bp以下 灵敏度
三、影响LAMP扩增的因素
1、引物设计 2、模板DNA大小与浓度 3、DNA聚合酶 4、缓冲液
四、LAMP扩增的应用前景
《LAMP原理及应用》幻 灯片
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一、扩增原理
1、引物的设计
2、起始结构的扩增
启动链置换DNA合成
置换先头FIP引物合成的DNA链，并合成自身DNA
FIP引物先合成的DNA链被F3引物进行链置换产生一单链
被置换的单链DNA两端存在互补序列 该结构是LAMP法基因扩增循环的起始结构
3பைடு நூலகம்LAMP法基因扩增循环
在 同 一 条 链 上 互 补 序 列， 周 而 复 始 形 成 大 小 不 一 的 结 构。
二、LAMP法的特点
1、设备、步骤简单 2、高特异性 3、快速、高效扩增 4、灵敏度较高
5、鉴定简便
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DNA 扩增
•模板 DNA •引物
FIP F3 BIP B3 •Bst DNA 聚合酶
•dNTPs •反应缓冲液
RNA 扩增
•模板RNA •引物
FIP F3 BIP B3 •Bst DNA聚合酶 •逆转录酶 •dNTPs •反应缓冲液
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LAMP法实验室常规操作步骤
样本
DNA/RNA 抽取、提纯
样本中 RNA/DNA的抽取
★病毒 Loopamp H5亜型インフルエンザウイルス检测试剂盒（体外診断用医薬品） Loopamp SARS冠状病毒检测试剂盒（体外診断用医薬品） Loopamp 诺如病毒GI 检测试剂盒 Loopamp 诺路病毒GII 检测试剂盒 Loopamp 引物组WNV Loopamp 引物组Avian Flu H5 Loopamp 引物组Avian Flu H7 Loopamp 引物组KHV （指針収載） H1 pdm 2009引物组（干燥剂形用） FluA引物组（干燥剂形用）
dNTPs
DNA Polymerase Mg2+, DNA
P2O74- + 2 Mg2+
DNA-(dNMP)n + nPPi
Mg2P2O7
PPi = P2O7
( White precipitate)
11
LAMP法结果判断方式① ----目视检查混浊
dNTPs
DNA Polymerase Mg2+, DNA
Loopamp H5亚型禽流感检测试剂盒
27
应用LAMP法的诊断试剂
•Loopamp® SARS冠状病毒检测试剂盒
2003年12月、作为体外诊断用医药品开始销售
•Loopamp® H5亚型禽流感病毒检测试剂盒
2008年11月、作为体外诊断用医药品开始销售
•Loopamp® 支原体P检测试剂盒
2010年5月24日、
一 步 扩增 反 应 检测
2
LAMP法和PCR法的比较
温度 时间 产物量 特异性
检测 试剂
LAMP
PCR
◎ 反应全程恒温
△ 必须要有热循环
◎ 约１５～６０分钟
△ ２～３小时
◎ 约１０１０倍 (100亿倍) △ 约１０７倍 (1千万倍)
◎
极高 ６区域 ４ 引物
无需其他检测步骤， ◎ 根据扩增反应发生与
结果判定的考虑：
不仅仅通过实时浊度，荧光・目视法也能进行结果判断。
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简易操作过程（以甲型流感为例）
提取咽拭子
放在抽取液中
加入反应引物
加入样本
用干粉试管 提取样本
干粉状试剂 （可常温保存）
1小时之内
新型 A型
颠倒混合5次
RT-LAMP 反应 35分钟
结果判断 目测或浊度仪
检测完成
LAMP=快速、简便、高特异、低成本
⇒ 无需用电泳、特殊探针等，可通过浊度仪、荧光目 视方法确认扩增结果
从扩增到检测可在1个反应试管内（封闭系统）完成
⇒ 可防止由于扩增产物产生的污染。
从RNA经一步反应可完成扩增
⇒ 无需另外进行逆转录反应
23
LAMP法的应用
24
LAMP法的应用领域
灵活运用能够简单、快速地进行基因扩增的特征，在各个领域得到广 泛应用。
否判断
△ ２区域 ２ 引物 △ 需其他检测步骤
◎ 无需特殊试剂
◎ 无需特殊试剂
简单、快速、准确的基因扩增法
3
LAMP法的引物设计
4
LAMP法使用的酶
链置换型DNA聚合酶: Bst DNA Polymerase
•扩增对象为双链DNA时，其中一条链解离的同时进行链伸长。 •LAMP法使用最适温度65℃的聚合酶。
5’ B1c B2
Loop Primer F F2
F1 5’
F1c
(11)
B1c B2c B2
3’ B1 B1c
9
环引物的应用 ②
RNA
PS A
癌症转移标志基因
DNA
CYP2C19 公牛特异性序列
HBV
λDNA
快速法（Loop Primer ：有） 标准法（Loop Primer ：无）
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LAMP法结果判断方式① ----目视检查混浊
F1c
F1 F2c F1c FIP
F1
F2c F2
B2
F2c F2
F1
B1c
F1c
F1c FIP
(9)
F1c
F2c
F2
F1 F1c
F1
B1 B2 B1c F1c F2 F1
B1c B2c B1 B1
B2 B2c
B1c
F1 F2c F1c F1
F2c F2 F1c
B1c BB11cB2 B2c B1
B1c
★SNPｓ（单碱基多型） Loopamp P450タイピング试剂盒(CYP2C19＊2) Loopamp P450タイピング试剂盒(CYP2C19＊3) Loopamp P450タイピング试剂盒(CYP2C9＊3)
★其他 Loopamp 牛胚胎性别判断试剂盒
Loopamp 诺如病毒GⅡ 检测试剂盒
• MRSA • 疟疾 • 肠毒毒素大肠杆菌
腮腺炎病毒 麻疹病毒 RSV
• 组织侵袭性大肠杆菌（EIEC） 日本脑炎病毒
• 伪膜性结肠炎
• Enterococcus faecalis • 口腔细菌（齿周炎病菌）
细小病毒B19 风疹病毒
登革热病毒
• 绿脓杆菌
埃博拉病毒 腺病毒 流感病毒 HPV HAV
食品・环境检测用 Loopamp 沙门氏菌检测试剂盒 Loopamp 肠道出血性大肠杆菌检测试剂盒（公定法収載） Loopamp ベロ毒素(VT)タイピング试剂盒 Loopamp 大肠杆菌O157检测试剂盒
Loopamp L.monocytogenes 检测试剂盒 Loopamp カンピロバクター 检测试剂盒 Loopamp 引物组 A.acidoterrestris Loopamp 引物组 冷水病菌（指針収載）
LAMP技术原理及应用
北京蓝谱生物科技有限公司
米佳 E-mail: mijia@
Tel: 010-82101210/11 Mob: 15601353246
1
基因检测的流程
从样本中抽取、提纯 DNA、RNA
PCR
扩增 二 步 反
(4)
3’ F3c F2c F1c
5’ F3 F2 F1
＋
5’
解离链
F1c F2 F1
(5)
F1
F2
5F’ 1c5’
环状构造
(6) 5’ F1c F2 F1
3’ F1 F2c F1c
(7) 5’ F1c F2 F1
3’ F1 F2c F1c
＋
(8)
F2c
F1c 解离连
F1 3’
环状构造
B1 B2 B3 5’ B1c B2c B3c 3’
Purified HBV genomic DNA was used as a template.
Turbidity
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推荐理由
采用闭管扩增，可从源头上控制气溶胶污染
实时检测，可根据各引物反应时间、效率筛选 最佳引物及反应浓度
LAMP反应时间的确定
16
误区：选择阴性对照不反应的引物
0.8
0.7
・雌雄性别判断
・病原微生物的检
测 ・遗传病的发现
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II. LAMP法について
LAMP法的应用例（科研）
论文报告（科研・临床对象）
• 细菌・真菌・寄生虫
• 结核菌、耐酸菌 • 肺炎链球菌 • 支原体 • 流感嗜血杆菌 • 百日咳菌 • 绿脓杆菌（MDR）
• 病毒
HSV CMV VZV EBV HHV-6 HHV-7 HHV-8
例如・・・
食品领域
・食物中毒致病菌的检测 ・食品的卫生管理 ・食物中毒的防止
临床领域
・病原菌・病毒的检测 及鉴定 ・通过SNP多态性分型 决定用药量
农业领域
・植物病害的早期发 现及蔓延防止 ・转基因作物的检测
环境领域
・环境、水中病原微生物 的检测
工业领域
・工业产品用大量 DNA的生产成为可能
畜牧业领域
Calcein
Mg++ PPi + Mn++
Mn2P2O7
－＋
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误区：染料采用SYBR Green I
反应前加入：抑制LAMP反应 反应后加入：违背了LAMP不开盖原则 SYBR Green I染料灵敏度高，20pg的DNA也能检测出， 不能特异性地指示LAMP产物
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实验室方法建立阶段
• 感染症以外应用
胃癌微转移术中快速诊断
• H.pylori • 真菌
（PubMed检索 keyword「LAMP isothermal amplification」）
进行引物设计，确立LAMP法检测体系→学会报告、论文发表
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LAMP法试剂盒产品
★细菌・原生动物
环境卫生检查用
Loopamp 军团菌检测试剂盒E （公定法収載） Loopamp クリプトスポリジウム检测试剂盒 Loopamp ジアルジア检测试剂盒
•Loopamp® 军团菌检测试剂盒C
离心后放入仪器 62.5℃ 35分钟反应
判定结果
通过浊度上升判断
观察荧光
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小结：
扩增反应在等温条件（60～65℃）下连续进行
⇒ 可以使用简便、廉价的扩增装置
扩增效率高、可在短时间内完成扩增
⇒ 可在短时间内得出结果