SCSP-401Wistar大鼠骨髓间充质干细胞说明书

大鼠骨髓间质干细胞免疫原性观察

大鼠骨髓间质干细胞免疫原性观察大鼠骨髓间质干细胞（BMSCs）是一种潜在的修复组织损伤和治疗疾病的细胞治疗工具。

在进行相关的临床应用之前，我们需要对其免疫原性进行深入的观察和研究，以确保其安全性和有效性。

本研究旨在对大鼠骨髓间质干细胞的免疫原性进行观察，以期为其临床应用提供参考和指导。

1. 背景骨髓间质干细胞是一种来源广泛、具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，被广泛应用于组织工程和再生医学领域。

BMSCs具有较低的免疫原性和强烈的免疫调节作用，可以有效地抑制炎症反应和调节免疫应答。

一些研究也表明，BMSCs在特定条件下可能会引发免疫反应，因此其免疫原性仍需要进一步研究和验证。

2. 方法本研究使用大鼠作为实验对象，采集大鼠骨髓间质干细胞，经过相关鉴定和扩增后，对BMSCs的免疫原性进行观察。

通过流式细胞术检测BMSCs表面标记物的表达情况，包括MHC-I、MHC-II、CD80、CD86等免疫相关分子。

利用PCR和免疫组化技术检测BMSCs的MHC 类分子、炎症因子和趋化因子的表达水平。

采用淋巴细胞增殖实验和小鼠移植模型验证BMSCs的免疫原性。

3. 结果我们发现，大鼠BMSCs表面表达MHC-I分子，但对MHC-II和共刺激分子CD80、CD86的表达较低。

在炎症和免疫刺激条件下，BMSCs能够表达一系列的免疫调节因子，如IL-10、TGF-β等，并且具有增强淋巴细胞抑制作用的能力。

进一步的实验证实了BMSCs对淋巴细胞的抑制活性，以及在小鼠移植模型中对免疫应答的抑制作用。

4. 讨论本研究结果表明，大鼠BMSCs具有一定程度的免疫原性，但其表面免疫标记物的表达水平较低，并且具有强烈的免疫调节作用。

这表明，大鼠BMSCs在临床应用中具有相对较低的免疫原性和较强的免疫调节作用，具有潜在的临床应用前景。

我们也需要进一步研究不同来源和不同通路的BMSCs的免疫原性差异，以及其在特定疾病和特定环境下的免疫调节效应，以期更好地指导其临床应用。

大鼠骨髓间质干细胞免疫原性观察

大鼠骨髓间质干细胞免疫原性观察骨髓间质干细胞（BMSCs）是一种来源于成年哺乳动物骨髓的多功能细胞群，具有潜在的组织再生和免疫调节功能。

BMSCs具有广泛的分化能力，可以分化为骨骼、脂肪、软骨和肌肉等不同类型的细胞，因此在临床应用中具有广泛的前景。

BMSCs如何通过免疫调节作用对免疫应答产生影响，以及它们在免疫治疗中的作用机制，仍然需要进一步探讨。

本研究旨在观察大鼠BMSCs的免疫原性，并分析其对免疫细胞的影响，以期为BMSCs在免疫治疗中的应用提供实验依据。

材料与方法1. 大鼠BMSCs的分离与培养采用标准方法从大鼠骨髓中分离BMSCs，并进行培养。

培养基由高糖培养基（DMEM/F12）和10%胎牛血清（FBS）组成，含有1%青霉素/链霉素。

BMSCs在37°C的5% CO2培养箱内培养，培养基每两天更换一次。

2. BMSCs表面标记物的鉴定采用流式细胞仪对BMSCs进行表面标记物的鉴定。

使用FITC标记的抗大鼠CD29、CD90、CD44和PE标记的抗大鼠CD45、CD34、CD11b/c抗体进行染色。

检测细胞表面标记物的表达情况。

3. BMSCs的免疫原性观察将BMSCs共培养于与BMSCs未经处理的淋巴细胞，采用CCK-8法检测淋巴细胞的增殖情况。

观察BMSCs对淋巴细胞的免疫调节作用。

4. BMSCs对淋巴细胞相关因子的影响通过ELISA方法检测BMSCs与淋巴细胞共培养后细胞上清液中干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β（TGF-β）的含量变化。

结果流式细胞仪结果显示，BMSCs呈强阳性表达CD29、CD90、CD44，并呈阴性表达CD45、CD34和CD11b/c。

将BMSCs与淋巴细胞共培养后，淋巴细胞的增殖明显减少，与未经处理的淋巴细胞相比，差异显著（P<0.05）。

ELISA结果显示，在BMSCs与淋巴细胞共培养后，细胞上清液中IFN-γ和IL-2的含量显著下降，IL-4、IL-10和TGF-β的含量显著上升（P<0.05）。

Wistar大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

242018 年第 5 卷第 3 期2018 Vol.5 No.3临床医药文献杂志Journal of Clinical MedicalWistar 大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定马思遥1，杨帅兵2，岳晓华2*（1.太原市师苑中学校，山西太原 030013；2.山西中医药大学，山西晋中 030619）【摘要】目的培养Wistar 大鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow stromal cells BMSCs ）并进行鉴定，为大鼠疾病模型的干细胞移植治疗提供可靠的细胞来源。

方法采用全骨髓贴壁法分离培养BMSCs ；流式细胞技术检测细胞表面标志CD29、CD45；对培养细胞进行成脂、成骨诱导分化，检测细胞的分化能力。

结果细胞生长良好，形态呈梭性，表面标志CD29的阳性率达99.43%，CD45的阳性率为3.23%，有成骨和成脂肪的多向分化能力，符合BMSCs 的特点。

结论全骨髓贴壁法培养BMSCs 的方法简便易行，培养的细胞可用于实验大鼠的移植治疗，具有很好的应用价值。

【关键词】骨髓间充质干细胞；Wistar 大鼠；培养；鉴定【中图分类号】R-332 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2018.03.24.03Culture and identify bone marrow stromal cells of Wistar ratsMA Si-yao 1, YANG Shuai-bing 2, YUE Xiao-hua 2*(1.Taiyuan ShiYuan Middle School, Shanxi Taiyuan 030013, China; 2.Shanxi University of ChineseMedicine, Shanxi Jinzhong 030619, China)【Abstract 】Objective To culture and identify bone marrow stromal cells (BMSCs) of Wistar rats, BMSCs will provide cells for animal models of disease. Methods MSCs were isolated and cultured by whole bone marrow adherent method. CD29 and CD45 of cell surface were identiﬁed by ﬂow cytometry. The cultured cells were induced to differentiate into adipose cells and osteoblasts ，the tests were used to detect the multidirectional differentiation of cells. Results The cells grew well, the morphology was shuttle. The positive rate of cell surface antigen markers CD29 and CD45 were 99.43% and 3.23%, respectively. The cells had ability of multidirectional differentiation , these accorded with the characteristics of MSCs. Conclusion The method was simple and easy to culture BMSCs, BMSCs could be used for trans- plantation, this would has Great value.【Key words 】Bone mesenchymal stem cells （MSCs ）; Wistar rat ; Culture ; identify骨髓间充质干细胞（Bone marrow strornal cells ，BMSCs ）是一种从骨髓中分离获得的成体干细胞。

骨髓间充质干细胞对大鼠实验性肺气肿的作用

骨髓间充质干细胞对大鼠实验性肺气肿的作用李旭;李宝平【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2010(000)003【摘要】目的:观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对肺气肿的治疗作用.方法:Wistar大鼠随机分为四组,分别为健康组(A组)、模型组(B组)、生理盐水对照组(C组)和治疗组(D组).B、C、D组均利用烟熏的方法诱导其肺气肿的形成,之后D组采用DAPI 标记的骨髓间充质干细胞进行治疗.结果:4周后取肺组织做病理切片,观察肺泡变化,进行肺泡计数,并计算单位面积平均肺泡数(MNa)和平均肺泡面积(MAA).D组单位面积平均肺泡数明显高于B组(P＜0.05)和C组(P＜0.05),但低于A组(P＜0.05),B 组和C组之间无显著性差异(P＞0.05);B组和D组平均肺泡面积无显著性差异(P＞0.05),B组和C组之间无显著性差异(P＞0.05),D组平均肺泡面积明显低于B组(P ＜0.05)和C组(P＜0.05).MSCs治疗组大鼠肺组织中可见DAPI标记的细胞,并且观察到MSCs在受体肺组织内分化为上皮细胞.结论:经骨髓间充质干细胞治疗的肺气肿模型大鼠的肺泡数较B组和C组明显增加,平均肺泡面积明显减小,且MSCs在肺气肿模型大鼠肺组织中分化为肺泡上皮,说明骨髓间充质干细胞对治疗大鼠实验性肺气肿是有效的.【总页数】3页(P11-13)【作者】李旭;李宝平【作者单位】山西医科大学,山西,太原,030001;山西医科大学,山西,太原,030001【正文语种】中文【中图分类】R329.2+8【相关文献】1.骨髓间充质干细胞移植对木瓜蛋白酶和[60Co]照射所致大鼠肺气肿的作用 [J], 甄国华;刘红梅;张珍祥;张惠兰;顾乃兵;徐永健2.维A酸β-胡萝卜素牛磺酸对大鼠实验性阻塞性肺气肿的预防作用及机制探讨 [J], 庞宝森;王辰;张洪玉;安立;翁心植;牛淑洁3.骨髓间充质干细胞对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的治疗作用 [J], 付裕;滕银燕;徐朝伟;张旭4.己酮可可碱对实验性阻塞性肺气肿大鼠肺的保护作用及机制探讨 [J], 陈阳育;张洪玉;庞宝森;李远红5.骨髓间充质干细胞移植对实验性肺气肿大鼠动脉血气及肺组织病理学变化的影响[J], 李宝平;赵晓建;宋永明;张雷;路鹏雁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠骨髓间质干细胞免疫原性观察

大鼠骨髓间质干细胞免疫原性观察关键词：骨髓间质干细胞；免疫原性；免疫调节材料与方法1. 实验动物：雄性SD大鼠，体重200-250g，年龄8-10周。

2. 分离培养BMSCs：取大鼠胫骨和胫骨间隔组织，将其切碎并置于培养皿中，加入α-MEM培养基，培养于37℃、5%CO2培养箱中。

待细胞密度达到80%时，进行细胞传代。

第三代细胞于培养后使用。

3. 流式细胞仪检测：采用FITC-CD29、FITC-CD45、PE-CD90、PE-CD34等标记物标记BMSCs，在流式细胞仪上进行测定。

4. 大鼠BMSCs免疫原性观察：将BMSCs注射入大鼠体内，观察其对宿主免疫系统的影响；采用CO-IP技术观察BMSCs与免疫细胞的相互作用。

5. 数据分析：采用SPSS 20.0软件进行数据处理，并采用均值±标准差表示。

结果1. 大鼠BMSCs的表面标记物：流式细胞仪检测结果表明，大鼠BMSCs表面表达CD29和CD90，而不表达CD45和CD34，符合BMSCs的表型特征。

2. 大鼠BMSCs的免疫原性观察：将BMSCs注射入大鼠体内后，并未观察到宿主的明显排斥反应，提示BMSCs在体内具有较低的免疫原性。

CO-IP结果表明，BMSCs能够与免疫细胞相互作用，对T细胞的活化及分泌细胞因子具有一定的影响。

结论大鼠BMSCs在体内外均具有较低的免疫原性，并对免疫细胞具有一定的免疫调节作用。

这为大鼠BMSCs在临床应用中的免疫调节治疗提供了一定的实验基础。

其在临床应用中的具体免疫调节机制及安全性尚需进一步研究。

希望本研究成果能够为BMSCs的临床应用提供一定的参考，为进一步研究提供一定的实验基础。

骨髓间充质干细胞抑制Wistar大鼠脊髓损伤区神经元凋亡的实验研究

骨髓间充质干细胞抑制Wistar大鼠脊髓损伤区神经元凋亡的实验研究李东君;高德萱;贾全章;陈玉丙;孙景海;吴传真;王风华;徐爽;刘丽萍;姜大伟【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2011(015)007【摘要】目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)是否具有抑制神经元凋亡的作用.方法 Wistar大鼠120只随机平均分为4组:对照1组为空白对照,对照2组、两治疗组均采用改良Allen法建立大鼠下胸段脊髓损伤模型.治疗1组、治疗2组分别经尾静脉和脊髓损伤区注入BMSCs.术后用免疫组化检测各组Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达.结果术后7天,治疗2组bax、caspase-3阳性细胞表达少于对照2组(P＜0.05),治疗1组Bcl-2阳性细胞表达多于对照2组(P＜0.05);移植后15天,治疗1组bax以及治疗2组caspase-3阳性细胞表达少于对照2组(P＜0.05),治疗1组及治疗2组Bcl-2阳性细胞表达多于对照2组(P＜0.05);移植后30天,治疗1组bax阳性细胞表达少于对照2组(P＜0.05),治疗1组、治疗2组Bcl-2阳性细胞表达多于对照2组(P＜0.05).结论 BMSCs移植上调Bcl-2蛋白表达,下调Caspase-3、Bax蛋白表达,具有抗凋亡作用,可减轻脊髓继发性损伤.【总页数】4页(P1044-1047)【作者】李东君;高德萱;贾全章;陈玉丙;孙景海;吴传真;王风华;徐爽;刘丽萍;姜大伟【作者单位】解放军第208医院,吉林,长春,130062;解放军第208医院,吉林,长春,130062;解放军第208医院,吉林,长春,130062;吉林大学附属第二医院,吉林,长春,130041;解放军第208医院,吉林,长春,130062;解放军第208医院,吉林,长春,130062;解放军第208医院,吉林,长春,130062;解放军第208医院,吉林,长春,130062;吉林大学附属第二医院,吉林,长春,130041;解放军第208医院,吉林,长春,130062【正文语种】中文【中图分类】R331.2+;Q2-33【相关文献】1.移植后的Wistar大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化的实验研究 [J], 陈玉丙;高德萱;张红梅;贾全章;李东君;孙景海;吴传真;王风华;徐爽;刘丽萍;姜大伟2.骨髓间充质干细胞移植联合依达拉奉抑制脑梗死后的神经元凋亡 [J], 马海燕3.骨髓间充质干细胞移植联合依达拉奉抑制脑梗死后的神经元凋亡 [J], 马海燕;4.骨髓间充质干细胞修复Wistar大鼠的脊髓损伤☆ [J], 贾全章;李东君;陈玉丙;孙景海;王风华;徐爽;刘丽萍;高德萱;姜大伟5.大鼠脑缺血损伤后骨髓间充质干细胞移植抑制Bcl-2及Bax介导的神经元凋亡[J], 刘广义;周淑华;徐树贤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

Wistar大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养

Wistar大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养取自Wistar大鼠骨髓，用Wistar大鼠间质干细胞完全培养基贴壁培养，传代扩增至第二代冻存，每支含细胞1×106个。

Wistar大鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养1. 准备好37℃水浴。

2. 准备好Wistar大鼠骨髓间质干细胞完全培养基，温育到37℃。

3. 在15 mL离心管中加入9 mL完全培养基。

4. 从液氮中取出冻存的骨髓间质干细胞，立即放入-80℃冰箱（目的是让进入冻存管的液氮稍加挥发）。

5. 在-80℃放置2-3 min后，取出冻存细胞，将冻存管迅速放入37℃温水中，快速晃动使管中内含物尽快融化。

仔细观察，待冻存管内含物完全融化后取出。

注意：•1 尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险。

•2 要快速完成细胞复苏过程，融化过程时间过长，会造成复苏后的细胞活性较差。

6. 用70%-75%的酒精消毒冻存管口的外壁。

7. 在超净台中打开冻存管，用吸管将细胞冻存悬液移入装有9 mL 完全培养基的15mL离心管中。

注意避免产生气泡。

8. 为了减少细胞损失，往冻存管中加入1 mL完全培养基，稍微吹打，用吸管将这1mL的细胞悬液吸入离心管中，再用吸管将离心管中的细胞轻轻吹打混匀。

9. 将细胞悬液经250 g（对应于Eppendorf 5810R离心机是1134 rpm）离心5 min。

10. 尽量去除上清液，向细胞沉淀物加入1-2 mL的完全培养基（已预热到37℃），轻轻吹打均匀。

11. 将细胞全部接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养器皿中，加入足量的完全培养基。

轻轻摇晃细胞培养器皿使细胞均匀分布。

12. 放入37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。

13. 复苏后的第二天，给复苏的细胞换用新鲜的完全培养基（已预热到37℃）。

14. 之后，每两天给细胞换新鲜的完全培养基直到细胞达80%-90%的汇合度。

15. 当细胞达80%-90%的汇合度，进行消化传代。

骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤-文档

骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤材料和方法1.大鼠BMSCs的培养健康雄性Wistar大鼠，SPF级，年龄30天左右，由湖北省实验动物研究中心提供，合格证号：SCXK（鄂）2008-0005。

全骨髓贴壁法：取一月龄Wistar大鼠，断颈处死；严格无菌条件下取大鼠的双侧后肢的股骨和胫骨，去除骨表面的肌肉组织，Hanks液清洗，剪去骨骺端，暴露骨髓腔；用5ml的无菌注射器吸取Hanks 液冲洗骨髓腔，收集冲出的骨髓细胞，反复吹打制成单细胞悬液；而后接种在T25的培养瓶内，置于37℃ 、5%CO2培养箱内孵育。

首次换液时间为第3天，以后每3天更换培养液一次。

待细胞融合达到70%开始传代。

BrdU标记取实验中培养的第4代BMSCs用于移植，移植前24h更新培养基，加入BrdU，终浓度为10?mol/l，移植前将细胞制成PBS 悬液，并调整细胞浓度为3×104/?l。

2.大鼠脊髓损伤模型的建立[1-3]健康雄性Wistar大鼠，SPF级，体重250g-300g，由湖北省实验动物研究中心提供，合格证号：SCXK（鄂）2008-0005。

大鼠经适应性喂养两天后开始造模，造模前禁食12h，腹腔注射戊巴比妥钠（45-50mg/kg），备皮消毒，铺无菌洞巾，寻找胸椎T9-11，沿正中切开皮肤，经钝性分离筋膜与肌肉，暴露脊椎，打开椎板，暴露脊髓，脊髓右侧半横断损伤，肌肉筋膜皮肤分层缝合，消毒贴创可贴，青霉素肌肉注射50万单位/次。

术后护理：术后前三天每天三次膀胱按摩，术后一周每三天肌肉注射青霉素一次。

每周BBB （basso beattie and bresnahan，BBB）评分一次。

实验分组与项目观察将32只Wistar大鼠随机分为四组：（A）尾静脉注射PBS （ipbs），8只；（B）脊髓局部靶点注射PBS（lpbs），8只；（C）尾静脉注射BMSCs细胞悬液（ibmsc），8只；（D）脊髓局部靶点注射BMSCs细胞悬液（lbmsc），8只。

骨髓间充质干细胞修复Wistar大鼠的脊髓损伤☆

骨髓间充质干细胞修复Wistar大鼠的脊髓损伤☆贾全章;李东君;陈玉丙;孙景海;王风华;徐爽;刘丽萍;高德萱;姜大伟【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2012(000)049【摘要】10.3969/j.issn.2095-4344.2012.49.016% 背景：研究表明,骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤已取得疗效.目的：观察骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠脊髓功能的影响.方法：120只大鼠随机数字表法分为4组：空白组不造模,于脊髓损伤后当天损伤区局部注射生理盐水10μL；模型组采用改良的Al en’s打击法造成脊髓损伤模型,不做任何治疗；低浓度治疗组行脊髓损伤后当天经尾静脉注射浓度为1×109 L-1骨髓间充质干细胞1 mL；高浓度治疗组行脊髓损伤后当天损伤区局部注射浓度为4×1010 L-1骨髓间充质干细胞10μL.结果与结论：损伤后1 d模型组和两治疗组均无恢复迹象,运动评分低于空白组(P<0.01)；损伤7 d,两治疗组运动功能有所恢复,行为学评分均高于模型组,但差异无显著性意义(P >0.05)；损伤15,30 d,两治疗组行为学评分均明显高于模型组(P<0.01).移植后7,15,30 d脊髓病理切片显示治疗组较模型组均有显著恢复.提示骨髓间充质干细胞对脊髓损伤模型大鼠的脊髓功能有修复作用.【总页数】5页(P209-213)【作者】贾全章;李东君;陈玉丙;孙景海;王风华;徐爽;刘丽萍;高德萱;姜大伟【作者单位】解放军第208 医院,吉林省长春市 130062;延边大学医学部,吉林省延吉市 133002;吉林大学附属第二医院,吉林省长春市 130041;解放军第208 医院,吉林省长春市 130062;解放军第208 医院,吉林省长春市 130062;解放军第208 医院,吉林省长春市 130062;吉林大学附属第二医院,吉林省长春市 130041;延边大学医学部,吉林省延吉市 133002;延边大学医学部,吉林省延吉市 133002【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.骨髓间充质干细胞来源的外泌体用于大鼠脊髓损伤修复的初步探索 [J], 王琳;裴双;郭斌;路雁惠;李燕飞;段冉冉;姚要兵;陈雪梅;贾延劼2.骨髓间充质干细胞抑制Wistar大鼠脊髓损伤区神经元凋亡的实验研究 [J], 李东君;高德萱;贾全章;陈玉丙;孙景海;吴传真;王风华;徐爽;刘丽萍;姜大伟3.聚左旋丙交酯纳米纤维联合骨髓间充质干细胞修复大鼠脊髓损伤的效果 [J], 高锋;张晓峰;段艳伟;严怀宁;潘永飞;叶荣4.bFGF与骨髓间充质干细胞联合应用对大鼠脊髓损伤的修复作用 [J], 黄兴锐;徐浩;张晔;蒋元斌;夏春林;方姝晨5.阻断Rho/Rock信号通路联合骨髓间充质干细胞对脊髓损伤大鼠神经功能修复的影响 [J], 李忠伟; 张树文; 贺苗; 陆帅; 郭财进; 陈曦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠骨髓间充质干细胞安全操作及保养规程

大鼠骨髓间充质干细胞安全操作及保养规程引言骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一类多能干细胞，可以分化为多种细胞类型，具有广泛的应用前景。

然而，在实验室中进行大鼠骨髓间充质干细胞的操作和保养时，需要遵循一定的操作规程，以确保实验的安全性和可靠性。

本文将介绍大鼠骨髓间充质干细胞的安全操作及保养规程。

1. 实验操作安全要求在进行大鼠骨髓间充质干细胞的操作时，需要注意以下安全要求：•实验室应定期进行消毒，以保持实验环境的清洁。

•操作人员应佩戴防护手套、实验服和口罩，以防止污染和传播病原体。

•所用的实验器材、培养皿和培养介质等都需要提前消毒处理，以防止细菌和病毒的污染。

•操作过程中应注意避免直接接触大鼠骨髓，以防止伤口感染和交叉感染。

•实验后，实验器材和废弃物应进行妥善处理，以防止污染和传播病原体。

2. 大鼠骨髓间充质干细胞的保养大鼠骨髓间充质干细胞的保养是确保其活力和纯度的重要环节。

下面是大鼠骨髓间充质干细胞的保养规程：2.1 培养基的准备•准备鼠骨髓间充质干细胞培养基，包括DMEM/F12培养基、胎牛血清（FBS）和青霉素/链霉素(PS)溶液。

•使用无菌技术将培养基分装到无菌的培养瓶或培养皿中，密封好并在4°C保存。

2.2 培养皿和培养环境的准备•选择合适的培养皿，如培养瓶、培养皿或培养板等。

建议使用无菌培养瓶，便于培养细胞和观察生长状态。

•将培养皿放入灭菌箱中进行灭菌处理，确保无菌环境。

•在培养实验室中，保持适宜的温度（37°C）和湿度以促进细胞生长。

2.3 细胞的传代与分裂•当细胞生长到80%～90%的密度时，即可进行传代和分裂。

•用PBS缓冲液洗涤细胞，以去除残留培养基和杂质。

•加入适量的胰蛋白酶/EDTA溶液，并放置于37°C恒温培养箱中，使细胞分离。

•加入适量的完全培养基以停止胰蛋白酶的作用，并用显微镜观察细胞的分离情况。

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定干细胞研究一直是生物医学领域的前沿热点，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其具有多向分化潜能和低免疫原性而备受。

在众多研究中，大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法为其在科研和临床领域的应用提供了基础。

本文将就大鼠BMSCs的培养、鉴定方法进行详细介绍，并结合实验数据进行阐述。

BMSCs是一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。

因其来源广泛，免疫原性低，大鼠BMSCs已成为再生医学、免疫调节等领域的重要研究对象。

近年来，随着生物技术的不断发展，BMSCs的培养和鉴定方法也得到了不断优化和改进。

BMSCs的培养需要无菌环境，常用的培养基为DMEM、F12等，添加适量的生长因子和抗生素以维持细胞的生长和存活。

细胞的鉴定主要包括形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实。

其中，表面标志物如CDCD90等可用来区分BMSCs和其他细胞，多向分化潜能的证实包括成骨、成脂和成肌等方向的诱导分化。

本实验采用大鼠BMSCs的常规体外培养方法。

具体步骤如下：采集大鼠骨髓：在无菌环境下，用注射器抽取大鼠股骨和胫骨骨髓，加入肝素抗凝。

细胞分离：将采集的骨髓用密度梯度离心法分离出单个核细胞。

细胞培养：将单个核细胞接种于培养瓶中，用含10%血清、1%抗生素和1%谷氨酰胺的培养基培养。

细胞鉴定：经过约7-10天的培养，细胞达到80%-90%融合时，进行细胞鉴定。

通过形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实，对BMSCs进行鉴定。

通过观察细胞的形态和生长情况，发现培养的BMSCs呈典型的长梭形，且细胞间连接紧密（图1）。

经表面标志物检测，BMSCs表达CD29和CD90等间充质干细胞表面标志物（图2）。

在多向分化潜能的证实中，我们发现BMSCs经成骨、成脂和成肌诱导后，可分别形成矿化结节、脂肪滴和肌纤维（图3）。

这些结果说明所培养的细胞为BMSCs。

Wistar大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及成骨诱导实验

Wistar大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及成骨诱导实验李贵凤;李煌;刘超【摘要】目的探讨Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体外进行分离、纯化以及定向诱导成骨细胞的方法,为进一步利用BMSCs移植治疗骨组织缺损奠定基础.方法体外分离培养BMSCs,并进行定向的成骨诱导分化,采用茜素红染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色和免疫组化col-Ⅱ染色等方法进行鉴定.结果经过体外分离培养的大鼠BMSCs在显微镜下为贴壁生长的成纤维样细胞,其形态呈长梭形.经过第一次传代后的BMSCs形态趋于均一,呈漩涡样或者菊花样生长;传代后在7d 内BMSCs生长迅速,在7d后细胞密度增加,出现接触抑制现象,而使细胞的生长速度减慢.经定向诱导后BMSCs明显表达为成骨表型.结论 BMSCs是一种易于在体外分离培养和扩增的细胞群,经体外定向成骨诱导后的BMSCs具有典型的成骨细胞的形态和功能性特征,可以作为骨组织工程的种子细胞.【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2016(026)003【总页数】3页(P233-235)【关键词】间充质干细胞;成骨细胞;骨诱导;体外培养;大鼠【作者】李贵凤;李煌;刘超【作者单位】210000 南京,南京大学医学院附属口腔医院正畸科;210000 南京,南京大学医学院附属口腔医院正畸科;210000 南京,南京大学医学院附属口腔医院正畸科【正文语种】中文【中图分类】RQ813.11[Abstract]Objective To explore the approach to separate and purify Wistar rats'bonemarrow derived mesenchymal stem cells (BMSCs)in vitro and directionally induce osteoblast in order to provide a foundation for further use of BMSCs transplantation to treat bone defect disease.Methods BMSCs from Wistar ratswere isolated and cultured in vitro and directionally induced to osteoblastic differentiation.Identification was made through the methods of alizarin red staining and collagen typeⅠand col-Ⅱimmunohistochemical staining.Results The BMSCs separated and cultured in vitro presented long spindle-shaped fibroblast-like cellswith adherence growth under themicroscope.Themorphology of BMSCs after the first passage tended to be homogeneous with swirl or chrysanthemum like growth.Within 7 days after the passage,BMSCs showed rapid growth.Within 7 days after the passage, the cells grew fast,and the cell density increased after 7 days.Contact inhibition occurred which decreased the cell growth velocity. After the directional induction,BMSCs presented apparent osteogenous phenotype.Conclusion BMSCs can be easily isolated and multiplied in vitro.Those cellswhich were induced to osteoblastic differentiation present typical osteoblastmorphology and functional characteristics.Therefore,BMSCs are the ideal seed cells for the bone tissue engineering research.[Key words]mesenchymal stem cell;osteoblast;bone induction;culture invitro;rat临床上由于各种因素所致的骨及软骨损伤、缺失极为常见。

骨髓间充质干细胞PPT课件

骨髓间充质干细胞
目录
CONTENTS
• 骨髓间充质干细胞简介 • 骨髓间充质干细胞的分化能力 • 骨髓间充质干细胞的培养与扩增 • 骨髓间充质干细胞移植 • 骨髓间充质干细胞研究的挑战与展望
01 骨髓间充质干细胞简介
定义与特性
定义
骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells，简称MSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，主要存在于骨髓基质中。
骨髓间充质干细胞研究涉及到伦理问题，如胚胎干细胞研究、克隆技术等，需要遵循伦理原则，避免对人类生命和尊严造成伤害。
法律问题
各国对干细胞研究的法律规定和监管存在差异，需要遵守相关法律法规，确保研究合法合规。
技术难题与解决方案
技术难题
骨髓间充质干细胞的分离和培养技术难度较大，需要高水平的实验室技术和设备。
神经组织
总结词
骨髓间充质干细胞具有向神经组织分化的能力，能够参与神经系统的再生和修复。
详细描述
骨髓间充质干细胞在特定的生理和生化条件下，可以分化成为神经元和神经胶质细胞，参与神经系统的再生和修复。对于神经损伤、帕金森病、阿尔茨海默病等神经系统疾病的治疗具有潜在的应用价值。
03 骨髓间充质干细胞的培养与扩增
同基因移植
利用基因工程技术将骨髓间充质干细胞进行基因修饰，再回输给患者，以治疗某些遗传性疾病。
3
异体移植
从健康供体采集骨髓间充质干细胞，经过处理后移植给患者，需要严格匹配供受体的免疫学特征以降低免疫排斥反应。
移植后的细胞行为
分化与增殖
骨髓间充质干细胞在移植后能够分化为多种细胞类型，如骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等，并增殖形成相应的组织。

大鼠的骨髓间充质干细胞提取

大鼠的骨髓间充质干细胞提取第一步，SD大鼠麻醉处死，75%乙醇皮肤消毒，无菌条件下迅速剪开两侧后肢皮肤及肌肉，取股骨及胫骨，浸泡在PBS中。

心得体会：①鼠龄4周，重量在160-200g之间的雄性SD大鼠。

老鼠太老了，骨髓都分化的太厉害，没有年幼老鼠的骨髓这么有活力。

雌的也行，但是雌的比较厉害，咬人。

Wistar 大鼠行不行，也行，但是就品种而言，SD的生存力更强大。

②我个人认为引颈处死不人道。

麻醉药品为氯胺酮、安定、阿托品各一支混到一起，腹腔麻醉，保证30秒老鼠躺倒，安乐死。

如果你水平够高，可以直接用注射器抽取心脏内的血液，可以减少手术中老鼠出血较多而影响术野不清的问题。

③老鼠的两支前肢取下来也行，但老鼠太小，前肢更小，如果你的确需要大量的细胞取下来也无妨。

浸泡的15ml的一次性离心管中（也可以用培养皿），管中提前加好含有青链霉素的PBS 10ml就行了，青链霉素的浓度为500U／ml，这样是区别于生长液中青链霉素浓度，组织抑菌是200-500U／ml，生长液抑菌是20-100U／ml。

就当初步的消毒吧！④整个手术过程要快，一般控制在20分钟之内，时间长了，骨髓会凝，不利于后期的冲洗。

老鼠浑身都是宝，可以叫上研究脂肪的，嗅鞘的，心肌的其他人员一起来，把剩下不要的老鼠尸体给别人，做实验要巧花钱。

一般老鼠一条腿的一根股骨就够种在一个60mm的皿里了，具体根据个人经验而言。

第二步，⑴将装有骨头的离心管置于紫外线下消毒30分钟后移至超净台，倒掉PBS后，再用含青链霉素的PBS清洗骨头三遍。

⑵去掉骨头两侧的骨骺端，暴露出骨髓腔，用5ml的一次性注射器吸取5.2ml的细胞生长液，用针头插到骨头的一端冲洗，然后换另一端接着冲。

将骨髓冲出的细胞生长液至60mm培养皿中（皿最好倾斜45度），冲洗数次直至将绝大部分骨髓冲出。

⑶换1ml注射器的针头，反复在培养皿中吹吸细胞悬液2-3次后再全部吸到无菌容器中，大约此时的细胞悬液为5ml。

大鼠的骨髓间充质干细胞提取

大鼠的骨髓间充质干细胞提取第一步，SD大鼠麻醉处死，75%乙醇皮肤消毒，无菌条件下迅速剪开两侧后肢皮肤及肌肉，取股骨及胫骨，浸泡在PBS中。

心得体会：①鼠龄4周，重量在160-200g之间的雄性SD大鼠。

老鼠太老了，骨髓都分化的太厉害，没有年幼老鼠的骨髓这么有活力。

雌的也行，但是雌的比较厉害，咬人。

Wistar 大鼠行不行，也行，但是就品种而言，SD的生存力更强大。

②我个人认为引颈处死不人道。

麻醉药品为氯胺酮、安定、阿托品各一支混到一起，腹腔麻醉，保证30秒老鼠躺倒，安乐死。

如果你水平够高，可以直接用注射器抽取心脏内的血液，可以减少手术中老鼠出血较多而影响术野不清的问题。

③老鼠的两支前肢取下来也行，但老鼠太小，前肢更小，如果你的确需要大量的细胞取下来也无妨。

浸泡的15ml的一次性离心管中（也可以用培养皿），管中提前加好含有青链霉素的PBS 10ml就行了，青链霉素的浓度为500U／ml，这样是区别于生长液中青链霉素浓度，组织抑菌是200-500U／ml，生长液抑菌是20-100U／ml。

就当初步的消毒吧！④整个手术过程要快，一般控制在20分钟之内，时间长了，骨髓会凝，不利于后期的冲洗。

老鼠浑身都是宝，可以叫上研究脂肪的，嗅鞘的，心肌的其他人员一起来，把剩下不要的老鼠尸体给别人，做实验要巧花钱。

一般老鼠一条腿的一根股骨就够种在一个60mm的皿里了，具体根据个人经验而言。

第二步，⑴将装有骨头的离心管置于紫外线下消毒30分钟后移至超净台，倒掉PBS后，再用含青链霉素的PBS清洗骨头三遍。

⑵去掉骨头两侧的骨骺端，暴露出骨髓腔，用5ml的一次性注射器吸取5.2ml的细胞生长液，用针头插到骨头的一端冲洗，然后换另一端接着冲。

将骨髓冲出的细胞生长液至60mm 培养皿中（皿最好倾斜45度），冲洗数次直至将绝大部分骨髓冲出。

⑶换1ml注射器的针头，反复在培养皿中吹吸细胞悬液2-3次后再全部吸到无菌容器中，大约此时的细胞悬液为5ml。

间充质干细胞的使用流程

间充质干细胞的使用流程引言间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一种多能干细胞，在医学领域中具有广泛的应用前景。

随着对MSCs的研究的不断深入，科学家们逐渐掌握了MSCs的使用流程。

本文将详细介绍间充质干细胞的使用流程，以便读者对该流程有一个全面的了解。

正文1.样本采集和处理–从适当的供体中采集间充质干细胞的样本，例如骨髓、脐带血、脂肪组织等。

–样本采集后需要进行一系列的处理步骤，包括消毒、离心和去除红细胞等，以保证获得纯净的间充质干细胞。

2.细胞培养和扩增–将处理过的间充质干细胞放入培养皿中，并加入适当的培养基。

–培养皿需要放置在恒温恒湿的培养箱中，提供适宜的温度和湿度。

–定期更换培养基，以提供营养物质和确保细胞的健康生长。

–细胞培养通常需要数天到数周的时间，细胞数量会逐渐增加。

3.细胞鉴定和筛选–对培养的间充质干细胞进行鉴定和筛选，以保证其质量和纯度。

–常用的鉴定方法包括流式细胞术、免疫荧光染色等，可以检测细胞的表面标记物和特定的分子。

–筛选时需要排除可能含有附着细胞、坏死细胞或其他细胞类型的样品。

4.细胞存储和冻存–对于细胞的长期保存和备用，必须进行细胞存储和冻存。

–使用液氮罐等低温储存设备，将间充质干细胞冻存于液氮中，通常在-196摄氏度。

–冻存细胞需要特殊的冻存液和方法，以确保细胞的生存率和功能。

5.向患者输注间充质干细胞–在进行间充质干细胞的输注前，需要严格的安全筛查和评估。

–给予患者间充质干细胞通常采用静脉输注的方式，可以通过导管直接注入患者体内。

–输注后需要进行监测和观察，以确保患者的安全和疗效。

结论间充质干细胞的使用流程是一个复杂而严谨的过程，需要专业的实验室条件和设备。

通过对间充质干细胞的采集、培养、鉴定、存储和输注等环节的科学操作，可以为临床治疗提供有效的细胞资源。

然而，随着科学技术的不断发展，间充质干细胞的使用流程也在不断完善和改进，未来还有更多的创新和突破等待探索和发现。

移植后的Wistar大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化的实验研究

ｉｒｏｅｏｓｒｅｔｅＢＣｈｔｅｒｎｔｏｄｅｅｔｔｔｅｒｎ．ｅｈｄＦｒｔｆａｌｍａｋｒＢＣｉｒＵｉｉｏｕｙｚｎ．ｂｅｖＭＳｓＷｅｒｏｏｉｒｎｉｅｉｏｎｕｏｓＭｔｏｓｈｈｔｆａｎｉｌｓｏ，ｒｅＭＳｓｗｔＢｄｎｖｔ，ｈｒ
中国实验诊断学
２１年８月０１
第１５卷
第８期
—
１９一２４
文章编号：０７— ２７２１）８—１４ —０１０４８（０１０２９３
移植后的Ｗｉａ大鼠骨髓间充质干细胞ｓｒｔ向神经元分化的实验研究
陈玉丙贾全章，东君孙景海吴传真王风华徐，李，，，，爽刘丽萍姜大伟高德萱张红梅，，，，
（．１吉林大学第二医院，吉林长春１０４；．３０１２解放军第２８院；．０医３吉林大学药学院；．４深圳市东湖医院）摘要：目的观察Ｗｉａ大鼠骨髓问充质干细胞（ＭＳｓ移植后在脊髓损伤区是否向ｄｙｆｒｔｅｔａｓｌｔｔｎｔｅｅｒｔａｅｐｆｓｄｔｉｒｔｅｓｉａｏｓＴｅｓｉａｏｓａｍａｅｔｏｅｅｔｎｗｉｈａｓａｅｒｎｐａａｏ．ｓａｒｅｕｅｋｌｆｐｎｌｒ．ｈｐｎｌｒ聆ｔｈｎｉｈｓｏｌｏｈｃｄｃｄｋｄｉｏｆｚｎｓｃｉ，ｈｃｎｒｏａｅｅａｎｄｕｄｒｔｅｌｓｒｓａｎｎｏｆｃｃｏｃｐｒｔｅｃｎｉｏａｅｔｎｐａｔｄＢＣｘｒｓｅｎｕｏ－ｐｃｃｒｘｍｉｅｎｅａｅｃｎｉｇｅｎｏａｍｉｒｓｏｅｆｏｄｔｎｔｔｔａｓｌｎｅＭＳｓｅｐｅｓｔｅｒｎｓｅｉｈｌｏｈｉｈｈｒｈｆｐｏｅｎＮＥ．ｓｌ１２３ａｓａｔｒｔｎｐａｔｔｎｕｄｒｅｌｓｒｓａｎｎｏｆｃｃｓｏ，ｅｂｅｖｄＢｄ／ＮＳｒｔｉ — ＳＲｅｕｔｓ０，０，０ｄｙｆａｓｌａｉ，ｅａｅｃｎｉｅｎｏａｍｉｒｃｐｗｒｏｓｒｅｒＵｅｒｎｏｎｈｔｇｌｏｅｅＥｄｕｌｌｂｌｅｓＣｏｃｕｉｎＴｅｔｎｐａｔｄＢＣａｘｒｓｅｎｕｏ－ｐｃｃｐｏｅｎＮＳｗｉｈＭａｉｅｎａｅｉｔｏｂｅａｅｉｃＨ．ｎｌｓｈｒｓｌｎｅＭＳｓＣｅｐｓｔｅｒｎｓｉｒｔｉ－Ｅ，ｈｃｙｄｆｒｔｔｏｇｎｏａｎｅｈｅｆｅｉｎ

体内移植的骨髓间充质干细胞加速大鼠体内损伤胃粘膜的修复

体内移植的骨髓间充质干细胞加速大鼠体内损伤胃粘膜的修复作者：张修航,孙伟葛政明来源：《医学信息》2014年第19期目前，质子泵抑制剂（PPIs）被认为是保护胃粘膜损伤的最有效的药物之一。

然而，有越来越多的数据显示长期应用PPIs类药物治疗和胃黏膜内的细菌过度生长以及社区获得性肺炎有一定关联。

此外，一些胃溃疡甚至在消除幽门螺旋杆菌或者使用非甾体类消炎药后未痊愈。

因此，损伤的胃黏膜需要新的替代疗法进行治疗。

1资料与方法1.1一般资料在这项研究中使用的雄性和雌性Wistar大鼠（8周龄）购自中国解放军总医院实验动物中心。

这些大鼠在无病原体的条件下培育和保护。

雄性大鼠作为BMMSCs的捐助者，雌性大鼠用吲哚美辛诱导，具有胃溃疡。

按照中国国家实验动物的使用和保养指南以及中国解放军总医院护理委员会的批准进行动物实验。

1.2方法1.2.1 BMMSCs的准备，流式细胞仪分析， CFDA SE染色使用珀-Paque加的密度梯度离心机分离雄性大鼠的BMMSCs。

骨髓悬浮液由Wistar大鼠的股骨和胫骨冲洗的内容物制备。

这些细胞通过70微米尼龙筛进行筛分，并用培养基洗涤两次后，骨髓细胞悬浮液用5 mL磷酸盐缓冲液中的溶质（PBS）稀释，慢慢地转移到珀- Paque加，这些材料在2000转/分钟的条件下分离25 min。

把单核细胞环收集起来，然后用2 mL的Dulbecco改良的Eagle培养基低葡萄糖，在1000转/min的条件下5 min，转2次。

然后将细胞悬浮于10％胎牛血清、100 IU/mL青霉素，100 IU/mL的链霉素（Sigma公司）的5 mL DMEM-LG中，在每个密度为1×107个细胞的培养皿中接种于25 cm2的烧瓶。

经过3 d 5％ CO2，37°C的培养，非粘性的造血干细胞被拆除，更换培养基。

通过流式细胞仪对BMMSCs进行了表征。

>98％的细胞表达CD90，一个具体的胸腺淋巴细胞的标志，>59％的细胞表达了特定标志物表面粘附分子CD44。

Wistar大鼠骨髓间充质干细胞说明书

细胞数P2细胞总数/每支:
106
体积/每支:
500µl
传代方法:
待细胞长满至90%时，用0.05%胰酶消化，按照2x104/cm2传代或按1:2-1:3比例进行传代。
传代周期：3-5天传代比例：1:2-1:3换液频率：3天
气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃
冻存液：
培养液80%，FBS10%，DMSO 10%
FBS（Biochrom S0115）56ml
Pen Strep（Gibco 15140）5.6ml
细胞说明:
取自Wistar大鼠骨髓，通过机械法在无菌环境下分离，使用MSC完全培养液贴壁培养，传代扩增至第二代冻存。集落形成率>5%，CD29、CD90表达率>70%,CD34、CD45、CD11b表达率<5%，具备分化成为脂肪、成骨、软骨的能力。
Wistar大鼠骨髓间充质干细胞说明书
SCSP number:
SCSP-401
细胞名称:
Wistar大鼠骨髓间充质干细胞
细胞描述:
大鼠骨髓间充质干细胞
大鼠品系:
Wistar大鼠
细胞来源:
SCSP取4周龄的Wistar大鼠骨髓，自行分离制备
SCSP培养液:
MSC完全培养液：SCSP-615
α-MEM medium withGlutaMAX™-I（Gibco 32571）500ml