安捷伦液质使用中注意
安捷伦液质使用中注意
2021/3/7
CHENLI
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Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
防止堵塞溶剂过滤器
污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将缩短溶剂过滤器的使用寿命 ，并且影响色谱泵的运行。另外，其分泌物会很容易在质谱上表 现为干扰或者离子化抑制。这在水相溶剂中尤其如此。下列建议 将会防止质谱分析受到影响并延长溶剂过滤器的使用寿命。
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Agilent 1100/1200 四元泵／二元泵
Agilent 1100/1200 色谱泵工作原理
2021/3/7
CHENLI
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Agilent 1100/1200 自动进样器
Agilent 1100 自动进样器工作原理
2021/3/7
CHENLI
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HPLC常用的色谱柱接头及管路
Swagelok Parker
- 使用棕色的溶剂瓶来减缓藻类生长。
- 每两天更换水相溶剂。
- 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。
Tips: • 如果经常使用同一方法，可以将平时放置水相的A瓶，更换为预先 配好的流动相（等度分析）或者初始比例的混合流动相（梯度分 析）。当流动相中有机溶剂比例大于10%时，微生物生长会被抑制， 可以保存较长时间。 • 较长时间不使用系统时，请用甲醇将水相管路中溶剂冲洗替换之后 再停机，防止微生物生长。
CHENLI
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质谱维护时间表
任务 冲洗样品通路 清洁喷雾室 检查前级真空泵油的液面 开启气镇阀 检查并清空排污瓶 清洁或钝化毛细管 更换在线过滤器筛板 更换前级泵泵油 更换喷雾针 清洁离子光学 更换电子倍增器
每日 X X
每周 每6个月
根据需要
X X X
X X
安捷伦液相维护之溶剂使用篇
安捷伦液相维护之溶剂使用篇简介使用溶剂时，请遵循以下建议。
•遵循阻止藻类生长的建议。
•小颗粒可能会永久堵塞毛细管和阀。
因此，始终通过0.4um过滤器过滤溶剂。
•避免或尽量减少可腐蚀流路部件的溶剂。
考虑部件的不同材料所能耐受的不同PH范围，如流通池和阀的材料等。
流路材料安捷伦液相泵流路中使用了一下材料：1.提供超净管线，配合高端MS监测器使用。
它们还与THF兼容。
2.Jet Weaver，换热器PEEKPEEK（聚醚醚酮）综合了与生物相容性，抗化学腐蚀，机械和热稳定性相关的极佳属性。
因此，PEEK是适用于UHPLC和生化仪器的材料的最佳选择。
其在pH值范围内非常稳定，对许多一般溶剂具有惰性。
还与许多已知化学物质不相容，如氯仿，二氯甲烷，THF，DMSO，强酸（硝酸>10%，硫酸>10%，磺酸，三氯乙酸），卤素或卤水溶液，苯酚和衍生物（甲酚，水杨酸等）。
聚酰亚胺安捷伦在阀中的转子密封垫和自动进样器中的针底座上使用了半晶状的聚酰亚胺。
DuPont是一家聚酰亚胺供应商，其聚酰亚胺产品的商标为Vespel，安捷伦也使用他们的产品。
聚酰亚胺在pH值为1至10的环境及大多数有机溶剂中稳定。
它与浓无机酸（如硫酸），冰醋酸，DMSO和THF不相容。
它在像氨（如基本状态下的铵盐）这样的亲核物质或醋酸铵中性能会下降。
聚乙烯（PE）安捷伦将UHMW（超高分子量聚乙烯）-PE/PTFE混合物用于黄色活塞和冲洗密封垫（用于1290 infinity 泵和1260 infinity 泵中的正相应用)。
对于大多数普遍无机溶剂（包括pH范围在1到12.5之间的酸和酸碱），聚乙烯有着良好的稳定性。
它与许多在色谱系统中使用的有机溶剂（如甲醇，乙腈和异丙醇）相容。
它与脂肪类，芳香类和卤化碳氢类，THF，苯酚及其衍生物，浓酸和浓酸碱有着有限的稳定性。
对于正相应用，最大压力应限制为200bar。
钽（Ta）钽对于大多数的普通HPLC溶剂和几乎所有酸（除氟酸和带有自由三氧化硫的酸）呈惰性。
安捷伦液质联用培训教材(中文版)
=安捷伦 G6300 系列LC/MSD Trap现场培训教材质谱数据系统毛细管电泳液相色谱气相色谱注意包含在该文件中的信息将可能在未通知的情况下改变。
安捷伦科技有限公司不对与该材料有关的任何活动做担保。
这些活动包括但不仅限于为了某特殊目的而进行的销售和适应性。
安捷伦科技有限公司将不会对包含在材料里的与装备，表现和材料使用有关的错误或导致的损失负责。
这份文件中的任何部分都不得拷贝或复制或未经安捷伦科技公司的预先允许进行翻译。
安捷伦科技有限公司售后服务电话：800-8203278手机用户：400-8203278中文网站：/chem/cn2007年6月G6300A 系列离子阱软件概述以及开机关机操作仪器硬件概述1.1典型配置1.2仪器原理简介1.2.1离子阱的主体包含一个环电极和两个端电极，环电极和端电极都是绕Z轴旋转的双曲面，并满足r20=2Z20（ r0为环形电极的最小半径，Z0为两个端电极间的最短距离）。
射频电压V rf加在环电极上，两个端电极都处于零电位。
1.2.2与四极杆分析器类似，离子在离子阱内的运动遵循马修方程，也有类似四极杆分析器的稳定图。
在稳定区内的离子，轨道振幅保持一定大小，可以长时间留在阱内，不稳定区的离子振幅很快增长，撞击到电极而消失。
离子阱的操作只有射频RF电压，没有直流DC电压，因此离子阱的操作只对应于稳定图上的X轴。
对于一定质量的离子，在一定V rf下，不同质量数的离子按照m/z由小到大在稳定图的X轴上自右向左排列。
当射频电压从小到大扫描时，排在稳定图上的离子自左向右移动，振幅逐渐加大，依次到达稳定图右边界，从离子阱中抛出，经过高能打拿极然后由电子倍增器检测。
1.3仪器硬件概述1.3.1离子源1.3.2离子源原理1.3.3仪器构造-示意图1.3.4 仪器构造-实物离子阱整体离子阱分解图1.3.5 LC-MSD Trap 的典型操作模式（以MS2为例）：首先样品组分通过LC 进行分离，然后通过大气压电离源电离产生离子，离子阱在电场作用下，通过离子电荷控制（ICC ）在阱中进行离子累积存储一定数量的离子，然后通过扫描隔离掉低于目标离子质量数的离子，通过在端电极上施加附加电场排除掉阱中高于目标质量数的离子，这个过程为Isolation ，接下来通过在端电极上施加特定离子的共振波形，使其与He 碰撞导致离子内能增加而使离子碎裂，此过程称之为Fragmenation 或CID ，最后在离子阱上扫描Rf 电压得到二级质谱。
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。
2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。
3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。
4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。
5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。
6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。
7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。
8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。
注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。
- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。
- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。
- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。
- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。
- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。
安捷伦液质联用培训教材(中文版)
=安捷伦 G6300 系列LC/MSD Trap现场培训教材质谱数据系统毛细管电泳液相色谱气相色谱注意包含在该文件中的信息将可能在未通知的情况下改变。
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安捷伦科技有限公司售后服务电话：800-8203278手机用户：400-8203278中文网站：/chem/cn2007年6月G6300A 系列离子阱软件概述以及开机关机操作仪器硬件概述1.1典型配置1.2仪器原理简介1.2.1离子阱的主体包含一个环电极和两个端电极，环电极和端电极都是绕Z轴旋转的双曲面，并满足r20=2Z20（ r0为环形电极的最小半径，Z0为两个端电极间的最短距离）。
射频电压V rf加在环电极上，两个端电极都处于零电位。
1.2.2与四极杆分析器类似，离子在离子阱内的运动遵循马修方程，也有类似四极杆分析器的稳定图。
在稳定区内的离子，轨道振幅保持一定大小，可以长时间留在阱内，不稳定区的离子振幅很快增长，撞击到电极而消失。
离子阱的操作只有射频RF电压，没有直流DC电压，因此离子阱的操作只对应于稳定图上的X轴。
对于一定质量的离子，在一定V rf下，不同质量数的离子按照m/z由小到大在稳定图的X轴上自右向左排列。
当射频电压从小到大扫描时，排在稳定图上的离子自左向右移动，振幅逐渐加大，依次到达稳定图右边界，从离子阱中抛出，经过高能打拿极然后由电子倍增器检测。
1.3仪器硬件概述1.3.1离子源1.3.2离子源原理1.3.3仪器构造-示意图1.3.4 仪器构造-实物离子阱整体离子阱分解图1.3.5 LC-MSD Trap 的典型操作模式（以MS2为例）：首先样品组分通过LC 进行分离，然后通过大气压电离源电离产生离子，离子阱在电场作用下，通过离子电荷控制（ICC ）在阱中进行离子累积存储一定数量的离子，然后通过扫描隔离掉低于目标离子质量数的离子，通过在端电极上施加附加电场排除掉阱中高于目标质量数的离子，这个过程为Isolation ，接下来通过在端电极上施加特定离子的共振波形，使其与He 碰撞导致离子内能增加而使离子碎裂，此过程称之为Fragmenation 或CID ，最后在离子阱上扫描Rf 电压得到二级质谱。
安捷伦电子测量仪器使用及维护建议
安捷伦电子测量仪器使用及维护建议1.了解使用手册：在使用安捷伦电子测量仪器之前，应仔细阅读仪器的使用手册，并熟悉各个功能和操作方法。
这将有助于您更好地运用仪器进行测量和分析。
2.仔细处理和操作：使用过程中要小心轻放，避免发生碰撞或摔落，因为这可能会导致仪器的损坏或数据失真。
避免在仪器上放置尖锐或重物，并养成使用前洗手的好习惯，以防止油污和污垢粘附在仪器上。
3.定期校准和校正：安捷伦电子测量仪器在使用一段时间后可能会出现误差，因此定期进行校准和校正是十分必要的。
校准和校正可以提高仪器的准确性，可靠性和重复性。
4.温度和湿度控制：仪器应在适宜的温度和湿度环境下工作。
最好将仪器放置在温度不变化的环境中，并避免阳光直射、潮湿或过热的情况。
这将有助于保持仪器的稳定性和精确性。
5.定期清洁：定期对仪器进行清洁是保持其性能稳定的关键。
使用清洁布和无水酒精轻轻擦拭仪器的表面，避免使用化学溶剂或腐蚀性清洁剂。
定期清理仪器上的尘埃和污垢，并确保仪器通风孔不被堵塞。
6.注意电源和电源线：使用前要确保电源稳定，并正确连接电源线。
保持电源线清洁和完好，避免损坏或断裂，以防止电器事故或测量不准确。
7.保持仪器的干燥和防潮：防止仪器进水或受潮，尤其是在测量高湿度环境或开展戶外工作时。
使用仪器后，将其放置在干燥通风的地方，并避免长时间存放在高湿度的地方。
8.定期备份和更新软件：如果使用了安捷伦电子测量仪器的软件，建议定期备份和更新软件。
这将确保您始终使用最新的功能和性能。
9.定期维护检查：定期检查仪器的各个部分和连接线路是否正常，如有异常或故障，及时修复或更换。
综上所述，使用和维护安捷伦电子测量仪器需要注重细节和小心谨慎。
定期校准和清洁，保持稳定温湿度环境，以及定期维护检查，将确保仪器的准确性和可靠性，延长仪器的使用寿命。
同时，及时求助和维修能够解决可能出现的故障和问题，保证仪器的正常运行。
HPLC安捷伦高效液相使用维护常见问题PPT课件
启动液相色谱仪器的流程
流动相冲洗系统
水相走A、D泵，有机 相走B、C泵，可防止
缓冲盐析出
流动相配制后，先使用过滤装置过滤，然后超声15min，排除气泡干扰。流速 1ml/min，使用流动相冲洗系统至少30min，待基线平稳即可进行下一步操作。
进样测定 具体操作如下：点击“序列”-“序列表”-输入相关信息确定（样品瓶、样品 名称、方法名称-TEST、进样次数、进样量）-“开始序列”。待进样结束后， 进行下一步操作。 注意：在进样前，最好用100%甲醇进行洗针，以防进样针中残留的其它样品 影响实验结果。
稳定性考察： 取同一份供试品溶液，分别于不同时间进样测定（如0、2、4、6、8、10、12、 24h）。
HPLC色谱柱
数据处理系统
自动进样器 色谱泵
检测器
废液
第5页/共42页
一些商品化仪器
流动相
脱气装置
四元泵
样品盘 柱温箱 检测器
第6页/共42页
溶剂
棕色玻璃瓶会避免藻类的生长。 经常过滤溶剂以免其中微粒永久性阻塞毛细管。
第7页/共42页
启动液相色谱仪器的流程
开启HPLC系统各个设备的电源
打开泵、自动进样器、检测器电源，打开计算机启动 “1260联机工作站”，待
标准加样回收---已知浓度样品中加入药品
数据要求： 在规定范围内，至少用9个测定结果
进行评价。例如，设计3个不同浓度，每个 浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定。
第27页/共42页
分析方法的建立及验证
绝对回收率=提取回收率/（1－基质效应），HPLC中基质效应为0 1.绝对回收率=提取回收率=萃取回收率，是用药品加血浆经萃取处理后的进 样峰面积除以该药品溶液直接进样峰面积的比值，一般来说，该比值不可能 超过100%，能做到80%就不错了。以前国家对绝对提取率还有些要求，现在 随着lc-ms的应用，最低定量限已经能做到很低，也就不需要再对绝对回收率 提具体要求，只要相对回收率满意就可以。--生物样品：用于筛选提取溶剂， 可以低但要稳定 2.相对回收率=方法学回收率，是血浆处理后的进样峰面积代入血浆标准曲 线，计算所得浓度除以真实血样浓度.该比值在100%左右.一般要求高、中浓 度点在15%以内，低浓度点可适当放宽。--内标的相对回收率值与绝对回收 率要求类似 (1)举例：10ng A药加入1ml空白血浆（10ng/ml），经萃取处理后用0.5ml流动 相复溶，进样所得峰面积8000;配制对照溶液（浓度10ng/0.5ml=20ng/ml）， 进样所得峰面积假设为10000.那么萃取回收率为8000/10000=80%.
液质联用仪原理及操作注意事项安捷伦6410
•流动相以及样品必须过膜 （有机滤膜、水系膜）
•反相常用流动相为甲醇、 乙腈、水以及缓冲盐溶液。
流
•流动相应超声脱气 10~20min,否则压力易 波动（装有在线脱气机， 影响会小一些）
•流动相每两天至少更换
•注意：LC中常采用无机缓冲
盐，LC/MS中则应该使用挥 发性的缓冲盐，如甲酸铵、 乙酸铵；或挥发性酸碱甲酸、 乙酸、氨水等调节pH
2.清洗电喷雾雾化室 将仪器设置为standby,待离子源温度冷却后，用50%异
丙醇-水溶液浸湿无尘布，擦拭弧形电极和喷雾挡盖以 及周围。（切禁直接对着毛细管末端冲洗，压力会增 大，造成涡轮泵负载急剧增加，容易损坏涡轮泵）
四、质谱系统的日常维护及故障排除
3.打开气镇阀 必须每周逆时针拧开气镇阀到底，维持20-30min，把油 气分离器内多余的泵油放回泵内，然后顺时拧紧，关闭 气镇阀。关机前务必确认气镇阀处于关闭状态，否则泵 油可能因此回流到质谱的真空腔内，损坏仪器
二、定量方法的开发
逻辑顺序：
MS2 Scan
1.全扫描scan,确认 得到化合物离子质量 数
MS2 SIM
2.选择离子模式，优 化毛细管出口电压 (fragmentor),保证 母离子的传输效率
Product Ion Scan
3.子离子扫描，使用 优化好的 fragmentor,选择定 量离子，优化碰撞能 量，优化子离子的响 应
3
和键合相的坍塌。（特殊柱子除外，如T3柱， 因具有三相键合相，所以高耐水性，用于分
析丙酸、EDTA、三聚氰胺等）
三、液质操作系统的注意事项
紫外检测器 UV
检
测
质谱检测器 MS
器
的
选
安捷伦液相操作维护保养规程
安捷伦液相操作维护保养规程一、安全操作规范：1.操作前必须穿戴个人防护装备，包括实验服、手套、护目镜等。
2.在操作液相设备时，要保证周围环境干燥、清洁无尘。
3.不得将有机溶剂直接排放到下水道中，应按照相关规定进行处理。
4.避免与有机溶剂发生直接接触，防止引起火灾和爆炸。
在操作过程中要小心避免溢漏。
二、操作准则：1.严密密封液相系统，避免泄漏。
2.在使用气溶胶短管时，注意定期更换新管，并将废弃管进行妥善处理。
3.当不使用设备时，要关闭电源，并将设备清洁干净，避免灰尘和污渍。
4.设备放置时要水平摆放，不可放置在湿润或有机溶剂易波及的地方。
5.使用过程中，要定期检查设备的密封部分是否正常，如有破损应及时更换。
三、操作流程：1.根据实验要求，合理选用相关仪器设备，并调整好设备的参数。
2.操作前先进行设备的预热，保持设备恒定的温度。
3.将待测样品注入进样装置中，确保样品完全进入进样管。
4.打开进样阀，将样品注入到色谱柱中，观察色谱曲线并记录相关数据。
5.实验结束后，使用合适的溶剂将色谱柱进行洗脱，防止发生堵塞现象。
6.将设备进行清洗，除去可能残留下来的污物。
7.对设备进行维护检查，保证下次使用时设备处于良好状态。
四、设备保养：1.定期检查设备的电源线和数据线，如有破损应及时更换。
2.定期清洗仪器的进样口和进样管，防止堵塞。
3.对仪器设备进行定期润滑，确保设备的正常运转。
4.定期校准仪器的测量参数，确保仪器的准确性。
5.确保仪器设备的周围环境干燥，避免设备受潮。
五、事故及处理方法：1.发生溢漏情况时，立即关闭设备，及时清理溢漏物，并通风排气。
3.发生火灾或爆炸时，迅速撤离现场，并使用灭火器等灭火工具进行灭火。
六、员工培训和操作技能提升：1.新员工入职时，进行液相操作培训，包括安全操作规范、设备操作流程等方面的培训。
2.定期组织员工进行操作技能培训和考核，提高员工的操作技能和专业知识水平。
3.鼓励员工参加相关培训和学习，提升专业水平和操作技能。
安捷伦液质使用中注意讲解学习
Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
检查溶剂过滤器
－拧开脱气机出口或比例阀入口管线，此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶 剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。
－查看过滤器是否变色．
－临时取下过滤器，检查柱前压力是否正常．
清洁溶剂过滤器
将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下。将堵塞的过滤器放在装有浓 硝酸 （35％）的烧杯里浸一小时。
谢谢！
Agilent 1100/1200 色谱泵工作原理
Agilent 1100/1200 自动进样器
Agilent 1100 自动进样器工作原理
HPLC常用的色谱柱接头及管路
Swagelok Parker
0.090 in.
Waters
Rheodyne
0.090 in.
0.130 in.
0.170 in.
每周 每6个月
根据需要
X X X
X X
1年 1-2 年 1-2 年 2-3 年
Agilent 6400 QQQ MSD 日常维护
前级泵的日常维护
Tips: • 当质谱开机时，就应通干燥气，尽量避 免抽入空气。
• 定期检查前级泵废气过滤器，如果存有 较多泵油，打开气振阀可以促使泵油回流。 为防止停电或误操作导致泵油反抽到系统 内部，请在泵油回流后及时关闭气镇阀。
- 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。
Tips: • 如果经常使用同一方法，可以将平时放置水相的A瓶，更换为预先 配好的流动相（等度分析）或者初始比例的混合流动相（梯度分 析）。当流动相中有机溶剂比例大于10%时，微生物生长会被抑制， 可以保存较长时间。 • 较长时间不使用系统时，请用甲醇将水相管路中溶剂冲洗替换之后 再停机，防止微生物生长。
安捷伦1260 6120液质联用仪操作规程
Agilent 1260/6120液质联用-单四级杆质谱操作规程一、目的建立Agilent LCMS的标准操作规程，使分析人员的操作具有规范性和确保检测数据的准确可靠性。
二、应用范围所有参与Agilent LCMS操作的分析人员和操作人员。
三、使用标准Agilent LCMS 化学工作站标准操作培训中文版四、责任人分析部负责制作规程；分析部主管审核；研发部总监批准；研发部分析人员和操作人员负责执行五、概述：A、工作原理LCMS的工作原理是用高压输液泵，将具有不同特性的单一溶液或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相，用泵压入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入色谱柱内，在色谱柱内各成分被分离后，依次进入检测器，进入离子源后，试样被离子化，然后聚焦于质谱的质量分析器中，根据质荷比不同而被分离检测，获得各种色谱和质谱数据。
色谱信号由色谱工作站进行记录处理。
B、仪器的主要组成部分Agilent 1260 6120液质联用色谱仪主要由G1311B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G1316A柱温箱、G4212B二极管阵列检测器、6120单四极杆质谱检测器和Open LAB共12 页，第 2 页起草人：审核人：批准人：生效日期起草日期：审核日期：批准日期：起草部门分发部门修订号批准日期执行日期六、操作规程：6.1. 开机6.1.1 打开载气钢瓶控制阀，设置分压阀压力为0.56-0.69Mpa。
6.1.2 准备LC流动相，泵柱塞冲洗溶剂，检查管线连接状态，确认粗真空泵和喷雾室的废气排到实验室外部。
6.1.3 打开计算机，并依次打开LC各模块电源及质谱电源，等待各模块自检完成(各模块右上角指示灯为黄色或者无色，质谱有“嘟”一声声音) 。
6.1.4双击桌面图标，进入化学工作站。
颜色位置无色黄色绿色红色蓝色灰色模块右上角状态灯未开电源或者模块准备就绪模块未准备就绪正在进样分析模块出错；所有模块红色，仪器有漏液——工作站图形颜色—模块未准备就绪模块准备就绪出错或者不能联机正在进样分析此模块没启用共12 页，第 3 页起草人：审核人：批准人：生效日期起草日期：审核日期：批准日期：起草部门分发部门修订号批准日期执行日期6.2. 调谐开始抽真空之后至少要等4个小时或更长时间才能进行调谐或操作LC/MSD。
安捷伦液质联用系统介绍
Agilent 1100 Series LC/MSD 系统操作规程部门：药学院仪器测试中心实施日期：2012年12月25日Agilent 1100 Series LC/MSD系统操作规程1. 基本操作1.1 色谱柱的选择和安装：根据色谱条件选择合适的色谱柱，根据需要确定是否安装预柱或保护柱，阅读说明书后，与色谱柱一起安装入色谱系统中。
1.2 开机准备：使用前把各流动相加入相应的试剂瓶中。
仪器使用间隔两天以上，实验前须用有机溶剂冲洗泵，冲洗方法为：打开系统全部电源，启动色谱工作站，打开排气阀，以5mL/min流速冲洗泵约5min，溶剂用量相当于2倍泵的容积。
1.3 设置流动相试剂容积；根据所用的色谱条件设置流动相组成、流速；设置柱温，一般不得超过40℃。
1.4 柱平衡：调整流速后，关闭排气阀，让流动相进入色谱柱，经一段时间（约相当于三倍的柱体积）后达到平衡，一般需30min 以上，或根据检测器的基线变化调整平衡时间。
1.5 质谱检测器的设置：根据预期的分子量范围选择扫描范围，根据官能团结构和性质选择扫描模式（正离子或负离子）。
根据扫描所得的结果确定SIM方式。
1.6 进样：柱平衡后，经处理后的样品，设置自动进样。
1.7 检测数据处理：数据采集完毕后，进入Data Analysis 即可进行数据分析。
设置色谱峰处理的积分条件，设置数据报告的输出样式。
1.8 以保留时间和分子量作为定性依据，峰面积或峰高作为定量依据。
1.9 每次进样须经一定时间间隔后，确定系统没有杂质保留，基线走稳后方可进行下个样品的进样。
1.10 检测方法的编辑：对于已建立检测方法的药品，以上条件和设置经编辑后作为该药品的检测方法保存。
以后只要调用该方法即可，不用再重复设置。
1.11 检测结束后，调用Wash方法冲洗系统。
2. 色谱工作站（CHEMSTATION）的使用2.1 安装色谱工作站软件已经安装，可正常使用。
如遇到损坏不能正常使用时，应及时报告管理人员，由管理人员重新进行安装。
液质联用仪原理与操作注意事项安捷伦6410
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和键合相的坍塌。（特殊柱子除外，如T3柱， 因具有三相键合相，所以高耐水性，用于分
析丙酸、EDTA、三聚氰胺等）
三、液质操作系统的注意事项
紫外检测器 UV
检
测
质谱检测器 MS
器
的
选
择
二极管阵列 检测器DAD
示差检测器 RID
荧光检测器 FLD
蒸发光散色 检测器ELSD
三、液质操作系统的注意事项
不能使用的溶
剂添加剂
3
4 溶剂截止波长
三、液质操作系统的注意事项
反
1
色谱柱根据键合相的不同可分为氨基柱、C8、 C18、C30柱等等
相
色
谱 柱
色谱柱使用完要冲洗，特别是使用缓冲盐分
2
析样品时，原则上用于冲洗的流动相中水的 比例应该等于或高于分析时所用流动相中水
的比例。
严禁用纯水冲洗柱子，易造成固定相的流失
库伦爆炸
原理：带有被测物质离子的流动相在雾化针尖端发生雾化， 液滴表面富集带同种电荷的离子，内部带相反电荷聚集， 形成带电液滴细的喷雾，在电场的作用下，飞向毛细管。 加热的氮气干燥气体反向流动，带走液滴中的中性溶剂分 子，从而收缩液滴，直至排斥的静电力超过液滴表面张力， 引起库伦爆炸，过程不断重复，待分析物离子最终变成气 态进入毛细管。
动 相
过膜处理
1
2 缓冲盐的使用
•LC/MS中不能使用磷酸盐、 硼酸盐、硫酸盐、三氟乙 酸、三乙胺，易残留，会 形成强离子对，产生离子
抑制，降低灵敏度
•溶剂的截止波长：乙腈 /190nm,甲醇/210nm, 水/190nm.一般分析时样 品检测波长应至少大于所 用溶剂的截止波长20nm 以上，否则背景较高。
安捷伦高效液相色谱仪使用注意事项
安捷伦高效液相色谱仪使用注意事项
安捷伦高效液相色谱仪是一种常用的测量仪器，具有灵敏度高、准确性好、使用灵活、可靠性高等优点。
用户使用安捷伦高效液相色谱仪时需要注意的问题较多，今天小编就来具体介绍一下安捷伦高效液相色谱仪使用注意事项，希望可以帮助用户更好的应用产品。
安捷伦高效液相色谱仪使用注意事项
1、色谱柱使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等;必须使用保护柱;色谱柱长时间不用时，柱内应充满溶剂，两端封死保存。
2、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)
3、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤。
4、检测器的灯有使用寿命限制，一般在正式进样分析前30min 左右开启D灯或W 灯，分析结束，立即关灯。
5、仪器运行时，泵头必须用10%异丙醇水溶液虹吸冲洗，不能干涸。
6、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵。
7、对于手动进样器当使用缓冲溶液时要用水冲洗进样口同时搬动进样阀数次每次数毫升
8、若使用含盐流动相，开机时必须先用10%甲醇水溶液冲洗20分钟以上再换上含盐流动相。
9、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D(进液口位于混合器下方)放置含盐流动相，B、C(进液口位于混合器上方)放置不含盐流动相。
安捷伦高效液相色谱仪使用注意事项已经介绍完了，希望对大家的学习和工作有帮助。
安捷伦LC1260液相色谱操作规程及使用注意事项
安捷伦1260高效液相色谱仪操作规程及使用注意事项一、操作规程㈠开机1．把经过滤、脱气的各流动相装入贮液瓶中。
2．打开计算机，打开主机各模块电源（从上至下），再双击桌面“LC1260(联机)”图标，进入化学工作站。
3．旋开排气阀（逆时针），右键单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量设为“5mL/min”，溶剂A设为“100%”，打开泵，排出管路中的气体，直到由贮液瓶到泵入口整个管路中无气泡为止，此过程约需要5min。
4．依次切换到溶剂B、C、D，分别排气。
㈡数据采集1. 编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据，文件名等。
2. 编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，单击“确定”进入“方法注释”，编辑好单击“确定”。
在“选择进样源”中选择“手动进样”单击“确定”，在“设置方法”中进行参数设定。
3. 四元泵参数设定：在“流速”处输入流量，如1mL/min，在“溶剂”处依据需要选中B、C、D并输入相应的百分数，在右侧注释栏中标明各溶剂的名称；设置“停止时间”和“后运行时间”,在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。
4. TCC（柱箱）参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”，使柱箱的温度左右一致。
5. VWD检测器参数设定：在“波长”右侧的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，再设置“停止时间”和“后运行时间”。
6. 仪器曲线设置：默认即可。
7. 关闭排气阀（顺时针），冲洗色谱柱20~30min，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。
8. 将进样器转动手柄逆时针转到LOAD位置，在环路全量进样时（定量环体积为20uL），用50~100 uL的液相进样针将2~5倍定量环体积的样品缓慢注入进样器中，再将进样器转动手柄顺时针方向迅速转到INJECT位置，将定量环中样品引入系统中。
安捷伦液相色谱仪操作及原理
安捷伦液相色谱仪操作及原理一、概述安捷伦液相色谱仪是一种高效、快速、准确的分离分析仪器，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
本文将详细介绍安捷伦液相色谱仪的基本操作及原理，帮助用户更好地理解和使用该仪器。
二、安捷伦液相色谱仪操作1. 样品准备在进行液相色谱分析前，需要准备好待测样品。
样品应尽可能纯净，以避免杂质对分析结果的干扰。
根据不同的分析需求，可使用不同的样品处理方法，如萃取、沉淀、离心等。
2. 柱子安装柱子是液相色谱分析的核心部件，需要根据不同的分离需求选择合适的柱子。
安装柱子时，需确保柱子与仪器连接处紧密，无气泡产生。
柱子安装好后，需进行平衡操作，以确保分析结果的准确性。
3. 流动相配置液相色谱分析中，流动相是携带样品通过柱子的介质。
根据不同的分离需求，需选择合适的流动相。
配置流动相时，需注意比例、pH值等参数，以保证分析结果的准确性。
4. 样品进样将处理好的样品注入液相色谱仪中进行分析。
进样时，需注意进样量、进样速度等参数，以保证分析结果的准确性。
5. 检测器设置检测器是液相色谱仪的重要组成部分，用于检测样品中的组分。
根据不同的分析需求，需选择合适的检测器。
设置检测器时，需注意检测波长、灵敏度等参数，以保证分析结果的准确性。
6. 数据处理与分析液相色谱仪在完成样品分析后，会产生一系列数据。
这些数据需要通过相应的软件进行处理和分析，以得出最终的分析结果。
常用的数据处理软件有Agilent ChemStation等。
数据处理过程中，需注意数据清洗、峰识别、定量分析等步骤，以保证分析结果的准确性。
三、安捷伦液相色谱仪原理1. 色谱分离原理色谱分离是一种基于不同物质在固定相和流动相之间的分配平衡差异的分离方法。
在液相色谱中，固定相是涂布在担体表面的高分子化合物，如硅胶、氧化铝、凝胶等。
流动相是携带样品通过柱子的介质，如有机溶剂、水和缓冲溶液等。
当流动相带着样品通过固定相时，由于不同组分在固定相和流动相之间的分配平衡不同，因此会以不同的速度通过柱子，从而实现各组分的分离。
安捷伦液相色谱仪的操作注意事项 液相色谱操作规程
安捷伦液相色谱仪的操作注意事项液相色谱操作规程色谱—质谱联用技术，结合色谱及质谱的技术，是目前分别和鉴定的紧要的分析方法之一、其中液相色谱—质谱仪应用更为广泛，液相色谱除了能分析一般的化合物，还能分析气相色谱不能分析的强极性、热不稳定性、难挥发的化合物。
液相色谱质谱仪由色谱仪、接口、质谱仪、电子系统、记录系统和计算机系统六大部分构成，是一种的检测仪器，仪器的良好工作状态是检测精准度的一个紧要影响因子。
为了保证仪器有一个良好的状态，保证检测结果的牢靠性，需要正确合理的使用和维护仪器。
下面以液相色谱仪为例，从仪器进样系统、色谱柱系统等各个系统的日常维护保养进行认真阐述，并对使用过程中简单碰到的问题进行分析，提出解决方法。
安捷伦液相色谱仪1260液相部分的维护开机注意事项要求使用220？V单相交流电。
如发生断电，不管任何原因造成的，首先关闭仪器面板左下角的开关，等待供电恢复10分钟以上再开启电源，否则有可能烧毁电路板。
仪器运行时需供应纯度99%的氮气作为喷雾与干燥气，输出压力为0.6～0.7？MPa。
试验开始前先检查液氮罐液体存量是否充分。
仪器开机时，确认电源已经连接而且气振阀处于关闭，打开仪器总电源，随后将前面板左下方的电源按键按下，真空泵即开始工作。
大约2～3分钟后，仪器内置的系统启动完毕，可以开启Mass hunter软件与仪器通讯。
等待四极杆温度达到100℃，高真空达到410—5？Torr之后，即可进行调谐或开始试验。
在仪器开始抽真空时，请不要打开前级泵上的气振阀，否则可能由于回油污染真空腔体内部。
流动相的要求每次开机前，保证超纯水和流动相的新鲜，泵的各个管路不应余留上次残留的溶剂。
流动相需符合HPLC与LC—MS要求等级，流动相中尽量加易挥发的盐，尽量不使用表面活性剂之类，否则简单导致离子抑制，表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据。
假如碰到离子抑制，可以把样品峰往后推或者更改提取方法，或者考虑用APCI源。
安捷伦1260液相操作规程
安捷伦1260高效液相操作规程及注意事项一开机1)打开主机各模块电源(从下至上),待各模块完成自检后,再双击桌面“仪器2联机”图标,进入化学工作站,2)把过滤白头放入流动相溶剂瓶中。
3)旋开排气阀(逆时针),右单击“四元泵”图标出现快捷键,点击“方法”选项进入泵编辑画面。
将泵流量从1mL/min梯度上升至5mL/min,排出管路中的气体2—3分钟,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力(若大于10bar,则应更换排气阀内过滤白头),关闭排气阀。
4)重复上述步骤,依此切换到B、C、D溶剂分别排气。
5)将泵的流量设到实验用流速,按照色谱柱使用说明用相应溶液冲洗色谱柱20—30分钟。
6)点击四元泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,点击“确定”。
7)把缓冲液换成流动相,待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯,观察基线情况,进入平衡系统。
二数据采集方法编辑若已创建方法,可在“方法”菜单选择“调用方法”,选择相应的方法。
若无,需按下面步骤建立:(1)从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”,钩选“方法信息”、“仪器/采集”、“运行时选项表”三项,点击确定;(2)出现“方法信息”对话框,如有需要可将方法的描述信息输入,也可选择不输入任何信息,点击确定;(3)泵参数设定:在“流量”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入”一行“时间表”,编辑梯度。
在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,如300bar,以保护柱子。
点击“确定”进入下一参数设定。
(4)柱温箱参数设定:手动输入规定的温度即可。
(5)紫外检测器(VWD)参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。
在“时间表”中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm。
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• 开机和放空之前，必须确认前级泵气镇 阀处于关闭状态。
• 分子涡轮泵降速时需要散热，所以应避 免采用直接关电源关机或突然停电。 • 前级真空典型值为2 torr。过高的前级 真空可能源于长期未开气镇阀或者泵油需 要更换。
HPLC
在线脱气机 四元泵／二元泵 自动进样器
柱温箱
检测器
Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
Tips: 毛细管电流、喷雾室电流是否稳定也能判定喷雾和干燥的状况。另外， to MS/to waste压力差和废液桶中残留溶剂的积存状况也可以显示喷雾针的问题。
关注参数：
• 真空
• 毛细管电流(capillary current) • 喷雾式电流(chamber current) • HPLC泵压
几个名词
• • • • • TIC、EIC、ECC、BPC Tune、Calibration CID( 传输区、碰撞池)、SIM Mass accuracy（ppm=mass error/MW*106) Quasi-molecular ion（[M+H]+\ [M+Na] +）
注意事项：
• • • • 1 双蒸水、三蒸水？ 2 表面活性剂？ 3 三氟乙酸（TFA），三乙胺（TEA）? 4 关机
安捷伦液质培训
质谱特点：
• 1 样品必须离子化
• 2 必须具有一定的真空 • 3 必须测量质荷比（m/z）
质谱仪的组成
inlets
Ion source
Ion Optics
Mass analyzer
Detector
数据处 理
Vacuum system
离子源
• ESI、APCI、复合源、 其它（APPI,MALDI）
更换前级泵泵油
更换喷雾针 清洁离子光学
1年
1-2 年 1-2 年
更换电子倍增器
2-3 年
Agilent 6400 QQQ MSD 日常维护
前级泵的日常维护
Tips: • 当质谱开机时，就应通干燥气，尽量避 免抽入空气。 • 定期检查前级泵废气过滤器，如果存有 较多泵油，打开气振阀可以促使泵油回流。 为防止停电或误操作导致泵油反抽到系统 内部，请在泵油回流后及时关闭气镇阀。
- 避免溶剂瓶暴露在直射阳光下。
Tips: • 如果经常使用同一方法，可以将平时放置水相的A瓶，更换为预先 配好的流动相（等度分析）或者初始比例的混合流动相（梯度分 析）。当流动相中有机溶剂比例大于10%时，微生物生长会被抑制， 可以保存较长时间。 • 较长时间不使用系统时，请用甲醇将水相管路中溶剂冲洗替换之后 再停机，防止微生物生长。
Agilent 质谱日常维护 -真空系统 -ESI -APCI -毛细管的清洗和钝化 -八级杆的清洗
质谱维护时间表
任务 冲洗样品通路 清洁喷雾室 检查前级真空泵油的液面 开启气镇阀 检查并清空排污瓶 清洁或钝化毛细管 更换在线过滤器筛板 每日 X X X X X X X 每周 每6个月 根据需要
J. W. Dolan and P. Upchurch.
Color Red Green Blue
LC/GC Magazine 6:788 (1988)
i.d. 0.12 mm 0.17 mm 0.25 mm
谢谢！
Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
检查溶剂过滤器 －拧开脱气机出口或比例阀入口管线，此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶 剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。
－查看过滤器是否变色．
－临时取下过滤器，检查柱前压力是否正常． 清洁溶剂过滤器
将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下。将堵塞的过滤器放在装有浓 硝酸 （35％）的烧杯里浸一小时。 Tips: 用二次蒸馏水彻底冲洗过滤器。 • 如何简单判断脱气机腔体或溶 剂过滤头是否堵塞？ 将过滤器重新装好。
防止堵塞溶剂过滤器
污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将缩短溶剂过滤器的使用寿命 ，并且影响色谱泵的运行。另外，其分泌物会很容易在质谱上表 现为干扰或者离子化抑制。这在水相溶剂中尤其如此。下列建议 将会防止质谱分析受到影响并延长溶剂过滤器的使用寿命。 - 使用棕色的溶剂瓶来减缓藻类生长。
- 每两天更换水相溶剂。
Agilent 1100在线脱气机工作原理
Tips: •G1322A通道内部体积12 mL， G1379A/B内部体积1 mL 。更换溶剂后 请冲洗2倍通道体积后再开始实验。 •使用G1379，冲洗通道时的流量最好不 要大于2 mL/min。
Agilent 1100/1200 在线脱气机及溶剂管理
注意：不要使用没有安装溶剂过滤器的系统． • 关闭泵，拧开脱气机出口或比 例阀入口管线，此时溶剂会因 为重力流出，脱气机或溶剂过 滤头堵塞时，溶剂会流出不畅 或不流出。
Agilent 1100/1200 四元泵／二元泵
Agilent 1100/1200 色谱泵工作原理
Agilent 1100/1200 自动进样器
100,000 分 10,000 子 量 1000 APCI
ESI
nonpolar
Very polar
ESI
低流速 窄径柱
高流速 常规柱
fragmentor Vcap
高电压
源参数为什么重要？
•确认喷雾气/干燥气/鞘流气设置正常。
Tips: 使用含水量高的流动相要适当提高气体流量和温度。
• 确认喷雾针是否缺损或者堵塞，必要时更换。
Agilent 1100 自动进样器工作原理
HPLC常用的色谱柱接头及管路
Swagelok
0.090 in.
Waters
0.130 in.
Parker
0.090 in.
Rheodyne
0.170 in.
Valco
0.080 in.
Uptight
0.090 ittings, Part II.