硅胶柱层析的操作方法及注意事项

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硅胶过柱子操作流程

硅胶过柱子操作流程硅胶过柱子操作流程是一种常见的实验操作，主要用于分离和纯化物质。

下面是详细的操作步骤：一、准备工作1. 准备好硅胶柱，确保硅胶柱的清洁，无尘无杂质。

2. 准备好待分离的物质，将其溶解在适当的溶剂中，形成均匀的溶液。

3. 确定洗脱剂的种类和比例，根据待分离物质的性质选择合适的洗脱剂。

二、填充硅胶柱1. 将填充孔（一般为玻璃微漏斗）插入硅胶柱底部，注意保持漏斗口与硅胶柱顶部平齐。

2. 慢慢加入待分离物质的溶液，同时注意控制加入溶液的速度，以免溶液过快渗入硅胶中造成硅胶柱破裂。

3. 当溶液的颜色或透明度发生明显变化时，应停止加入溶液，此时溶液已基本通过整个硅胶柱。

三、开始分离1. 打开水龙头，将洗脱剂缓慢滴入硅胶柱内，使待分离物质开始分离。

2. 在分离过程中，应密切关注溶液的颜色和透明度的变化，以及硅胶柱内溶液的流速。

3. 当溶液的颜色或透明度发生显著变化时，表示待分离物质已基本分离完毕。

四、收集分离物1. 关闭水龙头，停止洗脱剂的滴入。

2. 从硅胶柱顶部或填充孔中取出分离物，进行必要的处理和分析。

五、硅胶柱的处理1. 分离完毕后，应将硅胶柱内的溶液倒掉，并用蒸馏水冲洗硅胶柱，以确保其干燥干净。

2. 将硅胶柱放置在干燥通风的地方，等待下次使用。

六、注意事项1. 在填充硅胶柱时，应避免溶液过快渗入硅胶中造成硅胶柱破裂。

2. 在开始分离时，应密切关注溶液的颜色和透明度的变化，以及硅胶柱内溶液的流速。

3. 在收集分离物时，应注意避免溶液溅出或洒落。

4. 在处理硅胶柱时，应注意避免硅胶颗粒的破碎或飞扬。

通过以上详细的操作步骤和注意事项，可以确保硅胶过柱子操作流程的顺利进行并得到准确的实验结果。

在实验过程中，还需要根据具体情况灵活调整操作步骤和参数设置以优化实验效果。

硅胶柱层析

硅胶柱层析硅胶柱层析硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量。

200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。

干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。

2.搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3.装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4.压实。

沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

柱床约被压缩至9/10体积。

无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5.上样。

干法湿法都可以。

海沙是没必要的。

上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6.过柱和收集。

柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。

硅胶柱层析分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离

极性的大小：极性羧基>羟基>氨基>巯基，
haida2013yan@，密码是haida2013
过柱子的注意事项：
先要选好洗脱剂，薄层色谱先确定展开剂，保证rf值在0.2-0.3之间，再利用这种展开剂稍微将极性再调小点，就可以作为洗脱剂了。

柱子要装的好了。

柱子一定要装直装实，多次用石油醚润洗柱子。

再用洗耳球不断敲击柱壁以将气泡全部排
在用石油醚洗完柱子后，带液面离硅胶面还有一厘米的时候就可以加样了。

待样品全部进入硅胶层，再取少量的石油醚冲洗内壁，带液体快全部进入硅胶层时，再加大量的你配好的洗脱剂就可以开始洗脱了。

硅胶柱层析分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，后出来。

极性较弱的物质不易被硅胶吸附，
如果想让Rf变得更大一些，可使溶剂体系极性更强些；如果想让Rf变小，就应该使溶剂体系的极性减小些。

如果在薄板上点样变成了条纹状而不是一个圆圈状，那么你的样品浓度可能太高了。

稀释样品后再进行一次薄板层析，如果还是不能
环已烷:-0.2、石油醚(Ⅰ类，30~60℃)、石油醚(Ⅱ类，60~90℃)、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2奏效，就应该考虑换一种溶剂体系。

硅胶柱层析注意事项

硅胶柱层析注意事项
1. 在操作硅胶柱层析之前，应当充分了解并熟悉相关实验室操作规程和安全操作要求，并戴好实验手套和口罩等个人防护装备。

2. 在使用硅胶柱层析进行分离纯化时，应选取合适的溶剂体系和流速，以保证分离效果和纯度。

3. 在装填硅胶柱层析柱时，应先将硅胶柱层析剂固定在柱内，并严密密封，以防止溶剂流失和杂质的进入。

4. 在进行样品的吸附和洗脱过程中，应控制好溶剂的流速和温度，以避免硅胶柱层析柱破裂和溶剂挥发带走干燥样品。

5. 硅胶柱层析柱的操作过程中，应避免剧烈振荡和撞击，以免柱内填充物移位或破碎。

6. 在层析过程中应注意观察样品和洗脱液的颜色和透明度变化，及时调整溶剂类型和浓度，以确保分离效果。

7. 在分离纯化后，应及时冻干或浓缩洗脱液，避免其再次污染或挥发。

8. 操作硅胶柱层析时，要注意保持实验室环境的清洁和卫生，以防止杂质的污
染和误差的产生。

9. 在操作过程中，要随时关注实验仪器和设备的运行状态，确保实验安全和数据准确。

10. 在结束实验后，要对硅胶柱层析柱进行彻底的清洗和维护，以保证下次使用时的质量和效果。

硅胶柱层析的操作方法及注意事项

硅胶柱层析一、硅胶柱层析的原理利用吸附原理，即利用硅胶对中药混合物中各种成分吸附能力的差异，而使混合物中各成分得以分离的色谱方法。

二、硅胶柱层析的操作方法及注意事项1、装柱操作要点：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。

有干法装柱和湿法装柱两种方法（1）干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内，中间不应间断，形成一细流慢慢加入管内。

也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。

柱装好后，打开下端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并保持一定液面。

（2）湿法装柱：将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，打开下端活塞，使洗脱剂缓慢流出。

然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液慢慢加入柱内，），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自由沉降，此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变动为止。

然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。

根据加样量控制洗脱剂液面至一定高度。

匀浆法：搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

2、上样将欲分离的样品溶于少量装柱时用的洗脱剂中，制成体积小、浓度高的样品溶液，加入层析柱中硅胶面上。

如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，则将样品溶于易挥发的溶剂中，并加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面），再覆盖一层硅胶即可。

上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。

3、洗脱洗脱剂的选用可通过薄层色谱筛选，一般TLC展开时Rf 值为0.2~0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。

硅胶柱层析

硅胶柱层析硅胶柱层析技术是一种用于分离和分析分子结构相似或略有不同的有机化合物的有机分离技术。

这种分离技术既可用于混合物的分离纯化，也可用于单组分的准确分析。

硅胶柱层析可以得到高精度的分离分析结果，它与其它分离分析技术相比具有较高的灵敏度，操作方便和分析效率高。

硅胶柱层析分子可以通过两种不同的方式分离：一种是吸附，另一种是偏析。

在吸附过程中，溶质分子被吸附在柱粒子表面上，并且不会溶解，而在偏析过程中，溶质分子会在柱粒子表面上同时进行偏析和均相移动，也就是说，不同结构的分子会以不同的速度移动，从而分离混合物中的分子。

硅胶柱层析过程的主要操作步骤如下：第一步是将硅胶柱放入柱层析装置中；第二步是向硅胶柱中加入待分离分析物；第三步是使用柱层析仪进行柱层析测定，即将分析物在柱中均匀地向下移动；最后一步是收集偏析后的分子产物。

硅胶柱层析技术在有机合成研究和有机分子分析中都有广泛的应用。

它在分离有机混合物、有机废水处理、有机物种鉴定以及其他有机化学应用等方面非常有用。

例如，它可以用于分离混合物中的微量组分；可以用于鉴定相似的有机物；可以用于检测污染物和有毒物质；可以用于分离复杂的有机混合物，如香料中的混合物；还可以用于研究生物分子的三维结构。

此外，硅胶柱层析技术还可以用于食品分析，如可可粉、乳糖、蛋白质分析等，以及药物分析，如抗生素分析、降脂药物分析等。

它甚至可以用于环境分析，如溶解性有机磷、元素烃的分析，在进行环境污染检测中也有重要作用。

硅胶柱层析技术目前已经被广泛应用于各个领域，它具有较高的灵敏度、操作简便、分析效率高以及结果可靠等优点。

硅胶柱层析技术也可以用于大规模分离复杂的物质，这使得它成为有机化学研究中不可或缺的重要技术。

柱层析使用技巧汇总

柱层析使用技巧汇总柱层析就是通常所说的过柱子，又叫柱色谱，属于色谱法中使用最广泛的一种方法。

对于含有多种有机物的混合样品，用重结晶无法提纯时，柱层析法可以说是有机实验中最有效的分离手段。

实验室中常用的是以硅胶和氧化铝做固定相的吸附柱。

硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

1、硅胶的使用初做柱层析很容易把柱子装得长了或短了，有时还会有大量的硅胶剩余，浪费硅胶，这主要是对硅胶等固定相的使用的量没有掌握。

柱层析用的硅胶一般是100-200目，100毫升硅胶的质量在47克左右，如果装一个直径是2.8 厘米的柱子，可以装18厘米高。

为了避免浪费硅胶和溶剂，最初学习装柱时最好对实验室中各种不同规格的柱子摸摸底。

方法很简单：用量筒量出100毫升干硅胶，直接倒入各种规格的柱子中，敲实，用刻度尺量出硅胶在柱子中的高度，这样就可以做到心中有数了。

一般在装柱的时候可以根据实验所需柱子的高度来调整硅胶的使用量，这样就可以大大地节省硅胶的使用，避免造成没有必要的浪费。

称量硅胶时一般称30~70倍于上样量，如果极难分，也可以用100倍量以上的硅胶。

2、洗脱剂的使用洗脱剂的极性可用薄层层析来确定，一般以待分离样品Rf 值为0.2-0.3为宜。

选择的洗脱剂应该使两相邻物质Rf 值之差最大化。

不要认为在板上爬得高分离的效果就比较好，如果Rf 在0.6，即使相差0.2 也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的过程，可以通过公式的比较：0.6/0.8 一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。

有时虽然在薄层板上看到分离的效果很好，但过柱层析时还是很难分开。

这主要的原因就是薄层层析用硅胶比柱层析用硅胶要细得多，所以分离效果好。

解决的办法就是降低洗脱剂的极性，一般柱层析用洗脱剂比薄层层析用的展开剂极性要再降低一倍可以达到比较好的分离效果。

硅胶柱层析的操作方法及注意事项

硅胶柱层析的操作方法及注意事项硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，具有操作简便、结果准确等优点，在化学、生物、医药等领域得到广泛应用。

下面我们来介绍硅胶柱层析的操作方法及注意事项。

1.准备样品及配制溶剂：一般需要将待测物质与适当的溶剂混合，使其溶解度较大，且不产生化学反应。

根据分析目的选用不同的溶剂，以保证分离效果。

2.准备硅胶柱：硅胶柱由无色透明的硅胶胶体组成，直径一般为1-2.5厘米，长约10-40厘米。

硅胶柱层析的分离效果，与柱高、柱径、胶体的大小和分布、溶液的流速等因素有关。

在选择硅胶柱时，应该根据实际需要选用合适的柱径和柱高。

3.测试流速：测试不同流速对分离效果的影响。

测试方法为将流速调节为不同值，测定每个流速下所采集的溶液吸收曲线，最终确定出最佳的流速。

4.样品处理：样品从洗脱液中洗脱出来之后，可以使用各种不同的方法进行处理。

例如可以用过滤膜、离心、深度过滤等方法，来去除样品中的离子、颗粒等。

5.动态洗脱：先在洗脱液用水稀释3-5倍，使液面齐平。

关掉泵阀使得管路只循环搅拌。

将占底部10%的甲醇浸入硅胶柱底部粉末颗粒中，然后打开泵阀。

保持洗脱液的温度和相对湿度稳定，然后逐渐开始动态洗脱。

6.收集洗脱液：可以采用分批收集和连续收集两种方法，最终将洗脱液图谱编制。

1.操作前，务必检查所有设备设施是否完好，液体循环是否通畅，以及所有参数（如气温、流速、洗脱液配比等）是否调整合适。

2.在操作时，不能超量进样，以免产生超过硅胶柱承受能力的负荷。

3.在操作中，应注意洗脱溶液的挥发和流动，以避免水分汽化，在操作过程中，应该密封管路和溶液，防止冷凝积聚。

4.硅胶柱层析法有一定的危险性，提供人员应该具备一定的化学实验经验，同时要持续关注硅胶柱的干燥程度，确定每步操作的效果，以保证精度和安全性。

5.在分析过程中，应注意各种简化重复操作，减少操作依赖，以提高生产效率。

总之，硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，其操作相对简便，可以大量产生准确的结果，因此在化学、生物、医药等领域都有广泛的应用。

柱层析的实验方法和技巧

湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂（一般用淋洗剂）拌匀，在硅胶颗粒还没有沉降前装入层析柱中。此法最大的优点是柱子装的比较结实，没有气泡，柱效高。在用湿法装柱时，先在层析柱中装入一定量的淋洗剂，放空一部分以排走所有的气泡，关闭柱子活塞，在柱中留1～2cm的淋洗剂，然后装入匀浆后，再用淋洗剂“走柱子”，直至硅胶界面不再下降为止。此时也可轻轻地敲打柱侧，以加速硅胶的沉降和排走带入的气泡。
此外在采用TLC选择洗脱剂时还应注意：
第一，某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。因此在寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不同的展开剂。展开剂的极性太小，点分不开；极性太大，也分不开。
第二，点不能点得太浓，否则容易重叠，不易判断，因为如果两个点相近的话，一浓就变成一个点了。但也不能太淡，否则含量较少的成分可能斑点模糊或不显出斑点。点样时还应避免损伤薄层。
干法装柱是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实（抽真空时间不要太长，以免柱子装的过实，流速过慢而导致扩散），接着是用淋洗剂“走柱子”。干法装柱较方便、快速且溶剂耗量少，但是其分辨率低、柱效差，故适于大量样品的粗步分离。在干发装柱时应注意：不要过分剧烈地震动和敲打侧壁，过分剧烈地震动和敲打侧壁会使得硅胶因自身粒径的不均匀性而产生柱子整体的不均匀。
而把固定相极性小于流动相极性的柱色谱方法称为反相柱层析，常用的流动相为甲醇、水等极性溶剂。较适宜分离极性较高的化合物。
二、凝胶层析——根据物质的分子大小进行分离
凝胶层析又称为凝胶过滤、分子筛层析等，是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。常用的凝胶是葡聚糖凝胶（Sephadex)，如Sephadex LH-20。

柱层析的实验方法和技巧

柱层析的实验方法和技巧柱层析法（Column chromatography）是一种常用的化学分离和纯化技术，可以用于从混合物中分离出多种化合物。

本文将介绍柱层析法的实验方法和一些实验技巧。

一、实验方法：1.准备工作：a.准备固定相：将固定相填充到柱中，并充填好；可以使用硅胶、氧化铝或C18等材料作为固定相；b.准备混合物：将待分离化合物溶解在适当的溶剂中；c.准备洗脱剂：根据实验需求选择合适的洗脱剂；2.柱层析操作步骤：a.将固定相填充到柱中。

b.添加适量的固定相保护剂：一般使用不溶于溶剂的物质作为固定相保护剂，以避免固定相的挤压；c.向柱中加入样品溶液，可使用注射器或滴管将样品缓慢滴入；d.加入适量的洗脱剂，使样品溶液通过柱时能够清除杂质；e.收集落下液：通过检测进样后的溶液，根据待分离化合物的特点来控制洗脱剂的加入；f.收集洗脱液：通过改变洗脱剂的性质和量，逐渐改变洗脱液中化合物的组成，实现化合物的分离；g.检测：对收集的液体进行分析和检测，确认化合物的纯度。

二、实验技巧：1.选择合适的固定相：根据待分离物质的性质选择合适的固定相。

一般来说，伯胺、硅胶C（C18）适用于一般的分离，而硅胶S（C2），硅胶A（C4）适用于疏水性化合物的分离，氧化铝适用于酸性物质的分离。

2.控制流速：流速过快会导致分离不彻底，流速过慢则浪费时间。

一般来说，柱床高度不同，流速也会有所不同，对于较长的柱床应采用较快的流速。

3.控制样品量：样品量过多可能会使分离效果不理想，样品量过少则浪费固定相。

应根据待分离化合物的性质和固定相的吸附容量来选择适当的样品量。

4.控制洗脱剂的pH值和溶度：柱层析中的选择性很大程度上取决于洗脱剂的pH值和溶度。

应根据待分离物质的性质和固定相的特点选择合适的洗脱剂。

5.收集洗脱液：在开始柱层析实验时，收集过程中的溶液可能是混合物，因此从开始收集时就需要根据所得的混合物变清的时间点调整洗脱剂的性质和量。

柱层析步骤

柱层析分离步骤1.取样拿到样品后用毛细管蘸取少量的样品放入离心管中，加入相应的溶剂将样品溶解，标号后作为对照。

2.跑板将取出的样品与要分离的样品点在同一块硅胶板上进行跑板，确定第几个点是将要分离出来的样品。

3.装柱将少量的棉花（棉花太少会露出硅胶，太多过滤的较慢）塞入柱子低端防治硅胶露出，配制硅胶溶剂时浓度应适当（浓度过大易造成干柱，溶度过小会大量浪费溶剂），将硅胶装入柱子直径的15—20倍高即可（柱子过高浪费时间且没有必要，柱子过低会造成物质没有分离开就应经被洗下）。

倒入一定量的硅胶之后将硅胶压实，然后将溶液压至和硅胶面向近处，重复加入硅胶到达预定的高度，然后加入一定量的无水硫酸钠（作用是防治在加样时将硅胶面冲的变形），然后用手稍微弹动柱子将无水硫酸钠弹平，在溶剂将柱内壁的硅胶及无水硫酸钠洗净。

4.加样将样品用溶剂溶解后加入柱内（加入溶液时从中间像外圈旋转滴加，不要将柱面冲出坑），并用溶剂反复洗瓶子3遍左右（洗瓶子时将溶剂沿磨砂口加但不能碰到瓶内壁，否则会污染试剂），将洗后的液体转移至柱子内。

5.过柱先用滴管沿柱内壁加入溶液，溶液到达一定高度后再将配制的溶液倒入到柱子上面的球型漏斗内，加压，先用锥形瓶接取前面柱内的溶剂，然后当溶液到达一定的高度时开始用试管接，然后不断的检验试管中是否有样品洗出，当从有样品洗出到没有时，第一个样品就被完全洗出，跳跃的点一定数量的点，然后进行跑板，确定没有自己要分离的样品后就可以倒掉，继续洗柱子。

换取极性稍大的溶剂，分离到第二个样品后同第一个做同样的处理，直至得到自己要的样品。

6.旋干将的的样品转移至圆底瓶中旋干，在将样品瓶安装好后，先打开冷凝系统和加热系统，然后打开旋转和抽气，缓慢关闭活塞，此时不停的观察是否有气泡，若有气泡应放入一定气体，然后缓慢关闭直至没有气泡，旋干后用油泵抽气（油泵的真空度比选转蒸发仪的真空度更大，能抽的更干）然后放入称量过质量的小瓶中，封口后放入冰箱内保存。

硅胶柱层析分离的实验原理法与技巧

硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧一、硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

200-300 目硅胶，称 30-70 倍于上样量；如果极难分，也可以用 100 倍量的硅胶 H。

干硅胶的视密度在 0.4 左右，所以要称 40g 硅胶，用烧杯量 100ml 也可以。

2.搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚 /乙酸乙酯 /丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿 /醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1% 的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3.装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3 体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4.压实。

沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

柱床约被压缩至 9/10 体积。

无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5.上样。

干法湿法都可以。

海沙是没必要的。

上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6.过柱和收集。

柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

收集的例子：10mg 上样量，1g 硅胶 H，0.5ml 收一馏分； 1-2g 上样量，50g 硅胶（200-300 目），20-50ml 收一馏分。

硅胶柱层析的操作过程

柱层析极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统极性较大的用甲醇：氯仿系统极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析下面介绍我现在惯用的方法：匀浆法。

1。

称量。

200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。

干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。

2。

搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3。

装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4。

压实。

沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

柱床约被压缩至9/10体积。

无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5。

上样。

干法湿法都可以。

海沙是没必要的。

上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6。

过柱和收集。

柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。

7。

检测。

要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。

8。

送谱。

收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。

如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。

硅胶柱层析的原理及方法分析全文

硅胶柱层析的原理及方法分析全文硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。

干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。

2.搅成匀浆。

加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。

如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。

如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。

氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。

如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。

3.装柱。

将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。

随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。

4.压实。

沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。

柱床约被压缩至9/10体积。

无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。

5.上样。

干法湿法都可以。

海沙是没必要的。

上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。

然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。

6.过柱和收集。

柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。

太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。

收集的例子：10mg 上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。

柱层层析硅胶cas

柱层层析硅胶cas柱层层析硅胶（Column Chromatography Silica Gel，简称CC硅胶）是一种用于化学分离和纯化的常见技术。

它是在硅酸盐基础上制备的，具有多孔结构和大的比表面积，因此在分离纯化过程中具有良好的吸附能力和选择性。

本文将介绍柱层层析硅胶的原理、操作步骤以及它在化学实验中的应用。

柱层层析硅胶的原理是基于物质在固定相（硅胶）和流动相（溶剂）之间的相互作用力差异实现分离。

固定相是填充在柱中的硅胶，它的粒径和孔径大小可以根据需要选择。

流动相是溶剂，可以通过改变溶剂的组成和性质来调节吸附和洗脱的效果。

在柱层层析过程中，样品溶液首先被加载到柱上，然后通过溶剂的流动，溶液中的不同组分会以不同的速度在固定相上移动，从而实现分离。

柱层层析硅胶的操作步骤如下：1. 准备柱子：选择合适大小的柱子，装入硅胶并均匀填充。

2. 预处理硅胶：用适当的溶剂进行洗涤，去除杂质和水分。

3. 样品加载：将待分离的混合物溶液加载到柱子上，可以使用注射器或滴管缓慢加入。

4. 溶剂流动：选择适当的流动相，缓慢地通过柱子，使样品分离。

5. 分馏收集：通过收集不同时间或体积的洗脱液，分别收集不同组分的纯化产物。

柱层层析硅胶在化学实验中有着广泛的应用。

例如，在有机合成中，它可以用于分离、纯化和提取目标化合物。

柱层层析硅胶的分离效果受到多种因素的影响，如硅胶的粒径和孔径大小、溶剂的选择和流速、样品的性质等。

根据需要，可以调整这些因素以达到更好的分离效果。

柱层层析硅胶还可以用于生物化学实验中的蛋白质纯化和寡核苷酸分离。

在这些应用中，硅胶通常需要经过修饰以增加特异性吸附。

此外，柱层层析硅胶还被广泛应用于药物分析、环境监测和食品检测等领域。

总结起来，柱层层析硅胶是一种常用的化学分离和纯化技术。

它通过固定相（硅胶）和流动相（溶剂）之间的相互作用力差异实现样品的分离。

在化学实验中，柱层层析硅胶被广泛应用于有机合成、生物化学和药物分析等领域。

柱层析的简单介绍

柱层析的简单介绍柱层析法是以吸附度和溶解度这两者为根据的一种技术，它是一种固-液相间进行分配的技术。

其中的固体几乎可以是任何物料，只要不溶解于附着的液相中即行。

但最常用的一些固体是硅胶(SiO 2 xH 2O) 也叫做硅酸，和氧化铝(Al 2O 3 xH 2O)。

这些化合物均用其粉状或磨细的形式(通常为200至400目) 层析法中所用的极大多数氧化铝系从粗的铝矿石(Al 2O 3 xH 2O + Fe 2O 3) 制得。

将铝土矿石溶于热氢氧化钠溶液中，过滤除去不溶的氧化铁; 矿石中的氧化铝则成为可溶性的两性氢氧化物 Al(OH)4-。

这个氢氧化物用CO 2(它能降低PH) 使沉淀成为 Al(OH)3 ，在加热时，此Al(OH)3失水成为纯的 Al 2O 3。

按此方法制得的氧化铝称为碱性氧化铝。

因为它仍旧含一些氢氧化物。

碱性氧化铝不能用于对碱敏感的化合物的层析分离。

因此，要用酸加以洗涤以便将碱中和，这样便得到酸性氧化铝。

这种物料仍然不能令人满意，除非经过足够的水洗以除去所有的酸，才能获得最适用于柱层析的物料，称为中性氧化铝。

如果化合物是酸敏感的，必须使用碱性或中性氧化铝，必须仔细的弄清你在层析法中所用的氧化铝属于哪一类型。

硅胶除了以适用于层析法的形式供应外别无任何其他类型。

若将粉末状或磨细的氧化铝(或硅胶) 加入至含有一种有机化合物的溶液中时，一部分有机物将会吸附或黏在氧化铝细粒上，使有机分子和氧化铝结合的力有好几种。

这些力按其种类不同，强度不一。

非极性化合物只用范德华( Van der waals) 力与氧化铝结合。

这种力较弱，故非极性化合物不能结合得很牢除非它们的分子量非常大。

极性有机化合物所用的相互作用力则较为重要，此中所用之力或为偶极-偶极相互作用力，或为某种直接的相互作用力(配位作用，氢键，或盐的形成等)。

这些相互作用的强度变化次序大致是: 盐的形成>配位作用>氢键>偶极-偶极相互作用力>范德华力。

使用柱层析硅胶的几个技巧

使用柱层析硅胶的几个技巧柱层析硅胶是一种广泛应用于化学分析和制造领域的化学试剂。

它的主要作用是用于将混合的化合物进行分离，并且可以根据渗透性和亲和力进行分子分离。

与许多其他试剂一样，柱层析硅胶具有一个独特的使用方法，需要特别注意到几个技巧和步骤。

本文讲述使用柱层析硅胶的几个技巧，旨在帮助您更好地理解并正确使用这种化学试剂。

技巧1：正确选择柱层析硅胶的类型必须根据需要分离的分子和混合物的性质来选择柱层析硅胶的类型。

当前市面上有许多不同类型的柱层析硅胶，包括正相色谱柱层析、反相色谱柱层析和离子交换柱层析等。

因此，在选择柱层析硅胶之前，需要了解试剂的类型并选择该类型以最佳地满足您的需要。

技巧2：调整样品浓度以达到最佳解析度对于过于稀释或过于浓密的样品溶液，分子无法均匀地分配到柱层析硅胶的各个部分中。

因此，调整样品的浓度以满足柱层析硅胶的需求是非常关键的。

在调整样品浓度时，不仅需要注意分子的浓度，还需要考虑呈现样品的溶剂，并确保在正确的浓度下呈现。

技巧3：保持柱层析硅胶的湿润状态柱层析硅胶的硬度和结构会在干燥时受到损坏，从而影响了分析结果。

因此，在柱层析硅胶不在使用时应始终保持其湿润状态。

这可以通过注入一些有机相来实现，并在放置柱子时确保其垂直或略向下安装。

这可以防止重液沉积并保持柱层析硅胶的湿度。

技巧4：避免过载柱子过载柱层析硅胶会导致以前分离的混合物的重新混合，从而可能会影响分析结果。

因此，在添加新的样品之前，应完全冲洗柱层析硅胶以确保前一讲分离的混合物已彻底从柱子中清除。

此外，在每个柱层析硅胶中应根据压力适当调整样品的量以避免过度装载柱层析硅胶。

技巧5：检查设备并记录运行参数尽管柱层析硅胶是一种高质量的化学试剂，但它也需要适当的设备和参数来实现最佳结果。

因此，在使用柱层析硅胶之前，应检查所有设备以确保其完好无损，并记录运行参数，包括溶剂流率，发生器，解决方案pH，溶液组合等。

这样，如果发现问题，可以更轻松地识别并进行调整。

柱层析硅胶粉

柱层析硅胶粉柱层析硅胶粉是一种常用的吸附材料，广泛应用于化学、医药、生物等领域。

它主要由硅胶颗粒组成，具有多孔结构和较大的比表面积，因此具有较高的吸附能力。

在柱层析过程中，硅胶粉作为固定相，可以与流动相中的样品分子发生相互作用，从而实现分离和纯化。

本文将详细介绍柱层析硅胶粉的性质、制备方法、应用以及注意事项。

一、柱层析硅胶粉的性质1. 多孔结构：柱层析硅胶粉具有丰富的多孔结构，这些孔隙可以是连通的，也可以是封闭的。

多孔结构使得硅胶粉具有较高的比表面积，从而增强了其吸附能力。

2. 吸附性能：柱层析硅胶粉对样品分子具有较好的吸附性能，可以通过调节硅胶粉的性质（如孔径、比表面积等）来优化吸附效果。

3. 化学稳定性：柱层析硅胶粉具有较好的化学稳定性，能够在多种溶剂和酸性、碱性环境中保持稳定的吸附性能。

4. 热稳定性：柱层析硅胶粉具有较高的热稳定性，可以在高温条件下进行柱层析操作。

二、柱层析硅胶粉的制备方法柱层析硅胶粉的制备方法主要有两种：干法和湿法。

1. 干法：干法是将硅酸钠与硫酸反应生成硅酸，然后通过干燥、煅烧等步骤制备成硅胶粉。

这种方法制备的硅胶粉具有较高的纯度和吸附性能。

2. 湿法：湿法是将硅酸钠与硫酸反应生成硅酸，然后通过沉淀、洗涤、干燥等步骤制备成硅胶粉。

这种方法制备的硅胶粉具有较高的机械强度和耐磨损性。

三、柱层析硅胶粉的应用柱层析硅胶粉在化学、医药、生物等领域具有广泛的应用，主要用于分离和纯化样品中的组分。

1. 化学领域：柱层析硅胶粉可以用于有机化合物的分离和纯化，如药物、天然产物等。

2. 医药领域：柱层析硅胶粉可以用于生物样品（如血液、尿液等）的预处理，以及药物成分的分离和纯化。

3. 生物领域：柱层析硅胶粉可以用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离和纯化。

四、柱层析硅胶粉的使用注意事项1. 选择合适的硅胶粉：根据样品的性质和分离要求，选择合适的柱层析硅胶粉，如孔径、比表面积等。

2. 柱层析操作：在柱层析操作过程中，要保证流动相的流速、温度等参数适宜，以获得较好的分离效果。

实验室硅胶柱操作规范

实验室硅胶柱操作规范1、操作步骤1.1 硅胶准备柱硅胶一般选用200-300目，拌样硅胶一般选用100-140目。

拌样硅胶用量为样品量的1-8倍，柱硅胶用量为样品量的8-100倍，对于极难分离的样品，还可以使用硅胶H作为柱硅胶。

1.2 实验仪器准备一支玻璃色谱柱，一个铁架台，烧杯，锥形瓶，径口直径较大的玻璃漏斗，一支玻璃棒，硅胶管，螺旋夹，夹子等。

1.3 装柱1.3.1 将硅胶管与色谱柱下端相连(若色谱柱带活塞则不用)，往硅胶管上加上螺旋夹，取与色谱柱口径相应的棉花，厚薄适中(太厚流速慢，太薄易漏硅胶)，置入色谱柱底部，将色谱柱固定于铁架台上。

1.3.2 吸附剂的加入①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相；或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。

操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。

②湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。

装完柱后需等硅胶沉降压实后再上样，通常需要半天到一天时间。

1.3.3试样的加入①湿法：将试样溶于层析时使用的流动相中，过滤，待填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将与柱表面相平时，再沿色谱管壁缓缓加入滤液。

注意勿使吸附剂翻起。

②干法：选择适当溶剂使样品刚好完全溶解，过滤后取100-140目硅胶适量，将样品溶液缓慢加入到拌样硅胶中，边加入边搅拌，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状（一般需放入通风橱中挥干过夜）；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。

如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。

上完样后可在拌样硅胶上面加入少量100-140目的保护硅胶，在保护硅胶之上还可以加入脱脂棉以防止加流动相时破坏硅胶保护层。

硅胶柱层析实验报告

硅胶柱层析实验报告本实验旨在通过硅胶柱层析法分离和纯化混合物中的有机物，了解硅胶柱层析法的原理及操作步骤，并掌握准确分离纯化有机物的方法。

实验原理：硅胶柱层析法是一种常用的分离和纯化有机物的方法，其分离原理是利用不同物质在硅胶柱上的吸附性、溶解性和扩散性差异，通过物质在硅胶上的迁移速度不同实现分离纯化的目的。

实验步骤：1. 准备硅胶柱：在取样架上横放一根长玻璃管，管内填充净化后的硅胶，并用砂芯杆将硅胶填充密实。

2. 试样制备：将待分离的混合物按照一定比例混合，加入适量的溶剂中溶解，制备好浓度适中的试样溶液。

3. 样品处理：将试样溶液通过滤纸滤除杂质，然后用注射器将样品注入硅胶柱上部，让其均匀渗透到硅胶柱中。

4. 流动相选择：根据样品的特性和目的，选择合适的流动相，如正己烷：乙酸乙酯（8:2）。

5. 层析：用滴酒器滴加流动相，使其从硅胶柱上部流动到底部，收集不同部位的溶液，通常以试剂漏斗收集。

6. 分离纯化：根据不同吸附特性，选择性收集目标物质，分离纯化为单一化合物。

实验结果：根据实验操作，得到硅胶柱层析的分离纯化实验结果。

实验讨论：1. 实验结果是否与预期相符，若不符合，可能的原因是什么？2. 实验中是否出现问题，如何解决？3. 实验中有无其他操作或步骤可以改进？4. 实验中应注意的细节和操作注意事项是什么？实验结论：通过硅胶柱层析法可以有效地分离和纯化混合物中的有机物，实验结果符合预期要求。

实验中出现的问题及解决方案已在讨论中给出。

实验中可以改进的操作或步骤需要再次优化。

在实验操作中，应注意保持操作环境的清洁和安全，遵循实验室操作规程，准确记录实验数据，并在实验结束后将实验器材进行清洗和归还。

参考文献：[1] 硅胶柱层析法在有机化学实验中的应用[J]. 实验技术与管理，2010(4)：138-140.[2] 孙XX，李XX. 有机化学实验[M]. 北京：高等教育出版社，2019.。