硅胶柱层析
硅胶柱层析的方法
硅胶柱层析的方法硅胶柱层析是一种常用的色谱分离技术，它基于样品成分在硅胶柱上的吸附和解吸过程，通过不同组分在硅胶上的吸附和解吸速度差异来实现分离和纯化。
硅胶柱层析的方法主要包括制备硅胶柱、样品处理、样品加载、洗脱和分析收集等步骤。
第一步是制备硅胶柱。
首先，选择合适的硅胶填料，常用的有粉末状硅胶和硅胶凝胶。
粉末状硅胶适用于高效液相色谱（HPLC），硅胶凝胶适用于柱层析。
然后，将硅胶填充到柱子中，通常使用的是玻璃柱，选择直径和长度适当，填充过程需要控制填充的均匀度和压实度，确保硅胶柱的质量。
第二步是样品处理。
根据需要，可以采取不同的处理方法。
例如，如果样品中有杂质或固体颗粒，可以首先使用滤纸或过滤膜进行过滤；如果样品中有有机溶剂，可以先进行浓缩或萃取。
处理后的样品应保持干燥和无杂质，以免对硅胶柱的分离产生干扰。
第三步是样品加载。
将处理后的样品加入硅胶柱中，一般通过重力或压力的方式进行。
样品的进样量应适中，既不能太多导致硅胶柱失效，也不能太少导致分离效果不理想。
如果样品中有多个组分需要分离，可以采用多次加载的方式，每次加载后等待吸附完成再进行下一次加载。
第四步是洗脱。
洗脱是分离和纯化的关键步骤。
一般来说，先用无极性溶剂进行洗脱，逐渐增加溶剂的极性，以使吸附在硅胶上的样品逐渐解吸出来。
洗脱的速度和温度也会影响分离效果，需要根据具体情况进行优化。
在洗脱过程中，可以采集不同洗脱时刻的洗脱液，以便后续的分析和检测。
最后一步是分析和收集。
通过对洗脱液的分析，可以确定各个组分的含量和纯度。
一般可以使用紫外可见光谱分析或其他检测方法进行定量分析。
根据分析结果，可以对样品进行收集，用于进一步的研究或生产应用。
总的来说，硅胶柱层析是一种简单且有效的分离技术。
通过合理选择硅胶填料、样品处理、加载、洗脱和分析等步骤的优化，可以实现对复杂混合物的高效分离和纯化。
在实际应用中，还需要考虑到硅胶柱的选择、操作条件的调整和设备的维护等因素，以保证分析的准确性和重复性。
柱层析硅胶性状和用途
柱层析硅胶性状和用途前言柱层析硅胶是化学实验室中常用的一种分离方法，其原理是依据样品分子在柱层析硅胶上的吸附能力大小进行分离。
在实验室中，柱层析硅胶常用于有机合成中，如提取天然产物、纯化有机物等。
本文将介绍柱层析硅胶的性状和用途。
柱层析硅胶的性状柱层析硅胶通常为白色细粉末状，在水中不溶，但可与一些有机溶剂混合，并形成不同程度的分散胶状物。
柱层析硅胶中的硅氧键结构可被分离分子吸附并逐步释放。
根据颗粒大小的不同，柱层析硅胶可分为不同的型号。
柱层析硅胶的颗粒大小柱层析硅胶的颗粒大小与其性能密切相关。
常见的柱层析硅胶型号包括0.063-0.200mm、0.100-0.200mm、0.200-0.300mm、0.300-0.500mm、0.500-0.710mm 等。
一般来说，颗粒越小，分离效果越好。
柱层析硅胶的孔径柱层析硅胶的孔径同样影响着其性能。
孔径可分为微孔、介孔和大孔三个范畴。
微孔柱层析硅胶的孔径小于2nm，静态吸附能力较强，适合于分离极性化合物或溶剂的少极性物质。
介孔柱层析硅胶的孔径在2-10nm之间，适合于中等极性化合物的分离和纯化。
大孔柱层析硅胶的孔径大于10nm，分离效率较低，但适用于大分子的纯化。
柱层析硅胶的用途分离有机化合物柱层析硅胶在有机化合物的分离和纯化中有广泛的应用。
其颗粒大小、孔径和表面性质的不同能够满足不同的分离条件。
常用的柱层析硅胶包括正相层析硅胶、反相层析硅胶和离子交换树脂层析硅胶。
中药提取柱层析硅胶在中药提取中也有广泛的应用。
在中药材中，不同的成分具有不同的极性，柱层析硅胶的分离能力和选择性可以有效地提取目标成分。
同时，柱层析硅胶可以去除中药材中的杂质和碎屑，提高中药品质和纯度。
食品检测柱层析硅胶在食品检测中也有应用。
例如在果汁中探测添加的防腐剂，柱层析硅胶可以有效地分离目标化合物并提高检测灵敏度。
总结柱层析硅胶是一种广泛应用于化学实验室中的分离方法，其性质和用途多样。
硅胶层析原理及操作
硅胶层析原理及操作硅胶层析原理及操作硅胶柱层析原理⼀．硅胶柱层析原理⼀． 硅胶层析法分离原理是根据物质在硅胶上的吸附⼒不同⽽得到分离，极性较⼤的物质与硅胶作⽤强，保留时间长，极性弱的物质与硅胶作⽤弱，保留时间短，物质在固定相与流动相间通过反复的吸附、解吸过程，得以分离。
流动相选择，极性⼩的⽤⼄酸⼄酯/⽯油醚系统；极性较⼤的⽤甲醇/氯仿系统；极性⼤的⽤甲醇/⽔/正丁醇/醋酸系统；如有拖尾，可根据具体情况，加⼊少量氨⽔或冰醋酸操作⽅法硅胶层析操作⽅法⼆．硅胶层析⼆． 1.硅胶量确定。
称取⼀定量的硅胶，根据所要装填的柱⼦体积及上样量来确定（上样量5%以内），极难分的物质，可适当增加硅胶量。
硅胶的密度在0.5-0.6左右，由此可计算出装填⼀定体积的柱⼦需要称取的硅胶质量。
2.制备匀浆。
加⼊⼲硅胶体积⼀倍的溶剂，玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是⽯油醚/⼄酸⼄酯/丙酮体系，就⽤⽯油醚制备匀浆；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就⽤氯仿制备匀浆。
3.装柱。
柱底出⼝关闭，⽆筛板的可⽤棉花替代，加⼊约1/5体积⽯油醚（氯仿），将匀浆⼀次性倾⼊柱⼦中。
然后打开柱⼦底部出⼝，待硅胶床沉降稳定后，关闭出⼝（注意不要使液⾯低于硅胶床）。
4.压实。
沉降完成后，⽤双联球或⽓泵加压，泵⼊洗脱液，直⾄床⾯稳定。
5.上样。
上样后，加⼊洗脱剂洗脱，可将脱脂棉置于硅胶床表⾯。
避免添加流动相时冲坏硅胶表⾯。
6.过柱和收集。
采⽤合适的洗脱液洗脱，根据样品情况可采⽤梯度洗脱。
分离出的样品采⽤分部收集，具体每个馏分的体积可根据实际的分离效果来确定，⼀般情况下以柱体积的10%为⼀个馏分来收集。
7.检测。
使⽤专⽤喷显剂，只使⽤⽤紫外检测，可能会损失⼀些样品，紫外的灵敏度⼀般⽐喷显剂低1-2个数量级。
三．柱层析经验1．柱⼦填装硅胶柱⼦装填，有两种⽅法：即湿法装柱和⼲法装柱。
不论⼲法还是湿法，硅胶（固定相）床的表⾯要平整，柱床径⾼⽐1:10以上，太短塔板数不够，太长会产⽣轴向扩散。
柱层析硅胶
柱层析硅胶
1.原理
柱层析硅胶的原理是根据原理相同的物质在不同条件下移动速度不同的特性，将样品在填充于柱中的硅胶中进行分离。
硅胶作为非极性物质，能够吸附极性物质，不同的硅胶粒度对样品的分离效果均不同。
2.分类
柱层析硅胶根据不同的粒度、孔径及强度，可分为不同的类型。
常见的有：
①L类型：中等孔径（100-200Å），对大多数化合物有良好的分离效果；
3.性质
柱层析硅胶的性质主要包括吸附性、表面积、孔径和粒径等。
其中吸附性越好，分离效果越好，但是也容易出现过度吸附的问题。
硅胶的表面积、孔径和粒径越小，其表面积和孔径比就越大，样品与硅胶的接触面积越大，吸附能力也就越强。
4.注意事项
在柱层析实验中，应注意以下事项：
①硅胶的选择应根据样品的性质和对分离效果的要求来进行。
②实验前要进行柱层析硅胶表面修饰，保证硅胶的表面活性。
③样品在加入前应先进行前处理，如过滤、浓缩或化学修饰等，以保证样品质量。
④严格控制柱层析条件，如移相剂的类型和浓度、流速、温度等，以保证分离效果。
⑤在柱层析后，对分离得到的物质进行鉴定和分析，以判断分离效果。
在实验中，应注意操作安全，避免化学品泼洒和误吸等意外情况的发生。
5.总结。
硅胶柱层析
硅胶柱层析硅胶柱层析技术是一种用于分离和分析分子结构相似或略有不同的有机化合物的有机分离技术。
这种分离技术既可用于混合物的分离纯化，也可用于单组分的准确分析。
硅胶柱层析可以得到高精度的分离分析结果，它与其它分离分析技术相比具有较高的灵敏度，操作方便和分析效率高。
硅胶柱层析分子可以通过两种不同的方式分离：一种是吸附，另一种是偏析。
在吸附过程中，溶质分子被吸附在柱粒子表面上，并且不会溶解，而在偏析过程中，溶质分子会在柱粒子表面上同时进行偏析和均相移动，也就是说，不同结构的分子会以不同的速度移动，从而分离混合物中的分子。
硅胶柱层析过程的主要操作步骤如下：第一步是将硅胶柱放入柱层析装置中；第二步是向硅胶柱中加入待分离分析物；第三步是使用柱层析仪进行柱层析测定，即将分析物在柱中均匀地向下移动；最后一步是收集偏析后的分子产物。
硅胶柱层析技术在有机合成研究和有机分子分析中都有广泛的应用。
它在分离有机混合物、有机废水处理、有机物种鉴定以及其他有机化学应用等方面非常有用。
例如，它可以用于分离混合物中的微量组分；可以用于鉴定相似的有机物；可以用于检测污染物和有毒物质；可以用于分离复杂的有机混合物，如香料中的混合物；还可以用于研究生物分子的三维结构。
此外，硅胶柱层析技术还可以用于食品分析，如可可粉、乳糖、蛋白质分析等，以及药物分析，如抗生素分析、降脂药物分析等。
它甚至可以用于环境分析，如溶解性有机磷、元素烃的分析，在进行环境污染检测中也有重要作用。
硅胶柱层析技术目前已经被广泛应用于各个领域，它具有较高的灵敏度、操作简便、分析效率高以及结果可靠等优点。
硅胶柱层析技术也可以用于大规模分离复杂的物质，这使得它成为有机化学研究中不可或缺的重要技术。
硅胶柱层析的操作方法及注意事项
硅胶柱层析一、硅胶柱层析的原理利用吸附原理，即利用硅胶对中药混合物中各种成分吸附能力的差异，而使混合物中各成分得以分离的色谱方法。
二、硅胶柱层析的操作方法及注意事项1、装柱操作要点：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。
有干法装柱和湿法装柱两种方法（1）干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内，中间不应间断，形成一细流慢慢加入管内。
也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。
柱装好后，打开下端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并保持一定液面。
（2）湿法装柱：将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，打开下端活塞，使洗脱剂缓慢流出。
然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液慢慢加入柱内，），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自由沉降，此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变动为止。
然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。
根据加样量控制洗脱剂液面至一定高度。
匀浆法：搅成匀浆。
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
2、上样将欲分离的样品溶于少量装柱时用的洗脱剂中，制成体积小、浓度高的样品溶液，加入层析柱中硅胶面上。
如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，则将样品溶于易挥发的溶剂中，并加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面），再覆盖一层硅胶即可。
上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。
3、洗脱洗脱剂的选用可通过薄层色谱筛选，一般TLC展开时Rf 值为0.2~0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。
硅胶柱层析
硅胶柱层析一、硅胶柱层析原理根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
二、硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸三、硅胶柱层析惯用方法1.称量200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。
干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2.搅成匀浆加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。
柱床约被压缩至9/10体积。
无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5.上样干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。
收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
7.检测要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
硅胶柱色谱层析 杨列超
The end,thank you!
祝老师同学假期愉快！
• 解决的办法是：第一、硅胶一定要填结实；第二、 一定要用较多的溶剂“走柱子”，一定要到柱子 的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。也 有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止 添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。但我的 感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必 要。
• 匀浆法： 搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂 用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙 酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/ 醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明 溶剂中含水量太大，尤其ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ乙酸乙酯/丙酮，如果 不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫 酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去 1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过 柱。
• 上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的 样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀 后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子 的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很 平整。湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开 剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性 较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用 胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀 加入。然后用少量溶剂洗涤后，再加入。湿法较 方便，熟手一般采用此法。 上样完毕后，接着即 用淋洗剂淋洗。
• 淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再 稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同， 即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析 得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大， 所以要稀释一倍，但又不能稀释太多，否则成了 靠扩散作用来分离，效果也不会好。 • 上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶 上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。
硅胶柱层析
硅胶柱层析一、硅胶柱层析原理根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程.二、硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统;极性较大的用甲醇:氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸三、硅胶柱层析惯用方法1.称量200—300目硅胶,称30—70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H。
干硅胶的视密度在0。
4左右,所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2。
搅成匀浆加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系,就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆,说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置干燥.氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1％的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3。
装柱将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿)，装上蓄液球，打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿)将其冲入柱中。
4.压实沉降完成后,加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定.柱床约被压缩至9/10体积.无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步,可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂.5.上样干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后,加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面.6.过柱和收集柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱.收集的例子:10mg上样量,1g硅胶H，0。
5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶(200-300目），20-50ml收一馏分.7.检测要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1—2个数量级。
硅胶柱层析技术
硅胶柱层析技术
➢ 常说的过柱子应该叫柱层析分 离，也叫柱色谱。我们常用的是以 硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
➢ 其实硅胶柱层析技术也可以称 作硅胶吸附柱色谱技术
▪ 色谱法，又称层析法。是一种以分配平衡为机理 的分配方法。色谱体系包含两个相，一个是固定 相，一个是流动相。当两相相对运动时，反复多 次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差 异，最后达到彼此分离的目的。
2.5 检测 2.5.1 初步检测
当冲洗溶剂流出一定量后，可对流出液进行初步检测，并且将锥形瓶 更换成小试管进行收集。一般只进行初步的快捷检测，因此通常是取 一小薄层板，用铅笔和直尺将硅胶板分划成多个小方块，并按一定的 次序编号。取一根内径为左右的玻璃毛细管蘸取少量流出液，点于薄 层板的一个小格内，待半点干后，然后用物理的或化学的方法检测。
夹带样品快速下行。
所柱④以子其 粗显他了色条，件上:相样一同后般的样时品常候的，原用常点物压就柱小理是（效反检率映测最在高柱法的子，上和但就化是是时样学间品也层检最比测长较，薄法比）如，.物天这然样理化相检合对物的测的减分小法离了，分中一离首个 的柱难先子度几。有个紫月也外是有光的。 乙醇等法)然后,紫用毛外细光管或常微量用点两样管种将试波液长点到(薄2层54板n上m. 与365nm).其次是碘蒸气显色法.化学检 取薄一层根 色出内谱径的法为展左开通右方常的法玻有惊璃上毛行醒细法显管,下蘸行色取法少剂,双量向直流展出开接液法，喷,径点向雾于展薄.开层显法板色等的。一剂个小有格通内，用待半显点色干后剂，然和后专用物用理的显或色化学剂的方.通法检测。 柱考层虑析 有用实限际柱显上填是料色在的剂扩吸散附最和量分常离见之间的的权是衡硫。 酸-乙醇或甲醇(1:1)溶液,喷雾后,有的化合物立 所以其即他条反件相应同,的但时多候，数常压化柱合是效物率最需高加的，热但是后时间经也历最长数，比分如钟天然才化合显物色的分,不离，同一个化柱合子几物个月的也反是有应的。 用文普献通 中不的有载写同薄用片正,所制己成烷以薄的颜板，太,把色贵欲了分也，离往除的非物往特质别点不需载同要薄不板.要专上用,放用不于然显小银型子色玻哗璃剂哗缸的是或，广流指口的瓶对比中淋展某洗开剂个,干还燥或快后，某显不色过一,因观类为察极斑化性点很分合小离物，情有况显时. 还是非它不可。 化取学出检 硅色出胶法的的通一常种试惊方剂醒法显是,利色将剂该用直柱接放化喷置合雾一段. 物时间本,让身溶剂的自然特挥有发完性后,质倒出,或硅胶利. 用其所含的某些官能团的 显色剂特有通殊用显反色应剂和.展专用开显色后剂根. 据斑点的,可以粗略的估计待分离物的含量的大小.
硅胶柱层析
2.4洗脱
通常按流动相洗脱能力大小，递增变换流动相的品种和比 例，分别分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少 或不再含有时，再改变流动相的品种和比例。操作过程中 应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。
2.3.2加样 ①干法：当被分离物质难溶于最初使用洗脱剂时，可选用一种
对其溶解度大而且沸点低的溶剂，将样品溶于尽可能少的该 溶剂中，将溶液加入适量吸附剂中或将吸附剂加入溶液中， 拌匀，挥干溶剂，研磨使之成为松散均匀的粉末，轻轻撒在 色谱柱吸附剂上面，再撒一层保护用细砂或所用吸附剂。注 意干法装柱时，色谱柱的活塞应处于开启的状态。
2、搅成匀浆 加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱 剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗 脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆， 说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸 乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用 无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1% 的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
硅胶一般选用200-300和300-400目 2.2 实验仪器准备
一支玻璃色谱柱,一个铁架台,烧杯,锥形瓶,径口直径较大的 玻璃漏斗,一支玻璃棒等。
2.3 装柱
2.3.1 吸附剂的加入
①干法：用带有砂芯板的色谱柱（或在普通色谱柱下端加少 许棉花或玻璃棉），打开下口，然后将吸附剂经漏斗缓缓 加入柱中，同时轻轻敲动色谱柱，使吸附剂松紧一致。
柱层层析硅胶
柱层层析硅胶柱层层析硅胶是一种常用的分离纯化技术，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
它是一种基于化学吸附和分子筛分离原理的技术，通过将混合物溶液经过硅胶柱层层析，使不同成分在硅胶柱中发生不同程度的吸附和分离，从而实现对混合物的分离纯化。
柱层层析硅胶的原理是基于化学吸附和分子筛分离原理。
硅胶是一种多孔性固体材料，具有很强的吸附性能。
当混合物溶液通过硅胶柱时，不同成分在硅胶表面发生不同程度的吸附，从而实现对混合物的分离纯化。
硅胶柱层层析技术的分离效果取决于硅胶的孔径大小、表面性质、溶液pH值、离子强度等因素。
柱层层析硅胶的操作步骤一般包括样品制备、柱层层析、洗脱和收集等步骤。
首先，将待分离的混合物溶液制备好，然后将其加入硅胶柱中。
在柱层层析过程中，混合物溶液会逐渐通过硅胶柱，不同成分在硅胶表面发生不同程度的吸附和分离。
接着，通过洗脱步骤，将吸附在硅胶表面的目标成分从硅胶中洗脱出来。
最后，通过收集步骤，将目标成分收集起来，得到纯净的目标物质。
柱层层析硅胶的优点是分离效果好、操作简单、成本低廉、适用范围广等。
它可以用于分离纯化各种化合物，如蛋白质、核酸、多肽、激素、抗体等。
此外，柱层层析硅胶还可以用于制备高纯度的化合物，如药物、天然产物等。
柱层层析硅胶的应用非常广泛。
在生物制药领域，柱层层析硅胶被广泛应用于蛋白质纯化、抗体制备、酶制备等方面。
在化学领域，柱层层析硅胶可以用于有机合成中的分离纯化、天然产物提取等方面。
在环境监测领域，柱层层析硅胶可以用于水质分析、土壤分析等方面。
柱层层析硅胶是一种常用的分离纯化技术，具有分离效果好、操作简单、成本低廉、适用范围广等优点。
它在化学、生物、制药等领域都有广泛的应用，是一种非常重要的分离纯化技术。
硅胶柱层析
硅胶柱层析硅胶柱层析是一种常用的化学分析技术，其实际应用范围十分广泛，从石油然、医药和食品行业到环境监测和地质探测等，均有较多的应用实例。
本文主要介绍硅胶柱层析的基本原理和工作原理，以及与传统柱层析相比，硅胶柱层析优势明显的方面。
硅胶柱层析是一种基于分子间相互作用实现分离的化学分析技术，是一种在柱芯内以非常小的有机聚合物分子、离子膜、金属离子和其它活性体等作为分子亲和层，实现被测物质分子与分离剂的作用而实现物质的分离的技术，属于无溶剂柱层析。
硅胶柱层析的分离原理是利用硅胶柱包覆的分子间的物质相互作用，利用不同的溶剂扩散和极性交互作用的强弱，实现物质的分离。
而柱芯分离机构，其正要运用的就是溶剂扩散和极性交互作用的强弱。
传统的柱层析方法，需要将分离剂和溶剂混合，由于分离剂本身具有一定的稳定性，使得其混合可以实现一定程度的分离，但是由于它们可以混合质量的不同，因此很难实现较高的分离精度，而且在实际操作中，因为溶剂渗透的存在，会大大增加实验的复杂性，准确性也会存在一定的问题。
与传统柱层析相比，硅胶柱层析有着许多明显的优势，其中首先要提到的是它不仅能够实现廉价易得的分离，而且还能够达到较好的精细程度，其效率和精确度能够明显提升。
另外，由于它可以大大减少添加溶剂，因此不仅仅能够提高实验效率，而且能够有效的降低实验的复杂性。
最后，当涉及到某些有毒物质的分离时，由于这种技术具有无溶剂的特性，因此可以大大减少对环境的影响，有效的保护实验环境的安全性。
综上所述，硅胶柱层析是一种利用分子间相互作用实现分离的无溶剂化学分析技术，与传统柱层析相比，它具有明显的优势，如廉价易得、效率高、精细程度高、不添加溶剂、减少对环境的影响等。
在某些特殊情况下，传统柱层析方法容易受到溶剂渗透的影响，而硅胶柱层析则能够很好的避免这种情况，因此今后由于硅胶柱层析的广泛应用，将会使得化学分析技术发挥更大的作用。
硅胶柱层析分离的实验原理法与技巧
硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧一、硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量。
200-300 目硅胶，称 30-70 倍于上样量；如果极难分，也可以用 100 倍量的硅胶 H。
干硅胶的视密度在 0.4 左右，所以要称 40g 硅胶，用烧杯量 100ml 也可以。
2.搅成匀浆。
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚 /乙酸乙酯 /丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿 /醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1% 的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱。
将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3 体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实。
沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。
柱床约被压缩至 9/10 体积。
无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5.上样。
干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集。
柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。
收集的例子：10mg 上样量，1g 硅胶 H，0.5ml 收一馏分； 1-2g 上样量，50g 硅胶（200-300 目），20-50ml 收一馏分。
硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧
硅胶柱层析分离的实验原理、方法与技巧一、硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量。
200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。
干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2.搅成匀浆。
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱。
将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实。
沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。
柱床约被压缩至9/10体积。
无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5.上样。
干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集。
柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。
收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
硅胶柱层析的原理及方法分析全文
硅胶柱层析的原理及方法分析全文硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量。
200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。
干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2.搅成匀浆。
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱。
将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实。
沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。
柱床约被压缩至9/10体积。
无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5.上样。
干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集。
柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。
收集的例子：10mg 上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
柱层层析硅胶cas
柱层层析硅胶cas柱层层析硅胶（Column Chromatography Silica Gel，简称CC硅胶）是一种用于化学分离和纯化的常见技术。
它是在硅酸盐基础上制备的，具有多孔结构和大的比表面积，因此在分离纯化过程中具有良好的吸附能力和选择性。
本文将介绍柱层层析硅胶的原理、操作步骤以及它在化学实验中的应用。
柱层层析硅胶的原理是基于物质在固定相（硅胶）和流动相（溶剂）之间的相互作用力差异实现分离。
固定相是填充在柱中的硅胶，它的粒径和孔径大小可以根据需要选择。
流动相是溶剂，可以通过改变溶剂的组成和性质来调节吸附和洗脱的效果。
在柱层层析过程中，样品溶液首先被加载到柱上，然后通过溶剂的流动，溶液中的不同组分会以不同的速度在固定相上移动，从而实现分离。
柱层层析硅胶的操作步骤如下：1. 准备柱子：选择合适大小的柱子，装入硅胶并均匀填充。
2. 预处理硅胶：用适当的溶剂进行洗涤，去除杂质和水分。
3. 样品加载：将待分离的混合物溶液加载到柱子上，可以使用注射器或滴管缓慢加入。
4. 溶剂流动：选择适当的流动相，缓慢地通过柱子，使样品分离。
5. 分馏收集：通过收集不同时间或体积的洗脱液，分别收集不同组分的纯化产物。
柱层层析硅胶在化学实验中有着广泛的应用。
例如，在有机合成中，它可以用于分离、纯化和提取目标化合物。
柱层层析硅胶的分离效果受到多种因素的影响，如硅胶的粒径和孔径大小、溶剂的选择和流速、样品的性质等。
根据需要，可以调整这些因素以达到更好的分离效果。
柱层层析硅胶还可以用于生物化学实验中的蛋白质纯化和寡核苷酸分离。
在这些应用中，硅胶通常需要经过修饰以增加特异性吸附。
此外，柱层层析硅胶还被广泛应用于药物分析、环境监测和食品检测等领域。
总结起来，柱层层析硅胶是一种常用的化学分离和纯化技术。
它通过固定相（硅胶）和流动相（溶剂）之间的相互作用力差异实现样品的分离。
在化学实验中，柱层层析硅胶被广泛应用于有机合成、生物化学和药物分析等领域。
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硅胶柱层析硅胶柱层析硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量。
200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。
干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2.搅成匀浆。
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱。
将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实。
沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。
柱床约被压缩至9/10体积。
无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5.上样。
干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集。
柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。
收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
7.检测。
要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
8.送谱。
收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。
如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。
可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。
操作1 装柱。
柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。
干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。
装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。
书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。
当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。
但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！2 加样。
用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。
加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm 就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。
3 淋洗剂的选择。
感觉上要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。
不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。
4 样品的收集。
用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。
所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话，就不容易流出。
这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。
这时可以采用氧化铝作固定相。
另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就收到了三个样品，wuwu。
如果都用小试管那工作量又太大。
5 最后的处理。
柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。
实验室常用的正向柱分离有加压、常压和减压等，我原是做天然产物全合成的，也做过少量天然产物分离工作。
还常用到反向柱。
正向柱分离1.TLC1)加压、常压柱主点Rf 0.5左右，相近的组份要能分开。
2)减压柱主点Rf 0.1左右，相近的组份要能分开，或次组份在原点。
2.硅胶或氧化铝等1)加压、常压柱60到200目2)减压柱300目以上大空树脂挺好，但自己用得少。
硅藻土很多时侯也很好。
3.柱径好分、量大，柱径可大些；难分、量小，柱径可小些。
4.柱长与柱径相似，好分、量大，柱长可短些。
5.制样减压一般是干法拌样；加压、常压可干法拌样，也可湿法备样。
6.洗脱液老板科研经费多，用加压、常压耗溶剂太多；要想给老板省钱，给自己省时间，就用减压。
7.接液主点未出，多接；主点快出来及快出完，少接。
8.收率对同一样品且同量减压一般收率低；加压、常压一般收率高。
9.备柱无论减压、加压、常压；无论干法、湿法备柱。
填料要想法压实，且备柱或过柱时均不可有气泡、断层、干柱（减压除外。
），否则一切从头开始。
层析技术层析技术的应用与发展，对于植物各类化学成分的分离鉴定工作起到重大的推动作用。
如中药丹参的化学成分在30年代仅从中分离到3种脂溶性色素，分别称为丹参酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。
但以后进一步的研究，发现除丹参酮Ⅰ为纯品外，Ⅱ、Ⅲ、均为混合结晶。
此后通过各种层析方法，迄今已发现15种单体（其中有4种为我国首次发现）。
目前新的层析技术不断发展，随着层析理论和电子学、光学、计算机等技术的应用，层析技术已日趋完善。
一．层析法的基本原理：层析过程是基于样品组分在互不相溶的两“相”溶剂之间的分配系数之差（分配层析），组分对吸附剂吸附能力不同（吸附层析），和寓子交换，分子的大小（排阻层析）而分离。
通常又将一般的以流动相为气体的称为气相层析，流动相为液体的称为液相层析。
一、吸附层析法（AdsorptionChromatography）（一）吸附剂、溶剂与被分离物性质的关系：液一固吸附层析是运用较多的一种方法，特别适用于很多中等分子量的样品（分子量小于1，000的低挥发性样品）的分离，尤其是脂溶性成分一一般不适用于高分子量样品如蛋白质、多糖或离子型亲水住化合物等的分离。
吸附层析的分离效果，决定于吸附剂、溶剂和被分离化合物的性质这三个因素。
1．吸附剂：常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、活性炭、硅酸镁、聚酰胺、硅藻土等。
（1）硅胶：层析用硅胶为一多孔性物质，分子中具有硅氧烷的交链结构，同时在颗粒表面又有很多硅醇基。
硅胶吸附作用的强弱与硅醇基的含量多少有关。
硅醇基能够通过氢键的形成而吸附水分，因此硅胶的吸附力随吸着的水分增加而降低。
若吸水量超过17％，吸附力极弱不能用作为吸附剂，但可作为分配层析中的支持剂。
对硅胶的活化，当硅胶加热至100～110℃时，硅胶表面因氢键所吸附的水分即能被除去。
当温度升高至500℃时，硅胶表面的硅醇基也能脱水缩台转变为硅氧烷键，从而丧失了因氢键吸附水分的活往，就不再有吸附剂的性质，虽用水处理亦不能恢复其吸附活性。
所以硅胶的活化不宜在较高温度进行（一般在170cC以上即有少量结合水失去）。
硅胶是一种酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分的层析。
同时硅胶又是一种弱酸性阳离子交换剂，其表面上的硅醇基能释放弱酸性的氢离子，当遇到较强的碱注化台物，则可因离子交换反应而吸附碱性化合物。
（2）氧化铝：氧化铝可能带有碱性（因其中可混有碳酸钠等成分），对于分离一些碱性中草药成分，如生物碱类的分离颇为理想。
但是碱性氧化铝不宜用于醛、酮、醋、内酯等类型的化合物分离。
因为有时碱性氧化铝可与上述成分发生次级反应，如异构化、氧化、消除反应等。
除去氧化铝中绚碱性杂质可用水洗至中性，称为中性氧化铝。
中性氧化铝仍属于碱性吸附剂的范畴，本适用于酸性成分的分离。
用稀硝酸或稀盐酸处理氧化铝，不仅可中和氧化铝中含有的碱性杂质，并可使氧化铝颗粒表面带有NO3一或CI一的阴离子，从而具有离于交换剂的性质，适合于酸性成分的层析，这种氧化铝称为酸性氧化铝。
供层析用的氧化铝，用于拄层析的，其粒度要求在100～160目之间。
粒度大子100目，分离效果差：小于160目，溶浓流速大慢，易使谱带扩散。
样品与氧化铝的用量比，一般在1：20～50之间层析柱的内径与柱长比例在1：10-20之向。
在用溶剂冲洗柱时，流速不宜过快，洗脱液的流速一般以每半～1小时内流出液体的毫升数与所用吸附剂的重量（克）相等为合适。
（3）活性炭：是使用较多的一种非极性吸附剂。
一般需要先用稀盐酸洗涤，其次用乙醇洗，再以水洗净，于80℃干燥后即可供层析用。
层析用的活性炭，最好选用颗粒活注炭，若为活性炭细粉，则需加入适量硅藻土作为助滤剂一并装柱，以免流速太慢。
活性炭主要且于分离水溶性成分，如氨基酸、糖类及某些甙。
活性炭的有为吸附作用，在水溶液中最强，在有机溶剂中则较低弱。
故水的洗脱能力最弱，而有机溶剂则较强。
例如以醇-水进行洗脱时，则随乙醇浓度的递增而洗脱力增加。
活性炭对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物，对大分子化合物的吸附力大于小分子化合物。
利用这些吸附性的差别，可将水溶性芳香族物质与脂肪族物质分开，单糖与多糖分开，氨基酸与多肽分开。
2．溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大。
在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混合溶剂）习惯上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展开剂。
洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。
如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。
在柱层操作时，被分离样品在加样时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。
溶解样品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附。
然后渐增大溶剂的极性。
这种极性的增大是一个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脱”，使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。
如果极性增大过诀（梯度太大），就不能获得满意的分离。
溶剂的洗脱能力，有时可以用溶剂的介电常数（ε）来表示。
介电常数高，洗脱能力就大。
以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂，如硅胶、氧化铝。
对非极性吸附剂，如活性炭，则正好与上述顺序相反，在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用，较在脂溶性溶剂中为强。
3．被分离物质的性质：被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素，彼此紧密相连。