脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase ,DHAR )试剂盒说明书
脱氢抗坏血酸(DHA)检测试剂盒(菲咯啉微板法)
脱氢抗坏血酸(DHA)检测试剂盒(菲咯啉微DHA)检测试剂盒(菲咯啉微板法)检测原理是利用还原剂将脱 氢抗坏血酸还原成还原型抗坏血酸，在酸性条件下，维生素 C(抗坏血酸)把三价铁离子还原 成亚铁离子，后者与菲咯啉形成稳定的红色螯合物，以酶标仪 534nm 处检测吸光度，在一 定浓度范围吸光度与抗坏血酸含量呈线性关系，获得抗坏血酸含量。该试剂盒主要用于植 物组织中的维生素 C(抗坏血酸)的检测，计算出总抗坏血酸含量，从中减去样品中原有的还 原型抗坏血酸含量，即得脱氢抗坏血酸含量，本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊 断或其他用途。
组成：
编号 名称 试剂(A): 抗坏血酸标准(250μg/ml) 试剂(B): 组织匀浆液(5×) 试剂(C): DHA 还原液 试剂(D): NaOH 溶液 试剂(E): 酸性缓冲液 试剂(F): AsA Assay buffer 试剂(G): 菲咯啉显色液 使用说明书
TC2040 100T
Storage
DHA 含量(mg/100g)=(m0×VT×100)/(m1×VS×1000)
北京雷根生物技术有限公司
注意事项：
1、 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。 2、 组织匀浆液(5×)久置或低温保存，容易产生乳白色浑浊。如果白色浑浊不明显，可以
直接使用，不影响效果；如果白色浑浊较多，应弃用。 3、 待测样本如不能及时测定，应置于 2~8℃保存，3 天内稳定。 4、 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
3、 制备 DHA 待测液：取 AsA 提取液，加入 DHA 还原液，用 NaOH 溶液调节 pH 至 7-8， 室温下静置，使脱氢抗坏血酸还原成抗坏血酸，再加入组织匀浆液(5×)和蒸馏水即为 DHA 待测液。
狗牙根耐旱基因的表达谱分析
狗牙根耐旱基因的表达谱分析吕爱敏;王生银;张菁;黄炳茹;安渊;周鹏【摘要】为了提高草坪草对干旱环境的适应能力,了解植物对干旱的响应特征,研究从已建立的草坪草狗牙根‘Tifway’(耐旱)和‘C299’(干旱敏感)干旱5和10 d应答SSH(suppression subtractive hybridization)4个文库中挑选出38个耐旱、干旱响应基因.采用半定量RT-PCR方法检测干旱胁迫下这些基因在‘Tifway’和‘C299’中的表达变化,比较它们在两品种间的表达差异.发现叶表面蜡质合成基因(CER1蛋白基因、固醇脱氢酶基因)、与耐旱相关的基因(脱水素基因)、与抗氧化相关基因(超氧化物歧化酶、脱氢抗坏血酸还原酶和2-半胱氨酸过氧化物酶基因)、和转录调控因子(EREBP-4 like蛋白和WRKY)在‘Tifway’中的表达量显著高于‘C299’.这些结果说明了‘Tifway’比‘C299’更加耐旱的分子机制.【期刊名称】《上海交通大学学报（农业科学版）》【年(卷),期】2015(033)003【总页数】7页(P14-20)【关键词】狗牙根;干旱胁迫;耐旱基因【作者】吕爱敏;王生银;张菁;黄炳茹;安渊;周鹏【作者单位】上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240【正文语种】中文【中图分类】S688.4干旱是限制植物生长的重要环境因子之一。
在干旱的环境中,植物受到伤害的同时会产生胁迫响应,对这些胁迫响应的研究有助于了解植物对干旱胁迫响应的机理,为进一步改良植物、提高植物的抗旱能力提供基础。
目前有关干旱胁迫的研究多集中在生理水平、细胞水平及基因的表达调控水平,可以通过克隆干旱表达基因寻找植物的干旱应答机制[1-4]。
dld 分子量
dld 分子量全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：DLD分子量是指鹰嘴豆脱氢酶（dihydrolipoamide dehydrogenase）的分子量，也称为二硫辅酶Q-氧化还原酶。
它是细胞色素bc1复合物的一个组成部分，负责在细胞内进行电子传递和能量生成的重要功能。
DLD分子量通常在约51-60kDa之间。
DLD是一种催化氧化还原反应的酶，它参与细胞内线粒体的三羟基甘氨酸羧基-乙酰辅酶A（HADH）的氧化还原过程，将NADH还原为NAD+。
DLD通过将HADH还原为其原始状态，从而将氧化剂还原为还原剂，参与线粒体内氧化磷酸化和ATP生成的过程。
在细胞内，DLD是一个非常重要的蛋白质，它不仅参与细胞内的代谢过程，还参与许多生物学过程。
研究表明，DLD在氧化应激、抗氧化反应、细胞凋亡、细胞增殖等生物学过程中都起着重要作用。
在疾病研究领域，DLD分子量与一些疾病的发生和发展有一定的关联。
在癌症和神经系统相关疾病中，DLD的活性水平和表达水平可能发生改变，进而影响细胞的代谢和功能。
研究DLD在疾病中的作用机制和调控途径具有重要的意义。
为了更深入地了解DLD分子量的生物学功能和生物化学特性，科学家们进行了大量的研究工作。
他们通过分子生物学、生物化学、免疫学和结构生物学等多个领域的方法和技术，研究DLD的结构、功能和调控机制，以及其在细胞内的生理和病理过程中的作用。
DLD分子量是一个非常重要的生物分子，在细胞内发挥着重要的作用。
通过深入研究DLD的生物学功能和调控机制，可以为人类健康和疾病治疗提供重要的科学依据，同时也有助于推动生物医学领域的发展和进步。
希望未来能够有更多的研究工作针对DLD进行深入探讨，为我们揭示其更多的生物学奥秘。
第二篇示例：DLD 分子量，全称为二氧化榔头，是一种用于测量多肽和蛋白质大小的方法。
DLD 分子量测定技术已经成为许多生物科学领域的重要方法，其在生物医学研究、药物研发和生物工程等领域的应用越来越广泛。
脱氢抗坏血酸结构式
脱氢抗坏血酸结构式
摘要：
1.脱氢抗坏血酸的概述
2.脱氢抗坏血酸的结构式
3.脱氢抗坏血酸的性质与稳定性
4.脱氢抗坏血酸的用途
5.脱氢抗坏血酸的生态学数据
正文：
脱氢抗坏血酸（英文名：dehydroascorbic acid，别名：维生素C，维他命C，丙种维生素，L-抗坏血酸）是一种白色结晶，无气味，具有柠檬酸样酸味。
其分子式为C6H8O6，分子量为176.13。
在干燥空气中，脱氢抗坏血酸是稳定的，但若与空气和光线接触，则会被氧化成脱氢抗坏血酸。
此外，碱、铁和铜等物质会加速其氧化反应。
脱氢抗坏血酸是一种相对强的还原剂，长时间贮存会导致颜色变深，呈现不同程度的浅黄色。
在1 克的产品中，约可以溶解于3 毫升的水、30 毫升的乙醇和50 毫升的乙醚。
脱氢抗坏血酸广泛应用于医药、食品、化妆品等行业。
在医药领域，它可以用于预防和治疗坏血病、增强免疫力等。
在食品和化妆品行业，它具有抗氧化作用，可以保持产品的新鲜度和活性。
然而，脱氢抗坏血酸对环境可能具有一定的危害性。
在接触空气和光线时，容易发生氧化反应，产生有害物质。
因此，在储存和使用过程中，应尽量避免与氧化物接触。
脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)检测
迪信泰检测平台
脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）检测
脱氢抗坏血酸还原酶（Dehydroascorbate reductase, DHAR）是植物体内一种重要的抗氧化酶，是抗坏血酸-谷胱甘肽（ASA-GSH）循环中的关键酶，通过抗坏血酸-胱甘肽循环将氧化型抗坏血酸还原为还原型抗坏血酸，在维持植物体内抗坏血酸的正常代谢水平，保护细胞组分抵御氧化损伤方面发挥着重要作用。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒，可高效、精准的检测脱氢抗坏血酸还原酶的活性变化。
此外，我们还提供其他ASA-GSH循环类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定脱氢抗坏血酸还原酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 脱氢抗坏血酸还原酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
水杨酸处理诱导采后甜瓜抗坏血酸-还原型谷胱甘肽循环代谢清除过氧化氢的作用及机制
水杨酸处理诱导采后甜瓜抗坏血酸-还原型谷胱甘肽循环代谢清除过氧化氢的作用及机制杨 乾，范存斐，王 毅，任亚琳，毕 阳*（甘肃农业大学食品科学与工程学院，甘肃 兰州 730070）摘 要：目的：研究抗坏血酸（ascorbic acid，AsA）-还原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）循环代谢在水杨酸处理采后甜瓜诱导的过量H2O2清除过程中的作用。
方法：用4 mmol/L水杨酸浸泡‘玉金香’厚皮甜瓜10 min，测定处理后果实常温贮藏过程中丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，分析活性氧的积累水平、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和过氧化氢酶（catalase，CAT）活力，以及AsA-GSH循环过程相关酶活力及产物和底物含量。
结果：水杨酸处理降低了果实MDA含量，第10天处理组MDA含量较对照组降低14.6%；显著提高了果实O2－·的产生速率和H2O2含量（P＜0.05），其中处理后第2天O2－·的产生速率高出同期对照组的1.9 倍，第6天H2O2含量高出对照组果实29.7%；提高了果实SOD活力，但抑制了CAT活力，说明H2O2的清除可能是依赖于除酶促系统外的其他系统。
此外，水杨酸处理提高了果实抗坏血酸过氧化物酶、单脱氢抗坏血酸过氧化物酶、脱氢抗坏血酸还原酶和谷胱甘肽还原酶的活力，增加了AsA和氧化型谷胱甘肽的含量，降低了脱氢抗坏血酸和GSH的含量。
结论：水杨酸处理诱导了厚皮甜瓜果实的氧爆，抑制了MDA产生，由水杨酸诱导产生的过量H2O2主要依靠AsA-GSH循环系统清除。
关键词：甜瓜；水杨酸；活性氧；抗坏血酸-还原型谷胱甘肽循环Role and Underlying Mechanism of the Ascorbic Acid-Reduced Glutathione Cycle in Scavenging Hydrogen Peroxide in Postharvest Melons Induced by Salicylic AcidYANG Qian, FAN Cunfei, WANG Yi, REN Yalin, BI Yang*(College of Food Science and Engineering, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China)Abstract: Objective:To ascertain the role of the ascorbic acid-reduced glutathione (AsA-GSH) cycle in scavenging excessive H2O2 in melons induced by salicylic acid (SA) during postharvest storage. Methods: Melon (cv. Yujinxiang) fruit were soaked in 4 mmol/L SA for 10 min, and stored at ambient temperature. Malondialdehyde (MDA) content and the accumulation level of reactive oxygen species, and the activity of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) were determined as well as enzyme activities involved in the AsA-GSH cycle and the contents of substrate and product. Results:SA treatment reduced MDA content, resulting in a 14.6% reduction in MDA content compared with the control group on day 10.SA significantly increased superoxide anion radical production rate and H2O2 content in the fruit (P < 0.05). On day 2 after the treatment, the production rate of superoxide anion radical in the treated group was 1.9 times higher in than that in the control at the same time point, and H2O2 content was 29.7% higher than that in the control on day 6. The chemical increased SOD activity and inhibited CAT activity, suggesting that scavenging of H2O2 is not dependent on the enzymatic system but other systems. Moreover, SA increased the activity of ascorbate peroxidase, glutathione reductase, monodehydroascorbate peroxidase, and dehydroascorbate reductase as well as the contents of ascorbic acid and oxidized glutathione, and decreased the contents of dehydroascorbic acid and reduced glutathione. Conclusion:SA treatment promoted oxygen burst in melons and reduced MDA content. Excessive H2O2 induced by SA was scavenged mainly through the AsA-GSH cycle.Keywords: melon; salicylic acid; reactive oxygen species; ascorbic acid-reduced glutathione cycleDOI:10.7506/spkx1002-6630-20191128-276收稿日期：2019-11-28基金项目：公益性行业（农业）科研专项（201303075）第一作者简介：杨乾（1993—）（ORCID: 0000-0001-9740-7445），男，硕士研究生，研究方向为果蔬采后生物学与技术。
脱氢抗坏血酸(DHA)含量检测试剂盒说明书 微量法
脱氢抗坏血酸（DHA）含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1245规格：100T/96S产品内容：提取液：液体110mL×1瓶，室温保存。
试剂一：液体20mL×1瓶，室温保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
标准品：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入5.743mL蒸馏水充分溶解；吸取0.1mL上述溶液，加入0.9mL蒸馏水，混匀，即为0.1μmol/mL DHA。
产品说明：AsA作为植物细胞一个重要生理指标，其AsA的含量、氧化还原状态(AsA/DHA比率)及其合成与代谢相关酶类活性的变化涉及植物对一系列环境胁迫的响应。
DHA是AsA的可逆的氧化型，在生物体内，与抗坏血酸共同组成氧化还原系统，具有电子受体的作用。
DTT还原DHA生成AsA，通过测定体系中AsA的生成速率，即可计算出DHA含量。
自备仪器和用品：低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样品中DHA提取：称取约0.1g样品，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g4℃离心20min，取上清液待测。
二、DHA测定操作：1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2.试剂一在25℃水浴锅中预热30min以上。
3.标准管：依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL标准液、160μL预热的试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录10s和130s的吸光值，分别为A1，A2，△A标准管=A2-A1。
4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL上清液、160μL预热的试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录10s和130s的吸光值，分别为A3，A4，△A测定管=A4-A3。
刺梨GGP和DHAR基因序列多态性及其与果实维生素C含量的关联分析
刺梨GGP和DHAR基因序列多态性及其与果实维生素C含量的关联分析【摘要】本研究通过对刺梨GGP和DHAR基因序列多态性的分析，探讨了其与果实维生素C含量的关联性。
结果显示，GGP和DHAR基因的不同基因型与果实维生素C含量之间存在显著差异。
具体而言，一些特定的基因型对果实维生素C含量有着明显的影响，表明GGP和DHAR 基因在刺梨果实维生素C代谢途径中起着重要作用。
通过详细的数据分析和结果展示，论证了刺梨GGP和DHAR基因与果实维生素C含量之间的关联性，并指出了未来的研究方向。
本研究的结果对于刺梨果实品质的改良和选育具有一定的指导意义，为相关领域的研究提供了新的思路和方法。
【关键词】刺梨，果实维生素C，GGP基因，DHAR基因，序列多态性，关联分析，数据分析，结果，结论，研究展望，创新点总结1. 引言1.1 研究背景刺梨（Pyrus pyrifolia）是一种重要的果树，其果实富含维生素C，具有很高的营养价值和药用价值。
维生素C是一种重要的抗氧化物质，可以帮助人体提高抵抗力，预防感冒，保护心血管健康等。
刺梨果实中维生素C含量的高低直接影响着其营养价值和市场竞争力。
在过去的研究中发现，植物维生素C的合成与代谢与多种基因的调控有关，其中GGP（GDP-L-galactose phosphorylase）和DHAR （dehydroascorbate reductase）基因在维生素C合成和代谢中起着重要的作用。
GGP基因编码的蛋白质参与了维生素C的合成途径，而DHAR基因编码的蛋白质参与了维生素C的还原过程。
关于刺梨GGP和DHAR基因序列多态性及其与果实维生素C含量的关联分析的研究还比较匮乏。
本研究旨在通过分析刺梨GGP和DHAR基因序列的多态性，探讨其与果实维生素C含量的关联性，为深入了解刺梨果实维生素C代谢途径提供科学依据。
1.2 研究目的刺梨果实富含维生素C，而维生素C是一种具有重要生理功能的抗氧化物质，对人体健康具有重要意义。
脱氢抗坏血酸用途
脱氢抗坏血酸用途
脱氢抗坏血酸具有以下多种用途。
首先，它被广泛用作维生素C的膳食补充剂，在很多保健品和营养补充剂中都可以找到它的身影。
其次，脱氢抗坏血酸也被用于制作化妆品，它能够改善皮肤外观，被添加到许多护肤产品和美容用品中。
例如，它可以用于处理烫发和进行免晒美黑应用。
在细胞培养基中，脱氢抗坏血酸被用来确保细胞摄取的维生素C 不含抗坏血酸转运类型。
最后，脱氢抗坏血酸还具有一些药物用途。
研究表明，它可以保护神经元免受中风引起的损伤。
复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制
第４７卷㊀第２期２０２３年３月南京林业大学学报（自然科学版）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．４７，Ｎｏ．２Ｍａｒ．，２０２３㊀收稿日期Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２０２２⁃０１⁃２４㊀㊀㊀㊀修回日期Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２０２２⁃０４⁃２４㊀基金项目：国家自然科学基金项目（３１８６００７３）；生物资源保护与利用湖北省重点实验室２０２０年度开放基金项目（ＰＴ０１２００８）㊂㊀第一作者：刘相泉（ｌｉｕｘｉａｎｇｑｕａｎ２０２１＠１６３．ｃｏｍ）㊂∗通信作者：邓志军（ｄｅｎｇｚｈｉｊｕｎ＠ｈｂｍｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ），副教授㊂㊀引文格式：刘相泉，赵仁菲，朱艳芳，等．复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制［Ｊ］．南京林业大学学报（自然科学版），２０２３，４７（２）：３５－４１．ＬＩＵＸＱ，ＺＨＡＯＲＦ，ＺＨＵＹＦ，ｅｔａｌ．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｅｅｄｖｉｇｏｕｒｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄｉｔｉｏｎ），２０２３，４７（２）：３５－４１．ＤＯＩ：１０．１２３０２／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２００６．２０２２０１０３８．复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制刘相泉，赵仁菲，朱艳芳，邓仕明，李吉涛，邓志军∗（湖北民族大学，生物资源保护与利用湖北省重点实验室，恩施州特色植物资源种质工程技术研究中心，林学园艺学院植物种质资源实验室，湖北㊀恩施㊀４４５０００）摘要：ʌ目的ɔ探明植冠种子库中种子活力变化的生理生态机制，准确认识植冠种子库的生态意义㊂ʌ方法ɔ以复羽叶栾树（Ｋｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ）植冠种子库为研究对象，在果实进入成熟期后每隔一定时间从植冠种子库中采集种子，分别进行萌发测试，种子干质量㊁含水量㊁浸出液电导率㊁丙二醛（ＭＤＡ）含量测定，以及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）㊁抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）㊁过氧化氢酶（ＣＡＴ）㊁脱氢抗坏血酸还原酶（ＤＨＡＲ）等４种主要抗氧化酶活性的测定，并对种子萌发率和各生理指标进行相关性分析㊂ʌ结果ɔ在研究期内，复羽叶栾树植冠种子库中的种子先后经历了生理成熟㊁成熟脱水㊁休眠诱导和休眠解除４个生理时期；各生理时期的种子总体上在模拟的秋季变温条件下萌发最好，其次为春季变温，再次为夏季变温；完成成熟脱水的种子在植冠种子库中宿存期间始终保持着高活力水平；４种抗氧化酶的活性与模拟的春㊁夏㊁秋季节变温条件下的萌发率间具有显著或极显著的正相关性，且均随着种子休眠的诱导而下降，随着种子休眠的解除而升高，表明抗氧化酶在植冠种子库中种子活力的获得和保持中起着重要的积极作用，并证实了种子休眠与萌发的 胚胁迫学说 ㊂ʌ结论ɔ本研究促进了对植冠种子库的深入认识，还发现复羽叶栾树植冠种子库中种子具有较强的活力保持能力，建议在森林经营管理和植被恢复中充分利用其植冠种子库㊂关键词：复羽叶栾树；植冠种子库；种子活力；休眠；萌发；抗氧化酶中图分类号：Ｓ７２２；Ｓ６８５㊀㊀㊀㊀㊀㊀文献标志码：Ａ开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：文章编号：１０００－２００６（２０２３）０２－００３５－０７ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｅｅｄｖｉｇｏｕｒｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａＬＩＵＸｉａｎｇｑｕａｎ，ＺＨＡＯＲｅｎｆｅｉ，ＺＨＵＹａｎｆａｎｇ，ＤＥＮＧＳｈｉｍｉｎｇ，ＬＩＪｉｔａｏ，ＤＥＮＧＺｈｉｊｕｎ∗（ＨｕｂｅｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃＲｅｓｏｕｒｃｅｓＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｆｏｒＧｅｒｍｐｌａｓｍＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃＰｌａｎｔＲｅｓｏｕｒｃｅｓｉｎＥｎｓｈｉＰｒｅｆｅｃｔｕｒｅ，ＴｈｅＰｌａｎｔＧｅｒｍｐｌａｓｍＲｅｓｏｕｒｃｅｓＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＨｕｂｅｉＭｉｎｚｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｅｎｓｈｉ４４５０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ʌＯｂｊｅｃｔｉｖｅɔＴｈｉｓｓｔｕｄｙｅｘｐｌｏｒｅｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｓｅｅｄｖｉｇｏｒｃｈａｎｇｅｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａｉｎｏｒｄｅｒｔｏａｃｃｕｒａｔｅｌｙｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｔｈｅｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｓ．ʌＭｅｔｈｏｄɔＡｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫ．ｂｉｐｉｎｎａｔａｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｏｂｊｅｃｔｏｆｓｔｕｄｙ，ａｎｄｓｅｅｄｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋａｔｃｅｒｔａｉｎｔｉｍｅｉｎｔｅｒｖａｌｓａｆｔｅｒｆｒｕｉｔｓｅｎｔｅｒｅｄｔｈｅｒｉｐｅｎｉｎｇｐｅｒｉｏｄ．Ｗｅｔｈｅｎｃｏｎｄｕｃｔｅｄａｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｅｓｔａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈｅｓｅｅｄｄｒｙｍａｓｓ，ｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔ，ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅｃｏｎｔｅｎｔ，ａｎｄａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＳＯＤ，ＡＰＸ，ＣＡＴａｎｄＤＨＡＲ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｗｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｎａｎａｌｙｓｉｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｄｉｃｅｓ．ʌＲｅｓｕｌｔɔＤｕｒｉｎｇｔｈｅｓｔｕｄｙｄｕｒａｔｉｏｎ，ｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｄｆｏｕｒｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｅｒｉｏｄｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｍａｔｕｒｉｔｙ，ｍａｔｕｒｅｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ，ｄｏｒｍａｎｃｙｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｌｅａｓｅ．Ｔｈｅｓｅｅｄｓｉｎｅａｃｈｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｅｒｉｏｄｇｅｎｅｒａｌｌｙｈａｄｔｈｅｂｅｓｔｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｕｎｄｅｒｓｉｍｕｌａｔｅｄａｕｔｕｍｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ，ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｓｐｒｉｎｇａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓａｎｄｓｕｍｍｅｒａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ．Ｔｈｅｖｉｇｏｒｏｆｔｈｅｓｅｅｄｓｗａｓｍａｉｎｔａｉｎｅｄａｔａｈｉｇｈｌｅｖｅｌａｆｔｅｒｍａｔｕｒｅｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｗａｓｆｉｎｉｓｈｅｄ，ａｎｄｔｈｅｆｏｕｒａｎｔｉｏｘｉｄａｓｅｓｐｌａｙｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｐｏｓｉｔｉｖｅｒｏｌｅｉｎｔｈｅａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎａｎｄｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｓｅｅｄｖｉｇｏｒ，ｂｅｉｎｇｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｖｅｗｉｔｈｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓｕｎｄｅｒｓｉｍｕｌａｔｅｄｓｐｒｉｎｇ，ｓｕｍｍｅｒａｎｄａｕｔｕｍｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｔｈｅｙａｌｌｄｅｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｓｅｅｄｄｏｒｍａｎｃｙａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆｄｏｒｍａｎｃｙ，ｗｈｉｃｈａｌｓｏｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈｅ Ｅｍｂｒｙｏｓｔｒｅｓｓｔｈｅｏｒｙ ｏｆｓｅｅｄｄｏｒｍａｎｃｙａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．ʌＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎɔＴｈｉｓｓｔｕｄｙｎｏｔｏｎｌｙｐｒｏｍｏｔｅｓｆｕｒｔｈｅｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｓ，ｂｕｔａｌｓｏｆｉｎｄｓｔｈａｔｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫ．ｂｉｐｉｎｎａｔａｈａｖｅａｓｔｒｏｎｇａｂｉｌｉｔｙｔｏｍａｉｎｔａｉｎｖｉｇｏｒ．Ｆｕｌｌｕｓｅｏｆｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｓｉｎｆｏｒｅｓｔｍａｎａｇｅｍｅｎｔａｎｄｖｅｇｅｔａｔｉｏｎｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎｓｈｏｕｌｄｂｅｅｎｃｏｕｒａｇｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｋｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ；ｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋ；ｓｅｅｄｖｉｇｏｕｒ；ｄｏｒｍａｎｃｙ；ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅ㊀㊀许多植物种子成熟后会在短时间内集中脱落，进入土壤种子库（ｓｏｉｌｓｅｅｄｂａｎｋ），随即或等待萌发［１］；也有相当一部分植物种子成熟后以植冠种子库（ｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋ）的形式宿存在植株上，随后不定时地陆续脱落［２］，宿存时间１ ３０ａ，甚至更长［３］㊂与土壤种子库一样，植冠种子库也是植物的一种生态适应策略，具有调节种子萌发时间㊁维持种子有效供应㊁利于物种保护和植被更新等生态意义［２，４－７］㊂植冠种子库在干旱荒漠区比较普遍，是植物应对干旱环境的一种重要适应特征［３］㊂以往的植冠种子库研究大多聚焦于具有植冠种子库植物的识别㊁种子脱落机理㊁对土壤种子库的补充㊁与植株的关系㊁生态功能以及种子活力的分布与变化特征［３］，鲜有关注湿润地区的植冠种子库以及其中种子活力变化的生理生态机制㊂种子活力是反映种子质量的一个综合性指标［８］，也是植冠种子库实现生态功能的生理基础［３］㊂一般而言，种子发育至生理成熟时其活力水平也达到最高，随后活力会发生不可逆的下降，直至种子死亡，这个种子活力逐渐丧失的过程即为种子老化（ｓｅｅｄａｇｉｎｇ）或种子劣变（ｓｅｅｄｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ）［８－９］㊂在自然条件下，环境温度和湿度是影响种子老化的最重要因素，低温干燥会延缓种子老化，而高温高湿则会加速其老化［８］㊂另外，干湿循环对种子活力也有重要影响，通常初期会提高种子活力，而随后则会加速种子老化［１０］㊂种子老化是一个复杂的生理生态过程，通常与活性氧物质（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅ⁃ｃｉｅｓ，ＲＯＳ）过量产生所引起的氧化胁迫，与超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）㊁过氧化氢酶（ＣＡＴ）㊁抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）等种子自身抗氧化酶的防御作用有关［１１］㊂复羽叶栾树（Ｋｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ）为无患子科（Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ）栾树属落叶乔木［１２］，其枝叶茂密，花果艳丽，速生且适应性强，木材可制家具，因此既是优良的景观树种，也是理想的造林树种；同时，其根与花均可入药，花还可做黄色染料，极具医药和工业应用价值［１２］㊂目前关于复羽叶栾树的研究主要涉及繁育［１３－１４］㊁植物保护［１５］㊁系统发育［１６］和生态修复［１７－１８］等方面，鲜见种子生物学方面的研究，以及有关复羽叶栾树种子生态，尤其是其植冠种子库方面的报道㊂据观察，其植冠种子库可存续约１０个月㊂鉴于复羽叶栾树在造林和生态修复方面的应用潜力［１７－１８］，对其植冠种子库，尤其是植冠种子库中种子活力变化的生理生态机制进行研究，有助于进一步深入认识植冠种子库，且对于该树种的生态应用和管理具有重要的指导意义㊂１㊀材料与方法１．１㊀供试材料种子采集自湖北省恩施市市郊（１０９ʎ０４ᶄ４８ᵡ １０９ʎ５８ᶄ４２ᵡＥ，２９ʎ５０ᶄ３３ᵡ ３０ʎ３９ᶄ３０ᵡＮ）至少１５株树龄相仿的成年复羽叶栾树㊂分５批次采集，时间分别为２０１７年１０月６日（Ｄ１）㊁２０１７年１１月４日（Ｄ２）㊁２０１７年１２月５日（Ｄ３）㊁２０１８年１月６日（Ｄ４）㊁２０１８年２月４日（Ｄ５）㊂１．２㊀种子含水率和干质量测定为了监测种子的发育状态，参照冯景等［１９］的烘干称质量法对采集的每批次种子进行种子含水量和干质量测定㊂干质量（ｍｇ）测定８次重复，每次重复１０００粒种子㊂含水率测定３次重复，每次重复１５粒种子；种子含水率（％）以鲜质量为基础进行计算㊂１．３㊀种子萌发测试为了检测所采集种子的活力，从各种子批次中随机取样，分别在模拟当地（湖北省恩施市）春㊁夏㊁秋季气温的变温培养箱中进行萌发测试㊂在当地气象局近３年的每日气温监测数据基础上，计算春㊁夏㊁秋３个季节的日平均最高温和最低温，依此来设置萌发测试培养箱的变温条件，光照条件统一设置为每天１２ｈ光照和１２ｈ黑暗，每天的光照和黑暗时间分别与变温的高温和低温时间相同步，光合光量子通量密度（ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐｈｏｔｏｎｆｌｕｘｄｅｎ⁃ｓｉｔｙ，ＰＰＦＤ）为（１２１ʃ２）μｍｏｌ／（ｍ２㊃ｓ）㊂３种模拟的季节变温（夜／日）分别为春（１２ħ／２２ħ）㊁夏（２２ħ／３１ħ）㊁秋（１１ħ／２２ħ）㊂每个处理４次重复，每次重复５０粒种子，以用蒸馏水充分湿润６３㊀第２期刘相泉，等：复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制的珍珠岩为培养介质，萌发测试期内适时适量添加蒸馏水，以胚根突破种皮ȡ２ｍｍ作为萌发标准㊂３０ｄ后统计萌发率㊂１．４㊀种子电导率、丙二醛含量及酶活性测定从每批次种子中随机取样，参照文献［２０］的方法进行电导率测定，用以检测不同批次种子电解质渗漏情况㊂每个处理４次重复，每次重复１０粒种子㊂最后计算相对电导率（ｒｅｌａｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ，ＲＥＣ）㊂为了检测不同批次种子的脂质过氧化情况，参照文献［２１］的分光光度法，从每批次种子中随机取样并测定丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）含量㊂每个处理４次重复，每次重复５０粒种子㊂从每批次种子中随机取样并采用分光光度法测定几种主要抗氧化酶的活性㊂超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活性测定参照文献［２２］，抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）的活性测定参照文献［２３］，过氧化氢酶（ＣＡＴ）的活性测定参照文献［２４］，脱氢抗坏血酸还原酶（ｄｅｈｙｄｒｏａｓｃｏｒｂａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＤＨＡＲ）的活性测定参照文献［２５］的分光光度法㊂均设４次生物学重复，每次重复５０粒种子㊂１．５㊀数据处理使用Ｒ４．１．２软件完成作图㊁Ｐｅａｒｓｏｎ相关性分析㊁方差分析及多重比较（Ｓｔｕｄｅｎｔ⁃Ｎｅｗｍａｎ⁃Ｋｅｕｌｓ，Ｓ⁃Ｎ⁃Ｋ，Ｐ＝０．０５）㊂为保证方差齐性，所有以百分率表示的数据在统计分析前首先进行反正弦转换㊂统计数据均以平均值ʃ标准误表示㊂２㊀结果与分析２．１㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子含水率和干质量的变化及影响萌发的因素㊀㊀研究期内，复羽叶栾树植冠种子库中种子的含水率和干质量均发生了显著变化（图１）㊂Ｄ１ Ｄ３时期内，种子含水率持续显著下降（Ｐ＜０．０５），Ｄ３期以后，含水率保持在最低水平，不再有显著变化（Ｐ＞０．０５）㊂而种子干质量则呈现出 升 降 升 的变化趋势，Ｄ２时期的干质量最大，显著高于其他４个时期㊂分析发现，宿存时间和萌发温度均对复羽叶栾树种子萌发具有极显著影响（Ｐ＜０ ０１），且宿存时间和萌发温度之间存在显著的交互作用（图２，表１，Ｐ＜０ ０５）㊂总体上，随着宿存时间的延长，种子在３种模拟季节变温下的萌发率都大致呈现出 升 降 升 的变化趋势，最低萌发率均出现在Ｄ４时期；Ｄ４时期种子在夏季变温下的萌发率最低，为（３７．５ʃ８ ３）％，而最高萌发率则均出现在Ｄ２时期和Ｄ５时期，Ｄ５时期种子在秋季变温下的萌发率最高，为（９４．５ʃ１．７）％曲线上不同小写英文字母表示不同采种期间差异显著（Ｓ⁃Ｎ⁃Ｋ，Ｐ＜０．０５）㊂下同㊂Ｔｈｅｒｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｔｈｅｓｔａｔｉｓ⁃ｔｉｃａｌｖａｌｕｅｓｍａｒｋｅｄｗｉｔｈｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｓ（Ｓ⁃Ｎ⁃Ｋ，Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ．图１㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子含水量和干质量的变化Ｆｉｇ．１㊀ＣｈａｎｇｅｓｏｆｍｏｉｓｔｕｒｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｄｒｙｍａｓｓｏｆｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ春㊁夏㊁秋为研究区春㊁夏和秋季模拟变温㊂Ｓｐｒｉｎｇ，ｓｕｍｍｅｒａｎｄａｕｔｕｍｎｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｒｅｆｅｒｔｏｔｈｅｓｐｒｉｎｇ，ｓｕｍｍｅｒａｎｄａｕｔｕｍｎｓｅａｓｏｎａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｓｉｍｕｌａｔｅｄＥｎｓｈｉＣｉｔｙｉｎＨｕｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ．图２㊀３种模拟季节变温下植冠种子库中不同宿存时间种子的萌发率Ｆｉｇ．２㊀Ｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｓｅｅｄｓｓｔｏｒｅｄｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｕｒａｔｉｏｎｕｎｄｅｒｔｈｒｅｅａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓｉｍｕｌａｔｅｄｓｅａｓｏｎａｌｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ表１㊀宿存时间和萌发温度对种子萌发影响的双因素方差分析Ｔａｂｌｅ１㊀Ｔｈｅｔｗｏ⁃ｗａｙＡＮＯＶＡｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ变异来源ｓｏｕｒｃｅｏｆｖａｒｉａｔｉｏｎｄｆＦＰ宿存时间ｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅ４３２．８１８＜０．００１萌发温度ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ２２８．０４４＜０．００１宿存时间ˑ萌发温度ｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅˑｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ８２．６８８０．０１７㊀㊀注：宿存时间对应５个采种日期㊂Ｔｈｅｓｔｏｒａｇｅｔｉｍｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｓｔｏｆｉｖｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄａｔｅｓｏｆｓｅｅｄｈａｒｖｅｓｔ．７３南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷２．２㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子生理生化指标的变化㊀㊀变温处理下，复羽叶栾树植冠种子库宿存种子丙二醛（ＭＤＡ）含量㊁相对电导率（ＲＥＣ）变化情况见图３㊂由图３Ａ㊁３Ｂ可知，随着种子在植冠种子库中宿存时间的延长，种子ＲＥＣ与ＭＤＡ含量均有极显著变化（Ｆ电导率＝２５３．９６３，Ｐ电导率＜０．０１；ＦＭＤＡ＝１８ ３３８，ＰＭＤＡ＜０．０１）㊂Ｄ１ Ｄ５时期，种子中的ＭＤＡ含量呈现出 降 升 降 的变化趋势，最高值出现在Ｄ４时期，最低值分别出现在Ｄ２和Ｄ５时期（图３Ａ）；而相对电导率在Ｄ１ Ｄ３时期未发生显著变化（Ｐ＞０．０５），保持在最低水平，随后在Ｄ３ Ｄ５时期持续显著升高（Ｐ＜０ ０５，图３Ｂ）㊂植冠种子库中复羽叶栾树种子内几种主要抗氧化酶活性的变化见图３㊂由图３Ｃ ３Ｆ可知，种子在树冠上宿存期间，其ＳＯＤ㊁ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性均呈现出先降后升的变化趋势，Ｄ１ Ｄ３时期均无显著变化（Ｐ＞０．０５），然后在Ｄ４时期降至最低水平，随后又上升至初始水平（ＳＯＤ和ＤＨＡＲ）或比初始更高的水平（ＣＡＴ）；而ＡＰＸ活性则呈现出 升 降 升 的变化趋势，Ｄ１和Ｄ４时期的活性最低，Ｄ２和Ｄ５时期的活性最高㊂图３㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子ＭＤＡ含量㊁相对电导率及４种酶活性的变化Ｆｉｇ．３㊀ＴｈｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ，ｒｅｌａｔｉｖｅｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｆｏｕｒｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｔｈｅｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋｏｆＫ．ｂｉｐｉｎｎａｔａ２．３㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子各生理指标间的相关性㊀㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子各生理指标间的相关性见表２㊂由表２可知，种子干质量与含水量及模拟春季变温下的萌发率均呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１），与模拟夏季变温下的萌发率呈显著正相关（Ｐ＜０．０５）；种子含水量与模拟春季变温下的萌发率呈显著正相关（Ｐ＜０．０５），与模拟秋季变温下的萌发率及相对电导率呈显著负相关（Ｐ＜０ ０５）㊂模拟春季变温下的萌发率与模拟夏季变温下的萌发率及ＳＯＤ活性间极显著正相关（Ｐ＜０ ０１），与ＡＰＸ㊁ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性呈显著正相关（Ｐ＜０ ０５），与ＭＤＡ含量呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１）㊂模拟夏季变温下的萌发率与模拟秋季变温下的萌发率及ＳＯＤ㊁ＡＰＸ㊁ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性间均呈显著正相关（Ｐ＜０ ０５），与ＭＤＡ含量呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１）㊂模拟秋季变温下的萌发率与ＡＰＸ㊁ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性间均呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１），与相对电导率呈显著正相关（Ｐ＜０ ０５），与ＭＤＡ含量呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１）；ＭＤＡ含量与ＳＯＤ㊁ＡＰＸ和ＣＡＴ活性均呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１），与ＤＨＡＲ活性呈显著负相关（Ｐ＜０ ０５）；ＳＯＤ活性与ＡＰＸ和ＣＡＴ活性呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１），与ＤＨＡＲ活性呈显著正相关（Ｐ＜０ ０５）；ＡＰＸ活性与ＣＡＴ和ＤＨＡＲ活性呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１）；ＣＡＴ活性与ＤＨＡＲ活性呈极显著正相关（Ｐ＜０ ０１）㊂８３㊀第２期刘相泉，等：复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制表２㊀植冠种子库中种子各活力指标间的相关性分析Ｔａｂｌｅ２㊀ＡＰｅａｒｓｏｎｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｂｅｔｗｅｅｎｖａｒｉｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｖｉｇｏｒｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｆｓｅｅｄｓｉｎｔｈｅｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋ指标ｉｎｄｅｘ干质量ｄｒｙｍａｓｓ含水量ｍｏｉｓｔｕｒｅｃｏｎｔｅｎｔ萌发率ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅ春ｓｐｒｉｎｇ夏ｓｕｍｍｅｒ秋ａｕｔｕｍｎ相对电导率ＲＥＣＭＤＡ含量ＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ酶活性ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙＳＯＤＡＰＸＣＡＴＤＨＡＲ干质量ｄｒｙｍａｓｓ１含水量ｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔ０．６９３∗∗１萌发率ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅ春ｓｐｒｉｎｇ０．６２５∗∗０．５２８∗１夏ｓｕｍｍｅｒ０．５２６∗０．２１７０．６５３∗∗１秋ａｕｔｕｍｎ０．０３３－０．５５４∗０．１４９０．５２５∗１相对电导率ＲＥＣ－０．１４４－０．５４１∗－０．３４１０．１２３０．５９３∗１ＭＤＡ含量ＭＤＡｃｏｎｔｅｎｔ－０．４９４－０．０１４－０．６７０∗∗－０．７９８∗∗－０．７０３∗∗－０．２０９１酶活性ｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙＳＯＤ０．４３８０．２２４０．８１５∗∗０．５５５∗０．４０３－０．１９０－０．７２３∗∗１ＡＰＸ－０．３６１－０．１１７０．５７１∗０．６４７∗０．８１０∗∗０．２６６－０．７３８∗∗０．７３０∗∗１ＣＡＴ－０．３６３－０．０５９０．５９０∗０．６２９∗０．７１２∗∗０．４２７－０．８３７∗∗０．７３６∗∗０．７３４∗∗１ＤＨＡＲ－０．３７２－０．０７５０．５７０∗０．５５２∗０．６６５∗∗０．１７０－０．５９０∗０．６２４∗０．８１７∗∗０．６５９∗∗１㊀㊀注：∗∗．Ｐ＜０．０１；∗．Ｐ＜０．０５㊂３㊀讨㊀论３．１㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子生理活性的变化㊀㊀综合复羽叶栾树植冠种子库中种子含水量㊁干质量和萌发变化，可以判断出，植冠种子库中的种子依次经历了生理成熟（Ｄ１ Ｄ２时期）㊁成熟脱水（Ｄ２ Ｄ３时期）㊁休眠诱导（Ｄ３ Ｄ４期时）和休眠解除（Ｄ４ Ｄ５时期）等４个生理过程㊂其中生理成熟和成熟脱水生理过程在时间上存在着重叠，在生理成熟过程中即伴随着成熟脱水㊂当种子完成生理成熟达到最大干质量后，种子干质量又发生了先下降（Ｄ３时期）后升高（Ｄ５时期）的变化㊂这或许是因为种子达到生理成熟后，内部生理活动尚未停止，呼吸作用会消耗一部分营养物质，从而使干质量发生下降，直至休眠诱导完成后（Ｄ４时期）生理活动几乎趋于完全停止时为止［２６］；而后随着种子休眠的解除，种子生理活动被重新激活，还未彻底枯死果实中的营养物质还有可能被继续运输至种子保存，从而使种子干质量再次上升［２７］㊂由此可知，植冠种子库中的种子在宿存早期或许发生着复杂的生理变化，而这应该也是与土壤种子库的重要差异之一㊂种子休眠与萌发特性是植物的一种重要适应特征，使种子在合适的时空条件下萌发成苗［２８］㊂总体上看来，复羽叶栾树植冠种子库中宿存不同时间的种子在模拟的当地秋季变温下萌发最好，其次为春季变温，再次为夏季变温㊂这应该是复羽叶栾树对当地环境的一种适应㊂恩施地处长江以南的武陵山区，冬无严寒，种子秋季成熟后萌发所成的幼苗可以安全过冬㊂尽管夏季变温下萌发情况最差，但最低萌发率也达（３７．５ʃ８．３）％㊂值得注意的是，尽管春季和秋季变温仅低温部分相差１ħ，但Ｄ４和Ｄ５时期种子在秋季变温下的萌发率却显著高于春季变温下的萌发率（Ｐ＜０．０５），其背后的生理生态机制值得进一步研究㊂在３种模拟的季节变温下，均是Ｄ４时期的种子萌发率最低，随后Ｄ５时期种子的萌发率又升高至和生理成熟时（Ｄ２时期）相当的水平，表明植冠种子库中的种子在完成成熟脱水后经历了休眠诱导（Ｄ３ Ｄ４时期，２０１７年１２月至２０１８年１月，冬季）和休眠解除（Ｄ４ Ｄ５时期，２０１８年１月至２月，冬末春初）过程，这也是植物的一种生态适应㊂休眠循环（ｄｏｒｍａｎｃｙｃｙｃｌｅ／ｃｙｃｌｉｎｇ）现象是种子休眠与萌发特性在生态适应方面的重要表现形式之一，多见于土壤种子库中［２９－３０］㊂植冠种子库中的种子是否也存在休眠循环现象目前尚未见相关报道㊂由于本研究持续时间不够长，有待进一步研究㊂植冠种子库中种子休眠的诱导与解除，以及活力的逐渐丧失，应该主要与不定期的降水所引起的种子吸湿回干循环有关［１０，３１－３３］，其生理生态机制也值得深入研究㊂３．２㊀复羽叶栾树植冠种子库中种子氧化伤害及抗氧化防御的变化㊀㊀在正常情况下，细胞中ＲＯＳ（包括超氧阴离子㊁Ｈ２Ｏ２和羟自由基等）的产生量很少，并且保持着一种相对稳态；细胞一旦遭受胁迫，ＲＯＳ就会大量产生从而打破稳态［３４］㊂大量产生的ＲＯＳ一方９３南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷面作为一种激活胁迫响应的信号，另一方面又会导致氧化胁迫［３５－３６］㊂在一定范围内，细胞自身的抗氧化防御系统会及时清除产生的过量ＲＯＳ，但若ＲＯＳ的产生超过抗氧化防御系统的清除能力时，氧化胁迫就会发生，会导致脂质过氧化等伤害，进而使质膜发生破裂［３７］㊂活性氧的清除主要依赖于ＳＯＤ㊁ＡＰＸ和ＣＡＴ等几种主要抗氧化酶［３８－４０］㊂其中，胁迫所致的活性氧的大量清除主要依赖于ＣＡＴ，而ＡＰＸ则因其对Ｈ２Ｏ２的相对高亲和力，可能主要通过微调的方式在胁迫信号转导方面起作用［３７］㊂超氧阴离子首先在ＳＯＤ的催化下转化为Ｈ２Ｏ２，然后Ｈ２Ｏ２再通过水⁃水循环㊁抗坏血酸⁃谷胱甘肽循环㊁谷胱甘肽过氧化物酶循环和ＣＡＴ等途径被还原为水或Ｏ２，从而彻底清除掉ＲＯＳ的氧化破坏性［３７］㊂在本研究中，脂质过氧化产物ＭＤＡ的含量先随种子生理成熟下降，然后随成熟脱水和休眠诱导上升，最后又随休眠解除再次下降，说明在生理成熟和休眠解除过程中脂质过氧化程度呈下降趋势，而成熟脱水和休眠诱导过程中脂质过氧化程度呈上升趋势㊂成熟脱水对于种子来说无疑是一种胁迫㊂按Ｄｅｎｇ等［２８］的观点，休眠对于胚来说实质上也是一种胁迫㊂相对电导率在生理成熟和成熟脱水过程中均没有显著变化，始终保持在最低水平，然后随着休眠诱导和解除则持续升高㊂相对电导率和ＭＤＡ含量间之所以没有显著相关性（Ｐ＞０ ０５），并且ＭＤＡ含量与３种模拟季节变温下的萌发率均极显著负相关（Ｐ＜０．０１），而相对电导率仅与模拟的秋季变温下的萌发率显著正相关（Ｐ＜０ ０５），这可能是因为脂质过氧化（导致ＭＤＡ含量增加）与电解质渗漏（脂质过氧化诱发膜破裂所致）之间存在着程度积累和时间滞后现象所致㊂除了ＳＯＤ活性与模拟的秋季变温下的萌发率间相关性不显著（Ｐ＞０．０５），几种抗氧化酶的活性与３种模拟季节变温下的萌发率间均呈显著正相关（Ｐ＜０．０５），且除了ＤＨＡＲ活性与ＭＤＡ含量呈显著负相关（Ｐ＜０．０５），ＳＯＤ㊁ＡＰＸ和ＣＡＴ活性均与ＭＤＡ含量呈极显著负相关（Ｐ＜０ ０１），表明植冠种子库中的种子在经历生理成熟㊁成熟脱水㊁休眠诱导和解除的过程中，几种抗氧化酶在种子活力获得和保持中起着重要的积极作用㊂值得注意的是，几种抗氧化酶的活性均随着种子休眠的诱导而下降，随着休眠的解除而升高，这似乎再次证明了Ｄｅｎｇ等［２８］２０１６年提出的种子休眠与萌发的 胚胁迫学说 ㊂植冠种子库是植物的一种生态策略，有利于种子有效扩散和适时萌发成苗［４，３８］㊂而种子活力决定着植冠种子库各种生态功能的实现㊂鉴于复羽叶栾树植冠种子库中种子较强的活力保持能力，建议在森林经营管理和植被恢复中充分利用其植冠种子库㊂参考文献（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）：［１］ＷＡＮＧＹＣ，ＪＩＡＮＧＤＭ，ＴＯＳＨＩＯＯ，ｅｔａｌ．Ｒｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｓｏｉｌｓｅｅｄｂａｎｋｒｅｓｅａｒｃｈ［Ｊ］．ＣｏｎｔｅｍｐＰｒｏｂｌＥｃｏｌ，２０１３，６（５）：５２０－５２４．ＤＯＩ：１０．１１３４／ｓ１９９５４２５５１３０５０１８１．［２］ＬＡＭＯＮＴＢＢ，ＰＡＵＳＡＳＪＧ，ＨＥＴＨ，ｅｔａｌ．Ｆｉｒｅａｓａｓｅｌｅｃｔｉｖｅａｇｅｎｔｆｏｒｂｏｔｈｓｅｒｏｔｉｎｙａｎｄｎｏｎｓｅｒｏｔｉｎｙｏｖｅｒｓｐａｃｅａｎｄｔｉｍｅ［Ｊ］．ＣｒｉｔＲｅｖＰｌａｎｔＳｃｉ，２０２０，３９（２）：１４０－１７２．ＤＯＩ：１０．１０８０／０７３５２６８９．２０２０．１７６８４６５．［３］马君，刘志民．植冠种子库及其生态意义研究［Ｊ］．生态学杂志，２００５，２４（１１）：１３２９－１３３３．ＭＡＪ，ＬＩＵＺＭ．Ｃａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋａｎｄｉｔｓｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ：ａｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＥｃｏｌ，２００５，２４（１１）：１３２９－１３３３．ＤＯＩ：１０．１３２９２／ｊ．１０００－４８９０．２００５．０１５４．［４］ＡＧＵＡＤＯＭ，ＶＩＣＥＮＴＥＭＪ，ＭＩＲＡＬＬＥＳＪ，ｅｔａｌ．ＡｅｒｉａｌｓｅｅｄｂａｎｋａｎｄｄｉｓｐｅｒｓａｌｔｒａｉｔｓｉｎＡｎｔｈｅｍｉｓｃｈｒｙｓａｎｔｈａ（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ），ａｃｒｉｔｉｃａｌｌｙｅｎｄａｎｇｅｒｅｄｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．ＦｌｏｒａＭｏｒｐｈｏｌＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎＦｕｎｃｔＥｃｏｌＰｌａｎｔｓ，２０１２，２０７（４）：２７５－２８２．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｆｌｏｒａ．２０１２．０２．００２．［５］ＢＨＡＴＴＡ，ＰＨＯＮＤＡＮＩＰＣ，ＰＨＡＲＴＹＡＬＳＳ，ｅｔａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆａｅｒｉａｌｓｅｅｄｂａｎｋｓｏｎｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｔｈｒｅｅｄｅｓｅｒｔｐｌａｎｔｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．ＪＰｌａｎｔＥｃｏｌ，２０１６，１０（６）：９９４－１０００．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｊｐｅ／ｒｔｗ１１３．［６］苏文华，崔凤涛，赵元蛟，等．云南松球果延迟开放及其植冠种子库［Ｊ］．生态学报，２０１７，３７（２）：５４１－５４８．ＳＵＷＨ，ＣＵＩＦＴ，ＺＨＡＯＹＪ，ｅｔａｌ．ＣａｎｏｐｙｓｅｅｄｂａｎｋａｎｄｓｅｒｏｔｉｎｏｕｓｃｏｎｅｓｏｆＰｉｎｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓｆｏｒｅｓｔｓ［Ｊ］．ＡｃｔａＥｃｏｌＳｉｎ，２０１７，３７（２）：５４１－５４８．ＤＯＩ：１０．５８４６／ｓｔｘｂ２０１５０７０４１４１４．［７］ＳＵＷＨ，ＹＵＪＥ，ＺＨＡＮＧＧＦ，ｅｔａｌ．ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｃａｎｏｐｙａｎｄｓｏｉｌｓｅｅｄｂａｎｋｓｏｆＰｉｎｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓｉｎｃｅｎｔｒａｌＹｕｎｎａｎ，Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＦｏｒＥｃｏｌＭａｎａｇ，２０１９，４３７：４１－４８．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｆｏｒｅｃｏ．２０１９．０１．００２．［８］邓志军，宋松泉，艾训儒．植物种子保存和检测的原理与技术［Ｍ］．北京：科学出版社，２０１９．ＤＥＮＧＺＪ，ＳＯＮＧＳＱ，ＡＩＸＲ．Ｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅａｎｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｐｌａｎｔｓｅｅｄｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃ⁃ｔｉｏｎ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，２０１９．［９］李振华，王建华．种子活力与萌发的生理与分子机制研究进展［Ｊ］．中国农业科学，２０１５，４８（４）：６４６－６６０．ＬＩＺＨ，ＷＡＮＧＪＨ．Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｓｅｅｄｖｉｇｏｒａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＳｃｉＡｇｒｉｃＳｉｎ，２０１５，４８（４）：６４６－６６０．ＤＯＩ：１０．３８６４／ｊ．ｉｓｓｎ．０５７８－１７５２．２０１５．０４．０３．［１０］陈快．吸湿⁃回干循环对水杉种子活力的影响［Ｄ］．恩施：湖北民族大学，２０２０．ＣＨＥＮＫ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｈｙｄｒａｔｉｏｎ⁃ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｃｙ⁃ｃｌｅｓｏｎｓｅｅｄｖｉｇｏｒｏｆＭｅｔａｓｅｑｕｏｉａｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｏｉｄｅｓ［Ｄ］．Ｅｎｓｈｉ：ＨｕｂｅｉＭｉｎｚｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０２０．［１１］ＬＩＵＨ，ＺＨＵＹＦ，ＬＩＵＸ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄａｇｉｎｇｏｎｔｈｅｖｉｇｏｒｏｆＭｅｔａｓｅｑｕｏｉａｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｏｉｄｅｓｓｅｅｄｓ［Ｊ］．ＪＦｏｒＲｅｓ，２０２０，３１（３）：７６９－７７９．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１１６７６－０１８－０８４０－１．［１２］中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志：第４７卷第１册［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８５：５６．ＥｄｉｔｏｒｉａｌｃｏｍｍｉｔｔｅｅｏｆｆｌｏｒａｏｆＣｈｉｎａ，ＣＡＳ．ＦｌｏｒａｏｆＣｈｉｎａ：ｖｏｌ．４７（１）［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：０４㊀第２期刘相泉，等：复羽叶栾树植冠种子库种子活力变化机制ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，１９８５：５６．［１３］钟军弟，蔡进改，张涛，等．复羽叶栾树育苗基质配方的筛选［Ｊ］．北方园艺，２０１７（４）：８３－８９．ＺＨＯＮＧＪＤ，ＣＡＩＪＧ，ＺＨＡＮＧＴ，ｅｔａｌ．ＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｓｕｂｓｔｒａｔｅｆｏｒｍｕｌａｆｏｒｓｅｅｄｌｉｎｇｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａ［Ｊ］．ＮｏｒｔｈＨｏｒｔｉｃ，２０１７（４）：８３－８９．ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１７０４０１９．［１４］ＴＡＷＦＩＫＡ，ＩＢＲＡＨＩＭＯ，ＴＡＨＡ．ＭｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａｕｓｉｎｇｊｕｖｅｎｉｌｅａｎｄｍａｔｕｒｅｅｘｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＣｕｒｒＪＡｐｐｌＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ，２０２１，２０（３）：４７０－４７８．ＤＯＩ：１０．１４４５６／ｃａｓｔ．２０２０．３１．［１５］ＹＡＮＧＹ，ＹＡＮＧＹ，ＹＵＹ，ｅｔａｌ．ＦｉｒｓｔｒｅｐｏｒｔｏｆｒｕｓｔｄｉｓｅａｓｅｏｎＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａｃａｕｓｅｄｂｙＮｙｓｓｏｐｓｏｒａｋｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｅｉｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＤｉｓ，２０１６，１００（５）：１０１４．ＤＯＩ：１０．１０９４／ｐｄｉｓ－１０－１５－１１８２－ｐｄｎ．［１６］ＣＡＯＬＭ，ＬＩＵＪＨ，ＬＩＮＱ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｆｌｏｒａｌｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆＫｏｅｌ⁃ｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａａｎｄｉｔｓｖａｒｉｅｔｙＫ．ｂｉｐｉｎｎａｔａｖａｒ．ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ（Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ）：ｅｖｉｄｅｎｃｅｏｆｆｌｏｒａｌｃｏｎｓｔｒａｉｎｔｓｏｎｔｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｍｏｎｏｓｙｍｍｅｔｒｙ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｙｓｔＥｖｏｌ，２０１８，３０４（８）：９２３－９３５．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ００６０６－０１８－１５１９－ｙ．［１７］ＬＵＯＺＨ，ＴＩＡＮＤＬ，ＮＩＮＧＣ，ｅｔａｌ．ＲｏｌｅｓｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔａａｓａｓｕｉｔａｂｌｅａｃｃｕｍｕｌａｔｏｒｔｒｅｅｓｐｅｃｉｅｓｉｎｒｅｍｅｄｉａｔｉｎｇＭｎ，Ｚｎ，Ｐｂ，ａｎｄＣｄｐｏｌｌｕｔｉｏｎｏｎＭｎｍｉｎｉｎｇｗａｓｔｅｌａｎｄｓｉｎＳｏｕｔｈｅｒｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＥｎｖｉｒｏｎＥａｒｔｈＳｃｉ，２０１５，７４（５）：４５４９－４５５９．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１２６６５－０１５－４５１０－８．［１８］李萧萧．复羽叶栾树对Ｃｄ㊁Ｐｂ污染的修复潜力研究［Ｄ］．重庆：西南大学，２０１９．ＬＩＸＸ．ＳｔｕｄｙｏｎｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆＫｏｅｌｒｅｕｔｅｒｉａｂｉｐｉｎｎａｔｅＦｒａｎｃｈ．ｆｏｒＣｄａｎｄＰｂｐｏｌｌｕｔｉｏｎ［Ｄ］．Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ：ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１９．［１９］冯景，沈永宝，史锋厚．银杏种子脱水敏感性的研究［Ｊ］．南京林业大学学报（自然科学版），２０１９，４３（６）：１９３－２００．ＦＥＮＧＪ，ＳＨＥＮＹＢ，ＳＨＩＦＨ．ＳｔｕｄｙｏｎｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＧｉｎｋｇｏｂｉ⁃ｌｏｂａｓｅｅｄｓ［Ｊ］．ＪＮａｎｊｉｎｇＦｏｒＵｎｉｖ（ＮａｔＳｃｉＥｄ），２０１９，４３（６）：１９３－２００．ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２００６．２０１８０８０２６．［２０］宋松泉．种子生物学研究指南［Ｍ］．北京：科学出版社，２００５：６１－６２．ＳＯＮＧＳＱ．Ｓｅｅｄｂｉｏｌｏｇｙｒｅｓｅａｒｃｈｇｕｉｄｅ［Ｍ］．Ｂｅｉ⁃ｊｉｎｇ：ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，２００５：６１－６２．［２１］ＨＥＡＴＨＲＬ，ＰＡＣＫＥＲＬ．Ｐｈｏｔｏｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎｉｎｉｓｏｌａｔｅｄｃｈｌｏｒｏ⁃ｐｌａｓｔｓ．Ｉ：ｋｉｎｅｔｉｃｓａｎｄｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｙｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｒｃｈＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ，１９６８，１２５（１）：１８９－１９８．ＤＯＩ：１０．１０１６／０００３－９８６１（６８）９０６５４－１．［２２］ＲＡＯＫＶＭ，ＳＲＥＳＴＹＴＶＳ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓｏｆｐｉｇｅｏｎｐｅａ（Ｃａｊａｎｕｓｃａｊａｎ（Ｌ．）Ｍｉｌｌｓｐａｕｇｈ）ｉｎｒｅ⁃ｓｐｏｎｓｅｔｏＺｎａｎｄＮｉｓｔｒｅｓｓｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０００，１５７（１）：１１３－１２８．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ０１６８－９４５２（００）００２７３－９．［２３］ＮＡＫＡＮＯＹ，ＡＳＡＤＡＫ．Ｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅｉｓｓｃａｖｅｎｇｅｄｂｙａｓｃｏｒ⁃ｂａｔｅ⁃ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｉｎｓｐｉｎａｃｈｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ，１９８１，２２（５）：８６７－８８０．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｏｘｆｏｒｄｊｏｕｒｎａｌｓ．ｐｃｐ．ａ０７６２３２．［２４］ＬÜＣＫＨ．Ｃａｔａｌａｓｅ［Ｃ］／／ＢＥＲＧＭＥＹＥＲＨＵ．Ｍｅｔｈｏｄｓｏｆｅｎｚｙ⁃ｍａｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９６５：８８５－８９４．［２５］ＡＲＲＩＧＯＮＩＯ，ＤＥＧＡＲＡＬ，ＴＯＭＭＡＳＩＦ，ｅｔａｌ．ＣｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅａｓｃｏｒｂａｔｅｓｙｓｔｅｍｄｕｒｉｎｇｓｅｅｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＶｉｃｉａｆａｂａＬ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９９２，９９（１）：２３５－２３８．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．９９．１．２３５．［２６］ＤＩＡＳＤＣＦＳ，ＲＩＢＥＩＲＯＦＰ，ＤＩＡＳＬＡＳ，ｅｔａｌ．Ｔｏｍａｔｏｓｅｅｄｑｕａｌｉｔｙｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｆｒｕｉｔｍａｔｕｒａｔｉｏｎａｎｄｐｏｓｔ⁃ｈａｒｖｅｓｔｓｔｏｒａｇｅ［Ｊ］．ＳｅｅｄＳｃｉＴｅｃｈｎｏｌ，２００６，３４（３）：６９１－６９９．ＤＯＩ：１０．１５２５８／ｓｓｔ．２００６．３４．３．１５．［２７］ＢＡＲＢＥＤＯＡＳ．Ｃ，ＺＡＮＩＮＡＣ．Ｗ，ＢＡＲＢＥＤＯＣＪｅｔａｌ．Ｅｆｅｉｔｏｓｄａｉｄａｄｅｅｄｏｐｅｒｉｏｄｏｄｅｒｅｐｏｕｓｏｐóｓ⁃ｃｏｌｈｅｉｔａｄｏｓｆｒｕｔｏｓｓｏｂｒｅａｑｕａｌｉｄａｄｅｄｅｓｅｍｅｎｔｅｓｄｅｂｅｒｉｎｊｅｌａ［Ｊ］．ＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａＢｒａｓｉｌｅｉｒａ，１９９４，１２（１）：１４－１８．［２８］ＤＥＮＧＺＪ，ＨＵＸＦ，ＡＩＸＲ，ｅｔａｌ．ＤｏｒｍａｎｃｙｒｅｌｅａｓｅｏｆＣｏｔｉｎｕｓｃｏｇｇｙｇｒｉａｓｅｅｄｓｕｎｄｅｒａｐｒｅ⁃ｃｏｌｄｍｏｉｓｔｓｔｒａｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ａｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ／ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｃａｃｉｄａｎｄｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｐｒｏ⁃ｔｅｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＮｅｗＦｏｒ，２０１６，４７（１）：１０５－１１８．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１１０５６－０１５－９４９６－２．［２９］ＢＡＳＫＩＮＣＣ，ＣＨＥＳＳＯＮＰＬ，ＢＡＳＫＩＮＪＭ．Ａｎｎｕａｌｓｅｅｄｄｏｒｍａｎｃｙｃｙｃｌｅｓｉｎｔｗｏｄｅｓｅｒｔｗｉｎｔｅｒａｎｎｕａｌｓ［Ｊ］．ＪＥｃｏｌ，１９９３，８１（３）：５５１．ＤＯＩ：１０．２３０７／２２６１５３３．［３０］ＦＩＮＣＨ⁃ＳＡＶＡＧＥＷＥ，ＦＯＯＴＩＴＴＳ．Ｓｅｅｄｄｏｒｍａｎｃｙｃｙｃｌｉｎｇａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｄｏｒｍａｎｃｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｔｏｔｉｍｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｖａｒｉａｂｌｅｆｉｅｌｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ［Ｊ］．ＪＥｘｐＢｏｔ，２０１７，６８（４）：８４３－８５６．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｊｘｂ／ｅｒｗ４７７．［３１］ＬＩＭＡＡＴ，ＭＥＩＡＤＯＭＶ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｈｙｄｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｃｙ⁃ｃｌｅｓｏｎＭｉｍｏｓａｔｅｎｕｉｆｌｏｒａｓｅｅｄｓｄｕｒｉｎｇｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄｉｎｉｔｉａｌｄｅ⁃ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．ＳＡｆｒＮＪＢｏｔ，２０１８，１１６：１６４－１６７．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｓａｊｂ．２０１８．０３．０１７．［３２］ＴＲＩＮＤＡＤＥＬＩＭＡＡ，ＭＡＲＩＡＤＥＯＬＩＶＥＩＲＡＤ，ＶＩＮＩＣＩＵＳＭＥ⁃ＩＡＤＯＭ．ＥｆｆｅｃｔｏｆｈｙｄｒａｔｉｏｎａｎｄｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｃｙｃｌｅｓｏｎＭａｃｒｏｐｔｉｌｉｕｍａｔｒｏｐｕｒｐｕｒｅｕｍｓｅｅｄｓｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｕｎｄｅｒｗａｔｅｒｄｅｆｉｃｉｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＣｏｍｍｕｎＰｌａｎｔＳｃｉ，２０１８，８（１）：５５－６１．ＤＯＩ：１０．２６８１４／ｃｐｓ２０１８００８．［３３］ＳＯＥＤＡＹ，ＫＯＮＩＮＧＳＭＣＪＭ，ＶＯＲＳＴＯ，ｅｔａｌ．ＧｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｇｒａｍｓｄｕｒｉｎｇＢｒａｓｓｉｃａｏｌｅｒａｃｅａｓｅｅｄｍａｔｕｒａｔｉｏｎ，ｏｓｍｏｐｒｉｍｉｎｇ，ａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｒｅｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｆｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓａｎｄｔｈｅｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅｌｅｖｅｌ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，２００５，１３７（１）：３５４－３６８．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．１０４．０５１６６４．［３４］ＰＯＬＬＥＡ．Ｄｉｓｓｅｃｔｉｎｇｔｈｅｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ⁃ａｓｃｏｒｂａｔｅ⁃ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ⁃ｐａｔｈｗａｙｉｎｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｓｂｙｍｅｔａｂｏｌｉｃｍｏｄｅｌｉｎｇ：ｃｏｍ⁃ｐｕｔｅｒｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓａｓａｓｔｅｐｔｏｗａｒｄｓｆｌｕｘａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，２００１，１２６（１）：４４５－４６２．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．１２６．１．４４５．［３５］ＤＥＳＩＫＡＮＲ，Ａ⁃Ｈ⁃ＭＡＣＫＥＲＮＥＳＳＳ，ＨＡＮＣＯＣＫＪＴ，ｅｔａｌ．Ｒｅｇｕ⁃ｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｂｙｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，２００１，１２７（１）：１５９－１７２．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．１２７．１．１５９．［３６］ＫＮＩＧＨＴＨ，ＫＮＩＧＨＴＭＲ．Ａｂｉｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ：ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｃｒｏｓｓ⁃ｔａｌｋ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉ，２００１，６（６）：２６２－２６７．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｓ１３６０－１３８５（０１）０１９４６－ｘ．［３７］ＭＩＴＴＬＥＲＲ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓａｎｄｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉ，２００２，７（９）：４０５－４１０．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ１３６０－１３８５（０２）０２３１２－９．［３８］程淑娟，唐东芹，刘群录．盐胁迫对两种忍冬属植物活性氧平衡的影响［Ｊ］．南京林业大学学报（自然科学版），２０１３，３７（１）：１３７－１４１．ＣＨＥＮＧＳＪ，ＴＡＮＧＤＱ，ＬＩＵＱＬ．ＲｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓｏｆｔｗｏＬｏｎｉｃｅｒａｓｐｅｃｉｅｓｕｎｄｅｒｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＪＮａｎｊｉｎｇＦｏｒＵｎｉｖ（ＮａｔＳｃｉＥｄ），２０１３，３７（１）：１３７－１４１．［３９］ＢＯＷＬＥＲＣ，ＭＯＮＴＡＧＵＭＶ，ＩＮＺＥＤ．Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅａｎｄｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．ＡｎｎｕＲｅｖＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌＰｌａｎｔＭｏｌＢｉｏｌ，１９９２，４３：８３－１１６．ＤＯＩ：１０．１１４６／ａｎｎｕｒｅｖ．ｐｐ．４３．０６０１９２．０００５０３．［４０］ＷＩＬＬＥＫＥＮＳＨ，ＣＨＡＭＮＯＮＧＰＯＬＳ，ＤＡＶＥＹＭ，ｅｔａｌ．ＣａｔａｌａｓｅｉｓａｓｉｎｋｆｏｒＨ２Ｏ２ａｎｄｉｓｉｎｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅｆｏｒｓｔｒｅｓｓｄｅｆｅｎｃｅｉｎＣ３ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＥＭＢＯＪ，１９９７，１６（１６）：４８０６－４８１６．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｅｍｂｏｊ／１６．１６．４８０６．（责任编辑㊀郑琰燚）１４。
苹果短链脱氢酶基因MdSDR响应腐烂病菌侵染的功能研究
㊀核农学报㊀２０２２，３６（１１）：２１５８ ２１６５ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ收稿日期：２０２１⁃１２⁃０８㊀接受日期：２０２２⁃０３⁃０１基金项目：国家自然科学基金－新疆联合基金（Ｕ１９０３２０６），国家自然科学基金（３１４７１７３２），陕西省重大专项（２０２０ｚｄｚｘ０３０３－０１）作者简介：王帅乐，男，主要从事植物病理学研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：６３１３４２７６０＠ｑｑ．ｃｏｍ∗通讯作者：黄丽丽，女，教授，主要从事小麦㊁果树病害的病原学和综合防治研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｌｉｌｉ＠ｎｗｓｕａｆ．ｅｄｕ．ｃｎ文章编号：１０００⁃８５５１（２０２２）１１⁃２１５８⁃０８苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究王帅乐㊀肖珂雨㊀王维东㊀黄丽丽∗（西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室／植物保护学院，陕西杨凌㊀７１２１００）摘㊀要：短链脱氢／还原酶（ＳＤＲ）是一类ＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）依赖的氧化还原酶，负责催化生物体内各种代谢活动的氧化还原步骤㊂为了探究苹果（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）ＳＤＲ（ＭｄＳＤＲ）蛋白的功能，利用农杆菌介导的苹果组培苗瞬时转化技术在苹果叶片中瞬时表达ＭｄＳＤＲ，然后通过刺伤接种法研究过表达ＭｄＳＤＲ对叶片抗病性的影响；利用实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）技术检测瞬时表达ＭｄＳＤＲ后苹果中脂肪酸生物合成相关基因的表达水平；利用气相色谱分析技术检测瞬时表达ＭｄＳＤＲ苹果叶片中的脂肪酸含量；利用尼罗红染色检测苹果叶片中的脂滴（ＬＤｓ）积累情况㊂结果表明，瞬时表达ＭｄＳＤＲ显著增强了苹果叶片对腐烂病菌（Ｖａｌｓａｍａｌｉ）的抗病性，试验组叶片病斑直径相比对照组减小约１４ ４６％（Ｐ＜０ ００１）；瞬时表达ＭｄＳＤＲ后苹果叶片中脂肪酸生物合成相关基因的表达显著上调（Ｐ＜０ ００１），其中ＭｄＡＣＣａｓｅ上调４８ ４１倍，ＭｄＫＡＲ上调１２９ ７９倍，ＭｄＥＮＲ上调１６８ ２０倍，ＭｄＨＡＤ上调８ ６７倍，ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ和ＭｄＫＡＳⅡ均上调约５倍；然而过表达ＭｄＳＤＲ后苹果叶片中脂肪酸的积累水平无显著变化（Ｐ＞０ ０５）；进一步研究发现，过表达ＭｄＳＤＲ后苹果叶片中调控脂滴合成的基因ＭｄＳＥＩＰＩＮ显著上调表达（Ｐ＜０ ０５），脂滴数量大量增加㊂本研究初步证明ＭｄＳＤＲ能够通过促进脂肪酸的合成，间接提高脂滴的数量，从而提高苹果的抗病性，为苹果抗性品种的研究提供了一定的理论基础㊂关键词：短链脱氢／还原酶（ＳＤＲ）；脂肪酸；脂滴；抗病性ＤＯＩ：１０ １１８６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００⁃８５５１ ２０２２ １１ ２１５８㊀㊀短链脱氢／还原酶（ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＳＤＲ）是一类ＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）依赖的氧化还原酶，负责催化生物体内的氧化还原反应［１－３］㊂ＳＤＲ在高等植物中分布广泛［４］，主要参与生物碱㊁萜类㊁酚类物质和激素等多种次级代谢途径，增强了植物对细菌㊁真菌㊁病毒㊁动物和昆虫等生物胁迫以及非生物胁迫的适应能力，并且在植物传粉㊁种子传播和种间竞争中发挥重要作用［１，５－８］㊂同时，ＳＤＲ也参与多种初级代谢，维持植物正常的生长发育㊂例如，在叶绿素的合成途径中，ＳＤＲ家族的原叶绿体氧化还原酶（ｐｒｏｔｏｃｈｌｏｒｏｐｙｌｌｉｄｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＰＯＲ）能将原叶绿素转化为叶绿素［９－１０］；在脂肪酸合成途径中，ＳＤＲ家族的β－酮脂酰－ＡＣＰ还原酶（β－ｋｅｔｏａｃｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＫＡＲ）和烯脂酰－ＡＣＰ还原酶（ｅｎｏｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＥＮＲ）能催化还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ｒｅｄｕｃｅｄｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＮＡＤＰＨ）和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ｒｅｄｕｃｅｄｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＮＡＤＨ）依赖的两个还原步骤，是植物脂肪酸生物合成的两种关键酶［１１－１２］㊂脂肪酸是细胞膜㊁栓质和角质蜡的关键成分，为植物抵御环境胁迫提供了物理屏障［１３－１４］㊂植物能通过改变不饱和脂肪酸的含量来调节膜的流动性，从而维持适合关键整合蛋白（ｉｎｔｅｇｒａｌｐｒｏｔｅｉｎ）发挥功能的环境［１５－１６］㊂例如，在高温胁迫环境下，野生型烟草叶绿体中的光合蛋白出现热变性和光合效率下降㊂而三元脂肪酸（ｔｒｉｅｎｏｉｃｆａｔｔｙａｃｉｄｓ，ＴＡｓ）表达被抑制的转基因植株中，未检测到光合蛋白热变性，其光合效率降幅较小［１７］㊂另外，脂肪酸也参与病原胁迫响应㊂研究发８５１２㊀１１期苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究现，游离亚麻酸既是一种胁迫信号分子，也是植物氧化脂质（如茉莉酸）生物合成的前体［１８－１９］㊂许多研究也证明，叶绿体油酸（ｏｌｅｉｃａｃｉｄ，ＯＡ）和壬二酸（ａｚｅｌａｉｃａｃｉｄ，ＡＺＡ）水平对拟南芥的生物胁迫响应至关重要，可以引发细胞程序性死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ）和激发系统获得性抗性（ｓｙｓｔｅｍｉｃａｃｑｕｉｒｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＳＡＲ）［２０－２１］㊂另外，植物叶片中脂肪酸的积累能刺激植物脂滴（ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓ，ＬＤｓ）的产生㊂而脂滴在植物胁迫应答㊁激素信号途径和植物生长发育中起重要作用［２２－２３］㊂例如，脂滴表面的油体钙蛋白ｃａｌｅｏｓｉｎ和油体固醇蛋白ｓｔｅｒｏｌｅｏｓｉｎ等蛋白具有酶活性，其中ｃａｌｅｏｓｉｎ具有过氧化酶活性，可以将α－亚麻酸衍生物转化为各种氧化脂类植保素；ｓｔｅｒｏｌｅｏｓｉｎ是一种甾醇脱氢酶，可以将甾醇底物转化为油菜素类固醇（ｂｒａｓｓｉｎｏｓｔｅｒｏｉｄｓ，ＢＲｓ），从而调控生长发育和胁迫响应［２４－２５］㊂上述研究结果均表明，脂肪酸在植物抵抗生物胁迫中发挥着重要的作用㊂在苹果（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）中，目前关于ＳＤＲ基因功能的研究仍鲜有报道㊂西北农林科技大学果树病害病原生物学及综合防治团队前期以富士苹果ｃＤＮＡ为模板克隆获得ＭｄＳＤＲ基因编码区（ｃｏｄｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＣＤＳ）全长序列，并通过预测发现其可能与脂肪酸的合成有关［２６］㊂为了验证ＭｄＳＤＲ蛋白是否参与脂肪酸的合成和调控植物免疫，本研究通过农杆菌介导的瞬时表达技术及实时荧光定量ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅＰＣＲ，ｑＲＴ－ＰＣＲ）技术探究苹果ＭｄＳＤＲ对脂肪酸合成中关键基因表达的影响，揭示ＭｄＳＤＲ在脂肪酸合成中的重要作用，并利用苹果瞬时表达技术探究ＭｄＳＤＲ对苹果树腐烂病菌侵染的影响，初步研究其抗逆功能和作用机理，旨在为苹果抗性品种的研究提供一定的理论基础㊂１㊀材料与方法１ １㊀植物材料嘎啦苹果组培苗（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃｃｖ．Ｒｏｙａｌｇａｌａ）由西北农林科技大学园艺学院李明军教授实验室惠赠㊂组织培养植株生长于ＭＳ培养基中，培养基配方为：４ ４３ｇ㊃Ｌ－１ＭＳ＋３０ｇ㊃Ｌ－１蔗糖＋８ｇ㊃Ｌ－１琼脂＋０ ３ｍｇ㊃Ｌ－１６－苄氨基嘌呤＋０ ２ｍｇ㊃Ｌ－１吲哚－３－乙酸，ｐＨ值为５ ８；组培苗置于人工智能气候箱（ＲＸＺ－５００－Ｄ⁃ＰＥＤ，宁波江南仪器厂）内培养，培养条件为：温度２５ħ，光照１６ｈ／黑暗８ｈ，光照度６４００Ｌｘ，相对湿度６０％㊂每１５ｄ更换一次培养基㊂１ ２㊀菌株和质粒载体大肠杆菌ＤＨ５α㊁农杆菌ＧＶ３１０１及载体ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２均购自北京擎科新业生物技术有限公司；苹果腐烂病菌０３－８（Ｖａｌｓａｍａｌｉ）保存于西北农林科技大学㊂１ ３㊀植物表达载体的构建以富士苹果ｍＲＮＡ反转录合成的ｃＤＮＡ为模板，利用特异性引物ＭｄＳＤＲ－Ｆ㊁ＭｄＳＤＲ－Ｒ对ＭｄＳＤＲ基因进行ＰＣＲ扩增，采用快捷型琼脂糖凝胶ＤＮＡ回收试剂盒ＩＩ（ＤＰ１７２２，Ｂｉｏｔｅｋｅ，北京）对目的基因条带进行回收㊂将回收产物与线性化载体ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２连接构建重组质粒ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２－ＭｄＳＤＲ㊂热激法转化大肠杆菌ＤＨ５α，进行卡那霉素抗性筛选及菌落ＰＣＲ验证后提取质粒送至上海生工生物工程股份有限公司测序㊂将测序重组质粒及空载体（对照）分别电击转化至农杆菌ＧＶ３１０１，卡那霉素抗性筛选及菌落ＰＣＲ验证后于－８０ħ冰箱保存备用㊂１ ４㊀农杆菌介导的苹果组培苗瞬时转化用含５０μｇ㊃ｍＬ－１卡那霉素及５０μｇ㊃ｍＬ－１利福平的ＹＥＰ培养基，以２８ħ㊁２００ｒ㊃ｍｉｎ－１的条件培养含有ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２－ＭｄＳＤＲ和ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２表达载体的农杆菌１６ｈ，６０００ｒ㊃ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ收集菌体，用０ ０１ｍｏｌ㊃Ｌ－１的ＭｇＣｌ２溶液清洗２次，最终用含１００μｍｏｌ㊃Ｌ－１乙酰丁香酮及１０μｍｏｌ㊃Ｌ－１２－吗啉乙磺酸（４－ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ，ＭＥＳ）的ＭｇＣｌ２溶液重悬菌体，使其ＯＤ６００值为１㊂挑选健康㊁长势相近的４周龄组培苗若干，使用真空渗透的方法［２６］对其进行瞬时转化，转化后的组培苗培养条件与１ １中的组培条件相同㊂１ ５㊀苹果总ＲＮＡ提取及ｃＤＮＡ的合成组培苗瞬时表达４８ｈ后随机选取叶片样品进行苹果总ＲＮＡ的提取，提取方法参照快速通用植物ＲＮＡ提取试剂盒说明书（０４１６－５０ｇｋ，北京华越洋生物有限公司），提取完成后对其浓度进行测定，于－８０ħ冰箱保存备用㊂ｃＤＮＡ的合成参照ＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙｃＤＮＡ反转录试剂盒说明书（４３６８８１３，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，美国）进行，反转录产物于－８０ħ冰箱保存备用㊂１ ６㊀实时荧光定量ＰＣＲ分析在ＮＣＢＩ数据库中找到ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡ㊁ＭｄＨＡＤ㊁ＭｄＥＮＲ等与苹果脂肪酸合成相关的基因序列以及与植物脂滴调控相关基因ＭｄＳＥＩＰＩＮ［２７－２８］，并以ＭｄＥＦ－１α为内参基因［２９］㊂使用Ｐｒｉｍｉｅｒ５软件对上述基因进行引物设计（表１）㊂９５１２核㊀农㊀学㊀报３６卷表１㊀引物序列Ｔａｂｌｅ１㊀Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓ引物名称Ｐｒｉｍｅｒｎａｍｅ引物序列（５ᶄң３ᶄ）Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅ（５ᶄң３ᶄ）产物大小Ｐｒｏｄｕｃｔｓｉｚｅ／ｂｐＭｄβＣＴ－ＦＡＴＡＴＣＡＴＴＡＴＴＧＣＣＧＡＡＣＣＣＡＡ９１ＭｄβＣＴ－ＲＴＴＴＴＣＧＴＡＡＡＡＴＣＴＣＧＣＣＴＡＣＴＭｄＡＣＣａｓｅ－ＦＧＡＣＣＡＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＡＡＧＴＴＡＡ１５１ＭｄＡＣＣａｓｅ－ＲＣＴＣＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＴＧＡＡＡＧＡＡＧＭｄＫＡＲ－ＦＴＧＧＴＴＧＣＡＧＧＧＴＣＣＴＴＧＴＴ８０ＭｄＫＡＲ－ＲＣＡＣＣＧＡＡＴＧＣＣＴＣＡＡＴＣＴＣＭｄＫＡＳⅠ－ＦＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＴＴＣＧＴＴＡＴＧＧＧ９１ＭｄＫＡＳⅠ－ＲＧＣＡＡＴＴＡＴＣＧＧＴＧＣＴＣＣＴＣＴＴＴＭｄＫＡＳⅡ－ＦＣＴＴＡＴＧＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＡ１３６ＭｄＫＡＳⅡ－ＲＡＧＣＣＡＴＣＡＣＧＡＴＴＡＣＴＡＴＣＣＣＭｄＥＮＲ－ＦＣＡＡＡＴＧＧＡＣＣＧＧＡＧＧＴＴＧ１１３ＭｄＥＮＲ－ＲＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＧＣＴＴＧＡＧＴＡＭｄＨＡＤ－ＦＡＡＡＴＧＣＴＣＣＣＴＣＣＣＧＡＡＴＣ９１ＭｄＨＡＤ－ＲＧＧＴＴＧＡＧＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＴＡＧＴＴＭｄＳＥＩＰＩＮ－ＦＣＴＣＧＧＡＧＴＣＴＴＴＣＡＧＧＴＣＡＧＧ１１２ＭｄＳＥＩＰＩＮ－ＲＡＴＡＧＡＡＧＧＣＧＧＡＴＡＧＧＣＴＣＡＣＭｄＥＦ－１α－ＦＡＴＴＣＡＡＧＴＡＴＧＣＣＴＧＧＧＴＧＣ１８９ＭｄＥＦ－１α－ＲＣＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＴＧＡＴＧＴＴＣＣ㊀㊀利用ＰＣＲ技术检测上述引物的特异性，ＰＣＲ反应体系为２０μＬ：１０μＬ２ˑＴａｑＭａｓｔｅｒＭｉｘ㊁上下游引物各０ ５μＬ㊁１μＬｃＤＮＡ㊁８μＬｄｄＨ２Ｏ㊂反应程序：９５ħ预变性５ｍｉｎ；９５ħ变性３０ｓ，５５ħ退火３０ｓ，７２ħ延伸３０ｓ，３０个循环㊂基因相对表达水平测定：按照２ˑＳＹＢＲ ＧｒｅｅｎＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ａ３１１－１０，北京康润诚业生物科技有限公司）说明书配制ｑＲＴ－ＰＣＲ反应体系，每个样品设３个重复㊂ｑＲＴ－ＰＣＲ反应体系为２０μＬ：１０μＬ２ˑＲｅａｌＳｔａｒＧｒｅｅｎＰｏｗｅｒＭｉｘｔｕｒｅ㊁１０μｍｏｌ㊃Ｌ－１正反向引物各０ ５μＬ㊁１ ５μＬｃＤＮＡ㊁７ ５μＬｄｄＨ２Ｏ㊂使用罗氏ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ９６实时荧光定量ＰＣＲ仪，反应程序：９５ħ预变性５ｍｉｎ；９５ħ变性１０ｓ，５８ħ退火３０ｓ，７２ħ延伸３０ｓ，４５个循环；熔解反应程序为：９５ħ１０ｓ，６５ħ６０ｓ，９７ħ１ｓ㊂１ ７㊀真菌活化与侵染试验将苹果腐烂病菌（Ｖ．ｍａｌｉ）在马铃薯葡萄糖琼脂（ｐｏｔａｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅａｇａｒ，ＰＤＡ）培养基上活化，于２５ħ条件下培养３ｄ㊂组培苗瞬时转化４８ｈ后取叶片刺伤接种Ｖ．ｍａｌｉ㊂将叶柄插入水琼脂中保湿，２５ħ共培养３６ｈ左右，拍照并用ＩｍａｇｅＪ软件计算病斑直径，重复３次㊂使用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９作图并用ＳＰＳＳ２６ ０进行ｔ测验分析㊂为了减少试验误差，每次重复使用至少３０个叶片，取自长势相似的组培苗㊂１ ８㊀苹果叶片脂肪酸含量的测定组培苗瞬时表达４８ｈ后取叶片样品，液氮速冻后用干冰保存运输，送至西安迈维代谢生物科技有限公司进行脂肪酸含量及种类的测定㊂处理组与对照组各做３次重复，使用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９作图并用ＳＰＳＳ２６ ０进行ｔ测验分析㊂１ ９㊀苹果叶片中脂滴的染色观察尼罗红（ＨＹ⁃Ｄ０７１８，ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ，美国）在缓冲液中稀释至２００ｍｍｏｌ㊃Ｌ－１，ｐＨ值为７㊂将组培苗瞬时表达４８ｈ后取叶片样品，在尼罗红染液中３７ħ避光孵育５ １０ｍｉｎ，洗去染色液后制片㊂用ＦＶ３０００激光共聚焦扫描显微镜（奥林巴斯，日本）观察，由４８８ｎｍ激发，在５００ ５４０ｎｍ光谱下收集信号㊂２㊀结果与分析２ １㊀苹果叶片抗病性检测为了探究ＭｄＳＤＲ蛋白在植物抗生物胁迫中的作用，在苹果组培苗叶片中瞬时表达ＭｄＳＤＲ基因后接种Ｖ．ｍａｌｉ，检测病斑变化情况㊂结果显示，过表达ＭｄＳＤＲ的苹果叶片的病斑明显小于对照（图１－Ａ）㊂平均病斑直径统计结果显示，过表达ＭｄＳＤＲ的苹果叶片的病斑直径显著小于（Ｐ＜０ ００１）对照（约１４ ４６％）（图１－Ｂ），表明过表达ＭｄＳＤＲ提高了苹果叶片对Ｖ．ｍａｌｉ的抗病性㊂注：Ａ：Ｖ．ｍａｉｌ．侵染苹果叶片３６ｈ后的叶片表型；Ｂ：Ｖ．ｍａｉｌ．侵染苹果叶片３６ｈ后的平均病斑直径㊂∗∗∗表示在Ｐ＜０ ００１水平差异显著㊂Ｎｏｔｅ：Ａ：ＲｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅｓｙｍｐｔｏｍｓｏｆｔｈｅａｐｐｌｅｌｅａｖｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲａｔ３６ｈｏｕｒｓｐｏｓｔ⁃ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ（ｈｐｉ）ｏｆＶ．ｍａｌｉ．Ｂ：ＴｈｅａｖｅｒａｇｅｌｅｓｉｏｎｄｉａｍｅｔｅｒｏｆａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｉｎｗｈｉｃｈＭｄＳＤＲｉｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄａｔ３６ｈｐｉｏｆＶ．ｍａｌｉ．∗∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ００１ｌｅｖｅｌ．图１㊀瞬时表达ＭｄＳＤＲ抑制Ｖ．ｍａｌｉ的侵染Ｆｉｇ．１㊀ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆＶ．ｍａｌｉ２ ２㊀脂肪酸合成相关关键基因的表达水平检测为了探究ＭｄＳＤＲ对植物脂肪酸合成的影响，对脂０６１２㊀１１期苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究肪酸合成通路关键酶编码基因的表达水平进行了检测㊂与对照相比，瞬时过表达ＭｄＳＤＲ苹果叶片中脂肪酸从头合成通路中的相关基因全部显著上调表达，其中ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ和ＭｄＥＮＲ上调幅度较大，ＭｄＡＣＣａｓｅ上调４８ ４１倍，ＭｄＫＡＲ上调１２９ ７９倍，ＭｄＥＮＲ上调１６８ ２０倍㊂ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡ和ＭｄＨＡＤ均呈现出上调表达的趋势，其中ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ和ＭｄＫＡＳⅡ均上调约５倍，ＭｄＨＡＤ上调８ ６７倍（图２）㊂上述结果表明，ＭｄＳＤＲ蛋白参与调控脂肪酸的生物合成㊂注：∗∗∗表示在Ｐ＜０ ００１水平差异显著；∗∗∗∗表示在Ｐ＜０ ０００１水平差异显著㊂Ｎｏｔｅ：∗∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ００１ｌｅｖｅｌ．∗∗∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ０００１ｌｅｖｅｌ．图２㊀ＭｄＳＤＲ㊁ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ㊁ＭｄＥＮＲ㊁ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡ和ＭｄＨＡＤ相对表达量Ｆｉｇ．２㊀ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ㊁ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ㊁ＭｄＥＮＲ㊁ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡａｎｄＭｄＨＡＤ２ ３㊀苹果叶片脂肪酸含量测定为了探究过表达ＭｄＳＤＲ对植物叶片中脂肪酸积累水平的影响，对苹果叶片中的脂肪酸含量进行了测定㊂通过对试验组与对照组数据进行差异显著性分析，发现过表达ＭｄＳＤＲ的苹果叶片中各种脂肪酸含量未发生显著变化（Ｐ＞０ ０５）（图３）㊂２ ４㊀脂滴合成关键基因的表达水平检测为了验证上述推测，过表达ＭｄＳＤＲ后检测了调控脂滴形成的关键基因ＭｄＳＥＩＰＩＮ的表达水平变化㊂结果显示，瞬时表达ＭｄＳＤＲ后，苹果叶片中ＭｄＳＥＩＰＩＮ基因的表达水平显著提高（图４－Ａ）（Ｐ＜０ ０５），表明瞬时表达ＭｄＳＤＲ促进了脂滴的生物合成㊂ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示，在瞬时表达ＭｄＳＤＲ基因的苹果组培苗叶片中检测到ＭｄＳＤＲ蛋白（图４－Ｂ），表明通过农杆菌介导瞬时表达技术，ＭｄＳＤＲ蛋白在苹果组培苗叶片中成功表达㊂２ ５㊀苹果叶片中脂滴的染色观察本研究采用尼罗红染色［３０］观察瞬时表达ＭｄＳＤＲ图３㊀脂肪酸相对含量Ｆｉｇ．３㊀Ｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄ的苹果叶片样品，结果显示，瞬时表达ＭｄＳＤＲ后的苹果叶片出现大量的点状绿色荧光（图５－Ａ），而在对照中并未发现有大量的点状绿色荧光（图５－Ｂ）㊂本试验过表达的ＭｄＳＤＲ蛋白上融合有ＧＦＰ标签，因此为了排除ＧＦＰ荧光给试验带来的干扰，单独表达了ＭｄＳＤＲ⁃ＧＦＰ１６１２核㊀农㊀学㊀报３６卷注：Ａ：ＭｄＳＥＩＰＩＮ相对表达水平；Ｂ：ＭｄＳＤＲ蛋白表达检测㊂∗表示在Ｐ＜０ ０５水平差异显著㊂Ｎｏｔｅ：Ａ：ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＥＩＰＩＮ．Ｂ：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｏｆＭｄＳＤＲ．∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ０５ｌｅｖｅｌ．图４㊀ＭｄＳＥＩＰＩＮ相对表达量与ＭｄＳＤＲ蛋白表达检测Ｆｉｇ．４㊀ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＥＩＰＩＮａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ注：脂滴被尼罗红染色后激发出的荧光呈点分布㊂Ａ：瞬时表达ＭｄＳＤＲ⁃ＧＦＰ后用尼罗红染色的苹果叶片；Ｂ：瞬时表达ＧＦＰ后用尼罗红染色的苹果叶片；Ｃ：瞬时表达ＭｄＳＤＲ⁃ＧＦＰ后未染色的苹㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀果叶片；Ｄ：瞬时表达ＧＦＰ后未染色的苹果叶片㊂Ｎｏｔｅ：ＴｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｅｘｃｉｔｅｄｂｙｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＮｉｌｅｒｅｄｓｈｏｗｓａｄｏｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．Ａ：ＡｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＮｉｌｅＲｅｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ－ＧＦＰ．Ｂ：ＡｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＮｉｌｅＲｅｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＦＰ．Ｃ：ＵｎｓｔａｉｎｅｄａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ－ＧＦＰ．Ｄ：Ｕｎｓｔａｉｎｅｄａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓ㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＦＰ．图５㊀ＭｄＳＤＲ瞬时表达增加苹果叶片中脂滴数量Ｆｉｇ．５㊀ＭｄＳＤＲｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｓｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＬＤｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓ和ＧＦＰ，观察并未发现点状绿色荧光（图５－Ｃ㊁Ｄ）㊂综上所述，瞬时表达ＭｄＳＤＲ促进了脂滴的形成㊂３㊀讨论短链脱氢／还原酶不仅可以参与调控植物初级代谢，如脂肪酸生物合成㊁叶绿素生物合成或降解，还可以参与调控植物的次级代谢，如萜类㊁类固醇㊁酚类和生物碱的生物合成［３１］㊂在脂肪酸生物合成的过程中，乙酰ＣｏＡ的羧化反应是脂肪酸合成通路的限速步骤，故乙酰ＣｏＡ羧化酶（ａｃｅｔｙｌＣｏＡｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ＡＣＣａｓｅ）活性控制着脂肪酸的合成速度；在脂肪酸链延伸阶段中，β－酮脂酰⁃ＡＣＰ合酶（β－ｋｅｔｏａｃｙｌ⁃ＡＣＰｓｙｎｔｈａｓｅⅡ，ＫＡＳ）能催化第一步的缩合反应；同时，β－酮脂酰⁃ＡＣＰ还原酶（β⁃ｋｅｔｏａｃｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＫＡＲ）和烯脂酰⁃ＡＣＰ还原酶（ｅｎｏｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＥＮＲ）负责催化其中两步还原反应，即在还原型辅酶ＩＩＮＡＤＰＨ的协助下，ＫＡＲ催化β－酮丁酰基的β－位羰基还原为羟基，ＥＮＲ催化ә２－烯丁酰基的α－双键还原为单键；而β－羟脂酰－ＡＣＰ脱水酶（β⁃ｈｙｄｒｄｏｘｙａｃｙｌ⁃ＡＣＰｄｅｈｙｄｒａｓｅ，ＨＡＤ）则负责催化β－羟丁酰基α㊁β－碳原子间的脱水反应［３２］㊂本研究发现瞬时过表达ＭｄＳＤＲ后，苹果中乙酰ＣｏＡ羧化酶（ＭｄＡＣＣａｓｅ）基因㊁β－酮脂酰－ＡＣＰ合酶（ＭｄＫＡＳ）基因㊁β－酮脂酰－ＡＣＰ还原酶（ＭｄＫＡＲ）基因㊁烯脂酰－ＡＣＰ还原酶（ＭｄＥＮＲ）基因的表达水平显著上调（图２）㊂上述结果表明，ＭｄＳＤＲ能参与调控植物脂肪酸的生物合成过程，这与本实验室前期预测的结果［２６］一致㊂已有研究表明脂肪酸能参与调控植物的免疫反应［１，２１］㊂例如茄子中棕榈油酸的积累提高了植物对白粉病菌的抗病性［３３］；番茄中棕榈油酸的积累增加了植物对黄萎病菌的抗病性［３４］；亚油酸和亚麻酸的积累会显著提升鳄梨对炭疽病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）和番茄对丁香假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ）的抗病性［３５－３６］；根际微生物诱导植物对灰霉病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）的抗病性同样与植物中亚油酸和亚麻酸积累水平密切相关［３７］㊂本研究发现，过表达ＭｄＳＤＲ能够提高苹果对腐烂病菌的抗性（图１），然而苹果叶片中脂肪酸含量无显著变化（图３）（Ｐ＞０ ０５）㊂因此推测ＭｄＳＤＲ参与调控脂肪酸的生物合成，但并未通过增加脂肪酸含量来提高苹果抗性㊂脂肪酸作为初级代谢产物，是生物体内多种中性脂质生物合成的前体㊂然而过高水平的脂肪酸会对细胞造成损伤［３８］㊂因此生物体会通过多种途径将脂肪酸转化成中性脂质，例如脂肪酸能够通过多步反应，最终在ＳＥＩＰＩＮ蛋白调控下形成了成熟的脂滴［２８，３０］，保２６１２㊀１１期苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究持了细胞内的脂肪酸水平的稳态［２２，３９］㊂脂滴是由富含膜蛋白的单层磷脂分子层包裹中性脂类物质组成的细胞器［４０］㊂脂滴一般存在于种子等植物的营养储存器官中，为植物提供能量和参与植物生长发育调控㊂叶片等光合组织中脂滴的数量通常远小于种子和花，但叶片脂滴能参与调控植物的非生物和生物胁迫响应［２３，３９］㊂例如，脂滴相关蛋白（ＬＤ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＤＡＰ）能调控植物脂滴的产生㊂对拟南芥ｌｄａｐ１／ｌｄａｐ３双敲除突变体的研究发现，突变体植物比野生型更容易受到干旱胁迫的影响［４１］㊂而过表达ｌｄａｐ基因的拟南芥显著提高了对干旱胁迫的抗性，这说明脂滴参与调控植物的干旱胁迫响应；另外两种脂滴表面的双加氧酶（ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ）和ｃａｌｅｏｓｉｎ能将α－亚麻酸转化为氧化脂类（ｏｘｙｌｉｐｉｎ）植保素，从而作为一种信号分子触发植物的超敏反应（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＨＲ）［２１，２５］㊂这些研究均表明脂滴参与植物的非生物和生物胁迫响应㊂本研究发现过表达ＭｄＳＤＲ促进了脂滴的产生（图４㊁５），同时也提高了苹果对病原菌的抗性（图１）㊂因此推测ＭｄＳＤＲ蛋白通过调控脂肪酸的生物合成间接提高了脂滴的积累水平，从而提高了苹果对腐烂病菌的抗性，但脂滴提高苹果抗病性的具体调控机制还有待进一步研究㊂４ 结论本研究利用农杆菌介导的瞬时转化体系在苹果组培苗中过表达ＭｄＳＤＲ，检测到苹果叶片中脂滴数量增加，并且对Ｖ．ｍａｌｉ的抗性显著提高㊂初步证明ＭｄＳＤＲ可以通过促进脂肪酸的生物合成，间接提高叶片脂滴的水平，从而增加植物的抗病性㊂该研究为理解植物抵抗病原胁迫的途径提供了新思路㊂参考文献：［１］㊀ＹｕＳＨ，ＳｕｎＱＧ，ＷｕＪＸ，ＺｈａｏＰＣ，ＳｕｎＹＭ，ＧｕｏＺＦ．Ｇｅｎｏｍｅ⁃ｗｉｄｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＳＤＲ）ｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｉｎＭｅｄｉｃａｇｏｔｒｕｎｃａｔｕｌａ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０２１，２２（１７）：９４９８［２］㊀ＫａｌｌｂｅｒｇＹ，ＯｐｐｅｒｍａｎｎＵ，ＪöｒｎｖａｌｌＨ，ＰｅｒｓｓｏｎＢ．Ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ（ＳＤＲｓ）［Ｊ］．ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，２６９（１８）：４４０９－４４１７［３］㊀ＭｏＸＨ，ＺｈａｎｇＨ，ＤｕＦＹ，ＹａｎｇＳ．Ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＮｃｍＤｉｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｔｈｅＣ－１０ｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｎｏｃａｍｙｃｉｎＦｉｎｎｏｃａｍｙｃｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０２０，１１：６１０８２７［４］㊀ＫａｖａｎａｇｈＫＬ，ＪｏｒｎｖａｌｌＨ，ＰｅｒｓｓｏｎＢ，ＯｐｐｅｒｍａｎｎＵ．ＴｈｅＳＤＲｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙｗｉｔｈｉｎａｆａｍｉｌｙｏｆｍｅｔａｂｏｌｉｃａｎｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｎｚｙｍｅｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌｕｌａｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，２００８，６５（２４）：３８９５－３９０６［５］㊀ＳｔｏｃｋｉｎｇｅｒＰ，ＲｏｔｈＳ，ＭüｌｌｅｒＭ，ＰｌｅｉｓｓＪ．Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｉｍｉｎｅ⁃ｒｅｄｕｃｉｎｇｅｎｚｙｍｅｓ：Ｃｏｍｍｏｎｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓｉｎｉｍｉｎｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ，β－ｈｙｄｒｏｘｙａｃｉｄｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ，ａｎｄｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ［Ｊ］．ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ，２０２０，２１（１８）：２６８９－２６９５［６］㊀ＦｅｒｒｅｒＪＬ，ＡｕｓｔｉｎＭＢ，ＳｔｅｗａｒｔＣＪｒ，ＮｏｅｌＪＰ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｅｎｚｙｍｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，４６（３）：３５６－３７０［７］㊀ＹｕＪ，ＳｕｎＨ，ＺｈａｎｇＪＪ，ＨｏｕＹＹ，ＺｈａｎｇＴＪ，ＫａｎｇＪＭ，ＷａｎｇＺ，ＹａｎｇＱＣ，ＬｏｎｇＲＣ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｌｄｏ⁃ｋｅｔｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅｆａｍｉｌｙａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏｓａｌｔ，ｄｒｏｕｇｈｔ，ａｎｄａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｓｔｒｅｓｓｅｓｉｎＭｅｄｉｃａｇｏｔｒｕｎｃａｔｕｌａ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０２０，２１（３）：７５４［８］㊀ＣｈｏｉＨＷ，ＬｅｅＢＧ，ＫｉｍＮＨ，ＰａｒｋＹ，ＬｉｍＣＷ，ＳｏｎｇＨＫ，ＨｗａｎｇＢＫ．Ａｒｏｌｅｆｏｒａｍｅｎｔｈｏｎｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔｍｉｃｒｏｂｉａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１４８（１）：３８３－４０１［９］㊀ＧａｂｒｕｋＭ，Ｍｙｓｌｉｗａ⁃ＫｕｒｄｚｉｅｌＢ．Ｔｈｅｏｒｉｇｉｎ，ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｉｓｏｆｏｒｍｓｏｆｌｉｇｈｔ⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｄｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＬＰＯＲ）：Ｆｏｃｕｓｏｎａｎｇｉｏｓｐｅｒｍｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ，２０２０，４７７（１２）：２２２１－２２３６［１０］㊀ＶｅｄａｌａｎｋａｒＰ，ＴｒｉｐａｔｈｙＢＣ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇｈｔ⁃ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｄｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｍａ，２０１９，２５６（２）：２９３－３１２［１１］㊀Ｏ ＨａｒａＰ，ＳｌａｂａｓＡＲ，ＦａｗｃｅｔｔＴ．Ｆａｔｔｙａｃｉｄａｎｄｌｉｐｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｇｅｎｅｓａｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｔｃｏｎｓｔａｎｔｍｏｌａｒｒａｔｉｏｓｂｕｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｂｓｏｌｕｔｅｌｅｖｅｌｓｄｕｒｉｎｇｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００２，１２９（１）：３１０－３２０［１２］㊀ＯｈｌｒｏｇｇｅＪＢ，ＪａｗｏｒｓｋｉＪＧ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９９７，４８：１０９－１３６［１３］㊀ＢｅｉｓｓｏｎＦ，ＬｉＹ，ＢｏｎａｖｅｎｔｕｒｅＧ，ＰｏｌｌａｒｄＭ，ＯｈｌｒｏｇｇｅＪＢ．ＴｈｅａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＧＰＡＴ５ｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｕｂｅｒｉｎｉｎｓｅｅｄｃｏａｔａｎｄｒｏｏｔｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２００７，１９（１）：３５１－３６８［１４］㊀ＬｅｅＳＢ，ＳｕｈＭＣ．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｏｆｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ⁃ａｎｃｈｏｒｅｄｌｉｐｉｄｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｅｉｎ１５ａｆｆｅｃｔｓｓｅｅｄｃｏａｔｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０１８，９６（６）：１２０６－１２１７［１５］㊀ＩｖａｎｏｖａＴＶ，ＶｏｒｏｎｋｏｖＡＳ，ＫｕｚｎｅｔｓｏｖａＥＩ，ＫｕｍａｃｈｏｖａＴＫ，ＺｈｉｒｏｖＶＫ，ＴｓｙｄｅｎｄａｍｂａｅｖＶＤ．ＬｉｐｉｄｆａｔｔｙａｃｉｄｆｒｏｍｔｈｅｐｅｒｉｃａｒｐＣｙｄｏｎｉａｏｂｌｏｎｇａＭｉｌｌ．ａｎｄＭｅｓｐｉｌｕｓｇｅｒｍａｎｉｃａＬ．ｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｌａｎｔａｄａｐｔａｔｉｏｎｔｏａｌｔｉｔｕｄｉｎａｌｚｏｎａｌｉｔｙ［Ｊ］．ＤｏｋｌａｄｙＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，２０１９，４８６（１）：２２９－２３３［１６］㊀ＲａｂｅｒｔＣ，ＩｎｏｓｔｒｏｚａＫ，ＢｒａｖｏＳ，ＳｅｐúｌｖｅｄａＮ，ＢｒａｖｏＬＡ．Ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙｓｔｕｄｙｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｐｒｏｆｉｌｅｉｎｔｗｏｆｉｌｍｙｆｅｒｎｓｗｉｔｈｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎｔｏｌｅｒａｎｃｅｒｅｖｅａｌｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｖｅｒｙｌｏｎｇｃｈａｉｎｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｏｍｅｇａ－３ｆａｔｔｙａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｓ（Ｂａｓｅｌ），２０２０，９（１１）：１４３１［１７］㊀ＩｂａＫ．Ａｃｃｌｉｍａｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔｒｅｓｓｉｎｈｉｇｈｅｒｐｌａｎｔｓ：Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓｏｆｇｅｎｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｆｏｒｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．３６１２核㊀农㊀学㊀报３６卷ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２００２，５３：２２５－２４５［１８］㊀Ｂｌ ｅＥ．Ｉｍｐａｃｔｏｆｐｈｙｔｏ⁃ｏｘｙｌｉｐｉｎｓｉｎｐｌａｎｔｄｅｆｅｎｓｅ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００２，７（７）：３１５－３２２［１９］㊀ＣｈｒｉｓｔｉｅＷＷ，ＨａｒｗｏｏｄＪＬ．Ｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓｔｏｐｒｏｄｕｃｅｌｉｐｉｄｍｅｄｉａｔｏｒｓ［Ｊ］．ＥｓｓａｙｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０２０，６４（３）：４０１－４２１［２０］㊀ＫａｃｈｒｏｏＰ，ＳｈａｎｋｌｉｎＪ，ＳｈａｈＪ，ＷｈｉｔｔｌｅＥＪ，ＫｌｅｓｓｉｇＤＦ．Ａｆａｔｔｙａｃｉｄｄｅｓａｔｕｒａｓｅｍｏｄｕｌａｔｅｓｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｄｅｆｅｎｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，２００１，９８（１６）：９４４８－９４５３［２１］㊀ＣｅｃｃｈｉｎｉＮＭ，ＳｐｅｅｄＤＪ，ＲｏｙｃｈｏｕｄｈｒｙＳ，ＧｒｅｅｎｂｅｒｇＪＴ．ＫｉｎａｓｅｓａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｍｏｔｉｆｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒＡＺＩ１ｐｌａｓｔｉｄｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇｄｕｒｉｎｇｐｌａｎｔｄｅｆｅｎｓｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０２１，１０５（６）：１６１５－１６２９［２２］㊀ＨｕａｎｇＡＨＣ．Ｐｌａｎｔｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓａｎｄｔｈｅｉｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｆｏｒｒａｐｉｄａｄｖａｎｃｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１８，１７６（３）：１８９４－１９１８［２３］㊀ＰｙｃＭ，ＣａｉＹＱ，ＧｒｅｅｒＭＳ，ＹｕｒｃｈｅｎｋｏＯ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ，ＤｙｅｒＪＭ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ．Ｔｕｒｎｉｎｇｏｖｅｒａｎｅｗｌｅａｆｉｎｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｂｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０１７，２２（７）：５９６－６０９［２４］㊀ＬｉａｎｇＴ，ＳｈｉＣ，ＰｅｎｇＹ，ＴａｎＨＪ，ＸｉｎＰＹ，ＹａｎｇＹ，ＷａｎｇＦ，ＬｉＸ，ＣｈｕＪＦ，ＨｕａｎｇＪＲ，ＹｉｎＹＲ，ＬｉｕＨＴ．Ｂｒａｓｓｉｎｏｓｔｅｒｏｉｄ⁃ａｃｔｉｖａｔｅｄＢＲＩ１－ＥＭＳ⁃ＳＵＰＰＲＥＳＳＯＲ１ｉｎｈｉｂｉｔｓｆｌａｖｏｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓｇｒｏｗｔｈａｎｄＵＶ⁃Ｂｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０２０，３２（１０）：３２２４－３２３９［２５］㊀ＳｈｉｍａｄａＴＬ，Ｈａｒａ⁃ＮｉｓｈｉｍｕｒａＩ．Ｌｅａｆｏｉｌｂｏｄｉｅｓａｒｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｆａｃｔｏｒｉｅｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｎｔｉｆｕｎｇａｌｏｘｙｌｉｐｉｎｓ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１５，２５：１４５－１５０［２６］㊀龚婉，吕路琼，王维东，黄丽丽．富士苹果ＳＤＲｓ家族基因ＭｄＳＤＲ的克隆及序列分析［Ｊ］．分子植物育种，２０２０，１８（１４）：４５９７－４６０４［２７］㊀ＷａｎｇＷＤ，ＮｉｅＪＪ，ＬｖＬＱ，ＧｏｎｇＷ，ＷａｎｇＳＬ，ＹａｎｇＭＭ，ＸｕＬＳ，ＬｉＭＪ，ＤｕＨＸ，ＨｕａｎｇＬＬ．ＡＶａｌｓａｍａｌｉｅｆｆｅｃｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ１ｔａｒｇｅｔｓａｐｐｌｅ（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ⁃ｒｅｌａｔｅｄ１０ｐｒｏｔｅｉｎｔｏｐｒｏｍｏｔｅｖｉｒｕｌｅｎｃｅ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０２１，１２：７４１３４２［２８］㊀ＧｒｅｅｒＭＳ，ＣａｉＹ，ＧｉｄｄａＳＫ，ＥｓｎａｙＮ，ＫｒｅｔｚｓｃｈｍａｒＦＫ，ＳｅａｙＤ，ＭｃＣｌｉｎｃｈｉｅＥ，ＩｓｃｈｅｂｅｃｋＴ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ，ＤｙｅｒＪＭ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ．ＳＥＩＰＩＮｉｓｏｆｏｒｍｓｉｎｔｅｒａｃｔｗｉｔｈｔｈｅｍｅｍｂｒａｎｅ⁃ｔｅｔｈｅｒｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎＶＡＰ２７－１ｆｏｒｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０２０，３２（９）：２９３２－２９５０［２９］㊀ＹｉｎＺＹ，ＫｅＸＷ，ＫａｎｇＺＳ，ＨｕａｎｇＬＬ．ＡｐｐｌｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｇａｉｎｓｔＶａｌｓａｍａｌｉｒｅｖｅａｌｅｄｂｙｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓａｎａｌｙｓｅｓ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２０１６，９３：８５－９２［３０］㊀ＣａｉＹ，ＧｏｏｄｍａｎＪＭ，ＰｙｃＭ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ，ＤｙｅｒＪＭ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ．ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓＳＥＩＰＩＮｐｒｏｔｅｉｎｓｍｏｄｕｌａｔｅｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０１５，２７（９）：２６１６－２６３６［３１］㊀ＴｏｎｆａｃｋＬＢ，ＭｏｕｍｍｏｕＨ，Ｌａｔｃｈ Ａ，ＹｏｕｍｂｉＥ，ＢｅｎｉｃｈｏｕＭ，ＰｅｃｈＪＣ，ＶａｎＤｅｒＲｅｓｔＢ．ＴｈｅｐｌａｎｔＳＤＲｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｉｎｐｒｉｍａｒｙａｎｄｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１１，１２：４１－５３［３２］㊀郭蔼光．基础生物化学第２版［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００９［３３］㊀ＷａｎｇＣ，ＣｈｉｎＣＫ，ＣｈｅｎＡ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｙｅａｓｔｄｅｌｔａ－９ｄｅｓａｔｕｒａｓｅｇｅｎｅｉｎｔｏｍａｔｏｅｎｈａｎｃｅｓｉｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９８，５２（６）：３７１－３８３［３４］㊀ＸｉｎｇＪＳ，ＣｈｉｎＣＫ．ＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎｅｇｇｐｌａｎｔａｆｆｅｃｔｓｉｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２０００，５６（５）：２１７－２２５［３５］㊀ＭａｄｉＬ，ＷａｎｇＸＪ，ＫｏｂｉｌｅｒＡ，ＬｉｃｈｔｅｒＡ，ＰｒｕｓｋｙＤ．Ｓｔｒｅｓｓｏｎａｖｏｃａｄｏｆｒｕｉｔｓｒｅｇｕｌａｔｅｓә９－ｓｔｅａｒｏｙｌＡＣＰｄｅｓａｔｕｒａｓｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｆａｔｔｙａｃｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ａｎｔｉｆｕｎｇａｌｄｉｅｎｅｌｅｖｅｌａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＣｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓａｔｔａｃｋ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２００３，６２（５）：２７７－２８３［３６］㊀ＹａｅｎｏＴ，ＭａｔｓｕｄａＯ，ＩｂａＫ．Ｒｏｌｅｏｆｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｔｒｉｅｎｏｉｃｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎｐｌａｎｔｄｉｓｅａｓｅｄｅｆｅｎｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２００４，４０（６）：９３１－９４１［３７］㊀ＯｎｇｅｎａＭ，ＤｕｂｙＦ，ＲｏｓｓｉｇｎｏｌＦ，ＦａｕｃｏｎｎｉｅｒＭＬ，ＤｏｍｍｅｓＪ，ＴｈｏｎａｒｔＰ．ＳｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅｐａｔｈｗａｙｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｙｓｔｅｍｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｕｃｅｄｉｎｂｅａｎｂｙａｎｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｔｒａｉｎ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔ⁃ＭｉｃｒｏｂｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２００４，１７（９）：１００９－１０１８［３８］㊀ＫｕｎｚＨＨ，ＳｃｈａｒｎｅｗｓｋｉＭ，ＦｅｕｓｓｎｅｒＫ，ＦｅｕｓｓｎｅｒＩ，ＦｌｕｇｇｅＵＩ，ＦｕｌｄａＭ，ＧｉｅｒｔｈＭ．ＴｈｅＡＢＣｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒＰＸＡ１ａｎｄｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌｂｅｔａ⁃ｏｘｉｄａｔｉｏｎａｒｅｖｉｔａｌｆｏｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｍａｔｕｒｅｌｅａｖｅｓｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｄｕｒｉｎｇｅｘｔｅｎｄｅｄｄａｒｋｎｅｓｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２００９，２１（９）：２７３３－２７４９［３９］㊀ＩｓｃｈｅｂｅｃｋＴ，ＫｒａｗｃｚｙｋＨＥ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ，ＤｙｅｒＪＭ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ．Ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｉｎｐｌａｎｔｓａｎｄａｌｇａｅ：Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｔｕｒｎｏｖｅｒａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＳｅｍｉｎａｒｓｉｎＣｅｌｌａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ，２０２０，１０８：８２－９３［４０］㊀ＯｎａｌＧ，ＫｕｔｌｕＯ，ＧｏｚｕａｃｉｋＤ，ＤｏｋｍｅｃｉＥｍｒｅＳ．Ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＬｉｐｉｄｓｉｎＨｅａｌｔｈａｎｄＤｉｓｅａｓｅ，２０１７，１６（１）：１２８［４１］㊀ＧｉｄｄａＳＫ，ＰａｒｋＳ，ＰｙｃＭ，ＹｕｒｃｈｅｎｋｏＯ，ＣａｉＹ，ＷｕＰ，ＡｎｄｒｅｗｓＤＷ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ，ＤｙｅｒＪＭ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ．Ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＬＤＡＰｓ）ａｒｅｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｔｒａｌｌｉｐｉｄｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１６，１７０（４）：２０５２－２０７１４６１２ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ５６１２２０２２，３６（１１）：２１５８ ２１６５ＦｕｎｃｔｉｏｎＥｘｐｌｏｒａｔｉｏｎｏｆＡｐｐｌｅＳｈｏｒｔ⁃ＣｈａｉｎＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ＲｅｄｕｃｔａｓｅｉｎＲｅｓｐｏｎｓｅｔｏＶａｌｓａｍａｌｉＷＡＮＧＳｈｕａｉｌｅ㊀ＸＩＡＯＫｅｙｕ㊀ＷＡＮＧＷｅｉｄｏｎｇ㊀ＨＵＡＮＧＬｉｌｉ∗（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐＳｔｒｅｓｓＢｉｏｌｏｇｙｆｏｒＡｒｉｄＡｒｅａｓ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ㊀７１２１００）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＳＤＲ）ｉｓａｋｉｎｄｏｆＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ｗｈｉｃｈｉｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｃａｔａｌｙｚｉｎｇｔｈｅｒｅｄｏｘｓｔｅｐｓｏｆｖａｒｉｏｕｓｍｅｔａｂｏｌｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｏｒｇａｎｉｓｍｓ．ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ，ｔｈｅＭｄＳＤＲｇｅｎｅｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＭａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａｃｖ．Ｆｕｊｉｂｙａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｐｒｉｃｋｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）．ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗｅｒｅａｎａｌｙｓｅｄｂｙＧａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＧＣ）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．ＴｈｅｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗｅｒｅｓｔａｉｎｅｄｂｙｎｉｌｅｒｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＶａｌｓａｍａｌｉ．Ｔｈｅｌｅｓｉｏｎｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｄｅｃｒｅａｓｅｄｂｙａｂｏｕｔ１４ ４６％ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０ ００１）．ＴｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ⁃ｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０ ００１）．ＴｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌｏｆＭｄＡＣＣａｓｅｗａｓｕｐ⁃ｒｅｇｕｌａｔｅｄ４９ ４１ｔｉｍｅｓ，ＭｄＫＡＲｗａｓ１３０ ７９ｔｉｍｅｓ，ＭｄＥＮＲｗａｓ１６９ ２０ｔｉｍｅｓ，ＭｄＨＡＤｗａｓ９ ６７ｔｉｍｅｓ，ａｎｄＭｄβＣＴ，ＭｄＫＡＳⅠａｎｄＭｄＫＡＳⅡｗｅｒｅａｂｏｕｔ６ｔｉｍｅｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｄｉｄｎｏｔｉｎｃｒｅａｓｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌｏｆｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｇｅｎｅｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ⁃ｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜０ ０５）．ＴｈｅｑｕａｎｔｉｔｙｏｆｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲ．Ｉｎｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｐｒｏｖｅｄｔｈａｔＭｄＳＤＲｉｎｄｉｒｅｃｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｑｕａｎｔｉｔｙｏｆｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｂｙｐｒｏｍｏｔｉｎｇｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆａｐｐｌｅ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｐｒｏｖｉｄｅｓａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆａｐｐｌｅｂｒｅｅｄｉｎｇｆｏｒｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＳＤＲ），ｆａｔｔｙａｃｉｄ，ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓ，ｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ。
实验二 食物抗坏血酸含量的测定
标定溶液
O HO HO H HO
C Cl C O C C C H
O Cl
O O O
C Cl C O C C C H
OH Cl
+
N H HO OH
+
N
H
CH 2 OH
CH 2 OH
OH
还原型维生素C
2 ,6 - 二 氯 酚 靛 酚
氧化脱氢维生素C
2 ,6 - 二 氯 二 对 酚 胺
滴定样品
【实验仪器与试剂】
【操作步骤】
(1) 标定抗坏血酸标准溶液：吸取抗坏血酸溶液 (20μ g/m1)5.0m1于锥形瓶中，加入6%碘化钾溶 液0.5m1，1%淀粉溶液3滴，再以0.000lmol/L碘 酸钾标准溶液滴定，终点为蓝色。
抗坏血酸标准溶液浓度 ( mg / ml )＝ V 1 0 . 0528 V2
V1－滴定时所消耗0.001mol/L碘酸钾溶液的体积(ml) V2－所取抗坏血酸溶液的体积(ml当于抗坏血酸 0.0528mg
1 . 0 ml 2 , 6 二氯酚靛酚相当于抗坏
2. 样品测定
(1) 取样品100g剪碎后置捣碎机中，按
1:1(w/v)加入2%草酸制成匀浆。
(2) 称取匀浆10g于小烧杯中，倒入50m1具塞
量筒中，用1%草酸溶液冲洗烧杯，稀释至刻度， 振摇。如有泡沫影响定容可加数滴戊醇。
2. 样品测定
(3) 将振摇后上层清液约20m1倒入100m1锥形 瓶中，加白陶士一勺，振摇数次，使充分脱色， 静置。同时，取一锥形瓶，加入1%草酸20m1， 加白陶士一勺，振摇数次作为空白。
(4) 取静置后上清液过滤，吸取滤液5.0m1， 以标定的2,6-二氯酚靛酚溶液滴定，至溶液呈 淡红色，l5s内不变化，记录染料的用量。
抗坏血酸与植物抗氧化性的关系
抗坏血酸与植物抗氧化性的关系第19卷2009钲第1期3月信阳农业高等专科学校JournalofXinyangAgriculturalCollegeV o1.19No.1Mar.20o9抗坏血酸与植物抗氧化性的关系耶兴元,何晖,仝胜利(信阳农业高等专科学校园艺林学系,河南信阳464OOO)摘要:抗坏血酸是植物体内一种重要的抗氧化剂.介绍了抗坏m酸的生理功能和在植物抗氧化过程中的作用以及在生产实践中的应用.关键词:抗坏血酸;生理功能;抗氧化中图分类号:Q945文献标识码:A文章编号:1008-4916(2009)01-0123-02 TherelationshipbetweenascorbicacidandplantantioxidantYEXing—yuan,HEHui,TongSheng—li(Dept.ofHorticultureandForestry,XinyangAgriculturalCollege,Xinyang464OOO,Chin a)Abstract:Ascorbicacidisanimportantantioxidantinplant.Thetheoryintroducedthephysiol ogicalfunctionsandart—tioxidanteffectsofascorbicacidinplant.andalso801TI~applicationsinpracticewasdiscuss ed.Keywords:ASA;physiologicalfunction;antioxidant1抗坏血酸的生理功能ASA作为自由基消除剂,可以作为初级抗氧化物直接清除单线态氧,超氧化物和羟自由基¨]. ASA也可以作为叶黄索循环中的紫黄质去环化酶的辅助因子,在保护光合机构及光合调节过程中起重要作用;ASA还可以作为次级抗氧化物直接参与生育酚的再生,并且还参与减数分裂和细胞扩增的调节,病原菌防御及金属和生物异源物质的消除.ASA与活性氧反应后形成单脱氢抗坏血酸和脱氢抗坏血酸,脱氢抗坏血酸可分解为酒石酸和草酰乙酸;而单脱氢抗坏血酸还原酶又可利用NADPH或谷胱甘肽的还原力将单脱氢抗坏血酸和脱氢抗坏血酸还原为抗坏血酸,从而形成抗坏血酸谷胱甘肽循环, 循环消除活性氧j.2抗坏血酸在植物的抗氧化过程中的作用2.1抗坏血酸与多酚氧化酶的关系果品在加工时极易发生褐变,影响其经济价值.而果品中的多酚氧化酶(PPO)是引起褐变的主要因素之一.PPO能催化各种酚类物质氧化成醌,然后再聚合成黑色素,并随时间的延长而逐渐变黑.所以对PPO活性的抑制在果品加工中显得至关重要.实践证明,抗坏血酸对PPO活性有很好的抑制作用.吴士云等研究认为,PPO活力在1.0～1.5%的抗坏血酸溶液中显着降低,1.0%抗坏血酸在pH3或pH4的条件下,能显着降低PPO的活力,在50—6O℃范围内15min能显着降低酶褐变.程建军等".研究发现,亚硫酸氢钠,抗坏血酸,柠檬酸对苹果中多酚氧化酶的抑制作用依次减弱.NaHSO,在微酸条件下产生二氧化硫,有效地抑制PPO的活性.但由于亚硫酸盐及其分解产生的二氧化硫对人体健康有害,使用上受到限制.抗坏血酸对PPO活性有明显的抑制作用,机理可能是将醌还原成酚或其自身被氧化,消耗了氧,抑制了酶促褐变的发生.抗坏血酸也是水果中的成份,因此在食品业中可以广泛地应用.2.2抗坏血酸与膜透性和丙二醛的关系丙二醛(MDA)是膜质过氧化的产物,其含量的多少代表了植物细胞受伤害的程度,表示了膜透性的大小.罗建平等研究发现,分离沙打旺悬浮细胞原生质体时,当酶液不含ASA时,MDA含量比分离前增加1.8倍;当在酶液中加入ASA时,MDA含量只比分离前增加约0.8倍.将分离的原生质体分别收稿日期:2008?11-06作者简介:耶兴元(1976.),男,陕西长安人,讲师,硕士,主要从事植物抗逆性研究.?123?第19卷第1期信阳农业高等专科学校2009年3月培养在添加和不添加ASA的培养基中进行培养,测有抗氧化性等优势,在食品加:I:业上得到广泛应用.定48h后培养物中的MDA含量,结果表明添加ASA如在果品加工过程中,果品极易发生褐变,主要是多的原生质体培养物MDA是培养前的1.4倍,而未添酚氧化酶引起的,由于抗坏血酸能抑制PPO的活性,加ASA的原生质体培养物MDA为培养前的2.9倍.对防止褐变有很好的效果I1引.把ASA加入早餐中,张兰等人用ASA处理蚕豆,ASA处理明显抑制了可以促进儿童对铁的吸收,可以预防和治疗儿童铁缺MDA含量的上升,从而延缓蚕豆的衰老进程,起到了乏,这在植物对铁的利用上也是可以借鉴的.保鲜的效果.因此,ASA对膜质过氧化具有抑制作4结语用,降低脂质过氧化产物MDA的含量,稳定细胞膜一～的结构,延缓细胞衰老,对细胞起到了保护作用.抗坏血酸是人体必须营养元素,它可以提高人体2.3抗坏血酸与植物抗氧化系统的关系的免疫力,增强人体抵抗能力,这可能与抗坏血酸是原生质体酶解过程中诱导了膜损伤的发生,损伤一种人体抗氧化剂有关,它可以消除人体内多余的活的原因与自由基和活性氧在酶解过程中的产生有性氧和自由基,使人体细胞保持健康状态.人们正是关.在酶解过程中,植物细胞自身存在原生质体利了它的这种能力,把它应用在植物的抗逆性研究膜受损的防御机制:细胞内超氧化物歧化酶(SOD),中,并且在实践中也得到了应用.在理论上应深入地抗坏血酸,过氧化物酶(APX),过氧化氢酶(CAT)活研究抗坏血酸的生理功能以及和其它物质的互作作性被激活,可以消除细胞内的活性氧和自由基,使细用,为在生产上更好应用建立理论基础,在生产实践胞内的氧化还原系统维持在一个平衡状态,对细胞起上应开发出经济有效的抗氧化新产品,为食品工业和到保护作用.农业生产服务.花生原生质体酶解过程中,向酶液中添加ASA后,MDA含量明显下降,SOD活性明显上升.AsA本参考文献:妻也熹冀璺磐茎堡I1]主:A.S,J,麦抗旱性生理效应研究植物护..因此,眸过程中添加AsA有利于原生质体的[2]菜:].食品工业科技,2o02,23(2):89_ 培养和再生.向酶液和培养基中加入抗氧化剂90.ASA,增加了原生质中抗氧化酶的活性,可以提高原[3]程建军,马莺杨,咏丽,等.苹果中多酚氧化酶酶学特性的研究生质体的活力,使原生质体培养得到了明显的改善.[J]?园艺,2002,29(3):261-262?罗建簟.究证二力.可地提嚣嘉.蒜篥嚣嚣豸活力SOD活性尤其是APX的活性,清除o'及H202,减[5]军:兰:.'酸对生质体分离轻膜脂氧化,增强沙打旺原生质体抗过氧化的能力.和培养中膜损伤及相关酶活性的影响[J].植物生理,原生质体分离时,酶液中加入ASA,SOD活性是分离1999,25(4):343-349.前的2.3倍,高于不加AsA的处理.原生质体培养[6]张兰,郑永华,苏新国,等.抗坏血酸处理对蚕豆保鲜的效果ft,~,KM8…DJ~.萼!A,壤生培毒.48..要宴曩墨幼苗脂质过氧化的SOD活性比培养前升高1.8倍.用ASA处理的原～晶.宁莩学(草,…2000,…23(…5)56=5.生质体APX活性是未处理原生质体的1.8倍.[8]何若天,张玲.甘蔗和烟草叶原生质体分离期间的膜损伤及3抗坏血酸在生产实践中的应用[9]羹嚣损伤…作黎黧妻.产:7-效10果.泛的应用.贵州省贵阳市花溪茂业植物速丰剂厂,生uJ～…～产出一种6%抗坏血酸水剂,经实践证明,此种物质[11]黄荣茂.抗病丰(6%抗坏血酸水剂)x~4,麦增产效果研究不污染环境,无残留,对人畜安全,并能调节机体生理[J].贵州大学(自然科学版),2002,19(3):56-60.机能,激活细胞内抗氧化酶活性,增强机体的免疫能[12]周国兰晓霞,张智广,等?茂丰(6%抗坏血酸水剂)在茶树,枣皂妻:霄曼堡:羔攀翟麓罢程中的抗氧稻,小麦,茶等多种作物上得到应用,其果明显,增;公共卫星;…)83-8—7.……产10～30%,达到优质高产的目的¨...褐变是导[14]黄建韶,张洪,田宏现.苹果切片褐变研究.食品与机械,致蚕豆品质下降和限制贮藏期的重要因素,用0.1%2001(3):56-57.抗坏血酸处理蚕豆可以使蚕豆的新鲜度保持3周引.[15]刘璐'介评,严玉仙-审校早餐中加入抗坏血酸或…Na2EDTA媳12~铁的吸收学藏,可以防止植物油氧化酸败现象¨.在食品工业一,'一"E,由于抗坏血酸无毒,无污染,对人体有益无害目.具?l24?。
脱氢抗坏血酸在重铬酸钾对A549细胞毒性效应中的作用
脱氢抗坏血酸在重铬酸钾对A549细胞毒性效应中的作用画宝勇;马丽华;李时恩【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(048)001【总页数】2页(P136-137)【关键词】重铬酸钾;脱氢抗坏血酸;细胞增殖抑制;A549细胞系【作者】画宝勇;马丽华;李时恩【作者单位】郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室,郑州,450001【正文语种】中文铬在自然界中分布广泛，六价铬[Cr(Ⅵ)]已被证实具有致癌性，其所致的肺癌是8种职业性肿瘤之一。
有研究[1-3]表明，活体细胞内90%的抗坏血酸(ascorbic acid，Asc)参与Cr(Ⅵ)的还原代谢，且是Cr(Ⅵ)的主要还原剂。
机体肺细胞内Asc 的平均水平为1.3 mmol/L[4]，但在体外细胞培养中含量却非常低[5-6]，脱氢抗坏血酸(dehydroascorbic acid，DHA)孵育可以使细胞内氧化形成Asc，使其达到或接近机体正常生理浓度[7]。
Reynolds等[8]发现DHA孵育H460和IMR90细胞90 min后，再用Cr(Ⅵ)染毒细胞，细胞的急性毒性增强。
作者用DHA孵育A549细胞后，观察重铬酸钾(K2Cr2O7)对A549细胞的增殖及毒性作用，探讨DHA在K2Cr2O7致A549细胞损伤中的作用。
1 材料与方法1.1 实验材料、主要试剂人胚肺A549细胞购于武汉大学中国典型培养物保藏中心。
K2Cr2O7 (天津化工厂)，DMEM/F12(美国Gibco公司)，优级胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，DHA、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)(美国Sigma公司)，Sunrise Remote 酶标仪(奥地利TECAN公司)。
1.2 DHA对K2Cr2O7刺激的A549细胞增殖的影响用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养液复苏A549细胞，培养传2代后用于实验。
当A549细胞铺瓶底达80%～90%时，用2.5 g/L的胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，调整密度为4.0 ×104 mL-1，以每孔200 μL接种于96孔板，接种6板。
保护性酶
保护性酶保护酶系：1. 过氧化物酶POD2. 超氧化物歧化酶SOD3. 苯丙氨酸解氨酶PAL4. 过氧化氢酶CA T5. 多酚氧化酶PPO6. 丙二醛（MDA）含量、游离脯氨酸含量、7. 谷胱甘肽还原酶(GR8. 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)9. 抗坏血酸(ASA)过氧化物酶（APX）Ascorbic acid peroxidase活性氧酶促保护系统主要包括：1 超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase ，SOD)、2. 过氧化氢酶（Catalase,CAT）3.抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate Peroxidase，AP)、4 脱氢抗坏血酸还原酶Dehydroascorbate Reductase，DR)5. 单脱氢抗坏血酸还原酶(Monodehydroascorbate Reductase，MR)6 谷胱甘肽还原酶(Glutathione Reductase，GR)7.非特异性过氧化物酶(non—specific peroxidase，POD)等。
张家口农专学报, 2002年6月,第l8卷第2期自由基清除酶一抗坏血酸自由基还原酶抗坏血酸过氧化物酶（APX）亚硒酸钠对小麦幼苗中谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶活性以及谷胱甘肽含量的影响--《植物生理学通讯》2004年02期谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）测试盒说明书一、测定意义谷胱甘肽过氧化物酶是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。
它特异的催化还原型谷胱甘肽对过氧化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。
谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心是硒半光氨酸，硒是GSH-PX的必需部分，每克分子酶含4克原子硒。
测定GSH-PX的活力可以作为衡量机体硒水平的一项生化指标。
测定原理谷胱甘肽过氧化物酶可以促进过氧化氢与还原型谷胱甘肽反应生成H2O及氧化型谷胱甘肽，谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力。
实验二 食物抗坏血酸含量的测定
【操作步骤】
(1) 标定抗坏血酸标准溶液：吸取抗坏血酸溶液 (20μ g/m1)5.0m1于锥形瓶中，加入6%碘化钾溶 液0.5m1，1%淀粉溶液3滴，再以0.000lmol/L碘 酸钾标准溶液滴定，终点为蓝色。
抗坏血酸标准溶液浓度 ( mg / ml )＝ V 1 0 . 0528 V2
V1－滴定时所消耗0.001mol/L碘酸钾溶液的体积(ml) V2－所取抗坏血酸溶液的体积(ml) 0.0528－0.0001mol/L的碘酸钾1.0ml相当于抗坏血酸 0.0528mg
【实验计算】
(V 1 V 0 ) T W
还原型抗坏血酸含量
( mg / 100 g )＝
100
式中：
V0－空白实验消耗的染料体积(m1)
V1－滴定样品消耗的染料体积(ml)
T－单位体积的染料相当于抗坏血酸的质量(mg/ml) W－滴定时所用样品的质量(g)
注意事项
实验二 食品中抗坏血酸含量测定
食物中抗坏血酸有还原型和脱氢型两种 形式，两者可通过氧化还原互变，均具 有生物活性，合称为总抗坏血酸。
通常抗坏血酸在酸性条件下以还原型存 在，易氧化成脱氢型抗坏血酸。
一、还原型抗坏血酸的测定 （2,6-二氯酚靛酚滴定法）
目的： 新鲜食物中的抗坏血酸主要以还原型形式存 在，测定还原型抗坏血酸可粗略了解该食品中抗 坏血酸的浓度。 通过本实验的学习，使学生掌握还原型抗坏 血酸的测定原理及其测定方法。
(2)标定2,6-二氯酚靛酚溶液：
取已标定的抗坏血酸溶液5.0m1，1%草酸溶液 5.0m1于锥形瓶中，摇匀，用欲标定的2,6-二氯酚 靛酚溶液滴定至呈淡红色，15s不褪色为止。
植物脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)研究进展
植物脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)研究进展
侯艳霞;张文鑫;杨婧;李小艳;郭艳
【期刊名称】《农业技术与装备》
【年(卷),期】2017(000)002
【摘要】脱氢抗坏血酸还原酶是AsA-GSH循环中能够促进抗坏血酸再生的关键酶.文章从植物脱氢抗坏血酸还原酶的发现、功能及分子生物学等方面的研究进展作一综述,以期为该酶的深入研究及其合理利用提供参考.
【总页数】3页(P28-29,32)
【作者】侯艳霞;张文鑫;杨婧;李小艳;郭艳
【作者单位】山西林业职业技术学院园艺系,山西太原030009;山西林业职业技术学院园艺系,山西太原030009;山西林业职业技术学院园艺系,山西太原030009;山西林业职业技术学院园艺系,山西太原030009;山西林业职业技术学院园艺系,山西太原030009
【正文语种】中文
【中图分类】Q943
【相关文献】
1.苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因cDNA片段的克隆及序列分析 [J], 张燕子;马锋旺;张军科;梁东
2.猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶和脱氢抗坏血酸还原酶cDNA片段的克隆与序列分析 [J], 牛歆雨;雷玉山;梁东;马锋旺;王西锐
3.棉花单脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆及原核表达 [J], 钱雯婕;王斐;石峰;葛娟;
李鸿彬
4.玉米脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆和特性研究 [J], 袁进成;马海莲;宋晋辉;宋小青;刘颖慧
5.哈密瓜脱氢抗坏血酸还原酶基因的鉴定及冷胁迫表达分析 [J], 宋文;张琴;宁明;周发科;杨新泉;单春会;唐凤仙
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实验二 食物抗坏血酸含量的测定
【实验计算】
(V 1 V 0 ) T W
还原型抗坏血酸含量
( mg / 100 g )＝
100
式中：
V0－空白实验消耗的染料体积(m1)
V1－滴定样品消耗的染料体积(ml)
T－单位体积的染料相当于抗坏血酸的质量(mg/ml) W－滴定时所用样品的质量(g)
注意事项
1.仪器：组织捣碎机、5.0ml微量滴定管、 100m1容量瓶、50m1具塞量筒。 2.试剂 (1) 1%草酸溶液、2%草酸溶液、白陶土。 (2) 0.01mol/L碘酸钾标准储备液： (3) 0.0001mol/L碘酸钾标准应用液： (4) 1%淀粉溶液： (5) 6%碘化钾溶液： (6) 抗坏血酸溶液： (7) 碳酸氢钠溶液： (8) 2,6-二氯酚靛酚溶液：
(2)标定2,6-二氯酚靛酚溶液：
Байду номын сангаас
取已标定的抗坏血酸溶液5.0m1，1%草酸溶液 5.0m1于锥形瓶中，摇匀，用欲标定的2,6-二氯酚 靛酚溶液滴定至呈淡红色，15s不褪色为止。
血酸的 mg 数＝ C V1 V2
C－抗坏血酸溶液的浓度(mg/ml) V1－抗坏血酸溶液的体积(ml) V2－滴定时消耗的2,6-二氯酚靛酚的体积(ml)
实验二 食品中抗坏血酸含量测定
食物中抗坏血酸有还原型和脱氢型两种 形式，两者可通过氧化还原互变，均具 有生物活性，合称为总抗坏血酸。
通常抗坏血酸在酸性条件下以还原型存 在，易氧化成脱氢型抗坏血酸。
一、还原型抗坏血酸的测定 （2,6-二氯酚靛酚滴定法）
目的： 新鲜食物中的抗坏血酸主要以还原型形式存 在，测定还原型抗坏血酸可粗略了解该食品中抗 坏血酸的浓度。 通过本实验的学习，使学生掌握还原型抗坏 血酸的测定原理及其测定方法。
柑桔汁中脱氢抗坏血酸的还原与抗血酸的测定
柑桔汁中脱氢抗坏血酸的还原与抗血酸的测定MasayoshiSawamura;陈金栋
【期刊名称】《福建热作科技》
【年(卷),期】1992(000)003
【摘要】本文综述了柑桔类果汁中L－脱氢抗坏血酸用12克／升的氢硫化钠溶液进行处理，在35℃下经20分钟后使其转化成L－抗坏血酸（维生素C）已获得了成功，接着用一种简便的液相色谱技术来分析测定柑桔汗中的抗坏血酸含量。
【总页数】3页(P75-77)
【作者】MasayoshiSawamura;陈金栋
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】TS255.44
【相关文献】
1.猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶和脱氢抗坏血酸还原酶cDNA片段的克隆与序列分析 [J], 牛歆雨;雷玉山;梁东;马锋旺;王西锐
2.电位滴定法测定桔汁饮品中抗坏血酸含量研究初报 [J], 陈忠明
3.《橙、柑、桔汁及其饮料中果汁含量的测定》国家标准概况 [J], 徐清渠
4.高效液相色谱法同时测定水果蔬菜中L-抗坏血酸、D-异抗坏血酸、脱氢抗坏血酸及总维生素C的含量 [J], 杨媛;冯晓元;石磊;杨军军;张莹莹;张开春
5.柑桔汁中脱氢抗坏血酸的还原与抗血酸的测定 [J], Sawam.,M;陈金栋
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实验二 食物抗坏血酸含量的测定
1 . 0 ml 2 , 6 二氯酚靛酚相当于抗坏
2. 样品测定
(1) 取样品100g剪碎后置捣碎机中，按
1:1(w/v)加入2%草酸制成匀浆。
(2) 称取匀浆10g于小烧杯中，倒入50m1具塞
量筒中，用1%草酸溶液冲洗烧杯，稀释至刻度， 振摇。如有泡沫影响定容可加数滴戊醇。
2. 样品测定
标定溶液
O HO HO H HO
C Cl C O C C C H
O Cl
O O O
C Cl C O C C C H
OH Cl
+
N H HO OH
+
N
H
CH 2 OH
CH 2 OH
OH
还原型维生素C
2 ,6 - 二 氯 酚 靛 酚
氧化脱氢维生素C
2 ,6 - 二 氯 二 对 酚 胺
滴定样品
【实验仪器与试剂】
【实验计算】
(V 1 V 0 ) T W
还原型抗坏血酸含量
( mg / 100 g )＝
100
式中：
V0－空白实验消耗的染料体积(m1)
V1－滴定样品消耗的染料体积(ml)
T－单位体积的染料相当于抗坏血酸的质量(mg/ml) W－滴定时所用样品的质量(g)
注意事项
【操作步骤】
(1) 标定抗坏血酸标准溶液：吸取抗坏血酸溶液 (20μ g/m1)5.0m1于锥形瓶中，加入6%碘化钾溶 液0.5m1，1%淀粉溶液3滴，再以0.000lmol/L碘 酸钾标准溶液滴定，终点为蓝色。
抗坏血酸标准溶液浓度 ( mg / ml )＝ V 1 0 . 0528 V2
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货号：QS1306 规格：50管/48样脱氢抗坏血酸还原酶（dehydroascorbate reductase ，DHAR）
试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
DHAR存在于细胞质、线粒体和叶绿体中。
DHAR催化GSH还原DHA生成AsA和GSSG，调控细胞AsA/DHA比值，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。
提高植物体内的 DHAR 活性，可提高植物食品中AsA含量，进而提高植物食品的营养品质。
测定原理：
DHAR催化GSH还原DHA生成AsA，通过测定DHA减少速率，计算DHAR活性。
自备实验用品及仪器：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体50 mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体35 mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取：
1.按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL
试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g 4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
DHAR测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、100μL试剂三、100μL试剂四和700μL 试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A=A2-A1。
DHAR活性计算公式：
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T
= 92×△A ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克样本每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/g鲜重) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T
第1页，共2页
= 92×△A ÷W
(3). 按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每104个细胞每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
= 92×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升样本每分钟还原生成1nmol AsA 为1个酶活单位。
DHAR(nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V反总×109÷V样÷T
= 92×△A
ε：AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104 L/mol /cm；109：摩尔分子换算成纳摩尔分子；d：比色杯光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，1mL=0.001 L；V样：反应体系中加入上清液体积，100μL =0.1mL；Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：反应时间，2 min。
注意事项：
临用前配制的试剂未使用完的4℃保存，3天内使用完。
第2页，共2页。