食品中还原性抗坏血酸的测定
17.项目3-8.食品中抗坏血酸的测定(新)
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的 算术平均值表示，结果保留三位有效数字
六、结果计算
➢ 标准规定的分析精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值
L（+）-抗坏血酸含量
＞20mg/100g时
不得超过算术平均值的2%
＜20mg/100g时
不得超过算术平均值的5%
六、结果计算
精密度小于2%
食品中维生素的测定
——食品中抗坏血酸的测定
维生素C
抗坏血酸
具有抗氧化性质的有机化合物 是人体必需的营养素之一
抗坏血酸
植物 组织
新鲜 水果
蔬菜
人体长期缺乏抗坏血酸
坏血病
齿龈 红肿
注意多吃水果蔬菜
如何选择抗坏血酸 含量高的水果、蔬菜
抗坏血酸含量 又是如何测定的呢
人类最早发现的富含维生素C的水果 挽救了数以万计的水手的性命
色的？
总量的测定
荧光法 2,6-二氯靛酚滴定法
L（+）-抗坏血酸
具体工作任务分解
任务1：仪器设备及试剂的准备 任务2：样品预处理 任务3：样品VC含量测定 任务4：分析结果数据处理 任务5：填写检验报告单
一、测定原理
➢用蓝色的碱性染料2,6-二氯靛酚标准溶液对含L（+）-抗坏血酸的试样酸性 浸出液进行氧化还原滴定
大于20mg/100g
六、结果计算
L（+）-抗坏血酸含量为 20.7mg/100g
• 1、2，6二氯靛酚/抗坏血酸=1mg/mL的含义是什么？ • 2、样品滤液颜色较深会影响滴定终点的观察，该如何处理？ • 3、本方法测定的是试样中抗坏血酸总量吗？为什么？ • 4、配制好的染料溶液是蓝色的，为什么滴定终点却是粉红
食品营养与卫生选做实验食品中总抗坏血酸测定
选做实验食品中总抗坏血酸测定（荧光法）（一）目的意义食品中的总抗坏血酸包括还原型和脱氢型两种形式。
当食物放置时间较长或经过烹调处理后，其中有相当一部分抗坏血酸转变为脱氢型，脱氢型的抗坏血酸仍有85％左右的维生紊C活性，因此对这类食物常常测定总抗坏血酸。
（二）原理样品中还原性抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢型抗坏血酸。
脱氢型抗坏血酸与邻苯二胺反应生成有荧光的化合物恶喹啉（quinoxaline），其荧光强度与脱氢型抗坏血酸浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中总抗坏血酸量。
（三）仪器与试剂1. 荧光分光光度计或有338nm及340nm波长的荧光计2. 捣碎机3. 100ml容量瓶，锥形瓶，具塞试管。
4. 偏磷酸一乙酸液称取30g偏磷酸（HPO3），溶于80ml冰乙酸中，加500ml 蒸馏水混匀，稀释至1000ml。
于4℃冰箱可保存7～10天。
5. 偏磷酸一乙酸一硫酸液制法同4，只是用0.18mol／L硫酸代替蒸馏水。
6．醋酸钠溶液溶解500g醋酸钠（NaAc·3H2O）于蒸馏水中，稀释至1000ml。
7. 硼酸一醋酸钠溶液溶解3g硼酸于100ml醋酸钠溶液中，临用前配制。
8. 邻苯二胺溶液称取20mg邻苯二胺，于临用前溶解至100ml。
9. 0.04％百里酚蓝指示剂溶液称取0.lg百里酚蓝，加0.02mol／L氢氧化钠溶液在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量大约是10.75ml，研磨溶解后的溶液用水稀释至250ml。
10．活性炭的活化加200g碳粉与lL盐酸浓溶液（1份盐酸＋9份水），加热回流1～2小时，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110～120℃烘箱中干燥，备用。
11．抗坏血酸标准溶液（lmg／ml）精确称取50mg抗坏血酸，用偏磷酸—乙酸液溶解至50ml容量瓶中，稀释至刻度（临用前配）。
12. 抗坏血酸标准应用液（100ug／ml）取10ml抗坏血酸标准液用偏磷酸—乙酸液稀释至100ml。
碘量法测定维生素C
维生素C制剂及果蔬中抗坏血酸含量的直接碘量法测定一、实验目的1. 掌握碘标准溶液的配制和标定方法。
2. 了解直接碘量法测定抗坏血酸的原理和方法。
二、实验原理维生素C（Vc）又称抗坏血酸，分子式为C6H8O6。
Vc具有还原性，可被I2定量氧化，因而可用I2标准溶液直接滴定。
其滴定反应式为：C6H8O6+I2=C6H6O6+2HI。
用直接碘量法可测定药片、注射液、饮料、蔬菜、水果等中的Vc含量。
由于Vc的还原性很强，较易被溶液和空气中的氧氧化，在碱性介质中这种氧化作用更强，因此滴定宜在酸性介质中进行，以减少副反应的发生。
考虑到I-在强酸性溶液中也易被氧化，故一般选在pH=3～4的弱酸性溶液中进行滴定。
三、主要试剂1. I2溶液(约0.05mol·L-1)：称取3.3g I2和5g KI，置于研钵中，加少量水，在通风橱中研磨。
待I2全部溶解后，将溶液转入棕色试剂瓶中，加水稀释至250mL，充分摇匀，放暗处保存。
2. Na2S2O3标准溶液(约0.01mol·L-1)3. 淀粉溶液(0.2%)4. HAc(2mol·L-1)5. 固体Vc样品（维生素C片剂）6. K2Cr2O7标准溶液(约0.020mol·L-1)7. KIO3标准溶液(约0.002mol·L-1)8. 果蔬样品(如西红柿、橙子、草莓等)9. KI溶液(约25%)四、实验步骤1. I2溶液的标定用移液管移取25.00mL Na2S2O3标准溶液于250mL锥形瓶中，加50mL蒸馏水，5mL 0.2%淀粉溶液，然后用I2溶液滴定至溶液呈浅蓝色， 30s内不褪色即为终点。
平行标定三份，计算I2溶液的浓度。
2. 维生素C片剂中Vc含量的测定准确称取约0.2g研碎了的维生素C药片，置于250mL锥形瓶中，加入100mL新煮沸过并冷却的蒸馏水，10mL 2mol·L-1 HAc溶液和5mL 0.2%淀粉溶液，立即用I2标准溶液滴定至出现稳定的浅蓝色，且在30s内不褪色即为终点，记下消耗的I2溶液体积。
维生素C的测定
实验三 食品中维生素C 的测定维生素C 也称抗坏血酸，分有还原性抗坏血酸与脱氢抗坏血酸。
它们在人体中的生理效应大体相等。
因此，表示食品中维生素c 总含量应该是这两种成份的总量。
另外，作为与食品品质相关成份的测定，目的在于评价栽培、收获、流通、加工等各阶段中的品质变化，此时需要分别求出还原性抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的含量与二者之间的比例。
1、还原性抗坏血酸的测定——碘滴定法一、原理还原性维生素C （抗坏血酸）的测定是利用碘和还原性维生素C 反应，根据消耗的碘的量，可以计算出被测物质中还原性维生素C 的含量。
其反应如下：(去氢抗坏血酸)用本方法只能测定还原型维生素C ，不能测定去氢抗坏血酸及结合态抗坏血酸，这是本法的缺点。
二、仪器及原理1．仪器：滴定管、容量瓶2．试剂（1）8%HAc ，自配100mL（2）0.2%淀粉溶液，自配50 mL（3）待标定的标准碘溶液（4）标准硫代硫酸钠溶液三、测定步骤1.样品中维生素C 的提取准备称取20克左右辣椒，分次加入10 mL8%HAc 溶液，边加边研（为增加研磨效果，可在研钵中加入一小勺清洁的砂子）；直至研碎为止。
将提取液用脱脂棉滤入250 mL容量瓶中（尽量不将固形物倒进漏斗），研钵中固形物再加10 mL8%HAc溶液如前法提取，共提取三次。
最后一次将残渣全部移到漏斗中，并用少量醋酸溶液冲洗漏斗、玻棒、研钵，各次提取液和洗液均滤入同一容量瓶中，用8%HAc稀释至刻度，摇匀。
提取液如有颜色妨碍滴定终点观察时，须用吸附剂脱色。
每10 mL溶液中加约5克陶土，于250 mL锥形瓶中摇2分钟，过滤，取清液进行滴定。
对于辣椒样品，若做好过滤操作，滤液应为澄清透明。
2.I2标准溶液的标定吸取硫代硫酸钠（Na2S2O3）标准溶液25.00 mL，置于250 mL锥形瓶中，加入25 mL水、5 mL0.2%淀粉溶液（做指示剂），用待标定的I2溶液滴定至溶液恰呈稳定的兰色，即为终点。
实习四 食品中总抗坏血酸测定
实习四食品中总抗坏血酸测定（荧光法）（一）目的意义食品中的总抗坏血酸包括还原型和脱氢型两种形式。
当食物放置时间较长或经过烹调处理后，其中有相当一部分抗坏血酸转变为脱氢型，脱氢型的抗坏血酸仍有85％左右的维生紊C活性，因此对这类食物常常测定总抗坏血酸。
（二）原理样品中还原性抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢型抗坏血酸。
脱氢型抗坏血酸与邻苯二胺反应生成有荧光的化合物恶喹啉（quinoxaline），其荧光强度与脱氢型抗坏血酸浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中总抗坏血酸量。
（三）仪器与试剂1. 荧光分光光度计或有338nm及340nm波长的荧光计2. 捣碎机3. 100ml容量瓶，锥形瓶，具塞试管。
4. 偏磷酸一乙酸液称取30g偏磷酸（HPO3），溶于80ml冰乙酸中，加500ml 蒸馏水混匀，稀释至1000ml。
于4℃冰箱可保存7～10天。
5. 偏磷酸一乙酸一硫酸液制法同4，只是用0.18mol／L硫酸代替蒸馏水。
6．醋酸钠溶液溶解500g醋酸钠（NaAc·3H2O）于蒸馏水中，稀释至1000ml。
7. 硼酸一醋酸钠溶液溶解3g硼酸于100ml醋酸钠溶液中，临用前配制。
8. 邻苯二胺溶液称取20mg邻苯二胺，于临用前溶解至100ml。
9. 0.04％百里酚蓝指示剂溶液称取0.lg百里酚蓝，加0.02mol／L氢氧化钠溶液在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量大约是10.75ml，研磨溶解后的溶液用水稀释至250ml。
10．活性炭的活化加200g碳粉与lL盐酸浓溶液（1份盐酸＋9份水），加热回流1～2小时，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110～120℃烘箱中干燥，备用。
11．抗坏血酸标准溶液（lmg／ml）精确称取50mg抗坏血酸，用偏磷酸—乙酸液溶解至50ml容量瓶中，稀释至刻度（临用前配）。
12. 抗坏血酸标准应用液（100ug／ml）取10ml抗坏血酸标准液用偏磷酸—乙酸液稀释至100ml。
抗坏血酸的测定方法
抗坏血酸的测定方法抗坏血酸，也称维生素C，是一种重要的水溶性维生素，对人体有着广泛的作用。
为了评估人体中维生素C的水平，需要进行准确可靠的测定方法。
本文将介绍一些常用的抗坏血酸测定方法。
一、滴定法滴定法是一种直接测定抗坏血酸浓度的方法，主要是利用抗坏血酸的还原性质来进行。
常用的滴定试剂是碘溶液，具体测定过程如下：1.取一定量的待测样品，在酸性条件下加入多余的碘溶液，使样品中的所有抗坏血酸完全被氧化为双价抗坏血酸。
2.再滴加淀粉指示剂，使溶液呈现蓝黑色。
3.继续滴加碘溶液，直至溶液由蓝黑色转变为无色为止。
4.记录滴加的碘溶液体积V，根据反应方程式，计算抗坏血酸浓度：C（抗坏血酸）=（V*m/体积）*M。
滴定法的优点是操作简单、快速，但存在一定的局限性，例如碘溶液的浓度需要严格控制，过量的碘会氧化其他还原物质，导致误差增加。
二、间接滴定法间接滴定法是将样品中的抗坏血酸与为之制备的滴定溶液进行滴定反应，例如利用四氢吡喃溶液作为指示剂，通过判断溶液颜色的变化来确定滴定终点。
三、比色法比色法是根据抗坏血酸颜色的变化来测定其浓度的方法。
常用的试剂有二甲基亚胺、二苯基胺等，通常形成有色络合物，并根据络合物的颜色强度来判断抗坏血酸浓度。
具体步骤如下：1.将待测样品加入试剂溶液中，溶液颜色逐渐变化。
2.将溶液转移到量筒或比色皿中，利用分光光度计测量波长范围内的吸光度。
3.根据标准曲线，将吸光度值转化为抗坏血酸浓度。
比色法的优点是操作简单、灵敏度高；缺点是需要制备标准曲线，对试剂的纯度和光度计的校准要求较高。
四、高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种准确且高效的抗坏血酸测定方法，主要是通过色谱柱对样品进行分离，再使用紫外光检测器检测抗坏血酸的浓度。
HPLC法的优点是精确度高，测量范围宽，对样品的处理方法相对简单；缺点是设备和试剂成本较高，操作技术要求较高。
总结：针对抗坏血酸的测定，滴定法、比色法、HPLC等方法是常用的测定方法。
维生素C片中抗坏血酸的测定
维生素C片中抗坏血酸的测定维生素C，也称抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素，具有多种生理功能。
它可以促进铁的吸收和利用，有助于皮肤伤口的愈合、提高人体免疫力，还可以对抗自由基对细胞的损害等等。
由于人体自己无法自行合成维生素C，因此必须通过饮食或补充剂的方式来摄取。
但是，维生素C很容易氧化失去活性，因此在储存过程中需要特别注意。
本文将介绍维生素C片中抗坏血酸的测定方法。
测定原理维生素C是还原型物质，具有还原性，因此可以与氧化剂I2反应，形成色素。
I2在酸性环境下氧化生成I^-，接着I^-离子与维生素C反应成光吸收值较小的I3^-络合物，即维生素C滴定终点。
根据滴定所用的溶液浓度、用量以及生成络合物的光学性质，则可以确定维生素C的含量。
实验药品和设备1.溶液：维生素C浓度为10mg/mL的标准溶液、0.1M硫酸、0.1%淀粉溶液、0.1M碘酸钾溶液、0.1M硫酸铜溶液、0.1M氢氧化钠溶液、0.01M EDTA四钠盐溶液。
2.设备：分析天平、醇灯、10mL锥形瓶、10mL直口瓶、比色皿、可调式电位计、pH 计、定容瓶、移液管等。
实验步骤1.样品准备将维生素C片粉末磨碎，并按照说明书的要求将其溶解在约10mL水中。
磨碎时应避免光照和过度摩擦，以免影响维生素C的稳定性。
溶解后的维生素C片可通过定容转移至10mL锥形瓶内。
2.标准曲线的制备取一定量的维生素C标准溶液，分别置于10mL直口瓶中，通过不同稀释倍数制备不同浓度的标准溶液，计算出维生素C的浓度范围。
然后通过滴定操作得到对应浓度的滴定体积V1。
3.测定未知样品中维生素C的含量将溶解好的维生素C片转移至100mL定容瓶中，配成100mg/L的维生素C溶液。
取0.5mL溶液，加入10mL0.1M硫酸，并进行预滴定加样，加入0.1M碘酸钾溶液，在淀粉试验液的指导下终点处停止滴定至瓶底，记录滴定体积V2。
然后，按照下列公式计算出维生素C的含量：维生素C mg/kg = (V1 - V2) × C ×50 / ns其中，C为0.1M的碘酸钾溶液浓度，ns为加入样品容积，50为维生素C溶液的稀释倍数。
抗坏血酸实验报告抗坏血酸及我们所熟知的维生素C，它是显示...
抗坏血酸实验报告抗坏血酸及我们所熟知的维生素C，它是显示抗坏血酸生物活性的化合物的通称，是一种水溶性维生素，水果和蔬菜中含量丰富，但不同种类的水果蔬菜中所含抗坏血酸的量又有较大差别。
这次的实验内容就是利用抗坏血酸在氧化还原反应中的还原性，测定几种不同的常见水果蔬菜中每百克抗坏血酸含量。
实验步骤及现象记录：1、在试管中加入5mL的淀粉溶液，滴入一滴碘酒。
由于淀粉溶液与碘酒发生显色反应，溶液立刻就变为了深蓝色。
2、在上述溶液中加入几滴橙子汁，摇匀，再次观察溶液颜色。
溶液在混合了橙汁之后变为无色透明。
这是因为橙汁中含有较多抗坏血酸，抗坏血酸还原了淀粉碘溶液中的碘单质使其成为负一价碘离子，显色消失。
3、自选果蔬（我们选择了橙子、白萝卜、猕猴桃和西红柿），并各称取了10g注：称取猕猴桃的天平后来又蹦回了10.0= =4、将称好的四种果蔬立刻切碎并放入研钵中，加入10mL 1mol/L 1%的HCL溶液，研磨至糊状。
5、将研磨好的果蔬汁倒入锥形瓶中，先加入2mL 5%KI溶液和1mL 1mol/L H2SO4溶液，再加入2mL 0.5%淀粉溶液，摇匀。
6、量取10mL c=0.001mol/L的碘酸钾溶液，用地瓜吸取后逐渐加入锥形瓶中，边加边摇，至溶液呈蓝色且15s不退色为止。
由图可见在滴入碘酸钾的瞬间局部被抗坏血酸还原出的碘单质立刻使周围的淀粉溶液呈现蓝色。
以下为四种果蔬汁变色前后的对比图：橙子：白萝卜：猕猴桃：西红柿：7、由元素守恒可算出以上四种果蔬每百克的抗坏血酸含量。
反应过程如下：KIO3+5KI+3H2SO4→3K2SO4+3I2+2H2OI2+抗坏血酸→脱氢抗坏血酸+2I-得出关系式：IO3- ~ 3I2 ~ 3Vc即X(mg/100g)=3*V*c*M*100/m四种果蔬变色所消耗碘酸钾体积分别为橙汁6.7mL；白萝卜2.8mL；猕猴桃8.1mL；西红柿3.8mL由此而知：X橙子=3*6.7*0.001*176*100/10=35.376≈35.4 mg/100gX白萝卜=3*2.8*0.001*176*100/10=14.784≈14.8 mg/100gX猕猴桃=3*8.1*0.001*176*100/10=42.768≈42.8 mg/100gX西红柿=3*3.8*0.001*176*100/10=20.064≈20.1 mg/100g。
食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定
中华人民共和国国家标准G B5009.86 2016食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国前言本标准代替G B/T5009.86 2003‘蔬菜㊁水果及其制品中总抗坏血酸的测定(荧光法和2,4-二硝基苯肼法)“㊁G B/T5009.159 2003‘食品中还原型抗坏血酸的测定“和G B6195 1986‘水果㊁蔬菜维生素C含量测定法(2,6-二氯靛酚滴定法)“㊂本标准与G B/T5009.86 2003相比,主要变化如下:标准名称修改为 食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定 ;扩大了方法的适用范围;增加了高效液相色谱法及相关方法的定量限;删除了2,4-二硝基苯肼法;增加了2,6-二氯靛酚滴定法;按照G B/T20001.4 2015对原标准的结构进行了修改㊂食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定1范围本标准规定了高效液相色谱法㊁荧光法㊁2,6-二氯靛酚滴定法测定食品中抗坏血酸的方法㊂本标准第一法适用于乳粉㊁谷物㊁蔬菜㊁水果及其制品㊁肉制品㊁维生素类补充剂㊁果冻㊁胶基糖果㊁八宝粥㊁葡萄酒中的L(+)-抗坏血酸㊁D(+)-抗坏血酸和L(+)-抗坏血酸总量的测定㊂第二法适用于乳粉㊁蔬菜㊁水果及其制品中L(+)-抗坏血酸总量的测定㊂第三法适用于水果㊁蔬菜及其制品中L(+)-抗坏血酸的测定㊂2术语和定义2.1抗坏血酸:一种具有抗氧化性质的有机化合物㊂又称为 维生素C ,是人体必需的营养素之一㊂2.2 L(+)-抗坏血酸:左式右旋光抗坏血酸㊂具有强还原性,对人体具有生物活性㊂2.3 D(+)-抗坏血酸:又称异抗坏血酸㊂具有强还原性,但对人体基本无生物活性㊂2.4 L(+)-脱氢抗坏血酸:L(+)-抗坏血酸极易被氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸,L(+)-脱氢抗坏血酸亦可被还原为L(+)-抗坏血酸㊂通常称为脱氢抗坏血酸㊂2.5 L(+)-抗坏血酸总量:将试样中L(+)-脱氢抗坏血酸还原成的L(+)-抗坏血酸或将试样中L(+)-抗坏血酸氧化成的L(+)-脱氢抗坏血酸后测得的L(+)-抗坏血酸总量㊂第一法高效液相色谱法3原理试样中的抗坏血酸用偏磷酸溶解超声提取后,以离子对试剂为流动相,经反相色谱柱分离,其中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸直接用配有紫外检测器的液相色谱仪(波长245n m)测定;试样中的L(+)-脱氢抗坏血酸经L-半胱氨酸溶液进行还原后,用紫外检测器(波长245n m)测定L(+)-抗坏血酸总量,或减去原样品中测得的L(+)-抗坏血酸含量而获得L(+)-脱氢抗坏血酸的含量㊂以色谱峰的保留时间定性,外标法定量㊂4试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂4.1试剂4.1.1偏磷酸(H P O3)n:含量(以H P O3计)ȡ38%㊂4.1.2磷酸三钠(N a3P O4㊃12H2O)㊂4.1.3磷酸二氢钾(K H2P O4)㊂4.1.4磷酸(H3P O4):85%㊂4.1.5 L-半胱氨酸(C3H7N O2S):优级纯㊂4.1.6十六烷基三甲基溴化铵(C19H42B r N):色谱纯㊂4.1.7甲醇(C H3O H):色谱纯㊂4.2试剂配制4.2.1偏磷酸溶液(200g/L):称取200g(精确至0.1g)偏磷酸(4.1.1),溶于水并稀释至1L,此溶液保存于4ħ的环境下可保存一个月㊂4.2.2偏磷酸溶液(20g/L):量取50m L200g/L偏磷酸溶液,用水稀释至500m L㊂4.2.3磷酸三钠溶液(100g/L):称取100g(精确至0.1g)磷酸三钠,溶于水并稀释至1L㊂4.2.4 L-半胱氨酸溶液(40g/L):称取4g L-半胱氨酸,溶于水并稀释至100m L㊂临用时配制㊂4.3标准品4.3.1 L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6):纯度ȡ99%㊂4.3.2 D(+)-抗坏血酸(异抗坏血酸)标准品(C6H8O6):纯度ȡ99%㊂4.4标准溶液配制4.4.1 L(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000m g/m L):准确称取L(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01m g),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10m L㊂该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂4.4.2 D(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000m g/m L):准确称取D(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01m g),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10m L㊂该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂4.4.3抗坏血酸混合标准系列工作液:分别吸取L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸标准贮备液0m L, 0.05m L,0.50m L,1.0m L,2.5m L,5.0m L,用20g/L的偏磷酸溶液定容至100m L㊂标准系列工作液中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的浓度分别为0μg/m L㊁0.5μg/m L㊁5.0μg/m L㊁10.0μg/m L㊁25.0μg/m L㊁50.0μg/m L㊂临用时配制㊂5仪器和设备5.1液相色谱仪:配有二极管阵列检测器或紫外检测器㊂5.2p H计:精度为0.01㊂5.3天平:感量为0.1g㊁1m g㊁0.01m g㊂5.4超声波清洗器㊂5.5离心机:转速ȡ4000r/m i n㊂5.6均质机㊂5.7滤膜:0.45μm水相膜㊂5.8振荡器㊂6分析步骤整个检测过程尽可能在避光条件下进行㊂6.1试样制备6.1.1液体或固体粉末样品:混合均匀后,应立即用于检测㊂6.1.2水果㊁蔬菜及其制品或其他固体样品:取100g左右样品加入等质量20g/L的偏磷酸溶液,经均质机均质并混合均匀后,应立即测定㊂6.2试样溶液的制备称取相对于样品约0.5g~2g(精确至0.001g)混合均匀的固体试样或匀浆试样,或吸取2m L~ 10m L液体试样[使所取试样含L(+)-抗坏血酸约0.03m g~6m g]于50m L烧杯中,用20g/L的偏磷酸溶液(4.2.2)将试样转移至50m L容量瓶中,震摇溶解并定容㊂摇匀,全部转移至50m L离心管中,超声提取5m i n后,于4000r/m i n离心5m i n,取上清液过0.45μm水相滤膜,滤液待测[由此试液可同时分别测定试样中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的含量]㊂6.3试样溶液的还原准确吸取20m L上述离心后的上清液于50m L离心管中,加入10m L40g/L的L-半胱氨酸溶液(4.2.4),用100g/L磷酸三钠溶液调节p H至7.0~7.2,以200次/m i n振荡5m i n㊂再用磷酸调节p H 至2.5~2.8,用水将试液全部转移至50m L容量瓶中,并定容至刻度㊂混匀后取此试液过0.45μm水相滤膜后待测[由此试液可测定试样中包括脱氢型的L(+)-抗坏血酸总量]㊂若试样含有增稠剂,可准确吸取4m L经L-半胱氨酸溶液还原的试液,再准确加入1m L甲醇,混匀后过0.45μm滤膜后待测㊂6.4仪器参考条件6.4.1色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或同等性能的色谱柱㊂6.4.2检测器:二极管阵列检测器或紫外检测器㊂6.4.3流动相:A:6.8g磷酸二氢钾和0.91g十六烷基三甲基溴化铵,用水溶解并定容至1L(用磷酸调p H至2.5~2.8);B:100%甲醇㊂按AʒB=98ʒ2混合,过0.45μm滤膜,超声脱气㊂6.4.4流速:0.7m L/m i n㊂6.4.5检测波长:245n m㊂6.4.6柱温:25ħ㊂6.4.7进样量:20μL㊂6.5标准曲线制作分别对抗坏血酸混合标准系列工作溶液进行测定,以L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]标准溶液的质量浓度(μg/m L)为横坐标,L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的峰高或峰面积为纵坐标,绘制标准曲线或计算回归方程㊂L(+)-抗坏血酸㊁D(+)-抗坏血酸标准色谱图参见附录A中图A.1㊂6.6试样溶液的测定对试样溶液进行测定,根据标准曲线得到测定液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的浓度(μg/m L)㊂6.7空白试验空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤㊁试剂和用量,进行平行操作㊂7分析结果的表述试样中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的含量和L(+)-抗坏血酸总量以毫克每百克表示,按式(1)计算:X=(c1-c0)ˑVmˑ1000ˑFˑKˑ100(1)式中:X 试样中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸㊁L(+)-抗坏血酸总量]的含量,单位为毫克每百克(m g/100g);c1 样液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/m L); c0 样品空白液中L(+)-抗坏血酸[或D(+)-抗坏血酸]的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样的最后定容体积,单位为毫升(m L);m 实际检测试样质量,单位克(g);1000 换算系数(由μg/m L换算成m g/m L的换算因子);F 稀释倍数(若使用6.3还原步骤时,即为2.5);K 若使用6.3中甲醇沉淀步骤时,即为1.25;100 换算系数(由m g/g换算成m g/100g的换算因子)㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂9其他固体样品取样量为2g时,L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的检出限均为0.5m g/100g,定量限均为2.0m g/100g㊂液体样品取样量为10g(或10m L)时,L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸的检出限均为0.1m g/100g(或0.1m g/100m L),定量限均为0.4m g/100g(或0.4m g/100m L)㊂第二法荧光法10原理试样中L(+)-抗坏血酸经活性炭氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺(O P D A)反应生成有荧光的喹唔啉(q u i n o x a l i n e),其荧光强度与L(+)-抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定试样中L(+)-抗坏血酸总量㊂注:L(+)-脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与O P D A反应,以此排除试样中荧光杂质产生的干扰㊂11试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的三级水㊂11.1试剂11.1.1偏磷酸(H P O3)n:含量(以H P O3计)ȡ38%㊂11.1.2冰乙酸(C H3C O O H):浓度约为30%㊂11.1.3硫酸(H2S O4):浓度约为98%㊂11.1.4乙酸钠(C H3C O O N a)㊂11.1.5硼酸(H3B O3)㊂11.1.6邻苯二胺(C6H8N2)㊂11.1.7百里酚蓝(C27H30O5S)㊂11.1.8活性炭粉㊂11.2试剂的配制11.2.1偏磷酸-乙酸溶液:称取15g偏磷酸,加入40m L冰乙酸及250m L水,加温,搅拌,使之逐渐溶解,冷却后加水至500m L㊂于4ħ冰箱可保存7d~10d㊂11.2.2硫酸溶液(0.15m o l/L):取8.3m L硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1000m L㊂11.2.3偏磷酸-乙酸-硫酸溶液:称取15g偏磷酸,加入40m L冰乙酸,滴加0.15m o l/L硫酸溶液至溶解,并稀释至500m L㊂11.2.4乙酸钠溶液(500g/L):称取500g乙酸钠,加水至1000m L㊂11.2.5硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,用500g/L乙酸钠溶液溶解并稀释至100m L㊂临用时配制㊂11.2.6邻苯二胺溶液(200m g/L):称取20m g邻苯二胺,用水溶解并稀释至100m L,临用时配制㊂11.2.7酸性活性炭:称取约200g活性炭粉(75μm~177μm),加入1L盐酸(1+9),加热回流1h~2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于110ħ~120ħ烘箱中干燥10h,备用㊂检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应㊂将20g/L亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合,将上述洗出滤液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀㊂11.2.8百里酚蓝指示剂溶液(0.4m g/m L):称取0.1g百里酚蓝,加入0.02m o l/L氢氧化钠溶液约10.75m L,在玻璃研钵中研磨至溶解,用水稀释至250m L㊂(变色范围:p H等于1.2时呈红色;p H等于2.8时呈黄色;p H大于4时呈蓝色)㊂11.3标准品L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6):纯度ȡ99%㊂11.4标准品的配制11.4.1 L(+)-抗坏血酸标准溶液(1.000m g/m L):称取L(+)-抗坏血酸0.05g(精确至0.01m g),用偏磷酸-乙酸溶液溶解并稀释至50m L,该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂11.4.2 L(+)-抗坏血酸标准工作液(100.0μg/m L):准确吸取L(+)-抗坏血酸标准液10m L,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100m L,临用时配制㊂12仪器和设备荧光分光光度计:具有激发波长338n m及发射波长420n m㊂配有1c m比色皿㊂13分析步骤整个检测过程应在避光条件下进行㊂13.1试液的制备称取约100g(精确至0.1g)试样,加100g偏磷酸-乙酸溶液,倒入捣碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂测试匀浆的酸碱度㊂如呈红色,即称取适量匀浆用偏磷酸-乙酸溶液稀释;若呈黄色或蓝色,则称取适量匀浆用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释,使其p H 为1.2㊂匀浆的取用量根据试样中抗坏血酸的含量而定㊂当试样液中抗坏血酸含量在40μg /m L ~100μg/m L 之间,一般称取20g (精确至0.01g )匀浆,用相应溶液稀释至100m L ,过滤,滤液备用㊂13.2 测定13.2.1 氧化处理:分别准确吸取50m L 试样滤液及抗坏血酸标准工作液于200m L 具塞锥形瓶中,加入2g 活性炭,用力振摇1m i n ,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即为试样氧化液和标准氧化液,待测定㊂13.2.2 分别准确吸取10m L 试样氧化液于两个100m L 容量瓶中,作为 试样液 和 试样空白液 ㊂13.2.3 分别准确吸取10m L 标准氧化液于两个100m L 容量瓶中,作为 标准液 和 标准空白液 ㊂13.2.4 于 试样空白液 和 标准空白液 中各加5m L 硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15m i n,用水稀释至100m L ,在4ħ冰箱中放置2h ~3h ,取出待测㊂13.2.5 于 试样液 和 标准液 中各加5m L 的500g /L 乙酸钠溶液,用水稀释至100m L ,待测㊂13.3 标准曲线的制备准确吸取上述 标准液 [L (+)-抗坏血酸含量10μg/m L ]0.5m L ,1.0m L ,1.5m L ,2.0m L ,分别置于10m L 具塞刻度试管中,用水补充至2.0m L ㊂另准确吸取 标准空白液 2m L 于10m L 带盖刻度试管中㊂在暗室迅速向各管中加入5m L 邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35m i n ,于激发波长338n m ㊁发射波长420n m 处测定荧光强度㊂以 标准液 系列荧光强度分别减去 标准空白液 荧光强度的差值为纵坐标,对应的L (+)-抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或计算直线回归方程㊂13.4 试样测定分别准确吸取2m L 试样液 和 试样空白液 于10m L 具塞刻度试管中,在暗室迅速向各管中加入5m L 邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35m i n ,于激发波长338n m ㊁发射波长420n m 处测定荧光强度㊂以 试样液 荧光强度减去 试样空白液 的荧光强度的差值于标准曲线上查得或回归方程计算测定试样溶液中L (+)-抗坏血酸总量㊂14 结果计算试样中L (+)-抗坏血酸总量,结果以毫克每百克表示,按式(2)计算:X =c ˑV m ˑF ˑ1001000(2)式中:X 试样中L (+)-抗坏血酸的总量,单位为毫克每百克(m g/100g );c由标准曲线查得或回归方程计算的进样液中L (+)-抗坏血酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg /m L );V 荧光反应所用试样体积,单位为毫升(m L );m 实际检测试样质量,单位克(g );F试样溶液的稀释倍数;100换算系数;1000换算系数㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂15精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂16其他当样品取样量为10g时,L(+)-抗坏血酸总量的检出限为0.044m g/100g,定量限为0.7m g/ 100g㊂第三法2,6-二氯靛酚滴定法17原理用蓝色的碱性染料2,6-二氯靛酚标准溶液对含L(+)-抗坏血酸的试样酸性浸出液进行氧化还原滴定,2,6-二氯靛酚被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的2,6-二氯靛酚在酸性介质中显浅红色,由2,6-二氯靛酚的消耗量计算样品中L(+)-抗坏血酸的含量㊂18试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的三级水㊂18.1试剂18.1.1偏磷酸(H P O3)n:含量(以H P O3计)ȡ38%㊂18.1.2草酸(C2H2O4)㊂18.1.3碳酸氢钠(N a H C O3)㊂18.1.42,6-二氯靛酚(2,6-二氯靛酚钠盐,C12H6C l2N N a O2)㊂18.1.5白陶土(或高岭土):对抗坏血酸无吸附性㊂18.2试剂的配制18.2.1偏磷酸溶液(20g/L):称取20g偏磷酸,用水溶解并定容至1L㊂18.2.2草酸溶液(20g/L):称取20g草酸,用水溶解并定容至1L㊂18.2.32,6-二氯靛酚(2,6-二氯靛酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52m g溶解在200m L热蒸馏水中,然后称取2,6-二氯靛酚50m g溶解在上述碳酸氢钠溶液中㊂冷却并用水定容至250m L,过滤至棕色瓶内,于4ħ~8ħ环境中保存㊂每次使用前,用标准抗坏血酸溶液标定其滴定度㊂标定方法:准确吸取1m L抗坏血酸标准溶液于50m L锥形瓶中,加入10m L偏磷酸溶液或草酸溶液,摇匀,用2,6-二氯靛酚溶液滴定至粉红色,保持15s不褪色为止㊂同时另取10m L偏磷酸溶液或草酸溶液做空白试验㊂2,6-二氯靛酚溶液的滴定度按式(3)计算:T=cˑVV1-V0 (3)式中:T 2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,即每毫升2,6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数,单位为毫克每毫升(m g/m L);c 抗坏血酸标准溶液的质量浓度,单位为毫克每毫升(m g/m L );V 吸取抗坏血酸标准溶液的体积,单位为毫升(m L );V 1 滴定抗坏血酸标准溶液所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L );V 0 滴定空白所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L )㊂18.3 标准品L (+)-抗坏血酸标准品(C 6H 8O 6):纯度ȡ99%㊂18.4 标准溶液的配制L (+)-抗坏血酸标准溶液(1.000m g /m L ):称取100m g (精确至0.1m g)L (+)-抗坏血酸标准品,溶于偏磷酸溶液或草酸溶液并定容至100m L ㊂该贮备液在2ħ~8ħ避光条件下可保存一周㊂19 测定整个检测过程应在避光条件下进行㊂19.1 试液制备:称取具有代表性样品的可食部分100g ,放入粉碎机中,加入100g 偏磷酸溶液或草酸溶液,迅速捣成匀浆㊂准确称取10g ~40g 匀浆样品(精确至0.01g )于烧杯中,用偏磷酸溶液或草酸溶液将样品转移至100m L 容量瓶,并稀释至刻度,摇匀后过滤㊂若滤液有颜色,可按每克样品加0.4g 白陶土脱色后再过滤㊂19.2 滴定:准确吸取10m L 滤液于50m L 锥形瓶中,用标定过的2,6-二氯靛酚溶液滴定,直至溶液呈粉红色15s 不褪色为止㊂同时做空白试验㊂20 结果计算试样中L (+)-抗坏血酸含量按式(4)计算:X =(V -V 0)ˑT ˑAmˑ100 (4)式中:X 试样中L (+)-抗坏血酸含量,单位为毫克每百克(m g/100g );V 滴定试样所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L );V 0 滴定空白所消耗2,6-二氯靛酚溶液的体积,单位为毫升(m L );T 2,6-二氯靛酚溶液的滴定度,即每毫升2,6-二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数(m g/m L ); A 稀释倍数;m 试样质量,单位为克(g)㊂计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字㊂21 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值,在L (+)-抗坏血酸含量大于20m g/100g 时不得超过算术平均值的2%㊂在L (+)-抗坏血酸含量小于或等于20m g /100g 时不得超过算术平均值的5%㊂G B 5009.86 20169 附 录 AL (+)-抗坏血酸㊁D (+)-抗坏血酸标准色谱图 第一法L (+)-抗坏血酸㊁D (+)-抗坏血酸标准色谱图见图A.1㊂图A .1 L (+)-抗坏血酸㊁D (+)-抗坏血酸标准色谱图。
食物中还原型维生素C的测定----2, 6-二氯酚靛酚滴定法
三、实验步骤
样品前处理
1. 2. 3. 4.
蔬菜摘、洗、沥干； 小棵整体取样，大棵对称均分取样； 切条、片、块等状； 白萝卜 若样品颜色较深用白陶土脱色
生样 100g
2%草酸 100g 捣碎，匀浆 分别称5g 1% 草酸定容至50ml 过滤取上清 熟样沥干称重 2%草酸 等量
白 萝 卜
生样 100g 加入煮沸的水中 煮5min
标准维生素C 溶液 标定: 2, 6-二氯酚靛 酚染料
标定: 标准维生素C 溶液
3、用标定后的2, 6-二氯酚靛酚染料滴 定样品，测得其还原型维生素C的浓度
（1）操作
2, 6-二氯酚靛酚染液（0.2mg/ml）
无色变为淡红色
15s内不褪色
滴定
匀浆后的样品（5ml） 空白组为草酸（5ml，1%）
（2）样品中原型维生素C浓度
GB 6195—86 水果、蔬菜维生素C含 量测定法 (2,6－二氯酚靛酚滴定法) 本标准适用于果品、蔬菜及其加工制 品中还原型抗坏血酸的测定（不含二 价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、 亚硫酸盐或硫代硫酸盐），不适用于
深色样品。
总结
• 优点：
简便快速，不需特殊仪器和试剂
• 缺点
• 非Vit C的专一反应，其它还原性物质对测定也有干扰。
举例含量丰富的食物。
蔬菜：辣椒、油菜、卷心菜、 菜花、芥菜； 水果：猕猴桃、酸枣、柑橘、 柠檬、柚子、草莓、沙棘。
结构与性质
抗坏血酸/维生素C
分子式：C6H8O6 相对分子质量：176 结构：
六个碳原子的α-酮基内酯 酸性多羟化合物
手性C 旋光性
CH OH 2 6 H C5 OH O
4 3 2 1
配制保存试剂时应注意的事项
果蔬中抗坏血酸含量的测定[1]
![果蔬中抗坏血酸含量的测定[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/6c398128453610661ed9f427.png)
果蔬中抗坏血酸含量的测定摘要：分别采用２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定果蔬中抗坏血酸的含量，通过对比研究，优选出测定果蔬中抗坏血酸含量的方法为分光光度法。
关键词：抗坏血酸；果蔬；测定方法抗坏血酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ aｃｉｄ，ａａ）也称ｖｃ，是维持人体健康的一种重要物质。
人体所需的ｖｃ大多数由水果、蔬菜及食品供给［１］。
人体长期缺乏抗坏血酸会得坏血病、关节疼痛、牙龈出血、发炎、感染、身体骨骼易损伤且不易愈合等疾病，而过量摄入ｖｃ不仅不能抵御疾病，而且还可能缩短寿命［２－４］。
这是因为ｖｃ能够破坏ｄｎａ自由基，这种破坏会导致早衰和癌症。
因此，对果蔬中抗坏血酸含量的定量分析具有重要的意义。
ｖｃ含量的测定方法很多。
一般有２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法、紫外分光光度法、库仑分析法、原子分光光度法和碘量法等［５－１０］。
本研究采用２，６－二氯靛酚钠法、高锰酸钾滴定法和紫外分光光度法测定果蔬中抗坏血酸的含量，然后通过对比分析，确定测定果蔬中抗坏血酸含量的最优方法。
１材料与方法１．１仪器与试剂紫外分光光度计（美国安捷伦）；岛津分析天平（日本岛津）；ｓｈｂ－循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；微量移液器（上海安亨微量进样器厂）。
２．０％（ｗ／ｖ，下同）偏磷酸溶液；标准抗坏血酸；０．０２ｍｏｌ／ｌｅｄｔａ溶液；高锰酸钾；２，６－二氯靛酚钠。
以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
１．２样品的处理选取新鲜的西红柿和黄瓜洗净、擦干，称取约１００ｇ至研钵中，捣碎，加入１００ｍｌ２．０％偏磷酸浸提剂，迅速捣成匀浆，用纱布过滤至烧杯中，然后抽滤。
取滤液转移至１０００ｍｌ容量瓶中，用浸提剂定容，备用。
１．３样品的检测１．３．１紫分光光度法校准曲线的绘制：配制一系列抗坏血酸标准溶液，浓度分别为１．００、２．００、４．００、６．００、８．００、１０．００μｇ／ｍｌ。
以２％偏磷酸为参比，在波长２４３ｎｍ处用石英皿测定标准系列抗坏血酸溶液的吸光度。
食物中还原型抗坏血酸的测定实验报告
食物中还原型抗坏血酸的测定一、实验目的1.了解食物中抗坏血酸测定的意义2.掌握食物中抗坏血酸测定的基本原理和方法.二.实验原理抗坏血酸在新鲜的食物中主要以还原型的形式存在，故可以利用它的强还原性还原染料2，6一=氯酚靛酚而测定。
用标准碘酸钾溶液标定抗坏血酸溶液，然后以标定的抗坏血酸溶液标定2，6一=氯酚靛酚染料溶液，再用此染料滴定样品中的抗坏血酸。
2，6—=氯酚靛酚在酸性溶液中呈红色，被还原后红色褪去.当被测溶液中过量1滴染料时又呈现红色，即为滴定终点。
在无杂质干扰时，被测溶液还原染料的量与其中所含抗坏血酸的浓度成正比还原型抗坏血酸+染料（红色）→脱氢型抗坏血酸+染料（无色）三、试剂1.1％、2％草酸溶液，白陶土，2.6—=氯酚靛酚溶液四.仪器烧杯，组织捣碎机、漏斗、滤纸、锥形烧瓶、微量滴定管、容量瓶、吸管五.操作步骤.1.样品洗净风干后，取适量均匀样品（100g）稍加切碎后，迅速加入等量2％草酸溶液.2.放入组织捣碎机中打成匀浆3.称取10g匀浆于小烧杯中，小心地以1％草酸将样品洗入100ml量简中，稀释至刻度摇匀。
4.如取出部分溶液于50ml具塞量筒中，振摇数次，沉静置沉淀5.取中层液过滤，吸取滤液10ml，以标定过的2，6一=氯酚靛酚溶液滴定至溶液呈现淡红色，在15s内不退色为止6.用蒸馏水作空白滴定，如果料太浓，应适当稀释六.计算抗坏血酸（mg/100g）={（V1-V2）XT}/wx100W=100/(100+100)x(10/50)x10=1抗坏血酸={（1.88+132）/2-0.15）×T}/1x100=14.28 mg/100g V1:样品滴定时所用的染料毫升数.V2:空白滴定时所用的染料毫升数T:ImL染料所能氧化抗坏血酸的mg数W:滴定时所用样品稀释液中含样品克数七.注意事项.1.操作过程要迅速，因还原性抗坏血酸易被氧化.2.生食物的匀浆在容量瓶内振摇后可能有泡沫，可用戊醇数滴除去3.滴定开始时，染料溶液要迅速加入，自至红色立即消失，然后尽可能地一滴滴加入，并不断振摇.直呈粉红色15s不消失为止.样品中可能有其它杂质也能还原2，6一=氯酚靛酚，但其还原染料的速度均较抗坏血酸慢，所以滴定时以15s 粉红色不退为止.。
维生素C片中抗坏血酸的测定
维生素C片中抗坏血酸的测定摘要维生素C（又名抗坏血酸，分子式为C6H8O6）通常用于防治坏血病及各种慢性传染病的辅助治疗。
市售维生素C药片含淀粉等添加剂。
具有较强的还原性，在空气中易被氧化，其含量可通过在弱酸性溶液中用已知浓度的I2溶液进行测定。
即取一定量研磨好的样品，加入一定量冰醋酸和一定量新煮沸后冷却的蒸馏水，搅拌溶解。
而后，加入淀粉指示剂，立即用已知浓度的I2标准溶液进行滴定，直至溶液中的蓝色持续不褪为止。
根据消耗I2溶液的体积，算得维生素C片中抗坏血酸的含量。
关键词碘量法维生素C片抗坏血酸1.引言维生素C，分子式为C6H8 O6 , 是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。
是人类营养中最重要的维生素之一，它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。
它对物质代谢的调节具有重要的作用，缺少它时会产生坏血病。
近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。
维生素C（还原型）纯品为白色无臭结晶，熔点190~192℃，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。
在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。
如果进一步水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用[5]。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。
根据它具有还原性质可测定其金属含量。
经过查阅资料，总结出十种方法测定维生素C片中抗坏血酸的含量：1.1铁铵矾滴定法取一定量研磨好的维生素C片，溶解后，以磺基水杨酸为指示剂，用铁铵矾氧化直接滴定该样品中抗坏血酸的含量。
该法经济可靠，所用铁铵矾标准液无须标定，但因室温下铁(Ⅲ)直接氧化抗坏血酸的速度慢，需控制恒温约55℃。
[1]1.22,6-二氯酚靛酚滴定法取一定量研磨好的样品溶解后，用碱性2,6-二氯酚靛酚溶液滴定含有该样品的草酸溶液，当溶液由蓝色变为无色再变为红色时即为终点。
食品中还原性抗坏血酸的测定
2，6—二氯酚靛酚
H+
2，6—二氯酚靛酚
(碱性－蓝色）
(酸性－红色）
还原
还原型抗坏血酸
还原态2，6—二氯酚靛酚 (无色）
过量2，6—二氯酚靛酚 (酸性－红色）
三、仪器与试剂
（一）仪器 1.组织匀浆机 2.微量滴定管 3.量筒、烧杯、吸管、锥形瓶 4.天平
六、注意事项
1. 操作过程要迅速，因为还原型抗坏血酸易被氧 化，一般不超过2min。
2. 食物匀浆在量筒中振摇可能产生泡沫，可加数 滴异戊醇去除泡沫。
六、注意事项
3. 样品匀浆液有颜色时，应加入一勺白陶土，振 摇脱色，过滤后，再取上层液滴定。
4. 样品中可能含有其它杂质，也能还原2，6-二氯 酚靛酚，但还原染料的速度较抗坏血酸慢，所 以滴定时以15s粉红色不退为终点。
进入实验室要求
1、使用化学试剂时要注意人身安全。 2、注意玻璃器皿的使用，破碎。 3、仪器使用必须按照操作说明及教师指导进行，盲目
操作导致损坏者后果自负。 4、实验器材用过后要及时清洗，实验结束后，要将器
材摆放整齐。 5、课代表每次课均要安排值日生，负责打扫卫生。 6、课代表在每次实验课结束后要填写实验室使用记录、
还原型抗坏血酸 （mg/ 100 g） V C 100 V 20 W
V—滴定时所用2，6-二氯酚靛酚的毫升数
C—1ml 染料相当于抗坏血酸毫克（0.05mg/ml）
W—5ml滤液中含有的样品克数 (0.25g)
100gx10gx5ml 200gx100ml =0.25g
1ml 溶 液 相 当 于 抗 坏 血 酸 0.05mg ， 即 0.05mg/ml
水溶C100中还原型抗坏血酸的测定 二氯酚靛酚滴定法
1%草酸，混匀，用二氯酚靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为 终点。记录所用染料Aml。
操作流程
2, 6-二氯酚靛酚染液
无色变为淡红色 滴定 15s内不褪色
A: 标准维生素C溶液(5ml)+草酸（5ml，1%）
C: 空白组为草酸（10ml，1%）
0.1 1ml染料相当于还原型维生素C的mg T (mg/ml) =
A-C（ml）
样品中还原型维生素C的浓度的测定
(采用标定的2, 6-二氯酚靛酚染料滴定)
水溶C100稀释液制备：市售水溶C100饮料冰箱待用。使 用前用草酸溶液稀释10倍（已制备）。
水溶C100稀释液中抗坏血酸浓度测定：在三角烧瓶中加 入5ml水溶C100稀释液、5ml 1%草酸，混匀，用二氯酚 靛酚染料滴定至粉红色，保持15秒不褪色为终点。记录结 果B ml。（两次）
二、原理及步骤
蓝色
红色
无色
抗坏血酸含有-OH基，具有较强的还原性，能还原染料2,6-二氯酚靛酚。 该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后为无色。 在没有杂质干扰时，一定量的食物溶液还原标准染料的量与其中的抗坏血酸成正比。
步骤
用标准维生素C溶液标定2, 6-二氯酚靛酚染料；
用标定后的2, 6-二氯酚靛酚染料滴定样品，测 得其还原型维生素C的浓度。
2, 6-二氯酚靛酚染料的标定
操作步骤
0.1%抗坏血酸标准储备液（1mg/ml），冰箱保存待用（已配制）。 1%草酸溶液：1g草酸充分溶解后→洗入100ml量筒中，加蒸馏水至
100ml刻度，搅匀→备用（已配制） 。 配制抗坏血酸标准应用液：用移液管取1ml 0.1%抗坏血酸标准储备液
实验二 固蓝盐比色法测定还原型抗坏血酸
（三）仪器与试剂 1．试剂 mol／ mL冰醋酸 冰醋酸， mL。 （1） 2 mol／L乙酸溶液 吸取 11.6 mL冰醋酸，加水稀释至 100 mL。 0.5mol／ 乙酸溶液吸取29mL冰醋酸，加水稀释至100 mL。 29mL冰醋酸 （2） 0.5mol／L乙酸溶液吸取29mL冰醋酸，加水稀释至100 mL。 0.25mol／ 3g乙二胺四乙酸二钠 乙二胺四乙酸二钠（ （3） 0.25mol／L乙二胺四乙酸二钠溶液称取 9. 3g乙二胺四乙酸二钠（C10H14 加水并加热使之溶解，冷却并稀释至100 mL。 N2O8 Na2·2H2O）加水并加热使之溶解，冷却并稀释至100 mL。 （4）蛋白质沉淀剂 g乙酸锌 Zn（ 乙酸锌［ COO） ］，加 3mL冰醋酸溶 ①乙酸锌溶液称取 22.0 g乙酸锌［Zn（CH3COO）2·2H2O］，加 3mL冰醋酸溶 于水并稀释至100 mL。。 于水并稀释至100 mL。。 g亚铁氰化钾 亚铁氰化钾［ Fe（CN） ］，加水溶解至 ②亚铁氰化钾溶液称取 10.6 g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6· 3H2O］，加水溶解至 mL。 100 mL。 B） g固蓝盐 （5）显色剂固蓝盐 B（Fast Blue Salt B）溶液准确称取 0.2 g固蓝盐 B，加水于 100mL棕色容量瓶中定容 该溶液在室温下贮存可稳定3d以上。 棕色容量瓶中定容。 3d以上 100mL棕色容量瓶中定容。该溶液在室温下贮存可稳定3d以上。 抗坏血酸标准储备溶液精密称取0 g抗坏血酸 抗坏血酸， mol／ （6）抗坏血酸标准储备溶液精密称取0．2000 g抗坏血酸，加 20mL 2 mol／L 乙酸溶液， mL棕色容量瓶中 用水定容并混匀。 棕色容量瓶中， 乙酸溶液，溶解后移入 100 mL棕色容量瓶中，用水定容并混匀。此溶液相当于 mg／mL抗坏血 2.0 mg／mL抗坏血 10℃下冰箱内贮存可稳定2d 2d）。 酸（10℃下冰箱内贮存可稳定2d）。 mL抗坏血酸标准储备溶液 （7）抗坏血酸标准使用溶液用移液管精密吸取 5.0 mL抗坏血酸标准储备溶液 mL棕色容量瓶内 棕色容量瓶内。 2mol／ 乙酸溶液并用水定容。 于100 mL棕色容量瓶内。加 5 mL 2mol／L乙酸溶液并用水定容。此溶液相当于 µg／mL抗坏血酸 临用时配制）。 抗坏血酸（ 100 µg／mL抗坏血酸（临用时配制）。
抗坏血酸含量实验报告
1. 掌握抗坏血酸含量的测定方法。
2. 了解抗坏血酸的性质及其在食品、药品中的应用。
3. 培养实验操作技能，提高分析问题、解决问题的能力。
二、实验原理抗坏血酸（维生素C）是一种水溶性维生素，具有抗氧化、增强免疫力等生理功能。
本实验采用2，6-二氯酚靛酚滴定法测定抗坏血酸含量。
该方法基于抗坏血酸具有还原性，可以将2，6-二氯酚靛酚还原成无色物质，从而通过滴定终点颜色变化来确定抗坏血酸的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：电子分析天平、滴定管、锥形瓶、研钵、漏斗、容量瓶、吸管等。
2. 试剂：2%草酸溶液、1%草酸溶液、标准抗坏血酸溶液、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液、待测样品等。
四、实验步骤1. 样品预处理：将待测样品进行研磨、过筛，准确称取一定量的样品，加入适量1%草酸溶液，搅拌均匀，提取抗坏血酸。
2. 标准溶液的配制：准确称取一定量的标准抗坏血酸，溶解于1%草酸溶液中，配制成一定浓度的标准溶液。
3. 滴定：将提取的抗坏血酸溶液置于锥形瓶中，加入适量的2，6-二氯酚靛酚溶液，搅拌均匀。
用标准抗坏血酸溶液进行滴定，直至溶液颜色由红色变为无色，记录滴定所用标准溶液的体积。
4. 计算抗坏血酸含量：根据滴定所用的标准溶液体积和浓度，计算待测样品中抗坏血酸的含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：根据实验数据，计算出待测样品中抗坏血酸的含量为X mg/g。
2. 分析：与国家标准或文献报道的抗坏血酸含量进行比较，分析实验结果的准确性。
1. 实验过程中可能存在的误差：样品预处理过程中可能存在抗坏血酸的损失；滴定过程中可能存在滴定终点判断不准确等。
2. 误差分析及改进措施：针对实验过程中可能存在的误差，提出相应的改进措施，以提高实验结果的准确性。
七、结论本实验采用2，6-二氯酚靛酚滴定法测定抗坏血酸含量，实验操作简便、准确。
通过实验，掌握了抗坏血酸含量的测定方法，提高了分析问题、解决问题的能力。
八、实验报告总结本次实验通过对抗坏血酸含量的测定，了解了抗坏血酸的性质及其在食品、药品中的应用。
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2，6—二氯酚靛酚
H+
2，6—二氯酚靛酚
(碱性－蓝色）(酸性－红色）还原还原型抗坏血酸
还原态2，6—二氯酚靛酚 (无色）
过量2，6—二氯酚靛酚 (酸性－红色）
三、仪器与试剂
（一）仪器 1.组织匀浆机 2.微量滴定管 3.量筒、烧杯、吸管、锥形瓶 4.天平
滴定至粉红色存在15秒不退为终点,记录2，6-二氯 酚靛酚的用量V1ml。测两次取其平均值; 5.用蒸馏水做空白对照，记录2，6-二氯酚靛酚的用量 V2ml. 6.计算5ml滤液中含有的样品克数W（？g）
五、计算
计算 100g 样品中还原型抗坏血酸的含量：
还原型抗坏血酸 （mg/ 100 g） V1 V2 C 100
（二）试剂
1. 1%草酸、2%草酸 2. 白陶土 3. 抗坏血酸标准液：秤取0.1g纯抗坏血酸，溶解于
1%草酸中，并用蒸馏水稀释至100ml，再取其 中1ml稀释至50ml，迅速用以标定染料。（最好 临用前配制） 0.02mg/ml
（二）试剂
4. 0.02% 2，6—二氯酚靛酚：溶解50mg 2，6— 二氯酚靛酚于200ml含52mg碳酸氢钠的热溶液 中，冷却后稀释至250ml，过滤后装于棕色瓶中， 每周标定一次。
食品中还原型抗坏血酸的测定
进入实验室要求
1、使用化学试剂时要注意人身安全。 2、注意玻璃器皿的使用，破碎。 3、仪器使用必须按照操作说明及教师指导进行，盲目
操作导致损坏者后果自负。 4、实验器材用过后要及时清洗，实验结束后，要将器
材摆放整齐。 5、课代表每次课均要安排值日生，负责打扫卫生。 6、课代表在每次实验课结束后要填写实验室使用记录、
W
V—滴定时所用2，6-二氯酚靛酚的毫升数
C—1ml 染料相当于抗坏血酸毫克（0.05mg/ml）
W—5ml滤液中含有的样品克数 (0.25g)
100gx10gx5ml 200gx100ml =0.25g
六、注意事项
3. 样品匀浆液有颜色时，应加入一勺白陶土，振 摇脱色，过滤后，再取上层液滴定。
4. 样品中可能含有其它杂质，也能还原2，6-二氯 酚靛酚，但还原染料的速度较抗坏血酸慢，所 以滴定时以15s粉红色不退为终点。
七、思考题?
这种测量维生素C方法的优缺点是什么?
用蒸馏水做空白对照的作用是什么?
W
V1—滴定时所用染料溶液的毫升数 V2—空白滴定时所用染料溶液的毫升数 C —1ml 染料相当于抗坏血酸毫克数（0.05mg/ml） W —所用滤液中含有的样品克数
六、注意事项
1. 操作过程要迅速，因为还原型抗坏血酸易被氧 化，一般不超过2min。
2. 食物匀浆在量筒中振摇可能产生泡沫，可加数 滴异戊醇去除泡沫。
实验报告书写内容
一、目的要求 二、实验原理 三、操作步骤 四、实验结果 五、分析讨论
说明：
• 实验报告一律使用 实验报告本；
• 学生完成实验报告 后由课代表收齐后交 给指导教师。
五、计算
计算 100g 样品中还原型抗坏血酸的含量：
还原型抗坏血酸 （mg/ 100 g） V C 100 V 20
5.蔬菜水果：番茄、柿子椒、甘蓝、柑橘、橙子、 鲜枣、猕猴桃等。
四、操作步骤
（一） 2，6-二氯酚靛酚溶液标定 取5ml新配置的抗坏血酸标准液，加5ml 1% 草酸于三角瓶中摇匀，用2，6-二氯酚靛酚滴 定至粉红色15秒不退为终点，所用上液的量相 当于0.1mg 抗坏血酸。
由此计算：1ml 溶液相当于抗坏血酸的毫克数 经标定后计算得：
1ml 溶 液 相 当 于 抗 坏 血 酸 0.05mg ， 即 0.05mg/ml
（二）样品测定
1. 称取样品100g，稍加切碎后置于组织匀浆机中， 加入100ml的2%草酸溶液，制成匀浆；
2. 取10g 匀浆于100ml量筒内，小心的以1%草酸 稀释至100ml，摇匀，静置；
（二）样品测定
3. 加一勺白陶土脱色, 过滤，备用； 4. 取滤液5ml于锥形瓶中，立即用2，6-二氯酚靛酚
仪器使用记录本、多媒体使用记录等。
一、目的要求：
（一）掌握还原型抗坏血酸的测定原理。 （二）熟悉维生素C的生理作用及缺乏症。 （三）了解本次实验的操作步骤及注意事项。
二、原理
还原型抗坏血酸有还原性，能还原染料2，6— 二氯酚靛酚，该染料在酸性溶液中呈红色，被 还原后红色消失，当被测溶液中过量一滴染料 时即显红色，以示终点。