腺苷脱氨酶ADA测定

腺苷脱氨酶ADA测定

1检验目的

指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2原理

ADA

腺苷+H2O 肌苷+NH3

PNP

肌苷+Pi 次黄嘌呤+1-磷酸核糖

XOD

次黄嘌呤+2 H2O+2O2尿酸+2 H2O2

POD

H2O2 +4-AAP+EHSPT 4H2O+苯醌类

3标本要求

3.1使用新鲜血清,不使用血浆.

3.2在采集血液后2h分离血清.

3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.

3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.

4试剂

4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ADA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1试剂组成

试剂1 60 ml,试剂主要成分如下:

Tris—HCL缓冲液（PH8.0）50.0mmol/L XO 0.2u/ml 4-AAP 2.0mmol/L POD 0.6u/ml

PNP 0.1u/ml NaN3 0.2g/L

试剂2 60 ml,试剂主要成分如下:

Tris—HCL缓冲液（PH4.0） 50.0mmol/L EHSPT 2.0 mmol/L 腺苷 10.0mmol/L

4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。试剂1 与试剂2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定20天。

4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

4.2 校准品：

4.2.1采用以检测用水为空白的方式进行校准。

4.2.2校准及校准频次的要求：正常情况下，应每周至少对测定进行一次校准。当发生下列情况时（如：使用的试剂批号发生改变时、使用的仪器进行维修、保养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生漂移或超出规定的范围等），应重新对测定进行校准后再对患者的样本进行检测。

5 仪器

AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪

6 操作步骤

6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。

6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。

6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。

6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。

7 质量控制

在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

8 计算方法

在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。

9 参考值

4-22 u/L（37℃）

10 临床意义

ADA在良恶性难辨的渗出液鉴别诊断上有重要价值，国内外研究表明，ADA对诊断结核性渗出液的特异性和敏感性明显优于活检和细菌学法、结核性胸腹水ADA活性显著增高，癌性胸腹水不增高，而血清ADA活性二者无显著差异，此外，脑脊液ADA检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标，结核性脑膜炎显著增高，病毒性脑炎不增高，颅内肿瘤及中枢神经系统白血病稍增高。

11 操作性能

11.1本法的ADA可报告范围为 0—200 u/L（37℃）

11.2精密度CV≤5%

11.3准确度测定值在正常及异常质控范围内

12 超出范围结果处理

如果超过线性范围用生理盐水1：1稀释，结果乘2

13 病危报警值的处理：

无。

14 补救措施

当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

15 参考文献

15.1叶应妩，王毓山，申子瑜主编·全国临床检验操作规程·中华人民共和国卫生部医政司编·(第四版)

15.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版

15.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版

15.4试剂说明书。