腺苷脱氨酶ADA测定
腺苷脱氨酶(ADA)测定及意义
腺苷脱氨酶(ADA)测定及意义
腺苷脱氨酶(ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类,属于巯基酶,每分子至少含2个活性巯基,其活性能对氯汞甲酸完全抑制。
ADA广泛分布于人体各组织中,以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高,肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。
血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞,其活性约为血清的40~70倍,T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高。
1.正常参考值:
速率法:健康成年人:0-19.6 U/L。
比色法:按ADA的习用单位计算,健康成年人为:0-25 U/L。
按国际单位计算,健康成年人为:≤30 U/L。
2.临床意义
血清ADA活性增高见于:
①肝脏疾病:急性黄疸性肝炎,肝细胞出现损伤,在黄疸尚未出现前,可见增高。
因
ADA分子量较ALT小,当肝细胞轻度受损时ADA比ALT先释入血内。
慢性肝炎活动期,慢性迁延性肝炎升高明显;肝硬化、原发性肝癌时,ADA活性也升高。
②肿瘤引起的阻塞性黄疸、前列腺癌和膀胱癌、网状细胞瘤、淋巴瘤、溶血性贫血、
风湿热、伤寒、痛风、重症地中海贫血、骨髓性白血病、结核、自身免疫性疾病、传染性单核细胞增多症和心力衰竭等均可引起此酶升高。
③结核性胸腹水ADA活性显著增高,癌性胸腹水不增高,而血清中ADA活性二者无
明显差别,故测定胸腹水中ADA活性有助于将两者鉴别。
④结核性脑膜炎ADA显著增高,而病毒性脑膜炎则不增高,颅内肿瘤及中枢神经系统
白血病稍增高。
所以脑脊液ADA检测可以作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标。
腺苷脱氨酶测定
腺苷脱氨酶测定检验科于2012年7月开展血液ADA检测,该试验主要用于辅助诊断肝脏疾病,指导临床治疗,取得了良好的效果。
现总结如下:1.概述腺苷脱氨酶是嘌呤核苷代谢中重要的酶类,属于巯基酶,每分子至少含2个活性巯基,其活性能对氯汞甲酸完全抑制。
ADA能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷,再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤,其代谢缓和终产物为尿酸。
腺苷脱氨酶是一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶。
测定血液、体液中的ADA及其同工酶水平对某些疾病的诊断、鉴别诊断、治疗及免疫功能的研究日趋受到临床重视。
ADA活性是反映肝损伤的敏感指标,可作为肝功能常规检查项目之一,与ALT或GGT等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。
ADA广泛分布于人体各组织中,T淋巴细胞含量尤其丰富。
血清ADA活性升高见于急性肝炎、酒精性肝纤维化、慢性活动性肝炎、肝硬化、病毒性肝炎和肝细胞瘤病人,结核病渗出液中也可见ADA活性增高。
结合ALT或γ-GT,检测病人血清ADA 活性对肝脏疾病诊断更具有独特价值。
2.检测仪器与原理:检测所用仪器为日立7180全自动生化分析仪,检测原理:ADA 催化腺嘌呤核苷脱氨转变为次黄嘌呤核苷,再经嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)作用生成次黄嘌呤。
次黄嘌呤经次黄嘌呤氧化酶(XOD)作用转变为尿酸和过氧化氢(H2O2)。
H2O2在过氧化物酶(POD)存在的情况下,可与N-乙醛-N-(2-羟基-3-硫丙基)-3-甲基苯胺(EHSPT)和氨基安替比林(4-AA)生成醌染料,醌染料生成速率与ADA含量相关。
3.技术优点:该技术具有测定精密度高,抗干扰能力强,标本中胆红素≤342umol/L,血红蛋白≤200mg/dl,甘油三酯≤8.47mmol/L,抗坏血酸≤4mg/dl 及NH4+对本试剂测定无影响,适合自动化快速测定的特点,为临床常规开展ADA检测应用创造了有利条件。
4.参考范围:4-24U/L,或66-398nkat/L。
ADA
迈克试剂标准操作程序目录1、用途 (2)2、检测原理 (2)3、样本 (2)3.1、样本类型 (2)3.2、样本的贮存和稳定性 (2)4、试剂 (2)4.1、试剂组成 (2)4.2、试剂装载 (3)4.3、试剂稳定性 (3)4.4、试剂规格 (3)5、参数设置 (3)6、校准 (3)6.1、校准品 (3)6.2、校准品准备 (3)6.3、校准品稳定性 (4)6.4、校准条件 (4)6.5、校准品溯源性 (4)6.6、校准实施 (4)7、质量控制 (4)7.1、质控品 (4)7.2、质控品的稳定性 (4)7.3、质控规则 (4)7.4、失控纠正 (5)8、样本测定 (5)8.1、安排 (5)8.2、实施 (5)9、性能指标 (5)9.1、精密度 (5)9.2、检测范围 (6)9.3、抗干扰能力 (6)9.4、方法学比较 (6)10、参考范围及危急值 (6)11、临床意义 (7)12、安全防护措施 (7)13、参考文献 (7)1、用途腺苷脱氨酶测定试剂盒(酶法)旨在通过HITACHI 7000系统定量分析血清或血浆中的腺苷脱氨酶的活性。
2、检测原理化学反应式:腺苷+H 2O −−→−ADA肌苷+NH 3肌苷+Pi −−→−PNP 次黄嘌呤+1-磷酸核糖 次黄嘌呤+2 H 2O +2O 2−−→−XOD尿酸+2H 2O 2H 2O 2+4-AAP +EHSPT −−→−POD4H 2O +苯醌类 分析仪HITACHI 7000能自动的按一定的体积比例将样品和试剂加入测试杯中,分析仪采用速率法在546nm 波长下测定吸光度变化率值(△A/min ),其△A/min 与样品中腺苷脱氨酶的活力成正比。
3、样本 3.1、样本类型样本为空腹血清;血浆(肝素抗凝,0.1mg 肝素可抗凝1.0ml 血液;EDTA 抗凝,1.8mgEDTA 可抗凝1.0ml 血液)。
3.2、样本的贮存和稳定性装有血样的试管应一直密封放置。
腺苷脱氨酶(ADA)
腺苷脱氨酶(ADA)参考值:0-15U/L 海丰参考区间4~24U/L介绍:腺苷脱氨酶(ADA)为一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶,其作用是催化水解腺苷生成肌苷和氨。
ADA广泛存在于各组织中,以盲肠、小肠黏膜、脾脏、胸腺中含量最高,肝脏、肺、肾、心脏、骨骼肌、神经组织等处含量较低,肝脏含量约为小肠的7%~10%。
肝内ADA90%存在与细胞浆水溶性部分,其余在细胞核内。
此外,血细胞(红细胞、粒细胞、淋巴细胞)内ADA活性约为血液中40倍~70倍,因此测定ADA时应避免溶血。
血清中的ADA主要来自肝脏,所以肝细胞损伤或膜通透性增强,均可使血中酶活性增高,故可依据该酶活性增高或降低反映肝细胞损伤和恢复程度。
血清腺苷脱氨酶(ADA)正常值:(1)酶速率法(37℃):健康成年人:7.7-19.3 U/L(2)分光光度法:<25 U/L(3)比色法:健康成年人为:5~25 U/L诊断参考:肝脏疾病:ADA活性是反映肝损伤的敏感指标,可作为肝功能常规检查项目之一,与ALT或GGT等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。
一.ADA活性是反映肝损伤的敏感指标,可作为肝功能常规检查项目之一,与AIT或GGT等组成肝酶谱。
(1)用于判断急性肝损伤及残留病变急性肝炎时ALT明显升高。
ADA仅低度,中度升高。
但重症肝炎发生酶胆分离时,尽管ALT不高,而ADA常明显升高。
而ALT恢复正常,ADA持续升高者,常易复发或易迁延为慢性肝炎。
(2)协助诊断慢性肝病在反映慢性肝损伤时ADA较ALT为优。
慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌患者血清ADA活性显著升高,因而可判断慢性肝病的程度。
另外,慢性活动性肝炎活性明显高于慢性迁延性肝炎。
故可用于二者的鉴别诊断。
(3)有助于肝纤维化的诊断ADA活性差异与肝细胞损害关系不大,与肝纤维化程度相关。
肝纤维化程度增加,ADA活性增加。
(4)有助于黄疸的鉴别据文献报道,阻塞性黄疸血清ADA活性明显低于肝细胞性黄疸及肝硬化伴黄疸。
腺苷脱氨酶(ADA),试剂标准操作规程(SOP)--ADA
试剂标准操作规程目录1.检测原理2.标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理腺苷在腺苷脱氨酶作用下脱氨基形成黄苷。
黄苷在PNP作用下生成次黄嘌呤,次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶(XOD)作用下转化为尿酸和过氧化氢(H2O2)。
H2O2与EHSPT和氨基安替比林(4-AA)反应生成有色染料,产物的颜色与ADA活性成正比。
ADA腺苷+H2O -----------------------黄苷+ 氨PNP黄苷+ 磷酸------------------------次黄嘌呤+ 核糖-1-磷酸XOD次黄嘌呤2H2O2+2O2----------------------尿酸+H2O2POD2H2O2+4-AA+EHSPT -----------------------醌式染料2.标本采集与处理2.1 受检者的准备:病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂:血浆使用EDTANa2(1mg/mL)作为抗凝剂。
2.4 标本处理:血标本室温放置30min~45min后离心分离血清或血浆,置洁净试管加盖低温保存。
腺苷脱氨酶(ADA)测定试剂盒(过氧化物酶法)产品技术要求lideman
腺苷脱氨酶(ADA)测定试剂盒(过氧化物酶法)产品技术要求lideman腺苷脱氨酶(ADA)测定试剂盒(过氧化物酶法)适用范围:本产品用于体外定量测定人血清或血浆中腺苷脱氨酶的含量。
1.1规格试剂1(R1):3×60mL、试剂2(R2):1×60mL;校准品(选配):1×1mL。
低值质控品(选配):1×1mL;高值质控品(选配):1×1mL。
1.2组成试剂盒由试剂、校准品(选配)和质控品(选配)组成。
试剂1(R1): Tris缓冲液:50mmol/L pH 8.0;4-氨基安替比林:4mmol/L;4-AA :2mM ;PNP :0.1U/mL;XOD:700U/L;过氧化物酶:2KU/L;试剂2(R2):mops缓冲液:50mmol/L pH 7.0;腺苷:10mM;EHSPT:2mM。
校准品组成:单个水平的冻干校准品,在水基质中添加腺苷脱氨酶,稳定剂0.1%。
定值范围:(80~180)U/L。
质控品组成:两个水平的冻干质控品,在水基质中添加腺苷脱氨酶,稳定剂0.1%。
定值范围:(20~50)U/L和(80~180)U/L。
2.1 外观液体双试剂:试剂1(R1):无色澄清液体,试剂2(R2):无色澄清液体。
校准品:冻干品,溶解后为无色至淡黄色液体。
质控品:冻干品,溶解后为无色至淡黄色液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 溯源性:根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容,该校准品溯源至参考物质(BCR-647,IRMM)。
2.4 试剂空白2.4.1 空白吸光度在37℃、(546nm±10%范围内的)波长、1cm光径条件下,用去离子(或生理盐水)水作为样品加入试剂测试时,试剂空白吸光度应<0.3 ABS。
2.4.2 空白吸光度变化率在37℃、(546nm±10%范围内的)波长、1cm光径条件下,用去离子(或生理盐水)水作为样品加入试剂测试时,试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应≤ 0.003 ABS/min。
检验科腺苷脱氨酶ADA标准操作规程
检验科腺苷脱氨酶(ADA)标准操作规程【目的】体外检测血清腺苷脱氨酶(ADA)含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP,室负责人监督落实。
2.本SOP的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.静脉采血除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪,低速离心机一、检测原理ADA腺苷 + H2O 次黄甘 + 氨PNP次黄甘+磷酸次黄嘌呤+核糖-1-磷酸XOD次黄嘌呤+2H2O 尿酸+H2O2POD2H2O2+4-AA+TOOS+H3+O 红色苯醌色素+5H20在上述反应中,通过在546nm处测定红色苯醌色素生成速率,即可测得样本中腺苷脱氨酶(ADA)的活性。
二、试剂1.试剂本科使上海复星长征医学科技有限公司ADA试剂盒,为液体双试剂。
各组分如下:试剂1(R1)4-氨基安替比林 0.4g/L嘌呤核苷酸磷酸化酶 1.3KU/L黄嘌呤氧化酶 2KU/L过氧化物酶 2KU/L试剂2(R2)TOOS 0.9g/L腺苷 4.0 G/L2.校准要求2.1使用与试剂配套使用的复星长征腺苷脱氨酶校准血清对测定进行校。
2.2校准间隔2.2.1 试剂批号变更时,使用与试剂配套使用的复星长征校准品对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
三、操作按生化分析仪操作要求结合长征试剂说明书输入测定参数,并按校准、质量控制、样本测定的顺序进行常规测定。
腺苷脱氨酶(ADA)检测在结核性胸腹水鉴别诊断中的应用
检 测在 结核 性胸 腹水 鉴别诊 断 中的应 用
价 值 , 定 其 鉴 别 临 界 值 。 方 法 : 20 确 对 2
例 胸 腹 水 标 本 的 ADA检 测 结 果 分 组 进 行
4 5例癌性胸腹水 A A含 量 , D 与其他 病例
否癌性胸腹水 或其 他性质 , 则需要结 合其 他 指标 分 析。也 有报 道认 为 : D A A较 高 时还要考虑 急性 淋 巴细胞 白血病 及风 湿 病 的可能 。本文资料 中 , 仅有 1例淋巴 细胞 白血病和 3例风湿病 , 由于病例太少 无法进行统计论证 。
R C( ee e prt g C aat i O R ci rO ea n hrc r — v i es
7 10 2 0 6陕西 电子 4果 作为结核 D
摘 要 目的 : 讨 腺 苷 脱 氨 酶 ( D 探 A A)
性胸腹水与癌性胸腹水 的鉴别依 据 , 但他 们忽视了非结核性非癌性胸腹水 的鉴别。 我们曾将本文 中 13例非 结核 组病 例 中 7
诊, 临床诊断 明确 。
仪 器 与 方法 : 标 本 留 取 : 疾 病 治 ① 于
疗前抽取胸腹水 , 离心后吸取上清 2 l m 与
0 ” z 0 4
1一 PE
时 诊 断 敏 感 度 为 8 . 7 , 异 度 为 66 % 特
U 5 1 8 3 l
小试管进行 检测 , 不能及 时检 测 , 一 如 置
・C 、 T 核磁 共 振 、 片 、 胸 B超 、 瘤 标 记 物 、 肿 病 理 细胞 学 检 验 、 核 菌 素 试 验 等 检 查 确 结
曲线下的面积计算 :线下面积 A z=
血清腺苷脱氨酶ADA测定
血清腺苷脱氨酶ADA测定1.实验原理应用ADA偶联嘌呤核苷磷酸化酶(PNP),黄嘌呤氧化酶(XOD)和过氧化物酶(POD)反应连续监测法。
ADA酶解腺苷(Adenosine)脱氨产生次黄苷(Inosine);再通过偶联PNP的作用,生成次黄嘌呤(Hypoxanthine);后者在XOD氧化作用下生成尿酸和过氧化氢;最后在POD的作用下H2O2再与N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-3-甲基苯胺(EHSPT)、4-氨基安替比林(4-AAP)反应(Trinder氏反应),生成紫红色的有色醌。
通过测量有色醌550nm处吸光度上升的速度来测算ADA的活性。
ADAAdenosine + H2O Inosine + NH3PNPInosine + Pi Hypoxanthine + Ribose 1-phosphateXODHypoxanthine + 2H2O + 2O2 Uric acid + 2H2O2POD2H2O2 + 4-AA P+ EHSPT 4H2O + Quinone dy e2. 标本:2.1 病人准备:新鲜血清,采血后应及时分离,避免溶血。
2.2 类型:血清、肝素或EDTA血浆,应避光保存。
3. 标本存放:血清,采血后应及时分离避免溶血,ADA在4℃稳定一个星期。
4. 标本运输:冰冻条件下保存运输。
5. 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。
6. 实验材料6.1 试剂:亚太ADA试剂盒(H013 090920 试剂1+试剂2)6.1.1 试剂组成6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂有效期为12个月。
试剂必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示:试剂出现颗粒或浑浊,被视作变质,应停止使用。
6.1.5 注意事项:试剂请勿直接接触皮肤、眼睛,如有接触,请用大量清水清洗。
请勿吞服。
6.2 校准品:使用亚太提供的专用校准品对自动分析仪进行校准,参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品:参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器:奥林巴斯AU640生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数:参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪项目测定参数.SOP文件。
医学检验·检查项目:血清腺苷脱氨酶(ADA)_课件模板
血清ADA活性增高见于: ① 肝脏疾 病:急性黄疸性肝炎,肝细胞出现损伤, 在黄疸尚未出现前,可见增高。因ADA分 子量较ALT小,当肝细胞轻度受损时ADA比 ALT先释入血内。慢性肝炎活动期,慢性 迁延性肝炎升高明显;肝硬化、原发性肝 癌时,ADA活性也升高。 ② 肿瘤引起的 阻塞性黄疸
相关症状: 黄疸、腹水、咳嗽、血红蛋白尿、血尿、 尿频伴尿急和尿痛。
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相关疾病:
溶血过度所致贫血、原发性肝癌、再生障 碍性贫血、膀胱癌、前列腺癌、小儿腺苷 脱氨酶缺乏、肝硬化、溶血性贫血、急性 淋巴细胞性白血病、黏脂贮积症Ⅰ型、病 毒性肝炎、肺结核、肠结核。
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简介:
40~70倍,T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活 性更高。
腺苷脱氨酶是一种与机体细胞免疫活 性有重要关系的核酸代谢酶。测定血液、 体液中的ADA及其同工酶水平对某些疾病 的诊断、鉴别诊断、治疗及免疫功能的研 究日趋受到临床重视。
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临床意义:
前列腺癌和膀胱癌、网状细胞瘤、淋巴瘤、 溶血性贫血、风湿热、伤寒、痛风、重症 地中海贫血、骨髓性白血病、结核、自身 免疫性疾病、传染性单核细胞增多症和心 力衰竭等均可引起此酶升高。 ③ 结核性 胸腹水ADA活性显著增高,癌性胸腹水不 增高,而血清中ADA活性二者无明显差别, 故测定胸腹水中A
谢谢!
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腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)
腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)简介:腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase ,ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类,属于一种巯基酶,每分子至少含2个活性巯基。
ADA 能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷,再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤,其代谢缓和终产物为尿酸。
ADA 广泛分布于人体各组织中,以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高,而肝、肺、肾和骨胳肌等含量低。
Leagene 腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)其检测原理是待测样品中的ADA 催化腺嘌呤核苷水解脱氨,产生次黄嘌呤核苷和铵离子,利用波氏显色法,测定氨离子生成量。
其反应公式为:腺苷+H 2O →次黄嘌呤+NH 3。
通过分光光度计检测处吸光度,根据计算公式可得ADA 活力,100T 试剂盒可测50个样本。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、离心管或小试管2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考):1、准备样品:①血浆、血清样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,冻存,用于ADA 的检测。
②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,冻存,用于ADA 的检测。
编号名称TE0233 100T Storage试剂(A):氨氮标准(1mg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): 底物缓冲液30ml 4℃ 试剂(C): 波氏ADA 显色液250ml 4℃ 避光试剂(D): ADA Assay b uffer 250ml 4℃ 避光使用说明书高活性样品:如果样品中含有较高活性的ADA,可以使用ddH2O稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ADA含量。
2、稀释标准品:用ddH2O准确稀释氨氮标准(1mg/ml)至25μg/ml,即为氨氮标准工作液,4℃保存,备用。
ADA
腺苷脱氨酶测定(ADA)测定操作规程(SOP文件)1实验原理和检验目的ADA腺嘌呤核苷+ H2O———→次黄嘌呤核苷+NH3PNP次黄嘌呤核苷+Pi———→次黄嘌呤+磷酸核糖XOD次黄嘌呤+2H2O+2O2 ———→2H2O2+尿酸POD2H2O2+4-AAP+ TOOS———→醌化合物在波长546nm处测定醌化合物生成速率,计算出ADA活力。
2标本采集和处理2.1标本种类和采集方法标本:血清、血浆、脑脊液、胸腹水,采血后应及时分离,避免溶血。
2~8℃贮存可用三天。
受检者(体检对象或病人)的准备:对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯。
静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布。
2.2标本处理方法标本要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
样品采集后要离心标本,吸出血清。
标本应立即测定。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3试剂3.1试剂组成3.2试剂准备试剂为液体双试剂,开瓶即可使用,用后及时置于2~8℃避光保存。
3.3试剂稳定性试剂在2-8℃避光保存可稳定12个月,试剂开盖稳定2周。
配成单一工作试剂稳定1周。
4校准4.1校准品每日进行试剂空白校准操作。
建议使用本公司ADA校准品进行全点校准操作。
4.2校准品准备本公司ADA校准品复溶30分钟,充分溶解混匀后即可使用。
4.3校准品稳定性本公司ADA冻干校准物2~8℃密闭保存稳定至有效期,复溶后校准物15℃~25℃稳定8小时,2℃~8℃稳定2天,-15℃~-25℃稳定2周。
4.4试剂校准周期推荐校准周期为2天。
当试剂批号更换时应重新校准。
5质控5.1质控品建议采用本公司ADA质控品进行室内质控。
5.2可接受性判断质控物的检测值应在给定质控范围,或可以通过参加卫生部室间质评对实验室的运作情况进行系统评估。
5.3质控操作每日进行样本检测之前首先应进行质控操作,以考察系统的在控情况。
如果检测结果符合质控要求则进行样本操作;如果不符合质控要求,则应重复质控操作,以排除可能发生的偶然误差;如果仍不符合质控要求,则应考虑质控品的重新准备、试剂的重新校准或更新、仪器的维护等。
腺苷脱氨酶ADA测定
腺苷脱氨酶ADA测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。
2原理ADA腺苷+H2O 肌苷+NH3PNP肌苷+Pi 次黄嘌呤+1-磷酸核糖XOD次黄嘌呤+2 H2O+2O2尿酸+2 H2O2PODH2O2 +4-AAP+EHSPT 4H2O+苯醌类3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4试剂4.1 试剂:上海复星长征医学科学有限公司ADA试剂盒(沪食药监械(准)字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014)4.1.1试剂组成试剂1 60 ml,试剂主要成分如下:Tris—HCL缓冲液(PH8.0)50.0mmol/L XO 0.2u/ml 4-AAP 2.0mmol/L POD 0.6u/mlPNP 0.1u/ml NaN3 0.2g/L试剂2 60 ml,试剂主要成分如下:Tris—HCL缓冲液(PH4.0) 50.0mmol/L EHSPT 2.0 mmol/L 腺苷 10.0mmol/L4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存:2~8℃避光、密封的储存条件下,试剂(盒)自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂2 启用后,在2~10℃避光的条件下可稳定20天。
4.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。
4.2 校准品:4.2.1采用以检测用水为空白的方式进行校准。
4.2.2校准及校准频次的要求:正常情况下,应每周至少对测定进行一次校准。
当发生下列情况时(如:使用的试剂批号发生改变时、使用的仪器进行维修、保养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生漂移或超出规定的范围等),应重新对测定进行校准后再对患者的样本进行检测。
26、腺苷脱氨酶标准操作规程(ADA)
前言为使临床检验操作规范化,指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作,保证检验质量,特制定本操作规程。
本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订,作为本产品的标准操作程序。
本规程从2007年5月2日起实施,每2年复审1次。
本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。
本规程起草单位:伊利康生物技术有限公司技术部。
本规程主要起草人:蒙凯、蔡其浩、张丽伟。
本规程首次起草。
目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型全自动生化分析仪参数腺苷脱氨酶测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请:血清腺苷脱氨酶(,缩写ADA)测定;临床医生根据需要提出检验申请。
2.标本采集与处理2.1 受检者的准备:采血前2周保持平时的饮食习惯,3d内避免高脂饮食,24h内不饮酒,空腹12h后采集标本。
体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带,不抗凝,置普通试管中。
ADA
3种同工酶具有不同的动力学性质: ADA1和ADA1 +CP最适PH为5.5~8.0,对腺 苷的Km值为50umol/L。对2-脱氧腺苷与腺 苷的活性之比为0.8,两者均对红-9-(2-羟基 -3-壬烷基)腺嘌呤抑制作用敏感。ADA2相 对于前两种同工酶具有较低的最适PH、较 高的催化腺苷Km值(2000umol/L)以及较低 的2-脱氧腺苷与腺苷的活性之比值(0.2),对 红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤抑制作用不敏 感。
2. 5伤寒的诊断
在诊断伤寒的实验室检查方法中,血、粪培养虽可起 确诊作用,但影响培养因素较多,阳性率也不高;骨髓培 养阳性率高,但难普遍开展;而肥达氏反应近年来受抗生 素影响,常出现假阳性或假阴性等异常结果。有研究表明, 血清ADA 测定可用于伤寒的辅助诊断,其变化早于肥达 氏反应。在伤寒患者发病初期的第1~4 天,ADA 就可明 显增高。增高的机理可能是由于伤寒患者回肠末端淋巴结 增大,大量淋巴细胞和巨噬细胞增生、坏死及肠黏膜破坏, 受累淋巴结及肠黏膜释放大量ADA 所ห้องสมุดไป่ตู้ 。
2. 8 透析性腹膜炎的诊断
透析性腹膜炎时,透析液中ADA 活性增 高,直至腹膜炎治愈,炎症消失后才明显下 降。所以ADA活性测定对于腹膜透析并发 腹膜炎的诊断有意义,可作为透析性腹膜 炎比较稳定的诊断指标 。
2.1.3肝纤维
肝硬化患者血清ADA活性明显高于急性黄疸 型肝炎、慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、肝 内多发性占位、阻塞性黄疸及对照组,慢性活动 性肝炎者也明显高于慢性迁延性肝炎者及对照组, 表明ADA活性差异关键在于肝纤维化程度,而 与肝细胞损害关系不大。实验得出,用肝硬化的 肝组织切片标本作肝纤维化程度的分级评分观察, 发现积分均值≤1.5者ADA阳性率(38.46%)显著 低于>1.5者(86.96%),证实ADA活性与肝纤维 化程度有关。随肝纤维化程度增加,ADA活性 逐渐增加,即肝硬化>慢性活动性肝炎>慢性迁 延性肝炎。
肺泡灌洗液中腺苷脱氨酶(ADA)检测对肺结核和肺癌的诊断价值
肺泡灌洗液中腺苷脱氨酶(ADA)检测对肺结核和肺癌的诊断价值张世权【摘要】目的:评价肺泡灌洗液腺苷脱氨酶(ADA)检测对肺结核和肺癌的鉴别诊断价值.方法:肺结核和肺癌患者60例于诊断前及治疗后1个月分别行肺泡灌洗液,采用数率法,通过检测其活性,并进行组间与治疗前后的对比.结果:60例患者中,结核组与肺癌组ADA值分别为(79.9±23.6)U/L和(17.3±7.2)U/L,结核组明显高于肺癌组(P<0.01),且结核治疗前后ADA活性间存在显著差异(P<0.01).结论肺泡灌洗液ADA检测方法简单,经济,对肺结核和肺癌的鉴别是一种有效指标.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2011(001)002【总页数】1页(P76-76)【关键词】肺泡灌洗液;腺苷脱氨酶;肺癌;肺结核;鉴别诊断【作者】张世权【作者单位】辽宁省本溪市本钢胸科医院,辽宁本溪,117000【正文语种】中文【中图分类】R521;R734.2鉴别肺结核和肺癌是临床病因学诊断中常见难题。
近10年来国内外一些权威医学期刊一致认为肺结核肺泡灌洗液中腺苷脱氨酶(ADA)很高[1],有助于两者鉴别诊断。
笔者就我院救治的60例肺泡灌洗液ADA检测,探讨其在结核和肺癌鉴别中的临床价值。
1 资料与方法1.1 一般资料本组患者肺结核48例,男34例,女14例,平均年龄(39.4±10.6)岁。
依据临床表现、X线检查、痰标本涂片镜检查、抗结核治疗有效而确诊。
肺癌12例,男9例,女3例,平均年龄(50.1±8.1)岁。
依据临床表现、痰脱落细胞学检查、纤维支气管镜检查、X线或CT检查等确诊。
1.2 标本采集与处理常规肺泡灌洗液,离心取上清液,用4℃冰箱保存,当天通过OLYMPUS640检测ADA活性。
然后予患者雷米封、利福平为主的诊断性抗结核治疗方案。
治疗1个月后,再次取肺泡灌洗液,方法同上,检测ADA活性。
胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)检测的临床应用
胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)检测的临床应用发表时间:2013-07-18T16:00:02.873Z 来源:《医药前沿》2013年第14期供稿作者:贾琳魏成翠[导读] 胸腔积液是临床常见的胸膜病变,其病因复杂,可原发于胸膜自身疾病,也可继发于肺部疾病。
贾琳魏成翠(沈阳市胸科医院辽宁沈阳 110044)【摘要】目的探讨腺苷脱氨酶(ADA)在胸腔积液鉴别诊断中的临床应用和疗效观察。
方法检测78例结核性胸膜炎及56例癌性胸膜炎患者胸腔积液中的ADA活性。
比较两组检测结果及结核性胸膜炎患者组治疗前后ADA活性变化。
结果结核性胸腔积液的ADA明显高于癌性胸腔积液。
治疗后结核性胸腔积液ADA明显下降。
结论胸腔积液ADA检测对结核性胸膜炎具有诊断价值,并可作为抗结核治疗效果的观察指标,值得临床广泛应用。
【关键词】胸腔积液 ADA 结核性胸膜炎【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2013)14-0213-01 Pleural effusion adenosine deaminase (ADA) detection of clinical applications jialin weichengcui Shenyang chest hospital Shenyang 110044,China 【Abstract】 Objective: To investigate the effect of ademinase(ADA) in clinical application and curative effect observation in the differential diagnosis of pleural effusion. Methods : ADA activity was detected in 78 cases of tuberculous pleurisy and 56 cases of carcinomatous pleurisy patients of pleural effusion. Changes of ADA activity were compared in the two groups before and after the test results and the patients with tuberculous pleurisy therapy . Results : the ADA of tuberculous pleural effusion was significantly higher than that in malignant pleural effusion. tuberculous pleural effusion ADA decreased significantly after treatment. Conclusions: pleural effusion ADA detection is valuable in the diagnosis of tuberculous pleurisy,observation index and can be used as anti-TB treatment effect,it is worthy of wild clinical application. 【Key words】Pleural effusion ADA Tuberculous pleurisy 胸腔积液是临床常见的胸膜病变,其病因复杂,可原发于胸膜自身疾病,也可继发于肺部疾病,其中以结核性和癌性最为常见。
腺苷脱氨酶(ADA)联合ALT,AST,GGT在肝脏疾病中的诊断价值
腺苷脱氨酶(ADA)联合ALT,AST,GGT在肝脏疾病中的诊断价值目的:探讨肝脏疾病患者血清ADA联合ALT、AST GGT组合对肝脏疾病的诊断、鉴别诊断和预后的价值。
方法:对132例肝病患者、40例正常对照者血清进行ADA、ALT、GGT、AST检测。
结果:肝硬化组ADA为(56.2±29.7)U/L,阳性率为92.6%;急性肝炎组ADA为(47.3±14.6)U/L,阳性率为82.6%,两组与正常对照组比较均有非常显著意义(P<0.01);慢性肝炎组ADA为(29.6±26.3)U/L,阳性率为68.4%,与正常对照组比较有显著意义(P<0.05);ALT在急性、慢性肝炎组、肝硬化组阳性率分别为86.9%,72.5%和53.6%,与正常对照组有显著意义(P<0.01和P<0.05);GGT在急性肝炎组、肝硬化组阳性率分别为56.8%、59.3%,与正常对照组有非常显著意义(P<0.01)。
结论:ADA 测定对肝脏疾病的诊断具有较高敏感性,在急性肝炎和肝硬化表现更为明显。
ADA能正确反映急性肝实质损伤程度,在肝炎患者ALT阴性时,ADA阳性表明急性肝炎向慢性肝炎发展。
ADA的检测联合ALT、AST、GGT对肝病的诊断具有一定的临床应用价值。
标签:腺苷脱氨酶;ALT;GGT;AST;诊断腺苷脱氨酶(Adenosne Deaminase ,ADA)是一种与机体细胞免疫系统有重要作用的核酸代谢酶,它广泛存在于人体各种细胞和体液中。
血清中ADA主要来源于肝脏,作为反映肝损伤的敏感指标,可作为肝功能常规检查的项目之一,与ALT、GGT等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。
本次研究对132例患者血清标本进行了腺苷脱氨酶(ADA)、丙氨酸转移酶(ALT)、r-谷氨酰转肽酶(GGT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的4项指标的检测,以探讨多项指标联合检测在不同肝病诊断中的意义。
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腺苷脱氨酶ADA测定
1检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。
2原理
ADA
腺苷+H2O 肌苷+NH3
PNP
肌苷+Pi 次黄嘌呤+1-磷酸核糖
XOD
次黄嘌呤+2 H2O+2O2尿酸+2 H2O2
POD
H2O2 +4-AAP+EHSPT 4H2O+苯醌类
3标本要求
3.1使用新鲜血清,不使用血浆.
3.2在采集血液后2h分离血清.
3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.
3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.
4试剂
4.1 试剂:上海复星长征医学科学有限公司ADA试剂盒(沪食药监械(准)字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014)4.1.1试剂组成
试剂1 60 ml,试剂主要成分如下:
Tris—HCL缓冲液(PH8.0)50.0mmol/L XO 0.2u/ml 4-AAP 2.0mmol/L POD 0.6u/ml
PNP 0.1u/ml NaN3 0.2g/L
试剂2 60 ml,试剂主要成分如下:
Tris—HCL缓冲液(PH4.0) 50.0mmol/L EHSPT 2.0 mmol/L 腺苷 10.0mmol/L
4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存:2~8℃避光、密封的储存条件下,试剂(盒)自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂2 启用后,在2~10℃避光的条件下可稳定20天。
4.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。
4.2 校准品:
4.2.1采用以检测用水为空白的方式进行校准。
4.2.2校准及校准频次的要求:正常情况下,应每周至少对测定进行一次校准。
当发生下列情况时(如:使用的试剂批号发生改变时、使用的仪器进行维修、保养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生漂移或超出规定的范围等),应重新对测定进行校准后再对患者的样本进行检测。
5 仪器
AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪
6 操作步骤
6.1 样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
8 计算方法
在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以U/L报告。
9 参考值
4-22 u/L(37℃)
10 临床意义
ADA在良恶性难辨的渗出液鉴别诊断上有重要价值,国内外研究表明,ADA对诊断结核性渗出液的特异性和敏感性明显优于活检和细菌学法、结核性胸腹水ADA活性显著增高,癌性胸腹水不增高,而血清ADA活性二者无显著差异,此外,脑脊液ADA检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标,结核性脑膜炎显著增高,病毒性脑炎不增高,颅内肿瘤及中枢神经系统白血病稍增高。
11 操作性能
11.1本法的ADA可报告范围为 0—200 u/L(37℃)
11.2精密度CV≤5%
11.3准确度测定值在正常及异常质控范围内
12 超出范围结果处理
如果超过线性范围用生理盐水1:1稀释,结果乘2
13 病危报警值的处理:
无。
14 补救措施
当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。
15 参考文献
15.1叶应妩,王毓山,申子瑜主编·全国临床检验操作规程·中华人民共和国卫生部医政司编·(第四版)
15.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社,2012年第5版
15.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版
15.4试剂说明书。