超高效液相色谱_串联质谱法同时测定草莓和杨梅中35种杀菌剂残留

1 材料与方法
1． 1 仪器与试剂 Waters Xevo TQ 液相色谱 － 串联 质谱仪，配电喷雾电离源（ 美国 waters 公司） ； PL202 － L（ Ⅲ） 电子天平（ 瑞士 Mettler 公司） ； 组织匀浆仪（ 德 国 IKA 公司） ； 混合器（ 德国 IKA 公司） ； Milli － Q 超 纯水净化系统 （ 美国 Millipore 公司） ； N － EVAP 112 氮吹仪（ 美国 organonation associates． Jnc） ； 电热恒温 水浴锅 （ 上 海 浦 东 荣 丰 科 学 仪 器 有 限 公 司） ； Sigma 3 － 15 离心机（ 德国 SIGMA 公司） ； 微孔有机过滤膜 （ 0． 22 μm） 。乙腈（ HPLC 级，美国 Tedia 公司，批号： 1103531） ； 甲 醇 （ HPLC 级，德 国 Merck 公 司，批 号： 1690107325） ； 甲苯（ HPLC 级，美国 Tedia 公司，批号： 809905） ； 二氯甲烷（ AR 级，上海凌峰化学试剂有限公 司，批号： 20130905） ； 氯化钠（ AR 级，广东光华科技股 份有限公司，批号： 20131029） ； Bond Elut carbon / NH2 柱（ 800 mg /6 ml，美国 Aglient 公司，批号： 12252202） ； Strata NH2 柱（ 500 mg /6 ml，美国 phenomenex 公司，批 号： S209 － 86） ； QuECHERS 提取试剂包 （ 6． 0 g 硫酸 镁，1． 5 g 醋酸钠； 美国 phenomenex 公司，批号： 9983 － 1） ； QuECHERS 净化试剂包（ 150 mg硫酸镁，50 mg PSA，50 mg C18 ） ； 美国 phenomenex 公司，批号： 2013 － 0802 － 8911） ； 乙酸铵（ 色谱纯，美国 fisher 公司） ； 乙 酸（ 分析纯，浙江中星化工试剂有限公司） ； 农药标准 物质： 纯 度 不 低 于 95% ，购 自 德 国 Dr． Ehrenstorfer GmbH 或美国 sigma － aldrich 公司。 1． 2 方法 1． 2． 1 混合标准溶液配制 称取 35 种农药标准品 7 mg ～ 10 mg（ 精确至 0． 1 mg） ，分别置于棕色容量瓶 中，用 甲 醇 溶 解 并 稀 释 至 刻 度，配 成 质 量 浓 度 为
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中国卫生检验杂志 2015 年 5 月第 25 卷第 9 期 Chin J Health Lab Tec，May． 2015，Vol． 25，No． 9
量（ MRL） ［3］。尤其是日本，作为我国农产品出口的主 要国家，在 2006 年 5 月 29 日“肯定列表制度”实施 后，我国输日植物性农产品超标农药中杀菌剂类的比 例逐渐增加［4］。所以，杀菌剂残留已经成为国外限制 我国农产品出口的新一轮技术壁垒。目前我国已经 制定了 75 种杀菌剂在蔬菜水果中的残留限量标准， 但在草莓中只制定了 5 种杀菌剂的最高残留量，而杨 梅则没有杀菌剂残留的限制［5］。随着经济的发展，草 莓和杨梅的出口量呈上升趋势，因此开发一种简单快 速、准确稳定、可用于草莓和杨梅中多种杀菌剂残留 量检测的方法十分必要。
摘要： 目的 建立一种超高效液相色谱 － 串联质谱（ UPLC － MS / MS） 法同时测定草莓和杨梅中 35 种杀菌剂残留量的
分析方法。方法 用乙腈提取试样中的杀菌剂残留，提取液浓缩后，经氨基固相萃取小柱净化，以 Phenomenex XB － C18 （ 100 mm × 2． 1 mm，2． 6 μm） 为色谱柱，以甲醇和 5 mmol / L 乙酸铵 － 0． 1% 乙酸缓冲溶液为流动相进行梯度洗脱，在多
作者简介： 吴淑春（ 1982 － ） ，女，硕士，讲师，主要从事卫生理化检 验教学与科研研究。
方式能有效防虫害，大大减少了杀虫剂的使用，但却 不能防菌。草 莓 和 杨 梅 的 抗 病 性 较 差，易 患 病 害，故 杀菌剂使用较多，另外这 2 种水果都属于裸果，人们 习惯不清洗而直接食用，提高了人体摄入杀菌剂的危 险。杀菌剂虽 具 有 高 效、广 谱、低 毒、抵 抗 性 的 优 点， 但长期或大量使用，会在植物源性食品中残留，对人 体的危害不容忽视［1 － 2］。世界各国对杀菌剂残留问 题都很重视，如美国、日本、欧盟等许多国家或国际组 织均制订了杀菌剂在食品和农产品中的最高残留限
chromatography － tandem mass spectrometry
WU Shu － chun* ，YU Miao * Zhejiang Medical Advanced College，Hangzhou，Zhejiang 310053，China Abstract： Objective To establish a method for simultaneous determination of 35 fungicides in strawberry and Chinese bayberry （ Myrica rubra） by UPLC － MS / MS． Methods The fungicide residues were extracted from the samples by acetonitrile，cleaned － up with an amino SPE column and then analyzed using UPLC － MS / MS in multiple reaction monitoring （ MRM） mode with positive electrospray ionization． The chromatographic analysis was carried out on a Phenomenex XB － C18 （ 100 mm × 2． 1 mm， 2． 6 μm） column with methanol and 5 mmol / L ammonium acetate buffer solution （ contain 0． 1% acetic acid） as the mobile phases in gradient program，and quantified by matrix － matched external standard method． Results 35 fungicides were well separated． The linear range of the calibration curve was 2 μg / L － 1 000 μg / L，The limits of quantification （ S / N = 10） of the 35 fungicides were 0． 12 μg / kg － 3． 88 μg / kg and the limits of detection （ S / N = 3） were 0． 03 μg / kg － 1． 16 μg / kg． The recoveries of the fungicides spiked in strawberry and bayberry samples were 62． 61% － 130． 53% at the spiked levels of 10 μg / kg． The relative standard deviations （ RSDs） were 2． 1% － 9． 5% ． Conclusion The method is simple，time － saving and environmental friendly with high sensitivity and good reproducibility，as well as having practical application value for its low － cost and short － circle． Key Words： Solid Phase Extraction （ SPE） ； Ultra － performance Liquid Chromatography － tandem Mass Spectrometry （ UPLC － MS / MS） ； Fungicides； Strawberry； Chinese Bayberry （ Myrica Rubra）
目前，果蔬类食品中杀菌剂残留测定方法主要采 用液 相 色 谱 － 串 联 质 谱 法［6 － 9］、气 相 色 谱 － 质 谱 法［10 － 11］、气相色谱法和 高 效 液 相 色 谱 法 等［12 － 16］，但 文献所得方法仅能检测一种或少数几种杀菌剂，草莓 或杨梅中多种类杀菌剂的同时测定未见报道。本文 建立了一种固相萃取提取净化技术，以超高效液相色 谱 － 串联质谱（ UPLC － MS / MS） 法同时检测草莓和杨 梅中 35 种杀菌剂的残留量。
反应监测（ MRM） 模式下测定，基质匹配标准溶液外标法定量。结果 35 种杀菌剂得到良好的分离，方法的线性范围为
2 μg / L ～ 1 000 μg / L，检出限（ S / N = 3） 为 0． 03 μg / kg ～ 1． 16 μg / kg，定量限（ S / N = 10） 为 0． 12 μg / kg ～ 3． 88 μg / kg。在
10 μg / kg 的添加水平下，回收率为 62． 61% ～ 130． 53% ，相对标准偏差为 2． 1% ～ 9． 5% 。结论 实验结果表明，该方法
操作简便，耗时短，提取效果好，灵敏度高，准确性和稳定性好，应用于日常检测可大大降 固相萃取； 超高效液相色谱 － 串联质谱法； 杀菌剂； 草莓； 杨梅
0． 254 g / L ～ 0． 489 g / L 的各农药标准储备液。精密 量取各农药标准储备液适量于 50 ml 棕色容量瓶中， 配成质量浓度为 2 μg / L ～ 1 000 μg / L 的混合标准溶 液储备液，置于 4 ℃ 冰箱中保存。 1． 2． 2 样品处理 样品提取： 准确称取 25． 0 g 试样 （ 精确至 0． 01 g） 于 250 ml 烧杯中，加入 50 ml 乙腈， 在匀 浆 机 中 高 速 匀 浆 2 min 后 用 滤 纸 过 滤，收 集 40 ml ～ 50 ml 滤液于装有 5 g ～ 7 g 氯化钠的 100 ml 具塞量筒中，盖上塞子，剧烈振荡 1 min，在室温下静 置 30 min，使水相和乙腈相分层。样品净化： 从具塞 量筒中吸取 10． 0 ml 乙腈溶液于 50 ml 烧杯中，将其 置于 80 ℃ 水浴中氮吹至干，加入 2． 0 ml 甲醇 － 二氯 甲烷（ 5∶95，V / V） 溶解残渣，盖上铝箔，待净化。将 氨基柱用 4． 0 ml 甲醇 － 二氯甲烷（ 5∶95，V / V） 预洗， 当液面到达柱吸附层表面时，立即加入上述待净化溶 液，用 15 ml 离心管收集洗脱液，用 4． 0 ml 甲醇 － 二 氯甲烷（ 5∶95，V / V） 洗烧杯后过柱，并重复 1 次。将 离心管置于氮吹仪上，在 50 ℃ 水浴中氮吹蒸发至近 干，用甲醇 － 水（ 2 ∶3，V / V） 定容至 5 ml。在混合器 上混匀后，经 0． 22 μm 滤膜过滤，待测。 1． 2． 3 液 相 条 件 色 谱 柱： Phenomenex XB － C18 （ 100 mm × 2． 1 mm，2． 6 μm） 。流动相： 甲醇（ A） 和 5 mmol乙酸铵 － 0． 1% 乙酸缓冲溶液（ B） 。梯度洗脱 程序： 0 min ～ 2 min，10% A ～ 90% A； 2 min ～ 6． 5 min， 90% A； 6． 5 min ～ 6． 6 min，90% A ～ 10% A； 6． 6 min ～ 7． 5 min，10% A。流速： 0． 2 ml / min； 进样量： 5 μl； 柱 温： 35 ℃ 。 1． 2． 4 质谱条件 离子源： 电喷雾离子源； 离子源温 度： 150 ℃ ； 电离方式： ESI + ； 监测方式： MRM； 毛细管 电压： 3． 0 kV； 脱溶剂气温度： 500 ℃ ； 脱溶剂气流速： 800 L / h； 锥 孔 反 吹 气 流 速： 40 L / h； 碰 撞 气 流 速： 0． 15 ml / min； 定 量 方 式： 外 标 法。其 他 质 谱 条 件 如 表 1所示。