中药制剂理化鉴别的方法

3.雄黄（主含As2S2）
（1）氯化钡沉淀法（检出硫） As2S2+KClO3+4HNO3
[o]
2K3AsO3+H2SO4+Cl2↑+4NO↑
H2SO4+BaCl2 牙痛一粒丸
BaSO4↓（白）
（2）硫化氢反应（检出砷） 2As2S2+7O2 2As2O3+4SO2↑ As2O3+3H2O 2H3AsO3 2H3AsO3+3H2S As2S3(黄)+6H2O As2S3在盐酸中析出黄色沉淀，并溶于碳酸铵中
2.分离度
用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相
应的主斑点，应显示两个清晰分离的斑点。用 于限量检查和含量测定时，要求定量峰与相邻 峰之间有较好的分离度，除另有规定外，分离 度应大于1.0。
分离度（R）的计算公式为： R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离； d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1 及W2为相邻两峰各自的峰宽；
三、操作方法
取中成药的提取液点加于滤纸上或加入蒸发皿中， 臵紫外光灯（ 365nm ）下约 10cm 处观察所产生的荧 光。必要时可在供试品上加酸、碱或其它试剂，再观 察荧光及其变化。
四、注意事项
① 荧光强度较弱，故一般需在暗室中观察荧光。
② 供试液一般用毛细管吸取，少量多次点加在滤纸上，使 斑点集中且具有一定浓度。 ③ 紫外光对人的眼睛和皮肤有损伤，操作者应避免与紫外 光较长时间接触。
二、特点 升华法具有简便、实用等特点，由于升 华性仅为少数中药化学成分所具有且升华 物纯度较高，故该法专属性亦较好。
三、操作方法
大多采用微量升华法，少数使用坩埚法 或蒸发皿法，在此，仅介绍微量升华 。
六味地黄丸中冰片升华物
六味地黄丸中冰片升华物显微镜下观
六味地黄丸中冰片升华物香草醛浓硫酸显色
四、注意事项
《中国药典》（2005）新增中成药 （116种）鉴别方法
鉴别方法 薄层色谱 高效液相色谱 气相色谱 分光光度法 一般化学反应法 荧光鉴别法 微量升华法 显微鉴别法 应用品种 114 4 3 0 2 0 0 29 适用于含药粉的剂型 主要鉴别挥发性成分 说 明
第二节 一般化学反应法
（ General Chemical Reaction）
第四节 荧光鉴别法 （Fluorescence）
一、原理 荧光鉴别法是利用制剂中某些成分，如 黄酮类、蒽醌类、香豆素类等在可见光或 紫外光照射下能产生一定颜色荧光的性质， 对中药制剂进行鉴别。有的成分本身不具 荧光性，但加酸、碱处理后，或经其它化 学方法处理后也可产生荧光供鉴别用。
二．特点 本法操作简便、灵敏，具有一定的专 属性。例如大黄和土大黄 ，前者显棕色 至棕红色荧光，而后者显亮蓝色荧光， 很容易区分。
（七）矿物药
朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。 1.朱砂（主含HgS） 主要采用铜片反应。 HgS+2HCl+Cu→CuCl2+Hg（白 △↑）+H2S 天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定。 2.石膏、牡蛎、海螵蛸等 此类药物均富含钙盐，主要采用草 酸铵反应 。 CaSO4+(NH4)2C2O4→CaC2O4（白）↓+(NH4)2SO4 CaC2O4溶于盐酸，难溶于醋酸。 CaC2O4+2HCl→CaCl2+H2C2O4 止咳桔红口服液（石膏）、安胃片（海螵蛸）、龙牡壮骨颗 粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）
（二）黄酮类化合物 最多使用的检识反应为盐酸—镁粉反应，呈紫 红色。大山楂丸（山楂）、抗骨增生丸（淫羊 藿）、参茸保胎丸（黄芩）等。此外，黄芩提取 物采用二氯氧锆-盐酸显色反应进行检识。 （三）蒽醌类化合物 主要应用碱液反应（Borntrager反应），阳性反 应呈红色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流浸 膏。
A B
W1 d1
W2
d2
3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄 层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对 标准偏差(RSD) 应不大于3.0%；需显色后测量的相 对标准偏差应不大于5.0%。
（三）对照物的设臵
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的 单体）、对照药材和对照提取物三种。 对照物的设臵有四种方式： ①设臵一种或数种对照品 ②设臵对照提取物 ③设臵一种或数种对照药材 ④同时设臵对照品和对照药材 (“ 双对照” ) ，它要求
4As2S3+12(NH4)2CO3 4(NH4)3AsO3+4(NH4)3AsS3+12CO2↑
小儿惊风散等。
（八）动物药
常含有较多的蛋白质或氨基酸、故鉴别此类药物，
常使用茚三酮反应，正反应呈红紫色。 例如：龟龄集（鹿茸、海马、等）、参茸保胎 丸（阿胶、鹿茸）等。
四、操作方法
（1）供试液的制备（见前述）
3.易发生假阳性或假阴性反应
假阳性或假阴性反应克服方法如下：
①对样品进行预处理，除去干扰性成分，富集被检成分。 ②选用专属性较强的检测试剂。 ③必要时做阳性或阴性对照试验加以验证，保证其专属 性和灵敏度。
三、常用的一般化学反应 主要用于制剂中生物碱、黄酮类、蒽醌类、皂 苷、香豆素、萜类以及各种矿物类成分的鉴别 （一）生物碱 1. 碘化铋钾反应 产生红棕色沉淀 2. 碘化汞钾反应 产生类白色沉淀 3. 硅钨酸反应 产生白色沉淀 4. 苦味酸反应 产生黄色结晶性沉淀 需在酸性条件下进行。注意事先排除其它成分 的干扰。少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应， 而具有专属性较强的其它反应。
二、特点
（一）简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功
能，且采用共薄层对照分析法，故专属性亦较强。 （二）系统适用性试验。(05版药典新增) 1.检测灵敏度 2.分离度
3.重复性
1.检测灵敏度 主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品 溶液与稀释若干倍（10倍）的对照品溶液在规 定的色谱条件下，于同一块薄层板上点样、展 开、检视，后者应显示清晰的斑点。
七、应用实例
1.千柏鼻炎片 6.安胃片
2.小儿清热止咳口服液
3.茴香橘核丸
7.天王补心丹
8.牙痛一粒丸
4.地奥心血康胶囊
5.养阴清肺膏
9.中风回春片
第三节 升华鉴别法
（Sublimation）
一、原理 本法是利用某些成分的升华性，在一定 温度下将其从制剂中升华分离出来，并以 升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴 别的依据。
薄层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。
三、影响薄层色谱鉴别的主要因素
影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂
的性能和薄层板的质量、点样（原点）的质量、展 开剂的组成和饱和情况、对照品的纯度、展开的距 离、相对湿度和温度等。重点介绍展开剂、相对湿 度、温度和pH值的影响。
四、仪器与材料
（一）薄层板 1.市售薄层板（亦称预制薄层板）
① 升华时应缓缓加热，温度过高，易使药粉焦化，在载玻片上产 生焦油状物，影响对升华物的观察或检识。温度的控制可通过调整 酒精灯火焰与石棉板的间距来实现。 ② 样品粉末用量一般约0.5g，过少不易产生足够量的升华物。 ③ 可在载玻片上滴加少量水降温，促使升华物凝集析出。
④ 无金属片，可用载玻片代替。
五、应用实例（P58） (一) 万应锭的鉴别 （二）小儿惊风散的鉴别（反应机理） （三）明目地黄丸的鉴别
二、理化鉴别的特点 理化鉴别是以制剂药味中的指标性成分（主要为 有效成分或特征性成分）为检测对象，故可以更加
客观深刻地评价药品的真实性。对于液体制剂或其
它不含原料药粉的制剂，理化鉴别则显得为重要。
三、理化鉴别的方法
目前中国药典收载的理化鉴别方法有：一般 化学鉴别法、微量升华法、荧光鉴别法、分光光 度法、薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱 法等。 其中色谱法尤其是薄层色谱法得到广泛的应 用，这主要是由于色谱法具有分离分析双重功能， 从而大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属性，并 成为今后中药制剂鉴别的发展方向。
样品色谱图中的主斑点应与对照品和对照药材色谱图中的
有关斑点相一致，从而大大提高了薄层色谱鉴别法的专属 性和整体性，可有效地检出药品是否使用了假冒药材.
（四）TLC已广泛用于中药材及其制剂的检验，成为中药
鉴别的重要方法和鲜明特色。
（五）中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，少数
使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
五、应用实例（P59）
（一）元胡止痛片 （二）五味麝香丸
（三）热炎宁颗粒
第五节 薄层色谱鉴别法
（Thin Layer Chromatography TLC）
一、原理
基于相同物质在同一的色谱条件下，表现出相同的色谱 行为这一基本规律，在同一块薄层板上点加供试品和对照 物，在相同条件下展开，显色检出色谱斑点后，将所得供 试品与对照物的色谱图进行对比分析，从而对药品进行定 性鉴别。
一、原理
一般化学反应法是利用检测试剂与制剂中的 指标性成分发生化学反应，根据所产生的颜 色、沉淀或气体等现象，来判断某些成分或 某些药味的有无。由此可见，所谓一般化学
反应法即通常所说的显色反应和沉淀反应。
二．特点
1.一般化学反应法具有操作简便，适用性较强 等特点。
2. 其否定功能往往强于肯定功能 , 专属性较差。

（四）皂苷 常用的定性鉴别反应有： ① 泡沫反应 样品水溶液振摇后，产生持久性泡 沫。 ② 醋酐—浓硫酸反应 甾体皂苷呈现污绿色，三 萜皂苷呈现红、红紫色。 ③ 浓硫酸反应 呈现红、红紫色。 ④ 三氯化锑或五氯化锑反应 氯仿液呈紫兰色。 ⑤ 氯仿—浓硫酸反应 氯仿层出现红色或兰色， 并具绿色荧光。 例：地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯蓣的 提取物）、养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。
除另有规定外，一般要求使用市售薄层板。