茚三酮 显色剂
茚三酮鉴定氨基酸概述
茚三酮鉴定氨基酸概述1.茚三酮简介茚三酮(Ninhydrine),又称水合茚三酮,水合茚满三酮,为白色或浅黄色结晶性粉末。
茚三酮是一种用于检测氨或者一级胺和二级胺的试剂。
当与这些游离胺反应时，能够产生深蓝色或者紫色的物质，叫做Ruhemann紫。
茚三酮常用来检测指纹，这是由于指纹表面所蜕落的蛋白质和肽中含有的赖氨酸残基，其上的一级胺被茚三酮检测。
在室温条件下，它是一种白色的固体物质，溶于乙醇和丙酮。
茚三酮可以看作是是二氢茚-1，2，3-三酮的水合物。
1901 年,茚三酮被成功研制出来以后主要用于生物医学领域,1954年,瑞典科学家Oden 和Hofsten 将其应用于潜在汗液手印的显现。
茚三酮与汗液中的氨基酸、多肽、蛋白质等发生反应, 生成蓝紫色的手印纹线。
茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。
除去脯氨酸之外的大多数氨基酸，水解之后可与茚三酮反应。
水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。
因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。
其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。
在分析化学反应的薄层色谱（TLC）中，它可以用于检测所有的胺类，氨基甲酸酯类，在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。
2.实际运用2.1指纹鉴别汗液手印中的汗液成分绝大多数是水(约99%以上),其余是少量的无机物和有机物,有机物中包括了人体所含有的各种氨基酸。
茚三酮与手印汗液中的氨基酸发生显色反应而现出手印。
二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO2的羧基碳。
在考古研究中，这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析，以帮助重现古代生物的食物结构。
用一种标记底物处理的土壤，随后利用茚三酮与氨基酸的反应释放羧基胺，可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。
这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌（也叫做硝化细菌）利用土壤中的尿素作为碳源。
法医常用茚三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。
手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面，也即含有氨基酸的指纹，经过茚三酮处理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色。
氨基酸检测试剂盒(茚三酮比色法)
氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：氨基酸(Amino acid ，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。
动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下，能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans 紫)，其吸收峰在波长570nm 处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比。
该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按植物组织：AA Lysis buffer=的比例加入AA Lysis buffer 匀浆或研磨，用去离子水稀释至，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于氨基酸的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer 进行适当匀浆，离心5min ，留取上清即为氨基酸粗提液，4℃保存备用，用于氨基酸的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer 进行恰当的稀释。
2、 配制茚三酮工作液: 取适量的茚三酮显色液、AAAssaybuffer ，按茚三酮显色液：AAAssaybuffer=的比例混合，即为茚三酮工作液。
4℃避光密闭保存，2周有效。
3、 配制维生素C 工作液: 取出1支维生素C ，准确溶解于10ml 去离子水，混匀。
4℃预冷备用。
-20℃保存1周有效。
注意：该试剂盒提供的维生素C 及其配制的工作液为过编号 名称TC2153 100T Storage试剂(A): 氨基酸标准(50μg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): AALysisbuffer 250ml RT 试剂(C): 茚三酮显色液 120ml RT 避光 试剂(D):AAAssaybuffer 10.5ml RT 试剂(E): 维生素C 2支RT 使用说明书1份量。
脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)
加入物(ml)
1
2
3
4
5
6ห้องสมุดไป่ตู้
脯氨酸标准(100μg/ml)
0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
蒸馏水
0.09 0.08 0.07 0.06 0.05 0.04
脯氨酸含量(μg)
1
2
3
4
5
6
4、 PRO 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注 意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进 行测定，样品的检测最好能设置平行管。
积。 4、 所测样本的浓度过高，应用 PRO Lysis buffer 稀释样品后重新测定。
有效期：6 个月有效。
相关：
编号 DF0135 NR0001 PS0013 TO1013
名称 多聚甲醛溶液(4% PFA) DEPC 处理水(0.1%) RIPA 裂解液(强) 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)
加入物(ml)
空白管 标准管
蒸馏水
0.1
—
系列脯氨酸标准(1-6 号管)
—
0.1
脯氨酸提取液
—
—
PRO Assay buffer
1.5
1.5
茚三酮显色液
1.5
1.5
混匀，沸水浴，溶液呈红色。
测定管 — — 0.1 1.5 1.5
5、PRO 测定：迅速冷却加入 PRO 萃取液，振摇 30s，静置片刻，取上清液转移至新的离 心管或试管，离心，取上清液备用。以空白调零，分光光度计(1cm 光径比色杯)检测标准 管 520nm 处吸光度；以 PRO 萃取液调零，分光光度计(1cm 光径比色杯)检测测定管 520nm 处吸光度。
茚三酮法测氨基酸
茚三酮法测氨基酸 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT茚三酮显色法测定氨基酸的含量一．原理：凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。
第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。
二．仪器：721型分光光度计台天平减压蒸馏器干燥容量瓶移液枪烧杯试管架试管水浴锅。
三．药品：（1）标准氨基酸溶液：配制成L 溶液（2），2mol/L 醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L 醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L 乙酸混合而成。
用pH 检查校正。
（3）茚三酮显色液：称取170mg 茚三酮和30mg 还原茚三酮，用20mL 乙二醇甲醚溶解（4）60％乙醇。
（5）样品液：每毫升含～50μg 氨基酸。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g 茚三酮溶于15～25mL 热蒸馏水中，加入活性炭，轻轻搅拌。
加热30min 后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL 冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取茚三酮，用沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将维生素C 用25mL 温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C 溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3 次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL 乙二醇甲醚中加入5g 硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
四、操作步骤1．标准曲线的制作分别取L 的标准氨基酸溶液0，，，，，于试管中，用水补足至1mL。
茚三酮显色原理
茚三酮显色原理
茚三酮（Indaneone）显色原理是通过茚三酮与亚硝酸钠（NaNO2）和一定条件下的氢酸反应，生成显色的偶氮染料。
该反应的显色原理主要如下：
首先，在盛有茚三酮的试管中，加入适量的亚硝酸钠溶液。
亚硝酸钠是一种常用的弱氧化剂，可以与茚三酮发生氧化反应。
随后，在试管内加入稀盐酸（HCl）溶液，调节反应环境酸性。
氢酸的加入可以加速反应的进行，并且使得反应中间体更容易形成和稳定。
在适宜的温度和反应时间下，亚硝酸钠与茚三酮反应，产生一个中间体。
这个中间体是不稳定的，可能通过裂解或另外的反应进一步分解。
然而，在酸性条件下，这个中间体可能会与另一个茚三酮分子发生偶氮偶合反应，形成一个稳定的偶氮染料。
该偶氮染料通常呈红色或橙色，可以通过目视或分光光度计等方式进行检测。
这个颜色的出现是茚三酮与亚硝酸钠反应得到的标志，可以用于检测亚硝酸盐的含量。
亚硝酸盐常见于食品中，其含量过高可能对人体造成危害，因此茚三酮显色原理在食品安全领域有着广泛的应用。
常用显色剂配制
常用显色剂配制一、通用显色剂1．碘，检查一般有机物。
碘蒸气对很多化合物显黄棕色。
在一个密封的玻璃缸内予先放进碘片，并使缸内空气被碘蒸气饱和状态，将薄层或纸层放进缸内数分钟即可呈色。
有时在缸内放一盛水的小杯，减少缸内的湿度，可以提升呈色的灵敏度。
2．硫酸：通用。
浓硫酸：水（1：10），或10%硫酸的乙醇溶液。
3．四唑兰试剂：还原性物质在室温或微加热时显紫色。
溶液i：0.5%四唑兰甲醇溶液溶液ii：6n氢氧化钠溶液临用前溶液i和溶液ii等量混合。
4．铁氰化钾—三氯化铁试剂：还原性物质显蓝色，再喷2n盐酸溶液，则蓝色更深。
二、生物碱显色剂1．改良碘化铋钾试剂：生物碱和某些含氮化合物显橙红色。
挑7.3克碘化铋钾，冰醋酸10毫升，搅拌60毫升。
2．碘—碘化钾试剂：生物碱显棕褐色。
碘1克和碘化钾10克溶50毫升水中，冷却，加冰乙醇2毫升，用水黧到100毫升。
3．硅钨酸试剂（沉淀试剂）5克硅钨酸溶100毫升水中，提盐酸至ph2左右。
4．苦味酸试剂（沉淀试剂）1克苦味酸溶100毫升水中。
5．鞣质试剂（沉淀试剂）1克鞣酸提乙醇1毫升熔化后，再搅拌至10毫升。
6．王水浓盐酸：硝酸（1：3）三、苷类显色剂1．糖的检出试剂（1）苯胺—邻苯二甲酸试剂：擦后105~110℃烤10分钟，糖显出红棕色（检测还原成糖）[注]苯胺—邻苯二甲酸试剂的制备：苯胺0.93克，邻苯二甲酸1.66克，溶于水饱和正丁醇100ml中。
（2）α—萘酚—硫酸试剂：擦后100℃烤3—6分钟，多数糖呈圆形蓝色，鼠李糖呈圆形橙色。
[注]试剂制备：15%α—萘酚乙醇溶液21ml，浓硫酸13ml，乙醇87ml及水8ml混合后使用。
（3）fehing试剂：本品分甲液与乙液，应用领域时挑等量混合，检查还原成糖。
甲液：结晶硫酸铜6.23克，加水至100毫升。
乙液：酒石酸钾钠34.6克及氢氧化钠10克，搅拌至100毫升。
（4）百里酚硫酚剂：喷后120℃烤15—20分钟，多数糖在灰白色背景上显暗红色，继续加热则变成浅紫色。
氨基酸分离鉴定中显色剂为什么不能用茚三酮水溶液
氨基酸分离鉴定中显色剂为什么不能用茚三酮水溶液茚三酮根很多种氨基酸都显示紫色没办法分离鉴定呀茚三酮使氨基酸显色原理α氨基酸与茚三酮在弱酸性溶液中共热，反应后经失水脱羧生成氨基茚三酮，再与水合茚三酮反应生成紫红色，最终为蓝色物质。
脯氨酸等仲胺氨基酸与茚三酮反应生成黄色物质。
该反应可广泛用于各种氨基酸的定性或定量测定。
阿尔法氨基酸与水合茚三酮一起加热，经氧化脱氨变成相应的阿尔法酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮被还原成还原成还原型茚三酮。
在弱酸性溶液中，氨、还原型茚三酮，和另一分子水合茚三酮反应，缩合成蓝紫色物质。
注意事项（1）被分离物质在该溶剂系统中Rf在0.05～0.8之间，各组分之Rf值相差最好能大于0.05，以免斑点重叠。
（2）溶剂系统中任一组分与被分离物之间不能起化学反应。
（3）被分离物质在溶剂系统中的分配较恒定，不随温度而变化，且易迅速达到平衡，这样所得斑点较圆整。
本实验采用八种混合氨基酸为样品，用酸性和碱性两种溶剂进行双向层析，以茚三酮为显色剂，可获得分离清晰的层析图谱，如图3.2所示。
注意事项（1）烘箱加热温度不可过高，且不可有氨的干扰，否则图谱背景会泛红。
（2）第一相溶剂最好在使用前再按比例混合，否则会引起酯化，影响层析效果。
（3）整个实验操作应戴手套进行。
思考题1．酸性与碱性溶剂系统对氨基酸极性基团的解离各有何影响？2．为什么展层时要用两种溶剂系统？性质：又称比移值。
是色谱法中表示组分移动位置的一种方法的参数。
定义为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。
在一定的色谱条件下，特定化合物的R f值是一个常数，因此有可能根据化合物的R f值鉴定化合物请问薄层层析时，Rf值在什么范围时，分离效果比较准我帮你查了相关书籍结合我的实验经验，薄层层析采用硅胶G-CMC板，通用展开系统：无水乙醇-苯（1：4）；苯-氯仿（1：3）；丙酮-甲醇（1：1）。
先用无水乙醇-苯（1：4）展开，Rf值如果>0.8，改用苯-氯仿（1：3），若Rf值如薄层层析时为甚麼Rf值要在0.2~0.8之间Rf值的大小与样品的结构、性质、溶剂系统等有关薄层层析时Rf值要在0.2~0.8之间主演是考虑的经济性，在效果比较好的情况下保持展开剂的用量少蛋白质的性质实验From： Update：2006-12-01【目的和要求】1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。
茚三酮鉴定氨基酸概述
茚三酮鉴定氨基酸概述1.茚三酮简介茚三酮(Ninhydrine),又称水合茚三酮,水合茚满三酮,为白色或浅黄色结晶性粉末。
茚三酮是一种用于检测氨或者一级胺和二级胺的试剂。
当与这些游离胺反应时，能够产生深蓝色或者紫色的物质，叫做Ruhemann紫。
茚三酮常用来检测指纹，这是由于指纹表面所蜕落的蛋白质和肽中含有的赖氨酸残基，其上的一级胺被茚三酮检测。
在室温条件下，它是一种白色的固体物质，溶于乙醇和丙酮。
茚三酮可以看作是是二氢茚-1，2，3-三酮的水合物。
1901 年,茚三酮被成功研制出来以后主要用于生物医学领域,1954年,瑞典科学家Oden 和Hofsten 将其应用于潜在汗液手印的显现。
茚三酮与汗液中的氨基酸、多肽、蛋白质等发生反应, 生成蓝紫色的手印纹线。
茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。
除去脯氨酸之外的大多数氨基酸，水解之后可与茚三酮反应。
水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。
因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。
其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。
在分析化学反应的薄层色谱（TLC）中，它可以用于检测所有的胺类，氨基甲酸酯类，在经过充分热处理后可以检测酰胺类物质。
2.实际运用2.1指纹鉴别汗液手印中的汗液成分绝大多数是水(约99%以上),其余是少量的无机物和有机物,有机物中包括了人体所含有的各种氨基酸。
茚三酮与手印汗液中的氨基酸发生显色反应而现出手印。
二氧化碳中的碳原子来源于氨基酸当茚三酮与氨基酸反应时可以释放CO2的羧基碳。
在考古研究中，这个反应用于释放古老骨骼中羧基碳用于稳定同位素分析，以帮助重现古代生物的食物结构。
用一种标记底物处理的土壤，随后利用茚三酮与氨基酸的反应释放羧基胺，可以证明这种底物是否被吸收进微生物蛋白质。
这种方法成功的发现了一些氨氧化细菌（也叫做硝化细菌）利用土壤中的尿素作为碳源。
法医常用茚三酮溶液分析诸如纸张等多孔表面上的潜指纹。
手指所分泌的细微汗液聚集于独特的手指纹路表面，也即含有氨基酸的指纹，经过茚三酮处理可以将氨基酸指尖纹路变为可见的紫色。
茚三酮显色原理
茚三酮显色原理茚三酮是一种常用的显色试剂，它在分析化学中具有广泛的应用。
茚三酮显色原理是指茚三酮与金属离子形成络合物而产生显色反应的化学过程。
茚三酮显色原理的研究和应用对于分析化学领域具有重要意义。
茚三酮是一种含氧杂环化合物，它具有较强的络合能力。
当茚三酮与金属离子形成络合物时，会发生颜色的变化。
这是因为金属离子与茚三酮形成的络合物具有不同的电子结构，导致吸收和反射光线的特性发生改变，从而产生显色反应。
茚三酮显色原理的具体过程可以用化学方程式表示。
以铁离子为例，茚三酮与铁离子形成络合物的化学方程式如下：Fe3+ + 3C10H7COCH3 → Fe(C10H7COCH3)3。
在这个化学方程式中，茚三酮分子中的羰基与铁离子形成了络合物。
这种络合物的形成导致了茚三酮分子中的π电子结构发生改变，从而产生了显色反应。
茚三酮显色原理的应用非常广泛。
在分析化学中，茚三酮可以用于检测和分离金属离子。
通过茚三酮显色原理，可以对金属离子进行定性和定量分析，从而实现对金属离子的快速检测和分离。
此外，茚三酮显色原理还可以应用于环境监测、食品安全检测等领域。
除了在分析化学中的应用，茚三酮显色原理还在其他领域具有重要意义。
例如，在生物医学领域，茚三酮显色原理可以用于生物标记和细胞成像。
通过茚三酮与金属离子形成的络合物，可以实现对生物样品中金属离子的检测和成像，为生物医学研究提供了重要的工具和方法。
总之，茚三酮显色原理是一种重要的化学反应过程，具有广泛的应用前景。
通过对茚三酮与金属离子形成络合物的研究，可以实现对金属离子的检测、分离和成像，为分析化学、生物医学等领域的研究和应用提供了重要的支持和帮助。
茚三酮显色原理的深入研究和应用将进一步推动分析化学和生物医学领域的发展，为人类健康和环境保护做出更大的贡献。
茚三铜反应
茚三酮反应
ninhydrin reaction
定义：
2，2-二羟基-1，3-茚三酮与氨基酸、肽类或蛋白质的自由α氨基或其他氨基化合物所产生的一种可定量的显色反应。
所呈现的颜色随反应的条件(酸度、温度、盐浓度、铜、镉离子等)不同而异。
用于氨基酸和肽的层析及定量测定。
茚三酮反应，即：所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质。
此反应十分灵敏，根据反应所生成的蓝紫色的深浅，在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量，也可以在分离氨基酸时作为显色剂对氨基酸进行定性或定量分析。
在法医学上，使用茚三酮反应可采集嫌疑犯在犯罪现场留下来的指纹。
因为手汗中含有多种氨基酸，遇茚三酮后起显色反应。
茚三酮 显色剂
茚三酮中文名称：苯并戊三酮，茚三酮英文名称：Ninhydrin分子量：160.13CAS RN：485-47-2熔点：251℃密度: 0.86性状：本试剂近似为白色结晶,或浅黄色结晶粉末,微溶于乙醚及三氯甲烷,100℃以上变为红色。
特性反应：跟酶类或者多肽在加热状况下发生显紫色反应。
作用茚三酮是一个有机化合物，被广泛用于检测氨、一级和二级胺，尤其是氨基酸。
氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条件下共加热时，氨基酸被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮水合物被还原，其还原物可与氨基酸加热分解产生的氨结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化合物，称为罗曼紫（Ruhemann's purple）。
此化合物最大吸收峰在570nm波长处。
由于此吸收峰的大小与氨基酸释放的氨量成正比，因此可作为氨基酸的定量分析方法法医学上这个反应被用于鉴定指纹。
茚三酮反应（Kaiser鉴定）也可用来在固相接肽时检验脱保护基是否已经完成，鉴定和比色法分离氨基酸以及鉴定铵离子（呈紫色）。
茚三酮与氨基酸反应生成蓝紫色化合物，但pro，羟-pro反应时呈黄色。
茚三酮用于脯氨酸含量的测定当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸的含量的高低。
在520nm 的波长下比色，从标准曲线（用脯氨酸标准溶液制得）上查出(或用回归方程计算)脯氨酸的含量。
①茚三酮检出物：氨基酸、胺与氨基糖类。
溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。
方法：喷后于110oC加热。
结果：呈红紫色斑点。
茚三酮对一级二级的胺显色肯定没问题的，三级胺有些可以，酰胺应该也没问题的，配制：1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸；显色的时候板子浸湿，用纸擦一下多余液滴，再用电热枪（电吹风太弱了）吹出斑点，显色因为氨基酸的不同而显示不同的紫色黄色等等，你想检测伯胺的话，肯定没有问题的！配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸茚三酮不是太好溶解，需要多搅拌才行。
茚三酮显色剂配制注意事项
茚三酮显色剂配制注意事项茚三酮是一种可用作显色剂的化学试剂，常用于生化实验中用于检测蛋白质和核酸。
下面是茚三酮显色剂配制的注意事项。
第一，茚三酮显色剂的配制应在实验室中进行。
实验者应戴好实验手套和安全眼镜，确保安全操作。
第二，茚三酮显色剂的配方是将其与溶剂混合。
常见的溶剂包括甲醇、乙醇和二甲基亚砜等。
选择合适的溶剂应根据实验的需要和茚三酮的溶解性。
第三，需要记住茚三酮具有一定的毒性，需要注意避免直接接触与吸入。
在配制和使用过程中，应当采取良好的通风措施和防护措施，避免对人体造成危害。
第四，茚三酮显色剂的配制过程中应尽量避免光照。
茚三酮容易受到光照的影响，会降解或失去显色能力。
为了保持茚三酮的稳定性和显色效果，应在阴暗的条件下进行配制和保存。
第五，茚三酮显色剂的配制应根据实验需要确定浓度。
通常情况下，茚三酮的浓度为0.1%至0.5%。
浓度的选择应考虑到样品的特点，如蛋白质含量或核酸含量的多少。
第六，茚三酮显色剂的配制过程中应注意搅拌均匀。
将茚三酮加入溶剂中后，通过轻轻摇晃或搅拌均匀，以确保茚三酮充分溶解。
如果有大量沉淀或固体残留，应将其过滤或离心后再使用。
第七，茚三酮显色剂的配制完成后，应保持其干燥和密封。
可以使用暗瓶或铝箔包装将茚三酮保存在阴暗的地方。
暴露在空气中会使茚三酮氧化，降低其显色效果。
第八，茚三酮显色剂的配制后应该立即使用或冷藏保存。
因为茚三酮会随着时间的推移而失去显色能力，所以最好在配制后的24小时内使用。
第九，茚三酮显色剂在使用时需谨慎操作。
在加入茚三酮显色剂到样品中之前，应先将样品用溶液(如甲醇或乙醇)处理，以便茚三酮与样品充分接触。
总之，茚三酮显色剂的配制是生化实验中常用的过程。
在配制过程中，需要注意安全操作、选择合适的溶剂和浓度、避免光照、搅拌均匀以及保存等方面的注意事项，以保证茚三酮显色剂的质量和显色效果。
茚三酮显色蛋白质含量测量
茚三酮显色蛋白质含量测量蛋白质含量测量一、实验目的 1(学会各种蛋白质含量的测定方法。
2.了解各种测定方法的基本原理和优缺点。
二、实验原理 1. 考马斯亮兰法(Bradford 法) 考马斯亮兰法(Bradford法)，是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。
这种蛋白质测…当孙杨第一个到达终点时，整个游泳馆沸腾了～矗立在水中的孙杨紧握双拳，击打着水面，口中发出野兽一般的咆哮～那一刻，他征服了我，也征服了全世界～真正认识孙杨，是在2012年的伦敦奥运会上。
那场宏壮的体育盛宴点燃了全世界，即使平时不太关注体育的…在网上搜索了一半天，看到的都是亚克力制品有多少种，做什么最适合，在哪方面可以发挥最大的效果，承认亚克力制品作为一种新材料的出现，其中的很多性能超越以往的材料，而且节省成本，但是任何一种事物不可能是完美的，总会有缺陷。
亚克力制品也不例外，今天集中说说…1蛋白质含量测量一、实验目的1(学会各种蛋白质含量的测定方法。
2.了解各种测定方法的基本原理和优缺点。
二、实验原理1. 考马斯亮兰法(Bradford法) 考马斯亮兰法(Bradford法)，是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。
这种蛋白质测定法具有超过其他的突出优点，因而正在得到广泛的应用。
这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
考马斯亮兰G-250染料(如图)，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置( max)，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。
经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。
在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
Bradford法的突出优点是: (1)灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1 g。
这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质,染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry 法要大的多。
茚三酮显色原理
茚三酮显色原理
茚三酮是一种常用的有机合成试剂，其显色原理在化学实验中应用广泛。
茚三
酮显色原理是指茚三酮与醛类化合物在酸性条件下发生显色反应的化学原理。
茚三酮显色原理的应用领域涉及有机合成、药物化学、生物化学等多个领域，具有重要的理论和实际意义。
在茚三酮显色原理中，茚三酮与醛类化合物在酸性条件下会发生显色反应。
具
体来说，当茚三酮与醛类化合物在酸性条件下混合后，会发生巯基与醛基之间的缩合反应，生成有色产物。
这一反应是以茚三酮中的α-羰基与醛类化合物中的羰基
之间的亲核加成反应为基础的。
而在酸性条件下，茚三酮中的羰基会发生质子化，从而增强其亲核加成的活性，促进与醛类化合物的反应。
最终，产生的有色产物可以通过颜色深浅来判断反应的进行程度，从而实现对醛类化合物的检测和定量分析。
茚三酮显色原理的应用具有重要的意义。
首先，在有机合成领域，茚三酮显色
原理可以用于醛类化合物的检测和定量分析，为有机合成反应的控制和优化提供了重要的手段。
其次，在药物化学领域，茚三酮显色原理可以用于药物中醛类化合物的检测和质量控制，保证药物的质量和安全性。
此外，在生物化学领域，茚三酮显色原理也可以用于生物样品中醛类化合物的检测，为生物学研究提供了重要的技术支持。
总之，茚三酮显色原理是一种重要的化学反应原理，其应用涵盖了有机合成、
药物化学、生物化学等多个领域，具有重要的理论和实际意义。
通过对茚三酮显色原理的深入研究和应用，可以为相关领域的科学研究和工程技术提供重要的支持，推动相关领域的发展和进步。
各种显色剂及配制方法和显色原理
各种显色剂及配制方法1、碘：广谱显色剂：不饱和或者芳香族化合物 配制方法 ：在100ml 广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。
或者在瓶中，加入10g 碘粒，30g 硅胶 例如反应：Bu+CCl 3COCl2、紫外灯：含共厄基团的化合物，芳香化合物HCO 3H+OHOCHOH SO O3. 稀硫酸 糖类 4、氯化铁： 苯酚类化合物配制方法 ：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.苯酚会和氯化铁发生显色反应，原理如下用Ar-OH 表示苯酚,反应如下: 6Ar-OH + FeCl3 → [Fe(OAr)6]3- + 6H+ + 3Cl- 其中,[Fe(OAr)6]3-为紫色.OH F2OHFBrCS 2O FBrMe SO5、桑色素(羟基黄酮) ： 广谱, 有荧光活性配制方法 ：0.1% 桑色素+甲醇6、茚三酮 ：一般显蓝色或紫色(脯氨酸、羟基脯氨酸生成黄色） 与半胱氨酸紫红色然后无色。
氨基酸配制方法 ：1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸Q ：如何判断化合物B 的存在？NH 2O OH (Boc)2ONHBoc O OH AB7、二硝基苯肼(DNP) ：醛和酮配制方法：12g 二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸 + 80mL 水 + 200mL 乙醇NO 2NHNH 2NO 2R 2R 1O NO 2NHNNO 2R 128、香草醛(香兰素)： 广谱(甾体类)配制方法 ：15g 香草醛 + 250mL 乙醇 +2.5mL 浓硫酸HO OHO香草醛9、高锰酸钾：含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛配制方法：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH + 200mL 水. 使用期3个月10、溴甲酚绿：羧酸，pKa<=5.0配制方法：在100ml乙醇中，加入0.04g溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH水溶液，刚好出现蓝色即至。
溴甲酚绿溴甲酚绿是非水滴定中常用的酸碱指示剂（溶于无水乙醇中配制），在pH=3.8时呈黄色，pH=5.4时呈蓝绿色，pH=4.5时开始有颜色的明显变化11、钼酸铈：广谱配制方法：235 mL 水 + 12 g 钼酸氨 + 0.5 g 钼酸铈氨 + 15 mL 浓硫酸12、茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1：广谱配制方法：135 乙醇 + 5 mL 浓硫酸 + 1.5 mL of 冰醋酸 + 3.7 mL 茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.13、茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2：萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水 (1:10:20:80)14、磷钼酸(PMA)：广谱配制方法：10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇物质的颜色吸收光颜色波长（nm）黄绿紫400-450。
茚三酮显色法测定赖氨酸含量
■ L-赖氨酸的化学名称为L-2,6-二氨基己酸或α，ε-二 氨基己酸，属于单斜晶系，熔点为263℃，比旋光度是 +21°，难溶于醇和醚，易溶于水，等电点为9.59。游离的 L-赖氨酸具有很强的呈盐性，极易吸收空气的CO2生成碳酸 盐，故一般商品是以L-赖氨酸盐酸盐的形式存在。L-赖氨 酸盐酸盐的化学组成为C6H15O2N2Cl或C6H14O2N2·HCl，其相 对分子量为182.64，化学性质稳定，为无色晶体，几乎无 味，易溶于水，难溶于醇和醚，在25℃的水中溶解度为 793g/L。
一、茚三酮显色法测定赖氨酸含量
பைடு நூலகம்3.操作步骤
（1）绘制标准曲线 准确吸取已配好的标准浓度系列的亮氨酸溶液各0.5mL,
分别放入5支试管中，每种浓度做3个重复。再取一支试管加 入0.5mL蒸馏水做空白对照。向每支试管中各加入0.5mL的4 ％碳酸钠溶液和2mL茚三酮试剂（头一天配好的），混匀， 在80℃恒温水浴上保温30min。取出后，立即放入冷水浴中 冷却3min，然后向每管内加入5mL的95％乙醇，摇匀，在分 光光度计上500nm波长处进行比色，以空白做对照，读取吸 光度。以吸光度值为纵坐标，亮氨酸浓度为横坐标，绘出标 准曲线，并求出曲线的斜率。
10mL8％的甲酸，最后加水到100mL ■ 茚三酮试剂：称取1lg茚三酮和1g氯化镉(CdCl2)，加入25mL
上述缓冲溶液和75mL乙二醇，室温下放置一天，第二天使用。 若出现沉淀，则过滤后使用。注意该溶液不能现用现配，一定 要配制好后第二天使用，也不宜放置过久 ■ 4％和2％无水碳酸钠溶液：各50mL ■ 标准亮氨酸溶液：准确称取25mg亮氨酸，加数滴稀盐酸，待 溶解后定容至50mL，该溶液亮氨酸浓度为500μg／mL。准确 吸取上述母液1、3、5、7、9mL，分别稀释至25mL，待用 ■ 722型分光光度计、水浴锅
茚三酮反应
反应原理：参考资料•中文名称：苯硑戊三酮，茚三酮英文名称：NinhydrinNinhydrin (DE)1,2,3-Trioxohydrinden Hydrat (DE)1,2,3-Indantrione1,2,3-Triketohydrindene1H-Indene-1,2,3-trione2,2-Dihydroxy-1H-indene-1,3(2H)-dione分子式：C9H6O4分子量：178.14CAS RN：485-47-2熔点：251℃密度: 0.86特性反应：跟酶类或者多肽在加热状况下发生显紫色反应。
•含量不少于95.0% 净重5g•白色或淡黄色结晶或结晶性粉末•~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~•由于热敏纸（一种对热敏感的纸，如传真纸是其中一种，译者注）在信用卡收据上广泛使用，在热敏纸上显现潜指纹成为警方需解决的突出问题。
众所周知，茚三酮能与指纹汗液中的氨基酸反应，是在多孔表面显现潜指纹的最早方法。
然而，一些热敏纸在使用常规的茚三酮溶液处理时出现对热敏感的正面背景颜色变黑的现象，结果使得收据上的指纹信息受到损毁。
•目前，在热敏纸上显现潜指纹可采用的方法有：１、使用茚三酮衍生物替代茚三酮；２、茚三酮夹心法（用两张含干茚三酮的吸墨纸将热敏纸夹在中间，加压并保持数日）；３、二甲氨基苯甲醛烟熏法；４、通过电子探测微量分析仪测绘潜指纹法；５、对新鲜潜指纹使用碘熏法。
•本文介绍的方法是通过降低气压使茚三酮升华，无需溶剂显现热敏纸上的潜指纹。
茚三酮的分子量为１７８．１４，理论上可以从固相直接转化为气相。
已有文献尚没有关于茚三酮的升华和气体分压试验的报道，除了个别文献提及茚三酮在分解时熔点为２４１℃，有人在常压下曾使用茚三酮烟熏法。
••一、试验设备及方案•整个试验在一个边长为５０ｃｍ的立体真空箱进行。
真空箱设一个玻璃前门，内部有一个可控温的热源，直径为５ｃｍ，位于距真空箱底部上方１０ｃｍ处。
各种显色剂的显色目标物及其配制方法
各种显色剂的显色目标物及其配制方法：1、碘：主要针对不饱和或者芳香族化合物，配制方法：在100ml广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。
或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅胶；2、紫外灯：主要针对含共厄基团的化合物，芳香化合物；3、硫酸铈：主要针对生物碱，配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液；4、氯化铁：主要针对苯酚类化合物，配制方法：1% FeCl3+50%乙醇水溶液；5、桑色素(羟基黄酮) ：主要针对广谱、有荧光活性得化学物质，配制方法：0.1%桑色素+甲醇；6、茚三酮：主要针对氨基酸类化合物，配制方法：1.5g 茚三酮+100mL正丁醇+3.0mL醋酸；7、二硝基苯肼(DNP)：主要针对醛和酮类化合物，配制方法：12g二硝基苯肼+ 60mL浓硫酸+80mL水+200mL乙醇；8、香草醛(香兰素)：广谱，配制方法：15g香草醛+250mL乙醇+2.5mL浓硫酸；9、高锰酸钾：主要针对含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛，配制方法：1.5g KMnO4+10g K2CO3 +1.25mL10%NaOH +200mL水，使用期3个月；10、溴甲酚绿：主要针对羧酸，pKa≤5.0，配制方法：在100ml乙醇中，加入0.04g溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH水溶液，刚好出现蓝色即至；11、钼酸铈：广谱，配制方法：235 mL水+12g钼酸氨+ 0.5 g钼酸铈氨+15mL浓硫酸；12、茴香醛(对甲氧基苯甲醛)：广谱，配制方法：135ml乙醇+5mL浓硫酸+1.5mL冰醋酸+3.7 mL茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀；13、茴香醛(对甲氧基苯甲醛)：主要针对萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)，配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)；14、磷钼酸(PMA)：广谱，配制方法：10g磷钼酸+100 mL乙醇；。
茚三酮法测氨基酸
茚三酮显色法测定氨基酸的含量一．原理：凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸的溶液与水合茚三酮共热时，能产生紫色化合物，可用比色法进行测定。
氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤。
第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛、茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和NH3缩合生成有色物质。
二．仪器：721型分光光度计台天平减压蒸馏器干燥容量瓶移液枪烧杯试管架试管水浴锅。
三．药品：（1）标准氨基酸溶液：配制成0.3mmol/L 溶液（2）pH5.4，2mol/L 醋酸缓冲液：量取86mL 2mol/L 醋酸钠溶液，加入14mL 2mol/L 乙酸混合而成。
用pH 检查校正。
（3）茚三酮显色液：称取170mg 茚三酮和30mg 还原茚三酮，用20mL 乙二醇甲醚溶解（4）60％乙醇。
（5）样品液：每毫升含0.5～50μg 氨基酸。
茚三酮若变为微红色，则需按下法重结晶：称取5g 茚三酮溶于15～25mL 热蒸馏水中，加入0.25g 活性炭，轻轻搅拌。
加热30min 后趁热过滤，滤液放入冰箱过夜。
次日析出黄白色结晶，抽滤，用1mL 冷水洗涤结晶，置干燥器干燥后，装入棕色玻璃瓶保存。
还原型茚三酮按下法制备：称取0.5g 茚三酮，用12.5mL 沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。
将0.5g 维生素C 用25mL 温蒸馏水溶解，一边搅拌一边将维生素C 溶液滴加到茚三酮溶液中，不断出现沉淀。
滴定后继续搅拌15min，然后在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗涤3 次，置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存，备用。
乙二醇甲醚若放置太久，需用下法除去过氧化物：在500mL 乙二醇甲醚中加入5g 硫酸亚铁，振荡1～2h，过滤除去硫酸亚铁，再经蒸馏，收集沸点为121～125℃的馏分，为无色透明的乙二醇甲醚。
四、操作步骤1．标准曲线的制作分别取0.3mmol/L 的标准氨基酸溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL 于试管中，用水补足至1mL。
多功能显色剂
多功能显色剂引言有机合成实验中，薄层色谱（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种基础且常用的分析分离方法，为了观察这些物质在色谱带上的位置，我们最常用的方法是在紫外灯下观察。
然而，并非所有的化合物都具有紫外吸收，有时我们也需要对色谱带上的物质进行初步判断，这时TLC显色剂就发挥了重要作用。
实验中经常用到的显色剂包括高锰酸钾、磷钼酸、2, 4-二硝基苯肼、香草醛、碘单质、茚三酮等，这些显色剂具有广谱显色性质或只能和特定种类的物质发生显色反应，其中茚三酮就是一种氨基化合物的特定显色剂，它与氨基作用后会显示出独特的蓝紫色——罗曼紫（Ruhemann’s purple），凭借这一性质茚三酮被广泛用于胺类化合物，特别是氨基酸和多肽化合物的检测，在刑侦领域也是鉴定指纹的重要手段。
经茚三酮显色后的氨基酸片段茚三酮的发现纵观科学史，有很多重要的发明和发现均是源于意外和偶然，茚三酮也是如此，只不过这段历史以及它的发现者都鲜为人知罢了。
德裔英国化学家Siegfried Ruhemann发现茚三酮其实是源于他对烯醇化环状羰基化合物的研究兴趣，那时他发现化合物I主要以烯醇形式存在并且推测环外的乙酰基对烯醇互变有影响。
为了验证这一猜想，他设计了具有相似结构的化合物II，并决定采用1-茚酮（1-indanone）为起始原料进行合成。
根据最初设想，1-茚酮被4-亚硝基二甲苯胺（4-nitroso dimethylaniline）氧化后得到的亚胺中间体水解即可得到邻二酮产物。
然而事与愿违，他们始终没法合成期待的亚胺中间体，后来才发现1-茚酮的两个亚甲基均参与了反应——实际得到的是双亚胺中间体，水解后得到了三酮的单水合物（monohydrate of triketone），Ruhemann根据产物无色的性质排除了邻二酮结构的可能。
茚三酮的发现过程茚三酮的显色原理胺类化合物与茚三酮作用后会显色的独特现象究竟是如何被Ruhemann发现的我们已经不得而知，如今只能窥探到他最初记载的关键信息：“Of especial interest is the action of ammonia on the triketone. If the aqueous solution of the mixture of both substances is kept for a short time it turns a deep reddish-violet…”。
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茚三酮
中文名称：苯并戊三酮，茚三酮
英文名称：Ninhydrin
分子量：160.13
CAS RN：485-47-2
熔点：251℃
密度: 0.86
性状：本试剂近似为白色结晶,或浅黄色结晶粉末,微溶于乙醚及三氯甲烷,100℃以上变为红色。
特性反应：跟酶类或者多肽在加热状况下发生显紫色反应。
作用
茚三酮是一个有机化合物，被广泛用于检测氨、一级和二级胺，尤其是氨基酸。
氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条件下共加热时，氨基酸被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮水合物被还原，其还原物可与氨基酸加热分解产生的氨结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化合物，称为罗曼紫（Ruhemann's purple）。
此化合物最大吸收峰在570nm波长处。
由于此吸收峰的大小与氨基酸释放的氨量成正比，因此可作为氨基酸的定量分析方法法医学上这个反应被用于鉴定指纹。
茚三酮反应（Kaiser鉴定）也可用来在固相接肽时检验脱保护基是否已经完成，鉴定和比色法分离氨基酸以及鉴定铵离子（呈紫色）。
茚三酮与氨基酸反应生成蓝紫色化合物，但pro，羟-pro反应时呈黄色。
茚三酮用于脯氨酸含量的测定
当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸的含量的高低。
在520nm 的波长下比色，从标准曲线（用脯氨酸标准溶液制得）上查出(或用回归方程计算)脯氨酸的含量。
①茚三酮
检出物：氨基酸、胺与氨基糖类。
溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。
方法：喷后于110oC加热。
结果：呈红紫色斑点。
茚三酮对一级二级的胺显色肯定没问题的，三级胺有些可以，酰胺应该也没问题的，配制：1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸；显色的时候板子浸湿，用纸擦一下多余液滴，再用电热枪（电吹风太弱了）吹出斑点，显色因为氨基酸的不同而显示不同的紫色黄色等等，你想检测伯胺的话，肯定没有问题的！
配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸
茚三酮不是太好溶解，需要多搅拌才行。
加醋酸只是给显色提供一个微酸性的环境。
配置好的茚三酮显色剂装在棕色瓶中避光保存，是可以多次使用的。