茚三酮显色法测定氨基酸含量

氨酸酸样品的测定来自百度文库 2、氨酸酸样品的测定：
取样品液1ml，加入pH5.4,2M醋酸缓冲液和茚三酮 样品液1ml 加入pH5.4,2M醋酸缓冲液 1ml， pH5.4,2M醋酸缓冲液和 混匀后于100℃沸水中加热15min 显色液各1ml混匀后于100℃沸水中加热15min， 显色液各1ml混匀后于100℃沸水中加热15min，自 来水冷却。放置5min 5min后 3ml60%乙醇稀释， 乙醇稀释 来水冷却。放置5min后，加3ml60%乙醇稀释，摇 匀后测定OD 生成的颜色在60min内稳定） 60min内稳定 匀后测定OD570（生成的颜色在60min内稳定） 将样品测定的OD570与标准曲线对照，可确定样品 将样品测定的OD 与标准曲线对照， 中氨基酸的含量 样品同时做三份取平均数
二、试剂与材料
（1）标准氨基酸溶液：配制成0.3mM溶液 标准氨基酸溶液：配制成0.3mM溶液 0.3mM 本实验用赖氨酸） 已配) （本实验用赖氨酸）(已配) pH5.4,2M醋酸缓冲液：量取2M 2M醋酸缓冲液 （2）pH5.4,2M醋酸缓冲液：量取2M 86ml 醋酸钠溶液，加入14ml 2M乙酸混合而成 乙酸混合而成。 醋酸钠溶液，加入14ml 2M乙酸混合而成。 pH计较正 250ml/班 计较正（ 用pH计较正（250ml/班） （3）茚三酮显色液：称取85mg茚三酮和 茚三酮显色液：称取85mg茚三酮和 85mg 15mg还原茚三酮 还原茚三酮， 10ml乙二醇甲醚溶解 15mg还原茚三酮，用10ml乙二醇甲醚溶解 15ml/组 （15ml/组）
实验三 茚三酮显色法测定氨基酸含量
一、实验原理
茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。氨与 茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。 茚三酮和还原性茚三酮反应， 茚三酮和还原性茚三酮反应，生成紫色化 合物。颜色的深浅与氨基酸的含量成正比， 合物。颜色的深浅与氨基酸的含量成正比， 可通过测定570nm处的光密度， 可通过测定570nm处的光密度，测定氨基 570nm处的光密度 酸的含量
五、讨论与分析 六、思考题
茚三酮是否可用于氨基酸和蛋白质的 定性鉴定？
四、结果与计算
氨基酸的含量(g/100ml)=X*100 氨基酸的含量(g/100ml)=X*100
——X为查标准曲线所获得每ml含量g数 X为查标准曲线所获得每ml含量g ml含量
自配样品
——X*250/称取克数（X为查标准曲线所获得 X*250/称取克数（ X*250/称取克数 ml含量 含量g 每ml含量g数） ——250为稀释的倍数 250为稀释的倍数 250
还原型茚三酮按下法制备：称取0.5g茚三酮， 还原型茚三酮按下法制备：称取0.5g茚三酮， 0.5g茚三酮 用12.5ml沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。将 12.5ml沸蒸馏水溶解，得黄色溶液。 沸蒸馏水溶解 0.5g维生素C 25ml温蒸馏水溶解， 0.5g维生素C用25ml温蒸馏水溶解，一边搅 维生素 温蒸馏水溶解 拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中， 拌一边将维生素C溶液滴加到茚三酮溶液中， 不断出现沉淀滴定后继续搅拌15min， 不断出现沉淀滴定后继续搅拌15min，然后 搅拌15min 在冰箱内冷却到4℃，过滤、 在冰箱内冷却到4℃，过滤、沉淀用冷水洗 4℃ 真空干燥， 涤3次，真空干燥，置五氧化二磷真空干燥 器中保存备用
（4）60%乙醇（50ml/组 ） （ 60%乙醇 50ml/组 乙醇（ （5）样品液：每ml含0.5-50ug氨基酸（已配） （ 氨基酸（ 样品液： ml含0.5-50ug氨基酸 已配） （6）分光光度计 （ （7）水浴锅 （
三、操作方法
1、标准曲线的制作
分别取0， 0.2, 0.4, 0.6, 0.8,1.0ml0.3mM的 分别取0 0.8,1.0ml0.3mM的 标准氨基酸溶液于试管中 用水补足到1ml。 溶液于试管中， 补足到1ml 标准氨基酸溶液于试管中，用水补足到1ml。各加 1ml2M醋酸缓冲液 再加入1ml茚三酮显色液 醋酸缓冲液； 1ml茚三酮显色液， 入1ml2M醋酸缓冲液；再加入1ml茚三酮显色液，充 分混合后盖住试管口， 100℃水浴中加热15min， 水浴中加热15min 分混合后盖住试管口，在100℃水浴中加热15min， 用自来水冷却。放置5min 5min后 加入3ml60%乙醇稀释 3ml60%乙醇稀释， 用自来水冷却。放置5min后，加入3ml60%乙醇稀释， 充分摇匀，用分光光度计测定OD 充分摇匀，用分光光度计测定OD570（脯氨酸和羟脯 氨酸与茚三酮反应呈黄色，应测定OD ）。以 氨酸与茚三酮反应呈黄色，应测定OD440）。以OD570 为纵坐标，氨基酸含量为横坐标，绘制标准曲线。 为纵坐标，氨基酸含量为横坐标，绘制标准曲线。