TAKARA 实验室常规试剂配制方法

TaKaRa一步法RT-PCR提取法

*2 用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。ABI PRISM® 7000/7700 和 Applied
Biosystems® 7300 Real-Time PCR System 使用 ROX Reference Dye，7500
Real-Time PCR System 使用 ROX Reference Dye II，Thermal Cycler Dice Real
的荧光探针，游离荧光物质发出荧光。通过检测
反应体系中的荧光强度，可以达到检测 PCR 产物
扩增量的目的。具体原理见右图。
-2-
● 制品内容（50 μl 反应×100 次）
1. 2×One Step RT-PCR Buffer Ⅲ*1（2×）
840 μl ×3 支
2. TaKaRa Ex Taq HS（5 U/μl）
RNase Free dH2O
7.5 μl
Total
25 μl
*1 通常引物终浓度为 0.2 μM 可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在 0.1～1.0 μM 范围内调整引物浓度。
*2 探针浓度与所使用的 Real Time PCR 扩增仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，使用时请参考仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行。使用 Smart Cycler® System 时，通常探针终浓度在 0.1～0.5 μM 范围内进行调整。
Stage 2：PCR 反应 Repeat：40 times 95℃ 5 sec 60℃ 20 sec
◆特别提示：本制品中使用的 TaKaRa Ex Taq HS 是利用抗 Taq 抗体的 Hot Start 用 DNA 聚合酶，与其他公司的化学修饰型 Hot Start 用 DNA 聚合酶相比，不需要 PCR 反应前的 95℃、5～15 分钟的酶的活性化反应。如果高温处理时间过长，会使酶的活性下降，其 PCR 的扩增效率、定量精度等都会受到影响。PCR 反应前的反转录酶的热变性失活通常设定为 95℃、10 sec。

实验室常规试剂配制

实验室常用试剂、缓冲液的配制1 M Tris-HCl(pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度 1 M Tris-HCl配制量 1 L配制方法 1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

度每升高组份浓度配制量配制方法10×组份浓度配制量配制方法3 M组份浓度配制量配制方法组份浓度137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量 1 L配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

10 M 醋酸铵组份浓度10 M 醋酸铵配制量100 ml配制方法 1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 使用0.22 m m滤膜过滤除菌。

4. 密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚配制方法1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

TaKaRa一步法RT-PCR提取法

Mix；其中包括 RNase Free dH2O、Buffer、各种酶等），然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。 2）使用 TaKaRa Ex Taq HS、PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有 50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。 3） 2×One Step RT-PCR Buffer Ⅲ融解后如有不溶物请充分混合。配制 Real Time One Step RT-PCR 反应液时应避免强光照射。 4）反应液的配制、分装请一定使用新的（无污染的）枪头、Microtube 等，尽量避免污染。 5）本制品只能使用特异性反转录引物，不能使用 Random Primer 和 Oligo dT Primer 等进行反转录反应。
0.5 μl
PrimeScript RT Enzyme Mix Ⅱ
0.5 μl
PCR Forward Primer（10 μM）
0.5 μl 0.2 μM*1
PCR Reverse Primer（10 μM）
0.5 μl 0.2 μM*1
TaqMan® Probe
1 μl*2
Total RNA
2 μl*3
独自开发的 Buffer 系统相结合，具有高扩增效率，高扩增灵敏度之特点。 3. One Step RT-PCR Buffer III 是一种 2×浓度的 Premix Type 试剂，操作简单，能有效避免污染。
● 使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前请一定认真阅读。 1）当同时需要进行数次 Real Time One Step RT-PCR 反应时，应先配制各种试剂的混合液（Master

takara反转录试剂盒说明书

Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。

为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。

但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。

在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。

而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。

PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。

Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。

同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。

使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。

TAKARA植物DNA提取试剂盒说明书

M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 M
1.0 kbp 0.5 kbp
2.0 kbp
PCR 反应液 4 μl，1％ Agarose 电泳，M：Wide-Range DNA Ladder（50～10,000 bp）图 3 以提取的基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增的电泳图
图 1 从植物组织中提取的基因组 DNA 电泳图 -2-
表 1 从植物组织中提取的基因组 DNA 纯度*
样品名称
样品量
Sample No.
A260/A280
A260/A230
20 mg
1
拟南芥幼芽
2
3
50 mg
4
2.2
1.4
2.2
1.4
2.1
1.7
2.1
1.7
20 mg
5
6
西红柿幼芽
7
50 mg
8
图 5 以提取的基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增的电泳图
注：长时间存放可能会有夹杂物沉淀，尽量迅速进入下一步操作。
12. 12,000 rpm 4℃离心 10 分钟。 13. 弃上清，注意不要吸取沉淀。
注：沉淀有时肉眼看不见。
14. 加入 1 ml 70％乙醇，清洗沉淀。 15. 12,000 rpm 4℃离心 3 分钟。 16. 弃上清，注意不要吸取沉淀。 17. 沉淀干燥，加入适量 TE Buffer（约 20 μl）溶解沉
2. 取出冻结的植物组织于室温放置 5 分钟左右，使其融解。 3. 轻微离心，将植物组织收集在 Microtube 底部。 4. 使用 Pipet Tip 尖端将植物组织按压 Microtube 底部 10 次左右，进行物理破碎。 5. 加入 400 μl 的 Extraction Solution 1，剧烈振荡 5 秒钟。如果植物组织仍滞留于 Microtube 底部，

常用试剂及缓冲液的配制

分装，-20℃保存
65%(V/V)甘油
配制量：配制方法：
配方： 65%(V/V) 丙三醇
100ml
1. 量取 65ml 甘油（丙三醇） 2. 加入 35ml ddH2O，混匀 3. 高温高压灭菌后，4℃保存 4. 或无菌操作，用灭菌 1.5ml 离心管趁热
分装，-20℃保存
10%(V/V)甘油
1M MgCl2
配制量：配制方法：
配方： 1M MgCl2
1L
1. 称取 203.3g MgCl2·6H2O 固体置于烧杯中
2. 加入 700ml ddH2O，充分溶解 3. 定容至 1L 4. 高温高压灭菌，室温保存
2M MgCl2
配制量：配制方法：
配方： 2M MgCl2
1L
1. 称取 406.6g MgCl2·6H2O 固体置于烧杯中
100ml
1. 量取 56.9ml ddH2O 2. 加入 43.1ml 浓 HCl（11.6N），混匀 3. 室温保存注意：先加入水，再加浓盐酸
2.5N HCl
配制量：配制方法：
配方： 2.5N HCl
100ml
1. 量取 78.4ml ddH2O 2. 加入 21.6ml 浓 HCl（11.6N），混匀 3. 室温保存注意：先加入水，再加浓盐酸
pH＝ Y
I (ml)
5.8
91.5
6.0
86.8
6.2
80.8
6.4
72.2
6.6
61.9
6.8
50.3
7.0
38.5
7.2
28.3
7.4
19.8
7.6
13.4
7.8

TAKARA实验室常规试剂配制方法

TAKARA实验室常规试剂配制方法TAKARA实验室是一家提供生命科学研究和临床诊断解决方案的公司。

其产品线包括分子生物学试剂、细胞培养耗材、蛋白质研究试剂和临床诊断试剂等。

在TAKARA实验室产品的使用过程中，常规试剂的配制方法是非常重要的一部分。

本文将介绍一些TAKARA实验室常规试剂的配制方法。

1. Tris缓冲液的配制方法Tris缓冲液可用于蛋白质电泳，DNA和RNA电泳等实验中。

配制方法如下：1）将Tris酸粉末称取至容器中。

2）加入蒸馏水溶解，并调节pH至所需值（一般为8.0）。

3）使用0.22μm的滤器进行过滤。

2.PBS缓冲液的配制方法PBS缓冲液是一种常用的生理盐水缓冲液，在细胞培养和免疫染色实验中经常使用。

配制方法如下：1）将NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4按指定比例称取至容器中。

2）加入蒸馏水溶解，并调节pH至所需值（一般为7.4）。

3）使用0.22μm的滤器进行过滤。

3.LB培养基的配制方法LB培养基是一种常用的大肠杆菌培养基，在分子生物学实验中经常使用。

配制方法如下：1）将Tryptone、Yeast Extract和NaCl按指定比例称取至容器中。

2）加入蒸馏水溶解，并使用自动调pH仪调节pH至所需值（一般为7.0）。

3）将容器密封，并在121℃高压灭菌器中高压灭菌15-20分钟。

4. RNase-Free水的制备方法RNase-Free水在RNA实验中非常重要，保证实验的可靠性和准确性。

制备方法如下：1）将蒸馏水倒入洁净的玻璃烧杯中。

2）放入微波炉中加热，每隔一段时间取出搅拌一次，直至水沸腾。

3）冷却后，使用0.22μm的滤器进行过滤。

4）将过滤后的水贮存在RNase-Free的容器中。

5.甲醛溶液的配制方法甲醛溶液可用于细胞固定和染色实验。

配制方法如下：1）将甲醛溶液称取至容器中。

2）加入蒸馏水溶解，使浓度达到所需值（一般为4%）。

3）使用0.22μm的滤器进行过滤。

TaKaRaRNAisoReagent

TaKaRa RNAiso Reagent(T otal RNA 提取试剂)2.实验样品的研磨和匀浆。

A.贴壁培养细胞①倒出培养液，用1×PBS清洗一次。

②每10cm 2生长的培养细胞中加入2ml的RNAisoReagent，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落(对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥离细胞)。

*RNAiso Reagent中含有强变性剂，应避免与皮肤、衣物等接触。

若不小心接触到眼睛或皮肤时，请立即到医院进行处理。

【试剂盒之外所需准备试剂】氯仿、异丙醇、75%乙醇（D E P C 处理水配制)、RNase-free水（制备方法：使用RNase-free的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC至终浓度0.01%（v/v)，过夜搅拌后，高温高压灭菌。

）■保存和运输1.RNAiso Reagent在室温下可以保存12个月，为保证试剂质量，建议于2-8℃下避光保存。

2.可以在常温下运输。

■制品内容■RNA 提取实验前的准备RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。

因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。

通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。

100mlRNAiso Reagent *Code No.:D312100ml1,000元【使用器具】尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。

1.用0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下处理12小时。

2.然后在120℃下高压灭菌30分钟以除去残留的DEPC。

RNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。

【试剂配制】用于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60分钟)或使用上述方法进行DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装(也可以使用RNA实验用的一次性塑料容器)，使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。

Takara基因组抽提试剂盒说明书

Q4. 提取的基因组 DNA 生物学活性差，为什么？ A4. ① 提取的基因组 DNA 中盐分浓度过高。在使用 Rinse B 进行 DNA 制备膜的清洗时，请严格按
照说明书的要求进行。 ② DNA 中含有乙醇。在 Rinse B 洗净时，离心速度和时间应严格遵循说明书要求进行。
Q5. 能否使用本试剂盒提取酵母菌中的基因组 DNA？ A5. 不能。因为酵母菌属于真核微生物，其细胞壁的化学组成和结构与细菌不同，因此 Lysozyme 不
TaKaRa Code：DV810A
MiniBEST Bacterial Genomic DNA Extraction Kit Ver.2.0 （50 次量）
说明书
宝生物工程(大连)有限公司
内容
●制品说明 ●制品内容 ●运输温度 ●保存温度 ●实验前的准备 ●操作方法 ●使用例 ●注意事项 ●Q&A
22 ml
Solution C
35 ml
DB Buffer
25 ml
Rinse A
28 ml
Rinse B*3
24 ml
Elution Buffer
4 ml
*1 RNase A1 为混浊溶液。 *2 若出现沉淀，请于 65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 *3 首次使用前，请添加 56 ml 的 100%乙醇。
11. 弃 Filter Cup，在滤液中加入 450 μl 的 DB Buffer，混合均匀。
12. 将试剂盒中的 Spin Column 安置于 Collection Tube 上。
-2-
图 1. 操作流程简图
13. 将上述操作 11 的混合液转移至 Spin Column 中，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃滤液。 14. 将 500 μl 的 Rinse A 加入至 Spin Column 中，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃滤液。

takaraSYBR说明书

®
使用量 12.5 μl 0.5 μl 0.5 μl 2 μl 9.5 μl 25 μl*3
终浓度 1× 0.2 μM*1 0.2 μM*1
*1 通常引物终浓度为 0.2 μM 可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在 0.1～1.0 μM
Dissociation
试剂 SYBR Premix Ex Taq（2×）（Tli RNaseH Plus），Bulk PCR Forward Primer（10 μM） PCR Reverse Primer（10 μM） ROX Reference Dye（50×） DNA 模板（<100 ng） dH2O（灭菌蒸馏水） Total
*2 ®
使用量 10 μl 0.4 μl 0.4 μl 0.08 μl 2 μl 7.12 μl 20 μl
*3
使用量 25 μl 1 μl 1 μl 0.2 μl 4 μl 18.8 μl 50 μl*3
● 使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读。 1．使用前，请上下轻轻颠倒混匀，避免产生气泡，防止因混合不均匀造成的反应效果不佳。 (1) 请勿涡旋振荡混匀。 (2) SYBR® Premix Ex Taq（2×）（Tli RNaseH Plus），Bulk 在-80℃存放可能会产生白色或淡黄色的沉淀，可用手握缓慢溶解，于室温短时间避光放置，轻柔上下颠倒混匀直至沉淀全部消失。 (3) 沉淀会导致溶液成分不均匀，使用前务必充分混匀试剂。 2．配制反应液时，试剂请于冰上放置。 3．本制品中含有荧光染料 SYBR® Green I，配制 PCR 反应液时应避免强光照射。 4．反应液的配制、分装请一定使用新的（无污染的）枪头、Microtube 等，尽量避免污染。 5．本制品中使用的 TaKaRa Ex Taq HS 是利用抗 Taq 抗体的 Hot Start 用 DNA 聚合酶，与其他公司的化学修饰型 Hot Start 用 DNA 聚合酶相比，不需要 PCR 反应前的 95℃、5～15 分钟的酶的活性化反应。如果高温处理时间过长，会使酶的活性下降，其 PCR 的扩增效率、定量精度等都会受到影响。如果在 PCR 反应前进行模板的预变性，通常设定为 95℃、30 秒。

实验室常用试剂配制

实验室常用试剂、缓冲液的配制方法蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法SDS-PAGE分离胶配方表PAGE凝胶配方表（核酸电泳用）各种缓冲液的性质对照表离心机转子的转速与相对离心力RCF(g)间的换算关系相对离心力RCF值（g值）取决于转子的转速（rpm）和旋转半径（r，以mm计算)，可用如下公式表示：此外，根据RCF值（g值)、rpm值、r值之间的关系，可从图A、图B中大致读出各种数值。

图A高速转子的相对离心力列线图要确定某一列上的未知值时，用尺子排列其他两列的已知值，所需值落在尺子与第三列的交切处。

要确定某一列上的未知值时，用尺子排列其他两列的已知值，所需值落在尺子与第三列的交切处。

密码子表色素在聚丙烯酰胺凝胶中的移动速度*大肠杆菌的基因型野生的大肠杆菌（E.coli）的基因组DNA中有470万个碱基对（bp)，内含4288个基因。

E.coli基因组中还包含有许多插入序列，如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的，由此表明了基因组具有它的可塑造性。

利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型 (Phenotype)，把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型（Genotype)。

具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。

这些不同基因型特性的菌株在基因工程的研究和生产中具有广泛的应用价值。

大肠杆菌基因型的表示方法有如下几种：1．根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成三个斜体字母来表示。

例如：DNA Adenine Methylase→dam。

2．变异基因不同，导致的结果相同时，用其作用结果的英文名称的前三个字母斜体后加上一个大写字母来表示区别。

例如：Recombination→recA、recB、recC。

各实验试剂配制方法

NOx的测定试剂配制1、1・0Og/L盐酸萘乙二胺贮备液：称取0.50g(N-l-萘基)乙二胺盐酸盐(C1O H7NH(CH2)NH2・2HC1)于500ml容量瓶中，用水稀释至标线。

此溶液贮于密闭的棕色试剂瓶中，在冰箱中冷藏可稳定三个月。

2、显色液：称取5.0g对氨基苯磺酸(NH2C6H4S03H)，溶解于约200ml热水中，将溶液冷却至室温，全部移入1000ml容量瓶中，加入50.0ml盐酸萘乙二胺贮备液和50ml冰乙酸，用水稀释至标线。

此溶液于密闭的棕色瓶中，在25°C以下暗处存放，可稳定三个月。

若呈现淡红色，应弃之重配。

3、吸收液：临用时将显色液和水按4+1(V/V)比例混合，即为吸收液。

吸收液的吸光度不超过0.005(540nm，lcm比色皿，以水为参比)。

否则，应检查水、试剂纯度或显色液的配制时间和贮存方法。

4、亚硝酸钠标准贮备液：准确称取0.3750g亚硝酸钠(NaN02，优级纯，预先在干燥器内放置24h)溶解于水，移入1000ml容量瓶中，用水稀释至标线。

贮于密闭的棕色试剂瓶中，可稳定三个月。

此溶液每毫升含0.250mg亚硝酸根。

5、亚硝酸钠标准使用液：吸取亚硝酸钠标准贮备液1.00ml于100ml容量瓶中，用水稀释至标线。

临用前现配。

此溶液每毫升含2.5审亚硝酸根。

6、硫酸溶液C(1/2H2S04)=lmol/L：取15ml硫酸(p=1.84g/m1)徐徐加入500ml水中。

7、酸性高锰酸钾溶液：称取25g高锰酸钾，稍微加热使其全部溶解于500ml水中，然后加入lmol/L硫酸溶液500ml,混匀，贮于棕色试剂瓶中。

SO2的测定试剂配制1、环己二胺四乙酸二钠溶液C(CDTA-2Na)=0.0050mo1/L：称取1.82g反式-1,2-环己二胺四乙酸((trans-1，2-Cyc1ohexy1enedinitri1o)tetraaceticacid，简称CDTA),加入1.50mo1/L的氢氧化钠溶液6.5ml,溶解后用水稀释至100ml。

SDS-PAGE所有详细试剂配方

SDS-PAGE30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。

0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。

严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。

使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。

如有沉淀，可以过滤。

【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。

称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。

1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

【保存条件】室温保存。

【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。

1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL 混合，加水稀释到100ml终体积。

过滤后40C保存。

）【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

TAKARA 实验室常规试剂配制方法

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化验室常用试剂配制标准操作规程

化验室常用试剂（溶液）配制标准操作规程1 制定目的为使试剂（溶液）配制操作标准化，特建立本操作规程。

2 适用范围本操作规程适用于化验室常用试剂（溶液）的配制。

3 职责3.1 QA及管理人员负责监督其实施情况。

4 规程细则4.1 氢氧化钠滴定液（1mol/L、0.5mol/L或0.1mol/L）4.1.1 取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。

4.1.2 氢氧化钠滴定液（1mol/L）：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀。

4.1.3 氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）：取澄清的氢氧化钠饱和溶液28ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀。

4.1.4 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）：取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀。

4.1.5 标定4.1.5.1 氢氧化钠滴定液（1mol/L）：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50ml，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定；在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。

每1ml氢氧化钠滴定液（1mol/L ）相当于204.2mg 的邻苯二甲酸氢钾。

根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度，即得。

4.1.5.2 氢氧化钠滴定液（0.5mol/L ）：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约3g ，照4.1.5.1标定。

每1ml 氢氧化钠滴定液（0.5mol/L ）相当于102.1mg 的邻苯二甲酸氢钾。

4.1.5.3 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L ）取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.6g ，照4.1.5.1标定。

每1ml 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L ）相当于20.42mg 的邻苯二甲酸氢钾。

4.1.5.4 如需用氢氧化钠滴定液（0.05mol/L 、0.02mol/L 或0.01mol/L ）时，可取氢氧化钠滴定液（0.1mol/L ）加新沸过的冷水稀释制成。

反转录试剂盒TAKARA6210A操作步骤

反转录试剂盒TAKARA6210A操作步骤Code No. 6210A 研究⽤PrimeScript? II 1st StrandcDNA Synthesis Kit说明书⽬录内容页码●制品说明 1 ●制品内容 1 ●保存 1 ●1st-strand cDNA合成反应 2 ●RT-PCR反应 2 ●RNA样品的制备 3 ●相关产品 3●制品说明本制品是使⽤PrimeScript II RTase从Total RNA或Poly (A)＋ mRNA合成1st Strand cDNA的试剂盒。

含有1st Strand cDNA合成所需的全部试剂。

以结构复杂的RNA或长链RNA为模板进⾏cDNA合成时，cDNA合成受到抑制的主要原因是RNA⾼级结构与反转录酶的⾮特异性结合。

并且，由于反转录酶的错配引起的⾮特异性延伸，对RT-PCR或全长cDNA的合成极为不利。

PrimeScript II RTase是对PrimeScript RTase进⾏进⼀步改良的反转录酶，本反转录酶可以极⼤限度地抑制RNA⾼级结构与反转录酶的⾮特异性结合。

本制品使⽤了PrimeScript II RTase，利⽤Oligo dT从PolyA开始进⾏延伸反应，使⽤标准反转录温度42℃，不仅能维持PrimeScript RTase原有的卓越的cDNA合成效率和cDNA合成速度，同时可以合成本底低、纯度⾼、完整性好的cDNA。

另外，反转录反应液配制时所产⽣的⾮特异性延伸是抑制cDNA合成的主要原因，本制品能有效控制这⼀现象。

反应液配制后，冰上放置直⾄反转录反应开始，不会发⽣抑制cDNA合成的现象。

合成的1st Strand cDNA可⼴泛应⽤于2nd Strand cDNA合成、杂交、PCR法扩增等。

特别适⽤于全长cDNA⽂库制作、⾼纯度全长cDNA合成等。

●制品内容(50次量)PrimeScript II RTase (200 U/µl) 50 µl5×PrimeScript II Buffer 200 µl RNase Inhibitor (40 U/µl) 25 µl dNTP Mixture (10 mM each) 50 µl Oligo dT Primer (50 µM) 50µl Random 6 mers (50 µM) 100 µl RNase free dH2O 1 ml【各种引物序列】* 该序列与RNA PCR Kit (AMV) Ver. 3.0 (Code No. RR019A)中的Oligo dT Adaptor Primer不同，不含有与M13 Primer M4匹配的序列。

TAKARA糖基化分析试剂盒

用 1.5 ml Microtube 收集（分为 2 管，每管 1 ml）。最后用空气将 Cellulose Cartrige Colum 内的溶液全部吹出。 c）洗脱液用真空离心等方法干燥后，用 100 μl 左右的灭菌蒸馏水溶解，经适当稀释后进行 HPLC 分析。
注：Cellulose Cartridge Column 不能重复使用。
使用本试剂盒不需要特殊的pa化设备操作简单回收率对糖链进行pa化标记反应时首先是糖链的还原末端与2氨基吡啶反应形成西夫碱schiffbase西夫碱在还原剂的作用下生成稳定的糖链氨基吡啶衍生物pa糖链pa糖链是一种稳定的荧光诱导体检测灵敏度高
TaKaRa Code：D4480
Pyridylamination Manual Kit （20 次量）
④ Cellulose Cartrige Column 的洗净。注射器中吸入 10 ml*1 的试剂 1，安装到 Adaptor 上，以 1 滴/秒左右的速度推出液体，清洗 Cellulose Cartrige Column*2。整个操作过程要始终保持柱子中有液体。最后注射器内吸入 2 ml 左右的空气，把 Cellulose Cartrige Column 内的液体吹出。
向标记反应后的 PA 化糖链样品 40 μl 中，加入 1 ml 的试剂 1，充分振荡混匀。此样品溶液一定不要进行离心操作。注 1：样品中有可能产生蛋白质等的沉淀，请一定不要进行离心操作，保持悬浊液的状态直接上样。注 2：充分振荡后，样品溶液仍然明显分为两层时，可用试剂 1 稀释，有可能均一化。如果试剂 1 的
1．使用本试剂盒，按照上述操作方法，对 Biantennary Sugar Chain 进行 PA 化后充分干燥标记物。 2．用 100 μl 灭菌蒸馏水溶解标记物，取 5 μl 加入至 5 μl 的内部标准糖链 PA-Sugar Chain 003

Takara 感受态制备试剂盒说明书

TaKaRa Code：D406Competent Cell Preparation Kit次（200量）宝生物工程(大连)有限公司目录内容页码●制品说明 1●制品内容 1●制品保存 1●使用注意 1●感受态细胞的制备方法 1●感受态细胞的DNA转化 2●实验例 2●相关试剂及培养基的制备方法 3■Ampicillin 3■IPTG 3■X-Gal 3■LB培养基 3■LB/Amp培养基 3■SOB培养基 3■SOC培养基 4■φb×broth 4■LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 4●制品说明大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA（Plasmid DNA、Phage DNA等），处于这种状态的细胞称为感受态细胞（Competent Cell）。

在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。

实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种：一种是购买商品化的感受态细胞，但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难（超低温）；另一种是自己制备感受态细胞，实验人员自己制作感受态细胞时，往往受到各种试剂及实验条件等限制，制备的感受态细胞效率低，达不到实验要求。

TaKaRa Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。

使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mut S等，转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上（转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异）。

使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。

●制品内容（200次量）Solution A 20 mlSolution B 20 ml●制品保存：4℃保存。

●使用注意1.制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。